專利名稱：一種蟬夜安神膠囊的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蟬夜安神膠囊及其制備方法。
背景技術(shù)：
失眠是一種持續(xù)相當(dāng)長時間的睡眠的質(zhì)和/或量令人不滿意的狀況，常表現(xiàn)為難以入眠、不能入睡、維持睡眠困難、過早或間歇性醒來而引致睡眠不足。失眠是一種最常見的睡眠紊亂，它給患者帶來巨大的身體和精神上的痛苦。隨著社會的發(fā)展，生活節(jié)奏的加快，失眠癥的發(fā)生率有上升趨勢，據(jù)統(tǒng)計，約有30％的成人患有失眠。
目前，國內(nèi)外治療的失眠方法多為采用西藥鎮(zhèn)靜劑治療。西藥鎮(zhèn)靜劑只能消極地控制或強制病人睡眠，不能提高睡眠質(zhì)量，且隨著病程的延長，用藥量要不斷增加。西藥鎮(zhèn)靜劑還對人的神經(jīng)等系統(tǒng)有很大的毒副作用。現(xiàn)有的用于治療痰熱內(nèi)擾型失眠的中成藥，其治療效果差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于治療痰熱內(nèi)擾型失眠的中成藥--蟬夜安神膠囊及其制備方法，該膠囊療效好、毒性作用小。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種蟬夜安神膠囊，它的內(nèi)容物主要是由下列重量份的原料藥制成，天竺黃267份蟬蛻500份僵蠶 267份地龍 667份鉤藤833份法半夏333份首烏藤833份白芍500份酸棗仁500份遠(yuǎn)志400份其制備方法包括下列步驟(1)取所述重量配比的1/3量的天竺黃，在80℃下干燥4小時，粉碎成細(xì)粉，備用；(2)取所述重量配比的首烏藤加8倍量70％乙醇回流提取2小時，濾過，藥渣再加6倍量70％乙醇回流提取1.5小時，合并回流提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(3)取所述重量配比的僵蠶加10倍量水煎煮提取1.5小時，濾過，藥渣再加8倍量水煎煮提取1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達(dá)70％，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(4)取所述重量配比的蟬蛻、地龍、法半夏、白芍、酸棗仁、遠(yuǎn)志及2/3量天竺黃分別加10倍、8倍量水煎煮提取二次，第一次2小時，第二次1小時，于第二次提取時加入所述重量配比的鉤藤藥材，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達(dá)70％，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(5)合并所述步驟(2)、(3)、(4)制得的稠膏，加入所述步驟(1)制得的天竺黃細(xì)粉，混勻，在80℃下干燥，粉碎成細(xì)粉，過篩，加入適量淀粉，混勻，分裝成膠囊。
本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明的蟬夜安神膠囊的內(nèi)容物主要是由天竺黃、蟬蛻、僵蠶、地龍、鉤藤、法半夏、首烏藤、白芍、酸棗仁、遠(yuǎn)志作原料藥制成，它具有清熱化痰、鎮(zhèn)靜安神的功能，對失眠治療效果好、毒性作用小，特別適于治療痰熱內(nèi)擾型失眠。
以下通過試驗例來進一步闡述本發(fā)明所述的蟬夜安神膠囊的有益效果試驗例一、蟬夜安神膠囊主要藥效學(xué)試驗摘要通過動物實驗研究，觀察了蟬夜安神膠囊給予動物灌胃后出現(xiàn)明顯的解熱、抗炎、抑菌、鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥、提高動物機體免疫功能的作用。蟬夜安神膠囊各劑量給藥組均能使發(fā)熱家兔體溫降低；小鼠耳腫脹度及大鼠足腫脹度減輕，并有抑菌作用；小鼠自主活動(記數(shù)法及走動時間及舉前肢法)減少；小鼠入睡潛伏期縮短，睡眠時間延長；睡眠動物數(shù)增多，提高睡眠百分率；對抗中樞興奮藥—士的寧致小鼠驚厥作用；使小鼠碳廓清率提高，使幼齡小鼠免疫器官增重，使小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)增強，使血清溶血素生成增多。以上結(jié)果表明蟬夜安神膠囊對痰熱內(nèi)擾型失眠癥具有良好的防治作用，因此該藥可以提供臨床試用，進一步觀察該藥的療效。
目的觀察蟬夜安神膠囊給予動物灌胃給藥后所產(chǎn)生的解熱、抑菌、抗炎、鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥，及對小鼠機體免疫功能影響的作用，為中醫(yī)臨床試用治療痰熱內(nèi)擾型失眠提供實驗依據(jù)。
1 實驗材料1.1 藥物受試藥蟬夜安神膠囊，功能清熱化痰，鎮(zhèn)靜安神；主治痰熱內(nèi)擾型失眠癥。該藥由珠海星光制藥有限公司提供，批號20020329，口服膠囊劑型，內(nèi)容物呈棕色粉末，每粒裝0.4g，合生藥5.10g，每1g膠囊內(nèi)容物合生藥12.75g，成人日用劑量為(每日2次，每次5粒，成人體重按60kg計算)0.067g/kg，合生藥0.854g/kg。實驗時用蒸餾水配制成不同濃度的混懸液，置冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?；陽性對照藥——舒眠膠囊由貴州大隆制藥有限公司提供[國藥準(zhǔn)字(1999)z-33號]，批號20010103，口服膠囊劑型，內(nèi)容物呈棕色粉末，裝量為0.4g/粒，成人日用劑量為0.04g/kg，實驗時用蒸餾水配制成混懸液置冰箱保存?zhèn)溆?；戊巴比妥由上海醫(yī)藥進出口銷售部提供，批號20010908，實驗時用生理鹽水配制成4.5％及3％戊巴比妥鈉水溶液；硝酸士的寧注射液由上海禾豐制藥有限公司提供，批號010901，安瓿劑型，2mg/毫升，實驗時用生理鹽水配制成0.015％士的寧溶液；印度墨汁由長江日用粘合材料廠提供，批號98112，實驗時用生理鹽水配制成50％印度墨汁水溶液；2，4二硝基氯苯(DNCB)由中國上海試劑一廠提供，批號981201。
1.2 動物昆明種小鼠，體重20～22g；wistar大鼠，體重210~230g；家兔，體重2.5±1.0kg；豚鼠，體重300±50g；以上動物♀♂兼用，均由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，清潔級，合格證號200200018；公雞，市售(健康)。
1.3 主要儀器TMP-1上皿式電子天平(由湖南儀器儀表總廠天平廠提供)，721型分光光度計(由上海第三分析儀器廠提供)，LD5-2A離心機(由北京醫(yī)用離心機廠提供)。
2 實驗方法與結(jié)果2.1 蟬夜安神膠囊對致熱家兔解熱作用取家兔30只，分別稱重，編號；在室溫20℃條件下測正常體溫，選擇體溫在38~39℃的家兔供實驗用，隨機分為五組，每組6只，逐只向各組每只家兔耳靜脈注射傷寒、副傷寒甲、乙三聯(lián)菌苗0.5ml/kg體重，5h后家兔體溫升高造成高熱模型家兔；按表1所示藥物、劑量灌胃給藥，于藥后1h，3h，5h，7h測定各家兔體溫。結(jié)果見表1。
從表1可見蟬夜安神膠囊于灌胃給藥后1h就出現(xiàn)明顯的解熱作用，并可延續(xù)7h之久，與發(fā)熱模型家兔比較差異顯著(P＜0.05～P＜0.01)，而舒眠膠囊組及空白對照組對高熱家兔無解熱作用。
表1蟬夜安神膠囊對高熱模型家兔解熱作用(℃ x±s n＝6)組別劑量 正常時 發(fā)熱時致熱后解熱體溫(g/kg) 體溫體溫 1h3h5h 7h空白對照組 -38.3±0.3 39.4±0.4 39.9±0.3 40.1±0.3 39.7±0.20 39.5±0.3大劑量組0.67038.7±0.3 39.3±0.2 39.0±0.18*38.7±0.27**38.8±0.13**38.9±0.2*中劑量組0.33538.9±0.2 39.4±0.4 39.2±0.4*38.9±0.25*39.1±0.15**38.9±0.2*小劑量組0.17038.8±0.2 39.4±0.3 39.5±0.3*39.0±0.3*39.0±0.20*38.9±0.2*舒眠膠囊組 0.20 38.7±0.2 39.3±0.4 40.0±0.3 40.0±0.3 39.8±0.30 39.2±0.3注藥后體溫與藥前發(fā)熱體溫比較*P＜0.05 **P＜0.012.2 蟬夜安神膠囊抑菌作用2.2.1 實驗菌種金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、副氏痢疾桿菌、枯草桿菌、綠膿桿菌，均由貴陽中醫(yī)學(xué)院微生物教研室提供，批號20020601。
2.2.2 培養(yǎng)基普通肉湯培養(yǎng)基、普通營養(yǎng)瓊脂、血瓊脂平板(提供單位貴陽中醫(yī)學(xué)院微生物教研室)2.2.3 預(yù)先處理細(xì)菌及藥物將上述菌株分別常規(guī)培養(yǎng)24h增菌后，再分別轉(zhuǎn)種培養(yǎng)6h，然后作1∶1000稀釋即用；將供試藥物(蟬夜安神膠囊內(nèi)容物)配制成每1ml含1g的濃度。
2.2.4 采用抗菌譜初篩試驗；抗菌強度定性試驗；抗菌強度定量試驗。
2.2.5 結(jié)果①抗菌譜供試藥物蟬夜安神膠囊對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、副氏痢疾桿菌、枯草桿菌、綠膿桿菌等實驗菌均有一定的抗菌作用。
②抗菌強度定性結(jié)果見表2表2蟬夜安神膠囊抗菌強度定性結(jié)果金黃色葡 白色葡 檸檬色葡 乙型溶血性 大腸 傷寒 副氏痢 枯草 綠膿菌種萄球菌萄球菌 萄球菌 鏈球菌 桿菌 桿菌 疾桿菌 桿菌 桿菌抑菌圈直2.0 1.9 1.7 1.9 1.4 1.31.11.2 1.3徑(cm)
③抗菌強度定量試驗結(jié)果見表3表3蟬夜安神膠囊抗菌強度定量結(jié)果金黃色白色葡萄 檸檬色葡 乙型溶血 副氏痢疾桿藥濃葡 大腸桿菌 傷寒桿菌 枯草桿菌 綠膿桿菌試藥 球菌 萄球菌 性鏈球菌 菌％ 萄球菌號MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC------------------150.0225.0---------+-----+-+312.50 -----+---+-+-+-+-+46.25---+++--++++++++++53.13-+-+++-+++++++++++61.56-+++++-+++++++++++70.78++++++++++++++++++80.39++++++++++++++++++注最小抑菌濃度(MIC)，最小殺菌濃度(MBC)，(-)表示有抑制作用；(+)表示無抑制作用。
2.2.6 結(jié)論蟬夜安神膠囊對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、副氏痢疾桿菌、枯草桿菌、綠膿桿菌等實驗菌均有一定抗菌作用，其中對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌抗菌作用較強，對大腸桿菌、傷寒桿菌、副氏痢疾桿菌、枯草桿菌、綠膿桿菌抗菌作用較弱，以上抗菌作用與該制劑清熱化痰功能相吻合。
2.3 蟬夜安神膠囊抗炎作用2.3.1 蟬夜安神膠囊對二甲苯致小鼠耳腫的影響取昆明種小鼠50只，♀♂各半，體重20±2g，隨機分為五組，每組10只，分別按表4所述藥物、劑量灌胃給藥，每日一次，連續(xù)5天；末次藥后1小時，以二甲苯0.03ml涂于各組每只小鼠右耳前后兩面，15min時剪取雙耳，以直徑為8mm的打孔器于同一部位取下左右兩耳片，分別稱重(mg)，計算每只鼠耳腫脹度(右耳重減去左耳重之差，mg)，進行組間t檢驗，比較組間腫脹度差異性。結(jié)果見表4。
由表4可見蟬夜安神膠囊各劑量對二甲苯所致急性炎癥均有不同程度對抗作用，即表明蟬夜安神膠囊化痰功能的機理。舒眠膠囊對二甲苯誘發(fā)的炎癥無對抗作用。
表4蟬夜安神膠囊對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響(x±s，n＝10)劑量體重 耳腫脹度腫脹抑制率組別(g/kg)(g) (mg)(％)空白對照組- 21.0±0.85 6.0±1.21 -大劑量組 1.34 21.1±0.88 3.7±1.16***38中劑量組 0.67 20.8±0.86 4.0±1.20**33小劑量組 0.34 20.9±0.94 4.4±0.70*27舒眠膠囊組0.40 20.5±0.76 6.1±1.11-注各給藥組與空白對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0012.4 蟬夜安神膠囊對小鼠鎮(zhèn)靜作用
2.4.1 對小鼠自主活動的影響(活動記數(shù)法)取♀性小鼠50只，隨機分為5組，即空白對照組——給予蒸餾水0.2ml/10g體重灌胃；蟬夜安神膠囊大、中、小劑量組——劑量分別是1.34g、0.67g、0.34g/kg(合生藥17.1g、8.5g、4.3g/kg)，各為成人日用劑量0.067g/kg(合生藥0.85g/kg)的20倍、10倍、5倍，實驗時用蒸餾水配制成6.7％、3.4％、1.7％蟬夜安神膠囊內(nèi)容物混懸液按0.2ml/10g體重灌胃；陽性藥對照組——舒眠膠囊組，以舒眠膠囊內(nèi)容物，用蒸餾水配制成2.0％混懸液按0.2ml/10g體重灌胃。于上午8時～11時室溫20℃±1℃進行實驗，各組小鼠分別按體重灌胃給藥后20min，將小鼠放在小鼠活動記錄儀內(nèi)，先適應(yīng)5min后，再記錄5min內(nèi)各鼠自發(fā)活動次數(shù)，計算各組小鼠自發(fā)活動抑制百分率(％)。結(jié)果見表5。
由表5可見蟬夜安神膠囊各劑量組對小鼠自發(fā)活動均有明顯的抑制作用，與空白對照組相比差異顯著；并能提高自發(fā)活動抑制率，比舒眠膠囊作用優(yōu)。
表5蟬夜安神膠囊對小鼠自發(fā)活動的影響——活動記數(shù)法(x±s n＝10)劑量 5min內(nèi)自發(fā)活動次數(shù) 抑制率組別(g/kg)(次) (％)空白對照組- 11778±3179-大劑量組 1.34 8017±957***32中劑量組 0.67 8419±1059**29小劑量組 0.34 8367±1814**29舒眠膠囊組0.40 10149±230014注與空白對照組比較**P＜0.01***＜0.0012.4.2 蟬夜安神膠囊對小鼠走動時間及舉雙前肢的影響取♂性小鼠50只，體重18～22g，隨機分組同上述實驗項目2.4.1；將各組小鼠分別放在實驗箱內(nèi)適應(yīng)5min后，測定各鼠5min內(nèi)走動時間及前肢向上抬舉次數(shù)，作為給藥前各鼠正常狀態(tài)時小鼠自主活動。次日同樣時間按表6所示藥物、劑量分別給藥；給藥后15min時用上述相同方法將小鼠放入實驗箱內(nèi)適應(yīng)5min后，測定各鼠5min內(nèi)的自主活動，所得結(jié)果進行組間及給藥前、后小鼠自主活動變化的比較，結(jié)果見表6。
由表6可見，給藥前各組小鼠走動時間及前肢向上抬舉次數(shù)無明顯差異，給藥后給藥組與空白對照組比較，走動時間及前肢向上抬舉次數(shù)差異顯著，給藥組小鼠自主活動明顯減少，各給藥組給藥后與給藥前小鼠走動時間及前肢向上抬舉次數(shù)明顯減少，比陽性對照藥舒眠膠囊作用優(yōu)。
以上結(jié)果表明蟬夜安神膠囊對小鼠自主活動具有明顯的鎮(zhèn)靜作用。
表6蟬夜安神膠囊對小鼠自主活動抑制作用(x±s n＝10)給藥前給藥后劑量組別(g/kg)走動時間(s) 前肢向上抬舉次數(shù)走動時間(s) 前肢向上抬舉次數(shù)空白對照組 -106.0±9.75 24.8±4.37108.9±11.3224.1±5.20大劑量組 1.34 109.3±13.91 26.1±5.3841.4±12.12***ΔΔΔ15.2±1.80***ΔΔΔ中劑量組 0.67 113.4±17.96 26.2±5.7351.2±10.1***ΔΔΔ17.7±2.58**ΔΔΔ小劑量組 0.34 108.9±15.63 24.7±6.7850.3±10.1***ΔΔΔ17.3±2.91**ΔΔ舒眠膠囊 0.40 113.8±13.25 22.3±5.5956.3±9.42***ΔΔΔ17.2±4.10**△注與空白對照組比較**P＜0.01 ***P＜0.001；藥前與藥后比較ΔP＜0.05ΔΔP＜0.01ΔΔΔP＜0.001。
2.4.3 蟬夜安神膠囊對戊巴比妥鈉催眠量致小鼠睡眠的影響取小鼠100只，隨機分組同上實驗項目2.4.1，每組20只，♀♂各半；按表7所示藥物、劑量灌胃給藥，每日一次，連續(xù)三日；末次藥后30min及60min分別取出♀♂各半10只小鼠，以4.5％戊巴比妥鈉(45mg/kg)0.1ml/10g體重腹腔注射(ip)，立即觀察并記錄小鼠翻正反射消失的時間和小鼠翻正反射恢復(fù)的時間，該時間分別為該小鼠入睡潛伏期(出現(xiàn)睡眠時間)及睡眠持續(xù)時間。結(jié)果見表7。
由表7可見蟬夜安神膠囊具有協(xié)同戊巴比妥鈉中樞抑制作用，表現(xiàn)為二藥合用小鼠入睡潛伏期縮短，睡眠時間延長，與空白對照組相比差異顯著(P＜0.01、P＜0.001)。與舒眠膠囊催眠作用近似。
表7蟬夜安神膠囊對戊巴比妥鈉催眠作用的影響(x±s n＝10)給藥后30min藥后60min劑量組別(g/kg)入睡潛伏期 睡眠持續(xù)時間 入睡潛伏期 睡眠持續(xù)時間(min)(min) (min) (min)空白對照組 - 8.60±2.26 17.88±2.89.60±3.13 17.1±4.51大劑量組1.344.89±1.79***88.56±33.23***5.70±1.89**38.3±12.11***中劑量組0.674.78±1.10***56.00±15.30***6.10±1.66**38.1±13.91***小劑量組0.344.17±1.85***34.75±15.90***6.20±1.99**27.1±6.77**舒眠膠囊組 0.404.90±1.85***48.40±19.10***6.40±2.07**30.6±7.37***注各給藥組與空白對照組比較**P＜0.01***P＜0.0012.4.4 蟬夜安神膠囊對小鼠閾下催眠劑量戊巴比妥鈉作用的影響仿文獻(xiàn)取小鼠120只，♀♂各半，體重20～22g，隨機分組同上述實驗項目2.4.1，按表8所示藥物、劑量給予各組小鼠30min及60min后，逐只小鼠分別ip 3％戊巴比妥鈉溶液30mg/kg，觀察并記錄各組小鼠翻正反射消失(即入睡)的動物只數(shù)，計算其睡眠百分率。結(jié)果見表8。由表8可見，蟬夜安神膠囊各組及舒眠膠囊組睡眠動物數(shù)明顯增加，睡眠百分率明顯升高?？梢娤s夜安神膠囊給藥后30min與藥后60min催眠作用均強，呈量一效正相關(guān)關(guān)系，表明蟬夜安神膠囊與戊巴比妥鈉合用對中樞抑制作用明顯加強。
表8蟬夜安神膠囊對閾下催眠劑量戊巴比妥鈉協(xié)同作用的影響(x±s n＝12)藥后30min 藥后60min劑量組別(g/kg)入睡動物數(shù)入睡百分率入睡動物數(shù)入睡百分率(只) (％) (只) (％)空白對照組- 1 8 0 0大劑量組1.34 7*588*66中劑量組0.67 4 337*58小劑量組0.34 3 255 42舒眠膠囊組 0.40 3 255 42注x2檢驗，與空白對照組比較，*P＜0.052.4.5 蟬夜安神膠囊對抗士的寧致小鼠驚厥作用取小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，♀♂各半，按表9所示藥物、劑量分別灌胃給藥，每日一次，連續(xù)3日；末次藥后30min，以0.015％硝酸士的寧溶液0.1ml/10g體重腹腔注射，立即記錄士的寧致驚潛伏期(s)及小鼠小鼠死亡時間(s)，觀察驚厥以興奮、躁動、豎尾到陣攣性驚厥死亡為指標(biāo)，其結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理進行組間t檢驗。結(jié)果見表9。
由表9可見，蟬夜安神膠囊大、中、小劑量對士的寧致驚厥均有明顯的對抗作用，使致驚潛伏期明顯延長，死亡時間明顯延長。
表9蟬夜安神膠囊對小鼠致驚劑量士的寧引起驚厥的影響組別劑量 動物數(shù) 驚厥動物潛伏期 死亡時間(g/kg) (只) (s) (s)空白對照組 - 10 173.4±32.53 146.6±17.48大劑量組1.3410 237.3±52.92**172.6±16.65**中劑量組0.6710 225.7±32.51**178.9±19.20**小劑量組0.3410 214.0±28.69**168.7±12.73*△舒眠膠囊組 0.4010 188.8±14.16 161. 0±15.36注與空白對照組比較，**P＜0.012.5 蟬夜安神膠囊對小鼠免疫功能的影響2.5.1 對小鼠碳廓清率——網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞吞噬作用的影響取昆明種小鼠50只，隨機分組，每組10只，♀♂各半，按表10所示藥物、劑量給藥，每日一次，連續(xù)8天，末次藥后1h，以50％印度墨汁0.1ml/10g體重尾靜脈注射，于注射后2min、12min分別從眼眶取血0.02ml，加入盛有0.1％Na2CO3溶液2ml的試管內(nèi)，靜置10min后用721型分光光度計比色(λ＝680nm)，讀取光密度，計算吞噬指數(shù)(K值)。取血后處死小鼠，取肝、脾稱重，計算校正吞噬指數(shù)(α值)。結(jié)果見表10。
由表10可見除蟬夜安神膠囊小劑量組K值外，其余各組K值、α值均有明顯的增加，與空白對照組相比差異顯著(P＜0.05～P＜0.001)。蟬夜安神膠囊中劑量組與舒眠膠囊作用相近，表明蟬夜安神膠囊具有提高小鼠非特異性免疫功能作用。
表10蟬夜安神膠囊對小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬作用的影響(x±s n＝10)劑量組別 K值 α值(g/kg)空白對照組-0.0305±0.0182 5.359±1.216大劑量組 1.34 0.0575±0.0336*6.567±1.056*中劑量組 0.67 0.0536±0.0169**6.600±0.654**小劑量組 0.34 0.0436±0.0138 6.717±1.217*舒眠膠囊組0.40 0.0550±0.0181**6.922±1.060**注與空白對照組比較，*＜0.05 **P＜0.012.5.2 蟬夜安神膠囊對幼齡小鼠免疫器官重量的影響取幼齡小鼠50只，體重14~16g，隨機分為5組，每組10只，♀♂各半，按表11所示藥物及劑量灌胃給藥，每日一次，連續(xù)13天；第14天將各組小鼠脫頸椎處死，剖取脾臟及胸腺分別稱重，并計算脾臟及胸腺臟器指數(shù)。結(jié)果見表11。
由表11可見，除蟬夜安神膠囊小劑量組外，所有給藥組對小鼠脾臟、胸腺重量及指數(shù)均有增加的趨勢，無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但也可以表明蟬夜安神膠囊有一定程度的能夠提高小鼠非特異性免疫的功能。
表11 蟬夜安神膠囊對幼齡小鼠免疫器官重量及指數(shù)影響(x±s n＝10)組別 劑量 臟器重量(g) 臟器指數(shù)(g/10g體重)(g/kg) 脾胸腺體重脾 胸腺空白對照組 - 0.106±0.035 0.069±0.03022.14±6.12 0.048±0.01220.0305±0.0092大劑量組1.340.101±0.028 0.079±0.04720.02±2.66 0.0514±0.0164 0.0340±0.0139中劑量組0.670.107±0.016 0.075±0.02219.83±0.81 0.0548±0.0112 0.0377±0.0098小劑量組0.340.096±0.024 0.063±0.02218.31±4.73 0.0536±0.0121 0.0339±0.0056舒眠膠囊0.400.096±0.024 0.071±0.03818.90±2.80 0.0517±0.0155 0.0360±0.0148注各給藥組與空白對照組比較P均＞0.052.5.3 蟬夜安神膠囊對小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)的影響取昆明種小鼠50只，隨機分組同上述實驗項目2.5.1；按表12所示藥物、劑量灌胃給藥，每天一次，連續(xù)8天；于第3天和第5天用2.5％DNCB丙酮液0.02ml/只背部皮下注射致敏，第8天藥后1h用1％DNCB丙酮液0.02ml/只涂小鼠右耳(攻擊)。次日處死小鼠剪下雙耳，用直徑為8mm的打孔器取下左右兩耳同一部位之耳片，分別稱重，計算兩耳片重量之差(腫脹度)。結(jié)果見表12。
從表中可見，蟬夜安神膠囊大、中劑量及陽性藥舒眠膠囊均可使小鼠耳腫脹度明顯增加，表明以上兩種藥物均可明顯提高小鼠特異性免疫功能。
表12蟬夜安神膠囊對小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響(x±s n＝10)劑量 耳腫脹度組別(g/kg) (mg)空白對照組 - 3.25±1.41大劑量組 1.34 5.44±2.13*中劑量組 0.67 5.15±2.76*小劑量組 0.34 3.97±1.72舒眠膠囊組 0.40 5.04±1.24**注與空白對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01
2.5.4 蟬夜安神膠囊對小鼠血清溶血素含量的影響取昆明種小鼠50只，隨機分組，按表13所示藥物、劑量灌胃給藥，每日一次，連續(xù)9次。給藥的第2天以5％雞紅細(xì)胞(CRBC)混懸液0.2ml/只腹腔注射(ip)進行免疫，第9天藥后1h，摘眼球取血靜置30min，取血清10μ1，加入生理鹽水(NS)1ml，再加入5％CRBC混懸液及10％補體各0.5ml，混勻，置37℃的恒溫水浴箱孵育30min后，再移入冰箱冷卻5min，用分光度計測定光密度(OD)值，觀察溶血素生成情況。另設(shè)不加血清空白對照管上清液作調(diào)“0”基準(zhǔn)，以光密度(OD)讀數(shù)作為判定血清溶血素的指標(biāo)，比較各組差異。結(jié)果見表13。
由表13可見蟬夜安神膠囊各劑量組測得光密度值均明顯增加，與空白組比較，P＜0.001~P＜0.05，并呈量一效正相關(guān)。陽性藥舒眠膠囊與小劑量組近似，表明給藥組均可使小鼠血清溶血素生成增多，即抗體產(chǎn)生量增多；說明蟬夜安神膠囊能提高小鼠機體體液免疫功能，即提高小鼠機體特異性免疫功能。
表13蟬夜安神膠囊對小鼠溶血素生成影響(x±s n＝10)組別劑量 溶血素(g/kg)空白對照組 - 0.0812±0.014大劑量組1.34 0.1272±0.026***中劑量組0.67 0.1151±0.026**小劑量組0.34 0.1115±0.028*舒眠膠囊組 0.40 0.1186±0.036*注給藥組與空白對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0013 結(jié)束語經(jīng)主要藥效學(xué)動物實驗結(jié)果表明，蟬夜安神膠囊具有明顯的解熱、抑制細(xì)菌、消炎化痰、鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥及提高小鼠免疫功能的作用，與臨床中醫(yī)治療痰熱內(nèi)擾型失眠癥機理相吻合。該制劑對高熱家兔具有解熱作用，對多種細(xì)菌具有對抗作用；對二甲苯所致小鼠耳腫有明顯的抑制作用；對小鼠自主活動有明顯的抑制作用，對戊巴比妥鈉催眠量及閾下催眠劑量催眠作用均有協(xié)同作用；使小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮吞噬功能增強，免疫器官增重，遲發(fā)型趨敏反應(yīng)提高，使小鼠血清溶血素生成增加。
以上結(jié)果表明該制劑具有清熱、消炎、鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥及提高機體免疫功能的作用；因此，蟬夜安神膠囊有良好的治療痰熱內(nèi)擾型失眠的藥理基礎(chǔ)，可以提供臨床試用。
試驗例二、蟬夜安神膠囊急性毒性試驗摘要觀察口服給藥途徑，測定蟬夜安神膠囊最大給藥量試驗。結(jié)果表明小鼠口服蟬夜安神膠囊內(nèi)容物水混懸液，最大給藥量為28g/kg，合生藥357g/kg，相當(dāng)于成年人每日用藥量418倍。所以，可以認(rèn)為臨床擬定成人口服給藥劑量0.067g/kg(合生藥0.854g/kg)是安全的，因此本品可以提供臨床試用。
目的觀察蟬夜安神膠囊短期口服給予動物后，所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況，或最大給藥劑量，或推算臨床成人用量安全倍數(shù)，綜合評價該藥物的安全性。
1 實驗材料1.1 藥物受試藥物蟬夜安神膠囊由廣東珠海星光制藥有限公司提供，批號20020329，口服膠囊劑型，每1g膠囊內(nèi)容物合生藥12.75g，擬定臨床成人日用劑量為每日2次，每次5粒，0.4g/粒，該劑量按kg體重(成人體重按60kg計)計算為0.067g/kg，合生藥0.854g/kg。實驗時用蒸餾水配制成蟬夜安神膠囊內(nèi)容物混懸液置冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?br> 1.2 動物昆明種小鼠，體重20±2g，♀♂各半，由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號0200015。先予飼養(yǎng)3天適應(yīng)環(huán)境，第4天進行實驗。
2 實驗方法2.1 預(yù)試實驗取小鼠6只，以蟬夜安神膠囊內(nèi)容物混懸液最大濃度0.35g/ml(合生藥4.4625g/ml)、最大容積0.4ml/10g體重，給予小鼠一次灌胃，此劑量14g/kg(合生藥178.5g/kg)相當(dāng)于成年人每日劑量0.067g/kg(合生藥0.854g/kg)的209倍；觀察7天，不引起小鼠死亡。因不能測出藥物的半數(shù)致死量(LD50)，故進行本品最大給藥量的正式實驗。
2.2 正式實驗昆明種小鼠20只，♀♂各半，禁食不禁水12小時，給予小鼠0.35g/ml蟬夜安神膠囊內(nèi)容物混懸液0.4ml/10g體重，一日內(nèi)2次，藥量共計28g/kg，合生藥357g/kg。按體重計算此劑量相當(dāng)于成年人每日劑量0.067g/kg(合生藥0.854g/kg)的418倍。給藥后常規(guī)飼養(yǎng)小鼠7天，逐日觀察小鼠表現(xiàn)。
3 實驗結(jié)果小鼠給藥后7天內(nèi)，除給藥后小鼠出現(xiàn)短暫的活動減少，不喜啃咬、攝食外，未見小鼠出現(xiàn)毒性反應(yīng)及死亡現(xiàn)象。此結(jié)果表明1日內(nèi)給予小鼠2次灌胃蟬夜安神膠囊混懸液最大濃度(0.35g/ml)、最大容量(0.4ml/10g體重)，其劑量共計為28g/kg，合生藥357g/kg，相當(dāng)于成人每日劑量0.067g/kg(合生藥0.854g/kg)的418倍，而不致動物死亡。據(jù)文獻(xiàn)報道“一般認(rèn)為按體重計算小鼠最大耐受量相當(dāng)于人用量100倍以上則較為安全，可以提供臨床試用”。
根據(jù)上述實驗結(jié)果可以認(rèn)為，蟬夜安神膠囊口服給藥對動物的急性毒性甚小，臨床擬定成人每日服用該制劑0.067g/kg(合生藥0.854g/kg)體重是安全的，可以提供臨床試用。
4 結(jié)語受藥物濃度和容積的限制，對小鼠1次灌胃給藥測不出LD50，經(jīng)最大給藥量測定，1日內(nèi)2次給予小鼠灌胃給藥，最大給藥量相當(dāng)于臨床用藥量的418倍，故可認(rèn)為本品的急性毒性低，口服安全。
試驗例三、蟬夜安神膠囊長期毒性試驗試驗摘要大鼠連續(xù)8周灌胃(po)給予蟬夜安神膠囊內(nèi)容物3.35g、2.01g、1.005g/kg，合生藥42.71g、25.63g、12.81g/kg體重——三個劑量組劑量分別為擬用臨床成人日劑量0.067g/kg(合生藥0.854g/kg)體重(成人體重按60kg計)的50倍、30倍、15倍，及停藥2周。除去各組大鼠體重、攝食逐日增加外，未觀察到各組大鼠行為、活動、皮毛、大小便等明顯異常變化，未觀察到各組大鼠血液細(xì)胞學(xué)、血液生化學(xué)指標(biāo)(肝功能、腎功能)明顯變化，未觀察到各組大鼠主要器官心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺系數(shù)異常變化，同時上述臟器病理組織檢查未見明顯異常。
1 目的觀察較大劑量、較長時間、連續(xù)給予大鼠重復(fù)灌胃蟬夜安神膠囊8周，對大鼠所產(chǎn)生毒性反應(yīng)，嚴(yán)重程度及首先出現(xiàn)的癥狀；觀察毒性反應(yīng)的靶器官及恢復(fù)和發(fā)展情況，確定無毒反應(yīng)劑量，為擬定人用安全劑量提供依據(jù)。
2 實驗材料2.1 藥物蟬夜安神膠囊為口服膠囊劑，每粒裝0.4g，合生藥5.1g，每1g膠囊內(nèi)容物合生藥12.75g，由珠海星光制藥有限公司提供，批號20020329。蟬夜安神膠囊內(nèi)容物為棕色粉末，實驗時用蒸餾水配制成不同濃度混懸液，冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 2.2 動物wistar大鼠80只，♀♂各半，體重100~120g，由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號0200015。
2.3 主要儀器SC-970全自動血細(xì)胞分析儀，瑞士貝肯公司；日立7170A全自動生化分析儀，美國柯達(dá)。
2.4 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計以X±S表示，進行組間t檢驗。
3 實驗方法3.1 實驗條件 給藥前后的大鼠均每籠單性別群養(yǎng)，每籠同性別5只大鼠，飼以全價顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫20~25℃，濕度55％~65％。給藥前先觀察7天大鼠一般狀況，無異常變化，再開始給藥進行試驗。
3.2 分組和劑量取wistar大鼠80只，隨機分為4組，每組20只，♀♂各半，分別作為蟬夜安神膠囊高、中、低3種劑量組及空白對照組(對照組)。給藥組劑量分別為3.35g、2.01g、1.005g/kg(合生藥42.71g、25.63g、12.81g/kg)，各為擬定臨床成人日用劑量0.067g/kg(合生藥0.854g/kg)體重的50倍、30倍、15倍。實驗前將蟬夜安神膠囊內(nèi)容物用蒸餾水配制成33.5％、20.1％、10.05％的蟬夜安神膠囊混懸液，置于冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。給藥容積為10ml/kg體重。
3.3 給藥途徑及方法因為蟬夜安神膠囊臨床用藥途徑是口服給藥，所以各組均灌胃給藥，每日上午8時動物空腹時灌胃一次，連續(xù)8周；每周稱動物體重一次，根據(jù)動物體重增長變化，調(diào)整給藥劑量。
3.4 試驗周期實驗總周期為10周，前8周為給藥時間，后2周為停藥恢復(fù)時間；首先觀察給藥8周期間動物有無毒性反應(yīng)，每組取半數(shù)動物處死，測定各項指標(biāo)，其余半數(shù)動物停藥飼養(yǎng)2周后，同上述方法檢測各項指標(biāo)。
4 檢查項目4.1 一般觀察 進食量、體重、外觀形態(tài)體征、行為活動、大便性狀等；發(fā)現(xiàn)中毒動物立即隔離，重點觀察；發(fā)現(xiàn)死亡或瀕死動物，即刻尸檢。
4.2 檢測項目 連續(xù)給藥8周，末次藥后24小時，稱大鼠體重后，每組動物半數(shù)♀♂各半，股靜脈取血進行測試血液細(xì)胞學(xué)、血液生化學(xué)指標(biāo)后將動物處死，立即剖取各鼠主要器官心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺，分別稱重，計算器官系數(shù)；再于同一部位取材浸泡于10％甲醛溶液固定，進行石蠟包埋，切片，HE染色；置光學(xué)顯微鏡觀察并與對照組比較，首先對比檢查高劑量組與對照組動物組織切片，觀察器官組織形態(tài)變化。
血液學(xué)檢查指標(biāo)紅細(xì)胞(RBC)計數(shù)、紅細(xì)胞體積(HCT)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)、血紅蛋白(Hgb)、血紅蛋白平均量(MCH)、血小板(PLT)、白細(xì)胞(WBC)計數(shù)、淋巴細(xì)胞(LY)、粒細(xì)胞(GR)、單核細(xì)胞(MO)。
血液生化學(xué)(肝、腎功能)檢查指標(biāo)尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(AKP)含量。
4.3 指標(biāo)觀察時間 每天全面觀察所有實驗動物的一般狀況，動物活動行為，大便性狀，外觀體征，飼料夜耗量；每周稱體重一次；給藥8周末次藥后24小時，及停藥2周恢復(fù)期末，各進行一次各項指標(biāo)的全面檢查。
5 實驗結(jié)果5.1 蟬夜安神膠囊對大鼠一般情況及進食的影響 在連續(xù)給藥8周及停藥2周內(nèi)，將各給藥組與對照組比較，觀察動物活動、行為、飲食、大便、毛發(fā)光澤等，觀察到兩組動物情況相似，未見明顯異常變化。在同一時間內(nèi)大鼠攝食量雄性鼠比雌性鼠稍有增加，但無明顯差異。結(jié)果見表1-1、表1-2。
5.2 蟬夜安神膠囊對大鼠體重的影響實驗結(jié)果見表2-1、表2-2。
從表內(nèi)可見，蟬夜安神膠囊高、中、低三種劑量對大鼠連續(xù)給藥不同時間后的體重與對照組比較，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；但雄鼠體重比雌鼠體重增長略高。即實驗結(jié)果表明在較大蟬夜安神膠囊劑量、較長療程(8周)用藥及停藥2周對大鼠生長發(fā)育(體重增長)無毒性影響。
5.3 蟬夜安神膠囊對大鼠血液細(xì)胞學(xué)影響 實驗結(jié)果見表3-1、表3-2。
從表中可見，蟬夜安神膠囊高、中、低3種劑量對大鼠連續(xù)給藥8周及停藥2周，對大鼠的血常規(guī)均未見顯著影響；各給藥組動物RBC、Hgb、PCT、WBC等數(shù)值與對照組的數(shù)值接近；與對照組相比，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，P＞0.05；因此，可以認(rèn)為蟬夜安神膠囊較大劑量、較長時間(8周)給藥，及停藥2周，對大鼠的造血功能無顯著的毒性影響。
5.4 蟬夜安神膠囊對大鼠血液生化學(xué)(肝功、腎功)的影響 實驗結(jié)果見表4-1、表4-2。
從表中可見，蟬夜安神膠囊高、中、低3種劑量對大鼠連續(xù)給藥8周及停藥2周，大鼠的肝功能及腎功能各項生化指標(biāo)數(shù)值分別與對照組相應(yīng)數(shù)值相比較，未見明顯差異，P＞0.05；故表明蟬夜安神膠囊較大劑量連續(xù)用藥8周及停藥2周對大鼠肝功能、腎功能均無顯著毒性作用。
5.5 蟬夜安神膠囊對大鼠主要器官系數(shù)的影響 實驗結(jié)果見表5-1、表5-2。
從表中可見，蟬夜安神膠囊高、中、低3種劑量對大鼠連續(xù)給藥8周及停藥2周，大鼠重要器官心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺重量系數(shù)的數(shù)值與對照組均相近；經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，各給藥組各項指標(biāo)數(shù)值與對照組比較，其差異均無顯著性，P均＞0.05。表明蟬夜安神膠囊較大劑量長期(8周)灌胃及停藥2周，對大鼠器官重量系數(shù)無明顯影響。
5.6 蟬夜安神膠囊對大鼠重要臟器組織病理形態(tài)的影響對蟬夜安神膠囊連續(xù)給藥為8周，以及停藥2周的兩批次，殺取大鼠并解剖出各組大鼠的心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺；在相同部位取材，用10％甲醛溶液固定。將高劑量組及空白對照組大鼠臟器標(biāo)本抽樣進行組織切片，進行病理學(xué)檢查。
結(jié)果經(jīng)對兩組動物臟器標(biāo)本抽樣檢查，各種器官結(jié)構(gòu)基本正常，細(xì)胞染色均勻，無明顯改變。由于高劑量組動物被檢查的器官未出現(xiàn)藥物致病理改變，故對中劑量組及低劑量組未進行器官組織切片。
表1-1蟬夜安神膠囊長期連續(xù)給藥8周及停藥2周期間對♀大鼠日平均進食量的影響(x±s)周次 空白對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組1 77.07±08.10 75.29±09.98 75.64±08.64 77.21±08.592 107.86±10.80108.86±11.89105.86±08.82103.50±08.363 135.71±10.90139.71±15.00126.33±13.84126.36±13.484 189.93±22.11185.79±24.72187.79±16.78186.14±25.745 231.71±15.25231.36±20.53222.36±16.35226.93±20.426 279.36±17.36275.43±18.90271.64±19.00281.57±15.207 336.64±23.56344.86±29.45340.64±37.62345.07±36.548 368.14±38.57420.50±51.18397.29±42.94387.50±39.239 226.22±6.48 217.07±10.44222.29±5.28 216.57±5.0510237.07±04.92335.15±5.19 234.65±7.57 237.86±6.17注各給藥組與對照組比較，P＞0.05；1～8周為給藥期進食量，g/10只/天，n＝10；9～10周為停藥期進食量，g/5只/天，n＝5。
表1-2蟬夜安神膠囊長期連續(xù)給藥8周及停藥2周期間對♂大鼠日平均進食量的影響(x±s)周次對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組177.57±04.48 80.14±06.25 78.00±07.30 80.79±06.822120.00±16.60110.43±10.31112.79±13.28111.14±16.113146.07±16.03141.57±15.34138.43±12.95132.92±12.094190.57±27.91189.14±27.08196.79±24.18191.43±20.685242.14±14.87240.64±20.41235.86±15.11241.29±19.876292.86±18.56287.43±16.97284.00±19.09288.14±19.907365.29±37.90361.29±33.39353.21±31.51367.71±35.668417.93±27.38424.79±37.96414.29±49.26369.79±39.909223.57±9.19 221.72±8.32 225.15±5.70 223.36±04.8210 241.22±5.68 239.50±7.87 239.15±04.38243.57±13.45注各給藥組與對照組比較，P＞0.05；1～8周為給藥期進食量，g/10只/天，n＝10；9～10周為停藥期進食量，g/5只/天，n＝5。
表2-1蟬夜安神膠囊長期連續(xù)給藥8周及停藥2周期間對♀大鼠體重(g)的影響(x±s)
周次 空白對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組1119.30±7.40 118.30±06.68 120.60±08.11120.40±08.632133.70±10.01131.1±07.17134.00±06.50130.70±05.773151.10±08.76151.8±07.44151.70±07.29149.20±6.704160.00±17.66169.2±21.70164.1±22.46 165.00±19.805182.70±18.03182.2±15.08183.8±17.06 187.10±23.886198.70±17.31200.50±22.86 198.50±15.11207.00±09.107229.10±22.03220.00±22.85 217.40±24.71210.50±12.918256.50±18.04254.4±22.07243.90±17.69240.50±14.329264.80±06.42272.00±21.97 269.80±11.30269.00±15.5910 270.70±12.94277.00±20.80 275.80±20.51277.40±23.56注各給藥組與對照組比較，P＞0.05，1～8周為給藥期，n＝10；9～10周為停藥期，n＝5。
表2-2蟬夜安神膠囊長期連續(xù)給藥8周及停藥2周期間對♂大鼠體重(g)影響(x±s)周次 對照組 大劑量組 中劑量組 小劑量組1121.00±09.30118.10±13.95121.80±14.94123.40±12.042138.70±07.89138.80±13.34138.50±10.30141.70±11.273157.70±09.32160.40±09.47160.60±09.43161.20±10.734168..30±20.33 166.00±20.61167.00±22.36167.80±21.265184.40±20.44183.30±14.02184.90±20.28195.70±06.866202.40±21.4022.00±31.18 205.50±21.66210.00±26.147217.00±25.30223.10±30.83227.00±20.03225.10±22.418252.70±23.90253.40±24.73255.70±17.53254.10±17.379280.60±12.52279.00±19.85282.80±21.75274.20±19.5810 286.00±21.91281.00±21.62289.00±20.43282.00±19.24注各給藥組與對照組比較，P＞0.05，1～8周為給藥期，n＝10；9～10周為停藥期，n＝5。
表3-1蟬夜安神膠囊長期連續(xù)給藥8周對大鼠血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)的影響(X±S n＝10)組別劑量RBCHCT MCV HgbMCHPLT WBC WDC％g/kg (×1012/L)(％) (fl) (g/L) (pg)(×109/L)(×109/L)LYMO GR對照組 - 7.04±0.61 39.92±5.78 55.80±4.10 135.60±10.86 19.00±0.82 495.20±253.44 5.63±1.10 67.60±9.523.70±0.95 28.70±9.12蟬夜安 3.35 7.62±0.45 41.71±2.58 54.90±2.85 142.00±9.0418.80±0.92 561.70±244.30 5.48±1.67 70.20±14.00 3.80±0.75 26.00±13.86神膠囊2.01 7.18±0.33 39.73±2.68 55.00±2.36 138.60±7.6018.8±0.79 616.60±116.47 5.60±1.69 74.50±3.783.90±0.88 22.50±4.551.01 6.87±0.47 38.04±2.93 55.60±2.12 128.00±6.3918.80±0.42 506.80±127.88 5.17±1.31 69.10±4.613.40±0.84 24.50±3.98注各給藥組動物血液細(xì)胞學(xué)各項指標(biāo)數(shù)值分別與對照組相應(yīng)指標(biāo)數(shù)值比較P＞0.05表3-2蟬夜安神膠囊長期連續(xù)給藥8周后停藥2周對大鼠血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)的影響(X±S n＝10)組別劑量RBC HCT MCV Hgb MCH PLT WBCWDC％g/kg (×1012/L)(％) (fl) (g/L) (pg) (×109/L)(×109/L) LY MO GR對照組 -7.13±0.42 38.25±3.17 53.50±1.96 136.20±7.80 19.1±0.88 496.0±166.98 4.08±1.68 86.2±3.33 2.7±0.82 11.3±2.87蟬夜安 3.35 7.24±0.52 39.89±4.53 54.80±2.49 131.3±6.0418.2±0.92 444.8±117.66 5.30±1.91 85.1±3.81 3.0±0.82 12.1±3.48神膠囊2.01 7.09±0.69 38.73±4.17 54.60±2.32 131.4±11.40 18.6±0.84 426.4±134.68 4.85±2.56 86.3±2.56 3.4±0.97 10.3±4.671.01 6.84±0.60 37.84±4.88 54.70±2.68 128.8±8.9019.0±0.94 498.4±157.68 5.33±1.59 85.9±1.59 3.3±0.82 10.8±5.07注各給藥組動物血液細(xì)胞學(xué)各項指標(biāo)數(shù)值分別與對照組相應(yīng)指標(biāo)數(shù)值比較P＞0.05
表4-1蟬夜安神膠囊長期連續(xù)給藥8周對大鼠血液生化指標(biāo)影響(x±s，n＝10)組別 劑量 BUN CreaALT AST TP ALBAKPg/kg mmol/Lμmol/L u/L u/L g/L g/L u/L對照組- 7.68±3.8731.2±14.971.0±17.13336.1±89.6373.67±9.8433.80±3.01301.2±13.60蟬夜安3.358.04±1.0628.5±3.8971.5±11.77296.9±61.5177.91±4.2035.07±1.50350.2±11.05神膠囊2.018.05±0.9028.0±2.4960.2±26.90322.9±80.3976.11±4.1233.86±2.09348.6±99.881.017.81±1.1126.9±4.5168.7±15.41301.6±74.2175.15±3.8732.83±3.04362.2±96.17注各給藥組動物血液生化指標(biāo)數(shù)值分別與空白對照組相應(yīng)指標(biāo)數(shù)值比較P＞0.05表4-2蟬夜安神膠囊長期連續(xù)給藥8周的停藥2周對大鼠血液生化指標(biāo)影響(x±s，n＝10)組別 劑量BUN CreaALTAST TP ALB AKPg/kg mmol/Lμmol/L u/Lu/L g/L G/L u/L對照組- 7.03±1.9860.20±10.1450.5±15.20221.3±50.2067.68±6.6034.20±3.00309.0±83.3蟬夜安3.358.28±0.6965.43±10.5053.7±14.98186.6±33.4874.27±5.9036.74±3.98280.6±50.0神膠囊2.018.16±1.2165.52±6.37 50.5±10.41180.7±38.5875.18±4.4336.36±3.51293.4±66.21.017.56±0.9459.23±8.50 56.0±11.96188.7±25.9075.24±6.4338.24±5.30243.8±48.9注各給藥組動物血液生化指標(biāo)數(shù)值分別與空白對照組相應(yīng)指標(biāo)數(shù)值比較P＞0.05
表5-1蟬夜安神膠囊長期連續(xù)給藥8周對大鼠主要臟器指數(shù)的影響(g/100g體重)(s±x，n＝10)組別 劑量心肝 脾肺腎腎上腺 胸腺g/kg對照組- 0.33±0.053.22±0.660.30±0.020.81±0.090.70±0.100.024±0.0050.018±0.003蟬夜安3.350.32±0.053.33±0.270.31±0.030.87±0.120.67±0.100.024±0.0040.017±0.003神膠囊2.010.34±0.043.36±0.320.32±0.070.87±0.060.63±0.100.025±0.0070.017±0.0041.010.33±0.043.32±0.090.29±0.030.79±0.050.70±0.060.025±0.0050.018±0.002注各給藥組動物主要臟器系數(shù)指標(biāo)數(shù)值分別與空白對照組相應(yīng)指標(biāo)數(shù)值比較，P＞0.05.
表5-2蟬夜安神膠囊長期連續(xù)給藥8周后停藥2周對大鼠主要臟器指數(shù)的影響(g/100g體重)(s±x，n＝10)組別 劑量 心 肝 脾 肺 腎 腎上腺 胸腺g/kg對照組 -0.33±0.0263.58±0.69 0.29±0.085 0.981±0.1650.646±0.068 0.022±0.0040.0174±0.002蟬夜安 3.35 0.34±0.0323.27±0.43 0.306±0.0910.842±0.1040.691±0.0110.022±0.005 0.0181±0.004神膠囊2.01 0.35±0.0383.09±0.21 0.285±0.0670.968±0.2740.671±0.066 0.023±0.0070.0151±0.0041.01 0.34±0.0503.04±0.42 0.29±0.051 0.795±0.1410.635±0.011 0.027±0.0080.0168±0.005注各給藥組動物主要臟器系數(shù)指標(biāo)數(shù)值分別與空白對照組相應(yīng)指標(biāo)數(shù)值比較，P＞0.05.
6 結(jié)語經(jīng)大鼠長期毒性試驗結(jié)果表明，以蟬夜安神膠囊內(nèi)容物3.35g、2.01g、1.005g/kg體重(合生藥為42.71g、25.63g、12.81g/kg體重)三種劑量——分別為擬定臨床成人日用量0.067g/kg(合生藥0.854g/kg)體重的50倍、30倍、15倍——每日一次，連續(xù)8周對大鼠灌胃給藥以及停藥后2周，與灌胃蒸餾水的對照組比較；各種劑量給藥對大鼠的一般狀態(tài)(外觀形態(tài)、活動、大便形狀等)，生長發(fā)育(體重增長)，造血功能(血液學(xué)檢查)，肝、腎功能(血液生化學(xué))，重要器官重量系數(shù)，均未發(fā)現(xiàn)有明顯的毒性作用；經(jīng)病理學(xué)檢查證明，高劑量組與對照組比較觀察，對大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺組織，均未發(fā)現(xiàn)有明顯的毒性損傷變化。
所以可以認(rèn)為較大劑量、較長療程服用蟬夜安神膠囊的毒性較低，服用較安全，可提供臨床試用。
具體實施例方式
實施例本發(fā)明的蟬夜安神膠囊，其內(nèi)容物主要是由下列重量的原料藥制成天竺黃267g蟬蛻500g僵蠶 267g地龍 667g鉤藤833g法半夏333g首烏藤833g白芍500g酸棗仁500g遠(yuǎn)志400g以上原料藥制成膠囊1000粒。
其制備方法包括下列步驟(1)取所述重量的1/3量的天竺黃，在80℃下干燥4小時，粉碎成細(xì)粉，備用；(2)取所述重量的首烏藤加8倍量70％乙醇回流提取2小時，濾過，藥渣再加6倍量70％乙醇回流提取1.5小時，合并回流提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(3)取所述重量的僵蠶加10倍量水煎煮提取1.5小時，濾過，藥渣再加8倍量水煎煮提取1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達(dá)70％，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(4)取所述重量的蟬蛻、地龍、法半夏、白芍、酸棗仁、遠(yuǎn)志及2/3量天竺黃分別加10倍、8倍量水煎煮提取二次，第一次2小時，第二次1小時，于第二次提取時加入所述重量的鉤藤藥材，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達(dá)70％，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(5)合并所述步驟(2)、(3)、(4)制得的稠膏，加入所述步驟(1)制得的天竺黃細(xì)粉，混勻，在80℃下干燥，粉碎成細(xì)粉，過篩，加入適量淀粉，混勻，分裝成膠囊1000粒。
權(quán)利要求
1.一種蟬夜安神膠囊，其特征在于，它的內(nèi)容物主要是由下列重量份的原料藥制成天竺黃267份蟬蛻500份僵蠶 267份地龍 667份鉤藤833份法半夏333份首烏藤833份白芍500份酸棗仁500份遠(yuǎn)志 400份
2.一種權(quán)利要求1所述的蟬夜安神膠囊的制備方法，其特征在于，它包括下列步驟(1)取所述重量配比的1/3量的天竺黃，在80℃下干燥4小時，粉碎成細(xì)粉，備用；(2)取所述重量配比的首烏藤加8倍量70％乙醇回流提取2小時，濾過，藥渣再加6倍量70％乙醇回流提取1.5小時，合并回流提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(3)取所述重量配比的僵蠶加10倍量水煎煮提取1.5小時，濾過，藥渣再加8倍量水煎煮提取1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達(dá)70％，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(4)取所述重量配比的蟬蛻、地龍、法半夏、白芍、酸棗仁、遠(yuǎn)志及2/3量天竺黃分別加10倍、8倍量水煎煮提取二次，第一次2小時，第二次1小時，于第二次提取時加入所述重量配比的鉤藤藥材，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達(dá)70％，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(5)合并所述步驟(2)、(3)、(4)制得的稠膏，加入所述步驟(1)制得的天竺黃細(xì)粉，混勻，在80℃下干燥，粉碎成細(xì)粉，過篩，加入適量淀粉，混勻，分裝成膠囊。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蟬夜安神膠囊及其制備方法，旨在提供一種療效好、毒性作用小的治療失眠的膠囊。該膠囊的內(nèi)容物主要是天竺黃、蟬蛻、僵蠶、地龍、鉤藤、法半夏、首烏藤、白芍、酸棗仁、遠(yuǎn)志由作原料藥制成，它具有清熱化痰、鎮(zhèn)靜安神的功能。本發(fā)明適于治療痰熱內(nèi)擾型失眠。
文檔編號A61P25/00GK1600349SQ03146949
公開日2005年3月30日 申請日期2003年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月26日
發(fā)明者陳和亮 申請人:珠海星光制藥有限公司