專利名稱：抗性病特異性IgY的制備方法及其組合制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗性病特異性IgY(卵黃免疫球蛋白)及其制備方法，特別是涉及用于預(yù)防梅毒、淋病、尖銳濕疣和生殖器皰疹性病的特異性復(fù)合IgY及其制備方法和組合制劑。
背景技術(shù)：
當(dāng)前國內(nèi)外治療梅毒主要用大劑量的長效青霉素制劑，即普魯卡因青霉素或芐星青霉素。如劑量不足，療程不規(guī)則，可增加發(fā)生三期梅毒的危險性。治療淋病主要應(yīng)用抗生素，但由于淋病雙球菌對很多抗生素出現(xiàn)耐藥性，特別是耐青霉素和耐四環(huán)素及其他耐藥菌株的出現(xiàn)，且日趨嚴重，青霉素和四環(huán)素已不再作為治療淋病的第一線藥物，改用使用第三代頭孢類、大觀霉素、喹喏酮類、阿齊霉素等治療，但仍有高達6％-14％的耐藥菌出現(xiàn)。對尖銳濕疣治療目前無確切療效藥物，主要用外科切除、電凝、冷凍療法、CO2激光療法等，但都無法根除尖銳濕疣病毒，即人乳頭瘤病毒(HPV)。GH經(jīng)一般治療或抗病毒治療可使病情緩解，但大多數(shù)患者不能根除單純皰疹病毒(HSV)。
更重要的是應(yīng)用上述治療常見性病過程中，會破壞陰道或尿道局部微生態(tài)平衡，不僅殺死了有害菌，也殺滅了正常菌群，如乳酸桿菌、棒狀桿菌、腸球菌、非溶血鏈球菌等有益菌。乳酸桿菌使陰道或尿道局部形成弱酸性或低pH值，從而抑制了其他微生物和病毒的過度生長和粘附，其他桿菌繁殖又促進了有益厭氧菌生長，因而從正反兩方面維持了陰道或尿道正常菌群平衡，對增強免疫力十分有益。使用抗生素治療性病，不僅產(chǎn)生耐藥菌株，還將殺滅乳酸桿菌等有益菌，破壞正常菌群平衡，使陰道或尿道失去原有的天然防御疾病的屏障，反而加重病情。
因此，目前國內(nèi)外對上述多發(fā)性性病尚沒有理想的、環(huán)保的、無毒副作用的預(yù)防和治療藥物或手段。
抗四種性病特異性復(fù)合IgY屬IgG類免疫球蛋白，主要用導(dǎo)致梅毒、淋病、尖銳濕疣和生殖器皰疹的四種病原體免疫良種產(chǎn)蛋母雞，使之卵內(nèi)產(chǎn)生大量相應(yīng)的IgY，經(jīng)提取、分離、純化而制得特異性的復(fù)合卵黃抗體。這種復(fù)合抗體對引起梅毒、淋病、尖銳濕疣和生殖器皰疹的病原體有特異性結(jié)合和抑滅作用。在濃度極低的情況下(50ng/ml)就能起到有效作用。它的特點是只對病灶病原體起抑滅作用，而對共生有益菌則秋毫無犯，這與化學(xué)藥品和抗生素的作用是截然不同的。用該復(fù)合抗體(IgY)治療，既可保護病灶部位的微生態(tài)平衡，又可抑滅病原體，起到預(yù)防和保健的作用。這在國內(nèi)外預(yù)防性病方面，是一項開創(chuàng)性的先例。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種直接抑滅梅毒、淋病、尖銳濕疣和生殖器皰疹病原體的特異性復(fù)合IgY的制備方法；本發(fā)明的目的還在于提供一種由可直接抑滅蒼白密螺旋體(treponema pallidum，TP)、淋病雙球菌(gonococci，GC)、人類乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)和II型單純皰疹病毒(herpes simplex virus-2，HSV-2)的特異性復(fù)合IgY制成的高效、特效生物制劑，并由不同的劑型組成。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的1、根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，選取TP、GC、HPV和HSV-2作為具代表性的性病病原體；2、抗原制備采用TP、GC、HPV和HSV-2標準株，按常規(guī)方法分別進行培養(yǎng)。收集培養(yǎng)物，然后提純、稀釋分裝。將此四種病原體液按1∶1∶1∶1比例混合，再加入等量福氏佐劑，置高速勻漿機中，10,000-20,000rpm勻化，使形成油包水乳狀液，即為TP、GC、HPV和HSV-2四種復(fù)合抗原；3、制備免疫蛋選取高免疫應(yīng)答性、健康、無特殊病原體攜帶的(SPF)的產(chǎn)蛋母禽(包括產(chǎn)雞、鴨、鵝、火雞和鴕鳥等)進行強化免疫，在胸肌或皮下注射，每2周注射一次，計3次。第一次注射后第20天開始揀取免疫蛋；4、抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物的制備用流動水洗凈免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋機中將蛋殼打碎，用蛋黃篩濾除蛋清留下蛋黃，加入4-8倍蒸餾水稀釋攪拌均勻，用1.0N HCL溶度調(diào)pH至5.5-6.0，4℃靜置過夜，10000-30000rpm離心30分鐘，取上清液超濾，超濾濃縮10-20倍，繼而冷凍干燥，即得抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物；5、抗四種性病特異性復(fù)合IgY純品的制備將以上四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物先后過離子交換樹脂柱和凝膠層系析柱進行純化，即制得該特異性復(fù)合IgY純品；6、經(jīng)用SDS-PAGE測定抗四種性病復(fù)合IgY純品，達到PAGE純。用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)測得該復(fù)合IgY的四種抗體(抗-TP，抗-GC，抗-HPV，抗-HSV-2)效價分別達1∶512-1∶1024。
本發(fā)明另又采用上述方法制備得到的四種單一的抗性病特異性IgY，加以混合，制成另

實施例5

本發(fā)明的實施例與現(xiàn)有技術(shù)的性能的對比


從以上結(jié)果看，抗HPV特異性IgY，抗HPV活性十分理想。
實驗例4將HSV-2按上述技術(shù)內(nèi)容第2條的方法制作抗原，再用這種抗原免疫產(chǎn)蛋母雞，并采用本發(fā)明技術(shù)內(nèi)容第4條的方法制備抗HSV-2特異性IgY。分別以HSV-1和HSV-2作為檢測抗原，用ELISA法檢測所制得的抗HSV-2特異性IgY抗體效價。
結(jié)果如下表

從以上結(jié)果看出，不但對直接作為抗原免疫的HSV-2有高的抗體效價，而且對沒有直接作為抗原免疫的同種不同型的HSV-1也有一定的抗HSV-1活性。這提示HSV-1和HSV-2具有共同抗原決定簇。
實驗例5將抗TP特異性IgY，抗GC特異性IgY、抗HPV特異性IgY和抗HSV-2特異性IgY等量混合，加無菌蒸餾水稀釋至0.4％濃度。分別以TP、GC、HPV、HSV-2作為檢測抗原，用ELISA法檢測此抗四種性病特異性復(fù)合IgY的抗體效價，結(jié)果如下表

從以上結(jié)果看出，以上述四種特異性IgY混合所制備的抗四種性病特異性復(fù)合IgY，達到抗四種性病病原體的理想活性效果。
實驗例6將上述技術(shù)內(nèi)容第2條的方法制作的四種復(fù)合抗原，分別免疫產(chǎn)蛋母鴨、產(chǎn)蛋母鵝、產(chǎn)蛋火雞以及產(chǎn)蛋鴕鳥，再分別采用本發(fā)明的方法制備得到(1)抗四種性病特異性復(fù)合鴨IgY、(2)抗四種性病特異性復(fù)合鵝IgY、(3)抗四種性病特異性復(fù)合火雞IgY、(5)抗四種性病特異性復(fù)合鴕鳥IgY。然后用ELISA方法，分別以TP、GC、HPV、HSV-2作為檢測抗原，檢測所制得的抗四種性病特異性復(fù)合IgY的抗體效價。

從以上試驗結(jié)果可以看出，采用本發(fā)明的方法制作抗原，分別免疫產(chǎn)蛋母鴨、產(chǎn)蛋母鵝、產(chǎn)蛋火雞和產(chǎn)蛋鴕鳥，再采用本發(fā)明的方法分別制得抗四種性病特異性復(fù)合鴨IgY、抗四種性病特異性復(fù)合鵝IgY、抗四種性病特異性復(fù)合火雞IgY、抗四種性病特異性復(fù)合鴕鳥IgY四種不同的IgY，雖然免疫的禽類不同，但均獲得了較高的效價。雖然免疫產(chǎn)蛋鴕鳥和產(chǎn)蛋火雞所制得的IgY抗體效價稍微低了一些，但是，由于鴕鳥和火雞蛋個體重量重，每個免疫蛋所能提取得到的IgY比雞免疫蛋、鴨免疫蛋和鵝免疫蛋皆量大，這點對于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，也是十分可取的。
實施例1制備抗四種性病特異性復(fù)合IgY抗原制備選取TP、GC、HPV和HSV-2標準株，分別按他們的培養(yǎng)特性和最適培養(yǎng)條件，選擇適宜的培養(yǎng)基以常規(guī)方法進行大量培養(yǎng)與繁殖，收集培養(yǎng)物，然后提純、稀釋分裝；將TP、GC、HPV和HSV-2四種病原體液，按1∶1∶1∶1比例混合，再加福氏佐劑，置高速勻漿機中，以10000-30000rpm勻化，形成油包水乳液，即制得TP、GC、人HPV和HSV-2四種復(fù)合抗原；制備免疫蛋選擇具有高免疫應(yīng)答能力、健康、無特殊病原體攜帶(SPF)的產(chǎn)蛋母雞進行免疫。在胸肌或皮下注射上述復(fù)合抗原1ml，每二周注射一次，計3次。第一次注射后從第20天開始揀取免疫蛋。
抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物的制備用流動水洗凈免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋機中將蛋殼打碎，用蛋黃篩濾除蛋清留下蛋黃，加入6倍蒸餾水稀釋攪拌均勻，用1.0NHCl溶度調(diào)pH至5.5-6.0，4℃靜置過夜，以10000-30000rpm離心30分鐘，取上清液超濾，超濾濃縮15倍，繼而冷凍干燥，即得抗四種性病的特異性復(fù)合IgY粗提物；抗四種性病特異性復(fù)合IgY純品的制備將以上IgY粗提物先后過離子交換樹脂柱和凝膠層析柱進行純化，即制得IgY純品；實施例2制備抗四種性病特異性復(fù)合鴨IgY用TP制作抗原，分別免疫高免疫應(yīng)答的500只母鴨。每次注射1ml抗原，每隔二周再注射一次，共三次。于第一次注射后第七個月，把這些鴨所產(chǎn)的蛋標記后按常規(guī)方法分別提取其IgY，以ELISA法檢測其效價，選出其中達到效價≥1∶256的鴨200只，再用這批鴨所產(chǎn)的蛋孵出優(yōu)良鴨種，待其長大至2-3個月，作為優(yōu)選的特種母鴨；用實施例1中的四種復(fù)合抗原，采用皮下注射和翅靜脈注射相結(jié)合免疫，每只母鴨每次注射1ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次；第一次免疫20天后，逐日檢取母鴨所產(chǎn)免疫蛋；用流動水洗凈免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋機中將蛋殼打碎，用蛋黃篩濾除蛋清留下蛋黃，加入6倍蒸餾水稀釋攪拌均勻，用1.0N HCl溶度調(diào)pH至5.5-6.0，4℃靜置過夜，10000-30000rpm離心30分鐘，取上清液超濾，超濾濃縮15倍，冷凍干燥，即得抗四種性病的特異性鴨復(fù)合IgY粗提物；特異性鴨IgY粗提物的純化將以上所制取的IgY粗提物，先后過離子交換樹脂柱和凝膠層析柱進行純化，即制得抗四種性病特異性復(fù)合鴨IgY純品；
實施例3制備抗四種性病特異性復(fù)合火雞IgY用TP制作抗原，分別免疫高免疫應(yīng)答500只產(chǎn)蛋火雞。每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周注射一次，共三次。于第一次注射后第七個月，把這些火雞所產(chǎn)的蛋標記后，按常規(guī)方法分別提取其IgY；以ELISA法檢測其效價。選出其中達到效價≥1∶256的火雞200只，再用這批火雞所產(chǎn)的蛋孵出優(yōu)良火雞種。待長大至2-3個月，作為優(yōu)選的高免疫應(yīng)答的特種產(chǎn)蛋火雞；用實施例1中的四種復(fù)合抗原，采用皮下注射和翅靜脈注射相結(jié)合的免疫法，分別對優(yōu)選的特種產(chǎn)蛋火雞進行免疫。每只火雞每次注射3ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次。第一次免疫20天后，逐日檢取產(chǎn)蛋火雞所產(chǎn)免疫蛋；用流動水洗凈免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋機中將蛋殼打碎，用蛋黃篩濾除蛋清留下蛋黃，加入6倍蒸餾水稀釋攪拌均勻，用1.0N HCl溶度調(diào)pH至5.5-6.0，4℃靜置過夜，10000-30000rpm離心30分鐘，取上清液超濾，超濾濃縮15倍，冷凍干燥，即得抗四種性病的特異性復(fù)合火雞IgY粗提物；特異性火雞IgY粗提物的純化將以上所制取的火雞IgY粗提物先后過離子交換樹脂柱和凝膠層析柱進行純化，即制得抗四種性病特異性復(fù)合火雞IgY純品；實施例4抗四種性病特異性復(fù)合IgY洗液的制備取抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物150g，按以下配方調(diào)配100升抗四種性病特異性復(fù)合IgY洗液抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物 150g甘油 1500ml桉葉油 100mi薄荷香精 100ml香橙香精 100ml冰片 100g乙醇 750ml蒸餾水 加至100升先取蒸餾水80升，然后分別加入甘油、復(fù)合IgY攪拌溶解；再取配方量的桉葉油、薄荷香精、香橙香精、冰片加入配方量的乙醇溶解，并在攪拌下緩緩加入前述溶液中；充分攪拌均勻，調(diào)整溶液pH值至6.5-7.0，最后補加蒸餾水至100升，無菌過濾即得。
實施例5抗四種性病特異性復(fù)合IgY噴霧劑的制備取抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物100g，按以下配方調(diào)配100升抗四種性病特異性復(fù)合IgY噴霧劑抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物100g薄荷香精 100ml香橙香精 100ml甘油 100ml蒸餾水 加至100升先取蒸餾水80升，然后加入甘油、復(fù)合IgY攪拌溶解；將薄荷香精、香橙香精溶于適量乙醇中，在攪拌下緩緩加入前述溶液中；充分攪拌均勻，調(diào)整溶液pH值至6.5-7.0；最后補加蒸餾水至100升，無菌操作過濾和噴瓶灌裝即得。
實施例6抗四種性病特異性復(fù)合IgY乳膏劑的制備抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物2％十八烷酸 6.0％液體石蠟 9.0％白凡士林 6.0％span-80 0.85％甘 油 11％山梨酸鉀 0.1％吐溫-80 4.5％薄荷醇 0.2％蒸餾水 加至100％油相和水相分別加熱至80℃，將水相在攪拌下緩緩加入油相中，攪拌冷凝至40℃左右，加入復(fù)合IgY溶液，充分研磨攪拌均勻制成水色油乳膏，即得。
實施例7抗四種性病特異性復(fù)合IgY泡騰片(膠囊)的制備抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物0.1％碳酸氫鈉 17％無水檸檬酸 15％硼酸 5％乳糖 31％微晶纖維素 30％穩(wěn)泡劑 0.4％10％PVP無水乙醇液適量硬脂酸鎂 1％除IgY、硼酸、硬脂酸鎂外，按常規(guī)將泡騰劑及其他輔料混勻，用PVP無水乙醇液制粒、干燥、整粒，然后加入復(fù)合IgY和硬脂酸鎂、硼酸混勻，壓片或填充膠囊。
權(quán)利要求
1.一種抗性病特異性IgY，其特征在于該抗性病特異性IgY的制備方法包括下列步驟優(yōu)選引致性病的主要致病病原體，分別制備引致性病的各種病原體的單一或復(fù)合抗原；制備免疫蛋；制備抗性病各種病原體特異性IgY粗提物；抗性病各種病原體特異性IgY粗提物的純化。
2.如權(quán)利要求1所述的抗性病特異性IgY，其特征在于該抗性病特異性IgY的制備方法包括下列步驟篩選引致性病的病原體，按照這些病原體的培養(yǎng)特性和最適培養(yǎng)條件，分別選擇適宜的培養(yǎng)基，進行培養(yǎng)繁殖，收集培養(yǎng)物、提純、稀釋分裝，分別將各種病原體一定數(shù)量加入福氏佐劑，置高速勻漿機中以10000-30000r/min勻化，使成油包水乳狀液，即制得各種性病病原體抗原；制備免疫蛋選擇具有高免疫應(yīng)答的SPF、健康產(chǎn)蛋禽類，每只在胸肌或皮下分別注射所制備的病原體抗原。在第一次注射后間隔2周，再以同樣劑量、方法注射第二次；第二次注射后再間隔2周以相同劑量注射第三次。第一次注射后從第20天開始揀取免疫蛋，并對應(yīng)不同抗原對免疫蛋編號標記；抗性病病原體特異性IgY粗提物的制備將不同抗原分別免疫的禽類所產(chǎn)免疫蛋分別用流動水洗凈免疫蛋，75％酒精擦洗消毒晾干，置打蛋機中將蛋殼打碎，用蛋黃篩濾]除蛋清留下蛋黃，加入4-8倍蒸餾水稀釋攪拌均勻，1.0N HCL調(diào)pH至5.5-6.0，4℃靜置過夜，10000-30000rpm離心30分鐘，取上清液超濾，超濾濃縮10-20倍，冷凍干燥，即得抗四種性病的特異性IgY粗提物；抗性病病原體特異性IgY純品的制備將以上所制取的抗性病病原體特異性IgY粗提物過離子交換樹脂柱和凝膠層析柱進行純化，即得純特異性IgY；
3.如權(quán)利要求1或2所述的抗性病特異性IgY，其特征在于該抗性病特異性IgY的制備方法中引致性病的病原體包括蒼白密螺旋體(TP)、淋病雙球菌(GC)、人類乳頭瘤病毒(HPV)和II型單純皰疹病毒(HSV-2)。
4.一種抗四種性病特異性復(fù)合IgY，其特征在于該抗四種性病特異性復(fù)合IgY的制備方法是將上述不同抗原制得的IgY粗提物或純化物，按照1-10∶1-10∶1-10∶1-10的比例混合均勻，即得。
5.如權(quán)利要求4所述的抗四種性病特異性復(fù)合IgY，其特征在于該抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物或純化物0.02-80％，配以99.98-20％的輔料，可以制成臨床可接受的劑型，劑型包括洗液、噴霧劑、凝膠劑、乳膏劑、泡騰片(膠囊)。
6.一種抗四種性病特異性復(fù)合IgY，其特征在于該抗四種性病特異性復(fù)合IgY的制備方法包括下列步驟抗原制備選取TP、GC、HPV和HSV-2標準株，分別按他們的培養(yǎng)特性和最適培養(yǎng)條件，選擇適宜的培養(yǎng)基，以常規(guī)方法進行大量培養(yǎng)與繁殖，收集培養(yǎng)物，然后提純、稀釋分裝；將TP、GC、HPV和HSV-2四種病原體液，按1∶1∶1∶1比例混合，再加入等量福氏佐劑置高速勻漿機中，以10000-30000rpm勻化，使形成油包水乳狀，即制得TP、GC、HPV和HSV-2四種復(fù)合抗原；制備免疫蛋選擇具有高免疫應(yīng)答能力的SPF、健康產(chǎn)蛋母雞進行免疫。在胸肌或皮下注射一種上述抗原1ml，每隔2周注射一次，共計3次，第一次注射后從第20天開始揀取免疫蛋；抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物的制備用流動水洗凈免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋機中將蛋殼打碎，用蛋黃篩濾除蛋清留下蛋黃，加入6倍蒸餾水稀釋攪拌均勻，用1.0N HCl溶度調(diào)pH至5.5-6.0，4℃靜置過夜，10000-30000rpm離心30分鐘，取上清液超濾，超濾濃縮15倍，冷凍干燥，即得抗四種性病的特異性復(fù)合IgY粗提物；抗四種性病特異性復(fù)合IgY純品的制備將以上所制取的抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物先后過離子交換樹脂柱和凝膠層析柱進行純化，即制得特異性復(fù)合IgY純品；
7.一種抗四種性病特異性復(fù)合鴨IgY，其特征在于該抗四種性病特異性復(fù)合鴨IgY的制備方法包括下列步驟用TP制作抗原，分別免疫高免疫應(yīng)答的500只母鴨，每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周注射一次，共三次，于第一次注射后第七個月，把這些鴨所產(chǎn)的蛋標記后按常規(guī)方法分別提取其IgY，以ELISA法檢測其IgY效價。選出其中達到效價≥1∶256的鴨200只，再用這批鴨所產(chǎn)的蛋孵出優(yōu)良鴨種，待其長大至2-3個月，作為優(yōu)選的高免疫應(yīng)答能力的特種母鴨；用制備的TP、GC、HPV和HSV-2復(fù)合抗原，采用皮下注射和翅靜脈注射相結(jié)合的免疫法，分別對優(yōu)選的特種母鴨進行免疫，每只母鴨每次注射1ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次，第一次免疫20天后，逐日檢取母鴨所產(chǎn)免疫蛋；用流動水洗凈免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋機中將蛋殼打碎，用蛋黃篩濾除蛋清留下蛋黃，加入6倍蒸餾水稀釋攪拌均勻，用1.0N HCl調(diào)pH至5.5-6.0，4℃靜置過夜，10000-30000rpm離心30分鐘，取上清液超濾，超濾濃縮15倍，冷凍干燥，即得抗四種性病特異性復(fù)合鴨IgY粗提物；特異性復(fù)合鴨IgY粗提物的純化將以上所制取的抗四種性病特異性復(fù)合鴨IgY粗提物先后過離子交換樹脂柱和凝膠層析柱進行純化，即制得特異性復(fù)合鴨IgY純品；
8.一種抗四種性病特異性復(fù)合火雞IgY，其特征在于該抗四種性病特異性復(fù)合火雞IgY的制備方法包括下列步驟用TP制作抗原，分別免疫高免疫應(yīng)答的500只產(chǎn)蛋火雞，每次注射1ml抗原；在第一次注射后，每隔二周再注射一次，共三次，于第一次注射后第七個月，把這些火雞所產(chǎn)的蛋標記后按常規(guī)方法分別提取其中的IgY，以ELISA法檢測其IgY的效價，選出其中達到效價≥1∶256的火雞200只，再用這批火雞所產(chǎn)的蛋孵出優(yōu)良火雞種，待其長大至2-3個月，作為優(yōu)選的高免疫應(yīng)答能力的特種產(chǎn)蛋火雞；用制備的TP、GC、HPV和HSV-2種復(fù)合抗原，采用皮下注射和翅靜脈注射相結(jié)合的免疫法，分別對優(yōu)選的特種火雞進行免疫，每只產(chǎn)蛋火雞每次注射3ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次，第一次免疫20天后，逐日檢取火雞所產(chǎn)免疫蛋；用流動水洗凈免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋機中將蛋殼打碎，用蛋黃篩濾除蛋清留下蛋黃，加入6倍蒸餾水稀釋攪拌均勻，用1.0N HCl溶度調(diào)pH至5.5-6.0，4℃靜置過夜，10000-30000rpm離心30分鐘，取上清液超濾，超濾濃縮15倍，冷凍干燥，即得抗四種性病特異性復(fù)合火雞IgY粗提物；特異性復(fù)合火雞IgY粗提物的純化將以上所制取的抗四種性病特異性復(fù)合火雞IgY粗提物先后過離子交換樹脂柱和凝膠層析柱進行純化，即制得特異性復(fù)合火雞IgY純品；
9.一種抗性病特異性復(fù)合IgY洗液的制備方法，其特征在于該方法為取抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物150g，按以下配方調(diào)配100升抗四種性病特異性復(fù)合IgY洗液抗性病特異性復(fù)合IgY粗提物150g甘油1500ml桉葉油 100ml薄荷香精100ml香橙香精100ml冰片100g乙醇750ml蒸餾水 加至100升先取蒸餾水80升，然后分別加入甘油、復(fù)合IgY攪拌溶解；再取配方量的桉葉油、薄荷香精、香橙香精、冰片加入配方量的乙醇溶解，并在攪拌下緩緩加入前述溶液中；充分攪拌均勻，調(diào)整溶液pH值至6.5-7.0，最后補加蒸餾水至100升，無菌過濾即得。
10.一種抗四種性病特異性復(fù)合IgY噴霧劑的制備方法，其特征在于該方法為取抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物100g，按以下配方調(diào)配100升抗四種性病特異性復(fù)合IgY噴霧劑抗四種性病特異性復(fù)合IgY 100g薄荷香精100ml香橙香精100ml甘油100ml蒸餾水 加至100升先取蒸餾水80升，然后加入甘油、復(fù)合IgY攪拌溶解；將薄荷香精、香橙香精溶于適量乙醇中，在攪拌下緩緩加入前述溶液中；充分攪拌均勻，調(diào)整溶液pH值至6.5-7.0；最后補加蒸餾水至100升，無菌操作過濾和噴瓶灌裝即得。
11.一種抗四種性病特異性復(fù)合IgY乳膏劑的制備方法，其特征在于該方法為配方抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物 2％十八烷酸 6.0％液體石蠟 9.0％白凡士林 6.0％span-800.85％甘油 11％山梨酸鉀 0.1％吐溫-804.5％薄荷醇 0.2％蒸餾水 加至100％油相和水相分別加熱至80℃，將水相在攪拌下緩緩加入油相中，攪拌冷凝至40℃左右，加入復(fù)合IgY溶液，充分研磨攪拌均勻制成水色油乳膏，即得。
12.一種抗四種性病特異性復(fù)合IgY泡騰片(膠囊)的制備方法，其特征在于該方法為配方；抗四種性病特異性復(fù)合IgY粗提物 0.1％碳酸氫鈉 17％無水檸檬酸 15％硼 酸 5％乳 糖 31％微晶纖維素 30％穩(wěn)泡劑 0.4％10％PVP無水乙醇液 適量硬脂酸鎂 1％除IgY、硼酸、硬脂酸鎂外，按常規(guī)將泡騰劑及其他輔料混勻，用PVP無水乙醇液制粒、干燥、整粒，然后加入復(fù)合IgY和硬脂酸鎂、硼酸混勻，壓片或填充膠囊。
全文摘要
本發(fā)明了一種抗性病特異性IgY及其制備方法和制劑。本發(fā)明制備方法包括下列步驟分離和培養(yǎng)出引致性病的致病病原體，在分類和組合各種病原體的基礎(chǔ)上，分別制備單一或復(fù)合的病原體抗原，制備免疫蛋，制備抗性病各種病原體特異性IgY粗提物，抗性病各種病原體特異性IgY粗提物的純化，以及制備有關(guān)多種制劑。本發(fā)明抗性病特異性IgY多種制劑用于各種性病的預(yù)防和治療，具有特效、安全、使用方便的特點。
文檔編號A61P31/12GK1485343SQ0315363
公開日2004年3月31日 申請日期2003年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月18日
發(fā)明者包晟, 楊榮鑑, 林元藻, 包 晟 申請人:雅臣藥業(yè)集團(遠東)有限公司