專利名稱：由偶蹄哺乳動物獲得抗腫瘤物質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由患有造白細(xì)胞組織增生的偶蹄(even-toe hoofed)哺乳動物(偶蹄目動物)獲得抗腫瘤物質(zhì)的方法。
國際公開WO 00/40256涉及得自患有急性白血病的患者的血漿對不同類型腫瘤的抑腫瘤作用。在說明書中公開了若干實驗，其中與對照組相比，所應(yīng)用的物質(zhì)導(dǎo)致20％的改善。這種改善構(gòu)成了可被視為具有顯著性的低限。
在本人的匈牙利專利申請P 0002587中已經(jīng)確認(rèn)由患有造白細(xì)胞組織增生的偶蹄哺乳動物(偶蹄目動物)的不含脂質(zhì)的血漿部分，可獲得較得自白血病血液的血漿而言基本上更有效的抑腫瘤作用，并且公開了獲得具有所述作用的血漿部分的方法。
所述作用是通過引用的專利申請中所公開的、對患有不同類型腫瘤的動物進(jìn)行的實驗證實。
在要求所引用匈牙利專利申請的優(yōu)先權(quán)的公開的國際專利申請WO02/07739中，公開了其它用于驗證抑腫瘤作用的動物實驗，其涉及其它腫瘤類型，且證明了以不同方式(肌內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)和口服)施用活性物質(zhì)情況下的所述作用。
由于顯著的抑腫瘤作用，獲得活性物質(zhì)的制備方法和效率均具有重要的意義。除了由動物血液獲得所述物質(zhì)的可能性外，人們必須探尋所有可獲得相同物質(zhì)的其它方法。
本發(fā)明的目的是提供獲得所引用專利申請中所述的活性物質(zhì)的更有效的方法。
本人已經(jīng)確認(rèn)在懷孕期間動物血液中的抑腫瘤物質(zhì)(如免疫抗體)的濃度處于變化之中，此外，分娩后所述物質(zhì)立即出現(xiàn)在乳汁中。在分娩后首次哺乳和數(shù)次隨后的哺乳中提供的乳汁稱為初乳。
在動物機(jī)體中，免疫系統(tǒng)確保新生兒通過在最初幾個哺乳期中吮吸初乳以濃縮方式獲得授乳動物(suckler)免疫系統(tǒng)中的有用抗體，憑借這些抗體其可抵抗外來感染。因此，在分娩后的一段時間內(nèi)，授乳動物血液中的抗體濃度將下降，這些物質(zhì)將濃縮在初乳中。在哺乳期的最初幾周可觀察到該現(xiàn)象。
根據(jù)本發(fā)明的第一方面，利用患有造白細(xì)胞組織增生的偶蹄哺乳動物(偶蹄目動物)主要是牛(母牛)的初乳獲得具有抑腫瘤作用的活性物質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明的第二方面，利用了如下事實在孕期中期和后三分之一期間，懷孕動物血液中的抗體濃度升高，可由處于該孕期階段的供體懷孕動物的血液中獲得活性物質(zhì)。最優(yōu)選的動物是牛和羊。可利用的時期結(jié)束于孕期的最后幾天以及哺乳期的前幾天，因為在此期間血中的抗體水平下降并在初乳中升高至高水平。
活性物質(zhì)是通過使用與以上提及專利申請中所公開的方法類似的分離方法由初乳中獲得，其中起始物質(zhì)為動物血漿。
所述分離方法優(yōu)選包括以下步驟1)在振搖機(jī)中，將初乳與等體積的異丙醇和氯仿的1∶1混合物于室溫下振搖8小時；2)將所述物質(zhì)在冷卻狀態(tài)下以10000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心20分鐘；3)分離漂浮的上層和中間的渣殼(crust)層(傾出有機(jī)相)，將剩余的物質(zhì)加入氯仿和苯甲醇的1∶1混合物進(jìn)行稀釋，以達(dá)到初始體積并用振搖機(jī)振搖8小時；4)將所述物質(zhì)在+2至4℃下貯存10小時；5)如步驟2將所述物質(zhì)離心并傾出有機(jī)相；6)將漂浮的上層深度冷凍并凍干，并用生理鹽水溶液調(diào)至所要求的濃度，將該產(chǎn)品用于觀察對腫瘤小鼠的功效并已證明其具有生物學(xué)活性；7)將(步驟3中的)中間的果凍樣渣殼層冷凍并凍干，并如步驟6繼續(xù)處理，將如此獲得的物質(zhì)進(jìn)行生物學(xué)試驗，其對腫瘤小鼠有效；8)將步驟6和7中分別獲得的樣品合并，該物質(zhì)視為終產(chǎn)物。
通過使用相同劑量的如此分離的活性物質(zhì)，重復(fù)進(jìn)行了引用的匈牙利專利申請和國際專利申請中所公開的動物實驗，但是全部經(jīng)口(口服)給予活性物質(zhì)。
對于所有觀察的腫瘤類型而言，所述實驗得到了與以往用得自血漿的活性物質(zhì)進(jìn)行的實驗同樣良好的結(jié)果，這是可以理解的，因為活性物質(zhì)基本相同。
通過使用本發(fā)明的方法，可獲得實質(zhì)上更大量的物質(zhì)，如同自相同動物的血液獲得該物質(zhì)一樣。此外，利用初乳不會引起對動物的傷害。
為了闡述定量比例，應(yīng)注意的是具有平均重量的母牛在分娩后的最初階段每天可提供約20升初乳，該階段可持續(xù)甚至達(dá)3-4周。
權(quán)利要求
1.由患有造白細(xì)胞組織增生的偶蹄哺乳動物(偶蹄目動物)獲得抗腫瘤物質(zhì)的方法，其中所述物質(zhì)得自動物的不含脂質(zhì)的血漿部分，其特征在于所述血液取自處于第二或第三孕期至最多分娩前一周初時的懷孕的雌性供體動物。
2.權(quán)利要求1所要求的方法，其中的供體動物為?；蜓颉?br> 3.由患有造白細(xì)胞組織增生的偶蹄哺乳動物(偶蹄目動物)獲得抗腫瘤物質(zhì)的方法，其特征在于所述物質(zhì)取自動物的初乳。
4.權(quán)利要求3所要求的方法，包括以下步驟a)將初乳與等體積的異丙醇和氯仿的1∶1混合物于室溫下振搖預(yù)定的一段時間；b)將所述物質(zhì)在冷卻狀態(tài)下以至少5000轉(zhuǎn)/分鐘的速度再離心預(yù)定的一段時間；c)分離漂浮的上層和中間的渣殼層，將剩余的物質(zhì)加入氯仿和苯甲醇混合物進(jìn)行稀釋，以達(dá)到初始體積并振搖給定的一段時間；d)將所述物質(zhì)在+2至4℃下貯存；e)如步驟b)將所述物質(zhì)離心并傾出有機(jī)相；f)將漂浮的上層深度冷凍并凍干，并用生理鹽水溶液稀釋。
5.權(quán)利要求4所要求的方法，其中將步驟c)中分離的中間的果凍樣渣殼層冷凍并凍干，然后用生理鹽水溶液稀釋。
全文摘要
本發(fā)明涉及由患有造白細(xì)胞組織增生的偶蹄哺乳動物(偶蹄目動物)獲得抗腫瘤物質(zhì)的方法。根據(jù)第一種選擇，所述物質(zhì)由動物的不含脂質(zhì)的血漿部分獲得，所述血液取自處于第二或第三孕期至最多分娩前一周初時的懷孕的雌性供體動物。根據(jù)第二種選擇，所述物質(zhì)由雌性供體動物、優(yōu)選?；蜓虻某跞楂@得。
文檔編號A61K35/16GK1615142SQ03802264
公開日2005年5月11日 申請日期2003年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2002年1月15日
發(fā)明者安德拉什·貝爾塔 申請人:安德拉什·貝爾塔