專利名稱：：嘧啶衍生物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及嘧啶衍生物，涉及它們的生產方法、它們用作藥物的用途，以及涉及包含它們的藥物組合物。更具體地，本發(fā)明在第一方面提供了游離形式或鹽形式的式I化合物，其中，X為＝CR0-或＝N-；R0，R1，R2，R3和R4中的每一個獨立地是氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基-C1-C8烷基；羥基C1-C8烷基；C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷氧基C1-C8烷基；任選地在環(huán)上可以被羥基、C1-C8烷氧基、羧基或C1-C8烷氧基羰基取代的芳基C1-C8烷基；或R3和R4及與它們連接的氮和碳原子一起形成5到10元雜環(huán)，并額外地包含1、2或3個選自N、O和S的雜原子；或R1、R2和R3中的每一個獨立地是鹵素、鹵代-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基、鹵代-C1-C8烷氧基、羥基C1-C8烷氧基；C1-C8烷氧基C1-C8烷氧基；芳基；芳基C1-C8烷氧基；雜芳基；雜芳基-C1-C4烷基；5到10元雜環(huán)；硝基；羧基；C2-C8烷氧基羰基；C2-C8烷基羰基；-N(C1-C8烷基)C(O)C1-C8烷基；-N(R10)R11；-CON(R10)R11；-SO2N(R10)R11；或-C1-C4-亞烷基-SO2N(R10)R11；其中R10和R11中的每一個獨立地是氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷基；(C1-C8烷基)-羰基；任選地可以在環(huán)上被羥基、C1-C8烷氧基、羧基或C2-C8烷氧基羰基取代的芳基C1-C8烷基；或5到10元雜環(huán)；或R1和R2和與它們連接的C-原子一起形成芳基或包含一個或兩個選自N、O和S的雜原子的5到10元雜芳基；或R5和R6中的每一個獨立地是氫；鹵素；氰基；C1-C8烷基；鹵代-C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C2-C8炔基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基C1-C8烷基；C5-C10芳基C1-C8烷基；R7、R8和R9中的每一個獨立地是氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；鹵代-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基C1-C8烷基；芳基C1-C8烷基；-Y-R12，其中Y是一直接鍵或O，且R12是一個取代的或未取代的包含1、2或3個選自N、O和S的雜原子的5、6或7元雜環(huán)；羧基、(C1-C8烷氧基)-羰基；-N(C1-8烷基)-CO-NR10R11；-CONR10R11；-N(R10)(R11)；-SO2N(R10)R11；R7和R8或R8和R9，分別和與它們連接的碳原子一起形成包含選自N、O和S的1、2或3個雜原子的5或6元雜芳基；或5或6元碳環(huán)。任何芳基可以是苯基、萘基或1，2，3，4-四氫化萘基，優(yōu)選苯基。雜芳基是芳香族雜環(huán)，如5或6元芳香雜環(huán)，其任選地縮合到1或2個苯環(huán)和/或別的雜環(huán)上。任何雜環(huán)可以是飽和的或不飽和的，并任選地縮合到1或2個苯環(huán)和/或別的雜環(huán)上。雜環(huán)或雜芳基的實例包括例如嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吡啶基、嘌呤基、嘧啶基、N-甲基-氮雜-環(huán)庚烷-4-基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、1，2，3，4-四氫喹啉基、苯并噻唑基、噻唑基、咪唑基、苯并咪唑基、苯并噁二唑基、苯并三唑基、2，3-二氫化茚基、噁二唑基、吡唑基、三唑基和四唑基。優(yōu)選的雜環(huán)或雜芳基是嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吡啶基、N-甲基-氮雜-環(huán)庚烷-4-基、噻唑基、咪唑基和四唑基。當R7和R8或R8和R9和與其連接的碳原子一起形成5或6元碳環(huán)時，此環(huán)可優(yōu)選地為環(huán)戊基或環(huán)己基。鹵代-烷基是其中一個或多個H被鹵素取代的烷基(如CF3)。任何烷基或烷基部分可以是直鏈或支鏈。C1-8烷基優(yōu)選地是C1-4烷基。C1-8烷氧基優(yōu)選地是C1-4烷氧基。任何烷基、烷氧基、鏈烯基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基可以(除非另作說明)未被取代或被一個或多個選自鹵素；OH；C1-C8烷基；C1-C8烷氧基；硝基；氰基；COOH；氨基甲酰基；C(NH2)＝NOH；-N(R10)R11；C3-C6環(huán)烷基；3到7元雜環(huán)；苯基；苯基-C1-4烷基；5或6元雜芳基的取代基取代。當烷基、烷氧基或鏈烯基被取代時，其取代基優(yōu)選地位于末端C原子上。當雜環(huán)或雜芳香環(huán)被取代(如上面公開的)，取代可以在一個或多個環(huán)碳原子和/或環(huán)氮原子(如果存在)上。環(huán)氮原子上的取代基的實例是，例如C1-8烷基、氨基甲?；?C(NH2)＝NOH、-NR10R11、C3-6環(huán)烷基或苯基-C1-4烷基，優(yōu)選地是C1-8烷基、C3-6環(huán)烷基或苯基-C1-4烷基。優(yōu)選地取代的烷基或烷氧基(如R7)是其末端C原子被OH、C1-4烷氧基或雜環(huán)取代的烷基或烷氧基。當R10或R11是5到10元雜環(huán)時，它可以是例如噻唑基。鹵素可以是F、Cl、Br或I。優(yōu)選地，至多R1、R2或R3其中之一是CONR10R11或SO2NR10R11，更優(yōu)選地為SO2NR10R11。本發(fā)明化合物可以以游離形式或鹽的形式存在，例如與如有機或無機酸(例如三氟乙酸或氫氯酸)形成的加成鹽，或當它們包含羧基基團時，例如通過和堿(例如堿金屬的鹽，如鈉、鉀或取代的或非取代的銨鹽)反應而可獲得的鹽。在式I中，獨立地、共同地或以任何組合或亞組合方式優(yōu)選地具有下列意義(a)X是＝CR0；(b)R0是氫；鹵素(如Cl)；C1-C4烷基(如甲基或乙基)；C1-4烷基(如甲氧基)；優(yōu)選氫；(c)R1是氫、鹵素(如Cl或F)；OH；C1-C8烷基(如甲基或乙基)；取代的C1-8烷基(如末端OH取代的C1-8烷基)；-SO2N(R10)R11；-N(C1-4烷基)C(O)C1-4烷基；環(huán)上N原子任選地被取代(當可能時)的5或6元雜環(huán)；C1-C8烷氧基(如甲氧基)；芳基(如苯基)；或和R2及與R1和R2連接的C-原子一起形成5到10元芳基或雜芳基，后者包含1或2個氮原子；(d)R2是氫；羥基、C1-C8烷基(如甲基或乙基)；取代的C1-8烷基(如末端OH-或C1-4-烷氧基取代的C1-8烷基)；C1-8烷氧基；C1-C4烷氧基C1-C8烷氧基；-CON(R10)R11；-SO2N(R10)R11；或和R1及R1和R2連接的C-原子一起形成5到10元芳基或雜芳基，后者包含1或2個氮原子；(e)R3是氫；鹵素(如Cl、Br)；羥基；C1-C8烷基(如甲基或乙基)；取代的C1-C8烷基(如末端OH取代的C1-8烷基)；羧基；CONR10R11；-SO2N(R10)R11；環(huán)氮原子(當可能時)任選地被取代的5或6元雜環(huán)；或和R4及與R3和R4連接的N和C原子一起形成6元雜環(huán)。(f)R4是氫；或和R3及與R3和R4連接的N和C原子一起形成6元雜環(huán)；優(yōu)選氫；(g)R5是氫；鹵素；C1-4烷基；或CF3；(h)R6是氫(i)R7是氫；羥基；C1-4烷基；取代的C1-4烷基(如末端OH取代的C1-4烷基)；C1-8烷氧基；取代的C1-8烷氧基(如末端被OH、C1-4烷氧基或雜環(huán)取代)；NR10R11；-SO2N(R10)R11；-Y-R12；CF3；或R7和R8及與R7和R8相連的C-原子一起形成5元雜環(huán)(如通過-NH-CH＝CH-、-CH＝CH-NH-、-NH-N＝CH-、-CH＝N-NH-、-NH-N＝N-或-N＝N-NH-橋接)；(k)R8是氫；羥基；C1-4烷氧基；羧基；環(huán)C或N原子被任選地取代的5或6元雜環(huán)；N(C1-4烷基)-CO-NR10R11；或和R7或R9及與R7和R8或R8和R9分別相連的C-原子一起形成5元雜芳基(如通過-NH-CH＝CH-、-CH＝CH-NH-、-NH-N＝CH-、-CH＝N-NH-、-NH-N＝N-或-N＝N-NH-橋接)；(l)R9是氫；C1-4烷氧基；NR10R11；或和R8及與R8和R9相連的C原子一起形成5元雜芳基(如通過-NH-CH＝CH-，-CH＝CH-NH-，-NH-N＝CH-，-CH＝N-NH-，-NH-N＝N-或-N＝N-NH-橋接)；(m)R10和R11其中之一獨立地是氫或C1-4烷基，另外一個是氫；OH；C1-8烷基、取代的C1-8烷基(如末端被OH、C3-6環(huán)烷基或雜環(huán)取代)；C2-8鏈烯基；C3-8環(huán)烷基；羥基C1-8烷氧基C1-8烷基；或5元雜環(huán)。R3優(yōu)選地是SO2NR10R11。本發(fā)明也提供用于產生式I化合物的方法，此方法包括將式II化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和X是如上面定義的，Y是離去基團，優(yōu)選鹵素，例如溴、碘，或特別是氯和式III化合物反應其中R7、R8和R9是如上面定義，然后回收得到的游離形式或鹽形式的式I化合物，并且根據需要，將以游離形式獲得的式I化合物轉化為想要的鹽形式，反之亦然。此方法可以根據本領域已知方法實施，例如實施例1到4中描述的。用作起始物質的式II化合物可以通過將式IV化合物與式V化合物反應得到其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、Y和X是如上面定義的。式IV和V化合物為已知或可根據已知方法生產。下列實施例闡明本發(fā)明而不構成對本發(fā)明的任何限制。下列縮寫被采用APC＝別藻藍蛋白，BINAP＝2，2’-雙(二苯基膦基)-1，1’-聯(lián)萘基，cDNA＝互補DNA，DCM＝二氯甲烷，DIAD＝偶氮二羧酸二異丙酯，DMAP＝4-二甲氨基吡啶，DMF＝二甲基甲酰胺，DMSO＝二甲亞砜，DMF＝二甲基甲酰胺；Pmc＝2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃；tBu＝叔丁基；DIPCDI＝N，N′-二異丙基碳二亞胺；DTT＝1，4-二硫-D，L-蘇糖醇；DNA＝脫氧核糖核酸，EDTA＝乙二胺四乙酸，Lck＝淋巴樣T-細胞蛋白酪氨酸激酶，LAT-11＝用于T細胞活化的轉接蛋白，RT＝室溫；RT-PCR＝反轉錄聚合酶鏈反應，MS＝電噴霧質譜測定的分子離子(如M+H1+)，Eu＝銪；ZAP-70＝ζ鏈相關70kD蛋白；Syk＝p72syk蛋白酪氨酸激酶；SA＝鏈親和素。實施例12-[2-(1H-吲唑-6-基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯磺酰胺(a)2-(2-氯-嘧啶-4-基氨基)-苯磺酰胺將22.1g(148.42mmol，3當量)2，4-二氯嘧啶和200ml10M鹽酸(200mmol，4當量)加至8.52g(49.47mmol)2-氨基苯磺酰胺在200ml異丙醇的懸液中。懸液于60℃攪拌2小時15分鐘。用2升乙酸乙酯稀釋反應混合物，加入500ml水。通過加入碳酸氫鈉將pH調整到8-9。分層，隨后用500ml乙酸乙酯再萃取水層。用硫酸鈉干燥有機層，過濾，然后蒸發(fā)至300ml體積。晶體沉淀形成并通過過濾去除(副產物)。將濾液蒸發(fā)至100ml，由此產物結晶產生2-(2-氯-嘧啶-4-基氨基)-苯磺酰胺(通過HPLC達到97％純度)。通過柱層析法進一步純化此結晶的母液，結晶產生更多2-(2-氯-嘧啶-4-基氨基)-苯磺酰胺。(b)2-[2-(1H-吲唑-6基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯磺酰胺將13ml濃HCl*(130mmol，5當量)加至7.25g(25.46mmol)2-(2-氯-嘧啶-4-基氨基)-苯磺酰胺和4.07g(30.55mmol，1.2當量)6-氨基吲唑在400ml異丙醇中的懸液?；亓鲬乙?小時30分鐘。用1.5升乙酸乙酯稀釋反應混合物，加入1升水。通過加入碳酸氫鈉將pH調整到8-9。分層，用500ml乙酸乙酯再萃取水層。用硫酸鈉干燥有機層，過濾，然后蒸發(fā)至300ml體積。晶體沉淀(1.01g)形成并通過過濾去除(副產物)。在200g硅膠上用乙酸乙酯/甲醇95/5v/v洗脫的色譜法純化濾液。蒸發(fā)后形成結晶并過濾產生標題化合物。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.42(s，1H)，8.34(d，1h)，8.28(d，1H)，8.27(s，1H)，7.93(s，1H，7.88(d，1H)，7.62(m，2H)，7.32(d，1H)，7.24(t，1H)，6.40(d，1H)。MSm/z(％)382(M+H，100)；實施例22-[2-(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯磺酰胺除了在步驟(b)用3，4，5-三甲氧基-苯基胺代替6-氨基吲唑外，按實施例1所描述從2-(2-氯-嘧啶-4-基氨基)-苯磺酰胺制備標題化合物。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.18(s，1H)，8.22(d，1H)，8.17(d，1H)，7.89(d，1H)，7.55(t，1H)，7.25(t，1H)，7.14(s，2H)，6.40(d，1H)，3.69(s，6H)，3.62(s，3H).MSm/z(％)432(M+H，100)；實施例32-甲基-6-12-(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯磺酰胺除了在步驟(a)中使用2-氨基-6-甲基-苯磺酰胺代替2-氨基苯磺酰胺外，按實施例1所描述制備標題化合物。按照Girard，Y等人；J.J.Chem.Soc.PerkinTrans.I1979，4，1043-10472描述可以制備2-氨基-6-甲基-苯磺酰胺氮環(huán)境下-55-49℃時，將間甲苯胺(32.1g，32.5ml，0.30mmol)滴加入氯磺酰異氰酸酯(51.3ml，83.6g，0.59mmol)的硝基乙烷(400ml)溶液中。移去冷浴，將混合物升溫至-8℃隨后加入氯化鋁(51g，0.38mmol)。加熱混合物至100℃20分鐘，形成澄清褐色溶液，將其冷卻至室溫然后傾倒于冰上。過濾、用冰水和二乙醚洗滌后，收集沉淀，將其溶解于二氧雜環(huán)己烷(300ml)。加入水(1000ml)和濃HCl(1500ml)形成懸液，將其加熱至120℃18小時。冷卻至RT后用二乙醚/己烷(1400ml，1/1v/v)洗滌此澄清褐色溶液，通過加入碳酸鈉調整使pH＝8。用乙酸乙酯(2×1000ml)萃取、用水(500ml)和鹽水(500ml)洗滌有機相、干燥(用硫酸鎂)，然后濃縮產生褐色固體，在二氧化硅上用二氯甲烷/乙醇(100/1v/v)洗脫的色譜法純化此褐色固體產生白色固體的目標產物。熔點72-75℃(異丙醇)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ2.64(s，3H，Me)，3.63(s，3H，OMe)，3.68(s，6H，OMe)，6.31(d，J＝5Hz，1H，嘧啶CH)，7.07(d，J＝8Hz，1H，芳族CH)，7.15(s，2H，芳族CH)，7.40(t，J＝8Hz，1H，芳族CH)，7.65(s，2H，SO2NH2)，8.04(d，J＝8Hz，1H，芳族CH)，8.12(d，J＝5Hz，1H，嘧啶CH)，9.14(s，1H，NH)，9.40(s，1H，NH).MS(ES+)m/z446(MH+)，468(MNa+)MS(ES-)444(M-H)-實施例42-甲氧基-6-[2-(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯磺酰胺除了在步驟(a)中使用2-氨基-6-甲氧基-苯磺酰胺代替2-氨基-6-甲基-苯磺酰胺外，按照實施例1描述可以制備標題化合物。按照與實施例1a描述的類似方法可以從12.3g間-甲氧基苯胺制備2-氨基-6-甲氧基-苯磺酰胺。NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.62(s，3H，OMe)，3.69(s，6H，OMe)，3.91(s，3H，OMe)，6.31(d，J＝5Hz，1H，嘧啶CH)，6.86(d，J＝8Hz，1H，芳族CH)，7.12(s，2H，芳族CH)，7.43(t，J＝8Hz，1H，芳族CH)，8.01(d，J＝8Hz，1H，芳族CH)，8.11(d，J＝5Hz，1H，嘧啶CH)，9.18(s，1H，NH)，9.79(br，1H，NH).MS(ES+)462.2(MH+)，484.2(MNa+)MS(ES-)460.3(M-H)-式X1化合物，其中R3、R7和R8如表1定義，可以通過用合適的起始物按照實施例1的方法制備。表1式X2化合物，其中R3和R8如表2定義，可以通過用合適的起始物按照實施例1的方法制備。表2式X3化合物，其中R1，R7，R8和R9如表3定義，可以通過用合適的起始物按照實施例1的方法制備。表3式X4化合物，其中R2，R5，R7，R8和R9如表4定義，可以通過用合適的起始物按照表4式X5化合物，其中R0，R1，R2，R3和R4如表5定義，可以通過用合適的起始物按照表5式X6化合物，其中R5，R7，R8和R9如表6定義，可以通過用合適的起始物按照實施例1的方法制備。表6式X7化合物，其中R1，R2，R3，R7和R8如表7定義，可以通過用合適的起始物按照表7<tablesid="table12"num="012"><tablewidth="848">-2-基)154-H-OCH3-SO2NH2-O-CH2CH2-OH-H432.2430.2155-H-CH3-SO2NH2-O-CH2CH2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-OCH3513.2511.3156-OCH3-H-SO2NH2-O-CH2CH2-1-哌啶基-H499.2497.3157-OCH3-H-SO2NH2-O-CH2CH2-1-吡咯烷基-OCH3515.2513.2158-H-CH3-SO2NH2-O-CH2CH2-OH-OCH3446.2444.2159-OC2H5-H-SO2NH2-O-CH2CH2-1-吡咯烷基-CH3513.3511.3160-OCH3-OCH3-SO2NH2-O-CH2CH2-(4-甲基-哌嗪1-基)-OCH3574.2572.2161-H-Cl-SO2NH2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-H474.5472.5162-H-CH3-SO2NH2-O-CH2CH2-(4-環(huán)戊基-哌嗪-1-基)-H552.3550.3163-CH＝CH-CH＝CH--SO2NH2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-H490.5488.4164-H-H-SO2NH2-O-CH2CH2-哌嗪-1-基-H470.2468.3165-H-OCH3-SO2NH2-H-OCH3402.2400.2166-H-OCH3-SO2NH2-O-CH2CH2-(4-苯甲基-哌嗪-1-基)-H590.3588.3167-CH3-H-SO2NH2-O-CH2CH2-1-吡咯烷基-H469.2467.3168-Br-H-SO2NH2-O-CH2CH2-1-哌啶基-H549.1547.2</table></tables>式X8化合物，其中R1，R2，R3和R8如表8定義，可以通過用合適的起始物按照實施例1的方法制備。表8<tablesid="table13"num="013"><tablewidth="810">實施例R1R2R3R8*ES+*ES-</table></tables>式X9化合物，其中R7，R8和R9如表9定義，可以通過用合適的起始物按照實施例1的方法制備。表9式X10化合物，其中R1，R7和R9如表10定義，可以通過用合適的起始物按照實施例1的方法制備。表10式X11化合物，其中R8是-OCH3(實施例185)或-OH(實施例186)，可以通過用合適的起始物按照實施例1的方法制備。式X12化合物，其中R0，R1，R7，R8和R9如表12定義，可以通過用合適的起始物按照表12式X13化合物，其中R1，R2，R3和R5如表13定義，可以通過用合適的起始物按照實施例1的方法制備。表13式X14化合物，其中R2，R3，R5，R7，R8和R9如表14定義，可以通過用合適的起始物按照實施例1的方法制備。表14ES+指電霧化MS正離子模式；ES-指電霧化MS負離子模式；且EL指電子碰撞MS式I化合物和它們的可藥用鹽在體外測定中顯示出有價值的藥學性質，因此可用作藥物。特別地本發(fā)明化合物顯示ZAP-70(70KD的ζ鏈-相關蛋白)、粘著斑激酶(FAK)和/或Syk蛋白酪氨酸激酶抑制活性。更特別地，本發(fā)明的化合物對人ZAP-70、FAK和/或Syk蛋白酪氨酸激酶有活性。本發(fā)明化合物與ZAP-70、FAK和/或Syk蛋白酪氨酸激酶間的相互作用可以通過它們阻止人ZAP-70蛋白酪氨酸激酶磷酸化例如LAT-11(SEQIDNO1)、阻止人FAK蛋白酪氨酸激酶磷酸化例如Biot-Y397(SEQIDNO2)，和/或阻止在例如水溶液中人Syk蛋白酪氨酸激酶磷酸化例如多聚谷氨酸-酪氨酸(Glu，Tyr)的能力顯示，這一點例如按照下面的實驗方法顯示。1.無細胞激酶測定法ZAP-70和Syk激酶測定法ZAP-70，Lck和Syk在UpstateBiotechnology，LakePlacid，NY有市售。LAT-11(SEQIDNO1)的制備在ZAP-70激酶測定法中用作底物的肽LAT-11，可如WO02/12275的實施例1A中所公開的那樣制備，其內容特別是關于實施例1A此處引用作為參考。ZAP-70激酶測定法本發(fā)明試劑的活性在基于時間分辨熒光共振能量轉移的均相ZAP-70激酶測定法中測定。簡而言之，80nMZAP-70與80nMLck和4μMATP在ZAP-70激酶緩沖液(20mMTris，pH7.5，10μMNa3VO4，1mMDTT，1mMMnCl2，0.01％牛血清白蛋白，0.05％Tween20)在硅化聚丙烯試管中室溫下孵育1小時。然后，加入選擇性LCK抑制劑PP2(4-氨基-5-(4-氯-苯基)-7-(叔丁基)吡唑[3，4-d]嘧啶；AlexisBiochemicals)(終濃度為1.2μM)再孵育10分鐘。10μl該溶液與10μl作為底物的生物素化肽LAT-11(1μM)和20μl系列稀釋的抑制劑混合，室溫下孵育4小時。激酶反應用10μl10mMEDTA溶液在檢測緩沖液(20mMTris，pH7.5，0.01％牛血清白蛋白，0.05％Tween20)中終止。檢測階段通過在檢測緩沖液中加入50μl銪(Eu)標記的抗磷酸酪氨酸抗體(例如Eu-PT66；終濃度0.125nM；Advant/Wallac)和50μl鏈親和素-別藻藍蛋白(SA-APC；終濃度40nM)進行。室溫孵育1小時后如在Victor2多標記計數器上(Wallac)于665nm處檢測熒光。背景值(低對照)在無實驗樣品和ATP情況下獲得并從全部值中減去。在沒有試驗樣品條件下獲得的信號作為100％(高對照)。將在有試驗化合物時獲得的抑制作用計算為高對照的百分抑制率。導致50％抑制作用(IC50)的試驗化合物濃度由劑量-反應曲線確定。在此測定法中，本發(fā)明化合物IC50值的范圍從10nM到2μM，優(yōu)選地從10nM到100nM。實施例4的化合物顯示IC50值12nM。Syk激酶測定法本發(fā)明試劑的活性在基于解離-增強的鑭系熒光免疫分析(DELFIA)技術的非均相Syk激酶測定法中測定。這個方法使用銪螯合標記的抗磷酸酪氨酸抗體來檢測通過Syk進行的將磷酸轉移至包被于微量滴定板上的多聚谷氨酸-酪氨酸(Glu，Tyr)底物，如(BraunwalderAF，YarwoodDR，SillsMA，LipsonKE，使用銪螯合劑的時間分辨熒光法測定C-Src的蛋白酪氨酸激酶活性，Anal.Biochem.1996；238(2)159-64)所描述。然后用時間分辨的解離-增強熒光定量磷酸化的量。簡而言之，將100μl的多聚(Glu，Tyr)(4∶1；2μg/ml在磷酸鹽緩沖液PBS中包被到ELISA板上，室溫過夜。去除多聚(Glu，Tyr)溶液，加入250μl含1％牛血清白蛋白的PBS，室溫下放置1小時。然后用350μl洗滌緩沖液(25mMTris-HCl，pH7.4，含0.03％Tween-20)洗板三次。通過將30μl抑制劑的系列稀釋液與30μlSyk激酶(20ng/ml)和ATP(1μM)在激酶緩沖液(20mMTris，pH7.5，10μMNa3VO4，1mMDTT，10mMMnCl2，2mMMgCl2，0.01％牛血清白蛋白，0.05％Tween20)中混合，激酶反應在室溫下進行1小時。如上所述洗板四次后，加入60μlDELFIA銪N1-標記的抗-磷酸酪氨酸抗體PY20(Advant/Wallac)(在50mMTris-HCl中100ng/ml，pH7.4，150mMNaCl，20μMTitriplexV，0.2％牛血清白蛋白，0.05％Tween-20)并在室溫下孵育1小時。洗板八次后，加入60μl增強溶液(Wallac)。在615nm處測定熒光(Victor2；Wallac)。高對照值(100％信號)在沒有試驗樣本條件下獲得，而低對照值(背景)在沒有試驗樣本及ATP條件下得到。從全部值中減去低對照值。在存在試驗化合物時獲得的抑制作用計算為對高對照的百分抑制率。導致50％抑制作用的試驗化合物濃度(IC50)從劑量-反應曲線確定。在此測定法中，本發(fā)明化合物具有從100nM到10μM，優(yōu)選地從100nM到1μM的IC50值范圍。實施例128的化合物有IC50值具為150nM。2.同種異型混合淋巴細胞反應(MLR)本發(fā)明化合物顯示出T細胞抑制活性。更特別地，本發(fā)明化合物阻止T細胞在例如水溶液中的活化和/或增殖，例如如依照以下實驗方法所示。根據標準方法(J.Immunol.Methods，1973，2，279和MeoT.等人，ImmunologicalMethods，NewYork，AcademicPress，1979，227-39)進行雙向MLR。簡而言之，來自CBA和BALB/c小鼠的脾細胞(每種小鼠1.6×105個細胞置于平底組織培養(yǎng)微量滴定板的每個孔中，共計3.2×105)在含有10％FCS，100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素(GibcoBRL，Basel，Switzerland)、50μM2-巰基乙醇(Fluka，Buchs，Switzerland)、系列稀釋化合物的RPMI培養(yǎng)基中孵育。每個試驗化合物進行7個3倍稀釋步驟，每一稀釋進行2次。孵育4天后，加入1μCi3H-胸腺嘧啶。另外5小時培養(yǎng)期后收集細胞，根據標準方法測定摻入的3H-胸腺嘧啶。MLR的背景值(低對照)是單獨BALB/c細胞增殖。從所有值中減去低對照。無任何樣品的高對照作為100％增殖。計算樣品引起的抑制百分率，并測定50％抑制作用(IC50值)所需的濃度。在本測定法中，本發(fā)明化合物具有從10nM到10μMIC50值范圍，優(yōu)選地從10nM到100nM。實施例120的化合物顯示IC50值為13nM。3.FAK測定法所有步驟都在96-孔黑微量滴定板上進行。純化的重組6-組氨酸標記的人FAK激酶結構域用稀釋緩沖液(50mMHEPES，pH7.5，0.01％BSA，0.05％Tween-20在水中)稀釋至94ng/mL(2.5nM)的濃度。通過將10μL5x激酶緩沖液(250mMHEPES、pH7.5，50μMNa3VO4、5mMDTT、10mMMgCl2、50mMMnCl2、0.05％BSA、0.25％Tween-20的水溶液)、20μL水、5μL4μM生物素化肽底物(Biot-Y397)的水溶液、在DMSO中的5μL試驗化合物與5μL重組酶溶液混合，并在室溫孵育30分鐘來制備反應混合物。通過加入5μL5μMATP水溶液開始酶反應，混合物在37℃孵育3小時。加入200μL檢測混合物(在稀釋緩沖液中1nMEu-PT66，2.5μg/mLSA-(SL)APC，6.25mMEDTA)終止反應，室溫下孵育30分鐘后，從銪到別藻藍蛋白的FRET信號通過ARVOsx+L(PerkinElmer)測定。665nm與615nm的熒光強度之比用作用于數據分析的FRET信號以消除試驗化合物引起的顏色淬滅作用。結果以酶活性的抑制百分率測定。DMSO和0.5MEDTA分別作為0％和100％抑制對照。IC50值使用OriginPro6.1程序(OriginLab)的非線性曲線擬合分析確定。在本測定法中，式I的化合物抑制FAK活性的IC50＜1μM。實施例188，208和213分別顯示IC50值為15nM、1nM和7nM。Biot-Y397肽(Biotin-SETDDYAEIID銨鹽，SEQIDNO2)設計為與人GeneBank登錄號L13616從S392到D402區(qū)域具有相同氨基酸序列并用標準方法制備。純化的重組6-組氨酸標記的人FAK激酶結構域由如下方法獲得通過使用5’PCR引物(ATGGCAGCTGCTTACCTTGAC，SEQIDNO3)和3’PCR引物(TCAGTGTGGTCTCGTCTGCCC，SEQIDNO4)從人胎盤Marathon-ReadyTMcDNA(Clontech，No.7411-1)進行PCR擴增，分離全長的人FAKcDNA，并亞克隆入pGEM-T載體(Promega，No.A3600)。用AccIII消化后，純化的DNA片段用Klenow片段處理。cDNA片段用BamHI消化并克隆到預先用BamHI和StuI切割的pFastBacHTb質粒(InvitrogenJapanK.K.，Tokyo)。對得到的質粒hFAKKD(M384-G706)/pFastBacHTb進行測序以確認其結構。得到的DNA編碼一個364個氨基酸的蛋白質，此蛋白含有6-組氨酸標記，一段間隔區(qū)和一個在N-端的rTEV蛋白酶切割位點以及從29到351位的FAK激酶結構域(Met384-Gly706)。使用MaxEfficacyDH10Bac大腸桿菌(E.coli)細胞，將供體質粒轉座進桿狀病毒基因組。通過在Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)(Invitrogen)中描述的簡單堿裂解法制備BacmidDNA?；诠┴浬?CellFECTIN，Invitrogen)提供的方法，轉染Sf9昆蟲細胞。每一裂解物中FAK的表達通過SDS-PAGE和用抗-人FAK單克隆抗體(克隆#77，來自TransductionLaboratories)進行Western印跡分析。顯示最高表達的病毒克隆通過轉染到Sf9細胞進一步擴增。在ExpresSF+cells(ProteinSciencesCorp.，Meriden，Connecticut，USA)中的表達提供了高水平的幾乎無降解的蛋白質。細胞裂解物上樣到填充硫酸鎳并用50mMHEPESpH7.5，0.5M氯化鈉和10mM咪唑平衡的柱子HiTrapTMChelatingSepharoseHP(AmershamBiosciences)。捕獲的蛋白質用不斷增加咪唑量的HEPES緩沖液/氯化鈉洗脫，并通過在50mMHEPESpH7.5，10％甘油和1mMDTT中透析進一步純化。4.FAK的磷酸化水平通過夾心ELISA定量FAK在Tyr397處磷酸化水平。小鼠乳腺癌4T1細胞(1×105)加入96-孔培養(yǎng)板的孔中并與存在或不存在不同濃度的式I化合物在含10％FBS的Dulbecco’s改良的eagle培養(yǎng)基中孵育1小時。移去培養(yǎng)基并將細胞在含有1％NP-40、0.25％脫氧膽酸鈉、150mMNaCl、1mMEDTA、1mMPMSF、1mMNa3VO4、1mMNaF、1μg/mL抑酶肽、1μg/mL亮抑蛋白酶肽和1μg/mL抑胃酶肽的200μL50mMTris-HCl，pH7.4中裂解。離心后，上清液用夾心ELISA來定量磷酸化FAK和總FAK。細胞裂解液置于96-孔平底ELISA板4℃下18小時，此板事先用100μL/孔的4μg/mL小鼠單克隆抗-FAK抗體(克隆77，BectonDickinsonTransductionLaboratories)的50mMTris-HCl，pH9.5，150mM氯化鈉的溶液包被，并用水1∶4稀釋的300μLBlockAce(DainipponPharmaceuticalsCo.)室溫下封閉2小時。用TBSN(20mMTris-HCl，pH8.3，含300mMNaCl，0.1％SDS和0.05％NP-40)洗滌后，用100μL1μg/ml的抗-FAK多克隆抗體(#65-6140，UpstateBiologyInc.)檢測總FAK，而磷酸化FAK用100μL0.25μg/μL抗-磷酸化FAK(Y397)抗體(AffinityBioReagents，#OPA1-03071)的BlockAce溶液(用水1∶10稀釋)檢測。室溫下孵育1小時，平板用TBSN洗滌后，加入100μL用下述BlockAce1∶2000稀釋的生物素化抗-兔IgG(#65-6140，ZymedLaboratoliesInc.)，室溫孵育1小時，其中所述BlockAce用水1∶10稀釋。用TBSN洗滌后，用ABTS溶液底物試劑盒(#00-2011，ZymedLobolatoriesInc.)顯色。室溫下孵育20分鐘后測量405nm處的吸收度。測定引起FAK磷酸化水平下降50％(IC50)的化合物濃度。在本測定法中，式I化合物降低磷酸化的IC50＜1μM。實施例190、198和210顯示IC50值分別為0.44μM，0.043μM和0.01μM。5.非貼壁依賴性腫瘤細胞生長測定法將小鼠乳腺癌4T1細胞(5×103)置于96-孔UltralowAttachment板(#3474，CorningInc.)中的100μL含10％FBS的Dulbecco改良的eagle培養(yǎng)基。細胞培養(yǎng)2小時，加入DMSO終濃度為0.1％的不同濃度抑制。48小時后，細胞生長用細胞計數試劑盒-8(WakoPureChemical)測定，該試劑盒使用水溶性四唑鎓鹽WST8。每孔加入20μL試劑并繼續(xù)培養(yǎng)細胞2小時。在450nm測量光密度。引起50％生長抑制的化合物濃度可以由此測定。實施例204，213和206顯示IC50值分別為0.4μM、0.016μM和0.09μM。因此本發(fā)明的化合物可用于預防或治療通過ZAP-70抑制和/或Syk抑制發(fā)生作用的紊亂或疾病，例如T淋巴細胞、B淋巴細胞、肥大細胞和/或嗜酸性粒細胞介導的疾病或紊亂，例如急性或慢性器官或組織同種異體移植或異種移植排斥，動脈粥樣硬化，由于血管損傷如血管形成術、血管再狹窄、高血壓、心力衰竭、慢性肺梗阻疾病造成的血管阻塞，CNS疾病如阿爾茨海默病或肌萎縮側索硬化，癌癥，感染性疾病如AIDS，膿毒性休克或成人呼吸困難綜合癥，局部缺血/再灌注損傷例如心肌梗塞、中風、腸局部缺血、腎衰竭或出血性休克、或外傷性休克。本發(fā)明試劑也可用于治療和/或預防急性或慢性炎癥或紊亂或自身免疫疾病例如類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto’sthyroidis)、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、糖尿病(I型和II型)以及與之相關的紊亂、呼吸性疾病例如哮喘或炎性肝損傷、炎性腎小球損傷、免疫介導的紊亂或疾病的皮膚表癥、炎性和過度增生性皮膚病(如牛皮癬、異位性皮炎、過敏性接觸皮炎、刺激性接觸皮炎以及濕疹皮炎、脂溢性皮炎)、炎性眼病如斯耶格倫綜合征、角膜結膜炎或葡萄膜炎、炎性腸疾病、節(jié)段性回腸炎或潰瘍性結腸炎。本發(fā)明的化合物也可用于預防或治療與FAK相關的信號級聯(lián)功能障礙導致的疾病，例如腫瘤，例如腦和其它中樞神經系統(tǒng)腫瘤(如腦膜、腦、脊索、顱側神經腫瘤和其它部分中樞神經系統(tǒng)腫癌例如成膠質細胞瘤或骨髓胚細胞瘤)；頭和/或頸部癌癥；胸部腫瘤；循環(huán)系統(tǒng)腫瘤(例如心臟、縱膈和胸膜以及其它胸廓內器官、血管腫瘤和腫瘤相關的血管組織)；排泄系統(tǒng)腫瘤(如腎、腎盂、輸尿管、膀胱等及非特異泌尿器官)；胃腸道腫瘤(例如食道、胃、小腸、結腸、結腸直腸、乙狀直腸連接部、直腸、肛門和肛門道)，累及肝和肝內膽管、膽囊、等及非特異膽道部分、胰等及消化器官的腫瘤)；頭和頸；口腔(唇、舌、齒齦、口底、腭和口其它部分、腮腺、和唾液腺其它部分、扁桃體、口咽、鼻咽、梨狀竇、喉咽和唇、口腔和咽的其它部位)；生殖系統(tǒng)腫瘤(例如外陰、陰道、子宮頸、子宮體、子宮、卵巢、和其它雌性生殖器官相關部位、胎盤、陰莖、前列腺、睪丸、和其它雄性生殖器官相關部位的腫瘤)；呼吸道腫瘤(例如鼻腔和中耳、附屬竇、喉、氣管、支氣管和肺，例如小細胞肺癌或非-小細胞肺癌)；骨骼系統(tǒng)腫瘤(例如骨和四肢官階軟骨、骨關節(jié)軟骨和其它部位)；皮膚腫瘤(例如皮膚惡性黑色素瘤、皮膚非黑色素瘤、皮膚基底細胞癌、皮膚鱗狀細胞癌、間皮瘤、卡波濟肉瘤)；以及包括其它組織腫瘤，包括周圍神經和自主神經系統(tǒng)、結締組織和軟組織、腹膜后腔和腹膜、眼和附屬器、甲狀腺、腎上腺、和其它內分泌腺和相關結構、二級和非特異性惡性淋巴結贅瘤、呼吸和消化系統(tǒng)的二級惡性贅生物和其它部位的二級惡性贅瘤、血液和淋巴系統(tǒng)腫瘤(例如何杰金病、非何杰金淋巴瘤、Burkitt’s淋巴瘤、AIDS-相關淋巴瘤、惡性免疫增生性疾病、多發(fā)性骨髓瘤和惡性漿細胞贅瘤、淋巴細胞白血病、急慢性骨髓白血病、急慢性淋巴細胞白血病、單核細胞白血病、其它非特異細胞型白血病、非特異型細胞白血病、其它和非特異惡性淋巴結、造血和相關組織贅瘤，例如彌漫大細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤或表皮T細胞淋巴瘤)有作用。骨髓癌包括急、慢性骨髓性白血病。在上文和后文中，提到腫瘤、腫瘤疾病、癌癥或癌時，備選地或另外也指在原始器官或組織和/或任何其它位置中的癌轉移，不管腫瘤和/或癌轉移的位置是什么。用任何常規(guī)途徑可施用本發(fā)明組合物，特別是腸胃外地(例如以可注射溶液或懸液的形式)，腸內地(例如口服地，例如以片劑或膠囊形式)，局部施用，例如以洗液、凝膠劑、軟膏或霜的形式，或以滴鼻劑或栓劑的形式。包括本發(fā)明試劑和至少一種可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物可以用常規(guī)方法，通過與可藥用載體或稀釋劑混合而生產?？诜┯玫膯挝粍┬桶ɡ鐝拇蠹s0.1mg到約500mg活性物質。局部施用指例如施用至皮膚。局部施用的另一種形式是用于眼。式I化合物可以以游離的形式或可藥用鹽的形式，例如如上所述施用。這類鹽可以用常規(guī)方法制備并顯示出與游離化合物同量級的活性。與前面一致，本發(fā)明還提供(1)式I化合物或其可藥用鹽，用作藥物；(2)式I化合物或其可藥用鹽，用作ZAP-70、FAK和/或Syk酪氨酸激酶抑制劑，例如用于此前所述的任一特定適應癥；(3)包含式I化合物或其可藥用鹽，并包含一種或多種可藥用稀釋劑或載體的藥物組合物，例如用于此前所述的任一適應癥；(4)在需要它的受試者中治療任何如此前所述特定適應癥的方法，包括施用有效量的式I化合物或其可藥用鹽；(5)式I化合物或其可藥用鹽的用途，用于制備治療或預防ZAP-70、FAK和/或Syk酪氨酸激酶活化在其中起作用或相關的疾病的藥物；例如如上所討論。本發(fā)明的化合物可以作為單獨的活性成分或與其它對抗腫瘤疾病、炎性紊亂的藥物一同施用或在免疫調節(jié)療法中施用。例如，本發(fā)明的化合物可以與對上述各類疾病有效的活性劑聯(lián)合使用，所述活性劑例如環(huán)孢菌素、雷帕霉素或子囊霉素，或它們的免疫抑制類似物或衍生物如環(huán)孢菌素A、環(huán)孢菌素G，Isatx247、FK-506、西羅莫司或everolimus；CCI-779、ABT578、AP23573、皮質類激素，例如強的松、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、金制劑、柳氮磺吡啶、抗瘧藥、來氟洛米、咪唑立賓、霉酚酸、霉酚酸酯、15-脫氧斯潘格寧、具有促進淋巴細胞歸巢活性的EDG受體激動劑(例如FTY720或其類似物)、免疫抑制性單克隆抗體，例如白細胞受體例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、CD40、CD45、CD58、CD80、CD86、CD152、CD137、CD154、ICOS、LFA-1、VLA-4或它們配體的單克隆抗體；或其它免疫調節(jié)性化合物，例如CTLA4Ig。式I化合物也可以有利地與其它抗增生劑聯(lián)合使用。這類抗增生劑包括但不限于芳香酶抑制劑、抗雌激素藥物、拓撲異構酶I抑制劑、拓撲異構酶II抑制劑、微管活性劑、烷基化試劑、組蛋白脫乙?；敢种苿?、法呢基轉移酶抑制劑、COX-2抑制劑、MMP抑制劑、mTOR抑制劑、抗腫瘤的抗代謝劑、鉑化合物、降低蛋白激酶活性的化合物以及抗血管發(fā)生的化合物、促性腺釋放因子激動劑、抗雄激素藥、bengamides、雙磷酸鹽類(bisphosphonates)、抗增生抗體和泰莫佐羅(TEMODAL)。此處所用的術語“芳香酶抑制劑”涉及抑制雌激素產生即將底物雄烯二酮和睪酮分別轉化為雌酮和雌二醇的化合物。該術語包括但不限于類固醇，尤其是依西美坦和福美司坦，特別地是非類固醇，尤其是氨魯半特、伏羅唑、法曲唑、阿那曲唑以及非常特別地是來曲唑(letrozole)。包含抗腫瘤劑(其為芳香酶抑制劑)的本發(fā)明組合物可以特別用于治療激素受體陽性的乳房腫瘤。此處所用的術語“抗雌激素藥”涉及在雌激素受體水平對抗雌激素作用的化合物。該術語包括但不限于他莫昔芬、fulvestrant、雷洛昔芬和鹽酸雷洛昔芬。此處所用的術語“拓撲異構酶I抑制劑”包括但不限于拓撲替康、伊立替康、9-硝基喜樹堿和大分子的喜樹堿共軛物PNU-166148(在WO99/17804中的化合物A1)。此處所用的術語“拓撲異構酶II制劑”包括但不限于antracyclines、阿霉素(包括脂質體制劑，例如AELYXTM)、表阿霉素、去甲柔毛霉素和nemorubicin、蒽醌類的半托蒽醌和洛索蒽醌、以及表鬼臼毒素吡喃葡糖苷和替尼泊苷(teniposide)。此處所用的術語“微管活性劑”涉及微管穩(wěn)定與微管去穩(wěn)定劑，包括但并不限于紫杉烷類的紫杉醇和多西紫杉，長春花屬生物堿，例如長春花堿，特別是長春花堿硫酸鹽，長春新堿，特別是長春新堿硫酸鹽，和長春烯堿、discodermolide和埃坡霉素如埃坡霉素B和D。此處所用的術語“烷基化試劑”包括但不限于環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺和苯丙氨酸氮芥。此處所用的術語“組蛋白脫乙?；敢种苿鄙婕耙种平M蛋白脫乙?；覆⒕哂锌乖錾钚缘幕衔?。此處所用的術語“法呢基移酶抑制劑”涉及抑制法尼基轉移酶并具有抗增生活性的化合物。此處所用的術語“COX-2抑制劑”涉及抑制2型環(huán)氧酶(COX-2)和具有抗增生活性的化合物例如塞來昔布(Celebrex)、洛芬昔布(Vioxx)和lumiracoxib(COX189)。此處所用的術語“MMP抑制劑”涉及抑制基質金屬蛋白酶(MMP)和具有抗增生活性的化合物。此處所用的術語“抗腫瘤的抗代謝劑”包括但不限于5-氟尿嘧啶、喃氟啶、卡培他濱、克拉利平、阿糖胞苷、氟達拉濱磷酸鹽、氟尿嘧啶、吉西他濱、6-巰基嘌呤、羥基脲、氨甲蝶呤、依達曲沙和這類化合物的鹽類，以及ZD1694(RALTITREXEDTM)、LY231514(ALIMTATM)、LY264618(LOMOTREXOLTM)和OGT719。此處所周的術語“鉑化合物”包括但不限于碳鉑、順鉑和草酸鉑。此處所用的術語“降低蛋白激酶活性的化合物和其它抗血管發(fā)生化合物”包括但不限于降低例如血管內皮生長因子(VEGF)、表皮生長因子(EGF)、c-Src、蛋白激酶C、血小板源性生長因子(PDGF)、Bcr-Abl酪氨酸激酶、c-kit、Flt-3和胰島素樣生長因子I受體(IGF-IR)和細胞周期蛋白依賴性激酶(CDKs)活性的化合物和具有降低蛋白激酶活性以外的其它作用機制的抗血管發(fā)生化合物。降低VEGF活性的化合物特別是抑制VEGF受體，尤其是VEGF受體的酪氨酸激酶活性的化合物，以及結合VEGF的化合物，特別是那些分類并具體地公開在WO98/35958(描述式I化合物)、WO00/09495、WO00/27820、WO00/59509、WO98/11223、WO00/27819、WO01/55114、WO01/58899和EP0769947中的化合物、蛋白質和單克隆抗體；那些被M.Prewett等人在CancerResearch59(1999)5209-5218，被F.Yuan等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA，vol.93，pp.14765-14770，December1996，被Z.Zhu等人在CancerRes.58，1998，3209-3214，和被J.Mordenti等人在ToxicologicPathology，vol.27，no.1，pp14-21，1999中所描述；在WO00/37502和WO94/10202；AngiostatinTM，被M.S.O’Reilly等人，Cell79，1994，315-328所描述；和EndostatinTM，被M.S.O’Reilly等人，Cell88，1997，277-285所描述的化合物；降低EGF活性的化合物尤其是抑制EGF受體，尤其是EGF受體酪氨酸激酶活性的化合物，以及結合EGF的化合物，以及特別是那些分類并具體地公開在WO97/02266(描述式IV化合物)、EP0564409、WO99/03854、EP0520722、EP0566226、EP0787722、EP0837063、WO98/10767、WO97/30034、WO97/49688、WO97/38983和尤其是在WO96/33980的化合物；降低c-Src活性的化合物包括但不限于如下定義的抑制c-Src蛋白酪氨酸激酶活性的化合物和SH2相互作用抑制劑，如那些在WO97/07131andWO97/08193中所公開的；抑制c-Src蛋白酪氨酸激酶活性的化合物包括但不限于屬于吡咯并嘧啶，尤其是吡咯并[2，3-d]嘧啶、嘌呤、吡唑并嘧啶、尤其是吡唑并[3，4-d]嘧啶、吡唑并嘧啶，尤其是吡唑并[3，4-d]嘧啶和吡啶并嘧啶，尤其是吡啶并[2，3-d]嘧啶結構類的化合物。優(yōu)選地，本術語涉及那些在WO96/10028、WO97/28161、WO97/32879和WO97/49706中公開的化合物；降低蛋白激酶C活性的化合物尤其是那些公開在EP0296110(在WO00/48571描述藥物制備)中的為蛋白激酶C抑制劑的星形孢菌素衍生物；降低蛋白激酶活性并可能與本發(fā)明組合使用的其它特定化合物是Imatinib(Gleevec/Glivec)、PKC412、IressaTM(ZD1839)、PKI166、PTK787、ZD6474、GW2016、CHIR-200131、CEP-7055/CEP-5214、CP-547632和KRN-633；具有降低蛋白激酶活性以外的其它作用機制的抗血管發(fā)生化合物包括但不限于，例如沙立度胺(THALOMID)、塞來昔布(Celebrex)、SU5416和ZD6126。此處所用的術語“促性腺激素釋放因子激動劑”包括但不限于abarelix、性瑞林和醋酸性瑞林。性瑞林公開在US4,100,274中。此處所用的術語“抗雄激素藥”包括但不限于可如US4,636,505中所公開的那樣制劑的比卡魯胺(CASODEXTM)。術語“bengamides”涉及bengamides及其具有抗增生性質的衍生物。此處所用的術語“雙磷酸鹽類”包括但不限于etridonicacid、氯屈磷酸(clodronicacid)、替魯磷酸(tiludronicacid)、帕米磷酸(pamidronicacid)、阿侖磷酸(alendronicacid)、伊巴磷酸(ibandronicacid)、利塞磷酸(risedronicacid)和唑來磷酸(zoledronicacid)。此處所用的術語“抗增生抗體”包括但不限于司徒曼布(HerceptinTM)、司徒曼步-DM1、erlotinib(TarcevaTM)、bevacizumab(AvastinTM)、利妥希瑪(Rituxan)、PRO64553(抗-CD40)和2C4抗體。通過代號、屬名或商品名確定的活性劑的結構可從標準綱要“TheMerckIndex”的現(xiàn)行版本或從例如PatentsInternational數據庫(如IMSWorldPublications)獲得。與前述一致，本發(fā)明還進一步提供了以下方面(6)如上定義的方法，包括例如同時或依次聯(lián)合施用治療有效量的a)式I化合物或其可藥用鹽和b)第二種藥物，所述第二種藥物例如用于此前所述的任一特定適應癥。(7)包含ZAP-70、FAK和/或Syk酪氨酸激酶抑制劑例如式I化合物或其可藥用鹽和第二種藥物的治療有效量的組合物，其中所述第二種藥物例如如上所公開。如果ZAP-70、FAK和/或Syk酪氨酸激酶抑制劑，例如式I化合物與其它例如如上所公開的免疫抑制性/免疫調節(jié)性、抗炎或抗腫瘤劑聯(lián)合施用時，被共施用的藥物或試劑的劑量當然要根據所共用藥物或試劑的類型，或所用特定藥物或試劑，或受治療的疾病等改變。代表性的FAK抑制劑是實施例187-203和209-212的化合物。序列表<110>諾瓦提斯公司<120>嘧啶衍生物<130>4-32366A<150>GB0206215.6<151>2002-03-15<160>4<170>PatentInversion3.1<210>1<211>15<212>PRT<213>人工序列<220><223>LAT-11為用于ZAP-70激酶測定法中的人工序列<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>X＝L(+)-生物素化的氨基己酰基<400>1XaaGluGluGlyAlaProAspTyrGluAsnLeuGlnGlnLeuAsn151015<210>2<211>12<212>PRT<213>人工序列<220><223>Biot-Y397為用于FAK測定法中的序列<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>生物素<400>2XaaSerGluThrAspAspTyrAlaGluIleIleAsp1510<210>3<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>用于制備人FAKcDNA的PCR引物<400>3atggcagctgcttaccttgac21<210>4<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>用于制備人FAKcDNA的PCR引物<400>4tcagtgtggtctcgtctgccc2權利要求1.游離形式或鹽形式的下式I化合物其中，X為＝CR0-或＝N-；R0，R1，R2，R3和R4中的每一個獨立地是氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基-C1-C8烷基；羥基C1-C8烷基；C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷氧基C1-C8烷基；任選地在環(huán)上可以被羥基、C1-C8烷氧基、羧基或C1-C8烷氧基羰基取代的芳基C1-C8烷基；或R3和R4及與它們連接的氮和碳原子一起形成5到10元雜環(huán)，并額外地包含1、2或3個選自N、O和S的雜原子；或R1、R2和R3中的每一個獨立地是鹵素、鹵代-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基、鹵代-C1-C8烷氧基、羥基C1-C8烷氧基；C1-C8烷氧基C1-C8烷氧基；芳基；芳基C1-C8烷氧基；雜芳基；雜芳基-C1-C4烷基；5到10元雜環(huán)；硝基；羧基；C2-C8烷氧基羰基；C2-C8烷基羰基；-N(C1-C8烷基)C(O)C1-C8烷基；-N(R10)R11；-CON(R10)R11；-SO2N(R10)R11；或-C1-C4-亞烷基-SO2N(R10)R11；其中R10和R11中的每一個獨立地是氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷基；(C1-C8烷基)-羰基；任選地可以在環(huán)上被羥基、C1-C8烷氧基、羧基或C2-C8烷氧基羰基取代的芳基C1-C8烷基；或5到10元雜環(huán)；或R1和R2和與它們連接的C-原子一起形成芳基或包含一個或兩個選自N、O和S的雜原子的5到10元雜芳基；或R5和R6中的每一個獨立地是氫；鹵素；氰基；C1-C8烷基；鹵代-C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C2-C8炔基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基C1-C8烷基；C5-C10芳基C1-C8烷基；R7、R8和R9中的每一個獨立地是氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；鹵代-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基C1-C8烷基；芳基C1-C8烷基；-Y-R12，其中Y是一直接鍵或O，且R12是一個取代的或未取代的包含1、2或3個選自N、O和S的雜原子的5、6或7元雜環(huán)；羧基、(C1-C8烷氧基)-羰基；-N(C1-8烷基)-CO-NR10R11；-CONR10R11；-N(R10)(R11)；-SO2N(R10)R11；R7和R8或R8和R9，分別和與它們連接的碳原子一起形成包含選自N、O和S的1、2或3個雜原子的5或6元雜芳基；或5或6元碳環(huán)。2.根據權利要求1所述的化合物，其中至多R1，R2或R3之一是-CON(R10)R11或-SO2N(R10)R11。3.用于產生根據權利要求1的式I化合物的方法，其包括將下式II的化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和X為如權利要求1所述定義，Y是離去基團；與下式III的化合物反應的步驟其中R7、R8和R9為如權利要求1所述定義，以及回收得到的游離形式或鹽形式的式I化合物，并且根據需要，將以游離形式獲得的式I化合物轉化成目標鹽形式，或反之亦然。4.用作藥物的游離形式或可藥用鹽形式的根據權利要求1的化合物。5.藥物組合物，其包含根據權利要求1的式I化合物或其可藥用鹽，并還包含一種或多種可藥用載體或稀釋劑。6.游離形式或可藥用鹽形式的根據權利要求1的式I化合物的用途，用作藥物治療或預防其中ZAP-70，F(xiàn)AK和/或Syk酪氨酸激酶活性發(fā)揮作用或相關的疾病或病癥。7.游離形式或可藥用鹽形式的根據權利要求1的式I化合物的用途，用作藥物治療或預防其中ZAP-70，F(xiàn)AK和/或Syk酪氨酸激酶活性發(fā)揮作用或相關的疾病或病癥。8.一種組合物，其包含(a)治療有效量的ZAP-70、FAK和/或Syk抑制劑和(b)第二種藥物。9.在需要此種治療的受試者中，治療或預防其中ZAP-70、FAK和/或Syk酪氨酸抑制劑活性起作用或相關的疾病或病癥的方法，其包括施與該受試者治療有效量的根據權利要求1的式I化合物或其可藥用鹽。10.在需要此種治療的受試者中，治療或預防其中ZAP-70、FAK和/或Syk酪氨酸抑制劑活性起作用或相關的疾病或病癥的方法，其包括聯(lián)合施與該受試者治療有效量的ZAP-70、FAK和/或Syk抑制劑及第二種藥物。全文摘要提供右式(I)的化合物其中，X、R文檔編號A61K45/00GK1697830SQ03806101公開日2005年11月16日申請日期2003年3月14日優(yōu)先權日2002年3月15日發(fā)明者R·巴特里,G·森克,N·G·庫克,R·杜塔勒,G·托馬,A·馮馬特,本田敏幸,松浦直子,野野村和彥,大森治,梅村一郎,K·欣特爾丁,C·帕帕耶奧爾尤申請人:諾瓦提斯公司