專利名稱：誘導(dǎo)HIV感染細(xì)胞凋亡的人IgM抗體和用于HIV感染的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及人IgM單克隆抗體，所述抗體特別作用于HIV感染細(xì)胞，并誘導(dǎo)HIV感染細(xì)胞凋亡，本發(fā)明還涉及含有此抗體作為有效成分的抗HIV感染的藥物。
背景技術(shù)：
現(xiàn)在已發(fā)展出多種制劑，如逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑，用于治療HIV感染。共同使用三或四種這些制劑進(jìn)行多藥物療法(所謂高活性抗逆轉(zhuǎn)錄療法(highly active antiretroviral therapy)HAART)對HIV感染患者有效，使其血HIV濃度大幅下降，CD4淋巴細(xì)胞數(shù)量上升。但是，HAART無法清除潛伏的感染細(xì)胞，治愈HIV感染患者。因此，存在的問題是當(dāng)藥物治療停止時，HIV在潛伏感染細(xì)胞中重生并增殖。
雖然已有報道，間歇性重復(fù)中斷和恢復(fù)HAART有時可有效誘導(dǎo)對HIV的免疫反應(yīng)，此方法不被認(rèn)為是可靠的療法。但是這個結(jié)果表明了免疫反應(yīng)對HIV的重要性。
雖然特別作用于HIV感染細(xì)胞的人單克隆抗體已通過基因重組制備，它們是IgG類的抗體。雖然IgG抗體為抑制HIV感染的中和抗體，它不能傷害感染細(xì)胞。
由于在人細(xì)胞膜上存在種族特異性補(bǔ)體調(diào)控膜因子(如DAF，衰變加速因子(decay accelerating factor)；MCP，膜輔助因子蛋白(membrane cofactorprotein)；以及HRF20，20kDa同源限制因子(20kDa homologous restrictionfactor))，它們通過補(bǔ)體反應(yīng)不能誘導(dǎo)細(xì)胞裂解反應(yīng)，以阻止同源人補(bǔ)體的反應(yīng)。
另一方面，人血清中與HIV感染細(xì)胞反應(yīng)的IgM抗體被發(fā)現(xiàn)可依靠人補(bǔ)體越過補(bǔ)體調(diào)控膜因子，使HIV感染細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞裂解反應(yīng)。IgM抗體被發(fā)現(xiàn)可對神經(jīng)節(jié)苷脂如GM2和Gg4表現(xiàn)出類似上述的反應(yīng)，而神經(jīng)節(jié)苷脂的表達(dá)為被HIV感染增強(qiáng)(Japanese Patent Application Laid-Open No.9-227409，page 2，paragraph )。
L55被報道為人類抗GM2神經(jīng)節(jié)苷脂IgM單克隆抗體，其中L55由無限增殖的EB病毒轉(zhuǎn)形人B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。用人類IgM單克隆抗體處理后的HIV感染細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)通過人補(bǔ)體反應(yīng)產(chǎn)生裂解。但是，由于L55抗體不是特別作用于HIV感染細(xì)胞，它還可作用于非HIV感染細(xì)胞的正常細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為HIV感染患者提供藥物，所述藥物含有作為有效成分的人IgM抗體，所述抗體特別與HIV感染細(xì)胞反應(yīng)，誘導(dǎo)感染細(xì)胞凋亡，以導(dǎo)致細(xì)胞破壞。
為解決上述問題，本發(fā)明的第一個方面是提供一種屬于人IgM的抗原(antigen)，它特別地識別HIV感染細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
本發(fā)明的第二個方面是提供用于HIV感染的藥物，它含有作為有效成分的人IgM抗體，此抗體特別地識別HIV感染細(xì)胞并誘導(dǎo)HIV感染細(xì)胞凋亡。
本發(fā)明的第三個方面是根據(jù)第二個方面提供用于阻止AIDS發(fā)病的藥物。
本發(fā)明的第四個方面是根據(jù)第一到第三個方面中的任意一個提供人IgM單克隆抗體，其中作用于HIV感染細(xì)胞的人IgM單克隆抗體為2G9抗體，此抗體具有序列號1表示的H鏈可變區(qū)堿基序列。
本發(fā)明的第五個方面是根據(jù)第一到第四個方面中的任意一個提供人IgM單克隆抗體，其中作用于HIV感染細(xì)胞的人IgM單克隆抗體為2G9抗體，此抗體具有序列號2表示的L鏈可變區(qū)堿基序列。


圖1示出了2G9抗體的特異性。
流式細(xì)胞儀(flow cytometory)分析的結(jié)果表明HIV感染細(xì)胞被2G9抗體染色，而非感染細(xì)胞則沒有(PBMC外周血淋巴細(xì)胞(peripheral bloodlymphocyte)；IIIB，原代分離(primary isolate)、MN表示HIV名稱)。
圖2示出2G9抗體也可與HIV潛伏感染細(xì)胞反應(yīng)。
OM10.1細(xì)胞為潛伏感染細(xì)胞，可與2G9抗體作用，但它們不作為抗HIV膜蛋白抗原與gp120抗體(0.5β)反應(yīng)。
圖3示出了帶有HIV2G9抗體的感染細(xì)胞的凋亡。
它示出HIV感染的MOLT-4/IIIB細(xì)胞在以50μg/ml的濃度加入2G9抗體的培養(yǎng)物中培養(yǎng)2天后，通過TUNEL法，MOLT-4/IIIB細(xì)胞被凋亡探測試劑完全染色。無感染的MOLT-4細(xì)胞沒有受任何影響。
圖4示出帶有2G9抗體的HIV潛伏感染細(xì)胞的凋亡。
它示出2G9抗體以12.5μg/ml的濃度加入到HIV感染的OM10.1細(xì)胞中，細(xì)胞培養(yǎng)2天，與凋亡探測試劑Annexin V反應(yīng)的細(xì)胞比例與無抗體加入的比例相比，從5.5％增加到21.2％。
圖5例示2G9μ鏈表達(dá)質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)。
具體實(shí)施例方式
雖然關(guān)于本發(fā)明通過實(shí)施例被詳細(xì)說明，本發(fā)明的技術(shù)范圍不被這些實(shí)施例所限制。
為解決以上問題，本發(fā)明的發(fā)明人用免疫小鼠(TC鼠轉(zhuǎn)染色體小鼠；Kirin Brewery Co.，Ltd.制備)的HIV感染細(xì)胞，該小鼠中被轉(zhuǎn)入含有人免疫球蛋白基因的染色體，獲得可產(chǎn)生特別作用于HIV感染細(xì)胞的人抗體的小鼠。通過傳統(tǒng)的方法，融合免疫小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞株，制備雜交瘤(hybridoma)。從獲得的雜交瘤中選出產(chǎn)生作用于HIV感染細(xì)胞單克隆抗體的克隆，并且將所選出的雜交瘤命名為2G9細(xì)胞株。2G9細(xì)胞株產(chǎn)生的2G9單克隆抗體為人IgM單克隆抗體，含有人μ鏈人κ鏈。雖然2G9抗體特別作用于HIV感染細(xì)胞，它還可與潛伏感染細(xì)胞株OM10.1反應(yīng)。這些細(xì)胞通過誘導(dǎo)凋亡而被破壞，本發(fā)明已完成確認(rèn)。產(chǎn)生本發(fā)明2G9抗體的2G9細(xì)胞株于2003年5月8號被國際先進(jìn)工業(yè)科學(xué)協(xié)會-國際專利組織保藏處(National Institute of Advanced Industrial Science and Technology，International Patent Organism Depository)(Chuo-6，Higashi 1-1-1，TsukubaCity，Ibaraki Pref.)保藏，保藏號(accession number)為FERM BP-8378。
與2G9抗體反應(yīng)的抗原(2G9抗原)用SDS處理被認(rèn)為會失去對2G9抗體的反應(yīng)性。
表1表示κ鏈和μ鏈可變區(qū)中各編碼2G9抗體的基因的堿基序列分析結(jié)果。恒定區(qū)的堿基序列與報道基因的堿基序列大致相同。
表1
μ鏈可變區(qū)堿基序列TGCCCTGGATTCCAAGGCCTATCCACTTGGTGATCAGCACTGAGCACCGAGGATTCACCATGGAACTGGGGCTCCGCTGGGTTTTCCTTGTTGCTATTTTAGAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTACTTATAGCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATCTCCTTATAGCAGTGGCTGGCCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAκ鏈可變區(qū)堿基序列CTCAGTCAGGACACAGCATGGACATGAGGGTCCCTGCTCAGCTCCTGGGACTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGATACCAGATGTGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAATTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAACTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAATCAGGGGTCCCATCTCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAAGTATAACAGTGCCCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA第一個方面，諸如2G9抗體的抗體，可誘導(dǎo)包括OM10.1細(xì)胞的HIV感染細(xì)胞凋亡。換個說法，此抗體為可特別誘導(dǎo)HIV感染細(xì)胞凋亡的IgM單克隆抗體。由于此抗體也可誘導(dǎo)HIV潛伏感染細(xì)胞如OM10.1細(xì)胞凋亡，它可用作清除HIV感染患者體中潛伏的HIV潛伏感染的藥物，這些潛伏感染是化學(xué)治療藥物不能起作用的。
用于HIV感染患者的本發(fā)明的治療藥物可通過將此藥物與生理可接受的載體結(jié)合獲得，它包含人IgM抗體有效成分，通過特異性作用于HIV感染細(xì)胞，誘導(dǎo)HIV感染細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致其破壞。生理可接受的載體為本領(lǐng)域已知的，包括生理鹽緩沖溶液或其它具有緩沖行為的水溶液或溶劑，如乙二醇、甘油、油(例如橄欖油)或可注射有機(jī)酯。生理可接受的載體可含有穩(wěn)定IgM抗體或增強(qiáng)其吸收的化合物。生理可接受的化合物的例子包括糖如葡萄糖、蔗糖和葡聚糖；抗氧化劑如抗壞血酸和谷胱甘肽；螫合劑；蛋白質(zhì)如白蛋白；以及其它穩(wěn)定劑和賦形劑。還可進(jìn)一步加入其它生理活性物質(zhì)，如轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑。可根據(jù)給藥途徑和目標(biāo)疾病選擇生理可接受載體的任何結(jié)合。
實(shí)施例1.2G9抗體的特異性抗HIV感染細(xì)胞的2G9抗體的反應(yīng)性用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。U937細(xì)胞、MOLT-4細(xì)胞和CEM細(xì)胞的培養(yǎng)細(xì)胞株用作受試細(xì)胞。所用的HIV感染細(xì)胞有通過用HIV-1的IIIB株感染U937細(xì)胞制備的U937/IIIB，用原代分離單株感染的U937/原代分離，用MN株感染的U937/MIN，以及用IIIB株感染MOLT-4制備的MOLT-4/IIIB。沖洗2G9抗體處理的細(xì)胞后，該細(xì)胞用熒光色素標(biāo)記的抗人IgM抗體染色，細(xì)胞的熒光強(qiáng)度用流式細(xì)胞儀分析。結(jié)果表明，HIV感染細(xì)胞U937/IIIB、U937/原代分離、U937/MIN和MOLT-4/IIIB被2G9抗體強(qiáng)烈染色，而未感染的MOLT-4細(xì)胞和CEM細(xì)胞完全沒有被染色。對正常成人外周血淋巴細(xì)胞和用植物血凝素刺激后培養(yǎng)3天的外周血淋巴細(xì)胞制備的活化淋巴細(xì)胞的分析結(jié)果表明，這些細(xì)胞完全不與2G9抗體反應(yīng)。因此，這表明2G9抗體特別作用于HIV感染細(xì)胞，此抗原不與正常細(xì)胞反應(yīng)(圖1)。OM10.1細(xì)胞被認(rèn)為是HIV潛伏感染細(xì)胞株，常常不表達(dá)抗HIV抗體如gp120。但是，由于2G9抗體作用于OM10.1細(xì)胞，這表明2G9抗體可作用于潛伏感染期的細(xì)胞(圖2)。
實(shí)施例2.帶有2G9抗體的HIV感染細(xì)胞的凋亡被HIV-1感染的MOLT-4/IIIB細(xì)胞以5×105細(xì)胞/ml的濃度接種于加入20％失活人血清的RPMI1640培養(yǎng)基，加入同等體積100μg/ml的2G9抗體溶液，細(xì)胞在含有5％二氧化碳的恒溫箱中37℃培養(yǎng)2天。培養(yǎng)后以DNA片斷作為凋亡指標(biāo)，用TUNEL法染色，隨后用1％多聚甲醛固定細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀分析。如圖3所示，沒有用2G9抗體處理的細(xì)胞沒有被染色，而與2G9抗體共同培養(yǎng)的細(xì)胞被完全染色。這個結(jié)果表明2G9抗體具有誘導(dǎo)感染細(xì)胞凋亡的作用。未感染的MOLT-4細(xì)胞中沒有觀察到這樣的損傷作用(圖3)。
實(shí)施例3.帶有2G9抗體的HIV潛伏感染細(xì)胞的凋亡OM10.1細(xì)胞作為潛伏感染細(xì)胞株，以1×105細(xì)胞/ml的濃度接種于含20％失活人血清的細(xì)胞培養(yǎng)基(RPMI1640 medium)，并加入同等體積12.5μg/ml的2G9抗體溶液，隨后37℃培養(yǎng)2天。培養(yǎng)后的細(xì)胞用Annexin V作為凋亡探測試劑染色，細(xì)胞用1％多聚甲醛固定，用流式細(xì)胞儀分析。結(jié)果如圖4所示，未用2G9抗體處理時，5.5％的細(xì)胞被染色，而與2G9抗體共同培養(yǎng)時，21.2％的細(xì)胞被染色。因此可以確認(rèn)2G9抗體還具有誘導(dǎo)HIV潛伏感染細(xì)胞OM10.1細(xì)胞凋亡的作用。
實(shí)施例4.基因工程重建抗體基于表1所示2G9抗體可變區(qū)堿基序列重建2G9抗體的方法的一個實(shí)施如下所述，其中2G9抗體產(chǎn)生細(xì)胞株用基因工程方法如鳥槍連接法(shot-gun ligation method)建立(Grundstrom，T.et al.，Nucleic Acid Res.13，3305-3316，1985)。
2G9抗體可變區(qū)氨基酸序列通過翻譯表中的堿基序列獲得。2G9抗體可變區(qū)中有許多編碼此氨基酸序列的堿基序列，如表2所示，如原始2G9抗體可變區(qū)的堿基序列以及通過變換密碼于獲得的堿基序列。從這些序列中選出具有特定限制性內(nèi)切酶識別片斷的堿基序列，使每段達(dá)到能作為寡核苷酸化學(xué)合成的長度(表2)。
表22G9抗體的氨基酸序列中編碼同樣氨基酸的cDNA實(shí)施例
1M E L G L R W V F L V A I L E G V Q C EATA GAA TTA GGT TTA CGT TGA GTT TTT TTA GTT GCT ATT TTA GAA GGT GTT CAA TGT GAAATG GAG TTG GGC TTG CGC TGG GTC TTC TTG GTC GCC ATC TTG GAG GGC GTC CAG TGC GAGCTT GGA CTT CGA GTA CTT GTA GCA CTT GGA GTACTC GGG CTC CGG GTG CTC GTG GCG CTC GGG GTGCTA CTA CTA CTACTG CTG CTG CTG21V Q L V E S G G G L V K P G G S L R L SGTT CAA TTA GTT GAA TCT GGT GGT GGT TTA GTT AAA CCT GGT GGT TCT TTA CGT TTA TCTGTC CAG TTG GTC GAG TCC GGC GGC GGC TTG GTC AAG CCC GGC GGC TCC TTG CGC TTG TCCGTA CTT GTA TCA GGA GGA GGA CTT GTA CCA GGA GGA TCA CTT CGA CTT TCAGTG CTC GTG TCG GGG GGG GGG CTC GTG CCG GGG GGG TCG CTC CGG CTC TCGCTA AGT CTA AGT CTA CTA AGTCTG AGC CTG AGC CTG CTG AGC
41C A A S G F T F S T Y S M N W V R Q A PTGT GCT GCT TCT GGT TTT ACT TTT TCT ACT TAT TCT ATA AAT TGA GTT CGT CAA GCT CCTTGC GCC GCC TCC GGC TTC ACC TTC TCC ACC TAC TCC ATG AAC TGG GTC CGC CAG GCC CCCGCA GCA TCA GGA ACA TCA ACA TCA GTA CGA GCA CCAGCG GCG TCG GGG ACG TCG ACG TCG GTG CGG GCG CCGAGT AGT AGTAGC AGC AGC61G K G L E W V S S I S S S S S Y I Y Y AGGT AAA GGT TTA GAA TGA GTT TCT TCT ATT TCT TCT TCT TCT TCT TAT ATT TAT TAT GCTGGC AAG GGC TTG GAG TGG GTC TCC TCC ATC TCC TCC TCC TCC TCC TAC ATC TAC TAC GCCGGA GGA CTT GTA TCA TCA TCA TCA TCA TCA TCA GCAGGG GGG CTC GTG TCG TCG TCG TCG TCG TCG TCG GCGCTA AGT AGT AGT AGT AGT AGT AGTCTG AGC AGC AGC AGC AGC AGC AGC
81D S V K G R F T I S R D N A K N S L Y LGAT TCT GTT AAA GGT CGT TTT ACT ATT TCT CGT GAT AAT GCT AAA AAT TCT TTA TAT TTAGAC TCC GTC AAG GGC CGC TTC ACC ATC TCC CGC GAC AAC GCC AAG AAC TCC TTG TAC TTGTCA GTA GGA CGA ACA TCA CGA GCA TCA CTT CTTTCG GTG GGG CGG ACG TCG CGG GCG TCG CTC CTCAGT AGT AGT CTA CTAAGC AGC AGC CTG CTG
101Q M N S L R A E D T A V Y Y C A R D L LCAA ATA AAT TCT TTA CGT GCT GAA GAT ACT GCT GTT TAT TAT TGT GCT CGT GAT TTA TTACAG ATG AAC TCC TTG CGC GCC GAG GAC ACC GCC GTC TAC TAC TGC GCC CGC GAC TTG TTGTCA CTT CGA GCA ACA GCA GTA GCA CGA CTT CTTTCG CTC CGG GCG ACG GCG GTG GCG CGG CTC CTCAGT CTA CTA CTAAGC CTG CTG CTG121I A V A G H W G Q G T L V T V S SATT GCT GTT GCT GGT CAT TGA GGT CAA GGT ACT TTA GTT ACT GTT TCT TCTATC GCC GTC GCC GGC CAC TGG GGC CAG GGC ACC TTG GTC ACC GTC TCC TCCGCA GTA GCA GGA GGA GGA ACA CTT GTA ACA GTA TCA TCAGCG GTG GCG GGG GGG GGG ACG CTC GTG ACG GTG TCG TCGCTA AGT AGTCTG AGC AGC基于為每個限制性內(nèi)切酶識別片斷分開的堿基序列，化學(xué)合成寡核苷酸。在用相應(yīng)限制性內(nèi)切酸依次消化合成的寡核苷酸后，將其連接獲得編碼2G9抗體可變區(qū)氨基酸序列的全長堿基序列。通過同樣的方法獲得2G9抗體H鏈和L鏈可變區(qū)的cDNA片斷，每個片斷(分別命名為rVμ2G9和rVκ2H9)整合到含有用同樣方法獲得的人IgM抗體H鏈和L鏈恒定區(qū)基因序列(分別為Cμ和Cκ)的載體中，形成嵌合體抗體，獲得重組2G9μ鏈和κ鏈的表達(dá)質(zhì)粒)分別為rVμ2G9-Cμ和rVκ2G9-Cκ；圖5)。
實(shí)施例5.重組抗體的表達(dá)使用COS7細(xì)胞(ATCC CRL 1651)中的臨時表達(dá)體系考察抗體的活性，所述抗體使用表達(dá)重組2G9抗體基因的質(zhì)粒獲得。采用GIBCO Co.的脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑盒，使用兩種質(zhì)粒(rVμ2G9-Cμ和rVκ2G9-Cκ)的混合物以及人IgM抗體J鏈的表達(dá)質(zhì)粒(Cj)導(dǎo)入基因。繼續(xù)培養(yǎng)2天，其后采用常規(guī)培養(yǎng)條件，取回導(dǎo)入了基因的細(xì)胞培養(yǎng)物上清液。使用抗人μ-抗體和抗人κ-抗體，用夾層ELISA法檢測系統(tǒng)檢測培養(yǎng)物上清液，確認(rèn)培養(yǎng)物上清液中分泌的重組2G9抗體。使用諸如通過用HIV-1的IIIB株感染U937細(xì)胞和MOLT-4細(xì)胞制備的U937/IIIB和MOLT-4/HIB細(xì)胞，通過FACS分析培養(yǎng)物上清液，抗體被確認(rèn)具有上述特異性。而且，使熒光標(biāo)記原始的2G9抗原和培養(yǎng)物上清液同時與U937/IIIB或MOLT-4/IIIB反應(yīng)，通過此競爭性抑制試驗(yàn)，確認(rèn)了重組2G9抗體的活性。
隨后，表1所列出的2G9抗體μ鏈和κ鏈可變區(qū)堿基序列被確認(rèn)為是抗HIV活性的重要區(qū)域。
從這些結(jié)果還可確認(rèn)的是編碼μ鏈可變區(qū)和κ鏈可變區(qū)堿基序列的基因?qū)τ谥苽渲亟M抗HIV抗體是決定性的基因。
工業(yè)應(yīng)用性本發(fā)明中獲得的2G9抗體被確認(rèn)對潛伏感染的OM10.1細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡的行為。2G9抗體還被確認(rèn)對感染細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡的行為。相反，此抗體不損傷未感染的U937和MOLT-4細(xì)胞。這些結(jié)果表明本發(fā)明的2G9抗體可用作藥物，清除潛伏在化學(xué)療法無效的感染患者體內(nèi)的潛伏感染，這是由于抗體可誘導(dǎo)潛伏感染細(xì)胞的凋亡。本發(fā)明還提供編碼μ鏈可變區(qū)和κ鏈可變區(qū)堿基序列的基因，所述區(qū)域?qū)τ谥苽渲亟M抗HIV抗體是決定性的。
序列表<110>岡田秀親岡田則子<120>誘導(dǎo)HIV感染細(xì)胞凋亡的人IgM抗體和用于HIV感染的藥物<130>T-070102-3<150>2002-227953<151>2002-07-01<160>2<170>專利版本3.1<210>1<211>470<212>DNA<213>未知<220>
<223>人u鏈的可變區(qū)<220>
<221>V區(qū)<222>(1)..(470)<223>
<400>1
tgccctggat tccaaggcct atccacttgg tgatcagcac tgagcaccga ggattcacca 60tggaactggg gctccgctgg gttttccttg ttgctatttt agaaggtgtc cagtgtgagg120tgcagctggt ggagtctggg ggaggcctgg tcaagcctgg ggggtccctg agactctcct180gtgcagcctc tggattcacc ttcagtactt atagcatgaa ctgggtccgc caggctccag240ggaaggggct ggagtgggtc tcatccatta gtagtagtag tagttacata tactacgcag300actcagtgaa gggccgattc accatctcca gagacaacgc caagaactca ctgtatctgc360aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg ctgtgtatta ctgtgcgaga gatctcctta420tagcagtggc tggccactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 470<210>2<211>404<212>DNA<213>未知<220>
<223>人k鏈的可變區(qū)<220>
<221>V區(qū)<222>(1)..(404)<223>
<400>2ctcagtcagg acacagcatg gacatgaggg tccctgctca gctcctggga ctcctgctgc 60tctggctccc agataccaga tgtgacatcc agatgaccca gtctccatcc tccctgtctg 120catctgtagg agacagagtc accatcactt gccgggcgag tcagggcatt agcaattatt 180
tagcctggta tcagcagaaa ccagggaaag ttcctaaact cctgatctat gctgcatcca 240ctttgcaatc aggggtccca tctcggttca gcggcagtgg atctgggaca gatttcactc 300tCaccatcag cagcctgcag cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcaa aagtataaca 360gtgccccgta cacttttggc caggggacca agctggagat caaa40權(quán)利要求
1.一種屬于人IgM的單克隆抗體，其特征在于所述抗體特別識別HIV感染細(xì)胞，誘導(dǎo)感染細(xì)胞凋亡。
2.一種治療HIV感染疾病的藥物，其特征在于所述藥物包含作為有效成分的人IgM抗體，此抗體特別識別HIV感染細(xì)胞并誘導(dǎo)HIV感染細(xì)胞凋亡。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求2的藥物，其特征在于所述藥物用于阻止AIDS的發(fā)病。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)的人IgM單克隆抗體，其特征在于其中作用于HIV感染細(xì)胞的人IgM單克隆抗體為2G9抗體，所述抗體包含序列號1表示的H鏈可變區(qū)堿基序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)的人IgM單克隆抗體，其特征在于其中作用于HIV感染細(xì)胞的人IgM單克隆抗體為2G9抗體，所述抗體包含序列號2表示的L鏈可變區(qū)堿基序列。
6.一種產(chǎn)生2G9抗體細(xì)胞株，其特征在于所述細(xì)胞株保藏號為FERMBP-8378，屬于人IgM，特別識別HIV感染細(xì)胞，誘導(dǎo)感染細(xì)胞凋亡。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)的單克隆抗體，其特征在于所述抗體由保藏號為FERMBP-8378的細(xì)胞株產(chǎn)生。
全文摘要
一種屬于人IgM的單克隆抗體，其特別識別HIV感染細(xì)胞，并誘導(dǎo)感染細(xì)胞凋亡。使用獲得的抗體，提供一種用于HIV感染病人的藥物，該藥物包括作為有效成分的人IgM抗體，所述抗體可特別與HIV感染細(xì)胞反應(yīng)，誘導(dǎo)感染細(xì)胞凋亡，從而破壞細(xì)胞等。
文檔編號A61P31/18GK1665842SQ03815598
公開日2005年9月7日 申請日期2003年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月1日
發(fā)明者岡田秀親, 岡田則子 申請人:岡田秀親, 岡田則子