專利名稱：N－?；?表)k5－胺－o－硫酸鹽衍生物及其產(chǎn)品的制備方法
發(fā)明的目標(biāo)本發(fā)明涉及高硫酸化度的K5多糖的新衍生及其制備方法，在它們合成中有用的新的高O-硫酸化的中間體，以及含所述K5多糖作為活性成分的、對(duì)凝血基本上沒(méi)有活性的藥物組合物。
尤其，本發(fā)明與從K5多糖開(kāi)始得到的K5多糖衍生物有關(guān)，該K5多糖為預(yù)先N-脫乙酰的，N-硫酸化的，任選的解聚或任選至少20％C5-表異構(gòu)化的和任選解聚的，通過(guò)在適當(dāng)條件下O-過(guò)硫酸化，隨后游離胺的N-?；玫皆揔5多糖衍生物。
發(fā)明的背景糖胺聚糖，比如肝素，硫酸乙酰肝素，硫酸皮膚素，硫酸軟骨素和透明質(zhì)酸，是從各種動(dòng)物器官工業(yè)提取的生物高分子。
尤其，肝素，主要從豬的腸粘膜提取得到，或者從牛肺提取得到，是分子量分布約3000-30000的多分散共聚物，組成一個(gè)鏈混合物，基本上由糖醛酸(葡糖醛酸或艾杜糖醛酸)和通過(guò)鍵α-1→或β-1→4鏈接的氨基糖(葡糖胺)組成。在肝素中，糖醛酸單元可在2位O-硫酸化，葡糖胺單元是N-乙?；幕騈-硫酸化的，葡糖胺單元中存在約0.5％6-O-硫酸化3-O-硫酸鹽化。
Lindahl等人描述了哺乳動(dòng)物中肝素的性質(zhì)和天然生物合成1986 in Lane，D和Lindahl，U(編輯者)“肝素?；瘜W(xué)和生物性質(zhì)；臨床應(yīng)用”，Edward Arnold，倫敦，159-190頁(yè)，Lindahl，U，F(xiàn)eingold D.S和Roden L，1986 TIBS，11，221-225和Conrad H.E.“肝素粘合蛋白質(zhì)”，第二章肝素類(lèi)的結(jié)構(gòu)AcademicPress，1998。肝素的生物合成從它的N-乙?；鵫eparosan前體開(kāi)始，它由重復(fù)的葡糖醛酸基-β-1→4-N-乙酰基葡糖胺二糖單元構(gòu)成。所述前體經(jīng)酶催化修飾，部分水解N-乙?；肧O3-基團(tuán)取代它，表異構(gòu)化葡糖醛酸單元部分5位的羧基，把它們轉(zhuǎn)變成艾杜糖醛酸單元，并引入O-硫酸基團(tuán)，得到一種產(chǎn)物，該產(chǎn)物在工業(yè)提取時(shí)，每個(gè)二糖單元具有約兩倍于羧基的硫酸基團(tuán)。這些酶催化的修飾導(dǎo)致鍵接到抗凝血酶III(AT III)的五糖區(qū)的形成，稱為活性的五糖，它是肝素對(duì)AT III的高親合力結(jié)合要結(jié)構(gòu)，是肝素本身抗劑凝性和抗凝血活性的基礎(chǔ)。該五糖，僅存在于形成肝素的一些鏈的內(nèi)部，在3位上含有硫酸化的葡糖胺單元，在含艾杜糖醛酸的二糖之間隔著一個(gè)葡糖醛酸。
在自然界，活性五糖的形成，可通過(guò)葡糖醛?；?C5-表異構(gòu)酶(C5-表異構(gòu)化)，將部分葡糖醛酸單元的羧基的表異構(gòu)化反應(yīng)形成艾杜糖醛酸單元，并通過(guò)適當(dāng)?shù)牧蛩峄?，將硫酸基團(tuán)引入到葡糖胺3位羥基上而實(shí)現(xiàn)。更具體的，在自然界，活性五糖的形成，是通過(guò)這樣的事實(shí)C5-表異構(gòu)化一簇一簇地(即，在鏈的一部分上)廣泛發(fā)生，導(dǎo)致形成含艾杜糖醛酸單元比葡糖醛酸單元多的產(chǎn)物。事實(shí)上，市售肝素含約70％艾杜糖醛酸單元和30％葡糖醛酸單元。
除了主要的抗凝和抗凝血活性外，肝素還具有抗血酯的、抗增生的、抗病毒的、抗腫瘤的和抗轉(zhuǎn)移的活性，但作為藥物使用，因引起出血的抗凝副作用而受阻。
現(xiàn)有技術(shù)眾所周知，從大腸桿菌分離的莢膜K5多糖，Vann W.F.等人在EuropeanJournal of Biochemistry，1981，116，359-364(“Vann 1981”)中有所描述，由重復(fù)的二糖單元葡糖醛酸基-β-1→4-N-乙酰基葡糖胺的鏈混合物組成，顯示肝磷素N-乙?；?heparosan前體的相同重復(fù)順序(A)。
莢膜K5多糖，此后稱為“K5多糖”或更簡(jiǎn)單“K5”，由Lormeau等人在US 5550116描述的，Casu等人在Carbohydrate Research，1994，263，271-284中描述的進(jìn)行過(guò)化學(xué)修飾。具有抗腫瘤、抗轉(zhuǎn)移、尤其抗-HIV活性的K5-O-S-硫酸鹽，在EP 333243和WO 98/34958中描述。為了得到與從動(dòng)物器官提取的肝素(提取的肝素)相同類(lèi)型的、對(duì)凝血具有體外生物活性的產(chǎn)品，還對(duì)K5進(jìn)行了化學(xué)和酶促的修飾。
具有與提取的肝素相同類(lèi)型的抗凝血活性的產(chǎn)品是通過(guò)模仿自然出現(xiàn)的過(guò)程，并用D-葡糖醛酸基C5表異構(gòu)酶的C5-表異構(gòu)化的整個(gè)關(guān)鍵步驟而得到的。過(guò)程在IT 1230785，WO 92/17507，WO 96/14425和WO 97/43317中描述，用K5作為起始材料。對(duì)來(lái)源于發(fā)酵的K5進(jìn)行N-脫乙酰，接著N-硫酸化，并對(duì)這樣得到的K5-N-硫酸鹽在溶液中用C5-異構(gòu)化酶進(jìn)行C5-表異構(gòu)化，C5-異構(gòu)化酶是通過(guò)色譜法，從小鼠肥大細(xì)胞瘤的微粒體酶的溶液(IT 1230 785)或牛的肝臟的微粒體酶(WO 92/17507，WO 96/14425和WO 97/43317)得到的。
Campbell，P.等人純化了來(lái)自牛肝臟的D-葡糖醛酸基C5表異構(gòu)化酶，在J.Biol.Chem.，1994，269/43，26953-26958(“Campbell 1994”)，他們還提供了它的氨基酸組成，并描述了它在溶液中把K5-N-硫酸鹽轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的30％表異構(gòu)化產(chǎn)物，用HPLC方法，接著通過(guò)總亞硝酸解聚成二糖論證了艾杜糖醛酸的形成。
文件WO 98/48006描述了編碼D-葡糖醛酸基C5表異構(gòu)酶的DNA順序，和重組的D-葡糖醛酸基C5表異構(gòu)酶，后者是從含所述DNA的重組體表達(dá)載體得到，后來(lái)由Campbell等人純化，如Jin-Ping L.等人在J.Biol Chem.2001，276，20069-20077(“Jin-Ping 2001”)中所示。
C5表異構(gòu)酶的完整順序由Crawford B.E.等人在J.Biol.Chem.，2001，276(24)，21538-21543(Crawford 2001)中描述。文件WO 01/72848描述了制備K5多糖的N-脫乙酰的N-硫酸衍生物的方法，就總糖醛酸來(lái)說(shuō)，至少40％表異構(gòu)化的艾杜糖醛酸，分子量2000-30000，含25％-50％對(duì)ATIII高親合力的鏈，具有抗凝和抗凝血活性，表達(dá)為HCII/抗Xa比率1.5-4。所述文件描述40-60％表異構(gòu)化的K5-N-硫酸鹽的過(guò)硫酸化，并顯示得到的產(chǎn)物，其13C-NMR表明，每個(gè)二糖單元具有的硫酸基團(tuán)含量為2-3.5。在所述條件中重復(fù)所述過(guò)硫酸化，檢查13C-RMN，確定得到的產(chǎn)物事實(shí)上是游離胺，它的6-O-硫酸含量是80-95％，氨基糖上3-O-硫酸是30％，但其硫酸化度是3.2。還確定，在WO01/72848中描述的過(guò)硫酸化條件下，沒(méi)有得到大于3.2的硫酸化度。
專利申請(qǐng)MI2001/00397(WO 02/068477)，描述了K5-N，O-過(guò)硫酸化的，其硫酸化度大于3.2，從不含親脂性物質(zhì)的K5或它的分子量約5000的部分開(kāi)始，通過(guò)(a)N-脫乙?；?N-硫酸化，(b)O-過(guò)硫酸化，并任選地(c)N-再硫酸化得到。
上述文件沒(méi)有一個(gè)描述低分子量-K5-N-硫酸鹽，任選地40-60％表異構(gòu)化的，其中NH2或乙酰基團(tuán)實(shí)際上不存在。
為使了術(shù)語(yǔ)標(biāo)準(zhǔn)化，使文本更容易理解，在目前的描述中以單數(shù)或復(fù)數(shù)使用常規(guī)的術(shù)語(yǔ)或表達(dá)。尤其
-“K5”或“K5多糖”意指通過(guò)發(fā)酵得到的大腸桿菌的莢膜多糖，即，由如上所述在非還原端任選地含雙鍵的二糖單元(A)組成的鏈混合物，在任何情況下，根據(jù)文獻(xiàn)中所述的方法制備和純化，尤其，根據(jù)Vann 1981，根據(jù)Manzoni M.等人，Journal of Bioactive Compatible Polymers，1996，11，301-311(“Manzoni 1996”)或根據(jù)WO 01/72848和WO 02/068447中描述的方法；很明顯，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員，此后所示可應(yīng)用于N-乙?；鵫eparosan-“C5-表異構(gòu)酶”意指D-葡糖醛酸基C-5表異構(gòu)酶，提取的或重組的，在任何情況下制備，離析和純化，尤其，如Campbell 1994，WO 98/48006，Jin-PingL.等人在J.Biol Chem.2001，276，20069-20077或Crawford 2001中描述的；-K5-胺意指至少95％N-脫乙?；?，但是其中的乙酰基團(tuán)用目前的NMR裝置是不可檢測(cè)的；-“K5-N-硫酸”意指如下述至少95％N-脫乙酰化，并N-硫酸化的K5，其乙酰基用通常的NMR儀器是不可檢測(cè)的；-“表K5”意指K5和它的衍生物，其中20-60％的葡糖醛酸單元被C5-表異構(gòu)化為艾杜糖醛酸單元；-“表K5-N-硫酸鹽”意指20-60％的葡糖醛酸單元被C5-表異構(gòu)化為WO92/17507或WO 01/72848中所述類(lèi)型的艾杜糖醛酸單元的K5-N-硫酸鹽。
-“表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽”意指O-硫酸化的表K5-胺，硫酸化度至少為3.4-“N-?；?表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽”意指N-乙酰化的表K5-胺O-過(guò)硫酸鹽，其硫酸化度至少為3.4；-“K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽”意指O-硫酸化的K5-胺，其硫酸化度至少為2.2；-“N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽”意指N-酰化的N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，其硫酸化度至少為2.2；另外-上面定義的常規(guī)術(shù)語(yǔ)和表達(dá)，把K5稱作為發(fā)酵后離析的，一般分子量分布在約1500-50000，平均分子量10000-25000，優(yōu)選15000-25000；-除了分子量特殊的指定，這里定義的常規(guī)術(shù)語(yǔ)和表達(dá)，在用取首縮寫(xiě)“低分子量”(低分子量)時(shí)，例如低分子量-K5-N-硫酸鹽時(shí)，低分子量-表K5-N-硫酸鹽表示低分子量產(chǎn)物，具有平均分子量最高為12000；-“衍生物”整體上表示來(lái)自天然K5的衍生物和低分子量衍生物；
-前綴“表”，在常規(guī)術(shù)語(yǔ)和表達(dá)中如這里定義的在“K5”的前面，整體上表示來(lái)自天然K5的產(chǎn)物和如上定義20-60％表異構(gòu)化產(chǎn)物，即全由葡糖醛酸組成的鏈混合物，或葡糖醛酸和20-60％艾杜糖醛酸組成的鏈混合物，用符號(hào)“ζ”在分子式中表示。
-術(shù)語(yǔ)“約”涉及分子量時(shí)意指用粘度計(jì)，根據(jù)Johnson等人Carb.es.1976，51，119-127，用通過(guò)HPLC計(jì)算的分子量的樣品作為標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)量的分子量[±二糖單元的理論重量，包括鈉的重量，在(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物的情況下計(jì)算為461]，；-表述“優(yōu)勢(shì)體種類(lèi)”意指化合物，其在含低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽、低分子量-(表)K5-胺-過(guò)硫酸鹽或在低分子量-N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽組成的混合物中，是最有代表性的類(lèi)型，由HPLC測(cè)量分子量曲線的峰值確定；-除非另行特別說(shuō)明，“硫酸化度”意指SO3-/COO-的比，也可表示每個(gè)二糖單元的硫酸鹽數(shù)目，用Casu B.等人在Carbohydrate Research，1975，39，168-176(Casu 1975)中描述的電導(dǎo)方法測(cè)量，它們也用于WO 01/72848中。
-“O-過(guò)硫酸化的條件”意指進(jìn)行的極端的O-硫酸化，例如，根據(jù)Casu B.等人在Carbohydrate Research，1994，163，271-284(Casu 1994)中描述的方法進(jìn)行；-術(shù)語(yǔ)“烷基”意指線形或分支的烷基，但術(shù)語(yǔ)“四丁基銨”表示四-正丁基銨。
發(fā)明概述現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)從表K5-N-硫酸鹽開(kāi)始，可得到比文獻(xiàn)(例如在WO 01/72848)中描述的其它表K5-胺-O-硫酸鹽具更高硫酸化度的表K5-胺-O-硫酸鹽，用所述表K5-N-硫酸鹽衍生物的叔或季有機(jī)堿制備該鹽，注意讓反應(yīng)混合物靜置30-60分鐘，用相同的有機(jī)堿保持pH在約7，然后在O-過(guò)硫酸化的條件下，用O-硫酸化試劑處理得到的鹽。而且，低分子量-表K5-胺-N-硫酸鹽，在經(jīng)過(guò)相同的成鹽和O-過(guò)硫酸化的方法時(shí)，得到具有極高硫酸化度的低分子量-表K5-胺-O-硫酸鹽。在這種表K5-胺-過(guò)硫酸鹽-衍生物的情況下，硫酸化度大于3.2。
類(lèi)似地發(fā)現(xiàn)，將上面所述O-過(guò)硫酸化條件應(yīng)用于低分子量-K5-N-硫酸鹽，可得到高硫酸度的低分子量-K5-胺-O-硫酸鹽。而且，低分子量-K5-N-硫酸鹽，在以同樣方法進(jìn)行鹽化和O-過(guò)硫酸化時(shí)，給出高硫酸化度的K5-胺-O-硫酸鹽。在這種K5-胺-過(guò)硫酸鹽-衍生物的情況下，硫酸化度大于2.2。事實(shí)上，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，在上述條件下制備(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物的四叔丁基銨鹽，成鹽化變得完全，在隨后的O-過(guò)硫酸化中，有利于硫酸基團(tuán)從葡糖按的氮原子，完全取代為葡糖胺本身的氧原子，尤其是在3位的氧原子，由此產(chǎn)生高2位硫酸化度的、其中NH2基團(tuán)完全游離的(表)K5-胺-O-硫酸鹽-衍生物。衍生物表K5和K5硫酸化度的定量差別，取決于它們的有利于表異構(gòu)化衍生物的硫酸化的構(gòu)型。
還發(fā)現(xiàn)，使這樣得到的(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物N-?；玫降男翹-?；?(表)K5-胺-O-硫酸鹽-衍生物對(duì)凝血無(wú)活性，對(duì)藥物和化妝品組合物的制備是有用的。用這新的和通用的方法，以可重復(fù)的方式，制備表K5-O-硫酸鹽-衍生物、它們的N-酰基類(lèi)似物、具有精確硫酸化度的K5-O-硫酸鹽，總之，它的低分子量衍生物及其N(xiāo)-?；?類(lèi)似物是可能的。
圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1顯示硫酸/羧基比2.87的K5-NH2O-硫酸鹽的NMR質(zhì)子譜(根據(jù)實(shí)施例1得到)；圖2顯示硫酸/羧基比4.26的表K5-N-乙酰化物，O-硫酸鹽的NMR質(zhì)子譜(根據(jù)實(shí)施例2得到)；圖3顯示硫酸/羧基比2.87的K5-N-乙酰物，O-硫酸鹽的NMR質(zhì)子譜(根據(jù)通常，N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物是以鈉鹽的形式離析，所述鈉鹽任選轉(zhuǎn)化成另一個(gè)化學(xué)或制制藥學(xué)上可接受的鹽。
在這文本中，術(shù)語(yǔ)“化學(xué)上可接受的”指化學(xué)合成中有用的陽(yáng)離子，如離子鈉，銨，(C1-C4)四烷基銨，或者，用于產(chǎn)品純化，然而，“制藥學(xué)上可接受的”是不需加以說(shuō)明的。
有利的陽(yáng)離子衍生自堿金屬，堿土金屬，銨，(C1-C4)四烷基銨，鋁，和鋅。優(yōu)選的陽(yáng)離子是鈉、鈣和四丁基銨離子。
根據(jù)優(yōu)選的程序，步驟(a)是將(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物鈉鹽即K5多糖鈉鹽的溶液，(該衍生物是先前N-脫乙酰化的，N-硫酸鹽化優(yōu)選100％，優(yōu)選20-60％C5表異構(gòu)化和用亞硝酸任選解聚，具有平均分子量約1000-25000，優(yōu)選約1500-25000)，通過(guò)酸離子交換樹(shù)脂，例如IR-120H+型，收集包括樹(shù)脂洗滌水的洗出液，用叔或季有機(jī)堿，優(yōu)選用氫氧化四丁基銨的水溶液中和洗出液。讓溶液靜置1小時(shí)，通過(guò)加入相同的叔或季有機(jī)堿，保持其pH在約7(即，試圖保持中性)，通過(guò)冷凍干燥回收得到的鹽。
在步驟(b)中，用過(guò)量的O-硫酸化試劑，在溫度20-70℃，在質(zhì)子惰性的極性溶劑中處理24小時(shí)，進(jìn)行O-過(guò)硫酸化。
有利地，按將步驟(a)離析的(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物即K5多糖，先前N-脫乙酰化的，N-硫酸化的，優(yōu)先100％，任選20-60％C5-表異構(gòu)化的，用亞硝酸任選解聚，具有平均分子量約1500-25000的叔或季有機(jī)堿鹽，溶解在二甲基甲酰胺中，按每個(gè)游離的羥基用2-10摩爾的O-硫酸化試劑，在溫度40-60℃處理10-20小時(shí)。作為O-硫酸化試劑，以2.5-5摩爾游離羥基/二糖的量使用吡啶。SO3加合物，優(yōu)選2.5-4摩爾/游離羥基/二糖，反應(yīng)在50-60℃進(jìn)行，優(yōu)選在55℃過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束得到的產(chǎn)物，通過(guò)加入0.1-1體積的水并中和(優(yōu)選用氫氧化鈉)，用在丙酮中的飽和氯化鈉溶液沉淀，過(guò)濾和可能的超濾而離析。
這樣得到的產(chǎn)物通常是(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物的鈉鹽，具有如上所示葡糖醛酸和艾杜糖醛酸含量。當(dāng)在叔或季堿的鹽上優(yōu)選在表K5-N-硫酸鹽-衍生物的四丁基銨鹽上，它具有平均分子量約1000-25000，優(yōu)選約1500-25000，其中艾杜糖醛酸是總糖醛酸的20-60％，進(jìn)行過(guò)硫酸化反應(yīng)時(shí)，得到表-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，具有平均分子量約3500-40000，優(yōu)選約4500-40000，硫酸化度至少為3.4，有利地至少為3.5，更有利為3.55-4，優(yōu)選3.55-3.8。當(dāng)過(guò)硫酸化反應(yīng)是在K5-N-硫酸衍生物的叔或季堿鹽(優(yōu)選四丁基銨鹽)(其平均分子量約為1500～25000)上進(jìn)行時(shí)，得到的K5-胺-O-過(guò)硫酸衍生物的平均分子量為3500-40000，優(yōu)選4500-40000，硫酸化度為至少2.2-3或2.3-3，更有利地2.5-3，優(yōu)選2.7-2.9。這樣得到的產(chǎn)物來(lái)自低分子量K5-N-硫酸鹽，優(yōu)選低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸化的鈉鹽，具有硫酸化度2.3-3。這產(chǎn)物的平均分子量約3500-11000。
這樣得到的鈉鹽可轉(zhuǎn)化成另一個(gè)鹽。舉例的方法，可用超濾膜，進(jìn)行鈣離子交換工作。在步驟(c)中，用文獻(xiàn)中已知的方法，對(duì)具高硫酸化度的(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物進(jìn)行N-?；?。
使步驟(b)中產(chǎn)生的(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，與含2-4個(gè)碳原子的單或二羧酸的官能衍生物，在溫度約4℃水醇溶液中反應(yīng)進(jìn)行N-?；?。作為所述(C2-C4)羧酸的官能衍生物，優(yōu)選乙酸，丙酸，丙二酸，或丁二酸或它們的單酯，尤其甲基的或乙基的酯，可使用酸酐，氯化物，混合酸酐或活性酯。得到的產(chǎn)物，N-(C2-C4)酰基-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，用堿中和，優(yōu)選用氫氧化鈉，然后，通過(guò)超濾和用丙酮中的飽和氯化鈉溶液沉淀離析。N-?；牟襟E任選重復(fù)直至得到完全取代或大于95％取代。這樣得到的是N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，尤其是N-乙?；?，N-(2-羧基)乙?；?，N-(2-甲氧基羰基)乙?；?，N-(2-乙氧基羰基)乙?；?，N-丙酰基-，N-(3-羧基)丙酰基-，N-(3-甲氧基羰基)丙酰基-，N-(3-乙氧基羰基)丙?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽。
這樣得到的新N-酰基-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，一般為它們的鈉鹽形式。所述鈉鹽可轉(zhuǎn)化成另一個(gè)化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的鹽。特別有利的鹽是堿金屬，堿土金屬，銨，(C1-C4)四烷基銨，鋁和鋅的鹽。優(yōu)選鈉，鈣和四丁基銨的鹽。
不像WO 98/34958中描述的方法，其中K5鈉鹽在非均相中硫酸化，得到K5-O-硫酸鹽(根據(jù)這里使用的術(shù)語(yǔ)是“N-乙酰基-K5-胺-O-硫酸鹽”)，硫酸化度為0.5-4，它必需采用氯磺酸，以未控制的方式得到低分子量衍生物，本發(fā)明的方法是極其通用的。事實(shí)上，它使每種類(lèi)型的N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，以非常高的收率，用容易控制的反應(yīng)制備。尤其，本發(fā)明方法可制備用別的方法不可得到的N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，如表異構(gòu)化的C-5衍生物，具有與來(lái)自天然K5中存在的乙酰基不同的?；腘-?；难苌铮偷头肿恿康难苌?。除此之外，不像WO 98/34958中所述的方法，本發(fā)明的方法允許低分子量-K5-O-硫酸鹽以控制的方式得到，以便得到要求的平均分子量，總之，確定的硫酸化度可在2.3-3的范圍，但是，通常在2.7-2.9。最后，本發(fā)明方法的所有產(chǎn)物，尤其，游離中間體胺和N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，是藥物和化妝品組合物的有用活性成分。
步驟(a)的起始材料是文獻(xiàn)中已知的(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物或它們的-部分，或相應(yīng)(表)K5-硫酸鹽的亞硝酸解聚制備的低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽。
起始(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物具有平均分子量約1000-25000，優(yōu)選約1500-25000。作為起始材料優(yōu)選使用具有平均分子量10000-25000的(表)K5-N-硫酸鹽，或具有平均分子量約1500-12000，優(yōu)選約1500-8000，更優(yōu)選約1500-7500的低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽。
具艾杜糖醛酸單元含量約20％的低分子量表K-N-硫酸鹽，通過(guò)具平均分子量5000的K5部分的N-脫乙?；?，N-硫酸化和C5-表異構(gòu)化得到，在WO 92/17507中描述，但是這產(chǎn)物含有高百分率的乙?；鶊F(tuán)。
特別有利作為起始材料的表K5-N-硫酸鹽，是從特別純的K5實(shí)際上不含乙?；腒5-N-硫酸鹽的表異構(gòu)化得到，尤其不含親脂物質(zhì)制備的，在WO02/068477中描述。
具有較高艾杜糖醛酸單元含量(尤其40-60％，優(yōu)選50-55％)的低分子量C5-表異構(gòu)化的K5-N-硫酸鹽，是特別有利的新產(chǎn)品，在制備本發(fā)明的N-取代的表K5-胺-O-過(guò)硫酸化的-衍生物中作為起始材料。
低分子量-表K5-N-硫酸鹽也可由相應(yīng)低分子量-表K5-N-硫酸鹽的C5-表異構(gòu)化得到，優(yōu)選在它們的平均分子量大于4000時(shí)。實(shí)際上不含乙酰基團(tuán)的低分子量-K5-N-硫酸鹽，是通過(guò)不含乙?；鶊F(tuán)的K5-N-硫酸鹽的分級(jí)或，優(yōu)選通過(guò)解聚而制備的所有新產(chǎn)物。K5-N-硫酸鹽在文獻(xiàn)中是眾所周知的，并在上面提到的文件中描述，闡述工藝的狀況。前面所述的起始材料不可變的由K5的N-脫乙?；?，隨后這樣得到的K5-胺的N-硫酸化得到。但是，可以確定如果要制備它的K5特別純，尤其，如果它不含親脂物質(zhì)，則對(duì)實(shí)際上不含乙?；騈H2基團(tuán)的K5-N-硫酸鹽的制備是有幫助的，。所以，根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選使用從純化的K5制備的起始K5-N-硫酸鹽，如WO 02/068477中描述的。所述K5-N-硫酸鹽，它的13C-NMR光譜不顯示痕量的N-乙?；騈H2基團(tuán)，也在WO 02/068477中描述。
如上所示的新低分子量-表K5-N-硫酸鹽，由這樣的方法制備，它的特征為K5-N-硫酸鹽經(jīng)(以任何一個(gè)次序)(1)用離析的、純化的和在溶液中的或固定在固體支撐物上的D-葡糖醛酸基C5-表異構(gòu)酶，在pH約7，溫度約30℃，進(jìn)行C5-表異構(gòu)化，時(shí)間12-24小時(shí)，在至少一種兩價(jià)離子的存在下，它們選自鈣，鎂，鋇，錳；(2)任選亞硝酸解聚，接著還原，通常用硼氫化鈉。
表述“以任何次序”顯示方法可以(1)-(2)的方向進(jìn)行，即，以上面所述方向，也可以(2)-(1)，以相反方向進(jìn)行，使K5-N-硫酸鹽首先進(jìn)行亞硝酸解聚反應(yīng)，接著進(jìn)行硼氫化鈉還原反應(yīng)，此后在前述條件下進(jìn)行C-表異構(gòu)化。優(yōu)選的次序是以方向(1)-(2)。次序(2)-(1)優(yōu)選用平均分子量大于4000的低分子量-K5-N-硫酸鹽開(kāi)始，更優(yōu)選約6000。例如，可以確定以1克表K5-N-硫酸鹽開(kāi)始的亞硝酸鈉的量，得到分子量大于4000的低分子量-表K5-N-硫酸鹽，尤其，至少6000，以便得到制備低分子量表K5-N，O-過(guò)硫酸鹽的有用中間體。事實(shí)上，在這情況下，在步驟(2)中，得到最佳表異構(gòu)化的百分率。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方面，C5-表異構(gòu)酶固定在惰性的固體支撐物上。
根據(jù)Campbell 1994，WO 98/48006，Jin-Ping 2001或Crawford 2001離析和純化的C5-表異構(gòu)酶，優(yōu)選重組體，在底物的存在下固定在惰性支撐物上，即在起始的K5-N-硫酸鹽-衍生物的存在下，或在低分子量-K5-N-硫酸鹽的存在下，有利的具有平均分子量大于4000，優(yōu)選至少6000。固定根據(jù)傳統(tǒng)的方法進(jìn)行，例如，按WO 01/72848中描述。
循環(huán)20-1000毫升25Mm HEPES的pH約7、含0.001-10克底物(K5-N-硫酸鹽或低分子量-K5-N-硫酸鹽，優(yōu)選分子量大于4000，尤其至少6000)的溶液，進(jìn)行C5-表異構(gòu)化反應(yīng)，陽(yáng)離子選自鈣，鎂，鋇和錳，濃度在10-60mM，通過(guò)含1.2×107--3×1011cpm固定酶的柱，在約30℃保持pH約7，以30-220毫升/小時(shí)的流動(dòng)保持12-24小時(shí)，最好15-24小時(shí)。
所述溶液優(yōu)選在約200毫升/小時(shí)的流動(dòng)，循環(huán)過(guò)夜(15-20小時(shí))。得到產(chǎn)物根據(jù)已知方法純化和分離，例如，通過(guò)超濾和用乙醇沉淀。這樣得到產(chǎn)物包括表K5-N-硫酸鹽(在這種情況下溶解在水中并進(jìn)行解聚)或低分子量-表K5-N-硫酸鹽(在這種情況下它組成最終產(chǎn)物)。表異構(gòu)化的百分率，實(shí)際上是艾杜糖醛酸單元對(duì)葡糖醛酸單元的量，根據(jù)WO 96/4425中所述方法，用1H-RMN計(jì)算。
根據(jù)已知的方法，通過(guò)肝素的解聚，進(jìn)行亞硝酸解聚反應(yīng)，例如根據(jù)EP37319，WO 82/03627中描述的方法，或EP 544592中描述的K5-N-硫酸鹽解聚的方法，但從K5-N-硫酸鹽開(kāi)始或含0到小于10％、優(yōu)選小于5％乙?；鶊F(tuán)的表K5-N-硫酸鹽開(kāi)始。優(yōu)選用亞硝酸鈉和鹽酸，對(duì)實(shí)際上不含乙酰基團(tuán)的表K5-N-硫酸鹽上進(jìn)行解聚，接著在原地用硼氫化鈉還原。
實(shí)際上，用鹽酸將表K5-N-硫酸鹽冷的含水溶液調(diào)至酸性的pH(約2)，仍舊冷的，用保持在溫度(約4℃)和pH(約2)恒定的亞硝酸鈉處理，在解聚終止時(shí)(約15-30分鐘)，用氫氧化鈉中和，仍舊在約4℃，用硼氫化鈉水溶液處理。還原反應(yīng)終止時(shí)(約4小時(shí))，過(guò)量的硼氫化鈉用鹽酸破壞，溶液用氫氧化鈉中和，解聚(和還原)的產(chǎn)物根據(jù)已知的方法離析，例如用乙醇或丙酮直接沉淀。解聚終止時(shí)得到的產(chǎn)物，可以是低分子量-表K5-N-硫酸鹽(在這情況下，它組成最終產(chǎn)物)或低分子量-K5-N-硫酸鹽(在這情況下，如上面所示，直接進(jìn)行C5-表異構(gòu)化，離析后或仍在溶液中沒(méi)有前面的離析)，尤其，在它具有平均分子量大于4000時(shí)，優(yōu)選至少6000時(shí)，或用于制備具有抗血管形成或抗病毒活性的低分子量-K5-N，O-過(guò)硫酸化時(shí)。通過(guò)適當(dāng)控制解聚反應(yīng)，尤其用不同量的亞硝酸鈉/鹽酸，得到的低分子量-K5-N-硫酸鹽或低分子量-表K5-N-硫酸鹽具有平均分子量完全在約1500-12000的間隔中，優(yōu)選約1500-10000，更優(yōu)選約1500-7500，通過(guò)歸因于2，5-脫水甘露糖醇的C2信號(hào)和多糖鏈內(nèi)葡糖胺的異頭碳信號(hào)的積分，用13C-RMN譜計(jì)算。
根據(jù)以1克K5-N-硫酸鹽或表K5-N-硫酸鹽起始的一般程序，起始產(chǎn)物溶解在100-200毫升去離子水中，并在4℃恒溫。然后加入一定量的亞硝酸鈉，以便得到要求的平均分子量，例如約2000-4000。所以，以具有分子量20000(用HPLC方法測(cè)量的，裝備有BioRad BioSil 250柱和使用已知分子量的肝素標(biāo)準(zhǔn))的表K5-N-硫酸鹽開(kāi)始，需要加入溶解在0.2％水溶液中的300-480毫克亞硝酸鈉。含表K5-N-硫酸鹽和亞硝酸鈉的溶液，保持在4℃，通過(guò)加入0.1N冷卻到4℃的HC1，使pH為2。在緩慢攪拌下反應(yīng)20-40分鐘，然后用0.1N氫氧化鈉中和。得到的產(chǎn)物升至室溫，用還原試劑，如硼氫化鈉(250-500毫克溶解在50-100毫升的水中)處理，反應(yīng)4-8小時(shí)。用0.1N鹽酸調(diào)節(jié)pH為5-5.5，靜置2-4小時(shí)去除過(guò)量的硼氫化鈉，。最后，用0.1N氫氧化鈉中和，減壓蒸發(fā)濃縮產(chǎn)物，通過(guò)用丙酮或乙醇沉淀，回收產(chǎn)物。
類(lèi)似地，可確定亞硝酸鈉的量，它以1克K5-N-硫酸鹽或表K5-N-硫酸鹽開(kāi)始，得到平均分子量約4000-7500，尤其6000-7500的低分子量-K5-N-硫酸鹽或低分子量-表K5-N-硫酸鹽。
這樣得到的低分子量-K5-N-硫酸鹽，其艾杜糖醛酸含量為20-60％，優(yōu)選40-60％，更優(yōu)選50-55％，實(shí)際上不含NH2和N-乙?；鶊F(tuán)，具有平均分子量約1500-10000，優(yōu)選1500-7500，它們的化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受鹽，組成作為制備特別令人感興趣低分子量-表K5-N，O-過(guò)硫酸鹽中起始材料的有用新產(chǎn)物，而且，它們本身用為藥學(xué)或化妝品組合物的活性成分，組成本發(fā)明的又一部分。
制備本發(fā)明N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物的起始材料優(yōu)選是(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物，它由至少90％分子式I鏈的鏈混合物組成， 其中，葡糖醛酸單元/艾杜糖醛酸單元的比，從100/0到40/60，n是2-100的整數(shù)，優(yōu)選3-100，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
尤其，所述起始的(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物由鏈混合物組成，其中至少90％的所述鏈具有上述分子式I，葡糖醛酸單元含量100-40％，優(yōu)選葡糖醛酸含量100％，或者80-40％葡糖醛酸和20-60％艾杜糖醛酸，n是2-100的整數(shù)，優(yōu)選3-100，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上可接受的。優(yōu)選地，葡糖醛酸含量是100％，或者，來(lái)自總糖醛酸的40-60％是葡糖醛酸，60-40％是艾杜糖醛酸。
優(yōu)選的起始材料是鏈混合物組成的低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽，其中至少90％所述鏈具有分子式I，糖醛酸單元全由葡糖醛酸組成，或包括40-60％，優(yōu)選50-55％的艾杜糖醛酸，n是2-20的整數(shù)，優(yōu)選3-15，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)可接受的。表K5-N-硫酸鹽，由K5-N-硫酸鹽的C5-表異構(gòu)化制備，是眾所周知的，在文獻(xiàn)中廣泛描述。它們通過(guò)用D-葡糖醛酸基C5-表異構(gòu)酶，K5-N-硫酸鹽的葡糖醛酸單元的C5-表異構(gòu)化制備，在這里引用的文件中描述，闡述工藝的狀況，例如在WO 92/17507，WO 98/14425，WO 97/43317，WO 01/72848和US 2002/62019中。然而，根據(jù)優(yōu)選程序的方式，通過(guò)表異構(gòu)化，K5-N-硫酸鹽用于從不含親脂性物質(zhì)的K5得到，如WO 02/068477中描述的，C5表異構(gòu)化是用離析，純化和固定化在固體支撐物上D-葡糖醛酸基C5-表異構(gòu)酶進(jìn)行，pH約7，溫度約30℃，在至少一種兩價(jià)離子的存在下進(jìn)行12-24小時(shí)，離子選自鈣，鎂，鋇和錳，如上面所示。而且K5-N-硫酸鹽如上面所示。
低分子量的完全N-硫酸化的(表)K5-N-硫酸鹽，尤其是那些糖醛酸單元全是以葡糖醛酸和那些具有艾杜糖醛酸單元含量40-60％，優(yōu)選50-55％的硫酸鹽，全是特別有利的新產(chǎn)品，作為制備本發(fā)明的N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物的起始材料。所述起始材料，是具有艾杜糖醛酸含量為0％或就總糖醛酸而言40-60％的低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽，平均分子量約1500-12000，優(yōu)選約1500-7500，它們是化學(xué)上和制藥學(xué)上可接受的鹽。分布可在約1000-10000的范圍。
所述低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽優(yōu)選由鏈混合物組成，其中至少90％的所述鏈，具有分子式I’ 其中，糖醛酸單元是100％葡糖醛酸組成，或者，60-40％葡糖醛酸和40-60％艾杜糖醛酸，q是2-20的整數(shù)，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
在這文本中，術(shù)語(yǔ)“化學(xué)上”涉及化學(xué)合成中可使用的陽(yáng)離子，如離子鈉，銨，(C1-C4)四烷基銨，或用于產(chǎn)物的純化。
有利的陽(yáng)離子是衍生自堿金屬，堿土金屬，銨，(C1-C4)四烷基銨，鋁和鋅的鹽。優(yōu)選的陽(yáng)離子是鈉，鈣和四丁基銨離子。
優(yōu)選的起始材料是鏈混合物組成的新低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽，其中優(yōu)勢(shì)體具有分子式I’a 其中，糖醛酸單元是100％葡糖醛酸組成，或者，60-40％葡糖醛酸和40-60％艾杜糖醛酸，p是4-8的整數(shù)。這些產(chǎn)物的平均分子量約2000-4000，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
尤其，新的低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽是有用的起始材料，它們由鏈混合物組成，其中至少90％所述鏈具有分子式I’，通過(guò)上面所示相應(yīng)(表)K5-N-硫酸鹽的亞硝酸解聚得到，隨后用硼氫化鈉還原。
這些源自亞硝酸解聚步驟的(表)K5-N-硫酸鹽，在所述鏈混合物中鏈的還原端的大部分，存在2，5-脫水甘露糖單元，或在用硼氫化鈉還原的情況下，存在結(jié)構(gòu)(a)的2，5-脫水甘露糖醇 其中X代表甲?；鶊F(tuán)或羥甲基基團(tuán)。所以，鏈的還原端的大部分(60-70％)實(shí)際上由結(jié)構(gòu)(b)表示 其中X如上面定義的。
結(jié)構(gòu)(a)的存在，對(duì)(表)K5-N-硫酸鹽及其衍生物的化學(xué)特性沒(méi)有任何影響，因?yàn)榱蛩峄ㄒ粋€(gè)或兩個(gè)硫酸鹽基團(tuán)的可能引入，它們不明顯的改變O-硫酸化衍生物的硫酸化度。另外，結(jié)構(gòu)(a)的存在不影響產(chǎn)物的生物活性，如stergaard P.B.等人在Thrombosis Research，1987，45，739-749(stergaard 1987)中對(duì)低分子量肝素所闡述的。
本發(fā)明特別有利的低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽由鏈混合物組成，混合物中優(yōu)勢(shì)體是分子式I’b的化合物 其中X是甲?；蛄u甲基，m是4，5或6，相應(yīng)的陽(yáng)離子是一個(gè)化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子，糖醛酸單元全是葡糖醛酸或葡糖醛酸和艾杜糖醛酸單元交替地存在，以葡糖醛酸或艾杜糖醛酸單元開(kāi)始。在這種情況下，葡糖醛酸/艾杜糖醛酸的比從45/55到55/45，即約50/50。
上面所示的所有低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽，是構(gòu)成本發(fā)明另一目標(biāo)的新產(chǎn)品。
低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽，即上面所示的低分子量-K5-N-硫酸鹽，不像其他表K5-N-硫酸鹽，例如WO 92/17507中表示的，還有本發(fā)明的低分子量-表K5-N-硫酸鹽，實(shí)際上不含N-乙?；鶊F(tuán)，不具有抗凝固活性，具有抗自由基的令人感興趣的活性。由于它們的低毒性，新的低分子量-K5-N-硫酸鹽和低分子量-表K5-N-硫酸鹽，是制備藥學(xué)組合物的活性成分，它們可用作局部出血心臟病治療或光化性皮炎治療的輔助藥物，或在化妝品中用作皮膚抗老化劑。
在上面所示低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽用作O-過(guò)硫酸化反應(yīng)的起始材料時(shí)，在任何優(yōu)選的情況下，在如上所述的亞硝酸解聚制備中，所述解聚后用硼氫化鈉還原，得到以終端單元(a)為特征的低分子量-K5-N-硫酸鹽，其中X是羥甲基，因?yàn)楦鶕?jù)本發(fā)明的方法，所述低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽經(jīng)硫酸化和酰化反應(yīng)，它的影響，結(jié)構(gòu)(a)的2，5-脫水甘露糖基團(tuán)，在甲?；鶊F(tuán)上是未知的，其中X表示甲酰。所述起始材料優(yōu)選以鈉鹽的形式使用，除非已有按照上述步驟(a)制備的叔或季有機(jī)堿，優(yōu)選四丁基銨鹽。
根據(jù)本發(fā)明，起始的(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物，優(yōu)選100％N-硫酸化的，經(jīng)上面所述步驟(a)和(b)，終止時(shí)離析相應(yīng)的新(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其中胺是不取代的，通常以鈉鹽的形式，它可轉(zhuǎn)化成化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的鹽。
因此，根據(jù)它的另一方面，本發(fā)明涉及新的(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物和它們的化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的鹽，可從特性如下的方法得到(a)(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物，以酸的形式，用叔或季有機(jī)堿處理，讓反應(yīng)混合物靜置30-60分鐘，通過(guò)加入所述叔或季有機(jī)堿，保持溶液的pH值約7，它的鹽用所述有機(jī)堿離析；(b)所述(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物的有機(jī)堿的鹽，在O-過(guò)硫酸化的條件下，用O-硫酸化試劑處理，離析(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物。
這樣得到的衍生物通常是平均分子量約4500-40000的(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，以鈉鹽的形式離析，它可轉(zhuǎn)化成另一個(gè)化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的鹽。特別有利的鹽是堿金屬，堿土金屬，銨，(C1-C4)四烷基銨，鋁和鋅的鹽，它們中間，優(yōu)選鈉、鈣和四丁基銨的鹽。
如上面所示，由于K5-N-硫酸鹽-衍生物的二糖鏈中的體積，如上面得到的(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物的硫酸化度，取決于起始的(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物的構(gòu)型，其中，糖醛酸單元單獨(dú)由葡糖醛酸組成，使過(guò)硫酸化比用(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物發(fā)生的少，尤其，如果后者的表異構(gòu)化程度是40-60％的葡糖醛酸和60-40％艾杜糖醛酸。
事實(shí)上，可以確定，K5-N-硫酸鹽-衍生物經(jīng)上述步驟(a)和(b)，得到硫酸化度2.2-3的K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，優(yōu)選2.5-3，更優(yōu)選2.7-2.9。
表K5-N-硫酸鹽-衍生物經(jīng)上述步驟(a)和(b)，其中艾杜糖醛酸含量是總糖醛酸的20-60％，優(yōu)選40-60％，得到表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，具有硫酸化度至少為3.4，優(yōu)選至少3.5，更優(yōu)選3.55-4，最優(yōu)選3.55-3.8。
這些(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物在制備它們的N-(C1-C4)?；苌镏?，是作為中間體的有用的產(chǎn)品，作為基本上對(duì)凝固參數(shù)無(wú)活性的、但具有其他令人感興趣的藥理生物性質(zhì)的活性成分，是制備藥物組合物有用的。
對(duì)于本發(fā)明的(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物用作藥物組合物的活性成分，它有利于制備低分子量衍生物，平均分子量約3000-11500，優(yōu)選4500-8500，分子量分布在約2000和10000之間，以及制備高分子量衍生物，從未分級(jí)的K5開(kāi)始，平均分子量約15000-45000，優(yōu)選在約20000和45000之間，分子量分布從2000-70000。
因此，根據(jù)本它的另一方面，發(fā)明提供新的、由(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物組成的、藥物組合物的活性成分，衍生物由至少90％具分子式II鏈的鏈混合物組成 其中，n是2-100的整數(shù)，優(yōu)選3-100，R，R’，R”是氫或SO3-，糖醛酸單元全部是葡糖醛酸，硫酸化度至少為2.2，優(yōu)選2.2-3，或者從2.3-3，更優(yōu)選從2.5-3，最優(yōu)選2.7-2.9，或者20-60％由艾杜糖醛酸組成，硫酸化度至少為3.4，優(yōu)選至少3.5，更優(yōu)選3.55-4，最優(yōu)選3.55-3.8，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
有利的、極其高硫酸化度的(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，由至少90％具分子式II鏈的鏈混合物組成，其中糖醛酸單元由40-60％艾杜糖醛酸組成，n是2-100的整數(shù)，優(yōu)選3-100，平均分子量約2000-40000，優(yōu)選約4500-40000，R至少是40％，優(yōu)選50-80％SO3-，R’和R”都是SO3-，或者一個(gè)是氫，另一個(gè)是葡糖醛酸單硫酸鹽中的5-10％SO3-和艾杜糖醛酸單硫酸鹽中的10-15％SO3-，硫酸化度大于3.4，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
非常高硫酸化度的優(yōu)選(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，是低分子量-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，由至少90％具分子式II’鏈的鏈混合物組成 其中q是2-20的整數(shù)，R，R’，R”是氫或SO3-，糖醛酸單元由20-60％，優(yōu)選40-60％的艾杜糖醛酸組成，硫酸化度為3.55-4，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
特別令人感興趣的是II’的鏈混合物，其中糖醛酸單元由40-60％，優(yōu)選50-55％艾杜糖醛酸組成，R是至少40％，優(yōu)選50-80％，更優(yōu)選約65％的SO3-組成，R’和R”都是SO3-，或者一個(gè)是氫，另一個(gè)是葡糖醛酸中的5-10％SO3-和艾杜糖醛酸中的10-15％SO3-，n是3-15的整數(shù)，平均分子量約4000-8000，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
這些低分子量-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物中，優(yōu)選分子式II’a優(yōu)勢(shì)體的鏈混合物組成的那些衍生物 其中p是4-8的整數(shù)，R，R’，R”如上面定義的，硫酸化度為3.55-4，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
源自低分子量-表K5-N-硫酸鹽的新低分子量-表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，通過(guò)亞硝酸解聚和隨后的還原得到，例如用硼氫化鈉，包括所述鏈混合物中鏈主體的還原端，結(jié)構(gòu)(a’)的硫酸化的2，5-脫水甘露糖醇單元的存在 其中R”代表氫或SO3-。
因此，所述鏈混合物中鏈主體的還原端，由結(jié)構(gòu)(b’)表示
其中糖醛酸單元可以是葡糖醛酸的或艾杜糖醛酸的。
上述新低分子量-表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，優(yōu)選由這樣的混合物組成，其中優(yōu)勢(shì)體是分子式IIb’化合物 其中R，R’和R”是氫或SO3-，X”是OH或OSO3-，m是4，5或6，糖醛酸單元由40-60％艾杜糖醛酸組成，硫酸化度3.55-4，艾杜糖醛酸單元交替出現(xiàn)，以葡糖醛酸或艾杜糖醛酸單元開(kāi)始，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
根據(jù)它的另一方面，發(fā)明提供新的K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，它由至少90％分子式III鏈的鏈混合物組成 其中，n是2-100的整數(shù)，優(yōu)選3-100，R，R’，R”是氫或SO3-，硫酸化度至少為2.2，優(yōu)選2.2-3，更優(yōu)選從2.5-3，最優(yōu)選2.7-2.9，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
優(yōu)選的K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽是低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，它由至少90％分子式III’鏈的鏈混合物組成 其中q是2-20的整數(shù)，R，R’，R”代表氫或SO3-，硫酸化度至少為2.2，優(yōu)選2.2-3，更優(yōu)選從2.5-3，最優(yōu)選2.7-2.9，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
這些低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽中，優(yōu)選分子式III’a優(yōu)勢(shì)體的鏈混合物組成的那些衍生物 其中p是4-8的整數(shù)，R，R’，R”如上面定義的，硫酸化度至少為2.2，優(yōu)選2.2-3或2.3-3，更優(yōu)選從2.5-3，最優(yōu)選2.7-2.9，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
源自低分子量-K5-N-硫酸鹽的新低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，通過(guò)亞硝酸解聚和隨后的還原得到，例如用硼氫化鈉，包括所述鏈混合物中鏈主體的還原端，如上所示結(jié)構(gòu)(a’)的硫酸化的2，5-脫水甘露糖醇單元的存在其中R”代表氫或SO3-。
因此，所述鏈混合物中鏈主體的還原端，由如上所示結(jié)構(gòu)(b’)表示，其中糖醛酸單元仍然是葡糖醛酸。
上述新低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽中，優(yōu)選由這樣的混合物組成，其中優(yōu)勢(shì)體是分子式IIIb’化合物 其中R，R’和R”是氫或SO3-，X”是OH或OSO3-，硫酸化度至少為2.2，優(yōu)選2.2-3或2.3-3，更優(yōu)選從2.5-3，最優(yōu)選2.7-2.9，m是4，5或6，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
這些低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸化的，在制備它們的N-硫酸化和N-?；苌镏校亲鳛橹虚g體的有用的新產(chǎn)品，但它們本身具有其他令人感興趣的藥理生物性質(zhì)，尤其作為抗自由基和殺微生物劑，這樣，構(gòu)成藥物組合物的新活性成分，它構(gòu)成本發(fā)明的另一個(gè)方面。
尤其，根據(jù)它的另一方面，本發(fā)明涉及用前面所述(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，以高硫酸化度，制備新N-取代的表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物。
(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物經(jīng)本發(fā)明方法的步驟(c)，得到本發(fā)明的N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物。
這樣，根據(jù)它另外方面之一，本發(fā)明提供新的N-?；?表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其方法以此為特征(a)(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物，以酸的形式，用叔或季有機(jī)堿處理，讓反應(yīng)混合物靜置30-60分鐘，通過(guò)加入所述叔或季有機(jī)堿，保持溶液的pH值約7，它的鹽用所述有機(jī)堿離析；(b)所述(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物的有機(jī)堿的鹽，在O-過(guò)硫酸化的條件下，用O-硫酸化試劑處理；(c)這樣得到的產(chǎn)物用(C2-C4)羧酸的官能衍生物處理，離析這樣得到的N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物。通常N-酰基-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物以鈉鹽形式離析，所述鈉鹽轉(zhuǎn)化成另一個(gè)化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的鹽。
如(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物所發(fā)生的，如上得到的N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物的硫酸化度，也取決于起始的(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物的構(gòu)型，由于K5-N-硫酸鹽-衍生物的二糖鏈中的體積，其中，糖醛酸單元單獨(dú)由葡糖醛酸組成，使過(guò)硫酸化比用(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物發(fā)生的少，尤其，如果后者的表異構(gòu)化程度是40-60％的葡糖醛酸和60-40％艾杜糖醛酸。
事實(shí)上，可以確定，K5-N-硫酸鹽-衍生物經(jīng)上述步驟(a)-(c)，得到的N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物的硫酸化度2.2-3，優(yōu)選2.5-3，更優(yōu)選2.7-2.9。
使表K5-N-硫酸鹽-衍生物經(jīng)上述步驟(a)，(b)和(c)，其中艾杜糖醛酸含量是總糖醛酸的20-60％，得到的N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物具有硫酸化度至少為3.4，優(yōu)選至少3.5，更優(yōu)選3.5-4，最優(yōu)選3.55-3.8。
因此，根據(jù)它的一個(gè)方面，本發(fā)明提供?；?C2-C4)羧酸的新N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，平均分子量約2000-45000，優(yōu)選在約4500-40000之間，硫酸化度如上面所示，所述衍生物基本上對(duì)凝固參數(shù)是無(wú)活性的，但它是藥物或化妝組合物的有用活性成分。
對(duì)于本發(fā)明的N-?；?表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物用作藥物或化妝組合物的活性成分，它有利于制備低分子量衍生物，平均分子量約3000-11500，優(yōu)選4500-8500，分子量分布在約1000和15000之間，優(yōu)選在約2000-10000，以及制備高分子量衍生物，從未分餾的K5開(kāi)始，，平均分子量約15000-45000，優(yōu)選在約20000和45000之間，分子量分布從2000-70000。
在本發(fā)明的N-酰基-表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物中，因?yàn)槊總€(gè)二糖單元上有4個(gè)游離的羥基被硫酸化，至少3.4，優(yōu)選3.5-3.8，硫酸化程度非常高，而葡糖胺的氮，實(shí)際上100％被?；?。此外，N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物在它們的葡糖胺單元中，被100％6-O-硫酸化和50-80％3-O-硫酸化，在葡糖醛酸單元中5-10％3-O-單硫酸化，艾杜糖醛酸單元中10-15％O-單硫酸化，在留下的糖醛酸單元中2.3-二-O-硫酸化，認(rèn)為硫酸化度至少為3.4。
如上所示，N-?；?表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物具有硫酸化度2.2-3，并且至少90％6-O-硫酸化的。
根據(jù)它的另一方面，發(fā)明提供新的N-?；?表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，它由至少90％分子式IV鏈的鏈混合物組成 其中，糖醛酸單元由20-60％艾杜糖醛酸組成，n是2-100的整數(shù)，優(yōu)選3-100，R，R’，R”是氫或SO3-，Z是(C2-C4)?；?，硫酸化度至少為3.4，優(yōu)選至少3.5，更優(yōu)選從3.55-4，最優(yōu)選3.55-3.8，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
有利的、極高硫酸化度的優(yōu)選的N-?；?表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，由至少90％具分子式IV鏈的鏈混合物組成，其中糖醛酸單元由40-60％艾杜糖醛酸組成，n是2-100的整數(shù)，優(yōu)選3-100，平均分子量約2000-45000，優(yōu)選約4500-45000，R至少是40％，優(yōu)選50-80％SO3-，R’和R”都是SO3-，或者一個(gè)是氫，另一個(gè)是葡糖醛酸單硫酸鹽中的5-10％SO3-和艾杜糖醛酸單硫酸鹽中的10-15％SO3-，硫酸化度大于3.4，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
特別感興趣的非常高硫酸化度的N-?；?表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，是N-?；?低分子量-表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，它由至少90％分子式IV’鏈的鏈混合物組成 其中q是2-20的整數(shù)，R，R’和R”代表氫或SO3-基團(tuán)，硫酸化度為3.55-4，Z是(C2-C4)酰基，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
分子式IV’的鏈混合物，其中糖醛酸單元由40-60％，優(yōu)選50-55％的艾杜糖醛酸組成，R是至少40％，優(yōu)選50-80％，更優(yōu)選約65％的SO3-，R’和R”都是SO3-，或者一個(gè)是氫，另一個(gè)是葡糖醛酸中的5-10％SO3-和艾杜糖醛酸中的10-15％SO3-，q是3-15的整數(shù)，平均分子量約4500-9000，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
其他特別感興趣的N-?；?表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，是分子量非常低的那些，它們由鏈混合物組成，其中優(yōu)勢(shì)體是分子式IV’a的化合物 其中p是4-8的整數(shù)，R，R’，R”是氫或SO3-，硫酸化度為3.55-4，Z是(C2-C4)?；鄳?yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
源自低分子量-表K5-硫酸鹽的新N-酰基-低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，通過(guò)亞硝酸解聚和隨后的還原得到，例如用硼氫化鈉，包括所述鏈混合物中鏈主體的還原端，如上定義的，結(jié)構(gòu)(a’)的硫酸化的2，5-脫水甘露糖醇單元的存在，其中R”代表氫或SO3-。
因此，所述鏈混合物中鏈主體的還原端，由結(jié)構(gòu)(b”)表示， 其中Z表示(C2-C4)?；?，糖醛酸單元可以是葡糖醛酸的或艾杜糖醛酸的。
上述新N-酰基-低分子量-表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽中，優(yōu)選由這樣的混合物組成，其中優(yōu)勢(shì)體是分子式IVb’的化合物
其中R，R’和R”是氫或SO3-，Z是(C2-C4)酰基，X”是OH或OSO3-，m是4，5或6，硫酸化度為3.55-4，糖醛酸單元交替出現(xiàn)，以葡糖醛酸單元或艾杜糖醛酸單元開(kāi)始，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
所述陽(yáng)離子特別有利的是堿金屬，堿土金屬，銨，(C1-C4)四烷基銨，鋁和鋅，它們中間，優(yōu)選鈉、鈣和四丁基銨。
在如上所示的所有N-?；?表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽中，尤其分子式IV，IV’，IV’a，IV’b中，而且在結(jié)構(gòu)b”中，酰基基團(tuán)(z)優(yōu)選(C2-C4)?；?，選自乙?；?，(2-羧基)乙?；?，(2-甲氧基羰基)乙?；?，(2-乙氧基羰基)乙?；；?，(3-羧基)丙?；?，N-(3-甲氧基羰基)丙?；?3-乙氧基羰基)丙?；?。
根據(jù)它的另一方面，發(fā)明提供新的N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，它由至少90％分子式V鏈的鏈混合物組成 其中，n是2-100的整數(shù)，優(yōu)選3-100，Z是(C2-C4)?；?，R，R’和R”是氫或SO3-，硫酸化度至少為2.2，優(yōu)選至少2.2-3或2.3-3，更優(yōu)選從2.5-3，最優(yōu)選2.7-2.9，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
特別感興趣的是新的N-?；?低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，由至少90％具分子式V’鏈的鏈混合物組成 其中q是2-20的整數(shù)，Z是(C2-C4)?；?，R，R’和R”代表氫或SO3-，硫酸化度至少為2.2，優(yōu)選至少2.2-3或2.3-3，更優(yōu)選從2.5-3，最優(yōu)選2.7-2.9，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
這些N-?；?低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，由鏈混合物組成，其中優(yōu)勢(shì)體是分子式V’a的化合物 其中p是4-8的整數(shù)，Z是(C2-C4)?；?，R，R’，R”如上定義的，硫酸化度至少為2.2，優(yōu)選2.2-3或2.3-3，更優(yōu)選2.5-3，最優(yōu)選2.7-2.9，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
源自低分子量-K5-硫酸鹽的新N-?；?低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，通過(guò)亞硝酸解聚和隨后的還原得到，例如用硼氫化鈉，包括所述鏈混合物中鏈主體的還原端，如上定義的，結(jié)構(gòu)(a’)的硫酸化的2，5-脫水甘露糖醇單元的存在，其中R”代表氫或SO3-。
因此，所述鏈混合物中鏈主體的還原端，由結(jié)構(gòu)(b)表示， 其中Z，R，R’和R”如上面定義的。
上述新N-?；?低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽中，優(yōu)選由這樣的混合物組成，其中優(yōu)勢(shì)體是分子式Vb’的化合物 其中Z是(C2-C4)?；?，R，R’和R”是氫或SO3-，X”是OH或OSO3-，硫酸化度至少為2.2，優(yōu)選2.2-3或2.3-3，更優(yōu)選2.5-3，最優(yōu)選2.7-2.9，m是4，5或6，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
在如上所示的所有N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽中，尤其在分子式V，V’，V’a，V’b中，而且在結(jié)構(gòu)b中，?；鶊F(tuán)(Z)優(yōu)選(C2-C4)?；?，選自乙?；?，(2-羧基)乙酰基，(2-甲氧基羰基)乙酰基，(2-乙氧基羰基)乙酰基，丙?；?，(3-羧基)丙?；?，N-(3-甲氧基羰基)丙?；?3-乙氧基羰基)丙酰基。
特別感興趣的是上面所示的N-酰基-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，其中Z是與乙?；煌?C2-C4)酰基。而且，令人感興趣和特別活潑的是如上所示的N-?；?K5-胺O-過(guò)硫酸鹽，其中Z是乙?；?，具有硫酸化度為2.7-2.9，優(yōu)選約2.8。
新的N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，尤其以它們鹽的形式，是能捕獲自由基的高陰離子產(chǎn)品。它們用在化妝品工業(yè)中作為抗脫發(fā)的助劑或制備“抗老化”面霜，但最重要的是用在制藥工業(yè)中，作為治療皮炎的藥物和作為殺微生物劑。
因此，根據(jù)其另一方面，本發(fā)明提供制藥組合物，作為活性成分之一，把藥理上活性量的如上所示的N-酰基-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，或它的制藥學(xué)上可接受的鹽，包括在與典型制藥賦形劑的混合物中。
在本發(fā)明的口服、皮下、靜脈、透皮或局部給藥的制藥組合物中，活性成分優(yōu)選以劑量單位的形式、在與典型藥物賦形劑或媒介物的混合物中給藥。
根據(jù)病人的年齡、體重和健康狀況，劑量攝入可有很大變化。劑量攝入包括劑量1-1000毫克，優(yōu)選10-750毫克，更優(yōu)選250-500毫克，一日三次靜脈、皮下、口服、透皮或局部給藥。
本發(fā)明還提供化妝品組合物，將有效量的N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物或一個(gè)制藥學(xué)上可接受鹽與化妝品賦形劑一起包括在混合物中。
此外，本發(fā)明提供制藥組合物，例如一個(gè)活性成分，將根據(jù)上面所述步驟(a)和(b)得到的(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，或一個(gè)它的制藥學(xué)上可接受的鹽，與藥物賦形劑，包括在混合物中。有利地，所述(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物由鏈混合物組成，其中至少90％所述鏈具有分子式II，II’，III或III’，或其中優(yōu)勢(shì)體是分子式IIa，II’a，III’a，或III’b。優(yōu)選的活性成分是硫酸化度為2.2-3的低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，優(yōu)選平均分子量約3500-11000，更優(yōu)選約3500-5200，基本上不含N-乙?；蚇-硫酸鹽基團(tuán)。
在本發(fā)明的口服、皮下、靜脈、透皮或局部給藥的制藥組合物中，活性成分(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物優(yōu)選以劑量單位的形式、在與典型藥物賦形劑或媒介物的混合物中給藥。根據(jù)病人的年齡、體重和健康狀況，攝入劑量可有很大變化。這攝入劑量包括(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物劑量1-1000毫克，優(yōu)選10-750毫克，更優(yōu)選250-500毫克，一日三次靜脈、皮下、口服、透皮或局部給藥。
包括如上所示(表)K5-胺-O-個(gè)過(guò)硫酸鹽-衍生物的藥物組合物，以不同的給藥方式，與典型的賦形劑一起配制。特別有利的是以面霜、藥膏、擦劑、凝膠體、泡沫、香液、陰道栓劑、栓劑、溶液或懸浮液形式局部給藥。
最后，本發(fā)明提供藥物組合物，它包含，如一個(gè)它的活性成分，藥理活性量的低分子量-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，即，如上所示的低分子量-K5-N-硫酸鹽或低分子量-表K5-N-硫酸鹽，或一個(gè)制藥學(xué)上可接受的鹽，與藥物賦形劑的混合物。
在本發(fā)明的口服、皮下、靜脈、透皮或局部給藥的制藥組合物中，活性成分優(yōu)選以劑量單位的形式、在與典型藥物賦形劑或媒介物的混合物中給藥。
根據(jù)病人的年齡、體重和健康狀況，劑量攝入可有很大變化。劑量攝入包括劑量1-1000毫克，優(yōu)選10-750毫克，更優(yōu)選250-500毫克，一日三次靜脈、皮下、口服、透皮或局部給藥。
根據(jù)它的另一方面，發(fā)明還提供化妝品組合物，作為一個(gè)活性成分，將有效量的低分子量-K5-N-硫酸鹽或低分子量-(表)-N-硫酸鹽，或者一個(gè)制藥學(xué)上可接受鹽與化妝品賦形劑一起包括在混合物中。
有利地，所述低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物由鏈混合物組成，其中至少90％所述鏈具有分子式I或I’，或其中優(yōu)勢(shì)體是分子式Ia或I’b。優(yōu)選的活性成分是低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物，具有平均分子量約1000-12000，優(yōu)選約1500-8000，更優(yōu)選約1500-7500，并且基本上無(wú)N-不含?；鶊F(tuán)。
組成鹽的基團(tuán)選自堿金屬或堿土金屬，銨，(C1-C4)四烷基銨，鋁或鋅，尤其鈉、鉀、鈣、鎂、鋁或鋅的鹽，組成本發(fā)明組合物的有效活性成分。
下列實(shí)施例闡述而不限制發(fā)明。
制備I低分子量-表K5-N-硫酸鹽a)K5-N-硫酸鹽的表異構(gòu)化按WO 02/068477，步驟(i)和(ii)，實(shí)施例1所述得到的2克K5-N-硫酸鹽，溶解在120毫升25mM HEPES緩沖劑中，pH7，含50mMCaCl2。得到的溶液，通過(guò)含固定化酶樹(shù)脂的50毫升柱循環(huán)，酶如WO 96/14425中所述得到。在30℃操作，以200毫升/小時(shí)流速流動(dòng)24小時(shí)。得到的產(chǎn)物通過(guò)1000D膜超濾，流經(jīng)離子交換柱IR 120H+，用1N氫氧化鈉中和流出液，進(jìn)行純化。用乙醇或丙酮通過(guò)沉淀回收樣品。
以艾杜糖醛酸/葡糖醛酸比55/45，對(duì)起始產(chǎn)物的0/100的比，得到表異構(gòu)化的產(chǎn)物。表異構(gòu)化的百分率根據(jù)WO 96/14425中所述方法，用1H-NMR計(jì)算。以咔唑方法(Bitter and Muir Anal.Biochem.39，88-92-1971)，通過(guò)測(cè)量糖醛酸對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的含量，計(jì)算的收率是90％。
b)表-K5-N-硫酸鹽的解聚1克在步驟(a)中得到的產(chǎn)物，通過(guò)用亞硝酸降解方法和隨后形成醛的還原，進(jìn)行解聚。具體情況下，繼續(xù)溶解產(chǎn)物于25毫升蒸餾水中，并把它加到230毫克亞硝酸鈉溶解在115毫升蒸餾水中的溶液中。溶液升至4℃，用0.1N HCl使pH升至2，保持30分鐘。反應(yīng)結(jié)束時(shí)，溶液升至室溫，用0.1M氫氧化鈉使pH升至7。然后加入450毫克NaBH4的溶液，反應(yīng)4小時(shí)。用3體積的丙酮于4℃沉淀，用過(guò)濾漏斗過(guò)濾，在40℃的真空烤箱中干燥，回收產(chǎn)物。得到900毫克低分子量-表K5-N-硫酸鹽，用HPLC方法測(cè)量的分子量分布1000-4000，葡糖醛酸單元含量45％，艾杜糖醛酸單元含量55％。
制備II低分子量K5-N-硫酸鹽按WO 02/068477，步驟(i)和(ii)，實(shí)施例1所述得到的產(chǎn)物，通過(guò)用亞硝酸降解和隨后形成醛的還原，進(jìn)行解聚。繼續(xù)將1克K5-N-硫酸鹽溶解在200毫升蒸餾水中，并把它加入480毫升亞硝酸鈉溶解在240毫升蒸餾水中的溶液中。溶液升至4℃，用0.1N HCl將pH升至2，保持30分鐘。反應(yīng)結(jié)束時(shí)，用0.1M氫氧化鈉使溶液pH升至7，然后，溫度升至室溫，。然后加入450毫克NaBH4的溶液，反應(yīng)4小時(shí)。過(guò)量的NaBH4用HCl消除，pH升至5-6。產(chǎn)物，用0.1M NaOH中和，用3體積4℃的丙酮沉淀，用過(guò)濾漏斗過(guò)濾，在40℃的真空烤箱中干燥，回收產(chǎn)物。得到900毫克低分子量-K5-N-硫酸鹽，平均分子量約2000，由鏈混合物組成，其中優(yōu)勢(shì)體是分子式I’b，其中m是4，糖醛酸單元是葡糖醛酸單元。
制備III(a)K5-N-硫酸鹽的解聚按WO 02/068477，步驟(i)和(ii)，實(shí)施例1所述得到的2克K5-N-硫酸鹽，如制備III中所述，用100毫克亞硝酸鈉和300毫克硼氫化鈉解聚，得到1.8克低分子量-K5-N-硫酸鹽，平均分子量5000。
(b)K5-N-硫酸鹽的表異構(gòu)化1克在實(shí)施例1步驟(a)中得到的低分子量-K5-N-硫酸鹽，按實(shí)施例1步驟(a)中所述處理。以艾杜糖醛酸/葡糖醛酸比44/56，對(duì)起始產(chǎn)物的0/100的比，得到表異構(gòu)化的產(chǎn)物，分子量分布2000-10000，平均分子量5000D。以咔唑方法(Bitter and Muir Anal.Biochem.39，88-92-1971)，通過(guò)測(cè)量糖醛酸對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的含量，計(jì)算的收率是90％。
制備IV表K5-N-硫酸鹽的制備按WO 02/068477，步驟(i)和(ii)，實(shí)施例1所述得到的10克K5-N-硫酸鹽，在600毫升25mM HEPES緩沖劑、pH7、在50mM濃度含CaCl2的溶液中，通過(guò)50毫升填充有Sepharose 4B樹(shù)脂、含5克重組體C5-表異構(gòu)酶(WO96/14425)、按WO 01/72848固定的柱上循環(huán)。反應(yīng)在30℃，pH7，以200毫升/小時(shí)流動(dòng)24小時(shí)進(jìn)行。得到的產(chǎn)物通過(guò)超濾和用乙醇沉淀純化。這樣得到艾杜糖醛酸含量54％的表K5-N-硫酸鹽。
制備V低分子量-表K5-N-硫酸鹽的制備1克制備I中得到的產(chǎn)物，通過(guò)用亞硝酸的降解方法和隨后形成醛的還原，進(jìn)行解聚。在特殊的情況下，繼續(xù)溶解產(chǎn)物在25毫升蒸餾水中，并把它加到230毫克亞硝酸鈉溶解在115毫升蒸餾水中的溶液中。溶液升至4℃，用0.1N HCl使pH為2，保持30分鐘。反應(yīng)結(jié)束時(shí)，溶液升至室溫，用0.1M氫氧化鈉使pH調(diào)至7。然后加入450毫克NaBH4的溶液，反應(yīng)4小時(shí)。用3體積4℃的丙酮沉淀，用過(guò)濾漏斗過(guò)濾，在40℃的真空烤箱中干燥，回收產(chǎn)物。得到900毫克低分子量-表K5-N-硫酸鹽，用HPLC方法測(cè)量的分子量分布1000-4000。
實(shí)施例1表K5-按-O-過(guò)硫酸鹽
(a)表K5-N-硫酸鹽的四丁基銨鹽400毫克在制備IV中得到的、艾杜糖醛酸含量54％的表K5-N-硫酸鹽在40毫升水中的溶液，恒溫于4℃，然后流經(jīng)用4℃水預(yù)調(diào)的離子交換樹(shù)脂IR 120H+。得到的流出液，由100毫升pH1.94的溶液組成，用15％氫氧化四丁基銨的溶液中和，在室溫保留1小時(shí)，通過(guò)加入15％氫氧化四丁基銨保持pH為7，最后凍干。得到805毫克表K5-N-硫酸鹽的四丁基銨鹽。
(b)表-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽把30毫升二甲基甲酰胺(DMF)中含805毫克這樣得到鹽的溶液，調(diào)節(jié)到55℃，并用含2.26克吡啶.SO3加合物的30毫升DMF處理。在55℃反應(yīng)過(guò)夜，然后在混合物中加入60毫升水。用1N氫氧化鈉中和后，用3體積氯化鈉飽和的丙酮沉淀，在4℃過(guò)夜。在guch G4上過(guò)濾，然后用1000D Millipore TFF系統(tǒng)超濾，回收沉淀物，并減壓干燥。得到550毫克表-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，艾杜糖醛酸含量54％，葡糖胺-6-O-硫酸鹽100％，葡糖胺3-O-硫酸鹽60％，葡糖醛酸單硫酸鹽10％，艾杜糖醛酸單硫酸鹽15％，其余的糖醛酸單元被二硫酸化，根據(jù)Casu等人1975的電導(dǎo)測(cè)定方法測(cè)量的硫酸化度為3.55。
實(shí)施例2N-乙酰基-表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽冷卻到4℃的、250毫克實(shí)施例1中得到的表-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽在75毫升水的溶液中，加入7.5毫升甲醇和3.75毫升乙酸酐。在4℃保持反應(yīng)2小時(shí)，用5M氫氧化鈉保持pH在7。在1000D膜上超濾后，加入3體積氯化鈉飽和的丙酮，在5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5’，回收沉淀物。這樣得到249毫克N-乙?；?表K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，艾杜糖醛酸含量54％，葡糖胺-6-O-硫酸鹽100％，N-乙?；?00％，葡糖胺3-O-硫酸鹽60％，葡糖醛酸單硫酸鹽10％，艾杜糖醛酸單硫酸鹽15％，其余的糖醛酸胺單元被二硫酸化，根據(jù)Casu等人1975的電導(dǎo)測(cè)定方法測(cè)量的硫酸化度為3.5。
實(shí)施例3N-乙酰基-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽1克WO/02068477的實(shí)施例2中得到的K5 N，O過(guò)硫酸鹽，溶解在200毫升水中，用1N HCl調(diào)節(jié)溶液到pH2，恒溫在50℃。在50℃保持反應(yīng)3小時(shí)，然后冷卻到室溫，并用1N氫氧化鈉中和。然后樣品冷卻到4℃，將20毫升MeOH和10毫升乙酸酐加入反應(yīng)，保留在4℃2小時(shí)，pH保持恒定在7。在反應(yīng)結(jié)束時(shí)，樣品從鹽純化，通過(guò)用1000D膜超濾，然后減壓干燥回收。得到100％N-乙?；漠a(chǎn)品，得到100％6-O硫酸鹽，葡糖醛酸上30％單硫酸鹽和70％二硫酸鹽。
權(quán)利要求
1.制備N(xiāo)-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物及其化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受鹽的方法，特征在于(a)(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物，以酸的形式，用叔或季有機(jī)堿處理，讓反應(yīng)混合物靜置30-60分鐘，保持溶液的pH值約7，它的鹽用所述有機(jī)堿離析；(b)所述(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物的有機(jī)堿的所述鹽，在O-過(guò)硫酸化的條件下，用O-硫酸化試劑處理；(c)這樣得到的(表)K5-N-過(guò)硫酸鹽-衍生物，用(C2-C4)羧酸的官能衍生物處理，離析N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物。
2.如權(quán)利要求1中所述的方法，其特征在于所述N-?；?(表)K5-N，O-過(guò)硫酸鹽-衍生物以鈉鹽的形式離析，并任選轉(zhuǎn)化成另一個(gè)化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的鹽。
3.如權(quán)利要求1和2中的任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于在步驟(a)中氫氧化四丁基銨用作有機(jī)堿。
4.如權(quán)利要求1-3中的任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于在步驟(b)中，用2-4摩爾O-硫酸化試劑可用的/OH/二糖，溫度40-60℃，在二甲基甲酰胺中進(jìn)行O-過(guò)硫酸化15-20小時(shí)。
5.如權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于作為起始材料，使用具有平均分子量約1000-25000的(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物。
6.如權(quán)利要求1-5中的任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述起始材料是40-60％C5-表異構(gòu)化的。
7.如權(quán)利要求1-6中的任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述起始材料的平均分子量約為1500-25000。
8.如權(quán)利要求7中所述的方法，其特征在于所述起始材料的平均分子量約為10000-25000。
9.如權(quán)利要求7中所述的方法，其特征在于所述起始材料的平均分子量約為1500-12000。
10.如權(quán)利要求9中所述的方法，其特征在于所述起始材料的平均分子量約為1500-8000。
11.如權(quán)利要求5中所述的方法，其特征在于用作起始材料的(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物由鏈混合物組成，鏈混合物至少90％所述鏈具有分子式I 其中，葡糖醛酸單元/艾杜糖醛酸單元的比，從100/0-40/60，n是2-100的整數(shù)，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
12.如權(quán)利要求11中所述的方法，其特征在于所述起始材料是由至少90％所述分子式I鏈的鏈混合物組成，其中，糖醛酸單元由40-60％艾杜糖醛酸組成。
13.如權(quán)利要求11中所述的方法，其特征在于所述起始材料是由至少90％所述分子式I鏈的鏈混合物組成，其中，糖醛酸單元全部由葡糖醛酸構(gòu)成或由40-60％艾杜糖醛酸組成，n是3-15的整數(shù)，相應(yīng)陽(yáng)離子是化學(xué)上可接受的。
14.如權(quán)利要求11中所述的方法，其特征在于所述起始材料是由至少90％所述分子式I’鏈的鏈混合物組成的低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽， 其中，糖醛酸單元由100％葡糖醛酸組成，或由60-40％葡糖醛酸和40-60％艾杜糖醛酸組成，q是2-20的整數(shù)，相應(yīng)陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
15.如權(quán)利要求11中所述的方法，其特征在于所述起始材料是由優(yōu)勢(shì)體為分子式I’a的鏈混合物組成的低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽， 其中，糖醛酸單元由100％葡糖醛酸組成，或由60-40％葡糖醛酸和40-60％艾杜糖醛酸組成，p是4-8的整數(shù)。
16.如權(quán)利要求5-15中的任何-項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述起始材料是相應(yīng)(表)K5-N-硫酸鹽經(jīng)亞硝酸解聚和隨后還原而得到的低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽。
17.如權(quán)利要求16中所述的方法，其特征在于所述起始材料低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽，在所述鏈混合物的鏈的大部分還原端，含有結(jié)構(gòu)(a)的2，5-脫水甘露糖單元， 其中X代表羥甲基。
18.如權(quán)利要求16和17中的任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于用作所述起始材料低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽，由優(yōu)勢(shì)體為分子式I’b的鏈混合物組成 其中，X是羥甲基，m是4，5或6，相應(yīng)陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子，糖醛酸單元全部由葡糖醛酸組成，或葡糖醛酸和艾杜糖醛酸交替出現(xiàn)，以葡糖醛酸或艾杜糖醛酸單元開(kāi)始。
19.如權(quán)利要求1-18中的任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述起始材的(表)K5-N-硫酸鹽-衍生物，以鈉鹽形式使用。
20.N-酰基-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，可根據(jù)權(quán)利要求1-19中所述的方法得到。
21.如權(quán)利要求20中所述的N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，是以堿金屬或堿土金屬，銨，(C1-C4)四烷基銨，鋁或鋅鹽的形式存在的。
22.N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其中?；?C2-C4)?；?，艾杜糖醛酸含量20-60％，平均分子量約2000-45000，硫酸化度至少為3.4，或它的化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受鹽之一。
23.如權(quán)利要求22中所述的N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，它的平均分子量約為15000-45000。
24.如權(quán)利要求22中所述的N-酰基-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，它的平均分子量約為4500-8500。
25.如權(quán)利要求22-24中的任何一項(xiàng)所述的N-酰基-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于所述硫酸化度為3.4-3.8。
26.N-?；?表K5-N-硫酸鹽-衍生物由鏈混合物組成，其中至少90％所述鏈具有分子式IV 其中，糖醛酸單元由20-60％艾杜糖醛酸組成，n是2-100整數(shù)，R，R’和R”是氫或SO3-，Z是(C2-C4)?；?，硫酸化度至少為3.4，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
27.如權(quán)利要求26中所述的N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于它由至少90％具有分子式IV所述鏈的鏈混合物組成，其中糖醛酸單元由40-60％艾杜糖醛酸組成，n是3-100整數(shù)，平均分子量約2000-45000，R至少40％是SO3-，R’和R”都是氫或一個(gè)是氫，另一個(gè)是葡糖醛酸單硫酸鹽中5-10％的SO3-和艾杜糖醛酸單硫酸鹽中10-15％的SO3-，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
28.如權(quán)利要求26和27中的任何一項(xiàng)所述的N-?；?(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于它是低分子量-N-?；?(表)K5-O-過(guò)硫酸鹽，由至少90％具分子式IV’所述鏈的鏈混合物組成， 其中q是2-20整數(shù)，R，R’和R”代表氫或SO3-基團(tuán)，硫酸化度為3.55-4，Z是(C2-C4)?；鄳?yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
29.如權(quán)利要求28中所述的低分子量-N-?；?(表)K5-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于分子式(IV’)的所述鏈混合物中，羰醛酸單元由50-55％的艾杜糖醛酸組成，R至少40％是SO3-，R’和R”都是氫或一個(gè)是氫，另一個(gè)是葡糖醛酸中5-10％的SO3-和艾杜糖醛酸中10-15％的SO3-，q是3-15的整數(shù)，平均分子量約4500-9000，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
30.如權(quán)利要求28和29中的任何一項(xiàng)所述的低分子量-N-?；?(表)K5-O-過(guò)硫酸鹽，其特征在于它是由優(yōu)勢(shì)體為分子式IV’a化合物的鏈混合物組成 其中p是4-8的整數(shù)，R，R’和R”是氫或SO3-基團(tuán)，硫酸化度為3.55-4，Z是(C2-C4)?；?，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
31.如權(quán)利要求30中所述的低分子量-N-?；?(表)K5-O-過(guò)硫酸鹽，其特征在于所述優(yōu)勢(shì)體為分子式IV’b的化合物 其中R，R’和R”是氫或SO3-基團(tuán)，Z是(C2-C4)?；琗”是OH或OSO3-，m是4，5或6，硫酸化度為3.55-4，糖醛酸單元交替出現(xiàn)，以葡糖醛酸或艾杜糖醛酸單元開(kāi)始，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
32.如權(quán)利要求22-31中的任何一項(xiàng)所述的低分子量-N-?；?(表)K5-O-過(guò)硫酸鹽，其特征在于取代基(C2-C4)?；x自乙?；?2-羧基)乙?；?，(2-甲氧基羰基)乙?；?，(2-乙氧基羰基)乙酰基，丙?；?3-羧基)丙?；?，(3-甲氧基羰基)丙?；?，和(3-乙氧基羰基)丙?；?。
33.如權(quán)利要求22-32中的任何一項(xiàng)所述的N-酰基-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，其特征在于所述鹽或相應(yīng)的陽(yáng)離子是堿金屬或堿土金屬，銨，(C1-C4)四烷基銨，鋁或鋅。
34.N-酰基-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物由鏈混合物組成，其中至少90％的所述鏈具有分子式V鏈 其中，n是2-100整數(shù)，Z是(C2-C4)?；?，R，R’和R”是氫或SO3-，硫酸化度至少為2.2，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
35.如權(quán)利要求34中所述的N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于它是低分子量-N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，由至少90％具分子式V’所述鏈的鏈混合物組成， 其中q是2-20整數(shù)，Z是(C2-C4)?；?，R，R’和R”代表氫或SO3-基團(tuán)，硫酸化度為2.2-3，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
36.如權(quán)利要求35中所述的低分子量-N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，其特征在于它是由優(yōu)勢(shì)體為分子式V’a化合物的鏈混合物組成， 其中p是4-8的整數(shù)，Z是(C2-C4)?；?，R，R’和R”代表氫或SO3-基團(tuán)，硫酸化度為2.2-3，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的。
37.如權(quán)利要求36中所述的低分子量-N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，其特征在于所述優(yōu)勢(shì)體為分子式IV’b的化合物 其中Z是(C2-C4)酰基，R，R’和R”是氫或SO3-，X”是OH或OSO3-，硫酸化度為2.2-3，m是4，5或6，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
38.如權(quán)利要求34-37中的任何一項(xiàng)所述的N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于所述硫酸化度是2.3-3。
39.如權(quán)利要求38中所述的N-酰基-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于所述硫酸化度是2.5-3。
40.如權(quán)利要求39中所述的N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于所述硫酸化度是2.7-2.9。
41.如權(quán)利要求34-40中所述的N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于取代基(C2-C4)?；煌谝阴；?br> 42.如權(quán)利要求34-40中的任何一項(xiàng)所述的N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于取代基(C2-C4)?；且阴；?，具有硫酸化度2.7-2.9。
43.如權(quán)利要求42中所述的N-?；?K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于具有硫酸化度約2.8。
44.如權(quán)利要求34-43中的任何一項(xiàng)所述的N-酰基-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，其特征在于所述鹽或相應(yīng)陽(yáng)離子是堿金屬或堿土金屬，銨，(C1-C4)四烷基銨，鋁或鋅。
45.藥物組合物，包含，作為其活性成分之一，(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物或其制藥學(xué)上可接受鹽之一，按權(quán)利要求1步驟(a)和(b)的方法得到，以鈉鹽的形式離析，并任選轉(zhuǎn)化成制藥學(xué)上可接受鹽，與制藥賦形劑混合。
46.如權(quán)利要求45中所述的組合物，其特征在于所述活性成分是具有平均分子量約4500-40000的(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物。
47.如權(quán)利要求45或46所述的藥物組合物，其特征在于所述活性成分是(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，它由至少90％具分子式II鏈的鏈混合物組成 其中，n是2-100整數(shù)，R，R’和R”是氫或SO3-，糖醛酸單元全部是葡糖醛酸，硫酸化度為2.2-3，或由20-60％艾杜糖醛酸組成，硫酸化度至少為3.4，相應(yīng)的陽(yáng)離子是制藥學(xué)上可接受的。
48.如權(quán)利要求47中所述的藥物組合物，其特征在于所述活性成分是低分子量-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，它由至少90％具分子式II鏈的鏈混合物組成 其中，q是2-20整數(shù)，R，R’和R”是氫或SO3-，糖醛酸單元包括20-60％艾杜糖醛酸，優(yōu)選40-60％，硫酸化度為3.55-4。
49.如權(quán)利要求48中所述的藥物組合物，其特征在于在所述分子式II’的鏈混合物中，糖醛酸單元由40-60％艾杜糖醛酸組成，R是至少40％SO3-，R’和R”都是SO3-或一個(gè)是氫，另一個(gè)是葡糖醛酸中的5-10％SO3-和艾杜糖醛酸中的10-15％SO3-，n是3-15整數(shù)，平均分子量約4000-8000。
50.如權(quán)利要求48或49所述的藥物組合物，，其特征在于所述低分子量-(表)K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，由優(yōu)勢(shì)體具分子式II’a的鏈混合物組成 其中，p是4-8整數(shù)，R，R’和R”如上定義的，硫酸化度為3.55-4，相應(yīng)的陽(yáng)離子是制藥學(xué)上可接受的。
51.如權(quán)利要求50中所述的藥物組合物，其特征在于所述優(yōu)勢(shì)體為分子式II’b的化合物 其中，R，R’和R”是氫或SO3-，X”是OH或OSO3-，m是4，5或6，糖醛酸單元由40-60％艾杜糖醛酸組成，硫酸化度為3.55-4，艾杜糖醛酸單元交替出現(xiàn)，以葡糖醛酸的或艾杜糖醛酸單元開(kāi)始，相應(yīng)的陽(yáng)離子是化學(xué)上或制藥學(xué)上可接受的離子。
52.如權(quán)利要求45中所述的藥物組合物，作為其活性成分之-，包括K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽-衍生物，它由至少90％具分子式III鏈的鏈混合物組成 其中，n是2-100整數(shù)，R，R’和R”是氫或SO3-，硫酸化度至少為2.2，相應(yīng)的陽(yáng)離子是制藥學(xué)上可接受的。
53.如權(quán)利要求52中所述的藥物組合物，其特征在于所述其活性成分是低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽，它由至少90％具分子式III’鏈的鏈混合物組成 其中，q是2-20整數(shù)，R，R’和R”代表氫或SO3-基團(tuán)，硫酸化度至少為2.2。
54.如權(quán)利要求53中所述的藥物組合物，其特征在于所述低分子量-K5-胺-O-過(guò)硫酸鹽由具分子式III’a優(yōu)勢(shì)體的鏈混合物組成 其中，p是4-8整數(shù)，R，R’和R”如上定義的，硫酸化度為2.2-3。
55.如權(quán)利要求50中所述的藥物組合物，其特征在于所述優(yōu)勢(shì)體為分子式III’b的化合物 其中，R，R’和R”是氫或SO3-，X”是OH或OSO3-，硫酸化度為2.2-3，m是4，5或6，相應(yīng)的陽(yáng)離子是制藥學(xué)上可接受的離子。
56.如權(quán)利要求45-54中的任何一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于所述制藥學(xué)上可接受鹽或陽(yáng)離子是鈉、鉀、鈣、鎂或鋅。
57.如權(quán)利要求45-56中的任何一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于它是以面霜、藥膏、擦劑、凝膠體、泡沫、香液、陰道栓劑、栓劑、溶液或懸浮液形式局部給藥。
58.藥物組合物，含有，作為活性成分之一的藥學(xué)活性量的、基本上不含乙酰基的低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽，或其制藥學(xué)上可接受鹽之一，與藥物賦形劑混合。
59.含有權(quán)利要求1-10和25-37的任何一項(xiàng)所述有效量的低分子量-(表)K5-N-硫酸鹽化妝品組合物，其特征在于所述鹽或陽(yáng)離子是藥學(xué)上可接受的，它與化妝品賦形劑混合。
全文摘要
描述了得到極高硫酸化度和(表)K5－胺－O－過(guò)硫酸鹽的(表)K5－N－硫酸鹽的過(guò)硫酸化新方法，轉(zhuǎn)化這些中間體成為新的N－酰基－(表)K5－胺－O－過(guò)硫酸鹽，它們基本上對(duì)凝血參數(shù)無(wú)活性，并可用在化妝品或制藥領(lǐng)域。而且，還描述了含有作為它們活性成分之一的(表)K5－胺－O－過(guò)硫酸鹽的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61P17/00GK1675249SQ03818933
公開(kāi)日2005年9月28日 申請(qǐng)日期2003年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月18日
發(fā)明者P·A·奧雷斯特, G·佐派蒂 申請(qǐng)人:格利考斯2000有限公司