專利名稱：具有抗增殖活性的嘧啶并化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的式I的嘧啶并化合物及其藥用鹽， 其中R1選自-H，-COR4，和-COOCHR5OCOR4；R2和R3獨立地選自-H，和-OR5；R4選自-C1-6烷基，-被高至4個選自下組的基團取代的C1-6烷基-NR5R6，-SR5，-OR5，-芳基，-被高至2個獨立地選自-OR5和C1-4烷基的基團取代的芳基，和-雜芳基，和
-雜環(huán)基；R5和R6獨立地選自-H，和-C1-5烷基，或備選地，-NR5R6可以形成含有3-7個原子的環(huán)，所述環(huán)任選地包括一個或多個另外的N或O原子。
這些化合物抑制KDR(含有激酶插入結(jié)構(gòu)域的受體)和FGFR(成纖維細(xì)胞生長因子)激酶并選擇性抗LCK(T-細(xì)胞酪氨酸激酶p56lck)。這些化合物和它們的藥用鹽具有抗增殖活性和用于治療或控制癌癥，特別是實體瘤。另外，這些化合物具有有利的生物利用度曲線。本發(fā)明還涉及包含這些化合物的藥物組合物和治療或控制癌癥的方法，尤其是治療或控制乳腺瘤、肺瘤、結(jié)腸瘤和前列腺瘤。
蛋白激酶是一類調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能的蛋白質(zhì)(酶)。這伴隨著蛋白質(zhì)底物上特定氨基酸的磷酸化，導(dǎo)致底物蛋白質(zhì)的構(gòu)象改變。構(gòu)象變化調(diào)節(jié)底物的活性或它與其它結(jié)合配體的相互作用活性。蛋白激酶的酶活性是指激酶將磷酸基團加至底物上的速率。它可以例如通過測定作為時間的函數(shù)的轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的底物的量來測量。底物的磷酸化在蛋白激酶的活性位點處發(fā)生。
酪氨酸激酶是催化腺苷三磷酸的末端磷酸轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)底物上的酪氨酸殘基的蛋白激酶亞類。這些激酶在導(dǎo)致細(xì)胞增殖、分化和遷移的生長因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的傳播中發(fā)揮重要作用。
例如，成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)已經(jīng)公認(rèn)為腫瘤促進的血管生成的重要介質(zhì)。VEGF通過兩個高親和力的受體的信號傳導(dǎo)激活內(nèi)皮細(xì)胞，其中一個受體是含有激酶插入結(jié)構(gòu)域的受體(KDR，Hennequin L.F.等，J.Med.Chem.2002，45(6)，pp.1300)。FGF通過FGF受體(FGFR)的信號傳導(dǎo)激活內(nèi)皮細(xì)胞。實體瘤依賴于新血管形成(血管生成)來生長。因此，干擾生長信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和因此減緩或預(yù)防血管生成(agiogenisis)的受體FGFR和KDR的抑制劑是預(yù)防和治療實體瘤的有效試劑(Klohs W.E.等，Current Opinion in Biotechnology 1999，10，p.544)。
存在蛋白激酶催化活性的小分子抑制劑的幾個實例。特別是，小分子抑制劑典型地通過與蛋白激酶ATP結(jié)合位點(或“活性位點”，參見WO98/24432和Hennequin L.F.等，J.Med.Chem.2002，45(6)，pp.1300)緊密相互作用阻止底物磷酸化。這些化合物中的幾種抑制多個目標(biāo)。例如，WO99/61444(Warner-Lambert)公開了下式的二環(huán)嘧啶和二環(huán)3，4-二氫嘧啶， 其宣稱抑制依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶Cdk1，Cdk2和Cdk4以及生長因子受體酪氨酸激酶PDGFR和FGFR。一些化合物還據(jù)稱抑制Cdk6。
美國專利No.6,150,373(Hoffmann-La Roche Inc.)公開了下式的二環(huán)氮雜環(huán)， 其聲稱抑制T-細(xì)胞酪氨酸激酶p56lck。
繼續(xù)有對有效抑制蛋白激酶(特別是FGF和KDR激酶)催化活性、用于治療一種或多種類型的實體瘤的易合成的小分子化合物的需要。特別期望提供對于FGF和KDR選擇性的小分子抑制劑。這是理想的，是由于抑制多個目標(biāo)可能產(chǎn)生的潛在的伴生毒性和其它不希望有的并發(fā)癥。優(yōu)選該小分子抑制劑還具有有利的生物利用度曲線。因此本發(fā)明的目的是提供這些化合物和含有這些化合物的藥物組合物。
本發(fā)明涉及能夠選擇性抑制KDR和FGFR活性的新的嘧啶并化合物。這些化合物用于治療或控制癌癥，特別是治療或控制實體瘤。具體地本發(fā)明涉及下式的化合物或其藥用鹽，
其中R1選自-H，-COR4，和-COOCHR5OCOR4；R2和R3獨立地選自-H，和-OR5；R4選自-C1-6烷基，-被高至4個選自下組的基團取代的C1-6烷基-NR5R6，-SR5，-OR5，-芳基，-被高至2個獨立地選自-OR5和C1-4低級烷基的基團取代的芳基，和-雜芳基，和-雜環(huán)基；R5和R6獨立地選自-H，-C1-5低級烷基，或備選地，-NR5R6可以形成含有3-7個原子的環(huán)，所述環(huán)任選地包括一個或多個另外的N或O原子。
本發(fā)明還涉及包含治療有效量的一種或多種式I的化合物和藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明另外涉及式I的化合物在治療實體瘤、特別是乳腺瘤或結(jié)腸瘤中的應(yīng)用，其是通過向需要該治療的人類患者施用有效量的式I的化合物和/或其鹽。特別是，本發(fā)明涉及式I的化合物在治療和控制肺癌、結(jié)腸癌或前列腺癌中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及制備式I的化合物的方法以及用于制備式I的化合物的新中間體化合物。
如本文所用，下列術(shù)語應(yīng)當(dāng)具有下列定義“低級烷基”是指含有1-6個、優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈飽和脂族烴。典型的低級烷基包括甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，叔丁基，2-丁基，戊基和己基。如本文所用實例名為C1-4烷基是指含有1-4個碳原子的低級烷基。
如在取代的烷基中的“取代的”是指取代可以在一個或多個位置發(fā)生，除非另外指出，每個取代基位點的取代基獨立地選自特定選項。
“芳基”是指芳族碳環(huán)基團，例如6-10元芳族或部分芳族環(huán)系統(tǒng)。優(yōu)選的芳族基團包括但不限于苯基，萘基，甲苯基和二甲苯基。
“雜芳基”是指含有可達兩個環(huán)的芳族雜環(huán)系統(tǒng)。優(yōu)選的雜芳族基團包括但不限于噻吩基，呋喃基，吲哚基，吡咯基，吡啶基，吡啶，吡嗪基，噁唑基，噻唑基(thiaxolyl)，喹啉基，嘧啶基，咪唑和四唑基。
“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”是指飽和或部分未飽和的芳族一價環(huán)狀基團，其含有1-3個選自下組的雜原子氮，氧或硫或其組合。優(yōu)選雜環(huán)的實例是哌啶基，哌嗪基，吡咯烷基，和嗎啉基。
“環(huán)烷基”是指含有3-8個原子的非芳族部分或完全飽和的環(huán)狀芳烴。環(huán)烷基的實例包括環(huán)丙基，環(huán)戊基和環(huán)己基。
“鹵素”是指氟，氯，溴或碘，優(yōu)選氯。
“雜原子”是指選自N，O和S的原子，優(yōu)選N。
“甲硅烷基保護基”是指作為羥基官能團的保護基的甲硅烷基醚。通過與有機硅試劑反應(yīng)制備甲硅烷基醚。它們?nèi)菀自跍睾蜅l件下形成和裂解，并且它們的相對穩(wěn)定性可以通過簡單地改變硅上的取代基來細(xì)調(diào)。甲硅烷基保護基的實例包括三甲基甲硅烷基，三乙基甲硅烷基，三異丙基甲硅烷基，叔丁基二甲基甲硅烷基和叔丁基二苯基甲硅烷基。
“有效量”是指有效預(yù)防、減輕或改善疾病癥狀或延長被治療的受試者存活的量。
“IC50”是指抑制50％特定測量的活性所需的按照本發(fā)明的具體化合物的濃度。尤其可以如下文實施例22中描述測量IC50。
“藥用鹽”是指保留式I的化合物的生物效能和性能并且由適當(dāng)非毒性有機或無機酸或有機或無機堿形成的常規(guī)酸加成鹽或堿加成鹽。酸加成鹽實例包括衍生于無機酸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的那些，和衍生于有機酸如對甲苯磺酸、水楊酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸等的那些。堿加成鹽實例包括衍生于銨、鉀、鈉和氫氧化季銨如例如氫氧化四甲銨的那些。將藥物化合物(即藥物)的化學(xué)修飾成鹽是藥物化學(xué)家公知的獲得化合物改善的物理和化學(xué)穩(wěn)定性、吸濕性、流動性和溶解度的技術(shù)。參見例如H.Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(6th Ed.1995)，第196頁和第1456-1457頁。
“藥用的”如藥用載體，賦形劑等，是指對于向其施用特定化合物，對于受試者在藥理學(xué)上可接受的和基本上非毒性的。
“治療有效量”是指至少一種式I的化合物或其藥用鹽或酯的量，其顯著抑制人腫瘤細(xì)胞增殖和/或防止人腫瘤細(xì)胞分化，所述人腫瘤細(xì)胞包括人腫瘤細(xì)胞系。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及下式化合物或其藥用鹽，
其中R1選自-H，-COR4，和-COOCHR5OCOR4；R2和R3獨立地選自-H，和-OR5；R4選自-C1-6烷基，-被1-4個獨立地選自下組的基團取代的C1-6烷基-NR5R6，-SR5，-OR5，-苯基，-被1-2個獨立地選自-OR5和C1-4烷基的基團取代的苯基，和-噻吩基，-呋喃基，-吲哚基，-吡咯基，-吡啶基，-吡嗪基，-噁唑基，-噻唑基，喹啉基，嘧啶基，咪唑基和四唑基，和-哌啶基，哌嗪基，吡咯烷基，和嗎啉基；R5和R6獨立地選自-H，和-C1-5烷基，或備選地，-NR5R6可以形成含有3-7個原子的環(huán)，所述環(huán)任選地包括一個或多個另外的N或O原子。
在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明涉及其中R1是-COR4的式I的化合物。
特別優(yōu)選式I的化合物，其中權(quán)利要求3的式I的化合物，其中R1是-COR4并且R4是C1-6烷基。
這些化合物的實例如下N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺；
N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺；N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基戊酰胺；和N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丁酰胺。
還優(yōu)選式I的化合物，其中R1是-COR4和R4是被-NR5R6取代的-C1-6烷基，或被-NR5R6和另一個選自下組的基團取代的-C1-6烷基-NR5R6，-SR5，-OR5，-苯基，-被1-2個獨立地選自-OR5和C1-4烷基的基團取代的苯基，和-噻吩基，-呋喃基，-吲哚基，-吡咯基，-吡啶基，-吡嗪基，-噁唑基，-噻唑基，喹啉基，嘧啶基，咪唑和四唑基；和R5和R6獨立地選自-H和-C1-5烷基。
下列各項是這些化合物的實例(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺；(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-3-苯基-N-苯基丙酰胺；(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲基-N-苯基戊酰胺乙酸鹽；和(2S)-2-氨基-3-吲哚-3-基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺鹽酸鹽。
這些化合物另外的實例有2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺乙酸鹽；2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺鹽酸鹽；
(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺乙酸鹽；(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺鹽酸鹽；(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-3-苯基-N-苯基丙酰胺鹽酸鹽；(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲基-N-苯基戊酰胺鹽酸鹽；(2S)-2-氨基-3-(4-羥基苯基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺鹽酸鹽；(2S)-2，6-二氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基己酰胺二鹽酸鹽；(2S)-2-氨基-3-羥基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺；(2R)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺鹽酸鹽；N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基戊酰胺；和N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丁酰胺。
更優(yōu)選式I的化合物，其中R1是-COR4，R3是-OR5和R5是-H或-C1-5烷基。
下列化合物是其實例N-(4-羥基苯基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]乙酰胺；和N-(4-甲氧苯基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]乙酰胺。
在更優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及式I的化合物，其中R1是-COOCHR5OCOR4。
這些化合物的實例如下
{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲?；趸鶀甲基乙酸酯；{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲酰基氧基}甲基2-(二甲基氨基)乙酸酯；{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲?；趸鶀甲基2-(二甲基氨基)乙酸酯鹽酸鹽；和{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲?；趸鶀甲基哌啶-4-羧酸酯三氟乙酸鹽。
在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明涉及式I的化合物，其中R1是H。
下列化合物是其實例3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮甲磺酸鹽；7-[(4-羥基苯基)氨基]-3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；和3-(4-甲氧苯基)-7-[(4-甲氧苯基)氨基]-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。
在式I的化合物的另一個優(yōu)選實施方案中，R2是H。
在式I的化合物的另一個優(yōu)選實施方案中，R2和R3是H。
本發(fā)明的化合物對于FGF和KDR激酶是選擇性的。這些化合物用于治療或控制癌癥，特別是治療或控制實體瘤，特別是乳腺瘤，肺瘤和前列腺瘤。這些化合物是可溶的和因此具有有利的生物利用度曲線(profile)如改善的口服生物利用度。
通過一種方法可以制備本發(fā)明式I的化合物，該方法包含a)將式II的化合物
其中hal是氯，溴或碘，與式III的苯胺衍生物反應(yīng)， 其中R2和R3是H或-OR5’，其中R5’是H，C1-5烷基或甲硅烷基保護基，以獲得下式化合物， 和/或b)將式I-A的化合物與式IV的?；u或酐反應(yīng)R4-COXIV其中X是鹵素或-OCOR4，和R4如上所定義，以獲得下式化合物， 或備選地，
c)將式I-A的化合物與式V的氯甲酸酯反應(yīng) 其中R5如上所定義，以獲得式VI的化合物， 其然后與式VII的鈉鹽反應(yīng) 以獲得下式的化合物 和d)如果需要，將式I-A，I-B或I-C的化合物轉(zhuǎn)化為藥用鹽。
本發(fā)明還涉及下列用于合成式I的化合物的新中間體(氯代甲氧基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯甲酰胺[實施例4a]3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-{[4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基]氨基}-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮[實施例19c]，和N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-[4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基]乙酰胺[實施例19d]。
本發(fā)明的化合物可以通過任何常規(guī)方法制備。合成這些化合物的適當(dāng)方法在實施例中提供。通常，式I的化合物可以按照以下描述的合成路線制備。
RCOX＝?；u或酐其中R1＝-COOCHR5OCOR4的式I的化合物的合成在本領(lǐng)域公知并且在J.Alexander，R.Cargill，S.R.Michelson，H.Schwam J.Med.Chem.1988，31，318-322中記錄。
在備選的實施方案中，本發(fā)明涉及包含至少一種式I的化合物或其藥用鹽或酯的藥物組合物。
這些藥物組合物可以例如以片劑、包衣片劑、糖錠劑、硬或軟明膠膠囊、溶液劑、乳劑或者混懸劑的形式口服給藥。它們還可以例如以栓劑形式直腸給藥，或例如以注射液形式腸胃外給藥。
包含式I的化合物和/或其鹽的本發(fā)明藥物組合物可以以本領(lǐng)域已知的方式，例如通過常規(guī)混合、包封、溶解、造粒、乳化、截留(entrapping)，制糖錠或凍干方法制備。這些藥物制劑可以用在治療學(xué)上惰性的無機或有機載體配制。乳糖，玉米淀粉或其衍生物，滑石，硬脂酸或其鹽可以用作這些用于片劑、包衣片劑、糖錠劑和硬明膠膠囊的載體。軟明膠膠囊的適當(dāng)載體包括植物油，蠟和脂肪。取決于活性物質(zhì)的性質(zhì)，在軟明膠膠囊的情形中通常不需要載體。用于制備溶液劑和糖漿劑的適當(dāng)載體是水、多元醇、糖類、轉(zhuǎn)化糖和葡萄糖。注射液的的適當(dāng)載體是水，醇，多元醇，甘油，植物油，磷脂和表面活性劑。栓劑的適當(dāng)載體是天然或者硬化油、蠟、脂肪和半液體多元醇。
該藥物制劑還可以含有防腐劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、調(diào)味劑、改變滲透壓的鹽、緩沖劑、掩蔽劑或者抗氧化劑。它們也可以含有其它在治療上有價值的物質(zhì)，包括除了式I的那些的另外的活性成分。
如上所述，本發(fā)明的化合物，包括式I的化合物，用于治療或控制細(xì)胞增殖疾病，特別是腫瘤疾病。這些化合物和含有所述化合物的制劑特別有效用于治療或控制實體瘤，如例如，乳腺瘤，結(jié)腸瘤，肺瘤和前列腺瘤。因此，本發(fā)明另外涉及通過向需要該治療的患者施用有效量的式I的化合物和/或其鹽來治療這些實體瘤的方法。
按照本發(fā)明的化合物的治療有效量是指有效預(yù)防、減輕或改善疾病癥狀或延長被治療的受試者的存活的化合物的量。治療有效量的測定在本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)。
按照本發(fā)明的化合物的治療有效量或劑量可以在廣泛范圍內(nèi)變化并且可以以本領(lǐng)域已知的方法測定。該劑量可以根據(jù)每個具體病例中的個別需要而調(diào)整，包括被施用的具體化合物，給藥途徑，治療的疾病，以及被治療的患者。通常，在向重量約70kg的成年人口服或腸胃外給藥的情形中，約10mg至約10,000mg，優(yōu)選約200mg至約1,000mg的日劑量應(yīng)當(dāng)是適當(dāng)?shù)?，盡管當(dāng)指示時可以超過上限。日劑量可以作為單劑量或分劑量施用，或者對于腸胃外給藥，它可以作為連續(xù)輸注施用。
實施例下列實施例舉例說明了合成本發(fā)明的化合物和制劑的優(yōu)選方法。
實施例1實施例1a5-(羥基甲基)-1，3-二氫嘧啶-2，4-二酮 在裝備有機械攪拌器、溫度計、冷凝器和氮-入口鼓泡器的2-L三頸燒瓶中裝入尿嘧啶(185.0g，1650mmol)(Aldrich)，低聚甲醛(61.50g，作為甲醛2050mmol)(Aldrich)，和氫氧化鉀(86.9％，59.95g，928.5mmol)(Aldrich)水溶液(1.445L)。將混合物在50-52℃下攪拌68小時。TLC分析顯示完全反應(yīng)。在60℃/14mmHg下濃縮至約500mL的體積后，用丙酮(500mL)稀釋殘渣。通過過濾收集產(chǎn)生的沉淀，用丙酮洗滌，通過抽吸干燥，然后在50℃/25mmHg抽吸以提供粗制5-(羥基甲基)-1，3-二氫嘧啶-2，4-二酮(250g)，其為白色固體。將合并的母液和洗液濃縮至約100mL的體積，加入鹽酸羥胺(27.52g，396.0mmol，Aldrich)在水(100mL)中的溶液。通過過濾收集產(chǎn)生的沉淀，用丙酮洗滌，然后通過抽吸干燥以提供第二次收獲的粗制5-(羥基甲基)-1，3-二氫嘧啶-2，4-二酮(34g)，其為白色固體。將兩批合并(244g，4％過夜)并且直接用于下一個步驟。
實施例1b2，4-二氯-5-(氯甲基)嘧啶
在裝備有機械攪拌器、添加漏斗、溫度計和氮-入口鼓泡器的1-L三頸燒瓶中裝入粗制5-(羥基甲基)-1，3-二氫嘧啶-2，4-二酮(50.25g，約340mmol)(來自以上實施例1a)，磷酰氯(164.8mL，1768mmol)(Aldrich)，和甲苯(100mL)。在10分鐘內(nèi)向該混合物中加入N，N-二異丙基乙胺(184.7mL，1060mmol)(Aldrich)，同時使用水浴保持混合物的溫度低于70℃。在加入完成后，去除冷卻浴并將混合物加熱至回流(113-116℃)1小時。通過蒸餾去除一些甲苯(約35mL)以將反應(yīng)混合物的溫度提高至120℃，在120-123℃下攪拌混合物5小時。TLC分析顯示反應(yīng)完成。在使混合物冷卻至室溫過夜后，在67分鐘內(nèi)將混合物小心加至攪拌的水(200mL)和乙酸異丙酯(150mL)的兩相混合物中，同時使用冰水冷卻保持溫度為17-21℃，用甲苯(4×150mL)萃取混合物。干燥合并的有機層(硫酸鈉)，過濾，然后減壓濃縮至干燥，以提供粗制的作為白色固體的2，4-二氯-5-(氯甲基)嘧啶，其含有極性雜質(zhì)。(產(chǎn)率56.1g，從尿嘧啶的83.6％的產(chǎn)率)。
將粗制2，4-二氯-5-(氯甲基)嘧啶(70.39g)溶解在二氯甲烷(80mL)中，將獲得的溶液過濾通過TLC級別的硅膠墊(100g)。然后用二氯甲烷∶己烷(1L，7∶3)洗滌硅膠，將合并的濾液和洗液減壓濃縮至干燥，提供作為白色固體的2，4-二氯-5-(氯甲基)嘧啶。(產(chǎn)率58.77g，83.5％的回收率，從尿嘧啶的69.8％的總產(chǎn)率)。該化合物是高度腐蝕性的。
實施例1c2，4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶 在裝備有磁力攪拌器、冷凝器和氮-入口鼓泡器的500-mL圓底燒瓶中裝入碘化鈉(38.5g，256.9mmol)(Aldrich)和丙酮(300mL)。在獲得澄清溶液后，一份加入2，4-二氯-5-(氯甲基)嘧啶(50.0g，253.2mmol)(來自以上實施例1b)。在室溫下攪拌20分鐘后，加熱混合物至回流15分鐘。NMR分析顯示98％的轉(zhuǎn)化。在冷卻至室溫后，將獲得的沉淀(氯化鈉)通過半燒結(jié)的玻璃漏斗過濾去除和用丙酮洗滌。將合并的濾液和洗液濃縮至約75g的重量。將獲得的2，4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶在丙酮中的濃縮液用甲苯(20mL)稀釋。在濃縮至約85g的重量以便去除殘余的丙酮后，將該濃縮的2，4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶甲苯溶液直接用于下一個步驟。
實施例1d[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧苯基)胺 在裝備有磁力攪拌器、溫度計和氮-入口鼓泡器的500-mL三頸燒瓶中裝入來自先前步驟的2，4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶(85g，約253.2mmol)(來自以上實施例1c)在甲苯(13.7mL)中的溶液和甲苯(96.3mL，因此總共大約110mL甲苯)。在用冰水浴冷卻后，加入對甲氧基苯胺(31.18g，253.2mmol)(Aldrich)。在攪拌30分鐘后，在8分鐘內(nèi)滴加氫氧化鈉(13.54g，331.7mmol)水溶液(50mL)，同時保持反應(yīng)混合物的溫度為10-15℃。加入己烷(55mL)，在10-15℃下攪拌混合物45分鐘，然后在室溫下22小時以提供淤漿。上清液的TLC分析顯示完全反應(yīng)。用水(100mL)稀釋淤漿并通過過濾收集固體，用冷水和冷(-50℃)甲醇(100mL)洗滌，通過抽吸干燥以提供[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧苯基)胺，其為灰白色固體；通過HPLC分析純度為97％。(產(chǎn)率59.87g，83.2％)。
實施例1eN-[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基]-N-(4-甲氧苯基)-苯基氨基-甲酰胺
在裝備有機械攪拌器、溫度計、冷凝器和氮-入口鼓泡器的500-mL三頸燒瓶中裝入[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧苯基)胺(59.6g，209.7mmol)(來自以上實施例1d)和叔丁基甲基醚(300mL)(Aldrich)。在加熱至55℃提供澄清溶液后，加入異氰酸苯酯(27.48g，230.7mmol)(Aldrich)并將混合物加熱至回流10小時。TLC分析顯示基本上完全反應(yīng)。在冷卻至室溫后，通過過濾收集產(chǎn)生的固體，用叔丁基甲基醚(100mL)洗滌，通過抽吸干燥以提供作為白色固體的N-[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基]-N-(4-甲氧苯基)(苯基氨基)甲酰胺；通過HPLC分析98.46％的純度。(產(chǎn)率78.8g，91.3％)。
實施例1f7-氯-3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 在裝備有磁力攪拌器、溫度計和氮-入口鼓泡器的500-mL三頸燒瓶中裝入N-[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基]-N-(4-甲氧苯基)(苯基氨基)甲酰胺(78.8g，195.4mmol)(來自以上實施例1e)和二氯甲烷(120mL)。在用冷水浴冷卻至16℃后，加入氫氧化鈉(14.04g，343.9mmol)水溶液(28mL)和40％的氫氧四丁基銨水溶液(1.0mL，3.8mmol)(Aldrich)。在20-24℃攪拌2小時后，加入另一份40％的氫氧四丁基銨水溶液(0.75mL，2.9mmol)。在攪拌1小時后，加入第三份40％的氫氧四丁基銨水溶液(0.75mL，2.9mmol)，在室溫下攪拌混合物2.3小時。TLC分析顯示基本上反應(yīng)完成。然后用濃鹽酸(15mL)和水(80mL)的混合物淬滅反應(yīng)。分離有機層，用水(90mL)洗滌，通過硫酸鈉干燥，在減壓下濃縮至大約140g的重量。將該殘渣溶解在甲苯(90mL)中，在減壓下將溶液濃縮至100g的重量。將獲得的7-氯-3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮的濃甲苯溶液直接用于下一個步驟。
實施例1g3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 在裝備有機械攪拌器、冷凝器和氮-入口鼓泡器的500-mL三頸燒瓶中裝入來自先前步驟的7-氯-3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(約50g，大約97.7mmol)(來自以上實施例1f)在甲苯溶液中的溶液，(70mL)，苯胺(22.75g，244.3mmol)(Fluka)，和鹽酸苯胺(0.2g，1.54mmol)(Aldrich)。將混合物在回流下(111-113℃)加熱2小時以提供淤漿。TLC分析顯示反應(yīng)完成。在冷卻至大約80℃后，加入水(50mL)，接著加入己烷(90mL)。在30分鐘內(nèi)允許獲得的混懸液冷卻至室溫以后，通過過濾收集固體，用水(100mL)和甲醇(2×45mL)洗滌，并通過抽吸干燥以提供粗制3-(4-甲氧基-苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，其為淡黃色固體；通過HPLC分析98.9％的純度。(產(chǎn)率40.5g，98％)。將該物質(zhì)溶解在熱乙酸(50mL)(約100℃)中。在冷卻至約70℃后，在幾分鐘內(nèi)加入甲醇(125mL)。將獲得的淤漿冷卻至45℃，通過過濾收集固體，用甲醇(50mL)洗滌，通過抽吸干燥以提供3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，其為白色固體；通過HPLC分析99.49％的純度。(產(chǎn)率38.2g，從N-[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基]-N-(4-甲氧苯基)(苯基氨基)甲酰胺的92.3％總產(chǎn)率)。
實施例1h3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮甲磺酸鹽 將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(7.50g，17.71mmol)(來自以上實施例1g)溶解在熱1，4-二噁烷(120mL)中，將溶液過濾通過玻璃濾器。在室溫下向澄清的濾液中滴加甲磺酸溶液(10mL)，然后將混合物在-15℃下靜置過夜。收集形成的晶體物質(zhì)，用1，4-二噁烷、甲醇和乙醚洗滌，在85℃下真空干燥過夜以產(chǎn)生3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮甲磺酸鹽，其為無色晶體。mp.245-251℃。(產(chǎn)率5.5g，59.8％)。
實施例2N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺
在裝備有磁力攪拌器、溫度計、冷凝器和氮-入口鼓泡器的250-mL三頸燒瓶中裝入3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(37.90g，89.50mmol)(來自以上實施例1g)，乙酸酐(45.3mL，481.5mmol)(J.T.Baker)和N，N-二異丙基乙胺(22.76mL，130.7mmol)(Aldrich)。將混合物在回流下(123-127℃)加熱2小時。TLC分析顯示基本上反應(yīng)完成。在60℃/18mmHg下去除揮發(fā)物以提供固體殘渣(大約69g)，其在67-70℃下溶解在丙酮(45mL)中。向獲得的溶液中緩慢加入己烷(50mL)，同時保持混合物的溫度稍微高于54℃，加入N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺(大約5mg)的晶種。將獲得的淤漿進一步用己烷(50mL)稀釋，同時保持混合物的溫度為約53℃。在冷卻至室溫后，通過過濾收集固體，用丙酮-己烷(1∶2，3×40mL)洗滌，通過抽吸簡短干燥以提供粗制產(chǎn)物(產(chǎn)率55g)。將該物質(zhì)懸浮在己烷(200mL)中并將獲得的淤漿加熱至回流(68-70℃)20分鐘。在冷卻至室溫后，通過過濾收集固體，用己烷(100mL)洗滌，通過抽吸提供N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺，其為灰白色固體；通過HPLC 98.5％的純度，含有1.07％3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率39.4g，94.6％)。
實施例3N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺 向3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(304.0mg，0.718mmol)(來自以上實施例1g)在吡啶(5mL)(Fisher)中的溶液加入丙酸酐(1.0mL，7.8mmol)(Aldrich)和4-二甲基氨基吡啶(45.0mg，0.37mmol)(Aldrich)。將混合物在回流下加熱1.5小時并冷卻至室溫。將它倒入冰(15g)中并攪拌5分鐘。用乙酸乙酯(15mL)萃取混合物。用水，5％鹽酸水溶液，和水洗滌有機層，干燥(Na2SO4)，過濾并減壓濃縮至干燥。將殘渣溶解在二氯甲烷中并過濾通過TLC級別的硅膠，用乙酸乙酯-己烷(V/V 1∶1)和乙酸乙酯洗滌。將濾液在減壓下濃縮至干燥。將殘渣溶解在乙醚中并用己烷緩慢稀釋。然后在減壓下去除乙醚。通過過濾收集固體，用己烷洗滌和通過抽吸干燥。將固體溶解在熱乙酸異丙酯(2mL)中，用己烷稀釋至渾濁。允許它在冷藏箱中冷卻4天。將獲得的混懸液減壓濃縮至干燥以提供N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺，其為白色固體。(產(chǎn)率270mg，78.4％)。
實施例4a(氯代甲氧基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯甲酰胺 在0℃下向3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(3.5g，8.26mmol)(來自以上實施例1g)和N，N-二異丙基乙胺(8.63mL，49.6mmol)(Aldrich)在二氯甲烷(50mL)中的溶液滴加新鮮氯甲酸氯甲酯(2.55mL，28.9mmol)(Lancaster)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時。用二氯甲烷稀釋混合物并用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并減壓濃縮。通過快速色譜法(Biotage)純化殘渣，用二氯甲烷中的5％乙醚洗滌以提供粗制(氯代甲氧基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯甲酰胺，其含有痕量3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮和其它雜質(zhì)。該物質(zhì)不進一步純化而立即使用。(產(chǎn)率3.28g，77％)。
實施例4b{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲酰基氧基}甲基乙酸酯 向(氯代甲氧基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯甲酰胺(3.23g，6.32mmol)(來自以上實施例4a)在二甲基甲酰胺(60mL)中的溶液中加入無水乙酸鈉(5.18g，63.2mmol)(Aldrich)和硫酸氫四丁基銨(3.22g，9.48mmol)(Aldrich)。在室溫下攪拌混合物18小時，然后用水稀釋和用乙酸乙酯-乙醚(3X，1∶1)萃取。用水和鹽水洗滌合并的有機相，干燥(MgSO4)，過濾和減壓濃縮。通過快速色譜法(Biotage)純化殘渣，用乙酸乙酯-己烷(1∶1和3∶2)洗脫以提供{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲?；趸鶀甲基乙酸酯，其為白色泡沫。(產(chǎn)率3.20g，93.8％)。
實施例5a{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲酰基氧基}甲基2-(二甲基氨基)乙酸酯
在氮氣下向(氯代甲氧基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯甲酰胺(300mg，0.58mmol)(來自以上實施例4a)在無水四氫呋喃(15mL)中的溶液中加入N，N-二甲基甘氨酸鈉鹽(300mg，2.1mmol，通過用等當(dāng)量的氫氧化鈉處理酸(Aldrich)制備鈉鹽)，接著用硫酸氫四丁基銨(329mg，0.87mmol)(Aldrich)處理。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌72小時。過濾混合物和通過快速色譜法(Biotage，40 S柱)純化固體，含有0.1％三乙胺的二氯甲烷中的16％甲醇作為溶劑，然后相同溶劑系統(tǒng)中的30％甲醇。含有產(chǎn)品的合并級分從甲醇-二氯甲烷-己烷中重結(jié)晶以提供{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲?；趸鶀甲基2-(二甲基氨基)乙酸酯。(產(chǎn)率166mg，49％)。
(M.p.172℃；MS HR-ES[M+H]+-583.2306(實驗值)583.2300(理論值))。
實施例5b{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲?；趸鶀甲基2-(二甲基氨基)乙酸酯鹽酸鹽 將{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲?；趸鶀甲基2-(二甲基氨基)乙酸酯(144mg，0.247mmol)(來自以上實施例5a)溶解在四氫呋喃(3mL)、乙腈(2mL)和水(15滴)的混合物中。將其冷卻至0℃。加入含水1N鹽酸(272μL，0.27mmol)并將反應(yīng)在室溫下攪拌4小時。用水(10mL)稀釋混合物并在減壓下去除有機溶劑。將水溶液凍干以提供{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基-氨基甲酰基氧基}甲基2-(二甲基氨基)乙酸酯鹽酸鹽，其為白色固體。
實施例6aFMOC-甘氨酰氟 將FMOC-甘氨酸(5.02g，16.82mmol)(Bachem)溶解在二氯甲烷(85mL)中。在室溫下依次加入吡啶(1.36mL，16.82mmol)(Aldrich)和氰尿酰氟(2.27g，16.82mmol)(Aldrich)，攪拌混合物過夜。加入冰冷水(100mL)和過濾獲得的淤漿。將濾液倒入分液漏斗和分層。通過無水硫酸鈉干燥有機層，過濾，和減壓濃縮以提供FMOC-甘氨酰氟，其為白色粉末。(產(chǎn)率3.67g，73％)。
實施例6b2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺乙酸鹽 將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(150mg，0.35mmol)(來自以上實施例1g)溶解在乙腈(2mL)中。在室溫下加入FMOC-甘氨酰氟(265mg，0.89mmol)(來自以上實施例6a)，在微波裝置(Smith SynthesizerTM)中將混合物加熱至120℃30分鐘。將溶液過濾通過活化的堿性氧化鋁塞(Alfa Aesar)和用乙酸乙酯洗滌氧化鋁。將溶液在減壓下濃縮和將殘渣溶解在乙腈-哌啶(Aldrich)(10∶1)的混合物中。在室溫下10分鐘后，濃縮混合物和用乙醚-己烷(1∶1)研磨殘渣。通過過濾收集沉淀和在真空下45℃干燥。將粗產(chǎn)物通過反相HPLC(水-乙腈梯度，溶劑中含有0.1％乙酸)純化以提供2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺乙酸鹽。(產(chǎn)率63mg，34％)。
實施例6c2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺鹽酸鹽 將2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺乙酸鹽(126mg，0.24mmol)(來自以上實施例6b)溶解在二噁烷(4mL)(Aldrich)中的4N鹽酸中。將該溶液保持在室溫下15分鐘，然后濃縮至干燥。用乙醚研磨殘渣，通過抽吸過濾收集固體以提供2-氨基-N-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺鹽酸鹽。(產(chǎn)率124mg，100％)。
實施例7aFMOC-L-甲硫氨酰氟
將FMOC-L-甲硫氨酰氟(5.00g，13.46mmol)(Bachem)溶解在二氯甲烷(70mL)中。在室溫下依次加入吡啶(1.09mL，13.46mmol)(Aldrich)和氰尿酰氟(1.82g，13.46mmol)(Aldrich)，攪拌混合物過夜。加入冰冷水(100mL)并過濾獲得的淤漿。將濾液倒入分液漏斗中并分離層。通過無水硫酸鈉干燥有機層，過濾，和在減壓下濃縮以提供FMOC-L-甲硫氨酰氟，其為白色粉末。(產(chǎn)率3.7g.，74％)。
實施例7b(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺手性 將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(150mg，0.35mmol)(來自以上實施例1g)溶解在乙腈(2mL)中。在室溫下加入FMOC-L-甲硫氨酰氟(420mg，1.12mmol)(來自以上實施例7a)，在微波裝置(Smith SynthesizerTM)中將混合物加熱至120℃10分鐘。將溶液過濾通過活化的堿性氧化鋁塞(Alfa Aesar)和用乙酸乙酯洗滌氧化鋁。將濾液在減壓下濃縮和通過反相HPLC純化殘渣以產(chǎn)生FMOC保護的胺(228mg，0.29mmol)。將該衍生物溶解在乙腈-哌啶(Aldrich)(10∶1，2mL)中。在室溫下10分鐘后，將混合物濃縮和用乙醚-己烷(1∶1)研磨殘渣。通過過濾收集沉淀和在45℃真空干燥以提供(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺，其為白色固體。(產(chǎn)率120mg，62％)。
實施例7c(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺乙酸鹽手性 將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(100mg，0.24mmol)(來自以上實施例1g)溶解在乙腈(1.5mL)中。在室溫下加入FMOC-L-甲硫氨酰氟(445mg，1.18mmol)(來自以上實施例7a)，在微波裝置(Smith SynthesizerTM)中將混合物加熱至120℃10分鐘。將溶液過濾通過活化的堿性氧化鋁塞(Alfa Aesar)和用乙酸乙酯洗滌氧化鋁。將濾液在減壓下濃縮和通過反相HPLC純化殘渣以產(chǎn)生FMOC保護的胺(42mg，0.05mmol)。將該衍生物溶解在乙腈-哌啶(Aldrich)(10∶1，1.1mL)中。在室溫下10分鐘后，將混合物濃縮和通過反相HPLC(水-乙腈梯度，溶劑中含有0.1％乙酸)純化殘渣以提供(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺乙酸鹽。(產(chǎn)率25mg，17％)。
實施例7d(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺鹽酸鹽手性 將(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺(350mg，0.63mmol)(來自以上實施例7b)溶解在二噁烷(6mL)(Aldrich)中的4N鹽酸中。將均相溶液保持在室溫15分鐘，然后濃縮至于燥。用乙醚研磨殘渣。通過抽吸過濾收集沉淀，用乙醚洗滌和在室溫下在真空室中干燥以提供(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺鹽酸鹽，其為灰白色固體。(產(chǎn)率368mg，98％)。
實施例8aFMOC-L-苯丙氨酰氟 將FMOC-L-苯丙氨酸(17g，44mmol)(Bachem)溶解在二氯甲烷(100mL)中。在室溫下依次加入吡啶(3.55mL，44mmol)(Aldrich)和氰尿酰氟(6g，44mmol)(Aldrich)并攪拌混合物3.5小時。加入冰冷水(300mL)并過濾獲得的淤漿。將濾液倒入分液漏斗和分層。通過無水硫酸鈉干燥有機層，過濾和減壓濃縮以提供FMOC-L-苯丙氨酰氟，其為白色固體。(產(chǎn)率13.6g，80％)。
實施例8b(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-3-苯基-N-苯基丙酰胺手性
將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(450mg，1.05mmol)(來自以上實施例1g)溶解在乙腈(6mL)中。在室溫下加入FMOC-L-苯丙氨酰氟(2.1g，5.25mmol)(來自以上實施例8a)，在微波裝置(Smith SynthesizerTM)中將混合物加熱至120℃10分鐘。將溶液過濾通過活化的堿性氧化鋁塞(Alfa Aesar)和用乙酸乙酯洗滌氧化鋁。將濾液在減壓下濃縮和用1∶1乙醚-己烷研磨殘渣。通過抽吸過濾收集淡橙色的沉淀，通過反相HPLC純化以產(chǎn)生FMOC保護的胺(232mg，0.29mmol)。將該中間體溶解在10∶1乙腈-哌啶(Aldrich)(5mL)中。在室溫下10分鐘后，濃縮混合物并用1∶1乙醚-己烷研磨殘渣。通過過濾收集沉淀和在45℃下真空干燥以提供(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-3-苯基-N-苯基丙酰胺，其為白色固體。(產(chǎn)率110mg，20％)。
實施例8c(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-3-苯基-N-苯基丙酰胺鹽酸鹽手性 將(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-3-苯基-N-苯基丙酰胺(184mg，0.32mmol)(來自以上實施例8b)溶解在二噁烷(4mL)(Aldrich)的4N鹽酸中。將均相溶液保持在室溫15分鐘，然后濃縮至干燥。用乙醚研磨殘渣。通過抽吸過濾收集沉淀，和用乙酸乙酯攪拌過夜。通過抽吸過濾收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌和在30℃干燥以提供(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-3-苯基-N-苯基丙酰胺鹽酸鹽，其為灰白色固體。(產(chǎn)率125mg，64％)。
實施例9aFMOC-L-亮氨酰氟 將FMOC-L-亮氨酸(5g，14.14mmol)(Bachem)溶解在乙腈(70mL)中。在室溫下依次加入吡啶(1.14mL，14.14mmol)(Aldrich)和氰尿酰氟(1.91g，14.14mmol)(Aldrich)，攪拌混合物過夜。加入冰冷水(300mL)并過濾獲得的淤漿。將濾液倒入分液漏斗并分層。通過無水硫酸鈉干燥有機層，過濾和減壓濃縮以產(chǎn)生FMOC-L-亮氨酰氟，其為白色粉末。(產(chǎn)率4.57g，91％)。
實施例9b(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲基-N-苯基戊酰胺乙酸鹽手性 將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(400mg，0.93mmol)(來自以上實施例1g)溶解在乙腈(4.5mL)中。在微波裝置(Smith SynthesizerTM)中將混合物加熱至120℃10分鐘。將溶液過濾通過活化的堿性氧化鋁塞(Alfa Aesar)和用乙酸乙酯洗滌氧化鋁。將濾液在減壓下濃縮和通過反相HPLC純化以產(chǎn)生FMOC保護的胺(323mg，0.43mmol)。將該中間體溶解在10∶1乙腈-哌啶(Aldrich)(4mL)中。在室溫下10分鐘后，濃縮混合物和用1∶1乙醚-己烷研磨殘渣。通過研磨收集沉淀和在真空下45℃干燥，并通過反相HPLC(水-乙腈梯度，溶劑中含有0.1％乙酸)純化以提供(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲基-N-苯基戊酰胺乙酸鹽，其為白色固體。(產(chǎn)率96mg，17％)。
實施例9c(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲基-N-苯基戊酰胺鹽酸鹽手性 將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(600mg，1.42mmol)(來自以上實施例1g)溶解在乙腈(8mL)中。在室溫下加入FMOC-L-亮氨酰氟(629mg，1.77mmol)(來自以上實施例9a)，在微波裝置(Smith SynthesizerTM)中將混合物加熱至120℃10分鐘。將溶液過濾通過活化的堿性氧化鋁塞(Alfa Aesar)和用乙酸乙酯洗滌氧化鋁。將濾液在減壓下濃縮和通過反相HPLC純化以產(chǎn)生FMOC保護的胺(562mg，0.74mmol)。將該中間體溶解在10∶1乙腈-哌啶(Aldrich)(4mL)中。在室溫下10分鐘后，濃縮混合物和用乙醚研磨殘渣。通過過濾收集沉淀和在45℃干燥，然后溶解在二噁烷(4mL)(Aldrich)中的4N鹽酸中。減壓濃縮溶液并用乙醚研磨殘渣以提供(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲基-N-苯基戊酰胺鹽酸鹽。(產(chǎn)率333mg，57％)。
實施例10aN-FMOC-O-叔丁基-L-酪氨酰氟 將N-FMOC-O-叔丁基-L-酪氨酸(5g，10.88mmol)(Bachem)溶解在二氯甲烷(50mL)中。在室溫下依次加入吡啶(0.88mL，10.88mmol)(Aldrich)和氰尿酰氟(1.47g，10.88mmol)(Aldrich)，攪拌混合物5小時。加入冰冷水(100mL)并過濾獲得的淤漿。將濾液倒入分液漏斗中并分層。通過無水硫酸鈉干燥有機層，過濾和減壓濃縮，以提供N-FMOC-O-叔丁基-L-酪氨酰氟，其為白色粉末。(產(chǎn)率4.43g，88％)。
實施例10b(2S)-2-氨基-3-(4-羥基苯基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺鹽酸鹽手性 將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(600mg，1.41mmol)(來自以上實施例1g)溶解在乙腈(4.5mL)中。室溫下加入N-FMOC-O-叔丁基-L-酪氨酰氟(3.26g，7.06mmol)(來自以上實施例10a)，在微波裝置(Smith SynthesizerTM)中將混合物加熱至120℃10分鐘。將溶液過濾通過活化的堿性氧化鋁塞(Alfa Aesar)和用乙酸乙酯洗滌氧化鋁。將濾液在減壓下濃縮和通過反相HPLC純化以產(chǎn)生FMOC叔丁基醚保護的衍生物(648mg，0.75mmol)。將該中間體溶解在1∶1的二氯甲烷-三氟乙酸(Aldrich)中。在室溫下1小時后，濃縮混合物和用乙醚研磨殘渣。收集該沉淀，在減壓下干燥和用10∶1乙腈-哌啶(Aldrich)(5mL)處理1小時。濃縮該溶液和用1∶1乙醚-己烷研磨固體殘渣。收集該固體，減壓干燥，和溶解在二噁烷(10mL)(Aldrich)中的4N鹽酸中。濃縮接著從乙醚中沉淀提供(2S)-2-氨基-3-(4-羥基苯基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基-丙酰胺鹽酸鹽，其為黃色固體。(產(chǎn)率216mg，25％)。
實施例11a雙-FMOC-L-賴氨酰氟 將雙-FMOC-L-賴氨酸(5g，8.46mmol)(Bachem)溶解在二氯甲烷(50mL)中。室溫下依次加入吡啶(0.69mL，8.46mmol)(Aldrich)和氰尿酰氟(1.14g，8.46mmol)(Aldrich)，攪拌混合物過夜。加入冰冷水(100mL)并過濾獲得的淤漿。將濾液倒入分液漏斗中并分層。通過無水硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓濃縮以提供雙-FMOC-L-賴氨酰氟，其為白色粉末。(產(chǎn)率1.14g，23％)。
實施例11b(2S)-2，6-二氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基己酰胺二鹽酸鹽手性 將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(150mg，0.35mmol)(來自以上實施例1g)溶解在乙腈(2mL)中。在室溫下加入雙-FMOC-L-賴氨酰氟(1.05g，1.77mmol)(來自以上實施例11a)，在微波裝置(Smith SynthesizerTM)中將混合物加熱至120℃ 10分鐘。將溶液過濾通過活化的堿性氧化鋁塞(Alfa Aesar)和用乙酸乙酯洗滌氧化鋁。將濾液在減壓下濃縮和通過反相HPLC純化以產(chǎn)生-FMOC保護的二-胺(36mg，0.036mmol)。將該中間體溶解在10∶1乙腈-哌啶(Aldrich)(1mL)中。在室溫下10分鐘后，濃縮混合物和用1∶1乙醚-己烷研磨殘渣。通過過濾收集固體物質(zhì)，減壓干燥，然后溶解在二噁烷(5mL)(Aldrich)中的4N鹽酸中。減壓下濃縮接著從乙醚中沉淀提供(2S)-2，6-二氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基己酰胺二-鹽酸鹽，其為黃色固體。(產(chǎn)率25mg，10％)。
實施例12aFMOC-L-色氨酰氟 將FMOC-L-色氨酸(5g，11.72mmol)(Bachem)溶解在二氯甲烷(60mL)中。在室溫下依次加入吡啶(0.95mL，11.72mmol)(Aldrich)和氰尿酰氟(1.58g，11.72mmol)(Aldrich)，攪拌混合物6.5小時。加入冰冷水(100mL)并過濾獲得的淤漿。將濾液倒入分液漏斗中并分層。通過無水硫酸鈉干燥有機層，過濾和減壓濃縮以提供FMOC-L-色氨酰氟，其為米色粉末。(產(chǎn)率4.36g，87％)。
實施例12b(2S)-2-氨基-3-吲哚-3-基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺鹽酸鹽手性 將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(600mg，1.41mmol)(來自以上實施例1g)溶解在乙腈(6mL)中。室溫下加入FMOC-L-色氨酰氟(3.02g，7.06mmol)(來自以上實施例12a)，在微波裝置(Smith SynthesizerTM)中將混合物加熱至120℃10分鐘。將溶液過濾通過活化的堿性氧化鋁塞(Alfa Aesar)和用乙酸乙酯洗滌氧化鋁。將濾液在減壓下濃縮和通過反相HPLC純化以產(chǎn)生FMOC保護的胺(575mg，0.69mmol)。將該中間體溶解在10∶1乙腈-哌啶(Aldrich)(3mL)中。在室溫下10分鐘后，濃縮混合物和用1∶1乙醚-己烷研磨殘渣。通過過濾收集固體物質(zhì)，減壓干燥，然后溶解在二噁烷(20mL)(Aldrich)中的4N鹽酸中。減壓下濃縮接著從乙腈中沉淀提供(2S)-2-氨基-3-吲哚-3-基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺鹽酸鹽，其為黃色固體。(產(chǎn)率122mg，14％)。在濃縮母液和用乙醚研磨后獲得第二次收獲的產(chǎn)品。(產(chǎn)率285mg，31％)。
實施例13aN-FMOC-O-叔丁基-L-絲氨酰氟 將N-FMOC-O-叔丁基-L-絲氨酸(10g，26.07mmol)(Bachem)溶解在二氯甲烷(135mL)中。室溫下依次加入吡啶(2.11mL，26.07mmol)(Aldrich)和氰尿酰氟(3.52g，26.07mmol)(Aldrich)，攪拌混合物過夜。加入冰冷水(100mL)并過濾獲得的淤漿。將濾液倒入分液漏斗中并分層。通過無水硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓濃縮以提供N-FMOC-O-叔丁基-L-絲氨酰氟，其為無色油，靜置后固化。(產(chǎn)率9.79g.，97％)。
實施例13b(2S)-2-氨基-3-羥基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺手性 將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(300mg，0.71mmol)(來自以上實施例1g)溶解在乙腈(4mL)中。室溫下加入N-FMOC-O-叔丁基-L-絲氨酰氟(1.38g，3.58mmol)(來自以上實施例13a)，在微波裝置(Smith SynthesizerTM)中將混合物加熱至120℃10分鐘。將溶液過濾通過活化的堿性氧化鋁塞(Alfa Aesar)和用乙酸乙酯洗滌氧化鋁。將濾液在減壓下濃縮和通過反相HPLC純化以產(chǎn)生FMOC-叔丁基保護的衍生物(214mg，0.27mmol)。該中間體用1∶1二氯甲烷-三氟乙酸(Aldrich)(10mL)處理1小時。濃縮該混合物并通過反相HPLC(97mg，0.13mmol)純化殘渣。將該FMOC衍生物溶解在10∶1乙腈-哌啶(Aldrich)(2mL)中。在室溫下10分鐘后，濃縮混合物和用乙醚研磨殘渣。通過過濾收集固體物質(zhì)，減壓干燥，然后溶解在二噁烷(20mL)(Aldrich)中的4N鹽酸中。減壓濃縮接著從乙醚中沉淀提供(2S)-2-氨基-3-羥基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺，其為黃色固體。(產(chǎn)率60mg，15％)。
實施例14aFMOC-D-甲硫氨酰氟 將FMOC-D-甲硫氨酸(5.00g，13.46mmol)(Bachem)溶解在二氯甲烷(70mL)中。室溫下依次加入吡啶(1.09mL，13.46mmol)(Aldrich)和氰尿酰氟(1.82g，13.46mmol)(Aldrich)，攪拌混合物4小時。加入冰冷水(100mL)，過濾獲得的淤漿。將濾液倒入分液漏斗中并分離層。通過無水硫酸鈉干燥有機層，過濾，和減壓濃縮以提供FMOC-D-甲硫氨酰氟，其為白色粉末。(產(chǎn)率3.7g.，74％)。
實施例14b(2R)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺鹽酸鹽手性 將3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(300mg，0.71mmol)(來自以上實施例1g)溶解在乙腈(4mL)中。室溫下加入FMOC-D-甲硫氨酰氟(1.32g，3.54mmol)(來自以上實施例14a)，在微波裝置(Smith SynthesizerTM)中將混合物加熱至120℃10分鐘。將溶液過濾通過活化的堿性氧化鋁塞(AlfaAesar)和用乙酸乙酯洗滌氧化鋁。將濾液在減壓下濃縮和通過反相HPLC純化以產(chǎn)生FMOC保護的胺(242mg，0.31mmol)。將該中間體溶解在10∶1乙腈-哌啶(Aldrich)(5mL)中。在室溫下1小時后，濃縮該混合物并用乙醚研磨殘渣。通過過濾收集固體物質(zhì)，通過反相HPLC純化，然后溶解在二噁烷(10mL)(Aldrich)中的4N鹽酸中30分鐘。將均相溶液減壓濃縮并用乙醚研磨殘渣。通過抽吸過濾收集沉淀和減壓干燥以提供(2R)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺鹽酸鹽，其為米色固體。(產(chǎn)率20mg，5％)。
實施例15{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲酰基氧基}甲基哌啶-4-羧酸酯三氟乙酸鹽
在氮氣氛下向(氯代甲氧基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯甲酰胺(200mg，0.39mmol)(來自以上實施例4a)溶解在無水四氫呋喃中的溶液中加入BOC-異哌啶甲酸鈉鹽(356mg，1.4mmol)(356mg，1.4mmol)[通過用一當(dāng)量的NaOH處理酸(Bachem)制備的鈉鹽]，接著用硫酸氫四丁基銨(220mg，0.582mmol)(Aldrich)處理。室溫攪拌反應(yīng)22小時。TLC顯示原物質(zhì)仍然存在。加入另一份BOC-異哌啶甲酸鈉鹽(178mg，0.7mmol)和硫酸氫四丁基銨(110mg，0.75mmol)，室溫下攪拌反應(yīng)另外23小時。用氮氣流吹干溶劑，粗反應(yīng)混合物在二氯甲烷和水之間分配。用水和鹽水洗滌有機層并通過硫酸鎂干燥，然后過濾和減壓濃縮。通過快速色譜法(Biotage，40 S柱)純化保護的中間體，用二氯甲烷中的10％甲醇，然后15和20％的甲醇作為溶劑以提供BOC保護的產(chǎn)物。(產(chǎn)率259mg，94％)。
將BOC保護的產(chǎn)物(235mg，0.33mmol)溶解在無水二氯甲烷(7.5mL)和三氟乙酸(2mL)中，在室溫下攪拌3小時。在氮氣流下濃縮反應(yīng)混合物。通過快速色譜法(Biotage，40 S柱)純化殘渣，使用二氯甲烷中的20％，然后30％甲醇以提供{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲?；趸鶀甲基哌啶-4-羧酸三氟乙酸鹽。(產(chǎn)率121mg，50％)。從二氯甲烷-乙醚中重結(jié)晶產(chǎn)物。(Mp-88-90℃)。
實施例16N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7基)]-N-苯基戊酰胺 在氬氣下向3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.20g，0.47mmol)(來自以上實施例1g)在無水二氯甲烷(10mL)中的溶液加入戊酰氯(0.14mL，1.18mmol)(Aldrich)和N，N-二異丙基乙胺(0.41mL，2.36mmol)(Aldrich)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物1天。然后用乙酸乙酯稀釋混合物，用1N HCl水溶液、水、飽和碳酸鈉水溶液和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾和濃縮。通過快速色譜法純化殘渣，用乙酸乙酯/己烷(3∶2，V/V)洗脫以提供N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基戊酰胺，其為白色泡沫。(產(chǎn)率0.23g，96％)。
實施例17N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丁酰胺 在氬氣下向3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.20g，0.47mmol)(來自以上實施例1g)在無水二氯甲烷(10mL)中的溶液加入丁酰氯(0.12mL，1.18mmol)(Aldrich)和N，N-二異丙基乙胺(0.41mL，2.36mmol)(Aldrich)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物4小時。然后用乙酸乙酯稀釋混合物，用1N HCl水溶液、水、飽和碳酸鈉水溶液和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾和濃縮。通過快速色譜法純化殘渣，用乙酸乙酯/己烷(3∶2，V/V)洗脫以提供N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丁酰胺，其為白色泡沫。(產(chǎn)率0.23g，100％)。
實施例187-[(4-羥基苯基)氨基]-3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
將7-氯-3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.15g，0.41mmol)(來自以上實施例1f)和4-氨基-苯酚(57.8mg，0.53mmol)(Aldrich)在2-丙醇(3.5mL)中的溶液放置在微波反應(yīng)器(Smith SynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃加熱10分鐘。過濾形成的沉淀，用乙醇洗滌和干燥以提供7-[(4-羥基苯基)氨基]-3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率0.12g，67％)。
實施例19a1-硝基-4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯 向4-硝基苯酚(5.0g，35.9mmol)(Aldrich)在二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入咪唑(3.18g，46.7mmol)(Aldrich)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(6.49g，43.1mmol)(Avocado Research Chemicals Ltd.)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物1天。TLC分析顯示原材料仍然存在。加入另一份叔丁基二甲基甲硅烷基氯(1.0g，6.63mmol)，室溫下攪拌混合物另外1天。減壓下濃縮反應(yīng)混合物。將殘渣溶解在乙酸乙酯(200mL)中，用水(100mL)和含水1NHCl(80mL)的混合物洗滌。然后用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌有機層，干燥(MgSO4)，過濾和濃縮。通過快速色譜法純化殘渣，用乙酸乙酯/己烷(1∶9，V/V)洗脫以提供1-硝基-4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯。(產(chǎn)率7.8g，86％)。
實施例19b4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基胺 將1-硝基-4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯(7.8g，30.8mmol)(來自以上實施例19a)和10％Pd/C(0.70g)(Aldrich)在乙酸乙酯(100mL)中的溶液氫化1天。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，并濃縮。通過快速色譜法純化殘渣，用乙酸乙酯/己烷洗脫(1∶9 V/V)以提供4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基胺。(產(chǎn)率6.7g，97％)。
實施例19c3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-{[4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基]氨基}-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將7-氯-3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.20g，0.55mmol)(來自以上實施例1f)和4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基胺(0.16g，0.71mmol)(來自以上實施例19b)在2-丙醇(4mL)中的溶液放置在微波反應(yīng)器(Smith SynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃加熱10分鐘。過濾形成的沉淀，用2-丙醇洗滌和干燥以提供3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-{[4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基]氨基}-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率0.28g，93％)。
實施例19dN-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-[4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基]乙酰胺 在氬氣下向3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-{[4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基]氨基}-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.28g，0.51mmol)(來自以上實施例19c)和N，N-二異丙基乙胺(0.44mL，2.55mmol)(Aldrich)在無水二氯甲烷(10mL)中的溶液加入乙酰氯(0.09mL，1.26mmol)(Aldrich)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物4小時。用二氯甲烷稀釋混合物并用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾和濃縮。通過快速色譜法純化殘渣，用乙酸乙酯/己烷(3∶7，然后2∶3，V/V)洗脫，提供N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-[4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基]乙酰胺。(產(chǎn)率0.18g，60％)。
實施例19eN-(4-羥基苯基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]乙酰胺
在氬氣下向N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-[4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基]乙酰胺(0.17g，0.29mmol)(來自以上實施例19d)在無水四氫呋喃(5mL)中的溶液加入氟化四丁基銨(四氫呋喃中的1.0M溶液，0.43mL，0.43mmol)(Aldrich)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物4小時。濃縮混合物，通過快速色譜法純化殘渣，用乙酸乙酯/己烷(4∶1 V/V)和乙酸乙酯洗脫，提供N-(4-羥基苯基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]乙酰胺。(產(chǎn)率73mg，52％)。
實施例203-(4-甲氧苯基)-7-[(4-甲氧苯基)氨基]-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將7-氯-3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-1，3，4-三氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.15g，0.41mmol)(來自以上實施例1f)和對甲氧基苯胺(65mg，0.53mmol)(Aldrich)在2-丙醇(3.5mL)中的溶液放置在微波反應(yīng)器(Smith SynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃加熱10分鐘。過濾形成的沉淀，用2-丙醇洗滌并干燥以提供3-(4-甲氧苯基)-7-[(4-甲氧苯基)氨基]-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率0.18g，97％)。
實施例21N-(4-甲氧苯基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]乙酰胺
在氬氣下向3-(4-甲氧苯基)-7-[(4-甲氧苯基)氨基]-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.10g，0.22mmol)和N，N-二異丙基-乙胺(0.19mL，1.1mmol)(來自以上實施例20)在無水二氯甲烷(10mL)中的溶液加入乙酰氯(0.04mL，0.55mmol)(Aldrich)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物過夜。然后用二氯甲烷稀釋混合物并用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。通過快速色譜法純化殘渣，用乙酸乙酯/己烷(7∶3 V/V)洗脫以提供N-(4-甲氧苯基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]乙酰胺。(產(chǎn)率24mg，22％)。
抗增殖活性本發(fā)明化合物的抗增殖活性在以下實施例22和23中舉例說明。這些活性表明本發(fā)明的化合物在治療癌癥、特別是實體瘤如乳腺瘤和結(jié)腸瘤中有效。
實施例22激酶測定為了測定KDR，F(xiàn)GFR，EGFR，和PDGFR活性的抑制，使用HTRF(均勻時間分辨熒光)測定進行激酶測定。該測定在A.J.Kolb等，DrugDiscovery Today，1998，3(7)，p333中描述。
在激酶反應(yīng)之前，將重組EEE-標(biāo)記的KDR在激活緩沖液(50mMHEPES，pH 7.4，1mM DTT，10％甘油，150mM NaCl，0.1mM EDTA，26mMMgCl2，和4mM ATP)的存在下活化。將酶在4℃溫育1小時。
激酶活性測定在96-孔聚乙烯板(Falcon)中進行，每孔中總體積為90μl。每孔含有1μM KDR底物(生物素-EEEEYFELVAKKKK)，1nM活化的KDR，和具有8個測定濃度之一的試驗化合物，測定濃縮范圍為100μM-128pM(1∶5連續(xù)稀釋)。激酶活性測定在100mM HEPES，pH7.4，1mMDTT，0.1mM Na2VO4，25mM MgCl2，50mM NaCl(來自KDR貯液)，1％DMSO(來自化合物)，0.3mM ATP(Km濃度)和0.02％BSA的存在下進行。反應(yīng)在37℃下溫育30分鐘。為了終止KDR反應(yīng)，將72μL反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到含有18μL顯示緩沖液(20mM EDTA，50mM HEPES，pH7.4，0.02％BSA，10nM Eu-標(biāo)記的抗-pY抗體(終濃度2nM)，和100nM鏈霉抗生物素(終濃度20nM))的STOP板。在混合后，將35μL溶液轉(zhuǎn)移到384-孔黑板(Costar)的雙孔中，在Wallac Victor 5讀數(shù)器上在615/665nm下讀取。
如上關(guān)于KDR活性測定所述進行FGFR，EGFR，和PDGFR活性測定，不同之處如下。GST-標(biāo)記的FGFR酶在室溫下在下列激活緩沖液中活化1小時100mM HEPES，pH7.4，50mM NaCl，20mM MgCl2，和4mM ATP。使用1μM底物(生物素-EEEEYFELV)，1.5nM活化FGFR，和試驗化合物，在100mM HEPES，1mM DTT，0.4mM MgCl2，0.4mM MnCl2，50mM NaCl，1％DMSO，10μM ATP(對于FGFR，Km＝8.5μM)，0.1mM Na2VO4，和0.02％BSA的存在下進行激酶活性測定，總體積為90μL。測定其余部分以與KDR測定相同的方式進行。
用1μM底物(生物素-EEEEYFELV)，1.5nM EGFR，試驗化合物，100mM HEPES，pH7.4，1mM DTT，5mM MgCl2，2mM MnCl2，1％DMSO，0.5μM ATP(對于EGFR的Km)，0.1mM Na2VO4，和0.02％BSA進行EGFR激酶活性測定。測定其余部分以與KDR測定相同的方式進行。
用1μM底物(生物素-EEEEYFELV)，1.0nM PDGFR，試驗化合物，100mM HEPES，pH7.4，1mM DTT，5mM MgCl2，2mM MnCl2，1％DMSO，2.3μM ATP(對于PDGFR的Km)，0.1mM Na2VO4，和0.02％BSA進行PDGFR激酶活性測定。測定其余部分以與KDR測定相同的方式進行。
從雙份數(shù)據(jù)中測定化合物IC50值，并通過使用Excel和擬合數(shù)據(jù)至方程Y＝[(a-b)/{1+(X/c)d]+b來計算，其中a和b分別是在沒有試驗抑制劑化合物存在下和在極大量的抑制劑試驗化合物存在下的酶活性，c是IC50，d是化合物應(yīng)答的斜率常數(shù)(hill constant)。IC50值是在所述試驗條件下降低50％酶活性的試驗化合物的濃度。
前述體外實驗結(jié)果，包括IC50值在以下表1中列出。
表1酶抑制的IC50
實施例23VEGF和FGF-刺激的HUVEC增殖測定本發(fā)明試驗化合物在基于細(xì)胞的測定中的增殖活性通過使用BrdU試劑盒(Roche Biochemicals 1-647-229)的BrdU測定評估。將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Clonetics CC-2519)培養(yǎng)在EGM-2(Clonetics CC-3162)培養(yǎng)基中并以每孔10000個細(xì)胞接種在96-孔平低板(Costar 3595)的體積為200μL的EGM-2(Clonetics CC-3162)培養(yǎng)基中過夜。在37℃下5％CO2培養(yǎng)24小時后，通過抽吸緩慢去除溫育培養(yǎng)基，用300μL預(yù)熱的EBM-2(CloneticsCC-3156)洗滌各孔的內(nèi)容物，該EBM-2含有50μg/mL的慶大霉素和50ng/mL兩性霉素-B(Clonetics CC-4083)。隨后，再次吸出剩余的培養(yǎng)基和用160μl/孔的缺血清培養(yǎng)基(EBM-2補充1％熱滅活FBS(CloneticsCC-4102)，50μg/mL慶大霉素和50ng/mL兩性霉素-B(Clonetics CC-4083)，10單位/mL的Wyeth-Ayerst肝素(NDC0641-0391-25)，和2mM L-谷氨酰胺(GIBCO 25030-081)替換。在使細(xì)胞缺乏血清24小時后，向適當(dāng)細(xì)胞中加入20μL 10X試驗濃度的在含有2.5％DMSO的血清缺乏培養(yǎng)基中的試驗化合物。對照細(xì)胞含有20μL含有2.5％DMSO的血清缺乏培養(yǎng)基。將平板返回培養(yǎng)箱2小時。在將細(xì)胞與試驗化合物預(yù)溫育2小時后，加入20μL10X測定濃度的稀釋在血清缺乏培養(yǎng)基中的生長因子，50ng/mL的FGF，或200ng/mL的VEGF(R & D systems 293-VE)。測定中FGF的終濃度為5ng/mL，測定中VEGF的終濃度為20ng/mL。無生長因子的對照孔含有20ng/孔的血清缺乏培養(yǎng)基和與含有生長因子的孔相同量的BSA。將板返回至培養(yǎng)箱另外22小時。
BrdU ELISA在暴露于試驗化合物24小時后，通過加入20μL/孔的已經(jīng)稀釋(1∶100)在血清缺乏培養(yǎng)基中的BrdU標(biāo)記試劑，用BrdU(Roche Biochemicals1-647-229)標(biāo)記細(xì)胞。然后將板返回至培養(yǎng)箱4小時。通過將培養(yǎng)基排干在紙巾上去除標(biāo)記培養(yǎng)基。通過加入200μL固定/變性溶液至各孔中，并在室溫下溫育45分鐘，將細(xì)胞固定和DNA變性。將固定/變性溶液排干至紙巾上，向各孔中加入100μL抗-BrdU-POD和將孔在室溫下溫育2小時。去除抗體溶液并將各孔用300μL PBS洗滌3-4次。將100μL TMB底物溶液加入各孔并將孔在室溫下溫育5-8分鐘。然后通過加入100μL/孔的1M磷酸終止反應(yīng)。在450nm讀取平板，參考波長為650nm。通過從所有孔中減去空白(無細(xì)胞)的吸光度，然后用1減去每個試驗雙份的平均吸光度與對照平均值的商來計算每種試驗化合物的抑制百分比。最后結(jié)果然后乘以100(％抑制＝(1-試驗雙份的平均吸光度/對照平均值)100)。IC50值是抑制50％BrdU標(biāo)記的試驗化合物的濃度，是細(xì)胞增殖抑制的量度。從濃度對抑制百分比的對數(shù)曲線的線性回歸中測定IC50。IC50值在以下表2中顯示。
表2VEGF和FGF-刺激的HUVEC增殖測定的IC50
實施例24
片劑制劑
*化合物A表示本發(fā)明的化合物。
制備方法1.在適當(dāng)混合器中混和第1，2和3項15分鐘。
2.用20％聚乙烯吡咯烷酮K30溶液(第4項)將來自步驟1的粉末混合物制粒。
3.在50℃干燥來自步驟2的顆粒。
4.將步驟3的顆粒通過適當(dāng)研磨裝置。
5.將第5項加入磨碎的步驟4的顆粒并混和3分鐘。
6.在適當(dāng)壓力機上壓制步驟5的顆粒。
實施例25膠囊制劑
化合物A表示本發(fā)明的化合物。
制備方法
1.在適當(dāng)混合器中混和第1，2和3項15分鐘。
2.加入第4和5項，并混和3分鐘。
3.填充到適當(dāng)膠囊中。
實施例26注射液/乳劑制劑
化合物A表示本發(fā)明的化合物。
制備方法1.將第1項溶解在第2項中。
2.將第3，4和5項加入第6項并混和直至分散，然后均化。
3.將步驟1的溶液加入步驟2的混合物中并均化直至分散體半透明。
4.無菌過濾通過0.2μm濾器并裝入小瓶。
實施例27注射液/乳劑制劑
化合物A表示本發(fā)明的化合物。
制備方法1.將第1項溶解在第2項中。
2.將第3，4和5項加入第6項中，并混和直至分散，然后均化。
3.將步驟1的溶液加入步驟2的混合物中并均化直至分散體半透明。
無菌過濾通過0.2μm濾器并裝入小瓶。
盡管已經(jīng)通過參考具體和優(yōu)選實施方案舉例說明本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解可以通過常規(guī)實驗和實施本發(fā)明進行各種變化和修改。因此，本發(fā)明意欲不受以上描述限制，而是通過后附權(quán)利要求和它們的等同方案限定。
權(quán)利要求
1.下式的化合物或其藥用鹽， 其中R1選自-H，-COR4，和-COOCHR5OCOR4；R2和R3獨立地選自-H，和-OR5；R4選自-C1-6烷基，-被高至4個選自下組的基團取代的C1-6烷基-NR5R6，-SR5，-OR5，-芳基，-被高至2個獨立地選自-OR5和C1-4烷基的基團取代的芳基，和-雜芳基，和-雜環(huán)基；R5和R6獨立地選自-H，和-C1-5烷基，或備選地，-NR5R6可以形成含有3-7個原子的環(huán)，所述環(huán)任選地包括一個或多個另外的N或O原子。
2.按照權(quán)利要求1的式I的化合物，其中其中R1選自-H，-COR4，和-COOCHR5OCOR4；R2和R3獨立地選自-H，和-OR5；R4選自-C1-6烷基，-被1-4個獨立地選自下組的基團取代的C1-6烷基-NR5R6，-SR5，-OR5，-苯基，-被1-2個獨立地選自-OR5和C1-4烷基的基團取代的苯基，和-噻吩基，-呋喃基，-吲哚基，-吡咯基，-吡啶基，-吡嗪基，-噁唑基，-噻唑基，喹啉基，嘧啶基，咪唑基和四唑基，和-哌啶基，哌嗪基，吡咯烷基，和嗎啉基；R5和R6獨立地選自-H，和-C1-5烷基，或備選地，-NR5R6可以形成含有3-7個原子的環(huán)，所述環(huán)任選地包括一個或多個另外的N或O原子。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的式I的化合物，其中R1是-COR4。
4.權(quán)利要求3的式I的化合物，其中R4是C1-6烷基。
5.權(quán)利要求4的式I的化合物，其選自以下各項N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基乙酰胺；N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺；N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基戊酰胺；和N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丁酰胺。
6.權(quán)利要求3的式I的化合物，其中R4是被-NR5R6取代的-C1-6烷基，或被-NR5R6和另一個選自下組的基團取代的-C1-6烷基-NR5R6，-SR5，-OR5，-苯基，-被1-2個獨立地選自-OR5和C1-4烷基的基團取代的苯基，和-噻吩基，-呋喃基，-吲哚基，-吡咯基，-吡啶基，-吡嗪基，-噁唑基，-噻唑基，喹啉基，嘧啶基，咪唑和四唑基；和R5和R6獨立地選自-H和-C1-5烷基。
7.權(quán)利要求6的式I的化合物，其選自以下各項(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲硫基-N-苯基丁酰胺；(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-3-苯基-N-苯基丙酰胺；(2S)-2-氨基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-4-甲基-N-苯基戊酰胺乙酸鹽；和(2S)-2-氨基-3-吲哚-3-基-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基丙酰胺鹽酸鹽。
8.權(quán)利要求3的式I的化合物，其中R3是-OR5和R5是-H或-C1-5烷基。
9.權(quán)利要求8的式I的化合物，其選自以下各項N-(4-羥基苯基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]乙酰胺；和N-(4-甲氧苯基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]乙酰胺。
10.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的式I的化合物，其中R1是-COOCHR5OCOR4。
11.權(quán)利要求10的式I的化合物，其選自以下各項{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲?；趸鶀甲基乙酸酯；{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲酰基氧基}甲基2-(二甲基氨基)乙酸酯；{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲?；趸鶀甲基2-(二甲基氨基)乙酸酯鹽酸鹽；和{N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯基氨基甲?；趸鶀甲基哌啶-4-羧酸酯三氟乙酸鹽。
12.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的式I的化合物，其中R1是H。
13.權(quán)利要求12的式I的化合物，其選自以下各項3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-(苯基氨基)-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮甲磺酸鹽；7-[(4-羥基苯基)氨基]-3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；和3-(4-甲氧苯基)-7-[(4-甲氧苯基)氨基]-1-苯基-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。
14.一種藥物組合物，其含有治療有效量的按照權(quán)利要求1-13中任何一項的化合物和藥用載體或賦形劑。
15.權(quán)利要求14的藥物組合物，其中所述化合物適合給藥于癌癥患者。
16.權(quán)利要求1-13中任何一項的化合物，其用作藥物。
17.權(quán)利要求1-13中任何一項的化合物在制備用于治療和控制癌癥的藥物中的應(yīng)用。
18.按照權(quán)利要求17的應(yīng)用，其用于治療和控制實體瘤。
19.按照權(quán)利要求17的應(yīng)用，其用于治療和控制乳腺癌，肺癌，結(jié)腸癌或前列腺癌。
20.一種制備權(quán)利要求1的式I的化合物的方法，該方法包含a)將式II的化合物 其中hal是氯，溴或碘，與式III的苯胺衍生物反應(yīng)， 其中R2和R3是H或-OR5’，其中R5’是H，C1-5烷基或甲硅烷基保護基，以獲得下式化合物， 和/或b)將式I-A的化合物與式IV的?；u或酐反應(yīng)R4-COX IV其中X是鹵素或-OCOR4，和R4如權(quán)利要求1所定義，以獲得下式化合物， 或備選地，c)將式I-A的化合物與式V的氯甲酸酯反應(yīng) 其中R5如權(quán)利要求1所定義，以獲得式VI的化合物， 其然后與式VII的鈉鹽反應(yīng) 以獲得式I-C的化合物 和d)如果需要，將式I-A，I-B或I-C的化合物轉(zhuǎn)化為藥用鹽。
21.通過按照權(quán)利要求20的方法制備的按照權(quán)利要求1-13中任何一項的式I的化合物。
22.選自下組的化合物(氯代甲氧基)-N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-苯甲酰胺[實施例4a]3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-7-{[4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基]氨基}-1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮[實施例19c]，和N-[3-(4-甲氧苯基)-2-氧代-1-苯基(1，3，4-三氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶-7-基)]-N-[4-(1，1，2，2-四甲基-1-硅雜丙氧基)苯基]乙酰胺[實施例19d]。
23.如上所述的新化合物，藥物組合物，方法，和應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開新的式I的嘧啶并化合物，其是KDR和FGFR激酶的選擇性抑制劑并且選擇性抗LCK。這些化合物和它們的藥用鹽是用于治療或控制實體瘤，特別是乳腺瘤、結(jié)腸瘤、肺瘤和前列腺瘤的抗增殖劑。還公開了含有這些化合物的藥物組合物和它們的制備方法。
文檔編號A61P43/00GK1675214SQ03819160
公開日2005年9月28日 申請日期2003年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月14日
發(fā)明者陳奕, A·R·丹尼斯基, W·阿里斯, M·M·卡巴特, 埃米莉·愛軍·劉, 劉進軍, 陸建春, C·米舒 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司