專利名稱：成肌細胞轉移治療心力衰竭的機理的制作方法
技術領域：
本發(fā)明通常涉及梗死心肌層的治療，且更具體而言涉及應用細胞療法通過相伴隨的的血管生成和肌生成來修復心肌梗死。
背景技術：
心肌退化是人類衰弱和死亡的主要原因。它依次導致活的心肌細胞、收縮絲、和心臟功能的喪失。心肌細胞不會顯著地再生是因為這些末端分化細胞中的端粒DNA重復1極小。
退化心臟傳輸生化信號，從而征募干細胞以修復肌肉損害。多能的胚胎或成人干細胞顯示出不受控制的分化成各種譜系而產(chǎn)生骨、軟骨、脂肪、結締組織、骨骼肌和心肌(

圖1)。受損的心肌層需要其它活的肌原細胞使收縮絲(contractile filaments)沉積，從而恢復心臟功能，優(yōu)選在導致瘢痕形成的成纖維細胞浸潤前。然而，在科學家可準確定義特異性轉錄因子和途徑以指導干細胞分化成心肌細胞前，將干細胞注射到人心臟中的應用較之成肌細胞的應用具有更高的危險-效益比。
因為幼小的心肌細胞和成肌細胞漸漸定型且從干細胞分化，因此它們是相似的，即它們是沒有收縮絲的單核化細胞。在有神經(jīng)營養(yǎng)因子存在的條件下，成肌細胞融合成肌管，肌管發(fā)育成肌纖維。在心臟激素的影響下，幼小的心肌細胞融合為成熟的心肌細胞。心肌細胞和肌纖維是肌原細胞，可產(chǎn)生收縮蛋白，從而提供收縮性。
像心肌細胞一樣，成肌細胞是注定變?yōu)榧∪獾姆只毎?。然而與心肌細胞不同的是，成肌細胞具有較長的端粒DNA亞單位且能夠大量有絲分裂。進行有絲分裂及融合的能力在單核化衛(wèi)星細胞中是保守的，所述單核化衛(wèi)星細胞是成人肌肉中主要的成肌細胞儲備。衛(wèi)星細胞是分化的細胞。它們不是干細胞。成肌細胞在胞間液中存活并增殖。它們的存活不依賴于血管生成或神經(jīng)支配。
因為成肌細胞的這些理想性質，已經(jīng)嘗試用它們修復肌肉組織。如Law等人的研究所示，在這點上的重要特征是用于細胞移植的成肌細胞制品應當相對不含成纖維細胞，重要點已經(jīng)被本領域很多工作人員認識到。見，例如，Law等人，Gene Therapy and Molecular BiologyVol.1，345-363，特別是350-351頁，描述了用于骨骼肌疾病的矯正和改善的肌原細胞移植療法。另一點在于一旦引入，成肌細胞經(jīng)歷巨嗜細胞的清除獵食，通常達3周。因此，必須移植大量成肌細胞才能使移植的細胞有效。
第一次將人成肌細胞轉移到豬心臟中揭示了共20次在左心室內(nèi)的不同位置，通過Myostar導管(Biosense Webster，Inc.)以100×106/ml注射10億個成肌細胞是安全的2。確定了0.3ml-0.5ml是每次注射的最佳體積。該醫(yī)學領域已經(jīng)變得非?；钴S。然而，通?？山邮芮页晒Φ慕Y果仍然是難以獲得的。更需要以矯正損害的方式將細胞成功轉移到受損心臟中。
發(fā)明概述本發(fā)明的實施方案涉及患病心臟組織的細胞療法。在其中一個實施方案中，提供一種含有轉基因表達VEGF的經(jīng)分離成肌細胞的組合物。另一實施方案提供一種組合物，其中成肌細胞數(shù)以100∶1超過成纖維細胞數(shù)。另一實施方案提供一種含有用編碼上皮細胞刺激物或血管生成刺激物的基因和第二種標記基因共轉染的分離成肌細胞的組合物。另一實施方案提供一種用于減輕充血性心力衰竭的組合物，它含有至少10億個轉基因表達至少一種血管生成因子的肌原細胞。在另一實施方案中，所述細胞轉基因表達VEGF 165。在另一實施方案中，所述細胞還表達VPF。
另一實施方案提供一種治療個體充血性心力衰竭的方法，包括采集個體骨骼肌的活檢樣品以形成培養(yǎng)物；用編碼血管生成因子的至少一種外源基因轉化培養(yǎng)物中的細胞；形成足以修復個體心臟的適當純度的細胞培養(yǎng)物；并將培養(yǎng)物中的細胞引入到個體的患病心臟中。
附圖描述圖1.使用成肌細胞治療心力衰竭比使用干細胞的優(yōu)勢。MTT＝成肌細胞轉移療法圖2.成肌細胞純度所用的人結蛋白免疫染色。(A)平滑肌肉瘤的陽性對照，結蛋白染色為棕色。(B)陰性對照。(C)用結蛋白染色的純?nèi)顺杉〖毎?D))培養(yǎng)物中的純?nèi)顺杉〖毎?br> 圖3.(A)人成肌細胞注射后12周，豬心肌層中人肌球蛋白的棕色免疫染色。(B)具有Lac-Z-陽性核及人肌球蛋白染色的心肌細胞，表示供體或成肌細胞來源。(C)沒有成肌細胞假注射的豬心肌層中人肌球蛋白的陰性免疫染色(灰色)。
圖4.(A)來源于豬心肌細胞與人成肌細胞融合體的異核體在異核合胞體中顯示Lac-Z陽性人成肌細胞核(藍綠色)及豬心肌細胞核(紫色)。(B)這些異核體表達人肌球蛋白的重鏈。
圖5.注射成肌細胞的豬心肌層電子顯微鏡檢查表示(A)具有中心核及肌原纖維(myfibril)(ML)沉積物的肌管，和(B)具有衛(wèi)星細胞(SC)及核(N)的骨骼肌纖維。衛(wèi)星細胞位于基底膜(黑色箭頭)和質膜(白色箭頭)之間。肌原纖維節(jié)表示新形成的收縮絲的適當排列。
圖6.(A)相對于vWF VIII免疫染色并用伊紅復染色以顯示毛細管的對照心肌層。(B)VEGF165轉導的成肌細胞可增加血管密度。(C)與B相同，但沒有進行伊紅復染色。
發(fā)明詳述本發(fā)明實施方案的肌原細胞優(yōu)選自體的和由組織活檢樣品獲得的，例如在U.S.Nos.6,099,832、5,833,978、6,284,242和5,130,141中所述。在優(yōu)選實施方案中，組合物是從肌原細胞或肌原細胞前體制備的，它們具有最小的成纖維細胞污染。術語“最小的成纖維細胞污染”是指以總細胞數(shù)為基礎，少于5％、2％、1％、0.5％、0.2％甚或少于0.1％的細胞是成纖維細胞。該改進組合物的純度可以各種方式獲得。例如，在其中一種方式中，成纖維細胞優(yōu)選被培養(yǎng)基中所含的一種或多種物質抑制或殺死。在另一種方式中，使用細胞分類器每次分離一個細胞。在另一種方式中，非-成纖維細胞特異性啟動子，如肌肉特異性啟動子用于控制基因表達，該基因產(chǎn)生使得構成該產(chǎn)物的細胞在細胞培養(yǎng)物中存活的產(chǎn)物。在這種方式中，轉化的肌原細胞優(yōu)選存活且成纖維細胞的百分比減小。在另一種方式中，肌原細胞是在有巨噬細胞的細胞因子存在的條件下培養(yǎng)的，如Giurisato等人在BasicAppl.Myol.8(5)381-388(1998)中所述，該細胞因子刺激肌原細胞的增殖，但不刺激成纖維細胞的增殖。所述細胞因子可通過在沒有血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)巨噬細胞，然后采集培養(yǎng)基以獲得細胞因子的粗制品而生產(chǎn)。在優(yōu)選實施方案中，利用非常純(低成纖維細胞污染)的培養(yǎng)物進行的基本細胞轉移治療技術通過向培養(yǎng)物中加入由巨噬細胞分泌的50-10KDa細胞因子的粗品或部分純化的制品，并生長至少2、3、5、8或10代或更多代肌原細胞而使其可行。
在各種情況下，某些細胞分裂可用于在使用細胞前增加細胞數(shù)。更優(yōu)選培養(yǎng)并轉移至少10、20、50、100、250、500甚或超過1千億個細胞。當細胞不是自體的時，通常優(yōu)選在接受該細胞的動物或患者中用使異種移植物排斥最小或消除的藥劑，如環(huán)孢菌素。還可向再次引入的細胞中加入其它藥劑，如粘度調節(jié)物質、粘合劑等，以在細胞轉移過程中或轉移后，幫助細胞在心肌層內(nèi)安置和定位。
肌原細胞、或肌原細胞前體被激活或轉化以表達一種或多種基因，該基因刺激血管內(nèi)皮細胞的生長和/或發(fā)育。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，在細胞轉移到患病心臟中前，在適宜啟動子的控制下，用一種或多種表達內(nèi)皮細胞生長和/或血管生成蛋白的基因轉化該細胞。例如，酸性和堿性成纖維細胞生長因子分子是內(nèi)皮細胞和其它細胞類型的促分裂原，且優(yōu)選被穩(wěn)定整合入到細胞中，所述細胞是或變?yōu)榧≡毎?。促血管素和血管生成素可誘導血管生成，如Folknan，J.，CancerMedicine，Lea and Febiger Press，pp.153-170(1993)所描述的。血管內(nèi)皮細胞的高度選擇性促分裂原是血管內(nèi)皮生長因子或VEGF(Ferrara，N.等人，Endocr.Rev.1319-32(1992))，其也被稱作血管通透因子(VPF)。在最優(yōu)選的實施方案中，VEGF轉基因表達。然而，在某些實施方案中，通過同源性重組打開所需基因。最優(yōu)選VEGF轉基因表達。在其中一個實施方案中，至少兩種不同基因被轉基因表達，如VEGF與促血管素或血管生成素。在另一實施方案中，超過兩種不同的基因被轉基因表達。多個基因可在同一細胞中表達，或處于同一組合物內(nèi)由不同細胞表達。在某些情況下，兩種不同因子的表達，如兩種不同的血管生成因子協(xié)同導致更多移植細胞在靶患病心肌內(nèi)的建立。
細胞轉化可通過本領域技術人員已知的各種方法獲得。通常，編碼所需多肽的核酸序列，如VEGF165基因受到適宜啟動子的控制?？墒褂玫倪m宜啟動子包括，但不限于，腺病毒啟動子，如腺病毒主要晚期啟動子；或異源啟動子，如巨細胞病毒(CMV)啟動子；呼吸道合胞病毒(RSV)啟動子；誘導型啟動子，如MMT啟動子，金屬硫蛋白啟動子；熱激啟動子；白蛋白啟動子；ApoA1啟動子；人珠蛋白啟動子；病毒胸腺嘧啶核苷激酶啟動子，如單純皰疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶啟動子；逆轉錄病毒LTR(包括上文所述的修飾逆轉錄病毒LTR)；β-肌動蛋白啟動子；和人生長激素啟動子。所述啟動子還可以是控制編碼多肽的基因的天然啟動子。
在其中一個實施方案中，逆轉錄病毒質粒載體用于轉導包裝細胞系以形成生產(chǎn)細胞系?？杀晦D染的包裝細胞系的例子包括，但不限于，PE501、PA317、.psi.-2、.psi.-AM、PA12、T19-14X、VT-19-17-H2、.psi.CRE、.psi.CRIP、GP+E-86、GP+envAm112、和DAN細胞系，如Miller在Human Gene Therapy 15-14(1990)中所述，其整體引入此處作為參考。所述載體可通過本領域已知的任何方式轉導包裝細胞。這種方式包括，但不限于，電穿孔、脂質體的使用、以及CaPO4沉淀。在其中一個可選擇性實施方案中，可將所述逆轉錄病毒質粒載體包裹在脂質體中，或與脂類偶聯(lián)，然后施用于宿主。在該實施方案中，生產(chǎn)細胞系產(chǎn)生感染性逆轉錄病毒載體顆粒，其包括編碼多肽的核酸序列。然后使用這種逆轉錄病毒載體顆粒，以轉導肌原細胞或肌原細胞前體。所轉導的細胞表達編碼多肽的核酸序列。
在優(yōu)選實施方案中，用VEGF轉化細胞。VEGF由于可選擇性剪接而具有121、165、189和206個氨基酸這4種不同的形式，例如在U.S.No.6,040,157中所述。VEGF121和VEGF165是可溶性的且能夠促進血管生成，而VEGF189和VEGF206與細胞表面含蛋白聚糖的肝素結合。VEGF的時間和空間表達與血管的生理性增殖有關(Gajdusek，C.M.和Carbon，S.J.，Cell Physiol 139570-579(1989)；McNeil，P.L.等人，J Cell.Biol.109811-822(1989))。它的高親和性結合位點僅位于組織切片中的內(nèi)皮細胞上(Jakeman，L.B.等人，Clin.Invest.89244-253(1989))。在本發(fā)明的實施方案中，將至少兩種類型的細胞移植到心臟的不同區(qū)。其中一個類型的細胞表達VEGF(和任選另一血管生成因子)且優(yōu)選被移植到最需要血管生長的區(qū)中。將第二種類型的細胞移植到不太需要血管生長的區(qū)中。心臟病專家可很容易地確定用于移植兩種(或多種)類型細胞的最佳位置。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)血管通透因子(VPF)是造成損傷停止后血漿蛋白持續(xù)的微血管超透性的原因，其是正常傷口愈合的特征。這表明VPF在心肌層傷口愈合中是一種重要的因子。Brown，L.F.等人，J.Exp.Med.1761375-1379(1992)。VEGF表達水平在血管化組織中較高(例如，肺、心臟、胎盤和實體瘤)，且與血管生成在時間和空間方面有關。VEGF還顯示出誘導體內(nèi)血管生成。因為血管生成對于正常組織，特別是血管組織的修復而言十分重要，因此VEGF已被建議用于促進血管組織修復(例如，在動脈粥樣硬化中)。
于1991年12月17日授予Chen等人的美國專利號5,073,492中公開了一種協(xié)同增強內(nèi)皮細胞在適宜環(huán)境中生長的方法，該方法包括向環(huán)境中加入VEGF、效應子和血清衍生的因子。且，已經(jīng)通過聚合酶鏈反應技術制備了血管內(nèi)皮細胞生長因子C亞單位DNA。該DNA編碼以異二聚體或同二聚體形式存在的蛋白。所述蛋白是哺乳動物血管內(nèi)皮細胞促分裂原且，本身，可用于促進血管發(fā)育和修復，參見1992年9月30日公開的歐洲專利申請92302750.2。在本發(fā)明的實施方案中，在同一細胞或細胞的同一組合物中使用VEGF165與VPF和/或血管內(nèi)皮細胞生長因子C的共同表達，用于所需的協(xié)同作用。
所制備的轉基因肌原細胞組合物還可包含細胞刺激劑和促進細胞在心肌層沉積和附著的其它物質。通常，通過注射將濃稠懸浮液形式的細胞引入到受損心肌層中。
實施例描述了臨床試驗，該臨床試驗以明確證據(jù)證實了cGMP-產(chǎn)生的純?nèi)顺杉〖毎托呐K細胞療法的概念的證據(jù)。
人成肌細胞存活并整合到豬缺血性心肌層中，使細胞療法和基因療法能夠共存。而新形成的肌纖維具有衛(wèi)星細胞且給予心肌再生能力，心肌細胞通過成肌細胞基因組轉移在體內(nèi)基因轉化為再生的異核體構成最終的心臟修復。再生的心臟3還包括成肌來源的心肌細胞。在所有3個方案中，新的收縮絲沉積，從而改善了心臟收縮性。該后者可被轉化為改善心臟病患者的生活質量并預防心臟病發(fā)作。
因此，純的(即，至少95％、97％、98％、99％、99.5％甚或至少99.7％的純度)VEGF165成肌細胞，當心肌內(nèi)注射時，是用于共存的血管生成和肌生成以治療心力衰竭的潛在治療性轉基因載體。使用環(huán)孢菌素免疫抑制6周對于異種移植物或同種異體移植物的長期存活是有效的。
此處引證的每篇文獻均特別整體引入此處作為參考。提出下列實施例只為舉例說明而不是對本發(fā)明的限制。
實施例該實施例說明使用轉基因表達VEGF165的肌原細胞對心肌層損害進行的細胞療法。在該肌生成的實施例中，用攜帶Lac-Z報道基因的逆轉錄病毒載體轉導來源于人股直肌活檢樣品的衛(wèi)星細胞的經(jīng)培養(yǎng)成肌細胞。慢性局部缺血的豬心臟模型(n＝9；對照＝3；植入成肌細胞的＝6)是通過夾住左旋冠狀動脈周圍的ameroid環(huán)而產(chǎn)生的。四周后，通過左胸廓切開術使各心臟暴露。向左心室中20次心肌內(nèi)注射3億個成肌細胞(每次0.25ml)，或作為對照的5ml總體積的基礎DMEM。注射前一周和注射后第6周使用MIBI-Tc99mSPECT掃描評價左心室功能以證實心肌梗死。
從細胞移植前5天開始直到細胞移植后6周，使動物維持每kg體重5mg的環(huán)孢菌素。在手術后6周到5個月無痛處死動物，對心臟進行處理用于組織學、免疫細胞化學和超微結構研究。進行激光核捕獲及單一的核RT-PCR以描繪宿主和供體的核。使用對人Y-染色體和豬染色體1&10特異的熒光DNA探針進行原位雜交。
在血管生成研究中，用分別攜帶Lac-Z和人VEGF165基因的逆轉錄病毒載體和腺病毒載體轉導人成肌細胞。通過免疫染色、ELISA、免疫印跡和RT-PCR描述細胞的VEGF165轉導和表達效率。通過左旋動脈結扎在8只母豬中建立豬心臟梗死模型。將動物分為對照組(n＝3)和植入成肌細胞組(n＝5)。進行血管造影術以保證血管完全閉塞。梗死是用MIBI-Tc99mSPECT掃描加以證實的。4周后，將5ml不含或含有攜帶VEGF165和Lac-Z基因的3×108個人成肌細胞的基礎DMEM心肌內(nèi)注射到左心室中。手術后，使動物維持環(huán)孢菌素(5mg/kg體重)6周。然后移出心臟并處理用于免疫細胞化學研究。
制備通過人結蛋白免疫染色測定具有99％純度的人成肌細胞。用攜帶Lac-Z基因的逆轉錄病毒成功轉導約75％的肌核(myonuclei)。注射前立即進行的臺盼藍染色揭示了＞95％的細胞生存力。
12周后，注射成肌細胞的心肌層的組織學檢查顯示含有(供體來源的)Lac-Z陽性核的心肌細胞(圖3B)。超過80％的Lac-Z陽性心肌細胞對于人肌球蛋白重鏈陽性免疫染色(圖3A)。沒有注射成肌細胞的對照組心臟既沒有顯示出Lac-Z陽性肌核也沒有顯示出人肌球蛋白(圖3C)。注射成肌細胞的心肌的三重染色顯示多核化異核體含有表達人肌球蛋白的人核及豬核(圖4)。電子顯微鏡檢查證實了豬心肌層中具有帶衛(wèi)星細胞的人肌管和骨骼肌纖維(圖5)。
Lac-Z和VEGF165的轉導效率分別為75-80％和＞95％。轉導的成肌細胞繼續(xù)分泌VEGF165超過18天，顯著高于(37±3ng/ml)非-轉導組(200±30pg/ml)。染料排斥試驗揭示注射時＞95％的細胞生存力。組織學檢查顯示表達Lac-Z基因的移植成肌細胞在梗死中和梗死周圍廣泛存活。與VEGF165成肌細胞移植組(28.31±1.84)相比，在12個低放大率視野(×200)中平均計算的對照動物心臟的血管密度(平均值±SEM)為(4.18±0.42)(圖6)。SPECT掃描顯示梗死區(qū)中灌注改善。6周后環(huán)孢菌素的停止仍使得在長達20周的時段沒有異種移植排斥。
其它參考文獻1 F lshikawa，M J Matunis，G Dreyfuss，and T R Cech.“Nuclear Proteinsthat Bind the Pre-mRNA 3′Splice Site Sequence r(UUAG/G) and the HumanTelomeric DNA Sequence d(TTAGGG)n”，Molecular Cell Biology，(1993)，13，4301-4310.
2 P K Law，et al.，“World’s First Human Myoblast Transfer Into the Heart”，F(xiàn)rontiers in Physiology，(2000)，p.A85.
3 P K Law，“The Regenerative Heart”，Pharma Tech 2002，65-70.
當然，在閱讀了本說明書之后，本領域技術人員可很容易地理解此處提出的實施方案的變化和改進，且這種變化和改進落在權利要求的范圍之內(nèi)。
權利要求
1.一種含有經(jīng)分離的成肌細胞的組合物，所述成肌細胞轉基因表達上皮細胞刺激物或血管生成刺激物。
2.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中所述成肌細胞數(shù)以100∶1超過成纖維細胞數(shù)。
3.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中所述上皮細胞刺激物或血管生成刺激物是VEGF。
4.根據(jù)權利要求3所述的組合物，其中所述VEGF選自VEGF2、VEGF121、VEGF165、或其生物活性片段。
5.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中所述成肌細胞還轉基因表達至少第二種上皮細胞刺激物或血管生成刺激物因子。
6.根據(jù)權利要求5所述的組合物，其中所述第二種因子選自酸性成纖維細胞生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、促血管素、血管生成素、和VPF。
7.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中所述成肌細胞是與編碼上皮細胞刺激物或血管生成刺激物的基因和第二種標記基因共轉染的。
8.根據(jù)權利要求1所述的組合物，它含有至少十億個轉基因表達至少一種血管生成因子的肌原細胞。
9.根據(jù)權利要求8所述的組合物，其中所述至少一種血管生成因子包含VPF。
10.一種用于治療個體充血性心力衰竭的方法，包括1)采集個體骨骼肌的活檢樣品以形成培養(yǎng)物；2)用編碼血管生成因子的至少一種外源基因轉化培養(yǎng)物中的細胞；3)形成足以修復個體心臟的適當純度的細胞培養(yǎng)物；并4)將培養(yǎng)物中的細胞引入到個體的患病心臟中。
11.根據(jù)權利要求10所述的方法，其中所述步驟3的培養(yǎng)物是至少99％純度的成肌細胞。
12.根據(jù)權利要求10所述的方法，其中所述至少一種外源基因包含VEGF多肽。
13.根據(jù)權利要求10所述的方法，其中通過每次注射至少1億個細胞而將所述細胞引入到患病心臟中。
14.根據(jù)權利要求10所述的方法，其中將至少十億個細胞引入到患病心臟中。
15.一種用于治療個體充血性心力衰竭的方法，包括1)提供肌細胞的培養(yǎng)物；2)用編碼血管生成因子的至少一種外源基因轉化培養(yǎng)物中的細胞；3)形成足以修復個體心臟的適當純度的細胞培養(yǎng)物；并4)將培養(yǎng)物中的細胞引入到個體的患病心臟中。
16.根據(jù)權利要求15所述的方法，其中所述步驟3的培養(yǎng)物是至少99％純度的成肌細胞。
17.根據(jù)權利要求15所述的方法，其中所述至少一種外源基因包含VEGF多肽。
18.根據(jù)權利要求15所述的方法，其中通過每次注射至少1億個細胞而將所述細胞引入到患病心臟中。
19.根據(jù)權利要求15所述的方法，其中將至少十億個細胞引入到患病心臟中。
20.根據(jù)權利要求15所述的方法，其中在步驟4之前用環(huán)孢菌素治療所述個體。
全文摘要
對再生心臟進行生物工程改造可為心力衰竭提供一種新療法。在2002年5月14日，一名55歲患有缺血性心肌梗死的男性在冠狀動脈旁路移植后接受了25次含有4.65億個cGMP－產(chǎn)生的純成肌細胞的心肌層注射。以環(huán)孢菌素作為免疫抑制劑，用17個人/豬異種移植物說明了三種肌生成機理。某些成肌細胞發(fā)育成心肌細胞。其它則通過天然的細胞融合將它們的核轉移到宿主心肌細胞中。另外一些則形成具有衛(wèi)星細胞的骨骼肌纖維。收縮絲的從頭產(chǎn)生使心臟的收縮性增加。用VEGF165基因轉導的人成肌細胞在豬心肌層中產(chǎn)生的毛細管比對照組的多6倍。盡管在6周時停止了注射環(huán)孢菌素，但直到20周時仍然沒有觀察到異種移植物排斥。
文檔編號A61K38/19GK1688701SQ03824045
公開日2005年10月26日 申請日期2003年8月6日 優(yōu)先權日2002年8月9日
發(fā)明者彼得·K·羅 申請人:彼得·K·羅