專利名稱：P糖蛋白抑制劑表面活性劑在膠狀載體表面上的使用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的主題涉及P糖蛋白抑制劑表面活性在膠狀載體表面上的使用。
P糖蛋白是ABC家族中的跨膜蛋白質(zhì)成員，分子量為170KDa。通常認(rèn)為該糖蛋白的作用是在上皮細(xì)胞中從進(jìn)入細(xì)胞開(kāi)始阻斷毒素或外源物的解毒系統(tǒng)。對(duì)病人的易變性依次起作用的P糖蛋白的表達(dá)會(huì)隨不同個(gè)體發(fā)生變化。
已經(jīng)證明P糖蛋白可作為排出泵，并且作為細(xì)菌轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白以相同的方式將許多藥物(抗癌藥、抗菌藥、抗抑郁藥等...)從細(xì)胞內(nèi)排出。通過(guò)P糖蛋白的排出泵可明顯降低很多藥物的作用效果。
特別地，公認(rèn)P糖蛋白是有助于獲得的多藥耐藥并發(fā)癥(MDR)的一個(gè)因素，該癥狀會(huì)發(fā)生于許多反復(fù)化療的病人中[Kartner等人.，1985；Robinson等人.，1987]。絕大多數(shù)的抗癌藥物均會(huì)受到多藥耐藥性的影響。
而且，一定數(shù)量的藥物如用于治療AIDS的蛋白酶抑制劑(沙奎那維、克濾滿...)，在口服給藥后具有非常弱的生物可利用率。這也可通過(guò)存在于胃腸道上皮細(xì)胞中的P糖蛋白來(lái)進(jìn)行解釋由于P糖蛋白排出泵的存在阻止了藥物的足夠吸收。P糖蛋白還被認(rèn)為可用來(lái)轉(zhuǎn)運(yùn)絕大多數(shù)HIV蛋白酶抑制劑(HPI)，以及降低其口服生物可利用率和淋巴細(xì)胞、大腦、睪丸、及胎兒滲透，進(jìn)而可能導(dǎo)致在這些藥物的療效上的限制性影響[Huisman MT等人.，2002]。
盡管膠狀載體能夠?qū)崿F(xiàn)藥物的目標(biāo)轉(zhuǎn)運(yùn)，由此提高藥物療效、且減少有害作用，但是當(dāng)由于P糖蛋白排出泵的存在而使目標(biāo)藥物受多藥耐藥現(xiàn)象影響時(shí)，則使這種優(yōu)點(diǎn)最小化。
據(jù)報(bào)道，PEG-HS(Solutol HS 15或者聚乙烯乙二醇-66012-羥基硬脂酸酯)能夠抑制癌細(xì)胞中的P糖蛋白，其能夠?qū)е露嗨幠退幀F(xiàn)象[Buckingham等人.，1995；Buckingham等人.，1996]。
所有膠狀載體的制備工藝或者基于相分離，或者基于乳化方法。這些工藝通常都需要表面活性劑。
近來(lái)?yè)?jù)報(bào)道，可將具有兩親性質(zhì)的表面活性劑PEG-HS用于膠狀載體的制備中。
在這些例子中，通過(guò)親脂部分將這些表面活性劑附于載體的表面。位于載體外表面的PEG-HS的親水性聚乙烯乙二醇鏈可以穩(wěn)定懸浮液中的載體體系。此外，其能誘導(dǎo)靜態(tài)斥力，從而使載體與巨嗜細(xì)胞表面的粘附過(guò)程最小化，同時(shí)對(duì)接近的血漿蛋白產(chǎn)生排斥。因此，其可避免通過(guò)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的早期吸收，這一點(diǎn)與其它調(diào)理阻礙系統(tǒng)(opsonisation hindering systems)不同。
現(xiàn)在驚奇地發(fā)現(xiàn)，含有附于表面的包含如PEG-HS的P糖蛋白抑制劑表面活性劑能夠在靶細(xì)胞中釋放藥物，同時(shí)釋放所述P糖蛋白抑制劑表面活性劑。
出人意料地，表面活性劑并不是緊緊的附于載體表面，而是在各種水性流體存在的情況下即可擴(kuò)散。因此將P糖蛋白抑制劑表面活性劑釋放到靶細(xì)胞中來(lái)抑制P糖蛋白。
因此，那些表面附有P糖蛋白抑制劑表面活性劑的膠狀載體就可以減少細(xì)胞的多藥耐藥性。其也可以提高某些藥物的口服生物可利用率，這些藥物通過(guò)上皮的吸收因P糖蛋白排出泵的影響而降低。
那些膠狀載體具有將藥物轉(zhuǎn)運(yùn)到靶細(xì)胞和通過(guò)單一轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)給藥來(lái)抑制P糖蛋白的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的目的是膠狀載體在P糖蛋白抑制藥的制造中的使用，其中所述膠體蛋白-封裝或吸收藥理活性物質(zhì)，和-包含附在該膠狀載體表面的P糖蛋白抑制劑表面活性劑這種膠狀蛋白可以使藥理學(xué)活性物質(zhì)及P糖蛋白抑制劑表面活性劑在靶細(xì)胞中一起釋放。有利地，藥理學(xué)活性物質(zhì)和P糖蛋白抑制劑表面活性劑是半同步地從膠狀載體釋放到靶細(xì)胞中。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了這樣的膠體載體在降低多藥耐藥方面的使用。
在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了這樣的膠體載體在提高藥理學(xué)活性物質(zhì)口服生物可利用率方面的應(yīng)用，這些藥物通過(guò)上皮的吸收因P糖蛋白排出泵的影響而降低。
據(jù)預(yù)測(cè)，表面附有P糖蛋白抑制劑表面活性劑的膠狀載體可用于藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的各種應(yīng)用中，這種轉(zhuǎn)運(yùn)需要小的載體尺寸，從而滿足藥物定位性運(yùn)轉(zhuǎn)，同時(shí)這種轉(zhuǎn)運(yùn)會(huì)受到生物排出泵的阻礙。
一個(gè)主要的例子是在腫瘤治療中的應(yīng)用因?yàn)樾〉妮d體尺寸，能夠?qū)鐞盒阅z質(zhì)瘤這樣的幾乎無(wú)法接近的腫瘤類型進(jìn)行靶向作用，同時(shí)抑制通常降低普通抗癌藥物療效的P糖蛋白排出泵因此，可以將這種的膠狀載體用于藥物轉(zhuǎn)運(yùn)應(yīng)用，如在腫瘤方面，來(lái)對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行靶向作用，同時(shí)抑制多藥耐藥性，即通過(guò)單一藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)給藥。
載有那些藥物的膠狀載體能夠抑制膜蛋白相關(guān)的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，并且提高細(xì)胞內(nèi)藥物的濃度。
這種膠體載體還具有不需要通過(guò)細(xì)胞吸收就可以釋放到細(xì)胞內(nèi)的優(yōu)點(diǎn)。
而且，許多P糖蛋白抑制劑表面活性劑，如PEG-HS，已經(jīng)用于可注射劑型中，并據(jù)報(bào)道具有低細(xì)胞毒性[Buckingham等人.，1995]，而其它可以共同給藥的P糖蛋白抑制劑，如硝苯地平，可產(chǎn)生一些有害作用。
制備膠狀蛋白的方法對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是已知的。
根據(jù)本發(fā)明，膠狀蛋白可以是納米粒子如納米球、納米膠囊、或者固態(tài)脂質(zhì)納米粒子，或者可以是微脂粒、微膠粒、納米混懸劑、納米乳液或者球晶。
納米粒子可以定義為次微米膠狀體系(即，＜1μm)，該體系通常，但非必須地，由聚合物(可/不可生物降解的)制得。
納米粒子特別包括納米球、納米膠囊、或者固態(tài)脂質(zhì)納米粒子。
包括納米球和納米膠囊的納米粒子的制備方法由Couvreur等人.，在Eur.J.Pharm.Biopharm，41(1)2-13，1995中有所公開(kāi)。
納米球是基質(zhì)體系，其中藥物分散在粒子的各處。
納米膠囊是這樣的體系，其中將藥物限制于由聚合的或脂質(zhì)膜包圍的腔內(nèi)(Couvreur等人，Nanocapsule technology；Critical Reviews inTherapeutic Drug Carrier Systems，2002)。納米膠囊的尺寸通常在80～500nm之間。納米膠囊由聚合或脂質(zhì)膜包圍的液態(tài)核心和在界面處的親脂性和/或親水性表面活性劑組成。納米膠囊可以通過(guò)腸道外給藥(靜脈注射、肌內(nèi)給藥)或者口服給藥。聚合納米膠囊的制備方法在P.Legrand等人.，S.T.P.Pharma Sciences 9(5)411-418，1999中有所公開(kāi)。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，膠狀載體是根據(jù)WO 01/64328中公開(kāi)的方法制備的脂質(zhì)膠囊。根據(jù)本方法制備的脂質(zhì)膠囊由在室溫下處于液態(tài)或半液態(tài)的不可缺少的脂質(zhì)核心和附在該核心外的常溫下為固態(tài)的不可缺少的脂質(zhì)膜構(gòu)成。納米膠囊的平均尺寸小于150nm，優(yōu)選小于100nm，更優(yōu)選小于50nm。
固態(tài)脂質(zhì)納米粒子是由固態(tài)脂質(zhì)體，如甘油酸酯或脂肪酸，制備的納米球。
固態(tài)脂質(zhì)納米粒子的制備方法在W.Mehnert，Advanced DrugDelivery Reviews 47(2001)165-196中有所公開(kāi)。
微脂粒是包含一個(gè)或多個(gè)含有液態(tài)相的磷脂雙層的球狀囊，按其尺寸和脂質(zhì)層的數(shù)目可以分為大的多層微脂粒(MLV)、小的單層微脂粒(SUV)或者大的單層微脂粒(LUV)。親水性藥物可以溶解進(jìn)入內(nèi)層液態(tài)核心，而親脂或雙親化合物可以進(jìn)入脂質(zhì)雙層。微脂粒的制備方法在Gregoriadis，G.(1993)Liposomes Technology(Vol.1，2ndedn)CRC Press中給予綜述。微脂?？梢酝ㄟ^(guò)靜脈注射或者口服給藥。
納米混懸劑是僅由藥物和乳化劑組成的膠狀粒子。
微膠粒是能夠在水相介質(zhì)中捕獲親脂性分子的表面活性劑聚集體。其含有非水性核或脂質(zhì)雙層。
微膠粒是次微米乳劑。制備微膠粒的方法在Osborne Dw，Middleton CA，Rogers RL，Alcohol free nanoemulsions，J.Disp.Sci.Technol.，9，415-423，1988中有所公開(kāi)。
球晶是同心的多層微囊。制備球晶的方法在美國(guó)專利No.5,792,472、美國(guó)專利No.6,103,259和Freund等人.，Life Sciences67(2000)411-419和Mignet等人.，Nucleic Acid Research，Volume28，Issue 16，15 August 2000，頁(yè)數(shù)3134-3142中有所公開(kāi)。
根據(jù)本發(fā)明，由表面活性劑制備膠狀載體，表面活性劑中至少一種是P糖蛋白抑制劑，即與P糖蛋白作用進(jìn)而使P糖蛋白排出泵失去活性。
有利地，作為P糖蛋白抑制劑的表面活性劑是雙親性的。而且其是非離子性表面活性劑。更有利地，其是包含聚氧乙烯部分的脂肪酸酯表面活性劑，如-TPGS(聚乙氧基化生育酚琥珀酸酯)-CremophorEL(聚氧乙烯基蓖麻油或者聚乙氧基化蓖麻油)-Tween20聚氧乙烯脫水山梨醇甘油單月桂酸酯-Tween40聚氧乙烯脫水山梨醇甘油單棕櫚酸酯-Tween60聚氧乙烯脫水山梨醇甘油單硬脂酸酯-Tween80聚氧乙烯脫水山梨醇甘油單油酸酯-PluronicP85 et L81(聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物)-Triton X 100(辛基苯酚乙氧基化物)-Nonidet P40(壬基苯基聚氧乙烯乙二醇)優(yōu)選的P糖蛋白抑制劑表面活性劑是-SolutolHS 15(聚乙烯乙二醇660 12-羥基硬脂酸酯，Coon等人.，1991)，-CremophorEL(蓖麻油35聚烴氧基酯Schuurhuis等人.，1990)-Tween80(聚氧乙烯脫水山梨醇甘油單油酸酯，Riehm andBiedler，1972)根據(jù)本發(fā)明，表面活性劑附于膠狀載體的表面，即其可以通過(guò)其親脂部分固定在表面上，也可通過(guò)弱的化學(xué)力吸附于表面上。
根據(jù)本發(fā)明，將藥理活性物質(zhì)封裝或吸收于膠狀載體上。
“封裝”是指將活性物質(zhì)限制在膠狀載體的內(nèi)部。
“吸收”是指使活性物質(zhì)吸附于膠狀載體的外表面。
根據(jù)本發(fā)明，封裝在膠狀載體內(nèi)的藥理活性物質(zhì)可以是任何藥理活性物質(zhì)，該物質(zhì)在P糖蛋白排出泵的作用下排出細(xì)胞外。有利地，這些藥物可以是任何經(jīng)受多藥耐藥的藥物，更有利地，其可以是任何經(jīng)受多藥耐藥的抗癌藥物。
相應(yīng)地，藥理活性藥物可以是抗癌藥物如長(zhǎng)春堿、秋水仙堿、紫杉醇、依托泊苷、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春新堿或者替尼泊苷。
相應(yīng)地，本發(fā)明中由膠狀載體靶向作用的細(xì)胞可以是腫瘤細(xì)胞如惡性膠質(zhì)瘤、肝轉(zhuǎn)移、直腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、骨髓瘤、前列腺癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞或者卵巢癌細(xì)胞。
許多藥物在口服后可利用率非常低的原因可通過(guò)存在于胃腸道上皮細(xì)胞中的P糖蛋白來(lái)進(jìn)行解釋，由此阻止了上皮對(duì)藥物的足夠吸收。
相應(yīng)地，藥理活性物質(zhì)可以是蛋白酶抑制劑。同樣地，其可以是治療AIDS的藥物如沙奎那維或者克濾滿。
藥理活性藥物也可以是抗菌藥如阿齊霉素、克拉霉素、紅霉素、羅紅霉素、地紅霉素、克林霉素、達(dá)福普汀或四環(huán)素。
在所有的以下描述中-P-gp＝P-糖蛋白-PEG-HS＝Solutol HS 15或者聚乙烯乙二醇660 12-羥基硬脂酸酯(Coon等人.，1991)，-LNC＝根據(jù)WO 01/64328公開(kāi)的方法制備的脂質(zhì)納米膠囊-空白LNC＝無(wú)加載的脂質(zhì)納米膠囊，即沒(méi)有封裝任何藥理活性的脂質(zhì)納米膠囊-加載的LNC＝封裝藥理活性物質(zhì)的脂質(zhì)納米膠囊-SPIbio試驗(yàn)體系＝由SPibio，Massy，F(xiàn)rance制造的P-gp藥物的相互作用檢測(cè)-SD＝標(biāo)準(zhǔn)偏差-F98細(xì)胞＝CRL-2397-9L細(xì)胞＝ECACC 94110705-PX＝紫杉醇


圖1在變化的載體濃度下，不同LNC配方的P-gp與SPIbio試驗(yàn)體系的相互作用實(shí)驗(yàn)。
圖2PH為7.4，37℃下磷酸鹽緩沖液釋放介質(zhì)中加載依托泊苷的不同LNC配方的釋放圖。
圖3不同組的加載依托泊苷的LNC與等量空白LNC或者在F98細(xì)胞中相似濃度的依托泊苷溶液的對(duì)比圖。
圖4不同組的加載依托泊苷的LNC與等量空白LNC或者在9L細(xì)胞中相似濃度的依托泊苷溶液的對(duì)比圖。
圖5不同組的加載紫杉醇的LNC與等量空白LNC或者在F98細(xì)胞中相似濃度的紫杉醇溶液的對(duì)比圖。
圖6不同組的加載紫杉醇的LNC與等量空白LNC或者在9L細(xì)胞中相似濃度的紫杉醇溶液的對(duì)比圖。
圖7在F98細(xì)胞中純的或者與不同組LNC空白結(jié)合的依托泊苷溶液圖8在9L細(xì)胞中純的或者與不同組LNC空白結(jié)合的依托泊苷溶液結(jié)果與討論P(yáng)-gp抑制結(jié)果如附圖1所示。
以平均值+/-SD顯示四次測(cè)量的所有結(jié)果。
將試驗(yàn)體系本身的依賴于P-gp的APT酶的基礎(chǔ)活性值設(shè)定為1.0。
由試驗(yàn)體系的基礎(chǔ)活性給出可比較標(biāo)準(zhǔn)及來(lái)自長(zhǎng)春堿和維拉帕米的附加結(jié)果。
進(jìn)行試驗(yàn)的LNC樣品顯示出以APT酶活性表達(dá)的相關(guān)P-gp活性的降低。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的可能原因是P-gp抑制。
在SPIbio試驗(yàn)體系中觀察到輕微的LNC尺寸依賴的P-gp抑制。
對(duì)于所有的膠囊尺寸，發(fā)現(xiàn)純的LNC懸浮液能明顯降低P-gp相關(guān)的ATP酶活性。
在所有組中，抑制作用會(huì)隨濃度的不同而發(fā)生輕微變化，其中僅發(fā)現(xiàn)在LNC 20配方中，濃度對(duì)APT酶活性的影響很明顯。這證明P-gp相關(guān)的ATP酶的抑制作用可以基本上以游離PEG-HS活性為基礎(chǔ)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，PEG-HS是一種對(duì)多藥耐藥現(xiàn)象有效的P-gp抑制劑。
表面活性劑并不是緊緊的附在LNC表面上，而是在各種水性流體存在的情況下即可分散。從這一點(diǎn)上看，可將LNC看成是一個(gè)同時(shí)載有藥物和其P-gp抑制表面活性PEG-HS的儲(chǔ)存室。通過(guò)藥物與P-gp抑制劑結(jié)合起來(lái)共同轉(zhuǎn)運(yùn)到靶組織，來(lái)使這種體系的作用效果明顯增加。
LNC性質(zhì)與藥物和P-gp抑制劑的體外釋放附圖2顯示的是對(duì)于不同的LNC配方，通過(guò)描述其在磷酸鹽緩沖液(PH＝7.4，溫度37℃)中積累藥物釋放量的百分比來(lái)表達(dá)得自依托泊苷的體外藥物釋放動(dòng)力學(xué)的實(shí)施例。
Eto(LNC20、LCN50、LNC100)＝從加載依托泊苷的20nm、50nm、100nm的LNC中釋放的依托泊苷的重量百分含量。
PEG-HS(LNC20、LCN50、LNC100)＝從加載依托泊苷的20nm、50nm、100nm的LNC中釋放的PEG-HS的重量百分含量。
從這些實(shí)施例中可以很容易觀察到雙重釋放的發(fā)生，一個(gè)是抗癌藥物的釋放，另一個(gè)是P-gp抑制劑PEG-HS的釋放。
將約35％表面活性劑的初始質(zhì)量釋放出來(lái)，這個(gè)量對(duì)于在作用部位的P-gp抑制來(lái)說(shuō)是很重要的。而且，載體系統(tǒng)的穩(wěn)定性沒(méi)有受到表面活性劑釋放的影響。
細(xì)胞培養(yǎng)物實(shí)施例A)圖3與圖4(依托泊苷)和圖5及圖6(紫杉醇)所示結(jié)果Eto(LNC20、LCN50、LNC100)＝加載依托泊苷的20nm、50nm、100nmLNC。
Eto sol＝依托泊苷溶液Eto+PEG-HS sol＝自由給藥的依托泊苷和PEG-HS溶液(PEG-HS的濃度等于相應(yīng)的LNC配方的35％，并且從LNC釋放后，在48小時(shí)內(nèi)可以自由發(fā)揮作用)，見(jiàn)圖2。
空白(LNC20、LCN50、LNC100)＝未加載的20nm、50nm、100nmLNCPX(LNC20、LCN50、LNC100)＝加載紫杉醇的20nm、50nm、100nmLNCPX＝紫杉醇溶液PX+PEG-HS sol＝自由給藥的紫杉醇和PEG-HS溶液(PEG-HS的濃度等于相應(yīng)的LNC配方的35％，并且從LNC釋放后，在48小時(shí)內(nèi)可以自由發(fā)揮作用)，見(jiàn)圖2。
在96小時(shí)潛伏期后，從所有試驗(yàn)的細(xì)胞系中觀察到了藥物溶液與藥物加載的LNC之間的明顯區(qū)別。
對(duì)于依托泊苷，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的IC50值從對(duì)F98生長(zhǎng)抑制高的25倍(fold)到在9L細(xì)胞中的活性提高至少8倍之間變化。
在紫杉醇例子中，效果和差別更明顯。F98細(xì)胞中加載紫杉醇的LNC的活性比純藥品高300倍，同時(shí)在9L細(xì)胞中的抑制作用比藥品要高80倍。
對(duì)于不同尺寸的LNC，顯示了尺寸依賴性的作用強(qiáng)度。證明了空白LNC比游離藥物溶液的細(xì)胞毒素值低，并且可以排除實(shí)驗(yàn)中的高毒性。
B)圖7和圖8所示結(jié)果為了證明在LNC存在下附加效果的儲(chǔ)存室理論，在無(wú)毒濃度(1∶1000稀釋)、空白LNC存在下，用游離藥培養(yǎng)細(xì)胞。
在這種情況下，F(xiàn)98表現(xiàn)出對(duì)這種處理方式的高靈敏性(圖7)。
而且，IC50值顯示了LNC尺寸對(duì)作用效果的影響，其中對(duì)于所有細(xì)胞系來(lái)說(shuō)，最小LNC具有最佳效果。這可能是基于較高的絕對(duì)數(shù)量游離PEG-HS(根據(jù)圖2)的存在，從而增加了P-gp抑制效果。這樣的結(jié)果也符合對(duì)P-gp依賴的LNC體系作用效果的猜想。
通過(guò)與9L和F98比較發(fā)現(xiàn)，通過(guò)藥物/空白LNC的結(jié)合使細(xì)胞生長(zhǎng)受到很大程度的影響，這可能主要基于其耐藥機(jī)制的抑制[Matsumoto等人.1992]。
據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，9L細(xì)胞幾乎不顯示P-gp表達(dá)，并且可以預(yù)測(cè)其具有很低的P-gp依賴的多藥耐藥性(Saito等人.，1991；Yamashima等人.，1993)。
通常，納米載體對(duì)癌細(xì)胞的作用方式是將兩種不同的路徑結(jié)合起來(lái)。
通過(guò)用PEG-HS阻斷P-gp依賴的排出泵可以使細(xì)胞死亡增加，進(jìn)而提高藥物在胞漿中的濃度。這種假設(shè)經(jīng)圖7所示實(shí)施例證實(shí)，其中與游離藥結(jié)合的空白LNC對(duì)F98細(xì)胞顯示出明顯的作用效果，但對(duì)9L細(xì)胞卻沒(méi)有效果。這種在無(wú)藥LNC存在下的較高作用效果說(shuō)明了P-gp的阻斷機(jī)制，尤其是在被報(bào)道具有很少甚至沒(méi)有P-gp表達(dá)的9L細(xì)胞中，這種差別明顯降低。然而，在9L細(xì)胞中，LNC試驗(yàn)還顯示出高于游離藥8倍的作用效果。因此，抗腫瘤活性還可以通過(guò)第二條途徑實(shí)現(xiàn)。由于這些納米載體的尺寸的急劇減小，細(xì)胞對(duì)藥物的吸收明顯增加。這種藥物載體在細(xì)胞內(nèi)的出現(xiàn)可以影響多藥耐藥機(jī)制，如早期文獻(xiàn)中的報(bào)道[Bennis等人.，1994；Hu等人.，1995]。
向初期細(xì)胞培養(yǎng)的老鼠星形細(xì)胞中使用等劑量的LNC，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與游離的PX相比，毒性僅輕微提高。這個(gè)觀察結(jié)果與空白或者加載PX的LNC相似。這些結(jié)果證明了這種新的處理方法的無(wú)害性。
結(jié)論前面描述的納米體系可以使抗癌藥物與P-gp抑制劑從同一體系中結(jié)合釋放，其有利于在癌癥方面對(duì)抗多藥耐藥性的應(yīng)用。在捕獲抗癌藥物之后，發(fā)現(xiàn)新的策略能夠抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，在某些實(shí)施例中LNC會(huì)比溶液中藥物活性高20倍。本系統(tǒng)的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)是藥物和抑制劑的控制轉(zhuǎn)運(yùn)，同時(shí)使抑制劑的毒性很低，且不需要再加入其它組份。
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權(quán)利要求
1.一種膠狀載體在P糖蛋白抑制藥制備中的使用，其中，所述膠狀載體-封裝或吸收藥理活性物質(zhì)，和-包含附在該膠狀載體表面的P糖蛋白抑制劑表面活性劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠狀載體的使用，所述膠狀載體將藥理活性物質(zhì)和P糖蛋白抑制劑表面活性劑共同釋放到靶細(xì)胞中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一所述的膠狀載體的使用，是用來(lái)降低細(xì)胞的多藥耐藥性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一所述的膠狀載體的使用，是用來(lái)提高藥理活性物質(zhì)的口服生物可利用率，該藥理活性物質(zhì)通過(guò)上皮組織的吸收因P糖蛋白而降低。
5.根據(jù)權(quán)利要求1到4任一所述的膠狀載體的使用，其中膠狀載體是納米粒子如納米球、納米膠囊、或者固態(tài)脂質(zhì)納米粒子、微脂粒、微膠粒、納米混懸劑、納米乳液或者球晶。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的膠狀載體的使用，其中納米膠囊是脂質(zhì)納米膠囊。
7.根據(jù)權(quán)利要求1到6任一所述的膠狀載體的使用，其中所述表面活性劑包括聚氧乙烯部分。
8.根據(jù)權(quán)利要求1到7任一所述的膠狀載體的使用，其中所述表面活性劑是聚乙烯乙二醇660 12-羥基硬脂酸酯。
9.根據(jù)權(quán)利要求1到8任一所述的膠狀載體的使用，其中所述藥理活性物質(zhì)是經(jīng)受多藥耐藥性的抗癌藥物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的膠狀載體的使用，其中藥理活性物質(zhì)選自長(zhǎng)春堿、秋水仙堿、紫杉醇、依托泊苷、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春新堿或者替尼泊苷。
11.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的膠狀載體的使用，其中靶細(xì)胞是惡性膠質(zhì)瘤、肝轉(zhuǎn)移、直腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、骨髓瘤、前列腺癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞或者卵巢癌細(xì)胞。
12.根據(jù)權(quán)利要求1到8任一所述的膠狀載體的使用，其中所述藥理活性物質(zhì)是用來(lái)治療AIDS的蛋白酶抑制劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求1到8任一所述的膠狀載體的使用，其中所述藥理活性物質(zhì)是抗菌藥，選自阿齊霉素、克拉霉素、紅霉素、羅紅霉素、地紅霉素、克林霉素、達(dá)福普汀或四環(huán)素。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種膠狀載體在P糖蛋白抑制藥的制備中的使用，其中，所述膠狀載體封裝或吸收藥理活性物質(zhì)，而且還包含附在該膠狀載體表面的P糖蛋白。
文檔編號(hào)A61K9/127GK1741795SQ03825975
公開(kāi)日2006年3月1日 申請(qǐng)日期2003年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月12日
發(fā)明者J－P·伯努瓦, A·朗普雷克特 申請(qǐng)人:國(guó)家健康科學(xué)研究所