專利名稱:多環(huán)醚抗菌素的制作方法
本發(fā)明涉及抗菌素的酸性多環(huán)醚基團(tuán)的新組分，即在生物學(xué)上以陽(yáng)離子穿過(guò)細(xì)胞膜的作用為特征的一類化合物。這類抗菌素包括如莫能菌素、尼日利亞菌素、灰爭(zhēng)菌素、豬神霉素、足腫菌素(meduramycin)、甲基鹽霉素、鹽霉素、拉沙里菌素、妙太羅霉素、伊諾霉素和Leuseramycin之類的已知抗菌劑。這一專題已由Westley在“聚醚抗菌素”(Adv.Appl.Microbiol.，第22卷，177頁(yè)，1977年)中進(jìn)行述評(píng)。
以上所列的多環(huán)醚抗菌素抗革蘭氏陽(yáng)性菌、真菌和原蟲(chóng)是有效的。特別是這些抗菌素顯示了有力的抗球蟲(chóng)活性，因此在各種動(dòng)物感染的處理中，使用這些抗菌素已獲得不同程度的成功。
已知的原蟲(chóng)病和球蟲(chóng)病一直是一個(gè)嚴(yán)重問(wèn)題，防治這些疾病對(duì)獸醫(yī)科學(xué)，尤其是家禽業(yè)，在經(jīng)濟(jì)上是相當(dāng)重要的。球蟲(chóng)病是由一種或多種艾美球蟲(chóng)屬(Eimeria)或等孢子球蟲(chóng)屬(Isospora)菌感染引起的(見(jiàn)Lund和Farr在“家禽病學(xué)”的摘要，1056～1096頁(yè)，Biester和Schwarte編，第五版，衣阿華州立大學(xué)出版社，衣阿華，埃姆斯，1965年)。有六種球蟲(chóng)在敏感的小雞體內(nèi)很容易引起可識(shí)別的疾病。禽艾美球蟲(chóng)(Eimeria tenella)、扉嘴艾美球蟲(chóng)(E.necatrix)、E.brunetti、E.acervulina、E.maxima和E.mivati或是直接破壞消化道上皮細(xì)胞，或是通過(guò)間接產(chǎn)生毒素而引起損害。屬于同一族的其它三種原蟲(chóng)被認(rèn)為是相對(duì)無(wú)害的，然而，E.mitis、E.hagani和E.praecox能減少體重增加，降低進(jìn)食效率以及對(duì)產(chǎn)卵產(chǎn)生不利影響。
鑒于因球蟲(chóng)病造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失，所以繼續(xù)研究了新的抗球蟲(chóng)劑。
腸炎是另一種疾病，對(duì)家畜飼養(yǎng)者造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。小雞、豬、牛和羊都會(huì)患腸炎，主要是由厭氧菌特別是產(chǎn)氣莢膜桿菌(clostr-idium perfringens)和病毒造成的。反芻動(dòng)物的腸原性毒血癥，例如羊的“過(guò)食病”是由產(chǎn)氣莢膜桿菌感染所引起的。
豬痢疾是美國(guó)診斷中最常見(jiàn)豬病之一。而且，這種病在許多別的國(guó)家也是很普遍的，對(duì)全世界每年幼豬儲(chǔ)備造成嚴(yán)重?fù)p失。近來(lái)已發(fā)現(xiàn)大螺旋體是一種致病菌，這種病菌即豬痢疾密螺旋體(Treponema hyodyenterial)現(xiàn)已分離得到，并證明能夠致病〔Harris，D.L.等“豬痢疾-1，豬的豬痢疾密螺旋體(新種)接種及疾病復(fù)發(fā)”，vet，Med/SAC，67卷，61～64頁(yè)，1972年〕。下文列舉的試驗(yàn)數(shù)據(jù)涉及用這種菌進(jìn)行的試驗(yàn)。必需指出，我們尚不知道豬痢疾密螺旋體是否是豬痢疾唯一致病菌。但是，從現(xiàn)有數(shù)據(jù)可以得出結(jié)論，它是主要的感染源。
增強(qiáng)反動(dòng)物如牛和單胃動(dòng)物如豬的性能(提高生長(zhǎng)率和/或提高飼料利用率)是獸醫(yī)科學(xué)在經(jīng)濟(jì)上所要求的另一目的。特別有意義的是通過(guò)提高飼料利用率達(dá)到增強(qiáng)性能的作用。對(duì)于反動(dòng)物飼料的主要營(yíng)養(yǎng)部分的利用機(jī)理是熟知的。動(dòng)物瘤胃中的微生物使碳水化合物的降解，產(chǎn)生單糖，然后，把這些單糖轉(zhuǎn)化為丙酮鹽酸化合物，這些丙酮鹽酸化合物經(jīng)微生物的代謝作用，生成乙酸鹽、丁酸鹽或丙酸鹽，通稱為揮發(fā)性脂肪酸。更詳細(xì)的探討見(jiàn)Leng“反動(dòng)物的消化和代謝生理”，408～410頁(yè)，Phillipson等編，Oriel Press，Newcastle-Upon-Tyne，英國(guó)，1970年。
由McCullough在“飼料”(19頁(yè)，1971年6月19日);Eskeland等在J.An.Sci(第33卷，282頁(yè)，1971年);以及Church等在“Digestive Physiology and Nutrition of Ruminants”(2卷，622和625頁(yè)，1971年)等文獻(xiàn)中論述了揮發(fā)性脂肪酸的利用率。雖然乙酸鹽和丁酸鹽也可被利用，但是丙酸鹽的利用效率較高。此外，如果動(dòng)物獲得的丙酸鹽量太少，就可能患酮病。因此，有益化合物能促使動(dòng)物從碳水化合物產(chǎn)生較高比例丙酸鹽，從而提高碳水化合物的利用率，并且還降低酮病發(fā)生率。
本發(fā)明涉及新的酸性多環(huán)醚抗菌素。歐洲專利0，169，011號(hào)揭示了稱為UK-58，852的酸性多環(huán)醚抗菌素，其具有下列結(jié)構(gòu)式
式中R和R′都是H，這種抗菌素是在微生物紅薔薇足腫放線菌(Actinomadura roseorufa Huang SP.nov.，ATCC 39697)培養(yǎng)液中深層有氧培養(yǎng)產(chǎn)生的，該菌種是從日本土釀樣品中分離得到的。業(yè)已發(fā)現(xiàn)UK-58852在謹(jǐn)慎地控制條件下水解，會(huì)導(dǎo)致一個(gè)連接的糖苷配糖基環(huán)斷開(kāi)，以產(chǎn)生新的化合物，該化合物對(duì)廣譜抗球蟲(chóng)劑是完全有效的。并且，因?yàn)樗倪M(jìn)了毒性范圍，所以具有超過(guò)UK-58852化合物的優(yōu)點(diǎn)。
根據(jù)本發(fā)明，提供了一種具有下述結(jié)構(gòu)式的UK-61689抗菌素化合物，
根據(jù)本發(fā)明，還提供了制備抗菌素UK-61689，或其陽(yáng)離子鹽的方法，包括UK-58852化合物或其陽(yáng)離子鹽的受控水解。
UK-58852的水解，最好用對(duì)甲苯磺酸的乙腈/水溶劑來(lái)實(shí)施。優(yōu)選的乙腈/水組合物含水0.5%～5%。最好采用1.1摩爾當(dāng)量對(duì)甲苯磺酸與1當(dāng)量UK-58852鈉鹽的比值。
可以采用的其它溶劑系統(tǒng)包括純乙腈或叔丁醇/水或丙酮/水?？晒┻x擇的酸包括無(wú)機(jī)酸，如鹽酸、乙酸或強(qiáng)酸樹(shù)脂。一般在室溫下進(jìn)行反應(yīng)，并且用薄層色譜法跟蹤，直至所要求產(chǎn)品達(dá)到最佳得率。用于對(duì)甲苯磺酸的乙腈/水水解系統(tǒng)的反應(yīng)時(shí)間，一般約為1～3小時(shí)，但隨所用的酸和溶劑系統(tǒng)而變化。待反應(yīng)基本完成后，該反應(yīng)混合物用過(guò)量碳酸氫鈉中和，濃縮并用二乙醚或二氯甲烷萃取，然后用標(biāo)準(zhǔn)的硅膠層析技術(shù)提純。最終產(chǎn)物可再結(jié)晶為游離酸或適宜的陽(yáng)離子鹽。
另一方面，抗菌素UK-61689可以含有UK-58852的粗制發(fā)酵萃取液中產(chǎn)生。于是，濃縮甲基異丁基酮(MIBK)發(fā)酵萃取液，并且最好溶于乙腈/水和用對(duì)甲苯磺酸處理。最佳的乙腈水組合物含5%水，粗制發(fā)酵油與對(duì)甲苯磺酸的比值約9∶1，這些比值是近似的，可根據(jù)發(fā)酵萃取液組分而變化?？墒褂玫钠渌軇┫到y(tǒng)包括甲醇/水，但是，也可以通過(guò)用對(duì)甲苯磺酸，不另添加溶劑。處理粗制MIBK萃取液，進(jìn)行水解，可選擇的酸包括無(wú)機(jī)酸，如鹽酸。
抗菌素UK-61689對(duì)許多革蘭氏陽(yáng)性微生物的生長(zhǎng)具有抑制作用。在下面表1中概括了體外試驗(yàn)的結(jié)果。為了進(jìn)行此種試驗(yàn)，在含有營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基和各種濃度的抗菌素UK-61689的許多試管內(nèi)，接種各個(gè)菌種，以測(cè)定化合物抑制細(xì)菌生長(zhǎng)24小時(shí)的最小濃度(微克/毫升)(MIC)。
表Ⅰ抗菌活性菌種名稱 菌株號(hào) MIC微克/毫升產(chǎn)氣莢膜梭狀芽胞桿菌 10A006 2510A009 3.12生膿放線菌 14D002 0.3914D008 0.3914D011 0.39豬痢疾密螺旋體 94A001 6.2594A002 6.2594A007 3.1294A008 3.12抗菌素UK-61，689及其鹽類在小雞體內(nèi)抗球蟲(chóng)感染的療效數(shù)據(jù)，通過(guò)下述方法得到。取幾組3～5只十天年令，無(wú)病原菌的白色來(lái)克亨雞，喂給混合粉狀飼料，飼料中含有均勻分散其中的抗菌素UK-61，689或其鈉鹽和/或鉀鹽。按上述配料喂食24小時(shí)后，每個(gè)小雞口服接種試驗(yàn)用的特種艾美球蟲(chóng)卵囊。另外幾組3～5只十天年令的小雞，喂給同樣的混合粉狀飼料，但不含抗菌素UK-61689或其鹽類。24小時(shí)后，他們也受感染，被用作來(lái)防治感染之用。此外，另取一組3～5只十天年令的小雞，喂給同樣的混合粉狀飼料，但不含抗菌素UK-61，689，并且不用球蟲(chóng)感染。這些用作正常防治。五天后，就E.acervulina評(píng)價(jià)處理結(jié)果，六天后，評(píng)價(jià)其他所有免疫試驗(yàn)。
用于測(cè)定抗球蟲(chóng)活性的標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于禽艾美球蟲(chóng)包括0～4傷害分?jǐn)?shù)，(由J.E.Lyuch論述于“抗球蟲(chóng)活性基本測(cè)定的新方法”，Am.J.Ver Res.，22卷，324～326頁(yè)，1961年);對(duì)于其它種球蟲(chóng)，由J.Johnson和W.H.Reid規(guī)定的傷害評(píng)分系統(tǒng)的修正，定為0～3，見(jiàn)“抗球蟲(chóng)藥物，Lesion Scoring Techniques in Battey and Floor Pen Experimentin Chicks“，Exp.Parasit.，28卷，30～36頁(yè)，1970年。通過(guò)用防治感染的傷害分?jǐn)?shù)除每個(gè)已處理組的傷害分?jǐn)?shù)確定恒比值。
抗菌素uk-61689及其陽(yáng)離子鹽對(duì)家禽抗球蟲(chóng)感染顯示了極好的活性。把15-120PPm的這些化合物摻入小雞的食物時(shí)，對(duì)防治禽艾美球蟲(chóng)、E.acerulina、E.maxima、E.brunetri和扁嘴艾美球蟲(chóng)的防治感染是有效的。
動(dòng)物的飼料量一般直接由要喂食的動(dòng)物而定。英國(guó)書(shū)1，197，826號(hào)詳述了體外瘤胃技術(shù)，從而在動(dòng)物飼料的評(píng)定方面，使得測(cè)定由微生物引起的飼料中的變化更為迅速，精度也高。這種技術(shù)包括使用一種裝置，在該裝置中進(jìn)行著動(dòng)物的消化過(guò)程，而在體外進(jìn)引研究。將動(dòng)物的飼料、瘤胃培菌液和各種生長(zhǎng)促進(jìn)劑(growth promotants)引入該裝置，并在謹(jǐn)慎地控制條件下，從試驗(yàn)設(shè)備排出，嚴(yán)謹(jǐn)、漸進(jìn)地研究微生物消耗飼料過(guò)程中發(fā)生的變化。瘤胃液中丙酸組分的增加表明，由于飼料組合物中生長(zhǎng)促進(jìn)劑引起了反動(dòng)物整個(gè)性能方面所要求的反應(yīng)。丙酸組分的變化，以對(duì)照瘤胃液得到的丙酸組分的百分比表示。長(zhǎng)期的體內(nèi)進(jìn)食研究表明，瘤胃液中丙酸的增加和動(dòng)物特性的改進(jìn)之間，存在著可靠的相關(guān)性。
從經(jīng)胃痿術(shù)乳牛中收集瘤胃液，該乳牛用市售的含脂肪配料加干草進(jìn)行飼養(yǎng)。瘤胃液立即經(jīng)干酪包布過(guò)濾，取10毫升加到50毫升圓錐長(zhǎng)頸瓶中。長(zhǎng)頸瓶裝有400毫克標(biāo)準(zhǔn)作用物(68%玉米淀物+17%纖維素+15%提取的大豆粉)，10毫升H6.8的緩沖液和試驗(yàn)化合物。長(zhǎng)頸瓶用無(wú)氧的氮?dú)饧s2分鐘，并在振蕩水浴中和39℃下保溫16小時(shí)。所有試驗(yàn)重復(fù)三次。
保溫后，5毫升試樣與1毫升25%偏磷酸混合，10分鐘后，加入0.25毫升甲酸。該混合物在1500轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘，然后，用D.W.Kellog的方法(j.Dairy Science，52卷，1690頁(yè)，1969年)經(jīng)氣液層析分析這些試樣，用未經(jīng)處理和已處理的保溫長(zhǎng)頸瓶，確定乙酸、丙酸和丁酸的峰值高度。
當(dāng)用這種體內(nèi)方法試驗(yàn)時(shí)，每毫升含20微克抗菌素UK-61689會(huì)導(dǎo)致增加約80%丙酸產(chǎn)品，超過(guò)不加抗菌素UK-61689的對(duì)照溶液所產(chǎn)生的量。已知刺激RPA(瘤胃丙酸)產(chǎn)生的化合物，通過(guò)反類動(dòng)物如牛和羊，可提高飼料的利用，還可對(duì)單胃動(dòng)物如豬，有同樣作用?？咕豒K-61，689可以并入飼料組合物中，或者如游離酸，或者如鈉鹽或鉀鹽，或其混合物喂給動(dòng)物。另一方面，含抗菌素UK-61，689的粗制品或發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)粉，可并入飼料組合物，達(dá)到所要求的效力濃度。還可用合適的為測(cè)量藥物恒定含量設(shè)計(jì)的持續(xù)釋放裝置，以所要求的劑量供給抗菌素UK-61，689。
將球蟲(chóng)用于處理家禽，可以適宜的載體形式口服本發(fā)明化合物，適宜的藥療法可簡(jiǎn)單地用飲用水或家禽飼料實(shí)施，使實(shí)禽隨著日飲水或日料量來(lái)吸收藥劑的治療劑量。藥劑可直接量入飲用水，最好以液體形式和水溶性濃縮物形式加入(如水溶性鹽的水溶液)，或者直接加入飼料，或如以預(yù)混料或濃縮物形式直接加入。載體中治療藥劑的預(yù)混料或濃縮物，一般用來(lái)將藥劑摻入飼料。適宜的載體可以是任何的液體或固體，如水、各種細(xì)粒，例如大豆餅粉、亞麻籽餅粉、玉米芯粉，以及如通常用于家禽飼料的那種礦物質(zhì)混合物。特別有效的載體就是家禽飼料本身，即小部分家禽飼料。載體是促進(jìn)活性物質(zhì)在已摻有預(yù)混料的飼料中能均勻分布。這是很重要的，因?yàn)橹恍枰〔糠直景l(fā)明的有效藥劑。重要的是把化合物充分混入預(yù)混料，然后混入飼料。在這點(diǎn)上，藥劑可分散或溶于如豆油、五米油、棉籽油等適宜的油性賦形劑，或者溶于揮發(fā)性有機(jī)溶劑，然后與載體混合。由于配好的飼料中藥劑的量可以通過(guò)預(yù)混料與飼料以合適比例混合進(jìn)行調(diào)節(jié)，以獲得所要求的治療劑量，所以，可以理解濃縮物中活性材料的比例變化范圍能夠很廣。
如上所述，通過(guò)飼料加工廠將高效濃縮物與蛋白載體如大豆餅粉和其它粉料混合，產(chǎn)生適宜于直接喂食家禽的濃縮添加物。在這種情況下，家禽可以吸收有用食物。另一方面，這種濃縮添加物可直接加入家禽飼料，以達(dá)到營(yíng)養(yǎng)上平衡的配料，它含有治療上有效含量的本發(fā)明化合物。該化合物用常規(guī)方法，如用雙壁混合器充分混合均勻。
當(dāng)然，熟悉本技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員，對(duì)本文所述化合物的用量，顯然可在不同期間下進(jìn)行改變。在生長(zhǎng)期間，對(duì)小雞即在頭6～12星期期間，連續(xù)低劑量投藥法是有效的預(yù)防法。在處理已感染家禽中，必須高劑量來(lái)解決感染。飼料用量范圍一般為15～120ppm。當(dāng)摻入飲用水給藥時(shí)，提供的劑量是與藥療法的日劑量相同，即15～120ppm，這根據(jù)平均每天消耗的飼料對(duì)平均每天消耗水的重量之比進(jìn)行計(jì)算。
由下述實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明，但是，應(yīng)該很清楚，這些實(shí)施例的具體詳述并不限制本發(fā)明。
實(shí)施例1將3.07克(0.0161摩爾)對(duì)甲苯磺酸加到15.0克(0.0147摩爾)抗菌素UK-58，852號(hào)(按歐洲專利0169011號(hào)所述進(jìn)行制備)的乙腈/水(95∶5)(400毫升)溶液中，通過(guò)薄層層析跟蹤該反應(yīng)，直至所要求產(chǎn)品的得率達(dá)到最佳水平(約3小時(shí))。用過(guò)量的碳酸氫鈉固體或其水溶液處理反應(yīng)化合物，經(jīng)真空濃縮干燥，將生成的固體溶于二乙醚，用飽和的碳酸氫鈉水溶液進(jìn)行洗滌。碳酸氫鹽洗液用二乙醚萃取，并將所有乙醚層合并，依次用水和飽和的氯化鈉洗滌。乙醚溶液用無(wú)水硫酸鈉干燥去水，再經(jīng)真空蒸干。生成含有化合物UK-61，689為主要產(chǎn)品的粗制反應(yīng)產(chǎn)品，但還夾雜有不同量的UK-58，852的起始材料和其它副產(chǎn)品。粗制產(chǎn)品用硅膠層析提純，繼之以用異丙醚再結(jié)晶，得到4.2克(32%)如鈉鹽的化合物UK-61，689。熔點(diǎn)175～176℃;〔α〕25D＝+19.3°(c＝0.5，MeOH);C-13核磁共振(CDCl3)179.15ppm，107.45，103.18，97.74，96.96，86.92，84.60，84.20，82.27，82.01，80.88，80.20，79.86，74.80，74.55，73.07，70.06，67.71，66.89，59.11，56.81，45.40，39.82，38.93，36.46，33.81，33.71，33.54，33.42，33.13，32.44，32.26，30.56，27.58，26.90，26.84，26.11，23.23，18.40，17.53，16.99，12.13，11.04，10.42。
實(shí)施例2含有抗菌素UK-58，852(測(cè)定值25克)的粗制發(fā)酵萃取液(MIBK)(1升)，真空濃縮至680克。將深色粘稠油加到乙腈/乙(95∶5)(5.6升)中，生成的乳狀液用一份對(duì)甲苯磺酸(78.2克)進(jìn)行處理，反應(yīng)時(shí)，乳狀液逐漸分成明顯的兩層，再劇烈攪拌共計(jì)1.25小時(shí)。反應(yīng)混合物注入分離漏斗，除去底部的油性層，另加乙腈/水(95∶5)使反應(yīng)混合物變成漿狀。合并乙腈/水層，用飽和的碳酸氫鈉水溶液(400毫升)處理。然后，混合物真空濃縮至粘稠漿，溶于二乙醚/乙酸乙酯(3∶1)(2升)，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。有機(jī)層用硫酸鈉干燥并濃縮至棕色粘稠油(432克)。采用逆流萃取技術(shù)能極方便地完成純化。使用非極性相的己烷∶乙酸乙酯(1∶1)和極性液相的甲醇∶水(3∶2)進(jìn)行萃取。蒸發(fā)有機(jī)萃取液得半固體，用異丙醚研制從而獲得鈉鹽的化合物UK-61，689(10克)，熔點(diǎn)169～170℃。這種物質(zhì)經(jīng)薄層色譜分析及核磁共振對(duì)比，與用實(shí)施例1的方法產(chǎn)生的化合物UK-61，689完全一樣。
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)通式(Ⅰ)的抗菌素或其藥物上可接受的陽(yáng)離子鹽的
其特征在于控制水介通式(Ⅱ)的化合物
以及必要時(shí)，將游離酸形式轉(zhuǎn)化成其在藥物上可接受的陽(yáng)離子鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其中，用對(duì)甲苯磺酸的乙腈/水溶劑進(jìn)行水解。
3.根據(jù)上述任一項(xiàng)權(quán)利要求
所述方法，其中乙腈/水組合物含水0.5%～5%。
4.根據(jù)上述任一項(xiàng)權(quán)利要求
所述方法，其中1.1摩爾當(dāng)量對(duì)甲苯磺酸用于1當(dāng)量通式Ⅱ化合物的鈉鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1至4的任一項(xiàng)權(quán)利要求
所述方法，其中由此產(chǎn)生的抗菌素與動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)飼料相混合。
6.一種用于?；蜇i的營(yíng)養(yǎng)飼料組合物，其特征在于所述飼料含有有效量的促進(jìn)生長(zhǎng)和/或提高所述?；蜇i的飼料利用的權(quán)利要求
1的抗菌素。
7.促進(jìn)生長(zhǎng)和/或提高豬或牛的飼料利用效率的方法，包括供給所述豬或牛生長(zhǎng)促進(jìn)量或提高飼料利用率的有效量的權(quán)利要求
1的抗菌素。
8.根據(jù)權(quán)利要求
7所述的方法，其中所述抗菌素是通過(guò)將該抗菌素加到被豬或牛吸收的飼料中而供給所述豬或牛的。
9.用于家禽的營(yíng)養(yǎng)飼料組合物，其特征在于所述飼料包含有效量于防治所述家禽的球蟲(chóng)感染的權(quán)利要求
1的抗菌素化合物。
10.防治家禽的球蟲(chóng)感染方法，包括供給所述家禽抗球蟲(chóng)的有效量的權(quán)利要求
1的抗菌素化合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求
10所述方法，其中，所述抗菌素是通過(guò)把該抗菌素加到被家禽吸收的飼料中以供給所述家禽。
專利摘要
具有下列通式的新穎酸式多環(huán)抗菌素UK-61,689或其在藥物上可接受的陽(yáng)離子鹽
文檔編號(hào)A61K31/70GK87105304SQ87105304
公開(kāi)日1988年2月17日 申請(qǐng)日期1987年7月29日
發(fā)明者亞歷山大·克羅?！す诺? 奈杰爾·德里克·阿瑟·沃爾什 申請(qǐng)人:菲澤有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan