專利名稱：一種治療奶牛臨床乳房炎的生物性免疫制劑及其制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物性免疫制劑，尤其是涉及一種治療奶牛臨床乳房炎的生物性免疫制劑及其制作方法。
背景技術(shù)：
奶牛臨床乳房炎已成為奶牛場最嚴(yán)重最常見的疾病之一，發(fā)病率高達(dá)30％-80％，它嚴(yán)重影響奶牛的產(chǎn)奶量，降低奶牛養(yǎng)殖場的經(jīng)濟(jì)效益。據(jù)專家估計，全球每年因為奶牛乳房炎所造成的牛奶損失可達(dá)380萬噸。更重要的是，患乳房炎奶牛所產(chǎn)的牛奶品質(zhì)下降，有害微生物含量超標(biāo)，嚴(yán)重危及人體健康。奶牛乳房炎已經(jīng)成為制約奶牛養(yǎng)殖業(yè)健康快速發(fā)展的關(guān)鍵因素之一。
奶牛乳房炎是由多種非特定的病原微生物感染奶牛乳房所導(dǎo)致，這些病原包括細(xì)菌、病毒、真菌和霉形體。引起奶牛乳房炎的病原微生物多達(dá)80多種，較常見的有23種，其中細(xì)菌14種，霉形體2種，真菌和病毒7種，這是奶牛乳房炎不同于其他疾病的主要特點之一。
奶牛乳房炎的主要致病微生物以細(xì)菌為主，抗生素一直是該病的主要治療藥物。目前，獸醫(yī)治療奶牛臨床乳房炎所使用的抗生素有p-內(nèi)酰胺類抗生素包括青霉素和頭孢菌素，氨基糖甙類藥物如鏈霉素、新生霉素，大環(huán)內(nèi)脂類抗生素如紅霉素、螺旋霉素，土霉素類及林可霉素和克林霉素等。
抗生素使用的缺點由于抗生素的長期使用使得奶牛體內(nèi)的病原菌產(chǎn)生了耐藥性。大量的研究資料證實，牛奶中分離出的病原菌對許多種抗生素沒有反應(yīng)。細(xì)菌耐藥性的出現(xiàn)，使得臨床治療乳房炎時，抗生素的用量由過去的幾十萬個單位猛增到現(xiàn)在的幾百萬個單位，即使這樣，有時還難以奏效。大劑量使用抗生素，不僅提高了奶牛養(yǎng)殖成本，降低了利潤，而且導(dǎo)致奶?？股貧埩袅可仙?，牛奶品質(zhì)下降。由于抗生素的熱穩(wěn)定性較強(qiáng)，即使經(jīng)高溫加熱也無法把它們清除掉。長期飲用這樣的含有大量抗生素殘留的牛奶，勢必危害消費者身體健康抗生素過敏體質(zhì)的人可能出現(xiàn)過敏反應(yīng)，甚至發(fā)生過敏休克，危及生命；正常人群則會使體內(nèi)的細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性。乳房炎奶牛生產(chǎn)的牛奶中除了抗生素殘留外，還有含有病原菌及其代謝產(chǎn)物等對人體有害的成分。
乳房炎疫苗的缺點目前國內(nèi)外有些公司或個人從乳房炎患牛中分離病原菌，將其培養(yǎng)滅活后制成滅活菌苗，然后免疫奶牛以預(yù)防奶牛乳房炎的發(fā)生。據(jù)報道，這種方法在試驗中取得了一定的效果。但疫苗免疫法存在有兩個問題難以解決，首先由于引起乳房炎病原菌的復(fù)雜性及多樣性(前面已詳述)，所制備的疫苗在免疫奶牛后只能使奶牛對有限的幾種病原菌產(chǎn)生特異性免疫力。更重要的是這種疫苗屬于預(yù)防性疫苗而不是治療性疫苗，難以解決乳房炎的治療問題。另外，據(jù)調(diào)查，這種疫苗屬于滅活苗，價格昂貴(每頭份超過100元)。
中藥使用的缺點中藥防治奶牛乳房炎是我國的一大特色。但其治療效果還不如抗生素，并且療效慢，配方復(fù)雜。更重要的，該制劑使用時需要灌服，耗費大量的人力。如果添加在飼料中，則影響治療效果，或者適口性差，影響奶牛的飼料攝入。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決上述背景技術(shù)中的不足之處，提供一種治療奶牛乳房炎的生物性免疫制劑及其制作方法，其具有抗細(xì)菌、病毒、真菌及寄生蟲等多種功能，避免了抗生素只抗細(xì)菌的作用局限，并且克服了抗生素治標(biāo)不治本的局限，從提高奶牛免疫功能尤其是乳房局部免疫功能來達(dá)到治療奶牛臨床乳房炎這一根本途徑入手，實現(xiàn)治愈奶牛乳房炎的目的。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種治療奶牛臨床乳房炎的生物性免疫制劑，其特殊之處在于包括以下組分豬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子為0％-100％；牛淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子為0％-100％。
一種治療奶牛臨床乳房炎的生物性免疫制劑的制作方法，其特殊之處在于包括以下操作步驟選取豬、牛的脾臟絞碎單獨或按比例混合后進(jìn)行勻漿，將勻漿液反復(fù)進(jìn)行冰凍、解凍，再進(jìn)行冷凍離心，取上清液經(jīng)過透析、冰凍、解凍、過濾后制成成品。
上述操作步驟包括選取健康豬、牛的新鮮脾臟，除去脾臟表面及內(nèi)部的解締組織后，冰凍保存，取上述冰凍脾臟，待其解融后，絞碎，將絞碎的豬脾和牛脾混合，每份按照豬脾∶牛脾＝0～10∶0～10(重量比)，再加入與脾臟等重量的無菌三蒸水后，進(jìn)行組織搗碎勻漿，速度為8000～10000轉(zhuǎn)/分鐘，時間為6～10分鐘，制備好的勻漿液于-20℃冰凍24～48小時后，取出置于水浴恒溫振蕩器中進(jìn)行往復(fù)振蕩直至冰凍的勻漿塊全部化為勻漿液，振蕩器水溫保持在室溫，振蕩速度為60～100轉(zhuǎn)/分鐘，將勻漿液冰凍、解凍，反復(fù)6次，取最后一次解凍的勻漿液，以10000轉(zhuǎn)/分鐘冷凍離心30分鐘后，取上清液，裝入透析袋，在用三蒸水配制的無菌生理鹽中透析48小時，收取透析袋外的透析液，冰凍48～96小時后再次解凍，經(jīng)濾膜過濾，除去細(xì)菌及沉淀，收集濾過液，該濾過液經(jīng)無菌分裝后冰凍保存。
上述組織搗碎勻漿過程采用間歇方式，即每勻漿3分鐘停止10分鐘。
上述透析袋截留分子量可以是10KD。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的優(yōu)點和效果如下1、本產(chǎn)品具有抗細(xì)菌、病毒、真菌及寄生蟲的優(yōu)點。①避免了抗生素只抗細(xì)菌的作用局限?？股刂粚?xì)胞外細(xì)菌有殺滅作用，對細(xì)胞內(nèi)寄生的細(xì)菌如結(jié)核菌等則無作用。本產(chǎn)品本身不能直接殺滅病原微生物，而是通過激活乳房炎患牛的免疫系統(tǒng)來達(dá)到清除病原微生物、治愈乳房炎的效應(yīng)。乳房炎患牛的免疫系統(tǒng)一旦被激活，對體內(nèi)所有病原微生物包括細(xì)菌、真菌、病毒及寄生蟲均發(fā)揮清除作用。②克服了抗生素治標(biāo)不治本的局限，并且長期使用抗生素也會降低奶牛的抵抗力，導(dǎo)致奶牛臨床乳房炎復(fù)發(fā)率提高。本產(chǎn)品從提高奶牛免疫功能尤其是乳房局部免疫功能來達(dá)到治療奶牛臨床乳房炎這一根本途徑入手，實現(xiàn)治愈奶牛乳房炎的目的。乳房炎患牛使用本產(chǎn)品后，由于整體免疫功能提高，因而治愈后復(fù)發(fā)率大大低于抗生素治愈后的奶牛乳房炎復(fù)發(fā)率。③奶牛使用本產(chǎn)品，不僅對治療臨床乳房炎有良好的療效，同時對奶?？蛊渌麄魅静∫灿休^好的效果。
2、本產(chǎn)品進(jìn)入機(jī)體后，能夠迅速發(fā)揮其效應(yīng)，避免了中藥作用緩慢的缺點。中藥之所以在治療奶牛臨床乳房炎中不被重視，其很重要的一個原因是藥效不如抗生素快，此外一些中藥還有毒副作用。據(jù)我們對本產(chǎn)品在奶牛廠的試驗觀察，本產(chǎn)品的療效絲毫不亞于抗生素。
3.、本產(chǎn)品進(jìn)入奶牛體內(nèi)后，能夠被迅速、完全吸收，且無任何殘留，奶牛分泌的牛奶中也無任何殘留。
4、本產(chǎn)品使用途徑為肌肉注射，且可在奶牛的任何肌肉部位注射。避免了經(jīng)乳頭注射抗生素或灌服中藥耗工、費時的缺陷。
5、本產(chǎn)品使用后，奶牛所產(chǎn)的牛奶可正常出售，避免了抗生素使用后一周內(nèi)必須廢棄牛奶的缺陷。為奶牛廠挽回了廢棄牛奶所造成的損失。
6、經(jīng)過臨床試驗，本產(chǎn)品對奶牛臨床乳房炎的治愈率約為80％?；寂R床乳房炎的奶牛，每日注射本產(chǎn)品一次，每次注射10毫升，平均連續(xù)使用約4天左右，即可治愈乳房炎患牛。
7.本產(chǎn)品多次使用，奶牛不會產(chǎn)生抗藥性，因此藥效穩(wěn)定。避免了抗生素連續(xù)使用導(dǎo)致奶牛產(chǎn)生抗藥性，從而不得不在使用中加大藥量的缺陷。
具體實施例方式本發(fā)明制劑包括豬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子、牛淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子。各組分組成所占比例范圍為豬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子0％-100％；牛轉(zhuǎn)移因子為0％-100％。
實施例1 豬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子 18iu牛淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子 2iu實施例2 豬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子 10iu牛淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子 10iu工藝過程從屠宰車間選取健康豬、牛的新鮮脾臟，并經(jīng)檢視脾臟無病變、色澤正常后，除去脾臟表面及內(nèi)部的解締組織后，冰凍保存。取上述冰凍脾臟，待其解融后，絞碎。將絞碎的豬脾和牛脾混合，每份按照豬脾∶牛脾＝0～10∶0～10(重量比)，再加入與脾臟等重量的無菌三蒸水后，進(jìn)行組織搗碎勻漿，速度為約8000～10000轉(zhuǎn)/分鐘，時間為6～10分鐘左右。組織搗碎勻漿過程以間歇方式，即每勻漿3分鐘停止10分鐘左右進(jìn)行為佳，其目的是防止勻漿機(jī)高速運轉(zhuǎn)過熱，影響機(jī)器壽命。制備好的勻漿液于零下20℃冰凍24～48小時后，取出置于水浴恒溫振蕩器中進(jìn)行往復(fù)振蕩，振蕩器水溫保持在室溫條件，振蕩速度約為60～100轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩時間以冰凍的勻漿塊全部化為勻漿液為標(biāo)準(zhǔn)。如此，將勻漿液冰凍、解凍，反復(fù)進(jìn)行6次。取最后一次解凍的勻漿液，以10000轉(zhuǎn)/分鐘高速冷凍離心30分鐘后，取上清液，裝入透析袋(截留分子量為10KD)，在用三蒸水配制的無菌生理鹽中透析48小時。收取透析袋外的透析液，冰凍48～96小時后再次解凍，經(jīng)0.22μm的濾膜過濾，除去細(xì)菌及沉淀，收集濾過液。該濾過液經(jīng)無菌分裝，冰凍保存。使用時用自來水或自然解凍，待瓶內(nèi)液體恢復(fù)至室溫后即可直接注射給牛奶。
本發(fā)明的工作原理本發(fā)明所含的生物活性因子進(jìn)入乳房炎奶牛體內(nèi)后，首先刺激牛奶骨髓造血干細(xì)胞產(chǎn)生大量免疫細(xì)胞，并促使這些免疫細(xì)胞被釋放至外周血。外周血的T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及粒細(xì)胞被本產(chǎn)品的活性因子激活，然后經(jīng)淋巴細(xì)胞循環(huán)進(jìn)入乳房組織，殺滅導(dǎo)致乳房炎的病原微生物。和治療前乳房組織中低活性的免疫細(xì)胞相比，經(jīng)本制劑激活的免疫細(xì)胞殺傷病原微生物能力得到極大的增強(qiáng)，因此使用本產(chǎn)品后奶牛乳房中的病原微生物能夠被迅速清除，使臨床乳房炎患牛很快得以康復(fù)。
本發(fā)明所含活性成分全部來自動物免疫細(xì)胞。所有成分這些進(jìn)入奶牛體內(nèi)后，其作用的靶細(xì)胞均為奶牛免疫細(xì)胞，奶牛免疫細(xì)胞受這些成分的作用后，靜息免疫細(xì)胞被激活，活化免疫細(xì)胞活性被強(qiáng)化，尤其是奶牛白細(xì)胞數(shù)量及活性的顯著提高。這些活化的免疫細(xì)胞使得奶牛乳腺免疫力和整體免疫力得到明顯改善，具體表現(xiàn)在乳房局部的白細(xì)胞殺滅病原微生物能力大大提高，導(dǎo)致奶牛乳房炎的病原微生物迅速被清除，乳房炎患牛很快被治愈。另外，由于奶牛整體免疫力的提高，抗御病原微生物侵襲能力加強(qiáng)，奶牛不易被包括細(xì)胞內(nèi)寄生菌和病毒在內(nèi)的病原微生物再次感染，這是本產(chǎn)品在治療乳房炎奶牛中優(yōu)于抗生素之關(guān)鍵所在。
此外，本產(chǎn)品所有成分均為生物活性因子，其受體細(xì)胞均為免疫細(xì)胞，所以進(jìn)入奶牛機(jī)體后能夠直接作用于奶牛免疫細(xì)胞。因此，使用后見效快，并且被奶牛全部、迅速吸收，無任何殘留及毒副作用。這是其優(yōu)于抗生素及中藥的另一方面。
由于本產(chǎn)品不直接作用于細(xì)菌，而是通過提高奶牛細(xì)胞免疫功能達(dá)到清除病原微生物，治愈奶牛乳房炎的目的，因此不會使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。
本產(chǎn)品為生物活性成分，經(jīng)注射途徑進(jìn)入機(jī)體效果最佳，因此直接肌肉注射是保證本產(chǎn)品發(fā)揮最佳效果的前提。本產(chǎn)品經(jīng)肌肉注射在治療奶牛乳房炎時，和抗生素經(jīng)乳頭注射進(jìn)乳池治療乳房炎相比，使用方法簡便，省時、省力。
權(quán)利要求
1.一種治療奶牛臨床乳房炎的生物性免疫制劑，其特征在于包括以下組分豬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子為0％-100％；牛淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子為0％-100％。
2.一種治療奶牛臨床乳房炎的生物性免疫制劑的制作方法，其特征在于包括以下操作步驟選取豬、牛的脾臟絞碎按比例混合后進(jìn)行勻漿，將勻漿液反復(fù)進(jìn)行冰凍、解凍，再進(jìn)行冷凍離心，取上清液經(jīng)過透析、冰凍、解凍、過濾后制成成品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療奶牛臨床乳房炎的生物性免疫制劑的制作方法，其特征在于包括以下操作步驟選取健康豬、牛的新鮮脾臟，除去脾臟表面及內(nèi)部的結(jié)締組織后，冰凍保存，取上述冰凍脾臟，待其解融后，絞碎，將絞碎的豬脾和牛脾混合，每份按照豬脾∶牛脾＝0～10∶0～10(重量比)，再加入與脾臟等重量的無菌三蒸水后，進(jìn)行組織搗碎勻漿，速度為8000～10000轉(zhuǎn)/分鐘，時間為6～10分鐘，制備好的勻漿液于-20℃冰凍24～48小時后，取出置于水浴恒溫振蕩器中進(jìn)行往復(fù)振蕩直至冰凍的勻漿塊全部化為勻漿液，振蕩器水溫保持在室溫，振蕩速度為60～100轉(zhuǎn)/分鐘，將勻漿液冰凍、解融，反復(fù)進(jìn)行6次，取最后一次解凍的勻漿液，以10000轉(zhuǎn)/分鐘冷凍離心30分鐘后，取上清液，裝入透析袋，在用三蒸水配制的無菌生理鹽中透析48小時，收取透析袋外的透析液，冰凍48～96小時后再次解凍，經(jīng)濾膜過濾，除去細(xì)菌及沉淀，收集濾過液，該濾過液經(jīng)無菌分裝后冰凍保存。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種治療奶牛臨床乳房炎的生物性免疫制劑的制作方法，其特征在于包括以下操作步驟所述組織搗碎勻漿過程采用間歇方式，即每勻漿3分鐘停止10分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種治療奶牛臨床乳房炎的生物性免疫制劑的制作方法，其特征在于包括以下操作步驟所述透析袋截留分子量為10KD。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療奶牛臨床乳房炎的生物性免疫制劑及其制作方法，其具有抗細(xì)菌、病毒、真菌及寄生蟲等多種功能，避免了抗生素只抗細(xì)菌的局限，并且克服了抗生素治標(biāo)不治本的局限，從提高奶牛免疫抵抗力尤其是乳房局部免疫力來達(dá)到治療奶牛臨床乳房炎這一根本途徑入手，實現(xiàn)治愈奶牛乳房炎的目的。本發(fā)明包括以下組分豬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子為0％－100％；牛淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子為0％－100％。工藝過程為選取豬、牛的脾臟絞碎按比例混合后進(jìn)行組織搗碎勻漿，將勻漿液反復(fù)進(jìn)行冰凍、解融，再進(jìn)行冷凍離心，取上清液經(jīng)過透析、冰凍、解凍、過濾后制成成品。
文檔編號A61K35/28GK1589897SQ20031010587
公開日2005年3月9日 申請日期2003年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月3日
發(fā)明者陳德坤 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)