專利名稱：澳洲茄胺的制備方法及其澳洲茄胺在醫(yī)藥上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及澳洲茄胺的制備方法及其澳洲茄胺在醫(yī)藥上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
國(guó)內(nèi)外已有龍葵、澳洲茄和黃果茄的化學(xué)成分，澳洲茄胺的分離檢測(cè)方法和具有抗S180、抗炎、升高血糖等作用的報(bào)導(dǎo)，但尚未見澳洲茄胺制備方法及澳洲茄胺在醫(yī)藥上應(yīng)用的相關(guān)信息。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種具有抗癌、抗炎藥效活性，毒副作用小，制備方法簡(jiǎn)便，純度高、藥效活性強(qiáng)的澳洲茄胺的制備方法，以及將澳洲茄胺做為中藥一類抗癌、抗炎藥物的新藥源在醫(yī)藥上的應(yīng)用，以取代療效差、毒副作用大，生產(chǎn)方法復(fù)雜，產(chǎn)品質(zhì)量差不能進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)的現(xiàn)有醫(yī)藥，造福于人類。
本發(fā)明澳洲茄胺的制備原理是將無(wú)抗癌、抗炎活性化合物α-澳洲茄堿、β-澳洲茄堿、γ-澳洲茄堿、邊緣茄堿的混合物水解，使與糖結(jié)合的生物堿——澳洲茄堿分子中具有抗癌、抗炎作用的3-羥基由結(jié)合狀態(tài)變成游離狀態(tài)，以藥效活性基團(tuán)的形式存在于分子之中，使分子產(chǎn)生抗癌、抗炎活性，達(dá)到將無(wú)藥效活性成分的混合物全部轉(zhuǎn)化成藥效活性單體的目的。
其反應(yīng)如下

1、本發(fā)明的目的是提供澳洲茄胺的制備方法本發(fā)明的具有抗癌、抗炎活性的中藥一類新藥源澳洲茄胺是以茄科植物龍葵(Solanum Nigrum L)、澳洲茄(Solanum aviculare parst)或黃果茄(Solanumxanthocar pum Schrad，et wendl)的生果或其全草為原料，并按如下制備方法提取澳洲茄胺(1)原料處理及粗總生物堿的提取將龍葵、澳洲茄或黃果茄的生果或其全草經(jīng)篩選后，粉碎壓汁固液分離得果汁、果渣，用2～6％的醋酸水溶液浸取果渣，固液重量比1∶1，浸取2～3次，固液分離得浸液，合并果汁及浸液，放置沉降，取上清液加熱至沸除去上浮物，過(guò)濾冷卻，將濾液放置沉降，取上清液加熱至80～85℃時(shí)加濃氨水或NaOH、Na2CO3、KOH的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對(duì)下濁液離心固液分離，得膏狀粗總生物堿；(2)粗總生物堿的精制用2～6％醋酸水溶液溶解膏狀粗總生物堿，固液重量比1∶10～30，加熱至沸除去上浮物，過(guò)濾冷卻沉降，取上清液加熱至80～85℃時(shí)，加濃氨水或堿的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對(duì)下濁液離心固液分離得膏狀總生物堿，在80～100℃下恒溫干燥、粉碎得龍葵、澳洲茄或黃果茄中的總生物堿，其主要成分為α、β、γ-澳洲茄堿、邊緣茄堿四種生物堿的混合物；(3)粗澳洲茄胺的提取用含3～10％鹽酸的80～95％乙醇溶液溶解總生物堿，固液重量比1∶30～40，水解加熱回流2～3小時(shí)，冷卻過(guò)濾，用95％乙醇、水，洗至中性，干燥得澳洲茄胺鹽酸鹽，用含3～10％NaOH的95％乙醇溶液溶解澳洲茄胺鹽酸鹽，加熱回流1～2小時(shí)，熱過(guò)濾，冷卻吸濾洗至中性，干燥得粗澳洲茄胺；(4)澳洲茄胺的精制將粗澳洲茄胺溶于甲醇、乙醇或氯仿中至飽和溶液，用活化后的硅膠G與粗澳洲茄胺溶液混合，調(diào)成不流動(dòng)的膏狀物，在80～90℃下恒溫干燥，冷卻后裝入層析柱內(nèi)，振實(shí)，用氯仿、或氯仿∶甲醇體積比10∶1～2、或氯仿∶乙醇∶丙酮體積比3∶1∶2之一進(jìn)行洗脫得洗脫液，檢驗(yàn)洗脫結(jié)束后，對(duì)洗脫液常壓或減壓蒸餾濃縮，將濃縮液冷卻結(jié)晶過(guò)濾干燥后，粉碎至0.1～1.0微米粉末得澳洲茄胺。
制備方法(4)中檢驗(yàn)是否洗脫結(jié)束用1～5％SbCl3的無(wú)水乙醇或氯仿溶液為顯色劑，在濾紙上或硅膠G薄層層析板上檢驗(yàn)。具體操作為用毛細(xì)管取一定時(shí)刻剛流出的洗脫液，點(diǎn)于濾紙或硅膠G板上，烘干，將1～5％SbCl3溶液均勻噴于點(diǎn)樣的濾紙或硅膠G板上，烘干，如出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)說(shuō)明洗脫尚未結(jié)束，如無(wú)紅色斑點(diǎn)說(shuō)明洗脫完全，應(yīng)停止洗脫。
采用本發(fā)明制備方法所得的澳洲茄胺純度＞97％。本發(fā)明的原料來(lái)源豐富廉價(jià)，制備方法采用醋酸作提取溶劑成本低，制備工藝及設(shè)備簡(jiǎn)便，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品純度高、藥效活性強(qiáng)。
2、本發(fā)明的另一目的是提供澳洲茄胺在醫(yī)藥上的應(yīng)用經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)證明，澳洲茄胺具有如下作用(1)抗癌作用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺腹腔注射給藥8～30mg/kg對(duì)小鼠移植性實(shí)體型腫瘤抑制率為35％，灌胃給藥對(duì)小鼠移植性實(shí)體型腫瘤抑制率為32％。臨床試驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺注射給藥，濃度為1.0mg/ml，20～30ml/次；口服用藥膠囊或片劑，劑量為100mg/粒(片)，2粒(片)/日，對(duì)宮頸癌用藥10日為一療程，有30％的患者在1～2個(gè)療程內(nèi)得到明顯療效，配合手術(shù)用藥效果更佳。
(2)抗炎作用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺注射給藥10～30mg/kg，灌胃給藥60～200mg/kg能顯著對(duì)抗角叉菜膠引起的小鼠足腫脹P＜0.05，能顯著對(duì)抗大鼠棉球肉芽腫P＜0.05。臨床試驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺注射給藥1.0mg/ml，30～50ml/次，2次/日；口服用藥膠囊或片劑，劑量為100mg/粒(片)，2次/日，2粒(片)/次，對(duì)肺炎、肺結(jié)核、乳腺炎、扁桃體炎、咽炎、氣管炎患者，用藥3日內(nèi)白細(xì)胞明顯減少，炎癥明顯消失，有50～75％的患者用藥1～3個(gè)療程各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)趨向正常。
澳洲茄胺是一種具有抗癌、抗炎作用的中藥一類新藥源，其用途主要做為治療以下疾病的醫(yī)藥制造1、抗癌藥物的制造
(1)治療肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌等針劑的制造。
(2)治療肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌等口服制劑的制造。
2、抗炎藥物的制造(1)治療肺炎、肺結(jié)核、氣管炎、扁桃體炎、乳腺炎、咽炎等針劑的制造。
(2)治療肺炎、肺結(jié)核、氣管炎、扁桃體炎、乳腺炎、咽炎等口服制劑的制造。
3、用于生產(chǎn)抗癌、抗炎、平喘原料藥的制造(1)用于生產(chǎn)抗癌、抗炎、平喘原料藥澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的制造。
(2)用于生產(chǎn)抗癌、抗炎、平喘原料藥澳洲茄胺無(wú)機(jī)酸鹽的制造。


圖1是本發(fā)明澳洲茄胺的制備工藝流程圖。
圖2是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺的紫外吸收光譜圖。
圖3是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺的DSC圖。
圖4是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺的紅外光譜圖。
圖5是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺的質(zhì)子核磁共振譜圖。
圖6是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺的二維1H-1H質(zhì)子相關(guān)核磁共振譜圖。
圖7是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺的反轉(zhuǎn)門控去偶13C核磁共振譜圖。
圖8是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺的13C DEPT核磁共振譜圖。
圖9是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺的二維13C-1H異核相關(guān)核磁共振譜圖。
圖10是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺的LCQ正、負(fù)離子電噴霧質(zhì)譜圖。
圖11是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺的X-射線衍射圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例、試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明并不限于實(shí)施例，本專業(yè)的普通技術(shù)人員作某些修改，均在本發(fā)明保護(hù)范圍內(nèi)。
實(shí)施例1 以龍葵為原料制備澳洲茄胺參照?qǐng)D1，以龍葵生果制備澳洲茄胺的制備方法如下(1)稱取500kg10月中旬至10月下旬采收的龍葵生果去除雜物，用磨漿機(jī)粉碎固液分離得果汁、果渣，將龍葵果渣用濃度3％醋酸水溶液浸取2次，固液重量比1∶1，固液分離得浸液，合并果汁及浸液，放置沉降，取上清液加熱至沸，除去上浮綠色膠體物，過(guò)濾冷卻，將濾液放置沉降，取上清液加熱至80℃時(shí)加濃氨水至pH8，冷卻沉降除去上清液，對(duì)下濁液經(jīng)離心固液分離得膏狀龍葵粗總生物堿。
(2)用濃度3％的醋酸水溶液溶解膏狀龍葵粗總生物堿，固液重量比1∶30，加熱至沸除去上浮綠色膠體物，過(guò)濾冷卻沉降，取上清液加熱至80℃時(shí)，加濃氨水至pH8，冷卻沉降，使之沉淀完全除上清液，對(duì)下濁液沉淀物離心固液分離得膏狀龍葵總生物堿，在80～100℃下恒溫干燥、粉碎得龍葵總生物堿。
(3)將龍葵總生物堿溶于含5％鹽酸的95％乙醇溶液中，固液重量比1∶40，加熱至全溶吸濾，濾液水浴加熱至沸，水解2小時(shí)，冷卻吸濾，水洗至中性，用80％乙醇洗滌3次后干燥得澳洲茄胺鹽酸鹽，將澳洲茄胺鹽酸鹽加熱溶于含3％NaOH的95％乙醇溶液中，加熱至沸回流1小時(shí)，熱過(guò)濾，冷卻結(jié)晶，吸濾，水洗至中性，干燥得粗澳洲茄胺片狀結(jié)晶。
(4)將粗澳洲茄胺用95％乙醇溶解至飽和溶液，向溶液中加入經(jīng)活化的硅膠G，時(shí)時(shí)攪拌至不流動(dòng)膏狀物止，經(jīng)80～90℃恒溫干燥冷卻后，振動(dòng)下裝于不銹鋼層析柱中，振實(shí)，用氯仿、甲醇10∶2混液洗脫，流速1ml/秒，用SbCl3無(wú)水乙醇溶液為顯色劑，用濾紙上斑點(diǎn)顯色反應(yīng)判斷洗脫是否結(jié)束，當(dāng)無(wú)紅色斑點(diǎn)反應(yīng)時(shí)，停止洗脫，對(duì)洗脫液常壓蒸餾濃縮至有少許結(jié)晶析出，放出濃縮液冷卻結(jié)晶吸濾，濾液再蒸餾濃縮冷卻結(jié)晶吸濾，反復(fù)操作，合并結(jié)晶干燥粉碎至0.1～1.0微米的粉末，得澳洲茄胺213g，用高效液相色譜法測(cè)定純度為99.2％。
實(shí)施例2 以黃果茄為原料制備澳洲茄胺取500kg黃果茄生果，按實(shí)施例1制備方法，制得澳洲茄胺182g，用高效液相色譜法測(cè)定純度為98.7％。
實(shí)施例3 以澳洲茄為原料制備澳洲茄胺取500kg澳洲茄生果，按實(shí)施例1制備方法，制得澳洲茄胺137g，用高效液相色譜法測(cè)定純度為99.0％。
試驗(yàn)例1用薄層層析法檢驗(yàn)實(shí)施例所得澳洲茄胺確為同一種單體化合物將5％澳洲茄胺樣品的甲醇、氯仿溶液用毛細(xì)管分別點(diǎn)于硅膠GF254板原點(diǎn)上，干燥后可用三種展開劑將澳洲茄胺展開苯∶甲醇(4∶3)；苯∶甲醇∶丙酮(2∶1∶2)；氯仿∶乙醇∶丙酮(3∶1∶2)，在紫外光下λ＝254nm均出現(xiàn)一個(gè)斑點(diǎn)，證明樣品都是同一種單體化合物。
試驗(yàn)例2用高效液相色譜法測(cè)定實(shí)施例所得澳洲茄胺的純度精確稱取一定量澳洲茄胺標(biāo)準(zhǔn)樣(含量已標(biāo)定的樣品)和本發(fā)明實(shí)施例所得被測(cè)樣，用95％乙醇、甲醇、氯仿溶解，在wBondapaK18(30CM×3.9mmi.d.)用甲醇-0.01Mtris緩沖溶液(75∶25)柱流動(dòng)相，流速2ml/min，溫度25℃，在UV205檢測(cè)，均在15min處有最大吸收，測(cè)得澳洲茄胺純度＞98.7％。
試驗(yàn)例3實(shí)施例所得澳洲茄胺(對(duì)照品)與標(biāo)準(zhǔn)澳洲茄胺的紅外光譜對(duì)比試驗(yàn)試驗(yàn)所得紅外光譜圖數(shù)據(jù)如表1。
表1

澳洲茄胺標(biāo)準(zhǔn)譜數(shù)據(jù)IRVmaxcm-13400，2920，2880，1450，1370，1130，1040，970，950，890，870，取自文獻(xiàn)Atlas of Spectral and physical Constants fororganic Campoundszed；383， 。
對(duì)比結(jié)果對(duì)照品與標(biāo)準(zhǔn)樣的紅外光譜圖數(shù)據(jù)完全一致，證明對(duì)照品的分子結(jié)構(gòu)為澳洲茄胺。
試驗(yàn)例4實(shí)施例所得澳洲茄胺(對(duì)照品)與標(biāo)準(zhǔn)澳洲茄胺的核磁共振對(duì)比試驗(yàn)試驗(yàn)所得核磁共振譜圖數(shù)據(jù)如表2表2

澳洲茄胺標(biāo)準(zhǔn)譜數(shù)據(jù)NMR(CDCL3)δ0.80(3Hd.J＝6，27-Me)，0.83(3H.S，18-Me)，0.96(3H，d.J＝8，21-Me)，1.04(3H，S，19-Me).2.66(2H，d.J＝5，26-H2)，3.52(1H，m，3α-H)，4.3(1H，m，16α-H)，5.36(1H，m，6-H)，取自文獻(xiàn)Phytoehmistry zo(1)；157， 。
對(duì)比結(jié)果對(duì)照品與標(biāo)準(zhǔn)樣的核磁共振譜圖數(shù)據(jù)完全一致，證明對(duì)照品的分子結(jié)構(gòu)為澳洲茄胺。
試驗(yàn)5澳洲茄胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)測(cè)試分析經(jīng)中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春分院分析測(cè)試中心應(yīng)化所測(cè)試部測(cè)試實(shí)施例所得澳洲茄胺的紫外吸收光譜圖、DSC圖、紅外光譜圖、質(zhì)子核磁共振譜圖、二維1H-1H質(zhì)子相關(guān)核磁共振譜圖、反轉(zhuǎn)門控去偶13C核磁共振譜圖、13C DEPT核磁共振譜圖、二維13C-1H異核相關(guān)核磁共振譜圖、LCQ正負(fù)離子電噴霧質(zhì)譜圖、X-射線衍射圖，分別見圖2、3、4、5、6、7、8、9、10、11。與標(biāo)準(zhǔn)樣品的上述譜圖對(duì)照，證明實(shí)施例所得為澳洲茄胺。
實(shí)施例4 膠囊劑的制造精確稱取純度＞97％的澳洲茄胺43.0g、淀粉粒110.0g于容器中分別混均，得1000粒一個(gè)處方量的澳洲茄胺膠囊內(nèi)含物，將2#藍(lán)白膠囊放于每次可進(jìn)行400粒的膠囊板上，稱取60.0g膠囊內(nèi)含物，裝于固定在膠囊板上的膠囊中，封囊。按上述處方配料生產(chǎn)3個(gè)處方量，其合格率在99.25～99.62％，得澳洲茄胺膠囊3000粒，鋁塑封板，裝盒，得300盒膠囊劑。
實(shí)施例5 凍干粉針劑的制造將澳洲茄胺在無(wú)菌下經(jīng)微粒處理至0.1～1.0微米的微粒，精確稱取24.5g，加無(wú)菌注射蒸餾水溶解至24500ml為1000瓶的處方量(含工業(yè)損耗量)，將其分裝于1000個(gè)注射安瓶?jī)?nèi)，每瓶24ml，經(jīng)凍干處理，封瓶，裝盒，得凍干粉針劑100盒(每盒10支)。
實(shí)施例6 粉針劑的制造將澳洲茄胺精確稱取24.5g為1000瓶1個(gè)處方量(含工業(yè)損耗量)，將其以每瓶24mg裝于1000個(gè)注射安瓶?jī)?nèi)，無(wú)菌封瓶，得澳洲茄胺粉針劑100盒，10瓶/盒，合格率≥99.84％。
權(quán)利要求
1.澳洲茄胺的制備方法，其特征在于該制備方法包括以下步驟(1)原料處理及粗總生物堿的提取將龍葵、澳洲茄或黃果茄的生果或其全草經(jīng)篩選后，粉碎壓汁固液分離得果汁、果渣，用2～6％的醋酸水溶液浸取果渣，固液重量比1∶1，浸取2～3次，固液分離得浸液，合并果汁及浸液，放置沉降，取上清液加熱至沸除去上浮物，過(guò)濾冷卻，將濾液放置沉降，取上清液加熱至80～85℃時(shí)加濃氨水或NaOH、Na2CO3、KOH的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對(duì)下濁液離心固液分離，得膏狀粗總生物堿；(2)粗總生物堿的精制用2～6％醋酸水溶液溶解膏狀粗總生物堿，固液重量比1∶10～30，加熱至沸除去上浮物，過(guò)濾冷卻沉降，取上清液加熱至80～85℃時(shí)，加濃氨水或堿的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對(duì)下濁液離心固液分離得膏狀總生物堿，在80～100℃下恒溫干燥、粉碎得龍葵、澳洲茄或黃果茄中的總生物堿；(3)粗澳洲茄胺的提取用含3～10％鹽酸的80～95％乙醇溶液溶解總生物堿，固液重量比1∶30～40，水解加熱回流2～3小時(shí)，冷卻過(guò)濾，用95％乙醇、水，洗至中性，干燥得澳洲茄胺鹽酸鹽，用含3～10％NaOH的95％乙醇溶液溶解澳洲茄胺鹽酸鹽，加熱回流1～2小時(shí)，熱過(guò)濾，冷卻吸濾洗至中性，干燥得粗澳洲茄胺；(4)澳洲茄胺的精制將粗澳洲茄胺溶于甲醇、乙醇或氯仿中至飽和溶液，用活化后的硅膠G與粗澳洲茄胺溶液混合，調(diào)成不流動(dòng)的膏狀物，在80～90℃下恒溫干燥，冷卻后裝入層析柱內(nèi)，振實(shí)，用氯仿、或氯仿∶甲醇體積比10∶1～2、或氯仿∶乙醇∶丙酮體積比3∶1∶2之一進(jìn)行洗脫得洗脫液，檢驗(yàn)洗脫結(jié)束后，對(duì)洗脫液常壓或減壓蒸餾濃縮，將濃縮液冷卻結(jié)晶過(guò)濾干燥后，粉碎至0.1～1.0微米粉末得澳洲茄胺。
2.權(quán)利要求1的澳洲茄胺在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求1的澳洲茄胺在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1的澳洲茄胺在制備抗癌、抗炎、平喘原料藥中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及以龍葵、澳洲茄或黃果茄為原料，制備具有抗癌、抗炎藥效活性的化合物澳洲茄胺的方法，該方法是將無(wú)抗癌、抗炎活性化合物α－澳洲茄堿、β－澳洲茄堿、γ－澳洲茄堿、邊緣茄堿的混合物水解，使與糖結(jié)合的生物堿——澳洲茄堿等分子中具有抗癌、抗炎作用的3－羥基由結(jié)合狀態(tài)變成游離狀態(tài)，以藥效活性基團(tuán)的形式存在于分子之中，使分子產(chǎn)生抗癌、抗炎活性，達(dá)到將無(wú)藥效活性成分的混合物全部轉(zhuǎn)化成藥效活性單體的目的。本發(fā)明原料來(lái)源豐富廉價(jià)，制備方法采用醋酸作提取溶劑成本低，制備工藝及設(shè)備簡(jiǎn)便，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品純度高、藥效活性強(qiáng)。本發(fā)明還涉及以澳洲茄胺為中藥一類新藥的新藥源，在抗癌、抗炎等醫(yī)藥上的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1552724SQ20031011585
公開日2004年12月8日 申請(qǐng)日期2003年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月29日
發(fā)明者劉良, 劉芯辰, 崔淑華, 劉 良 申請(qǐng)人:劉良, 劉 良