專利名稱：一種注射用生脈凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種治療心血管疾病的藥物制劑及其制備方法，具體地說是一種注射用生脈凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
生脈注射液來源于《內(nèi)外傷辯惑論》，生脈散是由人參、麥冬、五味子三味中藥組成的古方，具有益氣、養(yǎng)陰、斂汗、復(fù)脈之功效，常用于出汗過多且臨床辯證為氣陰兩虛的患者?，F(xiàn)代藥理證明其具有降低血小板聚集、增強心肌收縮力、提高心肌缺氧耐受力、擴張冠狀動脈、抗心律失常以及抗病毒、抗炎和免疫調(diào)節(jié)等作用，臨床廣泛用于心肌梗死、心源性休克、冠心病、心肌炎等疾病的治療。廣州中醫(yī)藥大學(xué)王宗偉等進行了大鼠灌服生脈膠囊長毒實驗，結(jié)論是“生脈膠囊各劑量長期給予大鼠沒有產(chǎn)生明顯毒性反應(yīng)”。
源于生脈散的制劑包括注射劑、沖劑、袋泡劑、口服液、膠囊劑等，其制備工藝概括起來有兩種1.三味藥共煎；2.三味藥分別提取后混合。
中國發(fā)明專利CN1059820C在制備生脈散時采用群藥共煎的方法，依據(jù)合煎液產(chǎn)生的有效成分5-HMF的量，優(yōu)選麥冬與五味子的配伍比例及制備過程的煎煮時間和煎煮次數(shù)，結(jié)論是“……在前二次煎煮時提取完全。煎煮次數(shù)增加，5-HMF還有下降的趨勢”，研究該專利提供的實驗數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)實驗結(jié)果與結(jié)論相反，類似矛盾現(xiàn)象在中國發(fā)明專利CN1068777C中也存在，至少要考慮實驗的可信度問題。
目前已有的生脈散注射劑——生脈注射液雖然在臨床上對心血管系統(tǒng)疾病有良好的療效，但是生產(chǎn)工藝采用三味藥分別提取后混合，紅參采用乙醇回流法提取，五味子采用水蒸氣蒸餾后，再以水醇法對藥渣進一步提取，麥冬采用水醇法提取，不僅工藝較為繁瑣，而且違背了中藥復(fù)方的原旨。另外，由于水劑劑型的限制而穩(wěn)定性不佳，不利于保存，給臨床用藥安全性和有效性造成一定影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種穩(wěn)定性好、質(zhì)量高、療效顯著的注射用生脈凍干粉針制劑及其制備方法，應(yīng)用該方法制得的生脈凍干粉針制劑對大鼠急性心肌缺血的保護作用優(yōu)于現(xiàn)有的生脈注射劑。
本發(fā)明的一種注射用生脈凍干粉針劑是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的人參1份 麥冬2-3份 五味子1-2份的重量份組方，a.將五味子用8-10倍量60-80％乙醇回流提取2-3次，每次60-120min，回收乙醇至無醇味，浸膏在攪拌下加入乙醇，使含醇量達60-80％，充分?jǐn)嚢韬箪o置，濾過，減壓濃縮，回收乙醇至無醇味，得提取液A。
b.將用乙醇提取后的五味子藥渣與上述配比的人參和麥冬加10-12倍量水合煎1-2次，每次60-120min。合并水提取液濃縮后，加入乙醇使含醇量達60-80％，進行兩次醇沉，濾過，回收乙醇后用10-15倍量去離子水溶解，用大孔吸附樹脂處理，先以去離子水洗至無糖，再以40～80％乙醇洗至無皂甙止，回收醇洗脫液，濃縮得提取液B。
c.將上述人參、麥冬、五味子水提醇沉后的沉淀加10-12倍量蒸餾水溶解，濾過；50～70℃真空干燥，得水提多糖粗品。將多糖粗品加100-200倍量蒸餾水溶解，過中空纖維柱超濾(截留分子量6000～100000)，濃縮得提取液C。
d.將0.2％的吐溫80溶解于適量的注射用水中，加入提取液A、B和C，攪勻、冷藏、濾過，調(diào)PH6.5-7，濾液加適量活性炭煮沸15min，稍冷，過濾至澄明，得溶液，滅菌后分裝，冷凍干燥，壓蓋即得。
本發(fā)明的一種注射用生脈凍干粉針制劑及其制備方法的優(yōu)選技術(shù)方案是人參1份 麥冬3份 五味子1.5份的重量配比方，a.將五味子用8-10倍量65～75％乙醇回流提取2次，每次60-90min，回收乙醇至無醇味，浸膏在攪拌下加入乙醇，使含醇量達70-80％，充分?jǐn)嚢韬箪o置，濾過，減壓濃縮，回收乙醇至無醇味，得提取液A。
b.將用乙醇提取后的五味子藥渣與上述配比的人參和麥冬加10～12倍量水合煎2次，第一次90min，第二次60min。合并水提取液濃縮后，加入乙醇使含醇量達70-80％，進行兩次醇沉，濾過，回收乙醇后用10倍量去離子水溶解，大孔吸附樹脂柱處理，先以去離子水洗至無糖，再以60～70％乙醇洗至無皂甙止，回收醇洗脫液，濃縮得提取液B。
c.將人參、麥冬、五味子水提醇沉后的沉淀加15倍量蒸餾水溶解，濾過；50～60℃真空干燥，得水提多糖粗品。將多糖粗品加200倍量蒸餾水溶解，過中空纖維柱超濾(截留分子量6000～100000)，濃縮得提取液C。
d.將0.2％的吐溫80溶解于適量的注射用水中，加入提取液A、B和C，攪勻、冷藏、濾過，調(diào)PH6.5-7，濾液加0.05％活性炭煮沸15min，稍冷，過濾至澄明，得溶液，補充注射用水至規(guī)定量，滅菌后分裝，冷凍干燥，壓蓋即得。
本發(fā)明的一種注射用生脈凍干粉針制劑疏松多孔、復(fù)溶性好，含水量低，符合國家標(biāo)準(zhǔn)，臨床上適用于心血管疾病的治療。
其生產(chǎn)過程無菌操作，低溫干燥，活性成分不被破壞，真空或惰性氣體填充，不易發(fā)生氧化，貯存時間長，穩(wěn)定性得以提高，從而延長了該藥的有效期，便于貯存、運輸和銷售，也便于保證產(chǎn)品質(zhì)量。
實驗一HPLC測定生脈凍干粉針劑中五味子甲乙素的含量1儀器與試藥日本島津LC-10AT高效液相色譜儀；日本島津SPD-6A紫外檢測器；五味子甲素、乙素對照品，中國生物制品檢定所；生脈凍干粉針制劑，廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實驗室提供。甲醇為色譜純，F(xiàn)isher公司；其余均為分析純，水為超純水。
2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱BeckmanC18反相色譜柱(4.6×25cm，5μm)；流動相甲醇-水(85∶15)，流速1.0ml/min，檢測波長254nm；柱溫室溫；五味子甲素對照品保留時間為10.00min；五味子乙素對照品保留時間為15.00min，定量方法外標(biāo)法。
2.2含量測定方法2.2.1對照品溶液制備 精密稱取五味子甲素、乙素對照品，分別加甲醇各配成150μg/ml的溶液。
2.2.2供試品溶液制備 取生脈凍干粉適量，精密稱定，以乙醇溶解，使每1ml溶液相當(dāng)于生藥五味子0.15g，超聲30min，過濾，定容至2ml。
2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密吸取五味子甲、乙素對照品溶液1.0、2.5、5.0、10、15μl，分別進樣，測定峰面積，得回歸方程五味子甲素y＝1.7841×104C+1784，r＝0.9993；五味子乙素y＝1.7695×104C-642，r＝0.9995，即五味子甲、乙素濃度在0.15～2.25μg/μl范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2.2.4精密度試驗 精密吸取供試品10μl，連續(xù)進樣3次，五味子甲、乙素的RSD分別為2.2％、2.4％。
2.2.5回收率實驗 于已測定五味子甲素、乙素含量的生脈凍干粉中精密稱入一定量的五味子甲素、乙素對照品，按相同的方法處理并測定，五味子甲素、乙素的平均回收率分別為100.2％和100.6％，RSD分別為1.3％和1.7％。
2.3樣品測定 吸取供試品10μl，進樣，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量，結(jié)果見表1。
表1樣品中五味子甲、乙素含量的測定結(jié)果測定批數(shù)樣品1 2 3 4 5 X五味子甲素838588838685(mg·g-1)五味子乙素797881798079.4(mg·g-1)實驗二硫酸-苯酚法測定生脈凍干粉針劑中多糖的含量1儀器與試藥日本島津UV-265型紫外可見分光光度計；標(biāo)準(zhǔn)糖D-葡萄糖，上海生物化學(xué)試劑公司；硫酸-苯酚試劑溶解80g苯酚于20g水(雙蒸水)中，置冰箱避光貯存。臨用時，先配制成5％苯酚，再以1∶5分別加入5％苯酚和濃硫酸于樣品中。
2方法與結(jié)果2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密稱取D-葡萄糖(105℃干燥至恒重)80mg，置100ml容量瓶中，加蒸餾水使溶解并稀釋至刻度，擺勻。精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分別置于50ml容量瓶中，加水至刻度搖勻。精密吸取上述各種濃度溶液2ml，另精密吸取蒸餾水2ml作空白對照，置具塞試管中，分別加入5％苯酚溶液1.0ml搖勻，迅速加入濃硫酸5.0ml搖勻后放置5min，置沸水中加熱15min，再置冷水中冷卻30min，在波長490nm處測定吸光度，得回歸方程A＝0.1642C-2.582×10-3(μg/ml)，r＝0.99932.2精密度試驗精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液1ml，按以上硫酸-苯酚法操作，重復(fù)5次，RSD為3.1％。
2.3回收率實驗 稱取50mgD-葡萄糖，加水溶解后，移入100ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密吸取該溶液2ml，按以上硫酸-苯酚法操作，依線性關(guān)系計算葡萄糖的回收率為98.4％。
2.4樣品測定 取生脈凍干粉適量，精密稱定，以雙蒸水溶解，使每1ml溶液折合成生藥含人參0.1g，麥冬0.3g，五味子0.15g。吸取供試品2ml，緩緩加入95％乙醇6ml，攪拌，離心，傾出上清液，取沉淀以5倍量蒸餾水溶解，按以上硫酸-苯酚法操作，表2樣品中多糖含量的測定結(jié)果樣品 1 2 3 4 5 X多糖362343351328355348(mg·g-1)本發(fā)明的一種注射用生脈凍干粉針劑制備工藝，較為全面地考慮到所用藥材有效成分的提取。五味子中主要活性成分為五味子素，該成分水溶性差，采用水提工藝得到五味子素的量極少，故本發(fā)明中采用醇提工藝，使生脈凍干粉針劑中五味子甲、乙素含量均在70mg·g-1以上；人參皂甙、麥冬皂甙有較好的水溶性，采用水提工藝是適宜的；人參、麥冬、五味子多糖是主要的活性成分之一，本發(fā)明中采用五味子醇提藥渣與人參、麥冬一起水提，能較好地使多糖溶出，使有效成分得率提高。中國專利CN1059820C已經(jīng)證明，三藥合煎能產(chǎn)生新物質(zhì)5-羥甲基-2-糠醛。因此本發(fā)明的制備工藝不僅優(yōu)于傳統(tǒng)方法的水提醇沉工藝，后者使有效成分多糖絕大部分丟失；也優(yōu)于三種藥材分別單提。人參、麥冬、五味子的多糖具有較好的免疫作用，傳統(tǒng)中藥注射劑，基本不含有多糖成分，而本發(fā)明的制劑中最大程度地提取了多糖成分，使生脈凍干粉針劑中多糖含量在300mg·g-1以上，從而更好地提高制劑的藥用效果，并且達到了中藥復(fù)方配伍的意義，更符合了生脈的立方宗旨。
下面通過本發(fā)明的一種注射用生脈凍干粉針劑和生脈注射劑對大鼠急性心肌缺血保護作用的比較實驗，對本發(fā)明作進一步說明。
一、實驗材料和方法1實驗材料1.1動物Wistar大鼠30只，由第一軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供，體重200±20g，雄性。
1.2試劑垂體后葉素(Pit)，上海生物化學(xué)制藥廠，批號010301；生脈注射液，四川雅安三九藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號021207；生脈凍干粉針制劑，廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實驗室提供。
2實驗方法經(jīng)心電篩選合格的大鼠30只飼養(yǎng)5d以上，依次描記正常心電圖(標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)心電圖)，將動物隨機分為3組對照組(生理鹽水組)，生脈注射液組，生脈凍干粉針劑組。烏拉坦麻醉后，記錄心電圖。三組大鼠分別腹腔注射生理鹽水5ml/kg，生脈注射液7ml/kg，生脈凍干粉針劑用注射用水溶解，稀釋至每毫升折合生藥人參0.1g，麥冬0.3g，五味子0.15g；注射劑量為7mg/kg。腹腔注射受試藥物后30min，舌下靜脈注射Pit 0.5u/只，連續(xù)記錄給Pit前后5min內(nèi)的心電圖，出現(xiàn)下列指征之一者即為陽性心肌缺血T波升高1.5mv以上；T波低平(降低原T波高度50％以上)；T波雙向倒置；ST水平下移0.5mv；心律不齊。
二、實驗結(jié)果表2 注射用生脈凍干粉針劑對垂體后葉素引起大鼠急性心肌缺血的拮抗作用劑量心肌缺血陽性率組 別 動物數(shù)(只)(ml/kg)(％)對照組510 80生脈注射液710 40*注射用生脈凍干粉710 30**針劑與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01實施例一規(guī)格100瓶，a.按配比稱取原料人參100g，麥冬250g，五味子200g。
b.將五味子用10倍量的65％乙醇回流提取2次，每次60min，回收乙醇至無醇味，攪拌下加入乙醇，使含醇量達70％，充分?jǐn)嚢韬箪o置，濾過，減壓濃縮，回收乙醇至無醇味，得提取液A。
c.將用乙醇提取后的五味子藥渣與上述配比的人參和麥冬加10倍量水合煎2次，每次90min。合并水提取液濃縮后，加入乙醇使含醇量達70％，進行兩次醇沉，濾過，合并濾液，回收乙醇至無醇味后，靜置、濾過，濾液用10倍量去離子水溶解后，用大孔吸附樹脂處理，先以去離子水洗至無糖，再以70％乙醇洗至無皂甙止，回收醇洗脫液，濃縮得提取液B。
d.將上述人參、麥冬、五味子水提醇沉后的沉淀加10倍量蒸餾水溶解，濾過；60℃真空干燥，得水提多糖粗品。將多糖粗品加200倍量蒸餾水溶解，過中空纖維柱超濾(截留分子量6000～50000)，濃縮得提取液C。
e.將0.2％的吐溫80溶解于注射用水300ml中，加入提取液A、B和C，攪勻、冷藏、濾過，調(diào)PH6.5-7，濾液加0.05％活性炭煮沸15min，稍冷，過濾至澄明，得溶液，補充注射用水至500ml，滅菌后分裝，冷凍干燥，壓蓋即得。
實施例二規(guī)格1000瓶，a.按配比稱取原料人參1000g，麥冬3000g，五味子1500g。
b.將五味子用8倍量的80％乙醇回流提取2次，每次120min，回收乙醇至無醇味，攪拌下加入乙醇，使含醇量達80％，充分?jǐn)嚢韬箪o置，濾過，減壓濃縮，回收乙醇至無醇味，得提取液A。
c.將用乙醇提取后的五味子藥渣與上述配比的人參和麥冬加12倍量水合煎2次，每次90min。合并水提取液濃縮后，加入乙醇使含醇量達60％，醇沉，濾過，濾液，再加入乙醇，使含醇量達到80％，靜置醇沉后，過濾得濾液，回收乙醇至無醇味后，靜置、濾過，濾液用加入15倍量去離子水溶解，用大孔吸附樹脂處理，先以去離子水洗至無糖，再以60％乙醇洗至無皂甙止，回收醇洗脫液，濃縮得提取液B。
d.將上述人參、麥冬水提醇沉后的沉淀加15倍量蒸餾水溶解，濾過；50℃真空干燥，得水提多糖粗品。將多糖粗品加100倍蒸餾水溶解，過中空纖維柱超濾(截留分子量6000～100000)，濃縮得提取液C。
e.將0.2％的吐溫80溶解于注射用水3000ml中，加入提取液A、B和C，攪勻、冷藏、濾過，調(diào)PH6.5-7，濾液加0.05％活性炭煮沸15min，稍冷，過濾至澄明，得溶液，補充注射用水至5000ml，滅菌后分裝于西林瓶中，冷凍干燥，壓蓋即得。
權(quán)利要求
1.一種注射用生脈凍干粉針劑，其特征是是由下述重量份的人參1份、麥冬2-3份、五味子1-2份的三味藥材的有效部位制成的，其中五味子甲、乙素含量不少于70mg·g-1，多糖含量不少于300mg·g-1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種注射用生脈凍干粉針劑的原料藥的重量份為人參1份，麥冬3份，五味子1.5份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種注射用生脈凍干粉針劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟a.將五味子用60-80％乙醇回流提取2-3次，每次60-120min，回收乙醇至無醇味，浸膏在攪拌下加入乙醇，使含醇量達60-80％，充分?jǐn)嚢韬箪o置，濾過，減壓濃縮，回收乙醇至無醇味，得提取液A；b.將用乙醇提取后的五味子藥渣與上述配比的人參和麥冬加10-12倍量水合煎1-2次，每次60-120min。合并水提取液濃縮后，加入乙醇使含醇量達60-80％，進行兩次醇沉，濾過，回收乙醇后用10-15倍量去離子水溶解后，用大孔吸附樹脂處理，先以去離子水洗至無糖，再以40～80％乙醇洗至無皂甙止，回收醇洗脫液，濃縮得提取液B；c.將上述人參、麥冬、五味子水提醇沉后的沉淀加10-15倍量蒸餾水溶解，濾過；50～70℃真空干燥，得水提多糖粗品。將多糖粗品加100-200倍量蒸餾水溶解，過中空纖維柱超濾(截留分子量6000-100000)，濃縮得提取液C；d.將0.2％的吐溫80溶解于適量的注射用水中，加入提取液A、B和C，攪勻、冷藏、濾過，調(diào)PH6.5-7，濾液加適量活性炭煮沸15min，放冷，過濾至澄明，得溶液，補充注射用水至規(guī)定量，滅菌后分裝，冷凍干燥，壓蓋即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3，一種注射用生脈凍干粉針劑的制備方法優(yōu)選方案包括以下步驟a.將五味子用8-10倍量的65％-75％的乙醇回流提取2次，每次60-90min，回收乙醇至無醇味；浸膏在攪拌下加入乙醇，使含乙醇量達到70-80％，充分?jǐn)嚢韬箪o置，濾過，減壓濃縮，揮手乙醇至無醇味，得提取液A；b.將用乙醇提取后的五味子藥渣與配比的人參和麥冬加10-12倍量水合煎2次，第一次90min，第二次60min；合并水提取液濃縮后，加入乙醇使含醇量達70-80％，進行兩次醇沉，濾過，回收乙醇后，用10-15倍量去離子水溶解，溶液用大孔吸附樹脂處理，先以去離子水洗至無糖，再用60～70％乙醇洗至無皂甙止，回收醇洗脫液，濃縮得提取液B；c.將人參、麥冬、五味子水提醇沉后的沉淀加15倍量蒸餾水溶解，濾過，50～60℃真空干燥，得水提多糖粗品。將多糖粗品加到200倍量的蒸餾水中溶解，過中空纖維柱超濾，截留分子量6000-100000部分，濃縮得提取液C；d.將0.2％的吐溫80溶解于適量注射用水中，加入提取液A、B和C，攪勻、充分溶解后，冷藏、濾過，調(diào)PH6.5-7，向濾液中加入適量0.05％活性炭煮沸15min，稍冷，過濾至澄明，得溶液，補充注射用水至規(guī)定量，滅菌后無菌分裝，冷凍干燥，壓蓋即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種注射用生脈凍干粉針劑，其特征在于它是由人參、麥冬、五味子提取的有效部位制成，同時公開了該制劑的制備方法。本發(fā)明的生脈凍干粉針劑制備工藝較為全面地考慮到所用藥材有效成分的提取，保留了多糖成分。應(yīng)用該方法制得的生脈凍干粉針制劑穩(wěn)定性好、質(zhì)量高、療效顯著，動物實驗表明，生脈凍干粉針劑對心肌缺血具有極佳的保護作用。
文檔編號A61P9/10GK1544064SQ20031011673
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月19日
發(fā)明者張晴龍 申請人:張晴龍