專利名稱：桂枝茯苓組合物的制備工藝及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物的制備工藝及其用途，特別是涉及一種桂枝茯苓組合物的制備工藝及其用途。
背景技術：
桂枝茯苓丸出自張仲景的《金匱要略》，是中醫(yī)臨床常用傳統(tǒng)名方，由桂枝，茯苓，丹皮，桃仁，芍藥5味藥組成，現(xiàn)代常用為大蜜丸，記載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑》第一冊，具有活血化淤，緩消腫塊的功能?，F(xiàn)有桂枝茯苓丸的改良劑型，其制備工藝在原料的濃縮過程中損失較多，濃縮的浸膏密度不利于混合，不易干燥，費工、費時，并且原料的利用率、有效成份的提取率不高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種桂枝茯苓組合物新的制備工藝。本發(fā)明另一目的在于提供桂枝茯苓組合物在治療前列腺增生和乳腺增生的藥物中的應用。
本發(fā)明目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的具體工藝步驟如下牡丹皮的提取方法應為藥材打成粗粉2mm-1cm加水，潤濕1-2小時后，流通水蒸氣蒸餾提取，收集4-10倍量餾出液，冷藏靜置；待析出結晶后，濾過，濾液再重蒸餾，收集2.5-3.5倍量的餾出液，冷藏靜置；待析出結晶后，濾過，濾液棄去，合并兩次丹皮酚結晶；陰干后粉碎成細粉，制成細顆粒，陰干，低溫密閉儲藏，待用；將桂枝、白芍、桃仁及處方量10％-30％的茯苓粉碎成粗粉，混勻；加入牡丹皮藥渣，再加入藥材3-5倍量的90％乙醇，浸泡0.5-1小時，加熱回流提取1-3小時，濾過；藥渣再加入原藥材3-5倍量的90％7醇，回流提取1-3小時，濾過，合并濾液；藥渣加入原藥材5-7倍量的水，回流提取0.5-1小時，濾過；藥渣再加入原藥材3-5倍量的水，回流提取0.5-1小時，濾過；合并濾液，藥渣棄之；醇提液和水提液分別減壓濃縮，醇提液回收至無醇味；合并二濃縮液，得棕褐色粘稠膏體，相對密度在80℃為1.25；將另70％-90％處方量過100目篩的茯苓細粉與上述浸膏混勻，干燥，粉碎，烘干；加入丹皮酚細顆粒，混勻，整粒，裝入膠囊，即得。
本發(fā)明桂枝茯苓組合物的制備工藝還可以是如下步驟取桂枝、桃仁、白芍、牡丹皮及40％-60％處方量的茯苓五味藥碎成粗粉，混勻；加入70％-90％乙醇，浸泡0.5-1小時，加熱回流提取1-3次，其中每次加入70％-90％乙醇的量為原藥材的3-5倍，加熱回流提取時間為1-3小時；濾過，合并濾液；藥渣加入原藥材5-7倍量的水，回流提取1-3次，其中每次回流提取時間0.5-1小時；濾過，合并濾液，藥渣棄之；醇提液和水提液分別減壓濃縮，醇提液回收至無醇味；合并二濃縮液，得棕褐色浸膏；將另40％-60％處方量的茯苓細粉與上述浸膏混勻，干燥，粉碎，制粒，整粒，裝入膠囊，即得。
本發(fā)明桂枝茯苓組合物兩種新的制備工藝其工藝穩(wěn)定、可行，成品的丹皮酚含量、桂皮醛含量、芍藥苷的含量均比原工藝高，提高原料的利用率、有效成份的提取率，其桂枝茯苓組合物可用于治療前列腺增生和乳腺增生疾病。
下面實驗例用于進一步說明本發(fā)明。
實驗例1不同條件下提取丹皮酚的比較1實驗方法丹皮酚微溶于水，可隨水蒸氣蒸餾，冷卻時又可以自餾出液中析出，同時結合有關文獻，首先考察了下面三種條件下丹皮酚的得率，進行比較。
方法一、牡丹皮藥材120g，加水潤濕1小時后，采用流通蒸氣蒸餾，收集9倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后，濾過，濾液再重蒸餾，收集3倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后濾過，合并兩次結晶，記為A。
方法二、牡丹皮藥材120g，加水潤濕，再加入5％NaCL，1小時后，采用流通蒸氣蒸餾，收集9倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后，濾過，濾液加入上述量的NaCL再重蒸餾，收集3倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后濾過，合并兩次結晶，記為B。
方法三、牡丹皮藥材120g，加水潤濕，再加入10％NaCL，1小時后，采用流通蒸氣蒸餾，收集9倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后，濾過，濾液加入上述量的NaCL再重蒸餾，收集3倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后濾過，合并兩次結晶，記為C。
A、B、C丹皮酚結晶陰干后，置干燥器內(nèi)過夜，稱重，取適量按《中國藥典》2000年版一部137頁牡丹皮含量測定項下操作，結果如表1。
表1 牡丹皮藥材提取加與不加鹽的比較項目 丹皮酚結晶重量 取樣量 吸收度 丹皮酚含量 丹皮酚總量丹 皮酚提取率結晶 g g A ％ g％A 1.4858 0.00670 0.990 85.7％ 1.2733 62.1B 1.4207 0.00530 0.815 89.2％ 1.2673 61.8C 1.3818 0.00525 0.839 92.7％ 1.2809 62.4(藥材按藥典法測丹皮酚含量為1.71％)2實驗結果以上三種提取方法，結晶C的丹皮酚較純，但三種提取方法對于丹皮酚提取率相差不大，考慮到生產(chǎn)實際成本，采用方法一提取。即牡丹皮藥材直接用流通蒸氣提取，不需加鹽。
實驗例2不同因素對于丹皮酚提取的影響1選定實驗因素及選取水平對于影響牡丹皮藥材提取的其它因素，本發(fā)明選定了“藥材粒徑”、“潤濕時間”和“收集餾出液的量”等因素，同時結合生產(chǎn)，每個因素又選取了3個水平，見表2。
表2 因素水平表 2實驗方法按實驗設計方案要求，采用L9(34)進行實驗，以丹皮酚的總量為指標進行評判，結果見表3。
表3正交試驗結果表 注①牡丹皮藥材檢測，丹皮酚含量為1.71％。
②本實驗以1/2個處方量牡丹皮藥材為實驗對象。
③丹皮酚含量測定方法按《中國藥典》2000年版一部137頁牡丹皮含量測定項下有關規(guī)定操作。
3實驗結果表4 丹皮酚提取利用率方差分析表方差來源 離差平方和自由度平均方差 F值 P值SA 0.0137 2 0.0069 69 顯著SB 0.0015 2 0.0008 8SC 0.0231 2 0.0116 116 特別顯著SD 0.0002 2 0.0001 1.00F0.10(2，2)＝9 F0.05(2，2)＝19由表4可知A因素有顯著性差異(P＜0.05)，C因素有特別顯著性差異(P＜0.01)；由表3可知，A1＜A2＜A3，B3＜B1＜B2，C1＜C2＜C3，所以應選擇A3B2C3，但C2、C3相差不大，考慮到生產(chǎn)成本，本發(fā)明選用C2。即牡丹皮的提取工藝應為藥材打成粗粉過10目篩，加水潤濕1.5小時后，用流通蒸氣蒸餾，收集7倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后，濾過，濾液再重蒸餾，收集3倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后濾過，合并兩次結晶為所提丹皮酚結晶。
實驗例3餾出液取舍的研究按照牡丹皮藥材打成粗粉過10目篩，加水潤濕1.5小時牡丹皮提取工藝，取1/2處方量的牡丹皮藥材2份，進行驗證，分別得丹皮酚結晶①1.5248g②1.5309g；取第一次濾液重蒸餾后剩余液、第二次濾液分別作全波長掃描，圖譜峰形與丹皮酚對照品一致。
實驗例4醇提與水提工藝優(yōu)選取桂枝240g、茯苓120g、桃仁240g、白芍240g、牡丹皮240g，采用單因素考察法，以提取物中有效成分的含量為指標，對五味藥材的醇提與水提工藝進行了優(yōu)選。
1五味藥材醇提工藝優(yōu)選桂枝中含有桂皮醛、牡丹皮中含有丹皮酚，二者皆為脂溶性有效成分。根據(jù)物質的理化性質，我們以乙醇濃度、提取次數(shù)為考察因素，以五味藥材醇提物中桂皮醛及丹皮酚的含量為考核指標，經(jīng)試驗，優(yōu)選出最佳醇提工藝。見表5、表6。
表5 乙醇濃度的優(yōu)選(提取2次)

表6 提取次數(shù)的優(yōu)選(乙醇濃度為90％)

(注牡丹皮原藥材中丹皮酚含量為1.5％，桂枝中桂皮醛含量為0.5％。)由表5可知，選取的乙醇濃度因素中，濃度為“90％乙醇”其提取物中桂皮醛及丹皮酚為最高；表6中，提取次數(shù)對有效成分影響較大，但第二次與第三次相比，有效成分相差已較小，基本無差異，考慮到實際生產(chǎn)成本，優(yōu)選提取次數(shù)為“2次”。通過單因素試驗法，綜合有效成分的含量，優(yōu)選出醇提最佳工藝為“剩余的茯苓與桂枝等四味藥材粉碎成粗粉，混勻，加90％乙醇提取2次”。
2水提工藝優(yōu)選白芍中含有有效成分芍藥苷等水溶性有效成分。根據(jù)水溶性成分的性質，考慮到實際生產(chǎn)的成本，我們以水為提取溶劑，以提取次數(shù)為考察因素，以水提物中芍藥苷含量為考核指標，經(jīng)單因素試驗表明，加水提取次數(shù)為“2次”。見表7。
表7 提取次數(shù)的優(yōu)選

(注白芍原藥材中芍藥苷含量為2.0％)由表7可知，提取物中芍藥苷的含量隨著提取次數(shù)的增高而增高，但提取3次與提取2次芍藥苷的含量相差已不顯著，為了適應實際生產(chǎn)的需求，節(jié)約生產(chǎn)成本，優(yōu)選水提取次數(shù)為“2次”。
實驗例5 桂枝茯苓膠囊抗炎作用的研究1桂枝茯苓膠囊對大鼠棉球肉芽腫的影響受試藥物名稱桂枝茯苓膠囊提供單位江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司制劑、批號桂枝茯苓浸膏粉，為棕褐色粉末.每克藥粉相當于生藥3.87g.批號020420。
配制方法臨用時用蒸餾水配制成5.6％(相當于生藥21.6％)、2.8％(相當于生藥10.8％)和1.4％(相當于生藥5.4％)的濃度。氫化考的松，揚州制藥廠生產(chǎn)，規(guī)格5mg/m1，批號010105實驗動物選用成年健康SD雄性大鼠，50只，體重190±20g，由蘇州大學實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)使用許可證號SCXK(蘇)2002-0021；實驗動物使用許可證號SYXK(蘇)2002-0078。
實驗方法取健康SD雄性大鼠50只，隨機分為5組，每組10只。分別為正常對照組，陽性對照組(用氫化考的松肌注5mg/kg)以及桂枝茯苓膠囊大劑量組(0.56g·kg-1，相當于生藥2.16g·kg-1)；桂枝茯苓膠囊中劑量組(0.28g·kg-1，相當于生藥1.08g·kg-1)；桂枝茯苓膠囊小劑量組(0.14g·kg-1，相當于生藥0.54 g·kg-1)。試驗大鼠在4％水合氯醛淺麻醉下，無菌操作，將兩個無菌脫脂棉球(重量10±1mg，直徑6.5-8.5mm，高壓滅菌)植入大鼠兩側腋窩皮下然后縫合。術后當天給藥，每天一次，氫化考的松肌注0.1ml/100g體重，桂枝茯苓膠囊組灌胃1ml/100g體重，連續(xù)給藥7天后，第8天脫臼處死動物，取出棉球，置60℃烤箱烘干后稱重。減去原棉球重量，即為肉芽腫重量。比較各組肉芽腫重量并計算抑制率。計算抑制率的公式如下 實驗結果大鼠給藥7天后，桂枝茯苓膠囊三個劑量組對結締組織增生均有不同程度的抑制作用。抑制率分別為26.48％，19.47％，20.25％，尤以大劑量組作用最明顯(p＜0.05)。同對照組相比，大劑量組的抑制作用最為明顯(p＜0.05)。桂枝茯苓膠囊對棉球植入大鼠體內(nèi)引起的結締組織增生有一定的抑制作用，說明桂枝茯苓膠囊具有對抗增生性炎癥的作用。，結果見表8。
表8 不同劑量桂枝茯苓膠囊對大鼠棉球肉芽腫的影響(x±SD)組別 劑量 動物數(shù)(只) 肉芽腫重量(mg) 抑制率(％)正常對照組10 64.2±21.5氫化考的松 5mg·kg-110 42.3±1.0** 34.11桂枝茯苓膠囊 0.54g·kg-110 51.2±16.520.25桂枝茯苓膠囊 1.08g·kg-110 51.7±8.4 19.47桂枝茯苓膠囊 2.16g·kg-110 47.2±9.8*26.48
與正常對照組相比*p＜0.05；**p＜0.012桂枝茯苓膠囊對小鼠耳廓腫脹的影響受試藥物名稱桂枝茯苓膠囊提供單位江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司制劑、批號桂枝茯苓浸膏粉，為棕褐色粉末。每克藥粉相當于生藥3.87g.批號020420。
配制方法臨用時用蒸餾水配制成5.6％(相當于生藥21.6％)2.8％(相當于生藥10.8％)和1.4％(相當于生藥5.4％)的濃度。氫化考的松，揚州制藥廠生產(chǎn)，規(guī)格5mg/ml，批號010105；二甲苯蘇州金誠試劑廠，批號010110；實驗動物選用成年健康昆明種小鼠50只，雄性，23.22±2.31g，由蘇州大學實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)使用許可證號SCXK(蘇)2002-0021；實驗動物使用許可證號SYXK(蘇)2002-0078。
實驗方法實驗分為5組，每組10只，分別為正常對照組、陽性對照組(氫化考的松肌注10mg/kg)以及桂枝茯苓膠囊大劑量組10只(1.12g·kg-1，相當于生藥4.32g·kg-1)；桂枝茯苓膠囊中劑量組10只(0.56g·kg-1，相當于生藥2.16g·kg-1)；桂枝茯苓膠囊小劑量組10只(0.28g·kg-1，相當于生藥1.08g·kg-1)。小鼠分別灌服受試藥液0.2ml/10g體重，氫化考的松肌注0.02ml/10g體重，正常對照組予以等體積的蒸餾水灌胃，給藥30分鐘后，給致炎劑，將二甲苯0.03ml涂于小鼠右耳，左耳作為對照。2.5小時后將小鼠頸椎脫臼致死，沿耳廓基線剪下左、右耳，用直徑9mm打孔器分別取下同一部位耳片，電子天平稱重，每鼠右耳片重量減去左耳片重量，即為耳腫脹度，進行統(tǒng)計處理。
實驗結果1.08，2.16和4.32g·kg-1三個劑量的桂枝茯苓膠囊對小鼠的耳腫脹有不同程度的抑制作用。隨著劑量的增加，抑制作用逐步增強，尤其是中大劑量組的桂枝茯苓膠囊抑制作用最為明顯(p＜0.05；p＜0.01)。結果表明，三個劑量的桂枝茯苓膠囊對二甲苯引起的腫脹有抑制作用，且有一定的劑量依賴效應。見表9。
表9 不同劑量的桂枝茯苓膠囊對小鼠耳腫脹的影響(x±SD)組別劑量 動物數(shù)(只) 腫脹度(mg)正常對照組1018.6±3.89氫化考的松10mg·kg-11011.2±4.47**桂枝茯苓膠囊 1.08g·kg-11015.6±5.27桂枝茯苓膠囊 2.16g·kg-11014.3±3.92*桂枝茯苓膠囊 4.32g·kg-11014.1±2.81**與正常對照組相比 *p＜0.05；**p＜0.01，實驗例6 桂枝茯苓膠囊對大鼠血液流變學的影響受試藥物名稱桂枝茯苓膠囊提供單位江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司制劑、批號桂枝茯苓浸膏粉，為棕褐色粉末.每克藥粉相當于生藥3.87g。批號020420。
配制方法臨用時用蒸餾水配制成5.6％(相當于生藥21.6％)、2.8％(相當于生藥10.8％)和1.4％(相當于生藥5.4％)的濃度。
陽性藥物前列康片，浙江康恩貝制藥有限公司產(chǎn)品，批號020115；臨用時用蒸餾水配制成17％的濃度。
丙酸睪丸素，上海第九制藥廠生產(chǎn)，規(guī)格25mg/ml.批號020506；臨用時用橄欖油稀釋成10mg/ml濃度。
實驗動物及材料雄性SD大鼠，60只，體重237.9±30.1克，由蘇州大學實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)使用許可證號SCXK(蘇)2002-0021；實驗動物使用許可證號SYXK(蘇)2002-0078。
血液流變儀北京普利生儀器中心；型號LBY-N6實驗方法選用健康雄性SD大白鼠60只，隨機取出10只作為正常組。另50只用4％水合氯醛麻醉，在無菌條件下摘除雙側睪丸，然后縫合皮膚。一周后，將去勢大鼠隨機分為5組，每組10只，分別為模型組；桂枝茯苓膠囊大劑量組(0.56g·kg-1，相當于生藥2.16g·kg-1)；桂枝茯苓膠囊中劑量組(0.28g·kg-1，相當于生藥1.08g·kg-1)；桂枝茯苓膠囊小劑量組(0.14g·kg-1，相當于生藥0.54g·kg-1)；陽性藥對照組(前列康1.7g·kg-1)；實驗動物分籠飼養(yǎng)，除正常組外，其余大鼠每日sc丙酸睪丸素(1mg/300g體重)一次，用藥組同時予以灌服藥液1ml/100g體重，正常組予以等體積水灌胃。大鼠每周稱重一次，并調(diào)整給藥量。術后7日起連續(xù)給藥30日。于末次給藥后4％水合氯醛(400mg/kg)麻醉，大鼠腹主動脈取血4.0ml，注入肝素處理的抗凝管，經(jīng)過LBY-N6型旋轉式血液流變儀測定大鼠血液流變學指標。
實驗結果給藥組與模型組比較，全血粘度、全血還原粘度具有較顯著性差異。桂枝茯苓膠囊大、中劑量組與模型組相比可顯著降低大鼠血液粘度(P＜0.05；P＜0.01)。桂枝茯苓膠囊給藥組可降低大鼠全血、全血還原低切，中切粘度，與模型組相比，差異非常顯著(P＜0.05；P＜0.01)。見表10。
表10 桂枝茯苓膠囊對前列腺增生大鼠血液流變學的影響(x±SD，n＝10)組別 劑量全血粘度/mpas 全血還原粘度/mpas(生藥g·kg-1) 低切 中切 高切低切中切高切正常組7.852±0.817 4.682±0.321 4.002±0.26716.094±2.315 8.097±1.1816.355±1.087模型組10.972±1.284 5.763±0.343 4.776±0.24020.829±3.059 9.33±0.650 7.156±0.433桂枝茯苓膠囊2.16 9.730±0.989* 5.436±0.334* 4.559±0.28018.299±2.271 8.542±0.978* 6.539±0.835桂枝茯苓膠囊1.08 9.562±1.341* 5.063±0.790* 4.232±0.764* 17.229±2.268** 7.480±1.397** 5.656±1.346**桂枝茯苓膠囊0.54 11.563±1.894 5.841±0.602 4.780±0.51920.954±3.666 8.769±0.9766.511±0.980前列康片組 1.7 11.308±1.605 5.895±0.483 4.893±0.42520.819±3.048 9.315±0.9507.173±0.844與模型組相比，*P＜0.05；**P＜0.01實驗例7桂枝茯苓膠囊對雌激素造成大鼠乳腺增生模型的作用受試藥物乳增寧取乳增32片，用水溶解定容至100ml；桂枝茯苓膠囊大劑量取桂枝茯苓膠囊粉29.7g，用水溶解定容至100ml；桂枝茯苓膠囊中劑量取桂枝茯苓膠囊粉9.9g，用水溶解定容至100ml；桂枝茯苓膠囊小劑量取桂枝茯苓膠囊粉3.3g，用水溶解定容至100ml。
試驗動物72只雌性未孕健康SD大鼠，體重180±10g，由南京中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。蘇動質SCXK(蘇)2002-0012。
實驗方法健康雌性未孕大鼠72只，隨機分為6組，正常對照組(12只)，模型組(11只)，乳增寧組(1.92g/kg，11只)，桂枝茯苓膠囊大劑量組(11.5g生藥/kg，11只)、中劑量組(3.83g生藥/kg，12只)、小劑量組(1.28g生藥/kg，11只)，除正常對照組外，其余各組大鼠每隔1日于前腋下交替注射苯甲酸雌二醇0.6mg/kg，共注射10次，同時分別灌胃給予各相應藥物(正常對照組和模型組灌胃等體積的自來水)，正常對照組則隔日注射與苯甲酸雌二醇等體積的無菌生理鹽水，最后給藥后24小時，球后靜脈取血，分離血清，測定血清中E2、P、T、PRL水平(RIA法)；取第三對乳房的乳腺，進行包埋、切片、HE染色，鏡下觀察其病理形態(tài)學變化，并取子宮和卵巢、胸腺及脾臟，稱重并計算其臟器系數(shù)，鏡下觀察其病理形態(tài)學變化。
實驗結果1對乳腺組織影響的病理分級及鏡下觀察乳腺病理分級I級乳腺小葉明顯，體積增大，小葉內(nèi)腺泡數(shù)量增多，導管極度擴張，腺腔內(nèi)或導管內(nèi)有多量分泌物；II級乳腺小葉明顯，體積增大，但無I級明顯，管腔或導管擴張，腺腔內(nèi)或導管內(nèi)有分泌物III級部分乳腺小葉增生，體積增大，腺腔或導管輕度擴張，腺腔內(nèi)或導管內(nèi)有少量分泌物；IV級(正常乳腺組織)乳腺小葉不增生，腺泡體積正常，腺腔和導管不擴張，腺腔和導管內(nèi)未見明顯分泌物。光鏡觀察結果見表11。
表11 桂枝茯苓膠囊對乳腺增生大鼠臟器系數(shù)的影響組別 動物數(shù)n I級 II級 III級 IV級95％置信區(qū)間正常組 12 0 0 0 12 0.912±0.014模型組 11 101 0 0 0.322±0.015**乳增寧組 11 8 3 0 0 0.391±0.015##大劑量組 11 6 3 2 0 0.483±0.015##中劑量組 12 7 4 1 0 0.456±0.014##小劑量組 11 8 2 1 0 0.402±0.015##注與模型組比較 #P＜0.05 ##P＜0.01與正常組比較 *P＜0.05 **P＜0.01由表1可見，正常組與模型組比較有顯著差異，各治療組與模型組也有顯著性差異。
2對乳腺增生大鼠臟器系數(shù)的影響表12 桂枝茯苓膠囊對乳腺增生大鼠臟器系數(shù)的影響組別 體重(g) 胸腺系數(shù)(mg/g) 子宮卵巢系數(shù)(mg/g) 脾臟系數(shù)(mg/g)正常組 238.7±26.02.24±0.472.42±0.78 5.95±1.61模型組 211.9±20.61.63±0.56**4.30±1.41**6.28±1.01乳增寧組 200.8±27.21.33±0.184.12±1.08 5.84±1.95大劑量組 237.3±32.41.48±0.483.64±1.12 5.14±1.57中劑量組 215.1±16.81.61±0.374.35±1.23 5.35±1.18小劑量組 210.4±33.11.55±0.344.31±1.22 5.20±2.10注與模型組比較 #P＜0.05 ##P＜0.01與正常組比較 *P＜0.05 **P＜0.01由表12可見，正常組與模型組比較子宮系數(shù)、胸腺系數(shù)有顯著差異，其中模型組的胸腺系數(shù)明顯減小，而子宮卵巢系數(shù)與模型組比較明顯增大，桂枝茯苓膠囊大劑量、中劑量及乳增寧組和臟器系數(shù)無顯著差異。
3對乳腺增生大鼠性激素水平的影響表13 桂枝茯苓膠囊對乳腺增生大鼠血清中性激素的影響組別E2(pg/ml) T(pg/ml) P(pg/ml)PRL(pg/ml)正常組 97.55±127.3717.73±15.93 11.76±6.95 0.87±0.38模型組 749.05±100.92**16.70±15.61 14.62±11.40 0.87±0.42乳增寧組 825.30±136.66 9.50±5.8722.09±11.03 1.27±0.36##大劑量組 844.90±113.24 12.30±11.39 27.36±5.12##1.16±0.66中劑量組 734.33±109.99 24.57±20.39 22.86±12.86 1.81±1.19##小劑量組 819.08±144.47 11.90±14.82 19.83±10.34 1.96±1.40##注與模型組比較 #P＜0.05 ##P＜0.01與正常組比較 *P＜0.05 **P＜0.01由表13可見，模型組血清E2水平顯著高于正常對照組，桂枝茯苓膠大劑量能升高P，與模型組比較有顯著差異；乳增寧組及桂枝茯苓膠中、小劑量能升高PRL，并與模型組比較有顯著性差異。
實驗例8桂枝茯苓膠囊對治療大鼠實驗性前列腺增生病理模型的實驗研究受試藥物名稱桂枝茯苓膠囊提供單位江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司制劑、批號桂枝茯苓浸膏粉，為棕褐色粉末.每克藥粉相當于生藥3.87g.批號020420。
配制方法臨用時用蒸餾水配制成5.6％(相當于生藥21.6％)、2.8％(相當于生藥10.8％)和1.4％(相當于生藥5.4％)的濃度。
陽性藥物前列康片，浙江康恩貝制藥有限公司產(chǎn)品，批號020115；臨用時用蒸餾水配制成17％的濃度。
丙酸睪丸素上海第九制藥廠生產(chǎn)，規(guī)格25mg/ml.批號020506；臨用時用橄欖油稀釋成10mg/ml濃度。
實驗動物SD大鼠，雄性，60只，體重237.9±30.1，由蘇州大學實驗動物中心提供。實驗動物生產(chǎn)使用許可證號SCXK(蘇)2002-0021；實驗動物使用許可證號SYXK(蘇)2002-0078。
實驗方法選用健康雄性SD大白鼠60只，隨機取出10只作為正常組。另50只用4％水合氯醛麻醉，在無菌條件下摘除雙側睪丸，然后縫合皮膚。一周后，將去勢大鼠隨機分為5組，每組10只，分別為模型組；桂枝茯苓膠囊大劑量組(0.56g·kg-1，相當于生藥2.16g·kg-1)；桂枝茯苓膠囊中劑量組(0.28g·kg-1，相當于生藥1.08g·kg-1)；桂枝茯苓膠囊小劑量組(0.14g·kg-1，相當于生藥0.54g·kg-1)；陽性藥對照組(前列康1.7g·kg-1)；實驗動物分籠飼養(yǎng)，除正常組外，其余大鼠每日sc丙酸睪丸素(1mg/300g體重)一次，用藥組同時予以灌服藥液1ml/100g體重，正常組予以等體積水灌胃。大鼠每周稱重一次，并調(diào)整給藥量。術后7日起連續(xù)給藥30日。于末次給藥后1h處死動物，取前列腺各葉，電子天平稱濕重，容積法測前列腺體積，取左右頭葉稱濕重并在37℃烘干后稱干重，計算重量系數(shù)(即每100g大鼠體重的前列腺重量或體積)。取腹葉前列腺固定于10％福爾馬林液中作常規(guī)石蠟切片，HE鏡檢。
實驗結果1、桂枝茯苓膠囊對大鼠前列腺重量，體積的影響桂枝茯苓膠囊各劑量組與模型組相比，可明顯減輕大鼠前列腺頭葉干濕重，減輕腹葉濕重，減小前列腺體積。尤以桂枝茯苓膠囊大、中劑量組效果最為明顯，同模型組相比，差異非常顯著(P＜0.01)。見表14、15。
表14 桂枝茯苓膠囊對大鼠實驗性前列腺頭葉增生的影響(x±SD，n＝10)劑量 頭葉(濕重)(mg/100g體重) 頭葉(干重)(mg/100g體重)組別(g/kg)左右 左 右正常組20.61±5.4124.76±6.43 3.92±0.86 4.76±1.58模型組69.34±13.86 70.20±11.9813.0±2.60 12.58±3.23桂枝茯苓膠囊 2.1647.22±8.76** 48.77±12.50** 9.27±2.44**9.31±2.01*桂枝茯苓膠囊 1.0851.04±8.13** 54.15±6.90** 9.83±1.63**9.69±1.55*桂枝茯苓膠囊 0.5449.97±11.46** 50.59± 12.06** 9.29±1.50**9.58±1.74*陽性藥組 1.7 45.58±8.10** 46.96±8.23** 9.13±2.25**9.35±1.96*與模型組相比，*P＜0.05；**P＜0.01表15 桂枝茯苓膠囊對大鼠前列腺腹葉和體積的影響(x±SD，n＝10)組別 劑量(g/kg) 腹葉(濕重)(mg/100g體重) 體積(cm3/100g體重)正常 111.18±26.91 0.132±0.017模型組 270.11±49.03 0.349±0.058桂枝茯苓膠囊2.16 170.40±42.10** 0.187±0.093**桂枝茯苓膠囊1.08 204.02±34.70** 0.262±0.040**桂枝茯苓膠囊0.54 265.49±84.80 0.307±0.087與模型組相比，*P＜0.05；**P＜0.012、病理鏡檢結果正常組前列腺腺體排列整齊，腺腔無擴張，腺上皮呈單層柱狀，腺體間可見間質。模型組顯示腺體排列緊密，上皮細胞數(shù)目增加，多呈高柱狀，腺上皮高度增加，形成乳頭狀突入腺腔內(nèi)，腺腔明顯擴張，內(nèi)可見分泌物。桂枝茯苓膠囊小劑量組腺體排列略為緊密，腺腔內(nèi)可見乳頭狀增生。桂枝茯苓膠囊大劑量組，中劑量組病理結果顯示，腺腔擴張不明顯，增生腺上皮細胞數(shù)目明顯少于模型組，且低柱狀上皮多見，部分趨于恢復正常，腺腔直徑與腺上皮高度同模型組相比，差異非常顯著(P＜0.05；P＜0.01)。見表16。
表16 桂枝茯苓膠囊對大鼠前列腺腺腔直徑和腺上皮高度的影響(x±SD)組別 劑量(g/kg)動物數(shù)(只)腺腔直徑(μm)腺上皮高度(μm)正常組10171.0±34.14 16.9±2.23模型組10287.0±51.43 27.3±3.65桂枝茯苓膠囊 2.16 10231.0±41.22* 21.3±3.27**桂枝茯苓膠囊 1.08 10243.0±34.98* 23.0±4.06*桂枝茯苓膠囊 0.54 10254.0±39.21 24.9±4.84陽性藥組 1.7 10239.0±32.81* 22.5±4.35*與模型組相比，*P＜0.05；**P＜0.01實驗例9桂枝茯苓膠囊對小鼠尿生殖竇植入性前列腺增生模型的影響受試藥物名稱桂枝茯苓膠囊提供單位江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司制劑、批號桂枝茯苓浸膏粉，為棕褐色粉末.每克藥粉相當于生藥3.87g.批號020420。
配制方法臨用時用蒸餾水配制成5.6％(相當于生藥21.6％)、2.8％(相當于生藥10.8％)和1.4％(相當于生藥5.4％)的濃度。
陽性藥物前列康片，浙江康恩貝制藥有限公司產(chǎn)品，批號020115；臨用時用蒸餾水配制成17％的濃度。
實驗動物選用成年健康昆明種小鼠60只，雄性，25.41±3.16g，由蘇州大學實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)使用許可證號SCXK(蘇)2002-0021；實驗動物使用許可證號SYXK(蘇)2002-0078。
實驗方法選用雄性小鼠60只，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉(3％，60mg/kg)，無菌條件下沿腹正中剖開腹壁，用鑷子輕輕分離前列腺腹葉，在解剖鏡下植入3個16天齡胎鼠的尿生殖竇組織，縫合腹壁肌肉、皮膚，消毒，放回鼠籠。然后進行分組，正常組10只灌服等體積生理鹽水，模型組10只，桂枝茯苓膠囊大劑量組10只(1.12g·kg-1，相當于生藥4.32g·kg-1)；桂枝茯苓膠囊中劑量組10只(0.56g·kg-1，相當于生藥2.16g·kg-1)；桂枝茯苓膠囊小劑量組10只(0.28g·kg-1，相當于生藥1.08g·kg-1)；前列康組10只(3.4g·kg-1)。所有小鼠自由飲食，于術后第3天開始灌胃給藥，給藥體積0.2ml/10g體重，每日一次，連續(xù)給藥30天后，斷髓處死小鼠，分別取前列腺各葉，睪丸和精囊腺，用電子天平稱濕重。取一側頭葉稱濕重并在37℃烘干后稱干重，計算重量系數(shù)(即每克小鼠體重的腺體重量)另取前列腺腹葉組織固定于10％福爾馬林液，送切片鏡檢。
實驗結果1、桂枝茯苓膠囊對小鼠前列腺重量的影響桂枝茯苓膠囊各劑量組與模型組相比，可明顯減輕小鼠前列腺頭葉干濕重，減輕腹葉濕重和精囊腺重量，尤以桂枝茯苓膠囊大、中劑量組效果最為明顯，同模型組相比，差異顯著(P＜0.05；P＜0.01)。見表17。
表17 桂枝茯苓膠囊對小鼠實驗性前列腺增生的影響(x±SD，n＝10)劑量 頭葉 腹葉濕重 精囊腺 睪丸組別(g/kg) 濕重(mg/g) 干重(mg/g) (mg/g)(mg/g) (mg/g)正常組 0.780±0.1030.186±0.0550.395±0.143.737±1.02 6.203±1.036模型組 1.298±0.3770.304±0.1100.676±0.162 5.817±0.7264.308±1.217桂枝茯苓膠囊 4.32 0.844±0.095**0.166±0.027**0.473±0.123**4.181±0.908**5.168±1.044桂枝茯苓膠囊 2.16 0.935±0.147*0.196±0.053*0.478±0.168*4.416±0.857**5.383±1.407桂枝茯苓膠囊 1.08 0.937±0.175*0.222±0.0740.516±0.095*4.771±0.811**5.289±1.062陽性藥組 3.4 0.871 ±0.136**0.188±0.043**0.489±0.157*4.040±0.728**6.247±0.644**與模型組相比，*P＜0.05；**P＜0.012、病理鏡檢發(fā)現(xiàn)正常組前列腺腺體排列整齊，腺上皮呈單層柱狀，腺腔無擴張，腺體間可見間質。模型組顯示腺體增生，排列緊密，伴間質組織增生，腺腔擴張，呈高柱狀的上皮細胞數(shù)目增加，形成乳頭狀突入腺腔內(nèi)。桂枝茯苓膠囊大劑量組，中劑量組鏡檢切片結果顯示腺腔擴張較輕；腺上皮高度、腺腔直徑明顯小于模型組，差別顯著(P＜0.05)；增生腺上皮細胞數(shù)目明顯少于模型組，且低柱狀上皮多見；小劑量組效果不太明顯，可見較多的基底細胞，間質較多。實驗結果提示桂枝茯苓膠囊可有效治療小鼠前列腺增生。見表18
表18 桂枝茯苓膠囊對小鼠前列腺腺腔直徑和腺上皮高度的影響(x±SD)劑量組別動物數(shù)(只) 腺腔直徑(μm)腺上皮高度(μm)(g·kg-1)正常組 10 96.7±33.47 11.5±2.99模型組 10 152.0±20.44 17.1±4.15桂枝茯苓膠囊 4.3210 127.8±22.10* 13.2±3.16*桂枝茯苓膠囊 2.1610 131.5±19.44* 13.6±2.80*桂枝茯苓膠囊 1.0810 139.0±25.14 15.0±2.87陽性藥組 3.4 10 118.0±30.48* 12.8±3.08*與模型組相比，*P＜0.05實施例1 制備桂枝茯苓組合物的工藝1原料組成桂枝240g，茯苓240g，牡丹皮240g，白芍240g，桃仁240g。制成1000粒。
2制備工藝牡丹皮的提取工藝應為藥材打成粗粉過10目篩，加水潤濕1.5小時后，用流通蒸氣蒸餾，收集5倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后，濾過，濾液再重蒸餾，收集3倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后濾過，合并兩次結晶為所提丹皮酚結晶。陰干后粉碎成細粉，制成細顆粒，陰干，低溫密閉儲藏，待用；將桂枝、白芍、桃仁及處方量20％的茯苓粉碎成粗粉，混勻；加入牡丹皮藥渣，再加入藥材4倍量的90％乙醇，浸泡30分鐘，加熱回流提取2小時，濾過，藥渣再加入原藥材3倍量的90％乙醇，回流提取2小時，濾過；合并濾液。藥渣加入原藥材6倍量的水，回流提取1小時，濾過；藥渣再加入原藥材4倍量的水，回流提取1小時，濾過，合并濾液，藥渣棄之；醇提液和水提液分別減壓濃縮，醇提液回收至無醇味。合并二濃縮液，得棕褐色粘稠膏體，相對密度為1.25(80℃)；將另80％處方量的茯苓細粉(100目)與上述浸膏混勻，干燥，粉碎，制粒，烘干；加入丹皮酚細顆粒，混勻，過20目篩，即得。
實施例2 制備桂枝茯苓膠囊的工藝1原料組成桂枝240g，茯苓240g，牡丹皮240g，白芍240g，桃仁240g。制成1000粒。
2制備工藝牡丹皮的提取工藝應為藥材打成粗粉過10目篩，加水潤濕1.5小時后，用流通蒸氣蒸餾，收集9倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后，濾過，濾液再重蒸餾，收集3倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后濾過，合并兩次結晶為所提丹皮酚結晶。陰干后粉碎成細粉，制成細顆粒，陰干，低溫密閉儲藏，待用；將桂枝、白芍、桃仁及處方量20％的茯苓粉碎成粗粉，混勻；加入牡丹皮藥渣，再加入藥材4倍量的90％乙醇，浸泡30分鐘，加熱回流提取2小時，濾過，藥渣再加入原藥材3倍量的90％乙醇，回流提取2小時，濾過；合并濾液。藥渣加入原藥材6倍量的水，回流提取1小時，濾過；藥渣再加入原藥材4倍量的水，回流提取1小時，濾過，合并濾液，藥渣棄之；醇提液和水提液分別減壓濃縮，醇提液回收至無醇味。合并二濃縮液，得棕褐色粘稠膏體，相對密度為1.25(80℃)；將另80％處方量的茯苓細粉(100目)與上述浸膏混勻，干燥，粉碎，制粒，烘干；加入丹皮酚細顆粒，混勻，過20目篩，裝入膠囊中，制成1000粒，即得。每粒重0.31g，相當于原藥材1.20g。
實施例3 制備桂枝茯苓膠囊的工藝1原料組成 桂枝240g，茯苓240g，牡丹皮240g，白芍240g，桃仁240g。制成1000粒.
2制備工藝取桂枝、桃仁、白芍、牡丹皮及50％處方量的茯苓五味藥碎成粗粉，混勻加入藥材3倍量的90％乙醇，浸泡0.5小時，加熱回流提取1小時，濾過；藥渣再加入原藥材3倍量的90％乙醇，回流提取，濾過，合并濾液；藥渣加入原藥材5倍量的水，回流提取0.5小時，濾過；藥渣加入原藥材5倍量的水，回流提取0.5小時，濾過；合并濾液，藥渣棄之；醇提液和水提液分別減壓濃縮，醇提液回收至無醇味；合并二濃縮液，得棕褐色浸膏；將另50％處方量的茯苓細粉與上述浸膏混勻，干燥，粉碎，制粒，烘干，過20目篩，裝入膠囊中，制成1000粒，即得。每粒重0.31g，相當于原藥材1.20g。
實施例4 制備桂枝茯苓片劑的工藝1原料組成桂枝240g，茯苓240g，牡丹皮240g，白芍240g，桃仁240g。制成1000片。
2制備工藝取桂枝、桃仁、白芍、牡丹皮及50％處方量的茯苓五味藥碎成粗粉，混勻加入藥材3倍量的90％乙醇，浸泡0.5小時，加熱回流提取1小時，濾過；藥渣再加入原藥材3倍量的90％乙醇，回流提取，濾過，合并濾液；得桂皮醛含量0.67g，丹皮酚含量1.78g；藥渣加入原藥材5倍量的水，回流提取0.5小時，濾過；藥渣加入原藥材5倍量的水，回流提取0.5小時，濾過；芍藥苷的含量2.56g，合并濾液，藥渣棄之；醇提液和水提液分別減壓濃縮，醇提液回收至無醇味；合并二濃縮液，得棕褐色浸膏；將另50％處方量的茯苓細粉與上述浸膏混勻，干燥，粉碎，制粒，烘干，經(jīng)整粒機整粒，壓片，每片重0.31g，相當于原藥材1.20g。
實施例5 桂枝茯苓組合物在治療前列腺增生的藥物中的應用桂枝240g，茯苓240g，牡丹皮240g，白芍240g，桃仁240g。制成1000粒，0.31g/?；蚱?，患前列腺增生疾病的患者，口服，每次3粒，每日3次。
實施例6 桂枝茯苓組合物在治療乳腺增生的藥物中的應用桂枝240g，茯苓240g，牡丹皮240g，白芍240g，桃仁240g。制成1000粒，0.31g/?；蚱既橄僭錾膊〉幕颊?，口服，每次3粒，每日3次。
權利要求
1.一種桂枝茯苓組合物的制備方法，其特征在于該方法為取等量桂枝、茯苓、桃仁、白芍、牡丹皮五味藥；牡丹皮的提取方法為藥材打成粗粉2mm-1cm，加水潤濕1-2小時后，流通水蒸氣蒸餾提取，收集4-10倍量餾出液，冷藏靜置；待析出結晶后，濾過，濾液再重蒸餾，收集2.5-3.5倍量的餾出液，冷藏靜置；待析出結晶后，濾過，濾液棄去，合并兩次丹皮酚結晶；陰干后粉碎成細粉，制成細顆粒，陰干，低溫密閉儲藏，待用；將桂枝、白芍、桃仁及處方量10％-30％的茯苓粉碎成粗粉，混勻；加入牡丹皮藥渣，再加入藥材3-5倍量的90％乙醇，浸泡0.5-1小時，加熱回流提取1-3小時，濾過；藥渣再加入原藥材2-4倍量的90％乙醇，回流提取1-3小時，濾過，合并濾液；藥渣加入原藥材5-7倍量的水，回流提取0.5-1小時，濾過；藥渣再加入原藥材3-5倍量的水，回流提取0.5-1小時，濾過；合并濾液，藥渣棄之；醇提液和水提液分別減壓濃縮，醇提液回收至無醇味；合并二濃縮液，得棕褐色浸膏；將另70％-90％茯苓細粉與上述浸膏混勻，干燥，粉碎，制粒，烘干；加入丹皮酚細顆粒，混勻，過20-30目篩，即得。
2.如權利要求1所述桂枝茯苓組合物的制備方法，其特征在于該方法為取等量桂枝、茯苓、桃仁、白芍、牡丹皮五味藥；牡丹皮的提取工藝應為藥材打成粗粉過10目篩，加水潤濕1.5小時后，用流通蒸氣蒸餾，收集5倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后，濾過，濾液再重蒸餾，收集3倍量餾出液，冷藏靜置，待析出結晶后濾過，合并兩次結晶為所提丹皮酚結晶；陰干后粉碎成細粉，制成細顆粒，陰干，低溫密閉儲藏，待用；將桂枝、白芍、桃仁及處方量20％的茯苓粉碎成粗粉，混勻；加入牡丹皮藥渣，再加入藥材4倍量的90％乙醇，浸泡30分鐘，加熱回流提取2小時，濾過，藥渣再加入原藥材3倍量的90％乙醇，回流提取2小時，濾過；合并濾液。藥渣加入原藥材6倍量的水，回流提取1小時，濾過；藥渣再加入原藥材4倍量的水，回流提取1小時，濾過，合并濾液，藥渣棄之；醇提液和水提液分別減壓濃縮，醇提液回收至無醇味；合并二濃縮液，得棕褐色浸膏，相對密度在80℃時為1.25；將另80％處方量的過100目茯苓細粉與上述浸膏混勻，干燥，粉碎，制粒，烘干；加入丹皮酚細顆粒，混勻，過20目篩，即得。
3.一種桂枝茯苓組合物的制備方法，其特征在于該方法為取等量桂枝、茯苓、桃仁、白芍、牡丹皮五味藥；取桂枝、桃仁、白芍、牡丹皮及40％-60％處方量的茯苓五味藥碎成粗粉，混勻；加入70％-90％乙醇，浸泡0.5-1小時，加熱回流提取1-3次，其中每次加入70％-90％乙醇的量為原藥材的3-5倍，加熱回流提取時間為1-3小時；濾過，合并濾液；藥渣加入原藥材5-7倍量的水，回流提取1-3次，其中每次回流提取時間0.5-1小時；濾過，合并濾液，藥渣棄之；醇提液和水提液分別減壓濃縮，醇提液回收至無醇味；合并二濃縮液，得棕褐色浸膏；將另40％-60％處方量的茯苓細粉與上述浸膏混勻，干燥，粉碎，制粒，烘干，整粒，即得。
4.如權利要求3所述桂枝茯苓組合物的制備方法，其特征為在于該方法為取等量桂枝、茯苓、桃仁、白芍、牡丹皮五味藥；取等量桂枝、桃仁、白芍、牡丹皮及50％處方量的茯苓五味藥碎成粗粉，混勻；加入90％乙醇，浸泡0.5小時，加熱回流提取2次，其中每次加入90％乙醇的量為原藥材的3倍，加熱回流提取時間為1小時；濾過，合并濾液；藥渣加入原藥材5倍量的水，回流提取2次，其中每次回流提取時間0.5小時；濾過，合并濾液，藥渣棄之；醇提液和水提液分別減壓濃縮，醇提液回收至無醇味；合并二濃縮液，得棕褐色浸膏；將另50％處方量的茯苓細粉與上述浸膏混勻，干燥，粉碎，制粒，烘干，整粒，即得。
5.一種桂枝茯苓組合物的應用，其特征在于該桂枝茯苓組合物具有活血化瘀的功能，改善全血粘度、全血還原粘度；對結締組織增生和急慢性炎癥反應具有抑制作用。
6.如權利要求5所述的桂枝茯苓組合物的應用，其特征在于該桂枝茯苓組合物在治療前列腺增生的藥物中的應用。
7.如權利要求6所述的桂枝茯苓組合物的應用，其特征在于該桂枝茯苓組合物能控制前列腺腺腔組織擴張，降低增生腺上皮高度，減輕前列腺各葉重量及精囊腺重量，抑制結締組織增生，降低血液粘滯度。
8.如權利要求5所述的桂枝茯苓組合物的應用，其特征在于該桂枝茯苓組合物在治療乳腺增生的藥物中的應用。
9.如權利要求8述的桂枝茯苓組合物的應用，其特征在于該桂枝茯苓組合物能影響乳腺增生的臟器系數(shù)，升高血清中催乳素、孕酮水平，對抗雌激素水平，抑制乳腺增生。
10.權利要求5-9述的桂枝茯苓組合物的應用，其特征在于該桂枝茯苓組合物可制成口服制劑，其口服制劑可選自于片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑當中的一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種桂枝茯苓組合物新的制備工藝。并提供了桂枝茯苓組合物在治療前列腺增生和乳腺增生的藥物中的應用。在本發(fā)明制備工藝中，一種制備工藝采用牡丹皮單提，茯苓的提取投料量細粉量優(yōu)選比例為10％－30％∶70％－90％；另一種制備工藝采用多次醇提與水提相結合的方法。制備工藝穩(wěn)定、可行，成品的丹皮酚含量均比原工藝高。
文檔編號A61P19/04GK1546129SQ20031011683
公開日2004年11月17日 申請日期2003年11月28日 優(yōu)先權日2003年11月28日
發(fā)明者肖偉, 戴翔翎, 凌婭, 王振中, 陳艷平, 沈靜, 肖 偉 申請人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司