專(zhuān)利名稱(chēng)：治療關(guān)節(jié)炎的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從菊科植物中提取的香豆草醚類(lèi)化合物，含有該化合物的藥物組合物或者保健品，及其在治療風(fēng)濕性或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎癥方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
關(guān)節(jié)炎系指關(guān)節(jié)罹患炎癥，其致病原因復(fù)雜，發(fā)病形式多樣。但以類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎最為常見(jiàn)。類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種常見(jiàn)的以慢性多關(guān)節(jié)炎癥為主要表現(xiàn)的疾病，其特征為慢性、進(jìn)行性、對(duì)稱(chēng)性及侵蝕性的外周關(guān)節(jié)損害，病理變化為關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生、擴(kuò)張、充血，血管壁肥厚，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維組織增生、透明、變性等，可伴有關(guān)節(jié)外的系統(tǒng)性損害。關(guān)于類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)理至今尚未明確，細(xì)菌、病毒、性激素、遺傳、環(huán)境等因素均可能與之有關(guān)，也與機(jī)體素質(zhì)有一定關(guān)系(William PA.Thepathophysiology and treatment of rheumatoid arthritis.Arthritis Rheumatism1997；40(4)；595-597)，即與遺傳基因相關(guān)。
一般認(rèn)為，下面的假設(shè)可說(shuō)明兩者間的相互作用(1)HLA可以作為某些病原體的受體；(2)病原體的抗原片斷與HLA分子的氨基酸進(jìn)行結(jié)合；(3)分子模擬作用，既與疾病相關(guān)的HLA分子和病原體具有相似結(jié)構(gòu)的基因片段，如HLA-DR4某些與EB病毒殼抗原(gp110)間則有一段相同的氨基酸，使抗體對(duì)病原體的反應(yīng)轉(zhuǎn)為對(duì)其自身抗原的免疫反應(yīng)。當(dāng)抗原進(jìn)入人體后首先被巨嗜細(xì)胞或巨嗜樣細(xì)胞所吞噬，經(jīng)消化、濃縮后與其細(xì)胞膜的HLA-DR分子結(jié)合成復(fù)合物，若此復(fù)合物被其T細(xì)胞的受體所識(shí)別，則該T輔助淋巴細(xì)胞被火化，因其一系列的免疫反應(yīng)，包括激活B淋巴細(xì)胞，使其分化為漿細(xì)胞，分泌大量免疫球蛋白，其中有類(lèi)風(fēng)濕因子，70％患者血清中出現(xiàn)類(lèi)風(fēng)濕因子。類(lèi)風(fēng)濕因子是免疫球蛋白IgG Fc端的抗體，它與自身的IgG相結(jié)合，形成免疫復(fù)合物是造成關(guān)節(jié)局部和關(guān)節(jié)外病變的重要因素之一，故類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是自身免疫性疾病。同時(shí)免疫調(diào)節(jié)和淋巴細(xì)胞亞群間相互作用失調(diào)也是病因之一。其病理表現(xiàn)為關(guān)節(jié)的滑膜炎，當(dāng)累及軟骨和骨質(zhì)時(shí)出現(xiàn)關(guān)節(jié)畸形。
類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎被視為影響人類(lèi)健康的五大疾病之一，據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全球有1％的人患有類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病，中國(guó)的患者已達(dá)一千余萬(wàn)。在發(fā)病后10年內(nèi)近50％的患者失去工作能力，生活質(zhì)量下降，嚴(yán)重者甚至導(dǎo)致死亡(李克江等“近幾年開(kāi)發(fā)的類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療藥物”《國(guó)外醫(yī)藥抗生素分冊(cè)》2003Jan.24(1)24-29)。
骨關(guān)節(jié)炎的名稱(chēng)極多，如肥大性骨關(guān)節(jié)炎、退行性關(guān)節(jié)炎、變性性關(guān)節(jié)炎、增生性骨關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)病，均指一種病、國(guó)內(nèi)統(tǒng)一使用骨關(guān)節(jié)炎。該病是一種最常見(jiàn)的關(guān)節(jié)病變，其患病率隨著年齡而增加，是一種常見(jiàn)的老年人的關(guān)節(jié)炎。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全世界50歲以上的人中，骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率為50％，55歲以上的人群中，發(fā)病率為80％，因此，骨關(guān)節(jié)炎又被稱(chēng)為“下半生疾病”。65歲以上的老人幾乎都有這種疾病。其病因尚不完全清楚，其發(fā)病可能與機(jī)械影響和衰老導(dǎo)致生理改變等綜合因素如肥胖、骨密度、外傷和遺傳等因素所致。
關(guān)節(jié)炎大多呈慢性、進(jìn)行性病變過(guò)程，需要長(zhǎng)期應(yīng)用藥物治療。關(guān)節(jié)炎治療的基本目標(biāo)在于減輕疼痛、減少發(fā)炎、防止骨骼、軟骨及軟組織受破壞，維持關(guān)節(jié)的正常功能，使病人日常活動(dòng)不受影響。在藥物治療方面，傳統(tǒng)上是采用「金字塔」形狀的治療方式，即循序地使用一線(xiàn)、二線(xiàn)以至三線(xiàn)藥物。
一線(xiàn)藥物—非甾體抗炎藥(NSAIDs)典型的非甾體抗炎藥(NSAIDs)是當(dāng)前治療關(guān)節(jié)炎的主要藥物，在關(guān)節(jié)炎的早期階段能有效地通過(guò)抑制環(huán)氧化酶(COX)抑制前列腺素的合成而迅速產(chǎn)生抗炎止痛作用，對(duì)減輕急性關(guān)節(jié)炎的癥狀和體征有較好效果，但不能改變疾病的病程。目前這一類(lèi)藥物品種較多，主要有阿西美辛、雙氯芬酸鈉、布洛芬、吲哚美辛、美洛昔康、酮洛芬、舒林酸、金諾芳、萘普生、萘丁美酮、吡羅昔康、甲氯滅酸、氯滅酸、甲滅酸、吡洛芬、芬布芬、托美汀、氟滅酸、非諾芬、舒筋靈，尼美舒利、賽利克西、羅非克西等。非甾體類(lèi)抗炎藥(NSAIDs)是治療關(guān)節(jié)炎的一線(xiàn)藥物，在治療中舉足輕重。關(guān)于它們的使用效果，醫(yī)生和病人均有不同的看法，但是不容忽視的是這類(lèi)藥物都有難以克服的毒副反應(yīng)。因?yàn)樯鲜鏊幬锿瑫r(shí)抑制COX-1和COX-2的產(chǎn)生，導(dǎo)致很多嚴(yán)重的不良反應(yīng)，最突出的就是胃腸道并發(fā)癥、胃部不適及胃出血、潰瘍、穿孔，還有腎臟、肝臟、血液系統(tǒng)的損害。老年人由于胃腸、腎功能的生理退化，這方面表現(xiàn)尤甚。在英國(guó)，治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的年總成本估計(jì)3500萬(wàn)英鎊，而治療由這些藥物產(chǎn)生的毒副作用卻花費(fèi)5800萬(wàn)英鎊，若加上由于改善類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物(DMARDs)產(chǎn)生毒副作用而頻繁監(jiān)測(cè)的費(fèi)用，約相當(dāng)于三倍NSAIDs的費(fèi)用。
新上市的NSAIDs如美洛昔康(meloxican)、醋氯芬酸(aceclofenac)雖然療效未有大的提高，但最突出的優(yōu)點(diǎn)就是胃腸道不良反應(yīng)明顯減輕，耐受性進(jìn)一步提高。
二線(xiàn)藥物—慢作用抗風(fēng)濕藥(DMARDs)此類(lèi)藥物過(guò)去名為“病情改善藥(DMARD)”或“二線(xiàn)藥物”，它們對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜炎癥的作用較為緩慢，在應(yīng)用一段時(shí)間后方有效果，而療效在停藥后可持續(xù)一段時(shí)間。常見(jiàn)品種有甲氨蝶呤(MTX)、金制劑、柳氮磺吡啶、青霉胺、氯喹、雷公藤等。此外還有細(xì)胞毒藥物，此類(lèi)藥物通過(guò)不同途徑產(chǎn)生免疫抑制作用。常用的有環(huán)孢素、環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、雷公藤等。它們往往是系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和血管炎的二線(xiàn)藥物，副作用雖多且較嚴(yán)重，但對(duì)改善這些疾病的預(yù)后有很大的作用。來(lái)氟米特(leflunomide)是1998年9月10日經(jīng)FDA批準(zhǔn)在美國(guó)首次上市的類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療藥物。本品是參與嘧啶合成的二氫乳清酸脫氫酶(DHODH)可逆性抑制劑，它選擇性地作用于淋巴細(xì)胞，抑制淋巴細(xì)胞的增生，使病情進(jìn)程顯著延緩，并干擾病程的各個(gè)階段。其等效或優(yōu)于現(xiàn)有的關(guān)節(jié)炎緩解劑甲氨蝶呤和柳氮磺胺吡啶，并且起效快，有良好的安全性。但是其能引發(fā)的不良反應(yīng)有腹瀉、脫發(fā)、藥疹，因肝酶(ALT和AST)升高而需要臨測(cè)肝功能。
三線(xiàn)藥物—腎上腺皮質(zhì)激素本類(lèi)藥物是強(qiáng)的抗炎、抗過(guò)敏藥物，明顯改變結(jié)締組織病變的預(yù)后，但不能根治這些疾病。其副作用隨作用時(shí)間而劑量增加，故應(yīng)用時(shí)要衡量它的療效和副作用而慎重選用。甾體類(lèi)抗炎藥主要為糖皮質(zhì)激素，如可的松、潑尼松龍等。
此外，生物制劑用于治療關(guān)節(jié)炎的藥物有TNF-α抗體、γ-干擾素、RA疫苗等；其它的治療方式還有中藥治療、放射治療及基因治療等(王斌等類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療進(jìn)展山西醫(yī)藥雜志2001 Feb.30(1)34-38)。雖然現(xiàn)有的關(guān)節(jié)炎治療藥物種類(lèi)眾多，但至今尚無(wú)確切根治或控制關(guān)節(jié)炎病情發(fā)展，特別是針對(duì)類(lèi)風(fēng)濕及風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎的藥物。而且當(dāng)前常用的非甾體抗炎藥常有胃腸道副作用，且有時(shí)治療關(guān)節(jié)炎的療效不明顯，如苯胺類(lèi)藥物對(duì)乙酰氨基酚等；改善病情類(lèi)藥物在治療疾病的同時(shí)常會(huì)有其它系統(tǒng)的副作用，如肝腎毒性等；糖皮質(zhì)激素雖然療效好，但會(huì)導(dǎo)致感染、骨質(zhì)疏松、醫(yī)源性腎上腺皮質(zhì)機(jī)能不全等嚴(yán)重不良反應(yīng)，因此不適合長(zhǎng)期應(yīng)用。其它的治療藥物也存在療效不確切、起效慢、副作用大等缺點(diǎn)。
綜上所述，目前市場(chǎng)上缺乏起效快速、緩解關(guān)節(jié)病痛、副作用小的藥物。因此，本領(lǐng)域迫切需要開(kāi)發(fā)一種療效好、副作用小的關(guān)節(jié)炎治療藥物，尤其是來(lái)源于天然植物的有關(guān)節(jié)炎治療價(jià)值的新物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一類(lèi)可有效治療關(guān)節(jié)炎的香豆草醚類(lèi)化合物。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種式I的香豆草醚類(lèi)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含式I的香豆草醚類(lèi)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物的用途， 式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；其特征在于，被用于制備治療或預(yù)防關(guān)節(jié)炎病的藥物。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥學(xué)上可接受的鹽是式I化合物與選自下組的酸所形成的鹽氫氯酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來(lái)酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、或羥乙磺酸。
在另一優(yōu)選例中，所述的式I化合物或所述的提取物是從菊科植物中提取的。
在另一優(yōu)選例中，所述的菊科植物選自鱧腸(Eclipta prostrata Linn)、蟛蜞菊(Wedelia chinensis)或旱蓮草(Eclipta alba)、或其組合。
在另一優(yōu)選例中，所述的式I化合物是具有式II的蟛蜞菊內(nèi)酯 在另一優(yōu)選例中，所述的關(guān)節(jié)炎病選自下組風(fēng)濕性或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎癥。
在另一優(yōu)選例中，式I化合物是通過(guò)化學(xué)全合成、化學(xué)半合成或用生物轉(zhuǎn)換的方式獲得的。
在另一優(yōu)選例中，所述式I化合物是通過(guò)包括以下步驟的提取方法獲得的(a)用95±3％乙醇提取菊科植物的果實(shí)、葉或枝，得到乙醇浸膏；(b)取乙醇浸膏，用5-300倍(較佳地10-200倍，更佳地20-100倍)于浸膏體積的50-80℃的水溶解，過(guò)濾去除雜質(zhì)，回收水相；(c)用乙酸乙酯萃取步驟(b)的水相，回收乙酸乙酯相；(d)對(duì)步驟(c)的乙酸乙酯相進(jìn)行干燥，得到沉淀物；(e)在硅膠柱上，用梯度為5∶1至1∶2的石油醚/丙酮洗脫劑進(jìn)行洗脫步驟(c)的沉淀物，收集石油醚∶丙酮為1∶1的洗脫組分；(f)對(duì)步驟(e)的洗脫組分進(jìn)行濃縮，得濃縮物；(g)在硅膠柱上，用梯度為5∶1至1∶2的二氯甲烷/丙酮洗脫劑洗脫步驟(f)的濃縮物，收集二氯甲烷∶丙酮為3∶1的洗脫組分；(h)在硅膠柱上，用梯度為20∶10∶1至5∶10∶1的甲苯-丙酮-甲酸洗脫劑洗脫步驟(g)的洗脫組分，收集甲苯∶丙酮∶甲酸為10∶10∶1的洗脫組分；(i)在硅膠柱上，用梯度為30∶1至1∶1的二氯甲烷/甲醇洗脫劑洗脫步驟(h)的洗脫組分，收集二氯甲烷∶甲醇為20∶1的洗脫組分；(j)用乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，得到式I的香豆草醚類(lèi)化合物沉淀。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種制備香豆草醚類(lèi)化合物的方法，包括以下步驟
(a)用95±3％乙醇提取菊科植物的果實(shí)、葉或枝，得到乙醇浸膏；(b)取乙醇浸膏，用5-300倍(較佳地10-200倍，更佳地20-100倍)于浸膏體積的50-80℃的水溶解，過(guò)濾去除雜質(zhì)，回收水相；(c)用乙酸乙酯萃取步驟(b)的水相，回收乙酸乙酯相；(d)對(duì)步驟(c)的乙酸乙酯相進(jìn)行干燥，得到沉淀物；(e)在硅膠柱上，用梯度為5∶1至1∶2的石油醚/丙酮洗脫劑進(jìn)行洗脫步驟(c)的沉淀物，收集石油醚∶丙酮為1∶1的洗脫組分；(f)對(duì)步驟(e)的洗脫組分進(jìn)行濃縮，得濃縮物；(g)在硅膠柱上，用梯度為5∶1至1∶2的二氯甲烷/丙酮洗脫劑洗脫步驟(f)的濃縮物，收集二氯甲烷∶丙酮為3∶1的洗脫組分；(h)在硅膠柱上，用梯度為20∶10∶1至5∶10∶1的甲苯-丙酮-甲酸洗脫劑洗脫步驟(g)的洗脫組分，收集甲苯∶丙酮∶甲酸為10∶10∶1的洗脫組分；(i)在硅膠柱上，用梯度為30∶1至1∶1的二氯甲烷/甲醇洗脫劑洗脫步驟(h)的洗脫組分，收集二氯甲烷∶甲醇為20∶1的洗脫組分；(j)用乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，得到式I的香豆草醚類(lèi)化合物沉淀 式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基。
在本發(fā)明的第三方面，提供了一種保健品，它含有0.05-50wt％(固定夾0.1-10wt％)的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；
R2代表氫原子、羥基、C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；和食品上可接受的載體。
在本發(fā)明的第四方面，提供了一種治療關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，它含有(a)含有作為主要活性成分的0.05-90wt％的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含式I的香豆草醚類(lèi)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物 式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；(b)選自下組的一種或多種輔助活性成分阿西美辛、雙氯芬酸鈉、布洛芬、吲哚美辛、美洛昔康、酮洛芬、舒林酸、金諾芳、萘普生、萘丁美酮、吡羅昔康、甲氯滅酸、氯滅酸、甲滅酸、吡洛芬、芬布芬、托美汀、氟滅酸、非諾芬、舒筋靈，尼美舒利、賽利克西、羅非克西、醋氯芬酸；甲氨蝶呤、金制劑、柳氮磺吡啶、青霉胺、氯喹、雷公藤、環(huán)孢素、環(huán)磷酰胺；或糖皮質(zhì)激素；和(c)藥學(xué)上可接受的載體。


圖1顯示了佐劑性關(guān)節(jié)炎病變大鼠，可見(jiàn)左腳原發(fā)性的炎癥和右腳繼發(fā)性的炎癥。
圖2顯示了MTX對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療，可見(jiàn)左腳原發(fā)性的炎癥和右腳繼發(fā)性的炎癥均減輕。
圖3顯示了蟛蜞菊內(nèi)酯(12.5mg/kg)對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療，可見(jiàn)左腳原發(fā)性的炎癥和右腳繼發(fā)性的炎癥均減輕。
圖4顯示了蟛蜞菊內(nèi)酯(0.25mg/kg)對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療，可見(jiàn)左腳原發(fā)性的炎癥和右腳繼發(fā)性的炎癥有減輕趨勢(shì)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛和深入的研究，發(fā)現(xiàn)式I的香豆草醚類(lèi)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含式I的香豆草醚類(lèi)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物可有效地治療關(guān)節(jié)炎， 式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
式I化合物，可由植物中提取或化學(xué)合成、半合成、生物轉(zhuǎn)化的方式獲得，例如從菊科植物鱧腸(Eclipta prostrata Linn)、蟛蜞菊(Wedeliachinensis)、或旱蓮草(Eclipta alba)等植物中提取。該化合物在菊科植物中的提取部位為植物的枝、葉或果實(shí)部位，尤其是葉部位。
1956年，Govindachari等首次從Wedelia calendulacea中分離出香豆草醚類(lèi)成分蟛蜞菊內(nèi)酯(wedelolactone)，其結(jié)構(gòu)為 (Govindachari et.al.″Chemical Examination of Wedelia Calendulacea，Part I，Structure of Wedelolactone″，Journal of the Chemical Society(1956)，pp.629-632.；Govindachari et.al.″Chemical Investigation of Wedelia Calendulacea，PartII，The Position of the Methoxyl Group in Wedelolactone″，Journal of theChemical Society，(1957)，545-547；)。
其后Bhargava等從旱蓮草(Eclipta alba)中分離出去甲蟛蜞菊內(nèi)酯(demethylwedelolactone)，結(jié)構(gòu)式為 (Bhargava KK.et.al Isolation of desmethylwedelolactone and itsglucoside from Eclipta alba.Indian J Chem，1970，8(7)664-665)。
Li CC.等及美國(guó)專(zhuān)利6,552,071公開(kāi)了該類(lèi)化合物衍生物的結(jié)構(gòu)及合成方法。(Li CC.et.al Total synthesis of wedelolactone.J Org Chem.2003 Oct31；68(22)8500-4.)(Yuan et al.Methods for treating cell death diseases andinflammation.United States Patent 6,552,071)。
該類(lèi)化合物以往被認(rèn)為有護(hù)肝、止血、抗蛇毒等作用。(Wonget.al.”Wedelolactone and coumestan derivatives as new antihepatoticand antiphlogistic principles.Arzneimittelforschung.1998 May38(5)661-5；Melo.et.al.”Inhibition of the myotoxic and hemorrhagicactivities of crotalid venoms by Eclipta prostrate extracts andconstituents.Toxicon.1994 May；32(5)595-603)。
如本文所用，本發(fā)明化合物指式I化合物 其中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C1-C8烷基；R3-R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基。
如本文所用，烷基是指具有1～8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等。優(yōu)選具有1～4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。最優(yōu)選甲基。
本發(fā)明的化合物可以以由藥學(xué)上或生理學(xué)可接受的酸或堿衍生的鹽形式使用。這些鹽包括(但不限于)與如下酸形成的鹽氫氯酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來(lái)酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、或羥乙磺酸。鹵化物的鹽同樣適用。其他鹽包括與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鈣或鎂)形成的鹽，以及以酯、氨基甲酸酯或其他常規(guī)的“前體藥物”的形式(當(dāng)以這種形式給藥時(shí)，在體內(nèi)可轉(zhuǎn)化成活性部分)。
含有式I化合物的提取物也可用于本發(fā)明。一種優(yōu)選的提取方法如上所述。通常，在提取物中式I化合物的純度按重量計(jì)應(yīng)在40％-99.9％，更佳地為50-98％。
本發(fā)明還包括藥物組合物以及治療關(guān)節(jié)炎的方法，它包括給哺乳動(dòng)物施用藥物有效量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明的香豆草醚類(lèi)化合物可用于治療關(guān)節(jié)炎。代表性的例子包括(但并不限于)風(fēng)濕性或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎癥等。
藥物組合物本發(fā)明涉及的藥物組合物包含安全有效量的本發(fā)明涉及的化合物和藥物上可接受的載體?！鞍踩行Я俊毕抵冈谄毡檎J(rèn)同的醫(yī)學(xué)判定范疇內(nèi)，化合物的用量足以改善待治病情，且治療時(shí)并未出現(xiàn)嚴(yán)重的副作用。某化合物的安全有效量應(yīng)根據(jù)具體的待治病情、接受治療的病人的年齡和生理狀況、病情嚴(yán)重程度、療程長(zhǎng)短、藥用載體及給藥途徑等因素而確定。此時(shí)組合物中包含按重量計(jì)約0.1％至約99.9％的化合物。
通常，當(dāng)本發(fā)明化合物用于上述用途時(shí)，它們可與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑混合，如溶劑、稀釋劑等，而且可以用如下形式口服給藥片劑、膠囊、可分散的粉末、顆?；驊腋∫?含有如約0.05-5％懸浮劑)、糖漿(含有如約10-50％糖)、和酏劑(含有約20-50％乙醇)，或者以無(wú)菌可注射溶液或懸浮液形式(在等滲介質(zhì)中含有約0.05-5％懸浮劑)進(jìn)行非腸胃給藥。例如，這些藥物制劑可含有與載體混合的約2.5-90％，通常約為5％-60％(重量)的活性成分。
常見(jiàn)的藥物劑型包括粒劑、粉劑、片劑、膠囊、糖漿、栓劑、注射劑、乳劑、酊劑、懸浮液、溶液的形式口服或非口服給藥。
對(duì)于口服給藥，可使用片劑、錠劑、膠囊、丸劑、粉末、顆粒、糊劑、混懸劑、乳劑或者溶液劑。
對(duì)于非胃腸道給藥，可使用注射劑和輸液劑。
對(duì)于關(guān)節(jié)內(nèi)注射，可使用相應(yīng)配置的混懸劑。
對(duì)于肌肉內(nèi)注射，可使用水溶液和油溶液或者混懸劑以及相應(yīng)的貯存庫(kù)制劑。
對(duì)于體外局部用藥，可使用洗劑、霜?jiǎng)┖湍z劑等。
所用的活性成分的有效劑量可隨給藥的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重程度而變化。然而，通常當(dāng)本發(fā)明的化合物每天以約0.5-500mg/kg動(dòng)物體重的劑量給予時(shí)，能得到令人滿(mǎn)意的效果，較佳地每天以2-4次分開(kāi)的劑量給予，或以緩釋形式給藥。對(duì)大部分大型哺乳動(dòng)物而言，每天的總劑量約為1-100mg。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學(xué)上可接受的載體混合的約0.5-500mg的活性化合物?？烧{(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng)答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每天給予若干次分開(kāi)的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。通常，成年人的口服每日的合適臨床劑量的選擇范圍為1-1000mg，優(yōu)選為10-200mg，成人非口服的每日劑量為0.1-100mg，優(yōu)選1-100mg。
在優(yōu)選例中，本發(fā)明的化合物可通過(guò)口服以及靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑給藥。固態(tài)載體包括淀粉、乳糖、磷酸氫鈣、微晶纖維素、蔗糖和白陶土，而液態(tài)載體包括無(wú)菌水、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要適合活性成分的特性和所需的特定給藥方式。在制備藥物組合物中通常使用的佐劑也可有利地被包括，例如調(diào)味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑如維生素E、維生素C、BHT和BHA。
如本文所用，“非口服”包括皮下注射，靜脈注射，腹膜內(nèi)注射和滴注輸液，使用合適的分散劑或潤(rùn)滑劑及懸浮劑，由本領(lǐng)域常規(guī)方法可制得注射制劑如無(wú)菌注射的水性或油性懸浮劑，無(wú)菌注射的制劑為在稀釋劑中或溶液中的無(wú)毒、非口服施用的溶液或懸浮劑，例如水溶液，可用的載體或溶劑包括水、等滲鹽水、無(wú)毒非揮發(fā)性油也可用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可以使用任何非揮發(fā)油或脂肪酸，包括天然、合成或半合成的脂肪油和脂肪酸以及天然、合成或半合成的單、雙或三甘油酯。
直腸用藥的栓劑的制備可用藥物與一種合適的無(wú)刺激性賦形劑混合而成，賦形劑在常溫下為固體，而在腸內(nèi)溫度下為液體從而溶解、將藥物釋放到直腸中，如可可脂或聚乙二醇。
口服用藥的固體藥劑如上所述，包括粉劑、粒劑、片劑、丸劑、膠囊。這種劑型可用有效組分與至少一種添加劑混合而成，這些添加劑包括蔗糖、乳糖、纖維素糖、甘露醇、麥芽糖、葡聚糖、淀粉、瓊脂、藻酸炎、殼質(zhì)、殼聚糖、果膠、黃耆膠、阿拉伯膠、明膠、膠原、酪蛋白、白蛋白以及合成或半合成的聚合物和甘油酯，一般這些劑型可含有另外的添加劑，包括惰性稀釋劑，潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂，防腐劑如對(duì)羥苯甲酸酯類(lèi)，山梨酸，抗氧劑如維生素C、α-維生素E和半胱氨酸，分解劑，粘結(jié)劑，增稠劑，緩沖液，甜味劑，調(diào)味劑和香料。片劑和丸劑也可覆以腸衣。口服的液體劑型包括可藥用的乳劑、糖漿、酊劑、懸液和溶液，可以含有常用的惰性稀釋劑，如水。
從易于制備和給藥的立場(chǎng)看，優(yōu)選的藥物組合物是固態(tài)組合物，尤其是片劑和固體填充或液體填充的膠囊?；衔锏目诜o藥是優(yōu)選的。
在使用本發(fā)明化合物治療風(fēng)濕性或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎癥時(shí)，還可與其他風(fēng)濕性或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎癥手段或其他治療劑聯(lián)用。例如與選自下組的一種或多種輔助活性成分聯(lián)用非甾體抗炎藥阿西美辛、雙氯芬酸鈉、布洛芬、吲哚美辛、美洛昔康、酮洛芬、舒林酸、金諾芳、萘普生、萘丁美酮、吡羅昔康、甲氯滅酸、氯滅酸、甲滅酸、吡洛芬、芬布芬、托美汀、氟滅酸、非諾芬、舒筋靈，尼美舒利、賽利克西、羅非克西、醋氯芬酸；慢作用抗風(fēng)濕藥甲氨蝶呤、金制劑、柳氮磺吡啶、青霉胺、氯喹、雷公藤、環(huán)孢素、環(huán)磷酰胺；或腎上腺皮質(zhì)激素糖皮質(zhì)激素，如可的松、潑尼松龍。
本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明找到一類(lèi)香豆草醚類(lèi)化合物，它能有效地預(yù)防和治療風(fēng)濕性和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎的作用。與現(xiàn)有治療藥物相比，本發(fā)明治療關(guān)節(jié)炎地效果更加顯著，且對(duì)人體毒副作用小。
本發(fā)明化合物可將其單獨(dú)或與其它藥物共同作為活性成分制成預(yù)防、治療關(guān)節(jié)炎的藥品或保健品。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠(chǎng)商所建議的條件。
實(shí)施例1旱蓮草(Eclipta alba)中提取化合物蟛蜞菊內(nèi)酯。
(1)浸泡及過(guò)濾旱蓮草全草300kg，完全浸入0.75噸乙醇(濃度95％)中→浸泡過(guò)夜(10小時(shí))粗濾，從而除去全草殘?jiān)?保留)凈濾(抽濾)或高速離心(10000rpm，10分鐘)，從而除去灰塵及細(xì)渣綠色澄清濾液。
(2)乙醇回收蒸餾回收乙醇，溫度不超過(guò)60攝氏度每回餾2小時(shí)，將反應(yīng)釜中的浸膏移出至收集桶中(浸膏呈深墨綠色，略粘稠狀)重復(fù)上述步驟，直至回收全部乙醇。
(3)二次浸泡及回餾回收乙醇0.75噸，重新浸泡全草殘?jiān)葸^(guò)夜，粗濾、凈濾及蒸餾回收要求同前。得到浸膏。
(4)乙酸乙酯萃取取上述浸膏50-80攝氏度(更佳地60-70攝氏度)加熱水振蕩混勻，熱水加量為浸膏體積的50倍，抽濾得到熱水相液。按照水相∶酯相體積比為1∶1的比例加入萃取用的乙酸乙酯，充分混勻震蕩后，靜置，待水相/酯相分層。移出乙酸乙酯層，50攝氏度真空減壓蒸餾至干燥，加入少量乙醇溶解，置于燒杯中于4攝氏度保存過(guò)夜，底部出現(xiàn)沉淀。減壓抽濾獲得沉淀，50攝氏度烘箱干燥，得到粗品。
(5)產(chǎn)品的分離精制取粗品5g，拌樣于10g 200～300目硅膠，進(jìn)行硅膠柱層析(200g，200～300目)，用石油醚-丙酮梯度洗脫，每100mL收集一次，分別得到不同極性部位，合并(TLC石油醚-丙酮1∶1，Rf＝1/3)的斑點(diǎn)。將合并的組份濃縮后，再拌樣于硅膠進(jìn)行柱層析，用二氯甲烷-丙酮梯度洗脫，每50mL收集一次，分別得到不同極性部位，合并(TLC二氯甲烷-丙酮3∶1，Rf＝1/6)的斑點(diǎn)。將合并的組份濃縮后，再拌樣于硅膠進(jìn)行柱層析，用甲苯-丙酮-甲酸梯度洗脫，每50mL收集一次，分別得到不同極性部位，合并(TLC甲苯-丙酮-甲酸10∶10∶1，Rf＝1/2)的斑點(diǎn)。將合并的組份濃縮后，再拌樣于硅膠進(jìn)行柱層析，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，每25mL收集一次，分別得到不同極性部位，合并(TLC二氯甲烷-甲醇20∶1，Rf＝1/6)的斑點(diǎn)。得到純度＞90％的產(chǎn)品，收率約1％。
(6)標(biāo)準(zhǔn)品精制將純度＞90％的樣品30mg溶于70％甲醇中，用Lichroprep RP-18(40～63μ)柱進(jìn)行反相洗脫，用TLC檢測(cè)，收集70％洗脫下來(lái)的樣品，合并得到純度＞98％的標(biāo)準(zhǔn)品。收率約90％。標(biāo)準(zhǔn)品的性狀、分子式、熔點(diǎn)和IR，EIMS，1HNMR，13CNMR峰的歸屬如下灰白色粉末，分子式C16H10O7，mp 315℃(分解)，UV λmax(MeOH，nm)211.5(4.65)，247(4.40)，304(4.01)(sh)，350(4.48)。IR(KBr)cm-13300，1715，1640，1620，1445，1415，1320，1205，1155，1070。EIMS m/z(％)314(M+，100)，313(22)，299([M-CH3]，28)，285(5)，271([M-CH3-CO]，8)，243([M-CH3-CO-CO]，28)，187(17)，69(42)。1HNMR(δ)7.23(s)，7.14(s)，6.58(d，J＝2.3Hz)，6.42(d，J＝2.3Hz)，3.90(s)13CNMR(δ)158.0(C-1)，101.1(C-2)，159.6(C-3)，95.6(C-4)，99.3(C-5)，161.1(C-6)，95.0(C-7)，155.5(C-8)，155.0(C-9)，104.7(C-10)，145.2(C-11)，144.3(C-12)，99.0(C-13)，114.0(C-14)，148.7(C-15)，55.7(C-16)。
綜合上述數(shù)據(jù)，表明獲得的化合物是具有式II的蟛蜞菊內(nèi)酯 實(shí)施例2化合物蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)小鼠二甲苯致耳片炎癥的抑制作用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，體重18-22g。
給藥方式腹腔注射給藥，蟛蜞菊內(nèi)酯的劑量分別為12.5mg/kg，25mg/kg，陰性對(duì)照組為0.5％ CMC，陽(yáng)性對(duì)照組布洛芬，劑量為25mg/kg。
實(shí)驗(yàn)方法按體重將動(dòng)物隨機(jī)分成4組，每組10只。小鼠連續(xù)給受試物4天，第4天給藥1小時(shí)后用50μl二甲苯均勻涂抹于小鼠右耳兩側(cè)，左耳不做處理。放置2小時(shí)后，小鼠脫臼處死，以8mm內(nèi)徑的打孔器取雙耳相同位置的耳片，稱(chēng)重。以小鼠左右耳片重量之差做為指標(biāo)，評(píng)價(jià)藥物對(duì)炎癥的影響。
結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1，說(shuō)明蟛蜞菊內(nèi)酯能對(duì)抗二甲苯致小鼠耳腫脹急性炎癥反應(yīng)。
表1 蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)二甲苯所致小鼠急性炎癥的影響。(mg，x±SD)

“**”表示p＜0.01實(shí)施例3式(I)化合物對(duì)大鼠角叉菜膠致足趾炎癥的抑制作用參照文獻(xiàn)(Wong et.al.”Wedelolactone and coumestan derivatives asnew antihepatotic and antiphlogistic principles.Arzneimittelforschung.1998 May 38(5)661-5；)的合成方法合成化合物1、2和3。

其中，化合物1R1＝R2＝H R3＝R4＝OH化合物2R1＝OH R2＝CH3R3＝R4＝OH化合物3R1＝OH R2＝CH3R3＝Cl R4＝OH
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar雄性大鼠，體重200g左右。
給藥方式腹腔注射給藥，化合物1、化合物2及化合物3的劑量分別為12mg/kg，陰性對(duì)照組為0.5％ CMC。陽(yáng)性對(duì)照組布洛芬，劑量為25mg/kg。
實(shí)驗(yàn)方法按體重將動(dòng)物隨機(jī)分成4組，每組10只。分別為陰性對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組，化合物1、化合物2及化合物3劑量組。每天給藥1次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后30min，于大鼠右后足趾腱膜下注入1％的角叉菜膠0.1ml，然后測(cè)定致炎后不同時(shí)間足腫脹的程度。
結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2?；衔?、化合物2及化合物3能抑制大鼠角叉菜膠性腫脹表2 式(I)化合物對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響(n＝10，x±SD)

“***”表示p＜0.001與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有極為顯著性差異。
“**”表示p＜0.01與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有非常顯著性差異。
實(shí)施例4化合物蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的作用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar雄性大鼠，體重150g左右給藥方式腹腔注射給藥，蟛蜞菊內(nèi)酯的劑量分別為0.25mg/kg，12.5mg/kg，用0.5％的CMC配制，氨甲喋呤的劑量為0.2mg/kg。
實(shí)驗(yàn)方法按體重將動(dòng)物隨機(jī)分成4組。適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后用于試驗(yàn)。每只大鼠左后足拓皮內(nèi)注射CFA乳液0.1ml致炎，給佐劑后第10天給受試藥蟛蜞菊內(nèi)酯和對(duì)照組，按5ml/kg體積腹腔注射給藥。連續(xù)給藥19天。從給佐劑當(dāng)天開(kāi)始，每天用游標(biāo)卡尺測(cè)定四支腳爪的厚度變化，毛細(xì)管放大測(cè)量裝置測(cè)量后爪體積變化。選取給藥后第5、10、15、19天的值做統(tǒng)計(jì)分析。
結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3-8和圖1-4?？梢?jiàn)典型的關(guān)節(jié)炎大鼠和治療前后的比較，說(shuō)明蟛蜞菊內(nèi)酯能對(duì)抗佐劑引起的關(guān)節(jié)炎。
(1)Wistar大鼠四只腳爪的厚度變化表3 Wistar大鼠給藥后第5、10、15、19天的左前爪厚度(mm，x±SD)

“**”表示p＜0.01與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有非常顯著性差異。
表4 Wistar大鼠給藥后第5、10、15、19天的右前爪厚度(mm，x±SD)

“**”表示p＜0.01與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有非常顯著性差異。
“*”表示p＜0.05與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有顯著性差異。
表5 Wistar大鼠給藥后第5、10、15、19天的左后爪厚度(mm，x±SD)

“*”表示p＜0.05與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有顯著性差異。
表6 Wistar大鼠給藥后第5、10、15、19天的右后爪厚度(mm，x±SD)

“**”表示p＜0.01與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有非常顯著性差異。
“*”表示p＜0.05與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有顯著性差異。
(2)Wistar大鼠兩只腳后爪的體積變化表7 Wistar大鼠給藥后第5、10、15、19天的左后爪體積變化(ml)

“**”表示p＜0.01與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有非常顯著性差異。
“*”表示p＜0.05與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有顯著性差異。
表8 Wistar大鼠給藥后第5、10、15、19天的右后爪體積變化(ml)

“**”表示p＜0.01與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有非常顯著性差異。
“*”表示p＜0.05與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有顯著性差異。
實(shí)施例5化合物蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)膠原誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar雄性大鼠，體重120g左右。
給藥方式腹腔注射給藥，蟛蜞菊內(nèi)酯的劑量分別為6，12mg/kg，陰性對(duì)照組為0.5％ CMC。
實(shí)驗(yàn)方法1)制備II型膠原，在4攝氏度中將新鮮小牛關(guān)節(jié)軟骨揭碎，用Tris-HCL2浸泡洗滌得殘?jiān)儆梦傅鞍酌赶?，取上清夜鹽析出膠原，過(guò)DE-52柱得到II型膠原蛋白。取冰醋酸溶解的II型膠原加入氟氏佐劑研磨乳化，除模型空白組外，每只動(dòng)物于尾根部、頸背部皮內(nèi)多點(diǎn)注入膠原共2.5mg/kg。7天后再于尾根部、頸背部皮內(nèi)注射膠原1.0mg/kg作加強(qiáng)免疫。按體重將動(dòng)物隨機(jī)分成4組，每組10只。分別為模型空白組，模型對(duì)照組，蟛蜞菊內(nèi)酯低、高兩劑量組。每鼠于第1次免疫后第10天開(kāi)始給藥，每天1次，連續(xù)3周，觀(guān)察藥物對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療作用及對(duì)遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響。從第1次免疫后第10天開(kāi)始，每隔10天觀(guān)察下述指標(biāo)A、關(guān)節(jié)炎表面溫度用數(shù)字體溫儀測(cè)量雙后肢踝關(guān)節(jié)表面溫度，計(jì)算造模后溫度差值。B、關(guān)節(jié)炎癥積分按文獻(xiàn)給大鼠計(jì)分，1分足爪或足墊單個(gè)區(qū)域炎癥，2分足爪或足墊兩個(gè)以上區(qū)域炎癥，3分整個(gè)肢體的輕度炎癥，4分引起關(guān)節(jié)強(qiáng)直、畸形、功能障礙的重度炎癥，每足最高積分為4分，每鼠的總積分為16分。C、遲發(fā)性超敏反映觀(guān)察第24天時(shí)每鼠右耳背部皮下注射含II型膠原10μl，用測(cè)厚儀測(cè)量注射前及注射48h右耳厚度。
結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表9-12，說(shuō)明蟛蜞菊內(nèi)酯能抑制膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎。
表9 蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)表面溫度的影響(x±SD)

“***”表示p＜0.001與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有極為顯著性差異。
“**”表示p＜0.01與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有非常顯著性差異。
“*”表示p＜0.05與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有顯著性差異。
表10 蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)II膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)大鼠炎癥積分的影響(x±SD)

“***”表示p＜0.001與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有極為顯著性差異。
“**”表示p＜0.01與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有非常顯著性差異。
“*”表示p＜0.05與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有顯著性差異。
表11 蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)II膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)大鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響(x±SD)

“***”表示p＜0.001與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有極為顯著性差異。
“**”表示p＜0.01與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有非常顯著性差異。
“*”表示p＜0.05與陰性對(duì)照組(0.5％ CMC)相比有顯著性差異。
實(shí)施例6片劑的制備利用常規(guī)技術(shù)，混合以下組分，然后直接壓片，制備片劑形式的藥物組合物，其配方如下

實(shí)施例7片劑的制備利用常規(guī)技術(shù)，混合以下組分，然后直接壓片，制備片劑形式的藥物組合物，其配方如下


實(shí)施例8片劑的制備利用常規(guī)技術(shù)，混合以下組分，然后直接壓片，制備片劑形式的藥物組合物，其配方如下

在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種式I的香豆草醚類(lèi)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含式I的香豆草醚類(lèi)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物的用途， 式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；其特征在于，被用于制備治療或預(yù)防關(guān)節(jié)炎病的藥物。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥學(xué)上可接受的鹽是式I化合物與選自下組的酸所形成的鹽氫氯酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來(lái)酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、或羥乙磺酸。
3.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的式I化合物或所述的提取物是從菊科植物中提取的。
4.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述的菊科植物選自鱧腸(Eclipta prostrata Linn)、蟛蜞菊(Wedelia chinensis)或旱蓮草(Ecliptaalba)。
5.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的式I化合物是具有式II的蟛蜞菊內(nèi)酯
6.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的關(guān)節(jié)炎病選自下組風(fēng)濕性或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎癥。
7.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述式I化合物是通過(guò)包括以下步驟的提取方法獲得的(a)用95±3％乙醇提取菊科植物的果實(shí)、葉或枝，得到乙醇浸膏；(b)取乙醇浸膏，用5-300倍于浸膏體積的50-80℃的水溶解，過(guò)濾去除雜質(zhì)，回收水相；(c)用乙酸乙酯萃取步驟(b)的水相，回收乙酸乙酯相；(d)對(duì)步驟(c)的乙酸乙酯相進(jìn)行干燥，得到沉淀物；(e)在硅膠柱上，用梯度為5∶1至1∶2的石油醚/丙酮洗脫劑進(jìn)行洗脫步驟(c)的沉淀物，收集石油醚∶丙酮為1∶1的洗脫組分；(f)對(duì)步驟(e)的洗脫組分進(jìn)行濃縮，得濃縮物；(g)在硅膠柱上，用梯度為5∶1至1∶2的二氯甲烷/丙酮洗脫劑洗脫步驟(f)的濃縮物，收集二氯甲烷∶丙酮為3∶1的洗脫組分；(h)在硅膠柱上，用梯度為20∶10∶1至5∶10∶1的甲苯-丙酮-甲酸洗脫劑洗脫步驟(g)的洗脫組分，收集甲苯∶丙酮∶甲酸為10∶10∶1的洗脫組分；(i)在硅膠柱上，用梯度為30∶1至1∶1的二氯甲烷/甲醇洗脫劑洗脫步驟(h)的洗脫組分，收集二氯甲烷∶甲醇為20∶1的洗脫組分；(j)用乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，得到式I的香豆草醚類(lèi)化合物沉淀。
8.一種制備香豆草醚類(lèi)化合物的方法，其特征在于，包括以下步驟(a)用95±3％乙醇提取菊科植物的果實(shí)、葉或枝，得到乙醇浸膏；(b)取乙醇浸膏，用5-300倍于浸膏體積的50-80℃的水溶解，過(guò)濾去除雜質(zhì)，回收水相；(c)用乙酸乙酯萃取步驟(b)的水相，回收乙酸乙酯相；(d)對(duì)步驟(c)的乙酸乙酯相進(jìn)行干燥，得到沉淀物；(e)在硅膠柱上，用梯度為5∶1至1∶2的石油醚/丙酮洗脫劑進(jìn)行洗脫步驟(c)的沉淀物，收集石油醚∶丙酮為1∶1的洗脫組分；(f)對(duì)步驟(e)的洗脫組分進(jìn)行濃縮，得濃縮物；(g)在硅膠柱上，用梯度為5∶1至1∶2的二氯甲烷/丙酮洗脫劑洗脫步驟(f)的濃縮物，收集二氯甲烷∶丙酮為3∶1的洗脫組分；(h)在硅膠柱上，用梯度為20∶10∶1至5∶10∶1的甲苯-丙酮-甲酸洗脫劑洗脫步驟(g)的洗脫組分，收集甲苯∶丙酮∶甲酸為10∶10∶1的洗脫組分；(i)在硅膠柱上，用梯度為30∶1至1∶1的二氯甲烷/甲醇洗脫劑洗脫步驟(h)的洗脫組分，收集二氯甲烷∶甲醇為20∶1的洗脫組分；(j)用乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，得到式I的香豆草醚類(lèi)化合物沉淀 式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基。
9.一種保健品，其特征在于，它含有0.05-50wt％的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；和食品上可接受的載體。
10.一種治療關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，其特征在于，它含有(a)含有作為主要活性成分的0.05-90wt％的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含式I的香豆草醚類(lèi)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物 式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；(b)選自下組的一種或多種輔助活性成分阿西美辛、雙氯芬酸鈉、布洛芬、吲哚美辛、美洛昔康、酮洛芬、舒林酸、金諾芳、萘普生、萘丁美酮、吡羅昔康、甲氯滅酸、氯滅酸、甲滅酸、吡洛芬、芬布芬、托美汀、氟滅酸、非諾芬、舒筋靈，尼美舒利、賽利克西、羅非克西、醋氯芬酸；甲氨蝶呤、金制劑、柳氮磺吡啶、青霉胺、氯喹、雷公藤、環(huán)孢素、環(huán)磷酰胺；或糖皮質(zhì)激素；和(c)藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從菊科植物中提取的香豆草醚類(lèi)化合物，含有該化合物的藥物組合物，及其在治療風(fēng)濕性或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎癥方面的應(yīng)用。體外和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明，這類(lèi)從菊科植物中提取的香豆草醚類(lèi)化合物可有效治療和改善風(fēng)濕性或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎癥的癥狀。
文檔編號(hào)A61K31/366GK1634037SQ20031012451
公開(kāi)日2005年7月6日 申請(qǐng)日期2003年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月30日
發(fā)明者俞強(qiáng), 張怡軒, 張婷, 周文亮 申請(qǐng)人:上海安普生物科技有限公司