專利名稱：埃坡霉素d+5－氟尿嘧啶/吉西他濱的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及高增殖性疾病如癌癥的治療。更特別地，本發(fā)明提供包括埃坡霉素(epothilone)和核苷類似物如5-氟尿嘧啶的組合的各種治療形式。本發(fā)明可應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和藥學(xué)領(lǐng)域。
背景埃坡霉素D是埃坡霉素中的一種，它可從纖維堆囊菌(Sorangiumcellulosum)的突變株中分離得到，或者從表達(dá)埃坡霉素聚酮化合物(polyketide)合成酶基因的異源宿主中分離得到，而且還已知它也能結(jié)合微管，結(jié)合位點(diǎn)與紫杉醇的結(jié)合位點(diǎn)相同。埃坡霉素D是12，13-脫氧埃坡霉素B，埃坡霉素B是纖維堆囊菌微生物的主要次級(jí)代謝物。已出版的報(bào)道顯示，埃坡霉素D在小鼠中具有顯著的抗腫瘤作用，并且在定性上它這方面的性質(zhì)顯著優(yōu)于如15-氮雜埃坡霉素B(Chou等，2000)。使用遺傳學(xué)修飾的微生物生產(chǎn)埃坡霉素D的方法(2000年4月28日提交的美國系列號(hào)09/560367中公開，現(xiàn)已獲得授權(quán)，本文將其納入作為參考)使得生產(chǎn)實(shí)用數(shù)量的這種化合物得以實(shí)現(xiàn)，從而可利用其穩(wěn)定化微管和誘導(dǎo)有絲分裂抑制的性能。這些重要的發(fā)展使得可以生產(chǎn)足夠用于臨床使用的的量的埃坡霉素D。重要的是，埃坡霉素D在紫杉醇敏感性細(xì)胞系和紫杉醇抗性細(xì)胞系中以及異源移植物(xenographs)中都具有抗腫瘤作用，雖然如上所述埃坡霉素D在結(jié)合微管的位點(diǎn)與紫杉醇的結(jié)合位點(diǎn)相同。
給予紫杉醇的實(shí)驗(yàn)已證明，需要優(yōu)化治療方案。因此，本發(fā)明尤其涉及合適的給予腫瘤患者埃坡霉素并結(jié)合其它抗癌劑的方案，以提供協(xié)同的增強(qiáng)的治療。
附圖簡述

圖1A-1C顯示了對(duì)于DLD-1細(xì)胞，埃坡霉素D和5-FU的組合的組合指數(shù)(“CI”)相對(duì)于效果圖。圖1A顯示了同時(shí)施用埃坡霉素D和5-FU于細(xì)胞的CI相對(duì)于效果圖。圖1B是施用所述組合的CI相對(duì)于效果圖，其中先使DLD-1細(xì)胞與埃坡霉素D培育24小時(shí)，對(duì)細(xì)胞施用5-FU，然后使細(xì)胞與埃坡霉素D-5-FU組合培育48小時(shí)。圖1C是施用所述組合的CI相對(duì)于效果圖，其中，先使DLD-1細(xì)胞與5-FU培育24小時(shí)，對(duì)細(xì)胞施用埃坡霉素D，然后使細(xì)胞與埃坡霉素D-5-FU組合培育48小時(shí)。
圖2A-2C顯示了對(duì)于HCT-15細(xì)胞，埃坡霉素D與5-FU的組合的組合指數(shù)(“CI”)相對(duì)于效果圖。圖2A顯示了同時(shí)施用埃坡霉素D和5-FU于細(xì)胞的CI相對(duì)于效果圖。圖2B是施用所述組合的CI相對(duì)于效果圖，其中先使HCT-15細(xì)胞與埃坡霉素D培育24小時(shí)，對(duì)細(xì)胞施用5-FU，然后使細(xì)胞與埃坡霉素D-5-FU組合培育48小時(shí)。圖2C是施用所述組合的CI相對(duì)于效果圖，其中，先使HCT-15細(xì)胞與5-FU培育24小時(shí)，對(duì)細(xì)胞施用埃坡霉素D，然后使細(xì)胞與埃坡霉素D-5-FU組合培育48小時(shí)。
圖3A-3C顯示了對(duì)于HCT-116細(xì)胞，埃坡霉素D與5-FU的組合的組合指數(shù)(“CI”)相對(duì)于效果圖。圖3A顯示了同時(shí)施用埃坡霉素D和5-FU于細(xì)胞的CI相對(duì)于效果圖。圖3B是施用所述組合的CI相對(duì)于效果圖，其中先使HCT-116細(xì)胞與埃坡霉素D培育24小時(shí)，對(duì)細(xì)胞施用5-FU，然后使細(xì)胞與埃坡霉素D-5-FU組合培育48小時(shí)。圖3C是施用所述組合的CI相對(duì)于效果圖，其中，先使HCT-116細(xì)胞與5-FU培育24小時(shí)，對(duì)細(xì)胞施用埃坡霉素D，然后使細(xì)胞與埃坡霉素D-5-FU組合培育48小時(shí)。
發(fā)明概述一方面，本發(fā)明提供了施用埃坡霉素與核苷類似物的組合物治療高增殖性疾病如癌癥的方法。在一些實(shí)施例中，組合物中使用的核苷類似物能單獨(dú)地或其它一種或多種非埃坡霉素類藥物一起有效地治療癌癥。在更特別的實(shí)施例中，核苷類似物選自氮胞苷、克立拉平(cladribine)、阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟達(dá)拉濱、5-氟尿嘧啶、吉西他濱(gemcitabine)、戊糖苷(pentostatin)、尿嘧啶氮芥和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶(以商品名XELODA銷售(Roche))。
另一方面，本發(fā)明提供了治療以高增殖性為特征的非癌疾病的方法。
另一方面，本發(fā)明提供了治療疾病的方法，包括以一定劑量方案給予這里所述的組合物，同時(shí)也描述在這里。在某些實(shí)施例中，埃坡霉素和核苷類似物被同時(shí)給予。在其它某些實(shí)施例中，依次給予埃坡霉素和核苷類似物。在某些實(shí)施例中，在給予核苷類似物之前先給予埃坡霉素。在其它某些實(shí)施例中，給予核苷類似物后給予埃坡霉素。另一方面，本發(fā)明提供了分別、同時(shí)或依次用于治療高增殖性疾病的一種或多種埃坡霉素和一種或多種核苷類似物的組合物。另一方面，本發(fā)明提供一種或多種埃坡霉素和一種或多種核苷類似物在制備用于一起治療高增殖性疾病的藥劑中的用途。另一方面，本發(fā)明提供一種或多種埃坡霉素在制備用于與一種或多種核苷類似物結(jié)合給予以治療高增殖性疾病的藥劑中的用途。
發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明提供使用埃坡霉素和核苷類似物的組合物治療高增殖性疾病如癌癥的方法。在一些實(shí)施例中，組合物中使用的核苷類似物能單獨(dú)地或其它一種或多種非埃坡霉素類藥物一起有效地治療癌癥。在更具體的實(shí)施例中，核苷類似物選自氮胞苷、克立拉平(cladribine)、阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟達(dá)拉濱、5-氟尿嘧啶、吉西他濱(gemcitabine)、戊糖苷(pentostatin)、尿嘧啶氮芥和5’-脫氧-5-氟、N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶(以商品名XELODA銷售(Roche))。這些核苷類似物在治療各種癌癥方面具有經(jīng)證實(shí)的療效記錄，如本領(lǐng)域所周知的。如下文所證明的，埃坡霉素D與各種核苷類似物在各種細(xì)胞系中起到協(xié)同的作用(即，兩種藥物的組合效果大于各藥物單獨(dú)使用時(shí)產(chǎn)生的效果)，表明了針對(duì)各種癌癥類型的增強(qiáng)的抗癌治療方法。
用于本發(fā)明的藥物組合物中的埃坡霉素可以是任何埃坡霉素，更特別的是任何具有有用的治療性能的埃坡霉素((Hoefle等1993；Nicolaou，等1998；Reichenbach，等1998；Danishefsky，等1999a；Danishefsky，等1999b；Hoefle，等1999；Nicolaou，等1999a；Nicolaou，等1999b；Vite，等1999a；Vite，等1999b；Vite，等1999d；c；Hoefle，等2000a；Hoefle，等2000b；Danishefsky，等2001a；Danishefsky，等200lb；Santi，等2001；Avery 2002；Danishefsky，等2002；Nicolaou，等2002a；Nicolaou，等2002b；Wessjohann和Scheid 2002；White，等2002)。可采用總化學(xué)合成法、部分化學(xué)合成法或化學(xué)生物合成法的任何組合以及有機(jī)化學(xué)、藥物化學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的材料制備這些埃坡霉素(Hoefle，等1993；Nicolaou，等1998；Reichenbach，等1998；Danishefsky，等1999a；Danishefsky，等1999b；Hoefle，等1999；Nicolaou，等1999a；Nicolaou，等1999b；Vite，等1999a；Vite，等1999b；Vite，等1999d；c；Hoefle，等2000a；Hoefle，等2000b；Danishefsky，等2001a；Danishefsky，等200lb；Santi，等2001；Avery 2002；Danishefsky，等2002；Nicolaou，等2002a；Nicolaou，等2002b；Wessjohann和Scheid 2002；White，等2002)。具有有用的治療性能的埃坡霉素的具體例子包括但不限于埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、4-脫甲基埃坡霉素D、氮雜埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素B、9，10-脫氫埃坡霉素D、9，10-脫氫-26-三氟-埃坡霉素D、11-羥基埃坡霉素D、19-唑基埃坡霉素D、10，11-脫氫-埃坡霉素D和19-唑基-10，11-脫氫-埃坡霉素D。
在一些實(shí)施例中，本發(fā)明的組合物包含埃坡霉素D和核苷類似物。在一些實(shí)施例中，組合物中使用的核苷類似物能單獨(dú)地或其它一種或多種非埃坡霉素類藥物一起有效地治療癌癥。在更特別的實(shí)施例中，核苷類似物選自氮胞苷、克立拉平、阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟達(dá)拉濱、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、戊糖苷、尿嘧啶氮芥和5’-脫氧-5-氟、N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶(以商品名XELODA銷售(Roche))。更特別的實(shí)施例包括將埃坡霉素D與5-氟尿嘧啶或5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶組合。
本發(fā)明的治療應(yīng)用本發(fā)明還包括治療各種疾病的方法，如但不限于高增殖性疾病，包括頭和頸的癌癥，包括頭部、頸部、鼻腔、鼻側(cè)竇、鼻咽、口腔、口咽、喉、下咽部、唾液腺和副神經(jīng)節(jié)的腫瘤；肝和膽的樹狀分支組織中的癌癥，尤其是肝細(xì)胞的癌瘤；腸癌，尤其是結(jié)腸直腸癌；治療性卵巢癌；小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌；乳腺癌肉瘤，如纖維肉瘤、惡性纖維性組織細(xì)胞瘤、胚胎橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、神經(jīng)纖維肉瘤、骨肉瘤、滑膜肉瘤、脂肉瘤和牙槽軟部肉瘤；中樞神經(jīng)系統(tǒng)的瘤，尤其是腦癌；淋巴瘤，如Hodgkin淋巴瘤、淋巴細(xì)胞與漿細(xì)胞增多性淋巴瘤(lymphoplasmacytoid lymphoma)、濾泡性淋巴瘤、粘膜相關(guān)性淋巴組織淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、B系大細(xì)胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤以及T細(xì)胞退行發(fā)育性大細(xì)胞淋巴瘤。臨床上，本文所述的方法的實(shí)施和組合物的使用將使癌生長的大小或數(shù)量和/或相關(guān)癥狀(適用時(shí))減少。從病理學(xué)上看，本文所述的方法的實(shí)施和組合物的實(shí)用將產(chǎn)生病理學(xué)相關(guān)的響應(yīng)，如抑制癌細(xì)胞增殖、減小癌或腫瘤大小、防止進(jìn)一步轉(zhuǎn)移和抑制腫瘤血管再生。治療這些疾病的方法包括給予對(duì)象治療有效量的本發(fā)明的組合物。需要時(shí)可重復(fù)該方法。
本發(fā)明的方法和組合物可在組合治療中使用。換言之，本發(fā)明的化合物和組合物可在給予一種或多種其它所需的治療或醫(yī)學(xué)方法的同時(shí)、先于或之后給予。在組合方案中，治療和步驟的特定組合將考慮該治療和/或步驟的相容性以及所需達(dá)到的治療效果。因而，本文所述的組合物可與其它治療形式如外科手術(shù)和/或放療相組合。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，還可進(jìn)一步包括藥劑或方案，以減輕由本發(fā)明化合物或組合物產(chǎn)生的潛在的副作用，如腹瀉、惡心和嘔吐?？墒褂每垢篂a劑如類阿片類藥劑(如可待因、地芬諾酯、地芬諾辛和洛爾拉米地(loeramide))、堿式水楊酸鉍和奧曲肽治療腹瀉?？墒褂每箛I吐劑如地塞米松、甲氧氯普胺、苯海拉明、勞拉西泮、奧丹西隆、甲哌氯丙嗪、吐來抗和屈大麻酚來治療惡心和嘔吐。
在本發(fā)明另一方面，治療以細(xì)胞高增殖性為特征的非癌疾病。這類疾病的闡述性例子包括但不限于萎縮性胃炎、炎性溶血性貧血、移植排斥、炎性中性白細(xì)胞減少、大皰性類天皰瘡(bullous pemphigoid)、乳糜泄(coelia disease)、脫髓鞘神經(jīng)病、皮肌炎、炎性腸病(結(jié)腸潰瘍和Crohn病)、多發(fā)性硬化、心肌炎、鼻息肉、慢性竇炎、尋常型天皰瘡、原發(fā)性腎小球腎炎、牛皮癬、外科手術(shù)性粘附(surgical adhesions)、狹窄或再狹窄、鞏膜炎、硬皮病、濕疹(包括特應(yīng)性皮炎、刺激性皮炎、過敏性皮炎)、牙周病(即牙周炎)、多囊性腎病和I型糖尿病。其它例子包括血管炎〔如巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎(顳動(dòng)脈炎、Takayasu動(dòng)脈炎)、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、過敏性動(dòng)脈炎和肉芽腫病(Churg-Strauss病)、多血管炎重疊綜合癥、超敏性血管炎(Henoeh-Schonlein紫癜)、血清病、藥物誘導(dǎo)的血管炎、感染性血管炎、腫瘤性血管炎、與結(jié)締組織疾病相關(guān)的血管炎、與補(bǔ)體系統(tǒng)的先天性缺陷相關(guān)的血管炎、Wegener肉芽腫病、Kawasaki病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的血管炎、Buerger病和系統(tǒng)性硬化)；胃腸道疾病(如胰腺炎、Crohn病、潰瘍性結(jié)腸炎、潰瘍性直腸炎、原發(fā)性硬化性膽管炎、包括特發(fā)性疾病(ideopathic)在內(nèi)的任何原因的良性狹窄(如膽管、食道、十二指腸、小腸或結(jié)腸的狹窄))；呼吸道疾病(如哮喘、超敏性肺炎、石棉沉著病、硅肺和其它形式的肺塵埃沉著病、慢性支氣管炎和慢性阻塞性氣道疾病)；鼻淚管疾病(如包括特發(fā)性疾病在內(nèi)的任何原因的狹窄)；和咽鼓管疾病(eustacheantube diseases) (如包括特發(fā)性疾病在內(nèi)的任何原因的狹窄)。
劑量水平和給藥另一方面，本發(fā)明提供了治療疾病的方法，包括以這里所述的某些劑量方案給予前述的組合物?？蓪Ｆ旅顾嘏c一種或多種前述的核苷類似物同時(shí)給予?；蛘撸稍诮o予埃坡霉素前先給予一種或多種核苷類似物。相反，也可在給予核苷類似物之前先給予埃坡霉素。此外，對(duì)于埃坡霉素與核苷類似物分別給予的那些實(shí)施例中，可延遲后一種藥物的給予，以使該組合治療產(chǎn)生更大的治療效果。藥學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域里的熟練技術(shù)人員對(duì)適用于測定不同時(shí)給予治療劑時(shí)所遇到的暫時(shí)因素的概念、方法以及材料都是熟知的。相關(guān)因素的例子可包括但不限于患者的晝夜節(jié)律、與所治療的疾病相關(guān)的細(xì)胞周期特征(如腫瘤細(xì)胞類型)和所使用的藥物的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
術(shù)語“埃坡霉素”在本文中指天然產(chǎn)生的埃坡霉素或其化學(xué)類似物或衍生物，如埃坡霉素D，或者選自以下的埃坡霉素埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、4-脫甲基埃坡霉素D、氮雜埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素B、9，10-脫氫埃坡霉素D、9，10-脫氫-26-三氟-埃坡霉素D、11-羥基埃坡霉素D、19-唑基埃坡霉素D、10，11-脫氫-埃坡霉素D、19-唑基-10，11-脫氫-埃坡霉素D、9，10-脫氫埃坡霉素B或D、以及26-三氟9，10脫氫埃坡霉素B或D。給予癌癥患者或以細(xì)胞增殖為特征的非癌疾病患者的劑量在約1mg/m2到約200mg/m2的范圍內(nèi)，可以大丸劑(以任何合適的給藥途徑，包括口服或靜脈給藥)或連續(xù)灌注(如l小時(shí)、3小時(shí)、6小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)或72小時(shí))的形式每周、每兩周或每三周根據(jù)需要給予。然而，應(yīng)理解，特定患者的具體劑量水平依賴各種因素。這些因素包括所使用的特定化合物的活性；對(duì)象的年齡、體重、總體健康情況、性別和飲食；給藥的時(shí)間和途徑以及藥物的排泄速率；治療中是否使用藥物組合；以及所治療的疾病的嚴(yán)重程度。
另一個(gè)實(shí)施例中，根據(jù)需要和耐受度，劑量水平為約10mg/m2到150mg/m2，優(yōu)選約為10mg/m2到約75mg/m2、更優(yōu)選為約15mg/m2到約50mg/m2，每三周一次。在另一個(gè)實(shí)施例中，根據(jù)需要和耐受度，劑量水平為約1mg/m2到約150mg/m2，優(yōu)選為約10mg/m2到約75mg/m2、更優(yōu)選為約25mg/m2到約50mg/m2，每兩周一次。在另一個(gè)實(shí)施例中，根據(jù)需要和耐受度，劑量水平為約1mg/m2到約100mg/m2，優(yōu)選為約5mg/m2到約50mg/m2、更優(yōu)選為約10mg/m2到約25mg/m2，每周一次。在另一個(gè)實(shí)施例中，根據(jù)需要和耐受度，劑量水平為約0.1mg/m2到約25mg/m2，優(yōu)選為約0.5mg/m2到約15mg/m2、更優(yōu)選為約1mg/m2到約10mg/m2，每天一次。
為了保證不超過毒性界限，對(duì)副作用進(jìn)行監(jiān)測，包括周邊神經(jīng)疾病(peripheral neuropathy)，該病表現(xiàn)為肢體麻木、頭昏眼花以及類似狀況。監(jiān)測應(yīng)當(dāng)在灌注后一些相關(guān)時(shí)間點(diǎn)開始；通常，劑量越低，治療和監(jiān)測的時(shí)間間隔越長。例如，每灌注的劑量水平為9-60mg/m2時(shí)，通常在第5天開始監(jiān)測，并持續(xù)到第15天；但是，在較高的劑量如90-120mg/m2，則應(yīng)當(dāng)在灌注結(jié)束的當(dāng)天開始。其它副作用包括惡心和嘔吐、疲乏、皮疹、脫發(fā)，以及生命指征的變化，如體位性低血壓。雖然使用這種藥物時(shí)通常不會(huì)出現(xiàn)骨髓抑制，但是仍應(yīng)該對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測。骨髓抑制表現(xiàn)為貧血、嗜中性白細(xì)胞減少、血小板減少以及類似狀況。
通常，藥物動(dòng)力學(xué)是良好的。藥物動(dòng)力學(xué)不是劑量依賴性的，而且AUC對(duì)劑量的依賴性在9-150mg/m2是線性的。埃坡霉素D的半衰期的平均值為9.6±2.2小時(shí)，分布的體積(Vz)為172±74升，表明具有良好的藥物滲透。這要比使用紫杉醇所獲得的平均值高些，后者是140±70升。與第一次灌注相比，第二次灌注的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)沒有發(fā)生改變。
可通過測量分裂間期細(xì)胞中的微管的集束來監(jiān)測該藥物的有效性。這被認(rèn)為是微管穩(wěn)定劑如紫杉醇或埃坡霉素的有效性的合理指征。可通過免疫熒光法或Western印跡容易地測量集束(bundle)的形成。在一個(gè)典型的測定中，從患者收集全血，分離出單核細(xì)胞(PBMC)，用于評(píng)估集束的形成。當(dāng)劑量為18mg/m2低時(shí)獲得充分量的集束形成，而該形成隨著劑量的增加而增加。在120mg/m2，大多數(shù)微管被集束化。
實(shí)施例下述實(shí)施例僅僅用于列舉本發(fā)明的某些方面，以幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員實(shí)施本發(fā)明，它們并不以任何方式限定本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1埃坡霉素D和5-氟尿嘧啶之間的協(xié)同作用的證明細(xì)胞系和試劑從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(Manassa，VA)獲得癌細(xì)胞系。將該細(xì)胞維持在含有10％胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基中。從Kosan Biosciences公司(Hayward，CA)的Process Science部門獲得埃坡霉素D。從Sigma購買5-氟尿嘧啶(“5-FU”)。將各化合物溶解在二甲亞砜(“DMSO”)中，埃坡霉素D的濃度約為10毫摩爾(10mM)，5FU的濃度約為50毫摩爾(50mM)。將溶液保存在-20℃，備用。
細(xì)胞存活能力試驗(yàn)和組合效果分析將上述細(xì)胞接種在96孔微滴定板中，每孔5000個(gè)細(xì)胞，進(jìn)行兩組平行實(shí)驗(yàn)。過夜，使細(xì)胞粘附到各孔上。將每種藥物的連續(xù)稀釋液加到各孔中，培育細(xì)胞72小時(shí)。使用與活細(xì)胞數(shù)量相關(guān)的CELLTITER 96 AQUEOUS ONESOLUTION CELL PROLIFERATION ASSAY(Promega，Madison，WI)測定各化合物的IC50。
對(duì)于藥物組合試驗(yàn)，將細(xì)胞接種到96孔板中(5000個(gè)細(xì)胞/孔)，進(jìn)行兩組平行實(shí)驗(yàn)。過夜培育后，用單獨(dú)的藥物或等價(jià)于其IC50值的比例的兩種藥物的組合物處理細(xì)胞。使用三個(gè)不同的處理方案。第一個(gè)處理方案是同時(shí)暴露于兩種藥物中72小時(shí)。第二個(gè)處理方案是，先使細(xì)胞暴露于埃坡霉素D中24小時(shí)，然后將5-FU加到細(xì)胞中；再培育細(xì)胞48小時(shí)。第三個(gè)處理方案是，先使細(xì)胞暴露于單獨(dú)的5-FU中24小時(shí)，接著加入埃坡霉素D 48小時(shí)。使用CELLTITER 96 AQUEOUS ONE SOLUTION CELL PROLIFERATION ASSAY(Promega，Madison，WI)測定各實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞的存活能力。
來自各組合分析的數(shù)據(jù)使用CALCUSYN軟件(Biosoft，Cambridge，UK)分析，其測定各組合指數(shù)(“CI”)值。
結(jié)果使用測定所檢測的三個(gè)細(xì)胞系中各個(gè)細(xì)胞系的各組合的組合指數(shù)(“CI”)值的CALCUSYN軟件(Biosoft，Cambridge，UK)分析從各組合分析實(shí)驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)。小于1的CI值表明在兩種藥物之間存在協(xié)同作用，大于1的CI值表明兩種藥物之間存在拮抗作用，等于1的CI值表明兩種藥物之間存在附加的作用。經(jīng)測定，埃坡霉素D和5-FU的組合對(duì)所有測試的細(xì)胞系都具有協(xié)同效果，包括結(jié)腸癌細(xì)胞系DLD-1、HCT15和HCT116，乳腺癌細(xì)胞系A(chǔ)U565、MCF-7、MDA-MB-231、MX-1、T74D和SKBr-3，以及對(duì)所研究的所有處理方案都具有協(xié)同作用(圖1-3)。這種協(xié)同效果在埃坡霉素D與5-氟尿嘧啶和5’-脫氧一5-氟尿嘧啶的組合中都觀察到。由于5’-脫氧-5-氟-N-〔(戊氧基)羰基〕胞嘧啶被代謝為5’-脫氧-5-氟尿嘧啶(已證明與埃坡霉素D具有協(xié)同作用)，因此可以預(yù)見5’-脫氧-5-氟-N-〔(戊氧基)羰基〕胞嘧啶也與埃坡霉素D具有協(xié)同作用。此外，初步的實(shí)驗(yàn)表明，埃坡霉素D能上調(diào)一些腫瘤細(xì)胞中胸苷磷酸化酶的生產(chǎn)，該酶是引起5’-脫氧-5-氟尿嘧啶代謝為5-氟尿嘧啶的原因。
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權(quán)利要求
1.一種治療高增殖性疾病的方法，所述方法包括給予需要該治療的患者一種或多種埃坡霉素與一種或多種核苷類似物的組合。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述一種或多種埃坡霉素的給予與一種或多種核苷類似物的給予是同時(shí)進(jìn)行的。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述埃坡霉素選自埃坡霉素B、埃坡霉素D、21-羥基埃坡霉素B、21-羥基埃坡霉素D、21-氨基埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素D、氮雜埃坡霉素B、氮雜埃坡霉素D、9，10-脫氫埃坡霉素B、9，10-脫氫埃坡霉素D、26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素B和26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素D。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述核苷類似物選自氮胞苷、克立拉平、阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟達(dá)拉濱、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、戊糖苷、尿嘧啶氮芥和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
5.如權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述埃坡霉素是埃坡霉素D，所述核苷類似物選自5-氟尿嘧啶和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
6.如權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述埃坡霉素的給予產(chǎn)生約1mg/m2和約200mg/m2之間的劑量。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，先給予一種或多種埃坡霉素，接著給予一種或多種核苷類似物。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述埃坡霉素選自埃坡霉素B、埃坡霉素D、21-羥基埃坡霉素B、21-羥基埃坡霉素D、21-氨基埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素D、氮雜埃坡霉素B、氮雜埃坡霉素D、9，10-脫氫埃坡霉素B、9，10-脫氫埃坡霉素D、26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素B和26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素D。
9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述核苷類似物選自氮胞苷、克立拉平、阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟達(dá)拉濱、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、戊糖苷、尿嘧啶氮芥和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
10.如權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述埃坡霉素是埃坡霉素D，所述核苷類似物選自5-氟尿嘧啶和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
11.如權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述埃坡霉素的給予產(chǎn)生約1mg/m2和約200mg/m2之間的劑量。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，先給予一種或多種核苷類似物，接著給予一種或多種埃坡霉素。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述埃坡霉素選自埃坡霉素B、埃坡霉素D、21-羥基埃坡霉素B、21-羥基埃坡霉素D、21-氨基埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素D、氮雜埃坡霉素B、氮雜埃坡霉素D、9，10-脫氫埃坡霉素B、9，10-脫氫埃坡霉素D、26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素B和26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素D。
14.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述核苷類似物選自氮胞苷、克立拉平、阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟達(dá)拉濱、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、戊糖苷、尿嘧啶氮芥和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
15.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述埃坡霉素是埃坡霉素D，所述核苷類似物選自5-氟尿嘧啶和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
16.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述埃坡霉素的給予產(chǎn)生約1mg/m2和約200mg/m2之間的劑量。
17.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述埃坡霉素的給予產(chǎn)生約1mg/m2和約200mg/m2之間的劑量。
18.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述高增殖性疾病是癌癥。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中，所述癌癥選自結(jié)腸直腸癌、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述癌癥是結(jié)腸直腸癌或乳腺癌。
21.一種組合物，它含有一種或多種埃坡霉素和一種或多種核苷類似物，分別、同時(shí)或依次用于高增殖性疾病的治療。
22.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中，所述埃坡霉素選自埃坡霉素B、埃坡霉素D、21-羥基埃坡霉素B、21-羥基埃坡霉素D、21-氨基埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素D、氮雜埃坡霉素B、氮雜埃坡霉素D、9，10-脫氫埃坡霉素B、9，10-脫氫埃坡霉素D、26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素B和26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素D。
23.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中，所述核苷類似物選自氮胞苷、克立拉平、阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟達(dá)拉濱、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、戊糖苷、尿嘧啶氮芥和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
24.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中，所述埃坡霉素是埃坡霉素D，所述核苷類似物選自5-氟尿嘧啶和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
25.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中，所述高增殖性疾病是癌癥。
26.如權(quán)利要求25所述的組合物，其中，所述癌癥選自結(jié)腸直腸癌、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌。
27.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中，所述治療涉及同時(shí)給予一種或多種埃坡霉素和一種或多種核苷類似物。
28.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中，所述治療涉及先給予一種或多種埃坡霉素，接著給予一種或多種核苷類似物。
29.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中，所述治療產(chǎn)生約1mg/m2和約200mg/m2之間劑量的一種或多種所述埃坡霉素。
30.一種或多種埃坡霉素和一種或多種核苷類似物在制備聯(lián)合用于治療高增殖性疾病的藥劑中的用途。
31.如權(quán)利要求30所述的用途，其中，所述埃坡霉素選自埃坡霉素B、埃坡霉素D、21-羥基埃坡霉素B、21-羥基埃坡霉素D、21-氨基埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素D、氮雜埃坡霉素B、氮雜埃坡霉素D、9，10-脫氫埃坡霉素B、9，10-脫氫埃坡霉素D、26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素B和26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素D。
32.如權(quán)利要求30所述的用途，其中，所述核苷類似物選自氮胞苷、克立拉平、阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟達(dá)拉濱、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、戊糖苷、尿嘧啶氮芥和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
33.如權(quán)利要求30所述的用途，其中，所述埃坡霉素是埃坡霉素D，所述核苷類似物選自5-氟尿嘧啶和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
34.如權(quán)利要求30所述的用途，其中，所述高增殖性疾病是癌癥。
35.如權(quán)利要求34所述的用途，其中，所述癌癥選自結(jié)腸直腸癌、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌。
36.如權(quán)利要求30所述的用途，其中，所述治療涉及同時(shí)給予一種或多種埃坡霉素和一種或多種核苷類似物。
37.如權(quán)利要求30所述的用途，其中，所述治療涉及先給予一種或多種埃坡霉素，接著給予一種或多種核苷類似物。
38.如權(quán)利要求30所述的用途，其中，所述治療產(chǎn)生約1mg/m2和約200mg/m2之間劑量的一種或多種所述埃坡霉素。
39.一種或多種埃坡霉素在制備用于與一種或多種核苷類似物聯(lián)合給予以用于治療高增殖性疾病的藥劑中的用途。
40.如權(quán)利要求39所述的用途，其中，所述埃坡霉素選自埃坡霉素B、埃坡霉素D、21-羥基埃坡霉素B、21-羥基埃坡霉素D、21-氨基埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素D、氮雜埃坡霉素B、氮雜埃坡霉素D、9，10-脫氫埃坡霉素B、9，10-脫氫埃坡霉素D、26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素B和26-三氟-9，10-脫氫埃坡霉素D。
41.如權(quán)利要求39所述的用途，其中，所述核苷類似物選自氮胞苷、克立拉平、阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟達(dá)拉濱、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、戊糖苷、尿嘧啶氮芥和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
42.如權(quán)利要求39所述的用途，其中，所述埃坡霉素是埃坡霉素D，所述核苷類似物選自5-氟尿嘧啶和5’-脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞嘧啶。
43.如權(quán)利要求39所述的用途，其中，所述高增殖性疾病是癌癥。
44.如權(quán)利要求43所述的用途，其中，所述癌癥選自結(jié)腸直腸癌、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌。
45.如權(quán)利要求39所述的用途，其中，所述治療涉及同時(shí)給予一種或多種埃坡霉素和一種或多種核苷類似物。
46.如權(quán)利要求39所述的用途，其中，所述治療涉及先給予一種或多種埃坡霉素，接著給予一種或多種核苷類似物。
47.如權(quán)利要求39所述的用途，其中，所述治療產(chǎn)生約1mg/m2和約200mg/m2之間劑量的一種或多種所述埃坡霉素。
全文摘要
使用一種或多種埃坡霉素和一種或多種核苷類似物的組合治療高增殖性疾病的方法和組合物。在一些實(shí)施例中，該組合含有埃坡霉素D和5－氟尿嘧啶或5’－脫氧－5－氟－N－[(戊氧基)羰基]－胞嘧啶。
文檔編號(hào)A61K31/513GK1703208SQ200380100932
公開日2005年11月30日 申請(qǐng)日期2003年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月9日
發(fā)明者周憶清, R·G·小約翰遜 申請(qǐng)人:高山生物科學(xué)股份有限公司