專(zhuān)利名稱(chēng)：血漿制劑或血清制劑及其制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及安全性高的人及動(dòng)物的血漿或血清及其制造方法。
背景技術(shù)：
人的血漿或血清及動(dòng)物的血漿或血清有潛在地混入病毒的可能性。因而，由于血漿、血清及以其為原料制造的血液制劑的使用，如果是人，就不能否定有感染愛(ài)滋病毒及各種肝炎病毒等危險(xiǎn)性高的病毒的可能性。
以前，提出了有關(guān)這些血液制劑使用的防止病毒感染的方法。例如作為使血液制劑中存在的病毒鈍化的方法，有公知的使用表面活性劑和亞甲藍(lán)的化學(xué)鈍化方法等?？墒遣徽撃欠N方法，由于蛋白質(zhì)活性降低，所用化學(xué)物質(zhì)的除去等，所以復(fù)雜的操作是必要的，另外，還有化學(xué)物質(zhì)殘留的缺點(diǎn)。
另一方面，利用膜去除病毒的方法，作為不使蛋白質(zhì)變性，也沒(méi)有實(shí)質(zhì)地使活性降低，提高對(duì)病毒的安全性的方法，與其他的方法相比是優(yōu)異的。例如在特開(kāi)昭61-16837號(hào)公報(bào)及特開(kāi)昭63-68176號(hào)公報(bào)中，記載了通過(guò)把血漿用具有特別性能的多孔質(zhì)中空絲處理，對(duì)于丙型肝炎病毒或愛(ài)滋病毒能確保高的安全性的方法。
同樣，在特開(kāi)平1-192368號(hào)公報(bào)及特開(kāi)平1-254205號(hào)公報(bào)中，公開(kāi)了使用再生性纖維素的過(guò)濾膜的過(guò)濾方法及其系統(tǒng)。它們中的任何一個(gè)均提出了根據(jù)病毒的大小分離病毒的方法。另一方面，在特開(kāi)平10-28581號(hào)公報(bào)中，公開(kāi)了在溶液的特殊條件下，使用孔徑大于病毒粒徑的膜去除病毒的方法。
另外，在特開(kāi)2000-334037號(hào)公報(bào)中，提出了著眼于包膜病毒和LDL(Low density lipoprotein低比重脂蛋白)結(jié)合，利用LDL去除用的膜除去病毒的方法。
可是，這些中的任一種方法均有缺點(diǎn)。上述專(zhuān)利文獻(xiàn)5及6是通過(guò)使病毒在特殊條件下凝集或者和其他的混合物結(jié)合，通過(guò)排除或吸附而除去的方法。這些方法存在能去除的病毒的種類(lèi)很有限及由于條件的變動(dòng)而使去除效果不確定的缺點(diǎn)。
另一方面，特開(kāi)昭61-16837號(hào)公報(bào)及特開(kāi)昭63-68176號(hào)公報(bào)是把病毒的粒徑和粒徑比病毒的粒徑小的蛋白質(zhì)根據(jù)其大小分離的方法。在該膜中，病毒的去除率、蛋白質(zhì)的透過(guò)性能都不能充分滿(mǎn)足。另一方面，特開(kāi)平1-192368號(hào)公報(bào)及特開(kāi)平1-254205號(hào)公報(bào)雖然針對(duì)病毒除去率是優(yōu)良的方法，但是在蛋白質(zhì)處理量上存在問(wèn)題，尚不能實(shí)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的課題是提供從有病毒污染可能性的血漿、血清中有效的去除病毒，并且工業(yè)可行的制造安全的血漿制劑、血清制劑的方法及由該方法制造的血漿制劑、血清制劑。
如上所述，使用膜不讓蛋白質(zhì)變性的同時(shí)提高對(duì)病毒的安全性的方法，一直以來(lái)都在被探討，可是，血漿、血清因?yàn)閵A雜的蛋白質(zhì)很多，并且含有大量的高分子量的有用蛋白質(zhì)，所以提供一種在確保有用蛋白質(zhì)透過(guò)性的同時(shí)，確實(shí)的去除重篤病毒的方法是困難的。
本發(fā)明人等，為了解決上述課題重復(fù)各種研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò)在使用病毒去除膜過(guò)濾作為原料的人或動(dòng)物的血漿前，導(dǎo)入除去白細(xì)胞的工序，有效的去除病毒是可能的，從而完成了本發(fā)明。
即、本發(fā)明涉及(1)人或動(dòng)物的血漿制劑或血清制劑的制造方法，是包括下述(a)工序及(b)工序的制造方法(a)從來(lái)自于人或動(dòng)物的全血中分離血漿，使血漿中的白細(xì)胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進(jìn)行使用病毒去除膜的過(guò)濾工序。
(2)人或動(dòng)物的血漿制劑或血清制劑的制造方法，是包括下述(a)工序及(b)工序的制造方法(a)從來(lái)自于人或動(dòng)物的全血中立即分離血漿，分離后立即使血漿中的白細(xì)胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進(jìn)行使用病毒去除膜的過(guò)濾工序。
(3)上述(1)或(2)中記載的制造方法，其特征在于(b)工序的病毒去除膜的平均孔徑是100nm以下。
(4)上述(1)～(3)中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中(a)工序是通過(guò)白細(xì)胞除去膜使白細(xì)胞減少的工序。
(5)上述(1)～(4)中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于(a)及(b)工序是在25～40℃的溫度環(huán)境下進(jìn)行的。
(6)上述(1)～(5)中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于(a)及(b)工序是在98kPa以下的壓力環(huán)境下進(jìn)行的。
(7)上述(1)～(6)中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于在(a)及(b)工序中，使之通過(guò)的血液量是100ml～500ml。
(8)上述(1)～(7)中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于(b)工序的處理時(shí)間是10-40分鐘。
(9)上述(1)～(8)中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于(b)工序中使用的病毒去除膜的平均孔徑是75nm以下。
(10)上述(1)～(9)中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于(b)工序中使用的病毒去除膜是平均孔徑為75nm的病毒去除膜和繼之以平均孔徑為35nm的病毒去除膜的組合。
(11)人或動(dòng)物的血漿制劑或血清制劑，是通過(guò)包括下述(a)及(b)工序的工序來(lái)制造的(a)從來(lái)自于人或動(dòng)物的全血中分離血漿，從血漿中使白細(xì)胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進(jìn)行使用病毒去除膜的過(guò)濾工序。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明是基于發(fā)現(xiàn)了在使用病毒去除膜過(guò)濾新鮮冷凍血漿的冷凍前的血漿之際，通過(guò)預(yù)先使白細(xì)胞減少，在確保有用物質(zhì)的透過(guò)性的同時(shí)，能夠確實(shí)有效的去除病毒而完成的。
另外，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了不從全血中進(jìn)行白細(xì)胞去除，而是通過(guò)從全血中首先分離血漿后再使白細(xì)胞減少，確實(shí)有效的去除病毒。
作為本發(fā)明的人或動(dòng)物的血漿制劑或血清制劑的制造原料的血漿或血清，優(yōu)選新鮮冷凍血漿的冷凍前的原料血漿。另外，由于冷凍前保存時(shí)間長(zhǎng)的血漿所含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等結(jié)合，在過(guò)濾操作之際，會(huì)引起透過(guò)率降低及透過(guò)率透過(guò)量的降低，所以?xún)?yōu)選冷凍前保存時(shí)間短的血漿。
在本發(fā)明中，減少白細(xì)胞的工序只要是能使白細(xì)胞減少的任何方法都可以。例如有超離心分離的方法等，可是優(yōu)選簡(jiǎn)單的使用白細(xì)胞除去膜的方法。白細(xì)胞除去膜只要是使白細(xì)胞減少的膜，雖然可以不問(wèn)材料等，可是，但還是優(yōu)選使用例如聚酯無(wú)紡布。
所謂本發(fā)明中的病毒去除膜，意味著是至少具有把病毒和蛋白質(zhì)根據(jù)其大小的不同而分離的功能的膜，不論是再生纖維素、聚乙烯、聚偏氟乙烯等材料，但再生纖維素由于對(duì)蛋白質(zhì)的吸附少而優(yōu)選。
另外，在現(xiàn)在使用的各種病毒去除膜中，表示其平均孔徑的方法和尺度尚未統(tǒng)一，但在本發(fā)明中所謂病毒去除膜的平均孔徑是把病毒去除膜的平均孔徑根據(jù)病毒去除性能作如下定義。
即、所謂平均孔徑Anm的病毒去除膜，意味著能有效去除具有粒徑Anm以上的粒徑的病毒。所謂有效去除，意味對(duì)數(shù)去除率(LRV＝-log10(過(guò)濾后病毒濃度/過(guò)濾前病毒濃度))為3以上，優(yōu)選4以上，更優(yōu)選6以上。例如所謂平均孔徑100nm的病毒去除膜，意味能有效去除粒徑100nm以上的病毒。
根據(jù)想去除的病毒的平均粒徑，來(lái)選擇使用的病毒去除膜。例如具有100nm平均孔徑的病毒去除膜，作為除去對(duì)象的病毒具體的是愛(ài)滋病毒(HIV，平均粒徑100-120nm)、假性狂犬病毒(PSR，平均粒徑120-200nm)、小鼠白血病病毒(MuLV，平均粒徑120-150nm)等。
為了從血漿或血清中除去愛(ài)滋病毒(HIV)，病毒去除膜的平均孔徑在100nm以下是有效的。再者，平均孔徑如果是75nm以下，因病毒混入的可能性更加降低而優(yōu)選，并且，也能去除含有100nm以下75nm以上粒子系的病毒，所得到的制劑的安全性增加。
蛋白質(zhì)的透過(guò)性越高越優(yōu)選，總蛋白質(zhì)透過(guò)率優(yōu)選70％以上，更優(yōu)選80％以上。
另外，病毒去除膜通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)目讖剑部扇コ≡砸蜃雍筒灰难獫{混入物。
本發(fā)明是由從新鮮血漿中(a)使用白細(xì)胞除去膜等減少白細(xì)胞的工序和(b)在(a)工序完成之后使用病毒去除膜過(guò)濾去除病毒的工序構(gòu)成的制造安全性高的血漿的方法，只要是能進(jìn)行這些工序的裝置和操作均可，可是如果在具有(i)溫度控制裝置及(ii)加壓的制造氣氛的可能控制的條件下進(jìn)行，操作結(jié)果的再現(xiàn)性可以被期待，過(guò)濾后的血漿的品質(zhì)因?yàn)榉€(wěn)定，所以?xún)?yōu)選。
根據(jù)溫度控制裝置((i))控制的溫度，只要是蛋白質(zhì)未變性的溫度不論幾度均可，但優(yōu)選25～45℃。過(guò)濾溫度如果小于25℃，血漿的粘度就會(huì)變高，因而過(guò)濾需要長(zhǎng)的處理時(shí)間，在實(shí)用的時(shí)間范圍內(nèi)處理變得困難。因此，溫度優(yōu)選25℃以上。另一方面，處理溫度如果比45℃高，蛋白質(zhì)的質(zhì)量有因?yàn)闊岫档偷目赡埽圆粌?yōu)選。更優(yōu)選30～37℃。
處理時(shí)的壓力如果在膜的耐壓以下，不論什么樣的值均可。如果是98KPa以下的壓力，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的變性少，所以?xún)?yōu)選。更優(yōu)選80KPa以下。
另外，本發(fā)明在把血漿從來(lái)自于人或動(dòng)物的全血中分離之際，希望是立即分離血漿。所謂“立即”就是由于血漿中的蛋白質(zhì)凝集等原因而維持膜的透過(guò)率不降低的時(shí)間，通常在4小時(shí)以?xún)?nèi)，優(yōu)選2小時(shí)以?xún)?nèi)，更優(yōu)選1小時(shí)以?xún)?nèi)，最優(yōu)選10分鐘以?xún)?nèi)。
1次處理血漿的容量沒(méi)有特別的限制，可是因?yàn)閺囊粋€(gè)個(gè)體所能采集的血漿通常是100～500ml，所以100～500ml通常是1次處理的容量。如果是100ml以下，作為1次處理量在經(jīng)濟(jì)上不合算而不優(yōu)選，如果是500ml以上，從一個(gè)個(gè)體上采集，對(duì)個(gè)體的負(fù)擔(dān)大。更優(yōu)選200～400ml。
另外，處理時(shí)間根據(jù)處理的血漿量和膜的面積等決定，優(yōu)選設(shè)定成40分鐘以下。從個(gè)體采血同時(shí)過(guò)濾的情況下，定為40分鐘以下，是因?yàn)閷?duì)個(gè)體的負(fù)擔(dān)小，同時(shí)考慮過(guò)長(zhǎng)的過(guò)濾時(shí)間會(huì)有制劑變質(zhì)的可能性。
再者，在如上操作中，把減少白細(xì)胞后的血漿用孔徑為75nm的病毒去除膜過(guò)濾，繼之以用孔徑為35nm的病毒去除膜過(guò)濾后，丙型肝炎病毒(HCV，平均粒徑30-60nm)等的危險(xiǎn)病毒被除去，能提供安全性更高的血漿制劑。
另外，也可以把預(yù)先自血漿中去除血纖維蛋白原的血清作為原料使用?；蛘咄ㄟ^(guò)在血漿制劑制造工序的任一工序中除去血纖維蛋白原等，同樣的能夠制造安全性高的血漿制劑。
實(shí)施例以下，舉實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例1使用Fresenius公司制造的血漿分離采取裝置AF104，把從獻(xiàn)血者的血液中分離的血漿立即用旭化成公司制造的白細(xì)胞除去膜[セパセル]過(guò)濾，再用旭化成公司制造的病毒去除膜[プラノバ]過(guò)濾。所使用的[プラノバ]是用膜面積為0.06m2、最初平均孔徑75nm的病毒去除膜過(guò)濾，繼之以35nm的病毒去除膜過(guò)濾。過(guò)濾使用JMS公司制造的泵OT-601，在一定的流速下進(jìn)行。過(guò)濾溫度控制在35℃±2℃。
30分鐘處理血漿量250ml，壓力是0.3～0.6kg/cm2。蛋白質(zhì)的透過(guò)量記載于表1。根據(jù)表1，在用平均孔徑為75nm的病毒去除膜過(guò)濾的情況下，蛋白質(zhì)的透過(guò)量是75％以上，即使是平均孔徑為35nm，球蛋白及清蛋白是90％以上，F(xiàn)-VIII也是50％以上，從而可知沒(méi)有實(shí)用上的問(wèn)題。
比較例1除不進(jìn)行實(shí)施例1中的白細(xì)胞除去膜[セパセル]過(guò)濾及平均孔徑為75nm的病毒去除膜[プラノバ]過(guò)濾以外，其余和實(shí)施例1同樣的進(jìn)行。用平均孔徑35nm、膜面積0.06m2的プラノバ過(guò)濾開(kāi)始后，在過(guò)濾了50ml得時(shí)，因?yàn)閴毫Τ^(guò)1.0kg/cm2，所以中止過(guò)濾。
表1

比較例2采集全血液后，加入抗凝固液，立即在4℃保存2小時(shí)。之后，用旭化成公司制造的白細(xì)胞去除膜[セパセル]去除白細(xì)胞，然后，通過(guò)離心分離來(lái)分離血漿。
分離的血漿采用和實(shí)施例1相同的條件，使用膜面積0.06m2、平均孔徑75nm的病毒去除膜[プラノバ]，在0.3kg/cm2的初期壓力下，開(kāi)始過(guò)濾，在過(guò)濾了70ml的時(shí)候，壓力超過(guò)1.0kg/cm2，中止過(guò)濾。
產(chǎn)業(yè)上的利用可能性根據(jù)本發(fā)明得到的血漿制劑或血清制劑，對(duì)應(yīng)于過(guò)濾的病毒去除膜的平均孔徑，病毒的安全性提高，所以根據(jù)使用目的，可直接用于輸血，或者作為冷凍新鮮血漿保存，進(jìn)而可作為輸血或分化制劑的原料血漿使用。
權(quán)利要求
1.人或動(dòng)物的血漿制劑或血清制劑的制造方法，是含有下述(a)工序及(b)工序的制造方法(a)從來(lái)自于人或動(dòng)物的全血中分離血漿，使血漿中的白細(xì)胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進(jìn)行使用病毒去除膜的過(guò)濾工序。
2.人或動(dòng)物的血漿制劑或血清制劑的制造方法，是包括含有下述(a)工序及(b)工序的制造方法(a)從來(lái)自于人或動(dòng)物的全血中立即分離血漿，分離后立即使血漿中的白細(xì)胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進(jìn)行使用病毒去除膜的過(guò)濾工序。
3.權(quán)利要求1或2中記載的制造方法，其特征在于(b)工序的病毒去除膜的平均孔徑是100nm以下。
4.權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)記載的制造方法，其中(a)工序是通過(guò)白細(xì)胞除去膜使白細(xì)胞減少的工序。
5.權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于(a)工序及(b)工序是在25～40℃的溫度環(huán)境下進(jìn)行的。
6.權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于(a)工序及(b)工序是在98kPa以下的壓力環(huán)境下進(jìn)行的。
7.權(quán)利要求1～6中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于在(a)工序及(b)工序中，使之通過(guò)的血液量是100ml～500ml。
8.權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于(b)工序的處理時(shí)間是40分鐘以下。
9.權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于(b)工序中使用的病毒去除膜的平均孔徑是75nm以下。
10.權(quán)利要求1～9中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征在于(b)工序中使用的病毒去除膜是平均孔徑為75nm的病毒去除膜和繼之以平均孔徑為35nm的病毒去除膜的組合。
11.人或動(dòng)物的血漿制劑或血清制劑，是通過(guò)包括下述(a)工序及(b)工序的工序來(lái)制造的(a)從來(lái)自于人或動(dòng)物的全血中分離血漿，從血漿中使白細(xì)胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進(jìn)行使用病毒去除膜的過(guò)濾工序。
全文摘要
本發(fā)明涉及病毒混入的可能性極低的血漿制劑、血清制劑及其制造方法。把血漿制劑、血清制劑的原料的血漿或血清在應(yīng)用病毒去除膜之前，通過(guò)除去血液中的夾雜物的白細(xì)胞，以防止網(wǎng)孔堵塞，高效率的制造病毒混入可能性極低的血漿制劑、血清制劑。因?yàn)殡y于發(fā)生網(wǎng)孔堵塞，所以隨著過(guò)濾的進(jìn)行也沒(méi)有必要采用高壓力，實(shí)現(xiàn)高效率的過(guò)濾是可能的。
文檔編號(hào)A61K35/16GK1705490SQ20038010153
公開(kāi)日2005年12月7日 申請(qǐng)日期2003年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月16日
發(fā)明者佐藤裕, 佐藤哲男, T·比爾努夫, M·拉多塞維奇, H·A·高布蘭 申請(qǐng)人:旭化成制藥株式會(huì)社