專利名稱：Dc－sign阻斷劑及其在預(yù)防或治療病毒感染中的用途的制作方法
發(fā)明
背景技術(shù)：
領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的疾病的方法、用途和組合物，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由一種效應(yīng)分子(effector molecule)與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合或相互作用所介導(dǎo)。效應(yīng)分子可以是外來(lái)生物體的分子。外來(lái)生物體可以是病毒。
本發(fā)明還涉及用于鑒別組合物的組合物和方法，其中所述組合物可用于治療哺乳動(dòng)物疾病，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由一種效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。
本發(fā)明還涉及將對(duì)象分子(subject molecule)導(dǎo)向表達(dá)DC-SIGN受體的細(xì)胞(例如樹突細(xì)胞)的組合物和方法。這些組合物和方法基于導(dǎo)向復(fù)合物，其中一或多種對(duì)象分子共價(jià)結(jié)合于一或多種DC-SIGN阻斷劑，且通過(guò)所述導(dǎo)向復(fù)合物的一或多個(gè)所述DC-SIGN阻斷劑與DC-SIGN結(jié)合，所述對(duì)象分子被導(dǎo)向表達(dá)DC-SIGN受體的細(xì)胞。
背景技術(shù)：
登革熱是一種急性發(fā)熱性熱帶疾病，且引起該病的病毒是一種蟲媒病毒，由蚊子傳播。該疾病的載體是伊蚊屬的蚊子，特別是埃及伊蚊(Aedesaegypti)，其最常將其幼蟲產(chǎn)于居住地或居住地周圍區(qū)域。引起疾病的病毒在1951被分離，已經(jīng)分類為4種不同的抗原類型(DEN1、DEN2、DEN3和DEN4)。該病毒屬于黃病毒科(Flaviviridae)的黃病毒屬(genusflavivirus)。
超過(guò)20億人口居住在疾病流行區(qū)，每年感染該病毒的人口被認(rèn)為超過(guò)1億。特別是登革熱，因該病求治住院的人數(shù)每年為500000，且每年導(dǎo)致數(shù)萬(wàn)人死亡，大部分是兒童。
潛伏5到8天后通常突然出現(xiàn)臨床癥狀，這些癥狀有，出現(xiàn)混合熱型(undifferentiated fever)(DF登革熱)，伴隨嚴(yán)重的頭痛、腰痛、肌肉和關(guān)節(jié)疼痛以及寒戰(zhàn)。自發(fā)熱期的第3到5天起，開始出現(xiàn)充血性斑丘疹，可持續(xù)3到4天(普通登革熱(conventional dengue))。
嚴(yán)重的感染可導(dǎo)致出現(xiàn)出血綜合征(DHF或登革出血熱)，特點(diǎn)是血管通透性升高和凝血異常。盡管大多數(shù)患者的病情通常在一周內(nèi)開始好轉(zhuǎn)，但如出現(xiàn)低血容量休克則可以是致命的(DSS或登革熱休克綜合征)。這些并發(fā)癥的發(fā)生可能是由于預(yù)先存在免疫力，這種免疫力是在初次感染一種不同的登革熱病毒(不同血清型)時(shí)而獲得的。具體而言，在感染登革熱病毒的個(gè)體中鑒定到兩種不同類型的血清學(xué)應(yīng)答從未發(fā)生過(guò)黃病毒感染且未接受過(guò)針對(duì)另一種黃病毒(例如黃熱病病毒、日本腦炎病毒)的免疫接種的個(gè)體會(huì)出現(xiàn)初次應(yīng)答(primary response)，特點(diǎn)是緩慢產(chǎn)生對(duì)引起感染的病毒具有特異性的抗體；曾經(jīng)發(fā)生過(guò)黃病毒(例如其他登革熱血清型)感染或接受過(guò)針對(duì)另一種黃病毒的免疫接種的個(gè)體會(huì)出現(xiàn)二次應(yīng)答(secondary response)，特點(diǎn)是迅速產(chǎn)生抗體。
感染因素是登革熱病毒，其屬于黃病毒科，黃熱病病毒和日本腦炎病毒也屬于黃病毒科(T.P.Monath等，(1996)Flaviviruses in B.N.Fields，D.M.Knipe，P.M.Howly等(eds.)“Fields Virology”PhiladelphiaLippincottRaven Press Publishers)。這些病毒具有單鏈正極性RNA(single-strandRNA with positive polarity)，其包含11000個(gè)核苷酸且編碼一種大約3400個(gè)氨基酸的多蛋白。通過(guò)在共翻譯和翻譯后的病毒和細(xì)胞內(nèi)蛋白酶裂解，其被分離成三種結(jié)構(gòu)蛋白和七種非結(jié)構(gòu)蛋白，即NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5。NS1非結(jié)構(gòu)蛋白由P.K.Russel等(J.Immunol.，(1970)，105，838-845)在1970年首次鑒定，并由G.W.Smith等(J.GenVirol.，(1985)，66，559-571)在1985年表征。這種糖蛋白在黃病毒屬中高度保守(T.P.Monath已經(jīng)提到)，特別是4種登革熱病毒血清型中，這種糖蛋白存在一種細(xì)胞內(nèi)形式和一種細(xì)胞外形式。這種細(xì)胞內(nèi)形式被認(rèn)為參與了病毒復(fù)制的早期(Hall R.A.等，J.Virol.(1999)，73，10272-10280；RiceC.M.等，J.Virol.，(1997)，71，291-298；Rice C.M.等，J.Virol.，(1996)，222，159-168；Rice C.M.等，J.Virol.，(1997)，71，9608-9617)。在被轉(zhuǎn)運(yùn)至質(zhì)膜之前，NS1蛋白發(fā)生二聚化。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中(而非昆蟲細(xì)胞)，NS1蛋白的一部分被釋放至細(xì)胞外介質(zhì)中，其可以首先是可溶性蛋白的形式，或者其次是微顆粒形式。如其為可溶性形式，蛋白的形式為寡聚體，特別是五聚體或六聚體(Crooks A.J.等J.Chrom.(1990)，502，59-68和J.Gen.Virol.(1994)，75，3453-3460和Glamand等，J.Virol.(1999)，73，6106-6110)。
目前沒有特異性治療，對(duì)于患者的處理均只是對(duì)癥治療。對(duì)于普通登革熱，治療基于施用止痛劑和退熱劑。對(duì)于DHF，治療包括輸液以補(bǔ)充血漿丟失，并糾正電解質(zhì)紊亂以及進(jìn)行利尿。
針對(duì)登革熱病毒尚無(wú)商品化的疫苗。另一方面，N.Bhamarapravati等以4種登革熱病毒血清型的減毒株進(jìn)行的保護(hù)性分析的結(jié)果令人不滿意(Dengue and Dengue haemorrhagic fever(1997)，367-377)。因此，預(yù)防僅僅是基于對(duì)付病毒的載體，其結(jié)合了破壞幼蟲和噴灑“殺成蟲劑”。
重度登革熱(DEN)病毒感染的發(fā)病機(jī)制還不完全清楚。在重度DEN病中觀察到明顯的T細(xì)胞激活。在登革出血熱和/或登革熱休克綜合征中，發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞因子和趨化因子升高。長(zhǎng)期以來(lái)一直認(rèn)為巨噬細(xì)胞是DEN發(fā)病機(jī)制的重要成分。如Palucka所強(qiáng)調(diào)的，與其他白細(xì)胞不同，未成熟的人樹突細(xì)胞(DC)傾向于容許DEN感染(Wu等，Nat.Med.6816，2000；綜述參見Palucka，Nat.Med 6748，2000)。不同于單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞，特異性抗體并不增強(qiáng)DEN病毒感染(Marovich等，JID Syrnp.Proc.6219，2001)。作為對(duì)DEN病毒感染的應(yīng)答，未成熟的DC可發(fā)生成熟。在DC感染后，觀察到表面標(biāo)記B7-1、B7-2、HLA-DR CD11b和DC83的上調(diào)以及細(xì)胞因子的產(chǎn)生。越來(lái)越多的證據(jù)表明DEN感染可誘導(dǎo)DC發(fā)生功能成熟。這種感染引起表面標(biāo)記B7-1、B7-2、HLA-DR CD11b和DC83的上調(diào)，并刺激產(chǎn)生細(xì)胞因子(Ho等，Immunology 1661499，2001)。暴露于DEN病毒的未成熟DC產(chǎn)生TNF-α，后者可干擾內(nèi)皮細(xì)胞的功能。
樹突細(xì)胞(DC)是專職的抗原呈遞細(xì)胞(APC)，由于其高表達(dá)MHC和共刺激分子，因此參與引起T細(xì)胞依賴性免疫應(yīng)答。髓性DC以未成熟的狀態(tài)分布于全身，其抗原攝取和加工能力很高。一旦被炎癥刺激或感染因素激活，DC則進(jìn)行成熟過(guò)程，遷移到淋巴器官，并獲得激活原初(naive)T淋巴細(xì)胞的能力。
一個(gè)重要的問(wèn)題是DEN病毒利用了哪一種DC特異性分子作為進(jìn)入的受體。人DC特異性粘附受體DC-SIGN(抓獲ICAM的非整聯(lián)蛋白(ICAM-grabbing non integrin)或CD-209)是一種II型膜內(nèi)在蛋白質(zhì)(integralprotein)，由于其表達(dá)主要局限于未成熟DC，因此特別受到關(guān)注。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)DC-SIGN是ICAM-3的配體，其能夠使得DC-T細(xì)胞之間發(fā)生短暫的相互作用，由此促進(jìn)初級(jí)免疫應(yīng)答(Geijtenbeek等，Nature 1353，2000)。DC-SIGN似乎是未成熟的來(lái)源于髓性單核細(xì)胞的DC在成熟過(guò)程中所表現(xiàn)出的遷移和T細(xì)胞相互作用能力的一種至關(guān)重要的介導(dǎo)因素。DC-SIGN表達(dá)是IL-4依賴性的且受到IFN-γ、IFN-γ、TGF-β、和抗炎劑的負(fù)調(diào)節(jié)(Relloso等，J.Immunol.1682634，2002)。DC-SIGN多態(tài)性還可解釋為何一些患者產(chǎn)生了保護(hù)性免疫而其他患者則不能。
DC-SIGN是一種C型凝集素，具有一個(gè)單一的碳水化合物識(shí)別結(jié)構(gòu)域，后者以鈣依賴型方式與具有甘露糖或半乳糖側(cè)鏈的蛋白發(fā)生相互作用(Drickammer，Curr.Opin.1mmunol.13585，1999)?，F(xiàn)在認(rèn)為DC-SIGN結(jié)合病毒糖蛋白上的高甘露糖寡糖，并由此可捕獲有包膜病毒(Feinberg等，Science 2942163，2001)。例如，DC-SIGN結(jié)合HIV包膜糖蛋白gp120(Geijtenbeek等，Cell，100587，2000)并由此介導(dǎo)完整的HIV快速內(nèi)化進(jìn)入一種非溶酶體結(jié)構(gòu)中(Kwon等，Immunity，16135，2002)。
目前需要開發(fā)可調(diào)變效應(yīng)分子與DC-SIGN受體(例如哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體)的特異性結(jié)合的方法和組合物。需要此類方法和組合物以便，例如預(yù)防和治療疾病，例如病毒感染，例如登革熱病毒感染。就此而言，需要鑒別參與病毒附著和/或融合的細(xì)胞蛋白。此外，還需要能夠特異性導(dǎo)向表達(dá)DC-SIGN受體的細(xì)胞的方法和組合物，例如樹突細(xì)胞或肺泡巨噬細(xì)胞，以利于治療或診斷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人尋求確定DC特異性粘附受體DC-SIGN是否能夠促進(jìn)DEN病毒感染人DC細(xì)胞。在此所提供的數(shù)據(jù)顯示，DC-SIGN特異性抗體對(duì)DEN-1病毒感染具有阻斷作用。這些結(jié)果確立了DC-SIGN的一種新的功能，即作為登革熱病毒結(jié)合蛋白，這很可能是通過(guò)與E糖蛋白的相互作用而實(shí)現(xiàn)的。由DC-SIGN介導(dǎo)的登革熱病毒感染DC的過(guò)程，為設(shè)計(jì)抗病毒化合物提供了一種新的機(jī)制。
因此，本發(fā)明鑒別了DC-SIGN是一種受體，其參與了HIV以外的病毒與樹突細(xì)胞的結(jié)合。本發(fā)明還提供了多種用于治療哺乳動(dòng)物疾病包括病毒感染的新的方法、用途和組合物。
本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物疾病的方法，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)，且其中所述方法包含給哺乳動(dòng)物施用其量足以充分調(diào)變效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑(modulator)，由此預(yù)防或治療該疾病。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物疾病的方法，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)，且其中所述方法包含給哺乳動(dòng)物施用其量足以充分抑制效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑，由此預(yù)防或治療該疾病。
在一些實(shí)施方案中，所述DC-SIGN阻斷劑是所述效應(yīng)分子的阻斷性衍生物。在另一些實(shí)施方案中，所述DC-SIGN阻斷劑是抗體。
在DC-SIGN阻斷劑是抗體的本發(fā)明的實(shí)施方案中包括其中所述抗體特異性結(jié)合DC-SIGN這樣的實(shí)施方案，以及其中所述抗體特異性結(jié)合效應(yīng)分子這樣的實(shí)施方案。
在一些實(shí)施方案中，所述DC-SIGN阻斷劑是結(jié)合DC-SIGN受體的甘露糖基化分子(mannosylated molecule)。甘露糖基化分子可以是甘露聚糖(mannan)。
本發(fā)明的進(jìn)一步的目的在于提供一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的病毒感染的方法，其中所述病毒感染至少部分由病毒效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)，其中所述方法包含給哺乳動(dòng)物施用其量足以充分調(diào)變病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑，由此預(yù)防或治療該病毒感染。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的病毒感染的方法，其中所述病毒感染至少部分由病毒效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)，其中所述方法包含給哺乳動(dòng)物施用其量足以充分抑制病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑，由此預(yù)防或治療該病毒感染。
在本發(fā)明的方法的一些實(shí)施方案中，所述DC-SIGN阻斷劑包含所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。在另一些實(shí)施方案中，所述DC-SIGN阻斷劑包含病毒包膜糖蛋白的結(jié)合部分。在另一些實(shí)施方案中，所述DC-SIGN阻斷劑是抗體?？贵w可特異性結(jié)合DC-SIGN或特異性結(jié)合病毒效應(yīng)分子。在其他的實(shí)施方案中，所述DC-SIGN阻斷劑是結(jié)合DC-SIGN受體的甘露糖基化分子。甘露糖基化分子可以是甘露聚糖。
在DC-SIGN阻斷劑是抗體的本發(fā)明的實(shí)施方案中包括以下一些實(shí)施方案，其中抗體是單克隆抗體；哺乳動(dòng)物是人且抗體是人源化的單克隆抗體；抗體特異性結(jié)合DC-SIGN；單克隆抗體是Mab 1B10.2.6；抗體特異性結(jié)合病毒效應(yīng)分子；以及抗體特異性結(jié)合所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。
在本發(fā)明的方法的進(jìn)一步的實(shí)施方案中，病毒效應(yīng)分子是病毒包膜的一種分子組分。在特定的實(shí)施方案中，病毒包膜的分子組分是包膜糖蛋白。
在本發(fā)明的方法的另外的實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑包含所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。在病毒效應(yīng)分子是病毒包膜的一種分子組分的本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所用的DC-SIGN阻斷劑包含所述包膜糖蛋白的結(jié)合部分。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面，病毒感染是黃病毒科病毒感染，且病毒效應(yīng)分子是黃病毒科病毒效應(yīng)分子。在一個(gè)更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，病毒感染是登革熱病毒感染，且病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒效應(yīng)分子。在進(jìn)一步優(yōu)選的方面，哺乳動(dòng)物是人。在一些實(shí)施方案中，登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒包膜的分子組分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，登革熱病毒包膜的分子組分是登革熱病毒包膜糖蛋白。在另一個(gè)實(shí)施方案中，登革熱病毒包膜糖蛋白是登革熱病毒E糖蛋白。
在病毒感染是登革熱病毒感染且病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒效應(yīng)分子的本發(fā)明的實(shí)施方案中，包括以下一些實(shí)施方案，其中DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分；DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分；DC-SIGN阻斷劑是重組產(chǎn)生的蛋白質(zhì)；以及DC-SIGN阻斷劑是抗體。在DC-SIGN阻斷劑是抗體的實(shí)施方案中，包括以下一些實(shí)施方案，其中抗體是單克隆抗體；哺乳動(dòng)物是人且單克隆抗體是人源化的；抗體特異性結(jié)合DC-SIGN；單克隆抗體是Mab1B10.2.6；以及抗體特異性結(jié)合登革熱病毒效應(yīng)分子。在抗體特異性結(jié)合登革熱病毒效應(yīng)分子的實(shí)施方案中包括其中登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒E糖蛋白的實(shí)施方案。
在又一方面本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防或治療人或猿的HIV或SIV感染的方法，其中所述方法包括給人或猿施用其量足以充分調(diào)變HIV或SIV與人或猿的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑，由此預(yù)防或治療HIV或SIV感染。
在另一方面本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防或治療人或猿的HIV或SIV感染的方法，其中所述方法包括給人或猿施用其量足以充分抑制HIV或SIV與人或猿的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑，由此預(yù)防或治療HIV或SIV感染。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，預(yù)防或治療的是人類HIV感染。
在又一方面本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的炎癥的方法，所述炎癥由哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的特異性結(jié)合所引起，其中所述方法包含給哺乳動(dòng)物施用其量足以充分調(diào)變哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與所述哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑，由此預(yù)防或治療炎癥。
在另一方面本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的炎癥的方法，所述炎癥由哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的特異性結(jié)合所引起，其中所述方法包含給哺乳動(dòng)物施用其量足以充分抑制哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與所述哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑，由此預(yù)防或治療炎癥。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物是人。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是-其量足以充分調(diào)變一種效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療一種哺乳動(dòng)物疾病的藥物中的用途，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由所述效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。
-其量足以充分抑制一種效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療一種哺乳動(dòng)物疾病的藥物中的用途，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由所述效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。
-其量足以調(diào)變病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的病毒感染的藥物中的用途，其中所述病毒感染至少部分由所述病毒效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。
-其量足以充分抑制病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的病毒感染的藥物中的用途，其中所述病毒感染至少部分由所述病毒效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。
-其量足以充分調(diào)變HIV或SIV與人或猿的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療所述人或猿的HIV或SIV感染的藥物中用途。
-其量足以充分抑制HIV或SIV與人或猿的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療所述人或猿的HIV或SIV感染的藥物中用途。
-其量足以充分調(diào)變哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與所述哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的炎癥的藥物中的用途，所述炎癥由哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的特異性結(jié)合引起。
-其量足以充分抑制哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的炎癥的藥物中的用途，所述炎癥由哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的特異性結(jié)合引起。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物是人。
為上述方法所列的優(yōu)選的實(shí)施方案適用于這些用途。
在又一方面本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含a)一種DC-SIGN調(diào)變劑，以及b)至少一種藥物學(xué)可接受的賦形劑；其中所述DC-SIGN調(diào)變劑以可達(dá)到的治療濃度存在于組合物中。
在另一方面本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含c)一種DC-SIGN阻斷劑，以及d)至少一種藥物學(xué)可接受的賦形劑；其中所述DC-SIGN阻斷劑以可達(dá)到的治療濃度存在于組合物中。
在藥物組合物的一些實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑是病毒效應(yīng)分子的衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒E糖蛋白。
在藥物組合物的其他一些實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑是抗體。DC-SIGN阻斷劑是抗體的實(shí)施方案包括以下一些實(shí)施方案，其中抗體是單克隆抗體；單克隆抗體是人源化的；抗體特異性結(jié)合DC-SIGN；單克隆抗體是Mab 1B10.2.6；抗體特異性結(jié)合病毒效應(yīng)分子；或抗體特異性結(jié)合所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。
在又一方面本發(fā)明提供了一種鑒別DC-SIGN調(diào)變劑的方法，其中所述方法包含a)通過(guò)以下步驟確定基線結(jié)合值i.提供包含DC-SIGN受體的培養(yǎng)細(xì)胞；ii.將所述培養(yǎng)細(xì)胞暴露于一種標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分一段足夠的時(shí)間以使結(jié)合達(dá)到平衡；以及iii.確定所述標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分與所述培養(yǎng)細(xì)胞的結(jié)合程度，由此確定基線結(jié)合值；b)通過(guò)以下步驟確定測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值i.提供包含DC-SIGN受體的培養(yǎng)細(xì)胞；ii.在存在測(cè)試物質(zhì)的情況下將所述培養(yǎng)細(xì)胞暴露于一種標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分一段足夠的時(shí)間以使結(jié)合達(dá)到平衡；以及iii.確定所述標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分與所述培養(yǎng)細(xì)胞的結(jié)合程度，由此確定測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值；以及c)通過(guò)將所述測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值除以所述基線結(jié)合值確定所述測(cè)試物質(zhì)的測(cè)試物質(zhì)結(jié)合調(diào)變值，其中代表所述測(cè)試物質(zhì)對(duì)所述病毒效應(yīng)分子與樹突細(xì)胞的結(jié)合產(chǎn)生大約95％的調(diào)變的測(cè)試物質(zhì)結(jié)合抑制值，表示所述測(cè)試物質(zhì)是充分調(diào)變病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的物質(zhì)。
在一個(gè)優(yōu)選的方面本發(fā)明提供了一種鑒別DC-SIGN阻斷劑的方法，其中所述方法包含a)通過(guò)以下步驟確定基線結(jié)合值i.提供包含DC-SIGN受體的培養(yǎng)細(xì)胞；ii.將所述培養(yǎng)細(xì)胞暴露于一種標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分一段足夠的時(shí)間以使結(jié)合達(dá)到平衡；以及iii.確定所述標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分與所述培養(yǎng)細(xì)胞的結(jié)合程度，由此確定基線結(jié)合值；b)通過(guò)以下步驟確定測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值i.提供包含DC-SIGN受體的培養(yǎng)細(xì)胞；ii.在存在測(cè)試物質(zhì)的情況下將所述培養(yǎng)細(xì)胞暴露于一種標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分一段足夠的時(shí)間以使結(jié)合達(dá)到平衡；以及iii.確定所述標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分與所述培養(yǎng)細(xì)胞的結(jié)合程度，由此確定測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值；以及c)通過(guò)將所述測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值除以所述基線結(jié)合值確定所述測(cè)試物質(zhì)的測(cè)試物質(zhì)結(jié)合抑制值，其中代表所述測(cè)試物質(zhì)對(duì)所述病毒效應(yīng)分子與樹突細(xì)胞的結(jié)合產(chǎn)生大約95％的抑制的測(cè)試物質(zhì)結(jié)合抑制值，表示所述測(cè)試物質(zhì)是充分抑制病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的物質(zhì)。
鑒別DC-SIGN阻斷劑的方法包括以下一些實(shí)施方案，其中培養(yǎng)的細(xì)胞是DC；培養(yǎng)的細(xì)胞是THP-1細(xì)胞；病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒效應(yīng)分子；以及登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒E糖蛋白。
在又一方面本發(fā)明提供了一種由上述鑒別DC-SIGN阻斷劑的方法所鑒別的分離的DC-SIGN阻斷劑。
在另一方面本發(fā)明提供了一種通過(guò)將表達(dá)DC-SIGN受體的細(xì)胞暴露于導(dǎo)向復(fù)合物而將對(duì)象分子導(dǎo)向所述細(xì)胞的方法，其中所述導(dǎo)向復(fù)合物包含對(duì)象分子和DC-SIGN阻斷劑，且其中所述暴露在使得所述DC-SIGN阻斷劑結(jié)合表達(dá)所述DC-SIGN受體的細(xì)胞上的DC-SIGN的條件下進(jìn)行，由此將所述對(duì)象分子導(dǎo)向表達(dá)DC-SIGN受體的細(xì)胞。
將對(duì)象分子導(dǎo)向表達(dá)DC-SIGN受體的細(xì)胞的方法包括以下一些實(shí)施方案，其中DC-SIGN阻斷劑是抗體；DC-SIGN阻斷劑是單克隆抗體；對(duì)象分子是蛋白；對(duì)象分子是抗體；對(duì)象分子是標(biāo)記的；暴露在體內(nèi)進(jìn)行；以及暴露在體外進(jìn)行。
以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更加詳細(xì)的描述，其中

圖1所示為DEN-1病毒對(duì)離體(ex-vivo)人DC的感染。將感染了DEN-1病毒株FGA/NA d1d(5Ap61FFU/細(xì)胞)的DC在感染后40h以3％PFA(溶于PBS)固定，并以0.1％Triton X-100(溶于PBS)增加其通透性。以抗DEN-1病毒HMAF通過(guò)直接免疫熒光觀察細(xì)胞內(nèi)DEN蛋白，且細(xì)胞核以Hoechst 33258染色。通過(guò)熒光觀察DEN病毒感染的DC(病毒抗原)和染色質(zhì)濃聚(凋亡細(xì)胞核)。顯示了凋亡DC(箭頭)。
圖2所示為感染了DEN-1病毒的DC的凋亡性DNA片段化。以間接免疫熒光如圖1的圖例所述檢測(cè)感染的DC中的DEN抗原(病毒抗原)并同時(shí)以TUNEL檢測(cè)了感染的DC凋亡(TUNEL)。通過(guò)熒光觀察TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞。顯示了TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞(箭頭)。低(A)或高(B)放大倍數(shù)。
圖3所示為抗DC-SIGN Mab 1B10.2.6阻斷DEN-1病毒感染人DC。感染前，將DC與抗DC-SIGN Mab 110(20μg/ml)或抗DEN E Mab 9D12(稀釋1∶50)(Desprs等Virology，196209-219，1993)孵育20分鐘。在存在Mab的情況下，以DEN-1病毒株FGA/NA d1d感染抗體處理的DC 2小時(shí)。如圖1的圖例所示以間接免疫熒光檢測(cè)病毒抗原。DC顯示了感染42小時(shí)后的感染的DC的百分?jǐn)?shù)。
圖4所示為THP-1和THP-1/DC-SIGN細(xì)胞的黃病毒感染。在感染40小時(shí)后，如圖1的圖例所示，以間接免疫熒光檢測(cè)感染了DEN-1病毒株FGA/NA did(5AP61FFU/細(xì)胞)、YF病毒株17D-204(50 VEROFFU/細(xì)胞)或WN病毒株IS-98-ST1(5AP61FFU/細(xì)胞)的細(xì)胞中的病毒抗原。以抗DEN-1病毒HMAF(AB抗DEN-1)、抗YF病毒HMAF(AB抗YF)或抗WN病毒HMAF(Ab抗WN)觀察病毒抗原。(A)感染40小時(shí)后的假感染的THP-1細(xì)胞(頂部)、或感染了黃病毒的THP-1細(xì)胞(底部)和感染的THP-1/DC細(xì)胞(底部)(m.o.i.，感染復(fù)數(shù)(multiplicity ofinfection))。(B)顯示了感染細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。數(shù)值代表一式三份檢測(cè)的平均值土SD。
圖5顯示了甘露聚糖、EDTA和抗體特異性DC-SIGN足夠DEN-1病毒感染THP-1/DC/SIGN細(xì)胞。感染前，將THP-1/DC/SIGN細(xì)胞與Mab9D12(稀釋1∶50)、Mab BD12.5(20μg/ml)、Mab 1B10.2.6(20μg/ml)、EDTA(5mM)、甘露聚糖(20μg/ml)、或假處理(對(duì)照)進(jìn)行孵育。在存在試劑的情況下，以DEN-1病毒株FGA/NA d1d(5 AP61FFU/細(xì)胞)感染處理的細(xì)胞2小時(shí)。如圖1的圖例所示以間接免疫熒光檢測(cè)病毒抗原。顯示了感染后48小時(shí)的感染細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。數(shù)值代表一式三份檢測(cè)的平均值±SD。
圖6所示為DEN-1病毒感染表達(dá)突變形式的DC-SIGN的THP-1細(xì)胞克隆。感染后40小時(shí)，如圖1的圖例所述，以間接免疫熒光檢測(cè)了感染了DEN-1病毒株FGH/NA did(5AP61FFU/細(xì)胞)的THP-1Δ35細(xì)胞克隆(THP-1/DC-SIGN突變35)中的病毒抗原。
圖7所示為感染了DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4病毒的表達(dá)DC-SIGN的THP-1細(xì)胞克隆(THP/DC-SIGN細(xì)胞)與THP-1細(xì)胞的比較。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明涉及一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物疾病的方法，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。該方法包含給哺乳動(dòng)物施用其量足以充分抑制效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑，由此預(yù)防或治療該疾病。
在本發(fā)明中，“哺乳動(dòng)物”指的是哺乳綱的任何動(dòng)物。哺乳動(dòng)物的非限制性實(shí)例包括人和猿；寵物，例如狗、貓、貂和豚鼠；家畜，例如豬、牛、馬、綿羊、山羊和駱駝；以及動(dòng)物園的動(dòng)物，例如熊、斑馬、大象以及水牛。哺乳動(dòng)物優(yōu)選是人。
在此，“疾病”是哺乳動(dòng)物的任何病理情況，其原因是，例如感染、遺傳缺陷、或暴露于環(huán)境中的物質(zhì)。本發(fā)明的方法和組合物可用于預(yù)防或治療具有如下特征的疾病，即所述疾病的至少一種癥狀至少部分由效應(yīng)分子與哺乳動(dòng)物的細(xì)胞如樹突細(xì)胞或肺泡巨噬細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。此類疾病的具體實(shí)例包括病毒感染?？赏ㄟ^(guò)本發(fā)明的方法進(jìn)行治療的病毒感染的一個(gè)具體實(shí)例是人的登革熱病毒感染。
人的“DC-SIGN受體”在遺傳學(xué)上指的是DC-SIGN(Curtis等，1992所述)和/或DC-SIGNR(Pohimann等，2001所述)、和/或DC-SIGN或DC-SIGNR的類似物。本領(lǐng)域人員能夠認(rèn)識(shí)到，在一些情況下，使用這些形式的DC-SIGN受體中的一種或另一種是優(yōu)選的或者甚至是必須的。本領(lǐng)域人員能夠認(rèn)識(shí)到可通過(guò)多種途徑獲得人DC-SIGN蛋白。例如，人DC-SIGN可純化自得自體內(nèi)來(lái)源的人樹突細(xì)胞，例如得自人的血液，或者純化自體外來(lái)源，例如在組織培養(yǎng)物中由人樹突細(xì)胞前體細(xì)胞產(chǎn)生的人樹突細(xì)胞。也可以采用重組體系表達(dá)人DC-SIGN，使用培養(yǎng)的樹突細(xì)胞作為宿主或者使用一種合適的異種(heterologous)細(xì)胞系，例如COS-7或HeLa細(xì)胞，或細(xì)菌如大腸桿菌。
對(duì)于非人類哺乳動(dòng)物，“DC-SIGN受體”指的是人DC-SIGN受體的同系物(homologues)。本領(lǐng)域人員能夠認(rèn)識(shí)到，可通過(guò)多種途徑中的任何一種來(lái)鑒別此類蛋白。這些途徑包括表達(dá)克隆、使用簡(jiǎn)并的(degenerate)寡核苷酸引物的聚合酶鏈反應(yīng)、以及低嚴(yán)格性篩選細(xì)菌或噬菌體文庫(kù)。
樹突細(xì)胞是淋巴或非淋巴組織中的形態(tài)學(xué)上相似的細(xì)胞類型的一種性質(zhì)不同的群體。樹突細(xì)胞的作用是作為抗原呈遞細(xì)胞，其有效地在外周組織中捕獲抗原并將其加工形成MHC肽復(fù)合物。樹突細(xì)胞還參與早期激活對(duì)各種分枝桿菌糖蛋白(包括CAM)具有特異性的非MHC限制性γδ和CDI限制性T細(xì)胞(Kaufmann，2001 and Moody，等，2000)。攝取抗原后，這些非成熟樹突細(xì)胞獲得自外周遷移至次級(jí)淋巴器官的T細(xì)胞區(qū)域的特殊能力。樹突細(xì)胞將來(lái)自外來(lái)細(xì)胞和感染性微生物的抗原轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)合于主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的膜蛋白上的短肽。這些MHC肽復(fù)合物在細(xì)胞內(nèi)形成但最終呈遞于質(zhì)膜上，在該處，這些MHC肽復(fù)合物作為抗原特異性T細(xì)胞受體(TCR)的配體。除了形成TCR配體，樹突細(xì)胞還進(jìn)行許多其他功能，這使得它們?cè)谌舾森h(huán)節(jié)上對(duì)免疫進(jìn)行控制(Steinman，2000)。
肺泡巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞是表達(dá)DC-SIGN受體的細(xì)胞的實(shí)例。內(nèi)皮細(xì)胞是表達(dá)DC-SIGNR的細(xì)胞的實(shí)例。
本領(lǐng)域人員能夠理解，樹突細(xì)胞可得自體內(nèi)來(lái)源如哺乳動(dòng)物的血液，或在適當(dāng)?shù)臈l件下通過(guò)培養(yǎng)樹突細(xì)胞前體細(xì)胞而在體外生長(zhǎng)。樹突細(xì)胞前體細(xì)胞包括按照實(shí)施例2制備的單核細(xì)胞。
“效應(yīng)分子”是任何特異性結(jié)合哺乳動(dòng)物細(xì)胞例如哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞或肺泡巨噬細(xì)胞上的DC-SIGN受體并由此介導(dǎo)與該哺乳動(dòng)物的疾病有關(guān)的癥狀的分子。效應(yīng)分子的實(shí)例是存在于病毒上的與哺乳動(dòng)物細(xì)胞的受體結(jié)合并由此促進(jìn)病毒進(jìn)入該哺乳動(dòng)物的細(xì)胞的配體。對(duì)于效應(yīng)分子是病毒上的配體的情況，所述效應(yīng)分子可稱為“病毒效應(yīng)分子”。此類配體的實(shí)例包括HIV的gp120和登革熱病毒的糖蛋白E，其結(jié)合細(xì)胞如人的樹突細(xì)胞或肺泡巨噬細(xì)胞上的DC-SIGN受體，對(duì)于登革熱病毒，可由此促進(jìn)病毒進(jìn)入表達(dá)DC-SIGN的細(xì)胞。因此登革熱病毒E糖蛋白是一種“登革熱病毒效應(yīng)分子”。其他類型的效應(yīng)分子是哺乳動(dòng)物的內(nèi)源性配體。此類配體包括結(jié)合于其他細(xì)胞表面的配體以及可溶性配體，這些配體可定位于特定組織的細(xì)胞外間隙或在全身循環(huán)。
“癥狀”是指待治療的疾病的任何病理表現(xiàn)。如果調(diào)變效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合(降低或升高)導(dǎo)致癥狀的發(fā)生或其嚴(yán)重程度或者兩種出現(xiàn)可檢測(cè)到的降低，則癥狀至少部分由效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合引起。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在降低效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合后，該癥狀消失或者被預(yù)防而沒有出現(xiàn)。
如果效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合沒有因存在無(wú)關(guān)分子(如胎牛血清)而被競(jìng)爭(zhēng)性抑制，但卻被DC-SIGN抗體(如1B10.2.6)和/或另外的效應(yīng)分子而抑制，則該效應(yīng)分子被稱為“特異性結(jié)合”細(xì)胞如待治療的哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞或肺泡巨噬細(xì)胞的DC-SIGN受體。
一種特異性結(jié)合細(xì)胞上的如待治療的哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞或肺泡巨噬細(xì)胞上的DC-SIGN受體的效應(yīng)分子的實(shí)例是登革熱病毒E糖蛋白。登革熱病毒表面上的E糖蛋白與DC-SIGN的結(jié)合不能被0.2％牛血清白蛋白抑制，如圖3和5所示。不過(guò)，這種結(jié)合被DC-SIGN特異性抗體所抑制，如圖3和5所示，或者被添加到培養(yǎng)基中的可溶性甘露聚糖抑制，如圖5所示，或者被添加到培養(yǎng)基中的EDTA抑制，如圖5所示。
本領(lǐng)域人員能夠理解，這些測(cè)試方法也可用于鑒別其他特異性結(jié)合細(xì)胞上例如待治療的哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的效應(yīng)分子。對(duì)于本領(lǐng)域人員來(lái)說(shuō)同樣顯而易見的是，可以使用其他的等同測(cè)試方法來(lái)代替實(shí)施例中具體提及的方法。
一旦已知效應(yīng)分子可特異性結(jié)合DC-SIGN受體，可簡(jiǎn)單地將該效應(yīng)分子與DC-SIGN的結(jié)合稱為“結(jié)合”。本領(lǐng)域人員還能夠理解，這種結(jié)合是特異性的。就此而言，可以討論對(duì)結(jié)合的“調(diào)變”。調(diào)變可包括“抑制”或“增強(qiáng)”。
“調(diào)變”指的是調(diào)節(jié)，包括誘導(dǎo)一種分子的特性發(fā)生變化。在本發(fā)明中，“調(diào)變”指的是調(diào)節(jié)并改變效應(yīng)分子與其受體的結(jié)合。這種調(diào)變的作用是抑制結(jié)合或者增強(qiáng)結(jié)合或者是施加其他調(diào)節(jié)控制。
在本發(fā)明中，對(duì)結(jié)合的“抑制”指的是降低在一段固定時(shí)間內(nèi)結(jié)合于DC-SIGN的效應(yīng)分子的總量。可通過(guò)提供DC-SIGN阻斷劑來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)效應(yīng)分子的結(jié)合的抑制。“DC-SIGN阻斷劑”是任何明顯抑制一種特定效應(yīng)分子以該效應(yīng)分子特異性結(jié)合DC-SIGN的濃度發(fā)生結(jié)合的分子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所用的DC-SIGN阻斷劑是一種特異性結(jié)合DC-SIGN的單克隆抗體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所用的DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分。
在本發(fā)明中，對(duì)結(jié)合的“增強(qiáng)”指的是增加在一段固定時(shí)間內(nèi)結(jié)合于DC-SIGN的效應(yīng)分子的總量?？赏ㄟ^(guò)提供DC-SIGN增強(qiáng)因子(enhancer)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)效應(yīng)分子的結(jié)合的增強(qiáng)。“DC-SIGN增強(qiáng)因子”是任何明顯增加一種特定效應(yīng)分子以該效應(yīng)分子特異性結(jié)合DC-SIGN的濃度發(fā)生結(jié)合的分子。
“結(jié)合部分”指的是分子的一個(gè)部分，當(dāng)該分子的其他部分被去除或修飾后，或者當(dāng)該部分(結(jié)合部分)被置于一個(gè)異種分子中時(shí)，該部分基本上保留結(jié)合一種第二分子的能力。例如，對(duì)于在此所定義的效應(yīng)分子，可以定義該效應(yīng)分子的結(jié)合部分。效應(yīng)分子的結(jié)合部分是該效應(yīng)分子的一個(gè)部分，當(dāng)該分子的其他部分被去除或修飾后，或者當(dāng)該部分(結(jié)合部分)被置于一個(gè)異種分子中時(shí)，該部分基本上保留結(jié)合DC-SIGN的能力。就此而言，本領(lǐng)域人員可基于所尋求的該結(jié)合部分的特殊特性而對(duì)“基本上保留”作出定義。
“基本上抑制”指的是高于80％的抑制、高于90％的抑制、高于95％的抑制、或高于99％的抑制。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，對(duì)結(jié)合的抑制達(dá)到了大約90％。
“抑制”是通過(guò)將存在DC-SIGN阻斷劑的情況下的效應(yīng)分子與DC-SIGN的結(jié)合程度與不存在DC-SIGN阻斷劑的情況下的效應(yīng)分子與DC-SIGN的結(jié)合程度進(jìn)行比較而測(cè)量的。然后確定存在DC-SIGN阻斷劑的結(jié)合程度與不存在DC-SIGN阻斷劑的結(jié)合程度的比例。從而抑制百分比與結(jié)合的量的降低成比例。例如，比例為0.1表示結(jié)合降低了90％。
術(shù)語(yǔ)“治療”指的是給已經(jīng)表現(xiàn)出一種疾病的至少一種癥狀的個(gè)體施用療法。這種個(gè)體包括被診斷為患有一種已知疾病的個(gè)體。
術(shù)語(yǔ)“預(yù)防”指的是給最終可能會(huì)患上疾病但目前尚未患病的個(gè)體(即那些需要預(yù)防措施的個(gè)體)施用預(yù)防性的療法。可根據(jù)已知與疾病的隨后發(fā)生有關(guān)聯(lián)的危險(xiǎn)因素來(lái)鑒別此類個(gè)體。
術(shù)語(yǔ)“治療效益(therapeutic benefit)”指的是疾病的至少一種癥狀的改善、疾病進(jìn)展的減慢(如表現(xiàn)為疾病的至少一種癥狀的嚴(yán)重程度進(jìn)展的減慢)、或者疾病的至少一種癥狀的進(jìn)展的停止。通過(guò)對(duì)施用DC-SIGN阻斷劑之前和之后的疾病癥狀進(jìn)行比較而確定治療效益。
所述“抗體”指的是可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)制備的任何抗體?？赏ㄟ^(guò)以包含全部或部分靶蛋白的肽免疫一種宿主動(dòng)物而獲得合適的抗體。合適的宿主動(dòng)物包括小鼠、大鼠、綿羊、山羊、倉(cāng)鼠、兔，等等。蛋白免疫原的來(lái)源可以是小鼠、人、大鼠、猴子、或微生物例如細(xì)菌或病毒，等等。宿主動(dòng)物通常與免疫原屬于不同的物種，例如，以人的蛋白免疫小鼠，等等。
免疫原可包含完整的蛋白或其片段或衍生物。優(yōu)選的免疫原包含一種對(duì)象蛋白質(zhì)的全部或部分，其中這些殘基含有翻譯后修飾，例如天然靶蛋白所具有的糖基化?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的多種途徑產(chǎn)生包含細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的免疫原，例如采用常規(guī)重組方法的克隆基因的表達(dá)、自腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)物上清液進(jìn)行分離，等等。
為了制備多克隆抗體，第一步是以靶蛋白免疫宿主細(xì)胞，其中靶蛋白優(yōu)選地是基本上純化的形式，包含低于大約1％的污染。免疫原可包含完整的靶蛋白或其片段或衍生物。為了增強(qiáng)宿主動(dòng)物的免疫應(yīng)答，可將靶蛋白與一種佐劑相結(jié)合，其中合適的佐劑包括明礬、右旋糖苷、硫酸鹽、大的聚合陰離子、油和水乳劑，如弗氏佐劑、弗氏完全佐劑，等等。靶蛋白也可以綴合合成的載體蛋白或合成的抗原?？擅庖叨喾N宿主以產(chǎn)生所述多克隆抗體。此類宿主包括兔、豚鼠、嚙齒動(dòng)物如小鼠、大鼠、綿羊、山羊，等等。通常通過(guò)皮內(nèi)途徑將靶蛋白施用于宿主，以一個(gè)初始劑量，隨后繼以一個(gè)或多個(gè)強(qiáng)化劑量，通常至少為2個(gè)。免疫接種后，收集宿主的血液，隨后將血清與血細(xì)胞分離?？刹捎靡阎姆椒ㄟM(jìn)一步分離所得到的抗血清中的Ig成分，例如銨鹽分級(jí)、DEAE層析，等等。
通過(guò)常規(guī)技術(shù)產(chǎn)生單克隆抗體。一般來(lái)說(shuō)，被免疫的宿主動(dòng)物的脾臟和/或淋巴結(jié)提供了漿細(xì)胞來(lái)源。通過(guò)將漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合使之永生化而產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞。采用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來(lái)篩選來(lái)自各個(gè)雜交瘤的培養(yǎng)物上清液以便鑒別那些產(chǎn)生具有所需特異性的抗體的雜交瘤。用于產(chǎn)生針對(duì)人的蛋白的單克隆抗體的合適的動(dòng)物包括小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠，等等。為了產(chǎn)生針對(duì)小鼠蛋白的抗體，動(dòng)物通常是倉(cāng)鼠、豚鼠、兔，等等?？赏ㄟ^(guò)常規(guī)技術(shù)自雜交瘤細(xì)胞上清液或腹水中純化抗體，例如通過(guò)親和層析，使用結(jié)合于不溶性支持物蛋白A瓊脂糖凝膠的本發(fā)明的蛋白質(zhì)，等等。
產(chǎn)生的抗體可以是單鏈，而不是通常的多聚體結(jié)構(gòu)。Jost等(1994)J.B.C.26926267-73和其他人描述了單鏈抗體。編碼重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的DNA序列被連接于一個(gè)間隔區(qū)，該間隔區(qū)編碼至少4個(gè)小中性氨基酸的氨基酸殘基，包括甘氨酸和/或絲氨酸。由這種融合體編碼的蛋白能夠組裝一種保留了原抗體的特異性和親和力的功能性可變區(qū)。
還提供了“人工”抗體，例如在體外產(chǎn)生并篩選的抗體和抗體片段。在一些實(shí)施方案中，此類抗體被展示于一種噬菌體或其他病毒顆粒的表面。在很多實(shí)施方案中，此類人工抗體是與病毒或噬菌體結(jié)構(gòu)蛋白形成的融合蛋白，所述結(jié)構(gòu)蛋白包括M13基因III蛋白。產(chǎn)生此類人工抗體的方法是本領(lǐng)域人員熟知的。例如參見美國(guó)專利No5,516,637；5,223,409；5,658,727；5,667,988；5,498,538；5,403,484；5,571,698；和5,625,033。
對(duì)于體內(nèi)使用，特別是用于注射入人體，需要降低抗體的抗原性。受者對(duì)阻斷劑的免疫應(yīng)答可能會(huì)潛在地縮短有效治療的時(shí)間。對(duì)抗體進(jìn)行人源化的方法是本領(lǐng)域已知的。人源化抗體可以是具有人免疫球蛋白恒定區(qū)基因轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物的產(chǎn)品(參見例如國(guó)際專利申請(qǐng)WO 90/10077和WO 90/04036)?；蛘撸璧目贵w可通過(guò)遺傳工程化產(chǎn)生，即通過(guò)重組DNA技術(shù)將CH1、CH2、CH3、鉸鏈結(jié)構(gòu)域和/或框架結(jié)構(gòu)域替換為相應(yīng)的人的序列(參見WO 92/02190)。
使用Ig cDNA用于構(gòu)建嵌合免疫球蛋白基因是本領(lǐng)域人員已知的(Liu等(1987)P.N.A.S.843439和(1987)J.Immunol.1393521)。自雜交瘤或其他產(chǎn)生抗體的細(xì)胞分離mRNA，并用于產(chǎn)生cDNA。所需的cDNA可通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)使用特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增(美國(guó)專利No4,683,195和4,683,202)。或者，構(gòu)建并篩選文庫(kù)以分離所需的序列。然后將編碼抗體可變區(qū)的DNA序列融合于人的恒定區(qū)序列。人恒定區(qū)基因的序列可見于Kabat等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，N.I.H.publication no.91-3242。人的C區(qū)基因可自已知的克隆容易地獲得?？筛鶕?jù)所需的效應(yīng)劑的功能來(lái)選擇同種型，所述功能例如為固定補(bǔ)體、或抗體依賴性細(xì)胞毒活性。優(yōu)選的同種型為IgG1、IgG3和IgG4。可使用人輕鏈恒定區(qū)κ或λ。然后，該嵌合的人源化抗體可通過(guò)常規(guī)方法表達(dá)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體可以是完全的人抗體。例如，可采用與人抗體相同的異基因抗體。異基因人抗體指的是與人抗體相同的抗體，即它們完全是人抗體，不同之處在于它們是通過(guò)非人類宿主產(chǎn)生的，所述非人類宿主已經(jīng)被遺傳工程化改變以表達(dá)人抗體。參見例如WO98/50433；WO 98，24893和WO 99/53049，將這些公開的內(nèi)容在此并入作為參考。
抗體片段如Fv、F(ab′)2和Fab可通過(guò)裂解完整的蛋白質(zhì)而制備，例如通過(guò)蛋白酶或者化學(xué)裂解?；蛘撸梢栽O(shè)計(jì)一種截短的基因。例如，編碼F(ab′)2片段的一部分的嵌合基因可包括編碼H鏈的CH1結(jié)構(gòu)域和鉸鏈區(qū)的DNA序列，其后是翻譯終止密碼子，以便產(chǎn)生截短的分子。
H和LJ區(qū)的共有序列可用于設(shè)計(jì)用作引物的寡核苷酸，以便在J區(qū)內(nèi)引入有用的限制性位點(diǎn)，用于隨后將V區(qū)片段連接于人C區(qū)片段?？赏ㄟ^(guò)定點(diǎn)誘變對(duì)C區(qū)cDNA進(jìn)行修飾，以便在人的序列中的類似位置處放置一個(gè)限制性位點(diǎn)。
表達(dá)載體包括質(zhì)粒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、YAC、來(lái)自EBV的附加體，等等。一種方便的載體是編碼具有完整功能性的人CH或CL免疫球蛋白序列的載體，其具有遺傳工程化的合適的限制性位點(diǎn)，因此可容易地插入并表達(dá)任何VH或VL序列。在此類載體中，加工通常發(fā)生在插入的J區(qū)內(nèi)的加工供體位點(diǎn)與在人C區(qū)之前的加工受體位點(diǎn)之間，以及還發(fā)生在位于人CH外顯子內(nèi)的加工區(qū)域。聚腺苷酸化以及轉(zhuǎn)錄終止出現(xiàn)于編碼區(qū)下游的天然染色體位點(diǎn)處。得到的嵌合抗體可連接于任何強(qiáng)啟動(dòng)子，包括逆轉(zhuǎn)錄LTR，例如SV-40早期啟動(dòng)子(Okayama等(1983)Mol.Cell.Bio.3280)、Rous肉瘤病毒LTR(Gorman等(1982)P.N.A.S.796777)、以及Moloney鼠白血病病毒LTR(Grosschedl等(1985)Cell 41885)；天然Ig啟動(dòng)子，等等。
可采用本發(fā)明進(jìn)行預(yù)防或治療的疾病的一個(gè)實(shí)例是登革熱病毒感染。實(shí)施例中提供的結(jié)果首次證實(shí)了DC-SIGN在登革熱病毒結(jié)合于人樹突細(xì)胞過(guò)程中所起的作用。
在此所述的結(jié)果，包括實(shí)施例中所述的結(jié)果，顯示高度純化的攜帶蚊N連接寡糖的DEN-1病毒能夠在人DC中復(fù)制并產(chǎn)生子代病毒。在感染了DEN-1病毒的DC中觀察到凋亡性細(xì)胞死亡。C-凝集素分子DC-SIGN表達(dá)于DC表面。在此描述的實(shí)驗(yàn)試圖確定DC特異性粘附受體DC-SIGN是否具有促進(jìn)DEN病毒感染人DC的能力。結(jié)果說(shuō)明，DC-SIGN特異性抗體對(duì)DEN-1病毒感染具有阻斷作用。因此鑒別出DC-SIGN的一種新的功能，即可能通過(guò)與E糖蛋白相互作用而作為DEN病毒的結(jié)合蛋白。DC-SIGN介導(dǎo)的DEN病毒對(duì)DC的感染的過(guò)程為設(shè)計(jì)抗病毒化合物提供了一種新的機(jī)制。
根據(jù)這些結(jié)果，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物疾病的方法，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)，且其中所述方法包含給哺乳動(dòng)物施用其量足以充分抑制效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑，由此預(yù)防或治療該疾病。
在一些實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑是所述效應(yīng)分子的阻斷性衍生物。在另一些實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑是抗體。
在DC-SIGN阻斷劑是抗體的本發(fā)明的實(shí)施方案中包括其中所述抗體特異性結(jié)合DC-SIGN這樣的實(shí)施方案，以及其中所述抗體特異性結(jié)合效應(yīng)分子這樣的實(shí)施方案。
在一些實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑是結(jié)合DC-SIGN受體的甘露糖基化分子。甘露糖基化分子可以是甘露聚糖。
本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的病毒感染的方法，其中所述病毒感染至少部分由病毒效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)，其中所述方法包含給哺乳動(dòng)物施用其量足以充分抑制病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑，由此預(yù)防或治療該病毒感染。
在本發(fā)明的方法的一些實(shí)施方案中，所述DC-SIGN阻斷劑包含所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。在另一些實(shí)施方案中，所述DC-SIGN阻斷劑包含病毒包膜糖蛋白的結(jié)合部分。在另一些實(shí)施方案中，所述DC-SIGN阻斷劑是抗體?？贵w可特異性結(jié)合DC-SIGN或特異性結(jié)合病毒效應(yīng)分子。在其他的實(shí)施方案中，所述DC-SIGN阻斷劑是結(jié)合DC-SIGN受體的甘露糖基化分子。甘露糖基化分子可以是甘露聚糖。
在DC-SIGN阻斷劑是抗體的本發(fā)明的實(shí)施方案中包括以下一些實(shí)施方案，其中抗體是單克隆抗體；哺乳動(dòng)物是人且抗體是人源化的單克隆抗體；抗體特異性結(jié)合DC-SIGN；單克隆抗體是Mab 1B10.2.6；抗體特異性結(jié)合病毒效應(yīng)分子；以及抗體特異性結(jié)合所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。
在本發(fā)明的方法的進(jìn)一步的實(shí)施方案中，病毒效應(yīng)分子是病毒包膜的一種分子組分。在特定的實(shí)施方案中，病毒包膜的分子組分是包膜糖蛋白。
在本發(fā)明的方法的另外的實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑包含所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。在病毒效應(yīng)分子是病毒包膜的一種分子組分的本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所用的DC-SIGN阻斷劑包含所述包膜糖蛋白的結(jié)合部分。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面，病毒感染是黃病毒科病毒感染，且病毒效應(yīng)分子是黃病毒科病毒效應(yīng)分子。在一個(gè)更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，病毒感染是登革熱病毒感染，且病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒效應(yīng)分子。在進(jìn)一步優(yōu)選的方面，哺乳動(dòng)物是人。在一些實(shí)施方案中，登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒包膜的分子組分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，登革熱病毒包膜的分子組分是登革熱病毒包膜糖蛋白。在另一個(gè)實(shí)施方案中，登革熱病毒包膜糖蛋白是登革熱病毒E糖蛋白。
在病毒感染是登革熱病毒感染且病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒效應(yīng)分子的本發(fā)明的實(shí)施方案中，包括以下一些實(shí)施方案，其中DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分；DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分；DC-SIGN阻斷劑是重組產(chǎn)生的蛋白質(zhì)；以及DC-SIGN阻斷劑是抗體。在DC-SIGN阻斷劑是抗體的實(shí)施方案中，包括以下一些實(shí)施方案，其中抗體是單克隆抗體；哺乳動(dòng)物是人且單克隆抗體是人源化的；抗體特異性結(jié)合DC-SIGN；單克隆抗體是Mab1B10.2.6；以及抗體特異性結(jié)合登革熱病毒效應(yīng)分子。在抗體特異性結(jié)合登革熱病毒效應(yīng)分子的實(shí)施方案中包括其中登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒E糖蛋白的實(shí)施方案。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，效應(yīng)分子與DC-SIGN阻斷劑是相同的。在一個(gè)第二優(yōu)選的實(shí)施方案中，效應(yīng)分子與DC-SIGN阻斷劑是不同的。
有趣的是登革熱病毒和HIV(以及SIV)均可以結(jié)合DC-SIGN。HIV與樹突細(xì)胞的結(jié)合由HIV的gp120糖蛋白與DC-SIGN的結(jié)合介導(dǎo)的。因此gp120是一種病毒效應(yīng)分子。因此本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防和治療HIV感染的方法。具體而言，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于預(yù)防或治療人或猿的HIV或SIV感染的方法。所述方法包括給人或猿施用其量足以充分抑制HIV或SIV與人或猿的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的相互作用的DC-SIGN阻斷劑，由此預(yù)防或治療HIV或SIV感染。
還認(rèn)為DC-SIGN在介導(dǎo)已知的在缺乏外來(lái)抗原情況下樹突細(xì)胞與T細(xì)胞之間發(fā)生的松散粘附中具有至關(guān)重要的作用。這種粘附被認(rèn)為是為TCR提供了必要的機(jī)會(huì)，以便掃描樹突細(xì)胞的表面并鑒別出現(xiàn)的極少量的TCR配體，且由此被這種配體激活。為此，樹突細(xì)胞上的DC-SIGN與T細(xì)胞上的ICAM-3之間的相互作用很可能對(duì)于T細(xì)胞活化和刺激的過(guò)程是至關(guān)重要的。這一模型提示，DC-SIGN-ICAM-3相互作用可能在介導(dǎo)和/或強(qiáng)化樹突細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞的其他刺激作用中發(fā)揮作用。
為此，通過(guò)阻斷ICAM-3效應(yīng)分子與DC-SIGN的相互作用，DC-SIGN阻斷劑可能是一種有效的抗炎劑。因此，本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的炎癥的方法，所述炎癥由哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的相互作用所引起。所述方法包含給哺乳動(dòng)物施用其量足以充分抑制哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與所述哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的相互作用的DC-SIGN阻斷劑，由此預(yù)防或治療炎癥。
本發(fā)明還提供了其量足以充分調(diào)變一種效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療一種哺乳動(dòng)物疾病的藥物中的用途，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由所述效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。
本發(fā)明還提供了其量足以充分抑制一種效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療一種哺乳動(dòng)物疾病的藥物中的用途，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由所述效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。在一些實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑是所述效應(yīng)分子的阻斷性衍生物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑是抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體特異性結(jié)合DC-SIGN。在另一些實(shí)施方案中，抗體特異性結(jié)合效應(yīng)分子。
在另一些實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑是結(jié)合DC-SIGN受體的甘露糖基化分子；甘露糖基化分子優(yōu)選地是甘露聚糖。
本發(fā)明還提供了其量足以充分調(diào)變病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的病毒感染的藥物中的用途，其中所述病毒感染至少部分由所述病毒效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。
本發(fā)明還提供了其量足以充分抑制病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的病毒感染的藥物中的用途，其中所述病毒感染至少部分由所述病毒效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。在該用途的一些實(shí)施方案中，病毒效應(yīng)分子是病毒包膜的一種分子組分。在另一些實(shí)施方案中，病毒包膜的分子組分是包膜糖蛋白。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑包含所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。在另一些實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑包含所述包膜糖蛋白的結(jié)合部分。在另一些實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑是抗體?？贵w是單克隆抗體。在另一些實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物是人且單克隆抗體是人源化的?？贵w可特異性結(jié)合DC-SIGN或特異性結(jié)合病毒效應(yīng)分子。在另外的實(shí)施方案中，抗體特異性結(jié)合所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。此外，DC-SIGN阻斷劑是結(jié)合DC-SIGN受體的甘露糖基化分子。甘露糖基化分子可以是甘露聚糖。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，病毒感染是黃病毒科病毒感染，且病毒效應(yīng)分子是黃病毒科病毒的效應(yīng)分子。在一個(gè)更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，黃病毒科病毒感染是登革熱病毒感染，且所述黃病毒科效應(yīng)分子是登革熱效應(yīng)分子。在一個(gè)更加優(yōu)選的方面，哺乳動(dòng)物是人。在一些實(shí)施方案中，登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒包膜的分子組分。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，登革熱病毒包膜的分子組分是登革熱病毒包膜糖蛋白。在另一個(gè)實(shí)施方案中，登革熱病毒包膜糖蛋白是登革熱病毒E糖蛋白。
在病毒感染是登革熱病毒感染且病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒效應(yīng)分子的所述用途的實(shí)施方案中，包括以下一些實(shí)施方案，其中DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分；DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分；DC-SIGN阻斷劑是重組產(chǎn)生的蛋白質(zhì)；以及DC-SIGN阻斷劑是抗體。在DC-SIGN阻斷劑是抗體的實(shí)施方案中，包括以下一些實(shí)施方案，其中抗體是單克隆抗體；哺乳動(dòng)物是人且單克隆抗體是人源化的；抗體特異性結(jié)合DC-SIGN；單克隆抗體是Mab1810.2.6；以及抗體特異性結(jié)合登革熱病毒效應(yīng)分子。在抗體特異性結(jié)合登革熱病毒效應(yīng)分子的實(shí)施方案中包括其中登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒E糖蛋白的實(shí)施方案。
本發(fā)明還提供了其量足以充分調(diào)變HIV或SIV與人或猿的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療所述人或猿的HIV或SIV感染的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供了其量足以充分抑制HIV或SIV與人或猿的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合或相互作用的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療所述人或猿的HIV或SIV感染的藥物中的用途。在一些實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，預(yù)防或治療的是人類HIV感染。
本發(fā)明還提供了其量足以充分調(diào)變哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療所述哺乳動(dòng)物的炎癥的藥物中的用途，所述炎癥由哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的特異性結(jié)合引起。
本發(fā)明還提供了其量足以充分抑制哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合或相互作用的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療所述哺乳動(dòng)物的炎癥的藥物中的用途，所述炎癥由哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的特異性結(jié)合引起。在一些實(shí)施方案中，DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分。在另一些實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物是人。
本發(fā)明還提供了藥物組合物，其包含DC-SIGN阻斷劑。此類組合物可適合于制藥用途和施用于患者。組合物通常含有可達(dá)到的治療濃度的純化的DC-SIGN阻斷劑和藥物學(xué)可接受的賦形劑。在此，“藥物學(xué)可接受的賦形劑”包括任何和所有的溶劑、分散介質(zhì)、涂層、抗細(xì)菌和抗真菌劑、等張和吸收延遲劑，等等，這些均適合于進(jìn)行藥物施用。這些介質(zhì)和制劑用于藥物活性物質(zhì)的用途是本領(lǐng)域已知的。組合物還可含有其他活性化合物，以提供補(bǔ)充的、額外的或增強(qiáng)的治療功能。藥物組合物還可與施用說(shuō)明一同被置于容器中、包裝中或分配器中。
本發(fā)明的藥物組合物被配制為適合其施用途徑。實(shí)現(xiàn)施用的方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。施用可以例如是靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下或通過(guò)吸入施用。
用于皮下施用的溶液或混懸液通常包括以下成分中的一或多種無(wú)菌稀釋劑，例如注射用水、鹽溶液、非揮發(fā)性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗細(xì)菌劑，例如苯甲醇或甲基對(duì)羥基苯甲酸酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩沖劑，例如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；以及用于調(diào)節(jié)滲透壓的制劑，例如氯化鈉或葡萄糖?？捎盟峄驂A調(diào)節(jié)pH，例如用鹽酸或氫氧化鈉。此類制劑可被封于安瓿中、一次性注射器中或者由玻璃或塑料制成的多劑量小瓶中。
適合于注射的藥物組合物包括無(wú)菌水溶液或分散劑以及可即時(shí)配制成可注射的溶液或分散劑的無(wú)菌粉劑。對(duì)于靜脈內(nèi)施用，合適的載體包括生理鹽水、無(wú)菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸緩沖鹽(PBS)。在所有情況中，組合物必須是無(wú)菌的且其流動(dòng)性應(yīng)該易于注射。其在制造和存貯條件下必須是穩(wěn)定的，且必須在保存過(guò)程中可抵抗微生物例如細(xì)菌和真菌的污染。載體可以是溶劑或分散劑，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇等)及其合適的混合物。可通過(guò)一些方法保持其具有適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性，例如通過(guò)使用涂層如卵磷脂，對(duì)于分散劑可通過(guò)維持其所需的顆粒大小，以及通過(guò)使用表面活性物質(zhì)?？赏ㄟ^(guò)使用各種抗細(xì)菌和抗真菌藥劑來(lái)預(yù)防微生物的作用，例如使用對(duì)羥基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗壞血酸、噻汞撒，等等。在很多情況下，可以在組合物中加入等張劑，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨醇、氯化鈉?？赏ㄟ^(guò)在組合物中加入一種延緩吸收的制劑例如單硬脂酸鋁和凝膠以延長(zhǎng)注射用組合物的吸收。
也可通過(guò)經(jīng)粘膜或經(jīng)皮方式進(jìn)行全身施用。對(duì)于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮施用，在制劑中可使用適合于所欲滲透的屏障的滲透劑。此類滲透劑是本領(lǐng)域所熟知的，且包括，例如對(duì)于經(jīng)粘膜施用，可使用去垢劑、膽汁酸鹽、梭鏈孢酸衍生物。可采用噴鼻劑或栓劑進(jìn)行經(jīng)粘膜施用。對(duì)于經(jīng)皮施用，本領(lǐng)域熟知可將活性化合物配制成油膏、藥膏、凝膠或乳劑。
對(duì)于吸入施用，可將含有DC-SIGN阻斷劑的組合物以氣溶膠的形式，使用壓力容器或分配器進(jìn)行輸送，所述壓力容器或分配器具有推進(jìn)物例如二氧化碳或具有霧化器。
在一個(gè)實(shí)施方案中，使用一些載體來(lái)制備純化的DC-SIGN阻斷劑，所述載體可防止其自肌體快速清除，例如控釋制劑，包括植入體和微包囊化的輸送系統(tǒng)。可使用生物可降解的、生物相容性的聚合物，例如乙烯-醋酸乙烯共聚物、聚酸酐、聚乙二醇酸(polyglycolic acid)、膠原、聚原酸酯以及聚乳酸。制備此類制劑的方法對(duì)于本領(lǐng)域人員來(lái)說(shuō)是顯而易見的。原料可購(gòu)自Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals，Inc。含有LAM的脂質(zhì)體混懸液也可用作藥物學(xué)可接受的載體，可根據(jù)本領(lǐng)域人員已知的方法進(jìn)行制備，如美國(guó)專利No.4,522,811所述。
可用于治療的藥劑，例如生長(zhǎng)因子(如BMP、TGF-β、FGF、IGF)、細(xì)胞因子(如白細(xì)胞介素和CDF)、抗生素和任何對(duì)待治療的疾病有益的其他治療劑，均可任選地加入進(jìn)來(lái)或者與DC-SIGN阻斷劑同時(shí)或序貫施用。
特別優(yōu)選的是以劑量單位形式配制組合物以易于施用和統(tǒng)一劑量。在此所用的劑量單位形式指的是物理學(xué)上分離的單位，適合用作治療對(duì)象的一致的劑量；各單位劑量含有一個(gè)預(yù)先確定量的活性化合物，該預(yù)先確定的量經(jīng)過(guò)計(jì)算可與所需的藥物學(xué)載體一同產(chǎn)生所需的治療作用。對(duì)本發(fā)明的劑量單位形式的說(shuō)明直接取決于活性化合物的獨(dú)特特性和要達(dá)到的具體治療效果，以及配方領(lǐng)域例如用于治療個(gè)體的活性化合物的固有限制。
可通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)藥物學(xué)方法來(lái)確定包DC-SIGN阻斷劑的組合物的毒性和治療效力，例如測(cè)定LD50(導(dǎo)致50％的群體死亡的劑量)和ED50(在50％的群體中產(chǎn)生治療效果的劑量)。毒性劑量與有效治療劑量之間的比例是治療指數(shù)，其可以表示為L(zhǎng)D50/ED50比。具有高治療指數(shù)的DC-SIGN阻斷劑是優(yōu)選的。
得自細(xì)胞培養(yǎng)分析和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)可用于制定用于人類的劑量范圍。此類化合物的劑量的范圍優(yōu)選地是包括具有極少毒性或沒有毒性的ED50的循環(huán)濃度。劑量可在此范圍內(nèi)根據(jù)所采用的劑量形式和采用的施用途徑而變化。對(duì)于任何用于本發(fā)明的DC-SIGN阻斷劑，最初可根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)分析來(lái)估計(jì)治療有效量。可在動(dòng)物模型中制定一個(gè)劑量，以便達(dá)到包括如細(xì)胞培養(yǎng)中所確定的IC50(即對(duì)癥狀達(dá)到最大抑制程度的一半的DC-SIGN阻斷劑的測(cè)試濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍?？赏ㄟ^(guò)例如高效液相色譜來(lái)測(cè)定血漿中的水平?？赏ㄟ^(guò)合適的生物檢測(cè)方法來(lái)監(jiān)測(cè)任何具體劑量的效果。
本發(fā)明的導(dǎo)向復(fù)合物包含至少一種共價(jià)結(jié)合于至少一種對(duì)象分子的DC-SIGN阻斷劑分子。在一些實(shí)施方案中，一種DC-SIGN阻斷劑分子共價(jià)結(jié)合于一種對(duì)象分子。在其他的實(shí)施方案中，一種以上的DC-SIGN阻斷劑分子可共價(jià)結(jié)合于一種對(duì)象分子。多種DC-SIGN阻斷劑分子可各自獨(dú)立地共價(jià)結(jié)合于所述對(duì)象分子；或者，所述一種以上DC-SIGN阻斷劑分子中的一種或多種可僅與一或多種其他DC-SIGN阻斷劑分子共價(jià)結(jié)合，其中至少一種阻斷劑分子本身共價(jià)結(jié)合于對(duì)象分子。
在其他實(shí)施方案中，多種對(duì)象分子共價(jià)結(jié)合于一種DC-SIGN阻斷劑分子。所述多種對(duì)象分子可各自獨(dú)立地共價(jià)結(jié)合于所述DC-SIGN阻斷劑分子；或者，所述一種以上對(duì)象分子中的一或多種可僅與一或多種其他對(duì)象分子共價(jià)結(jié)合，其中至少一種對(duì)象分子本身共價(jià)結(jié)合于DC-SIGN阻斷劑分子。
本發(fā)明的另外的實(shí)施方案使用一種以上的上述各種類型的DC-SIGN阻斷劑的組合物。對(duì)可以采用的此類組合物的多樣性沒有限制。本領(lǐng)域人員能夠理解，具體使用的組合物取決于多種因素，且因此對(duì)于本發(fā)明的各種用途可適當(dāng)選擇合適的組合物。
制備本發(fā)明的DC-SIGN阻斷劑的技術(shù)是生物化學(xué)領(lǐng)域人員所熟知的和廣泛采用的，因此不需要在此詳述。不過(guò)，本領(lǐng)域人員能夠認(rèn)識(shí)到可采用任何合適的技術(shù)在對(duì)象分子和DC-SIGN阻斷劑分子之間形成共價(jià)鍵。
對(duì)象分子可以是任何感興趣的分子。非限制性的實(shí)例包括小的有機(jī)分子、蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物和脂質(zhì)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠理解還可使用一或多種此類分子的任何已知的衍生物和復(fù)合物。
對(duì)于對(duì)象分子是蛋白、核酸、碳水化合物或脂質(zhì)的情況，所述對(duì)象分子可來(lái)自天然來(lái)源，即自包含該分子的生物體中純化獲得?；蛘?，所述對(duì)象分子可通過(guò)重組獲得，即來(lái)自已經(jīng)被遺傳工程化以便產(chǎn)生所選的對(duì)象分子的重組的生物體。在一些情況中，用于產(chǎn)生重組對(duì)象分子的重組生物體是這樣一種生物體，即如天然存在的該生物體一樣，其包含該對(duì)象分子的非重組形式。在其他一些情況中，所述對(duì)象分子是這樣一種分子，即該分子并非天然存在于該重組生物體中。
本發(fā)明的對(duì)象分子還包括小的有機(jī)分子、蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物和脂質(zhì)的衍生物。在此，衍生物是小的有機(jī)分子、蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物或脂質(zhì)的一種形式，其通過(guò)對(duì)所述的小的有機(jī)分子、蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物或脂質(zhì)上的一或多個(gè)化學(xué)反應(yīng)位點(diǎn)進(jìn)行添加、刪除或改變而自其天然狀態(tài)修飾產(chǎn)生。制備小的有機(jī)分子、蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物或脂質(zhì)的衍生物的技術(shù)是生物化學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的和廣泛采用的，因此無(wú)需在此詳述。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述對(duì)象分子是抗體。
對(duì)象分子還可以是具有抗原性的分子。如果一種分子能夠與免疫系統(tǒng)的抗原識(shí)別分子例如免疫球蛋白(抗體)或T細(xì)胞抗體受體發(fā)生特異性相互作用，那么該分子即具有抗原性。抗原性多肽含有至少約5個(gè)，且優(yōu)選地含有至少約10個(gè)氨基酸。分子的抗原性部分可以是對(duì)抗體或T細(xì)胞受體的識(shí)別而言是免疫顯性(immunodominant)的部分，或者其可以是用于產(chǎn)生針對(duì)所述分子的抗體的部分，其中將抗原性部分與用來(lái)進(jìn)行免疫接種的載體分子相綴合。具有抗原性的分子其本身不需要具有免疫原性，具有免疫原性是指能夠不需要載體即可引起免疫應(yīng)答。
本發(fā)明的導(dǎo)向復(fù)合物可在體內(nèi)或體外暴露于表達(dá)DC-SIGN的細(xì)胞，例如樹突細(xì)胞。體內(nèi)暴露通過(guò)施用藥物組合物中的導(dǎo)向復(fù)合物而實(shí)現(xiàn)，所述藥物組合物可以是在此所述的或者是本領(lǐng)域已知的任何合適的與之相當(dāng)?shù)呐渲破?。在這種情況中，導(dǎo)向復(fù)合物可在體內(nèi)結(jié)合于樹突細(xì)胞表面上的DC-SIGN。體外暴露可通過(guò)將體外生長(zhǎng)的樹突細(xì)胞暴露于導(dǎo)向復(fù)合物而發(fā)生。
以下實(shí)施例用于描述本發(fā)明的特定方面。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠認(rèn)識(shí)到，在不脫離本發(fā)明的本質(zhì)和范圍的條件下，可進(jìn)行多種修改和變化。此類修改和變化也被本發(fā)明的范圍所涵蓋。這些實(shí)施例不以任何方式對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限制。
實(shí)施例實(shí)施例1黃病毒按照以往所述(Despres等，Virology，196209，1993)自一種蚊子Aedespseudoscutellaris AP61單層細(xì)胞制備并純化DEN 1型(DEN-1)病毒株FGA/NA d1d(GenBank登記號(hào)AF226686)(Duarte dos Santos等，Virology，274292，2000)和西尼羅河(WN)病毒株IS-98-ST1(GenBank登記號(hào)AF481864)(Mashimo等，PNAS，9911311，2002)，并通過(guò)灶免疫檢測(cè)試驗(yàn)(focus immunodetection assay，F(xiàn)IA)在AP61上進(jìn)行病毒滴定。黃熱病(YF)病毒疫苗株17D-204(STAMARIL，Pasteur Vaccins，Lot E113)(GenBank登記號(hào)X07755)在單層的非洲綠猴腎臟VERO細(xì)胞中繁殖2次，進(jìn)行蔗糖梯度純化，并在VERO上進(jìn)行滴定。感染性滴度表示為灶形成單位(focus forming units，F(xiàn)FU)。
值得注意的是，F(xiàn)GA/NA d1d E糖蛋白在Asn67位置和Asn153位置具有2個(gè)N-連接的糖基化位點(diǎn)。在N-糖基化過(guò)程中，DEN-1糖蛋白E的兩個(gè)N-糖基化位點(diǎn)似乎均被利用(Courageot等，J.Virol.，74564-572)。IS-98-ST1 E糖蛋白具有單一的N-連接的糖基化位點(diǎn)，似乎被利用(Despres，個(gè)人交流)。而17D-204 E蛋白不發(fā)生N-糖基化。黃病毒M蛋白不發(fā)生糖基化。
在這些實(shí)驗(yàn)中，我們測(cè)試了DEN-1和WN病毒顆粒相關(guān)性E糖蛋白，其攜帶來(lái)自蚊子AP61細(xì)胞的成熟的N-連接的寡糖。
實(shí)施例2人單個(gè)核細(xì)胞來(lái)自純化的單個(gè)核細(xì)胞的人DC、人單核細(xì)胞細(xì)胞系THP-1(ATCCTIB 202)和表達(dá)DC-SIGN的細(xì)胞克隆THP/DC-SIGN均來(lái)自Ali Amara(Immunologie Virale)(Kwon等，Immunity，16135，2002)。未成熟DC、THP-1和THP/DC-SIGN細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI 1640培養(yǎng)基，添加了10％熱滅活的胎牛血清(FCS)(Eurobio，lot 160402)，2mM L-谷氨酰胺和抗生素Peni/Strepto。
將DC粘附于聚-L-賴氨酸(Sigma)包被的玻璃Lab-tek隔室(NalgeNunc International)(5×104細(xì)胞/cm2)。將THP-1和THP/DC-SIGN細(xì)胞粘附于聚-L-賴氨酸處理的玻璃Lab-tek隔室或聚賴氨酸處理的12孔板(5×104細(xì)胞/cm2)。
實(shí)施例3病毒感染以RPMI 1640將細(xì)胞洗滌一次，與高度純化的病毒在添加了0.2％牛血清白蛋白(BSA，pH7.5)(Sigma)的RPMI 1640中在37℃孵育2小時(shí)，并置于添加了2％FCS，2mM L-谷氨酰胺和抗生素Peni/Strepto的新鮮培養(yǎng)基中，在37℃放置40小時(shí)。
使用1∶50稀釋的DEN-1病毒特異性超免疫小鼠腹水液體(HMAF)9801( 株)、WN病毒特異性HMAF 0801(IS-98-ST1株)或YF病毒特異性HMAF 9803(FNV株)，通過(guò)以往所述的間接免疫熒光(Despres等，J.Virol.，704090，1996)，測(cè)定表達(dá)病毒抗原的細(xì)胞的百分比。
實(shí)施例4抑制DC-SIGN介導(dǎo)的病毒結(jié)合將粘附的細(xì)胞與EDTA(5mM)、甘露聚糖(20μg/ml)、抗DC-SIGNMab 1B10.2.6(20μg/ml)、抗LMCV Mab 12.5(同型對(duì)照，20μg/ml)、或DEN E特異性Mab 9D12(1∶50稀釋)在添加了0.2％BSA的RPMI 1640中在室溫孵育20分鐘，隨后與病毒結(jié)合2小時(shí)。感染后2小時(shí)，以RPMI 1640洗滌細(xì)胞，并與RMPI 1640 2％FCS孵育40小時(shí)。抗DC-SIGN Mab1B10.2.6和抗LMCV Mab 12.5來(lái)自Ali Amara。
實(shí)施例5免疫熒光分析簡(jiǎn)言之，將細(xì)胞以3％多聚甲醛(PFA)(溶于PBS)在室溫固定20分鐘，與50mM NH4Cl(溶于PBS)孵育20分鐘，并以0.1％Triton X-100(溶于PBS)處理5分鐘增加通透性。以抗黃病毒HMAF對(duì)細(xì)胞內(nèi)病毒抗原進(jìn)行染色。第二抗體是FITC綴合的山羊抗小鼠IgG(Sigma)。以熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
實(shí)施例6原位檢測(cè)凋亡細(xì)胞為了評(píng)估與凋亡性細(xì)胞死亡相關(guān)的細(xì)胞核改變，將玻片上的PFA固定的細(xì)胞以0.1μg/ml的溶于0.1％檸檬酸鹽緩沖液(pH6.0)的Hoechst33258(Sigma)在室溫處理10分鐘。如果細(xì)胞核出現(xiàn)邊緣和染色質(zhì)濃聚，則認(rèn)為細(xì)胞發(fā)生了凋亡。以熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
通過(guò)末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP切口末端標(biāo)記法(TUNEL)(Despres等，J.Virol.，704090，1996)檢測(cè)凋亡誘導(dǎo)的DNA斷裂。以鏈霉抗生物素-CYTM3綴合物(Jackson Immunoresearch)進(jìn)行TUNEL分析。以熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
實(shí)施例7DEN病毒離體感染人DC我們已經(jīng)測(cè)定了DEN-1病毒株FGA/NA d1d是否在DC中復(fù)制。如以抗DEN-1 HMAF進(jìn)行IF分析所測(cè)定的，需要接種5AP61FFU/細(xì)胞以便50％的人DC在40小時(shí)內(nèi)感染DEN病毒(圖1)。感染后48小時(shí)，在FGA/NA d1d感染的DC中聚集的感染性顆粒達(dá)到9(±3)×104APGlFFU/ml(50,000個(gè)DC)。不同于DEN-1病毒，感染后40小時(shí)，低于1％的DC感染了WN病毒株IS-98-ST1(m.o.i.為5 AP61FFU/細(xì)胞)或YF疫苗株(m.o.i.為50 VEROFFU/細(xì)胞)(數(shù)據(jù)未顯示)。
以DEN-1病毒株FGA/NA d1d感染DC，在感染40小時(shí)后引起凋亡，如通過(guò)Hoescht 33258染色(圖1)和TUNEL法(圖2A&B)所測(cè)定的。
實(shí)施例8抗DC-SIGN Mab 1B10.2.6阻斷DEN-1病毒感染DC我們分析了抗DC-SIGN特異性Mab 1B10.2.6對(duì)DEN-1病毒株FGA/NA d1d的感染性的影響。圖3說(shuō)明，如IF法所測(cè)定的，20μg/ml的Mab 1B10.2.6阻斷了FGA/NA d1d對(duì)DC細(xì)胞的感染。作為陽(yáng)性對(duì)照，抗E Mab 9D12使得DEN-1病毒的感染性降低了70％。以Mab 1B10.2.6處理的感染了FGA/NA d1d的DC產(chǎn)生的感染性顆粒極低(＜5AP61FFU/ml)。
實(shí)施例9DEN病毒感染人單核細(xì)胞THP-1和THP/DC-SIGN1.DC-SIGN和DEN病毒之間的特異性相互作用我們進(jìn)一步研究了DC-SIGN和DEN病毒之間的相互作用的特異性。為此，首先以DEN-1病毒株FGA/NA d1d感染人單核THP-1細(xì)胞。在m.o.i.為5AP61FFU/細(xì)胞時(shí)，如IF分析所測(cè)定的，低于1％的THP-1呈現(xiàn)DEN抗原陽(yáng)性(圖4A&B)。類似地，YF病毒疫苗株17D-204(m.o.i.為50 VEROFFU/細(xì)胞)未能在THP-1細(xì)胞株復(fù)制(圖4A&B)。而需要m.o.i為5 AP61 FFU/細(xì)胞以使得大約70％的THP-1細(xì)胞感染W(wǎng)N病毒株IS-98-ST1(圖4A&B)。
2.DC-SIGN在DEN-1病毒對(duì)THP-1的感染性中的作用為了確定是否是DC-SIGN使得DEN-1病毒具有對(duì)THP-1的感染性，我們測(cè)試了表達(dá)DC-SIGN的人單核THP細(xì)胞系，THP/DC-SIGN(Kwon等，Immunity，16135，2002)。在m.o.i.為5AP61 FFU/細(xì)胞時(shí)，感染后48小時(shí)，超過(guò)50％的THP/DC-SIGN細(xì)胞呈現(xiàn)FGA/NA d1d抗原陽(yáng)性(圖4)。在感染96小時(shí)后，DEN-1病毒在其中進(jìn)行復(fù)制的THP/DC-SIGN細(xì)胞發(fā)生死亡。不同于DEN-1病毒，在m.o.i.高達(dá)50VEROFFU/細(xì)胞時(shí)，YF病毒疫苗株17D-204在THP/DC-SIGN中不進(jìn)行復(fù)制。同樣有趣的是，DC-SIGN可介導(dǎo)增強(qiáng)WN病毒對(duì)單核細(xì)胞的感染(圖4)。
3.甘露聚糖、ETDA和DC-SIGN特異性Mab 1B10.2.6對(duì)DC-SIGN介導(dǎo)的DEN病毒結(jié)合的影響我們測(cè)試了甘露聚糖、ETDA和DC-SIGN特異性Mab 1B10.2.6對(duì)DC-SIGN介導(dǎo)的DEN病毒結(jié)合的影響。在這些實(shí)驗(yàn)中，Mab BD12.5作為陰性對(duì)照，而抗E Mab 9D12用作陽(yáng)性對(duì)照。以DEN-1病毒株FGA/NAd1d以m.o.i.為5AP61FFU/細(xì)胞感染THP/DC-SIGN。當(dāng)以EDTA或DC-SIGN特異性Mab 1B10.2.6與THP/DC-SIGN細(xì)胞進(jìn)行預(yù)孵育后，DEN-1病毒的感染性被基本上消除(圖5)。劑量為201μg/ml的甘露聚糖可將FGA/NA d1d的感染性降低75％。因此，有理由認(rèn)為DC-SIGN能夠促進(jìn)DEN病毒感染單個(gè)核細(xì)胞。
DC-SIGN的細(xì)胞漿尾部含有2個(gè)限定的推定的內(nèi)化基序、1個(gè)基于雙亮氨酸的基序(dileucine-based motif)以及1個(gè)基于酪氨酸的基序。接下來(lái)我們測(cè)試了表達(dá)突變形式的DC-SIGN的THP-1細(xì)胞克隆A35，該突變形式的DC-SIGN中該分子的細(xì)胞漿結(jié)構(gòu)域時(shí)截短的(Kwon等，Immunity，16135，2002)。該截短去除了包括雙亮氨酸基序和基于酪氨酸的基序在內(nèi)的35個(gè)氨基酸。我們發(fā)現(xiàn)，DEN-1病毒對(duì)THP-1細(xì)胞克隆A35保留了大部分的感染性(圖6)。因此，細(xì)胞漿尾部在DC-SIGN增強(qiáng)DEN-1病毒感染中不起作用。
4.DC與不同DEN病毒類型之間的相互作用的比較按照實(shí)施例3所述，以DEN病毒[DEN-1病毒株FGA/NA d1d(FrenchGuiana)；DEN-2病毒株Jam(Jamaica)；DEN-3病毒株P(guān)aH 881(Thailand)；DEN-4病毒株63632(Birmanie)]感染THP/DC-SIGN細(xì)胞，感染復(fù)數(shù)(MOI)為自0.1至10AP61FFU/細(xì)胞。感染后40小時(shí)，使用特異性抗DEN HMAF通過(guò)間接免疫熒光測(cè)定表達(dá)DC-SIGN的DEN抗原陽(yáng)性THP細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)(％)(圖7)。在感染各種DEN病毒株的THP細(xì)胞中沒有檢測(cè)到DEN抗原。
結(jié)果總結(jié)于下表。
DEN病毒感染表達(dá)DC-SIGN的THP/DC-SIGN細(xì)胞

保藏名稱為“Hela DC-SIGN Flap”的Hela細(xì)胞系于2002年10月30日保藏于C.N.C.M.，28rue du Docteur Roux，75724巴黎Cedex 15，法國(guó)，保藏號(hào)為I-2949。
名稱為“DC-SIGN human clone2”的DC-SIGN克隆于2002年10月30日保藏于C.N.C.M.，28 rue du Docteur Roux，75724巴黎Cedex 15，法國(guó)，保藏號(hào)為I-2950。
名稱為“1B10.2.6”的雜交瘤于2002年11月7日保藏于C.N.C.M.，28rue du Docteur Roux，75724巴黎Cedex 15，法國(guó)，保藏號(hào)為I-2951。
參考文獻(xiàn)Bhamarapravati，N.et al.(Dengue and Dengue haemorrhagic fever(1997)，367-377).
Courageot et al.，J.Virol.，74564-572.
Crooks A.J.et al.J.Chrom.(1990)，502，59-68.
Crooks A.J.et al.J.Gen.Virol.(1994)，75，3453-3460.
Curtus et al.，PNAS USA(1992)，89，8356-8360.
Despres et al.，J.Virol.，704090，1996.
Despres et al.，Virology，196209，1993.
Drickammer，Curr.Opin.lmmunol.13585，1999.
Duarte dos Santos et al.，Virology，274292，2000.
Feinberg，H.，Mitchell，D.A.，Drickamer，K.& Weis，W.I.(2001).Structural basis for selective recognition ofoligosaccharides by DC-SIGNandDC-SIGNR.Science 294，2163-6.
Geijtenbeek，T.B.et al.(2000).DC-SIGN，a dendritic cell specificHIV-1-binding protein that enhances trans-infection of T cells.Cell 100，587-97.
Geijtenbeek et al.，Nature 1353，2000.
Glamand et al.，J.Virol.(1999)，73，6106-6110.
Gorman et al.(1982)P.N.A.S.796777.
Grosschedl et al.(1985)Cell 4l885.
Hall R.A.et al.，J.Virol.(1999)，73，10272-10280.
Ho et al.，Immunology 1661499，2001.
Jost et al.(1994)J.B.C.26926267-73.
Kabat et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，N.I.H.publication no.91-3242.
Kaufmann，S.H.E.(2001).How can immunology contribute to thecontrol of tuberculosis，Nat.Rev.Immunol.1，20-30.
Kwon et al.，Immunity，16135，2002.
Liu et al.(1987)P.N.A.S.843439 and(1987)J.Immunol.1393521.
Marovich et al.，JID Symp.Proc.6219，2001.
Mashimo et al.，PNAS，9911311，2002.
Monath，T.P.et al.，(1996)FlaviViruses in B.N.Fields，D.M.Knipe，P.M.Howly et al.(eds.)“Fields Virology“PhiladelphiaLippincott RavenPress Publishers.
Moody，D.B.et al.(2000).CDlc-mediated T-cell recognition ofisoprenoid glycolipids in Mycobacterium tuberculosis infection.Nature 404，884-8.
Okayama et al.(1983)Mol.Cell.Bio.3280).
Palucka，Nat.Med 6748，2000.
Pohlmann，S.，et al.，PNAS USA，(2001)，98，2670-2675.
Relloso et al.，J.Immunol.168，2634，2002.
Rice C.M.et al.，J.Virol.，(1997)，71，291-298.
Rice C.M.et al.，J.Virol.，(1997)，71，9608-9617).
Rice C.M.et al.，J.Virol.，(1996)，222，159-168.
Russel，P.K.et al.(J.Immunol.，(1970)，105，838-845).
Smith，G.W.et al.(J.Gen Virol.，(1985)，66，559-571).
Steinman，R.M.(2000).DC-SIGNA Guide to Some Mysteries ofDendritic Cells.Cell 100，491-94.
Wu et al.，Nat.Med.6816，2000.
WO 90/10077WO 90/04036.
WO 92/02190.
WO 98/50433.
WO 98/24893.
WO 99/53049.
美國(guó)專利No.4,683,195美國(guó)專利No.4,683,202美國(guó)專利No.5,516,637美國(guó)專利No.5,223,409美國(guó)專利No.5,658,727美國(guó)專利No.5,667,988美國(guó)專利No.5,498,538美國(guó)專利No.5,403,484美國(guó)專利No.5,571,698美國(guó)專利No.5,625,033本申請(qǐng)引用的所有參考文獻(xiàn)、專利以及公開的專利申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容均以其全文在此并入作為參考。
權(quán)利要求
1.其量足以充分調(diào)變一種效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療一種哺乳動(dòng)物疾病的藥物中的用途，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由所述效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。
2.其量足以充分抑制一種效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療一種哺乳動(dòng)物疾病的藥物中的用途，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由所述效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。
3.權(quán)利要求2的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑是所述效應(yīng)分子的阻斷性衍生物。
4.權(quán)利要求2的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑是抗體。
5.權(quán)利要求4的用途，其中所述抗體特異性結(jié)合DC-SIGN。
6.權(quán)利要求4的用途，其中所述抗體特異性結(jié)合所述效應(yīng)分子。
7.權(quán)利要求2的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑是一種結(jié)合DC-SIGN受體的甘露糖基化分子。
8.權(quán)利要求7的用途，其中所述甘露糖基化分子是甘露聚糖。
9.其量足以充分調(diào)變病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的病毒感染的藥物中的用途，其中所述病毒感染至少部分由所述病毒效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。
10.其量足以充分抑制病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的病毒感染的藥物中的用途，其中所述病毒感染至少部分由所述病毒效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的DC-SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。
11.權(quán)利要求10的用途，其中所述病毒效應(yīng)分子是病毒包膜的一種分子組分。
12.權(quán)利要求11的用途，其中所述病毒包膜的分子組分是包膜糖蛋白。
13.權(quán)利要求10的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑包含所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。
14.權(quán)利要求12的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑包含所述包膜糖蛋白的結(jié)合部分。
15.權(quán)利要求10的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑是抗體。
16.權(quán)利要求15的用途，其中所述抗體是單克隆抗體。
17.權(quán)利要求16的用途，其中所述哺乳動(dòng)物是人，且所述單克隆抗體是人源化的。
18.權(quán)利要求15的用途，其中所述抗體特異性結(jié)合DC-SIGN。
19.權(quán)利要求15的用途，其中所述抗體特異性結(jié)合所述病毒效應(yīng)分子。
20.權(quán)利要求19的用途，其中所述抗體特異性結(jié)合所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。
21.權(quán)利要求10的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑是結(jié)合DC-SIGN受體的甘露糖基化分子。
22.權(quán)利要求21的用途，其中所述甘露糖基化分子是甘露聚糖。
23.權(quán)利要求10的用途，其中所述病毒感染是一種黃病毒科(Flaviviridae)病毒感染，且所述病毒效應(yīng)分子是一種黃病毒科效應(yīng)分子。
24.權(quán)利要求23的用途，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
25.權(quán)利要求23的用途，其中所述黃病毒科病毒感染是登革熱病毒感染，且所述黃病毒科效應(yīng)分子是登革熱效應(yīng)分子。
26.權(quán)利要求25的用途，其中所述登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒包膜的分子組分。
27.權(quán)利要求26的用途，其中所述登革熱病毒包膜的分子組分是登革熱病毒包膜糖蛋白。
28.權(quán)利要求27的用途，其中所述登革熱病毒包膜糖蛋白是登革熱病毒E糖蛋白。
29.權(quán)利要求25的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。
30.權(quán)利要求28的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分。
31.權(quán)利要求30的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑是重組產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。
32.權(quán)利要求25的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑是抗體。
33.權(quán)利要求32的用途，其中所述抗體是單克隆抗體。
34.權(quán)利要求33的用途，其中所述單克隆抗體是人源化的。
35.權(quán)利要求32的用途，其中所述抗體特異性結(jié)合DC-SIGN。
36.權(quán)利要求32的用途，其中所述抗體特異性結(jié)合所述登革熱病毒效應(yīng)分子。
37.權(quán)利要求36的用途，其中所述登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒E糖蛋白。
38.其量足以充分調(diào)變HIV或SIV與人或猿的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療所述人或猿的HIV或SIV感染的藥物中的用途。
39.其量足以充分抑制HIV或SIV與人或猿的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療所述人或猿的HIV或SIV感染的藥物中的用途。
40.權(quán)利要求39的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分。
41.權(quán)利要求39的用途，其中預(yù)防或治療人的HIV感染。
42.其量足以充分調(diào)變哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與所述哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN調(diào)變劑在制備一種用于預(yù)防或治療所述哺乳動(dòng)物的炎癥的藥物中的用途，所述炎癥由哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的特異性結(jié)合引起。
43.其量足以充分抑制哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的結(jié)合的DC-SIGN阻斷劑在制備一種用于預(yù)防或治療所述哺乳動(dòng)物的炎癥的藥物中的用途，所述炎癥由哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上的ICAM-3與哺乳動(dòng)物的樹突細(xì)胞上的DC-SIGN受體的特異性結(jié)合引起。
44.權(quán)利要求43的用途，其中所述DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒E糖蛋白的結(jié)合部分。
45.權(quán)利要求43的用途，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
46.一種藥物組合物，其包含a)一種DC-SIGN阻斷劑，和b)至少一種藥物學(xué)可接受的賦形劑；其中所述DC-SIGN阻斷劑以可達(dá)到的治療濃度存在于組合物中。
47.權(quán)利要求46的藥物組合物，其中所述DC-SIGN阻斷劑是病毒效應(yīng)分子的衍生物。
48.權(quán)利要求46的藥物組合物，其中所述DC-SIGN阻斷劑包含登革熱病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。
49.權(quán)利要求48的藥物組合物，其中所述登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒E糖蛋白。
50.權(quán)利要求46的藥物組合物，其中所述DC-SIGN阻斷劑是抗體。
51.權(quán)利要求50的藥物組合物，其中所述抗體是單克隆抗體。
52.權(quán)利要求51的藥物組合物，其中所述單克隆抗體是人源化的。
53.權(quán)利要求50的藥物組合物，其中所述抗體特異性結(jié)合DC-SIGN。
54.權(quán)利要求50的藥物組合物，其中所述抗體特異性結(jié)合病毒效應(yīng)分子。
55.權(quán)利要求54的藥物組合物，其中所述抗體特異性結(jié)合所述病毒效應(yīng)分子的結(jié)合部分。
56.一種用于鑒別DC-SIGN調(diào)變劑的方法，其中所述方法包含a)通過(guò)以下步驟確定基線結(jié)合值i.提供包含DC-SIGN受體的培養(yǎng)細(xì)胞；ii.將所述培養(yǎng)細(xì)胞暴露于一種標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分一段足夠的時(shí)間以使結(jié)合達(dá)到平衡；以及iii.確定所述標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分與所述培養(yǎng)細(xì)胞的結(jié)合程度，由此確定基線結(jié)合值；b)通過(guò)以下步驟確定測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值i.提供包含DC-SIGN受體的培養(yǎng)細(xì)胞；ii.在存在測(cè)試物質(zhì)的情況下將所述培養(yǎng)細(xì)胞暴露于一種標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分一段足夠的時(shí)間以使結(jié)合達(dá)到平衡；以及iii.確定所述標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分與所述培養(yǎng)細(xì)胞的結(jié)合程度，由此確定測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值；以及c)通過(guò)將所述測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值除以所述基線結(jié)合值確定所述測(cè)試物質(zhì)的測(cè)試物質(zhì)結(jié)合調(diào)變值，其中代表所述測(cè)試物質(zhì)對(duì)所述病毒效應(yīng)分子與樹突細(xì)胞的結(jié)合產(chǎn)生大約95％的調(diào)變的測(cè)試物質(zhì)結(jié)合調(diào)變值，表示所述測(cè)試物質(zhì)是充分調(diào)變病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的物質(zhì)。
57.一種用于鑒別DC-SIGN阻斷劑的方法，其中所述方法包含a)通過(guò)以下步驟確定基線結(jié)合值i.提供包含DC-SIGN受體的培養(yǎng)細(xì)胞；ii.將所述培養(yǎng)細(xì)胞暴露于一種標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分一段足夠的時(shí)間以使結(jié)合達(dá)到平衡；以及iii.確定所述標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分與所述培養(yǎng)細(xì)胞的結(jié)合程度，由此確定基線結(jié)合值；b)通過(guò)以下步驟確定測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值i.提供包含DC-SIGN受體的培養(yǎng)細(xì)胞；ii.在存在測(cè)試物質(zhì)的情況下將所述培養(yǎng)細(xì)胞暴露于一種標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分一段足夠的時(shí)間以使結(jié)合達(dá)到平衡；以及iii.確定所述標(biāo)記的病毒效應(yīng)分子結(jié)合部分與所述培養(yǎng)細(xì)胞的結(jié)合程度，由此確定測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值；以及c)通過(guò)將所述測(cè)試物質(zhì)結(jié)合值除以所述基線結(jié)合值確定所述測(cè)試物質(zhì)的測(cè)試物質(zhì)結(jié)合抑制值，其中代表所述測(cè)試物質(zhì)對(duì)所述病毒效應(yīng)分子與樹突細(xì)胞的結(jié)合產(chǎn)生大約95％的抑制的測(cè)試物質(zhì)結(jié)合抑制值，表示所述測(cè)試物質(zhì)是充分抑制病毒效應(yīng)分子與DC-SIGN受體的結(jié)合的物質(zhì)。
58.權(quán)利要求57的方法，其中所述培養(yǎng)細(xì)胞是DC。
59.權(quán)利要求57的方法，其中所述培養(yǎng)細(xì)胞是THP-1細(xì)胞。
60.權(quán)利要求57的方法，其中所述病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒效應(yīng)分子。
61.權(quán)利要求60的方法，其中所述登革熱病毒效應(yīng)分子是登革熱病毒E糖蛋白。
62.由權(quán)利要求57的方法鑒別得到的分離的DC-SIGN阻斷劑。
63.一種通過(guò)將表達(dá)DC-SIGN受體的細(xì)胞暴露于導(dǎo)向復(fù)合物而將對(duì)象分子導(dǎo)向所述細(xì)胞的方法，其中所述導(dǎo)向復(fù)合物包含對(duì)象分子和DC-SIGN阻斷劑，其中所述暴露在使得所述DC-SIGN阻斷劑結(jié)合表達(dá)所述DC-SIGN受體的細(xì)胞上的DC-SIGN的條件下進(jìn)行，由此將所述對(duì)象分子導(dǎo)向表達(dá)DC-SIGN受體的細(xì)胞。
64.權(quán)利要求63的方法，其中所述DC-SIGN阻斷劑是抗體。
65.權(quán)利要求64的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
66.權(quán)利要求63的方法，其中所述對(duì)象分子是蛋白質(zhì)。
67.權(quán)利要求63的方法，其中所述對(duì)象分子是抗體。
68.權(quán)利要求63的方法，其中所述對(duì)象分子是標(biāo)記的。
69.權(quán)利要求63的方法，其中所述暴露發(fā)生于體內(nèi)。
70.權(quán)利要求63的方法，其中所述暴露發(fā)生于體外。
71.一種藥物組合物，其包含a)一種DC-SIGN調(diào)變劑，和b)至少一種藥物學(xué)可接受的賦形劑；其中所述DC-SIGN調(diào)變劑以可達(dá)到的治療濃度存在于組合物中。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于預(yù)防或治療包括病毒感染在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的疾病的方法和組合物，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由一種效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物的細(xì)胞上的DC－SIGN受體的結(jié)合所介導(dǎo)。本發(fā)明還提供鑒別組合物的方法，其中所述組合物可用于治療包括病毒感染在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的疾病，其中所述疾病的至少一種癥狀至少部分由一種效應(yīng)分子與待治療的哺乳動(dòng)物中表達(dá)DC－SIGN受體的細(xì)胞上的DC－SIGN受體的特異性結(jié)合所介導(dǎo)。本發(fā)明還涉及將對(duì)象分子導(dǎo)向表達(dá)DC－SIGN受體的細(xì)胞的組合物和方法。
文檔編號(hào)A61P31/14GK1738637SQ200380102859
公開日2006年2月22日 申請(qǐng)日期2003年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月5日
發(fā)明者阿里·阿瑪拉, 費(fèi)爾南多·阿倫薩納－塞斯德多斯, 菲利普·德普雷斯, 讓－路易·維雷利齊爾 申請(qǐng)人:巴斯德研究院, 國(guó)家健康與醫(yī)學(xué)研究院