專利名稱：治療癌癥的方法及相關(guān)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用受體酪氨酸激酶抑制劑治療癌癥的方法。本發(fā)明還涉及在給對(duì)象施用該抑制劑后，測定該抑制劑及其代謝產(chǎn)物的數(shù)量和濃度的方法。
背景技術(shù)：
毛細(xì)血管可到達(dá)幾乎所有的人體組織，向組織提供氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)并清除廢物。在通常情況下，襯于毛細(xì)血管內(nèi)壁的內(nèi)皮細(xì)胞不會(huì)分裂，因此，毛細(xì)血管的數(shù)目和大小在成年人體內(nèi)一般不會(huì)有所增長。然而，在某些正常情況下，例如當(dāng)組織受損或處于月經(jīng)周期的某些階段時(shí)，毛細(xì)血管開始迅速增生。這一由既有血管形成新生毛細(xì)血管的過程稱為血管生成或血管再生。參見Folkman，J.Scientific American 275，150-154(1996)。傷口愈合時(shí)的血管生成是成年時(shí)期病理生理性的血管再生的一個(gè)實(shí)例。在傷口愈合的過程中，新增的毛細(xì)血管供給氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，促使肉芽組織生成，并協(xié)助清除廢物。在愈合過程結(jié)束以后，毛細(xì)血管通常會(huì)退化。Lymboussaki，A.“胚胎、成體和腫瘤中的血管內(nèi)皮生長因子及其受體”的學(xué)術(shù)論文，赫爾辛基大學(xué)，分子/癌癥生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室和病理系，Haartman學(xué)院，(1999)。血管生成還在癌細(xì)胞的生長中起重要的作用。已知一旦癌細(xì)胞巢達(dá)到一定大小，即其直徑約為1至2mm時(shí)，癌細(xì)胞必須獲得血液供給才能使腫瘤生長得更大，這是因?yàn)榇藭r(shí)擴(kuò)散將不足以為癌細(xì)胞提供足夠的氧氣和營養(yǎng)。受體酪氨酸激酶(RTKs)是調(diào)節(jié)發(fā)育細(xì)胞的生長和分化、成體組織的重塑和再生的跨膜多肽。Mustonen，T.等，J.Cell Biology 129，895-898(1995)；vander Geer，P.等.Ann Rev.Cell Biol.10，251-337(1994)。已知，被稱為生長因子或細(xì)胞因子的多肽配體可激活RTKs。RTKs的信號(hào)傳導(dǎo)包括配體結(jié)合、受體外部區(qū)域構(gòu)型變化，以及由此引發(fā)的受體二聚體化。Lymboussaki，A.“胚胎、成體和腫瘤中的血管內(nèi)皮生長因子及其受體”的學(xué)術(shù)論文，赫爾辛基大學(xué)，分子/癌癥生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室和病理系，Haartman學(xué)院，(1999)；Ullrich，A.等，Cell 61，203-212(1990)。配體與RTK的結(jié)合，導(dǎo)致受體在特定酪氨酸殘基處的轉(zhuǎn)磷酸化，并隨后發(fā)生催化域的活化，該催化域的作用在于使胞質(zhì)中的底物磷酸化。同上。RTKs的兩個(gè)亞族對(duì)于血管內(nèi)皮是特異性的。這兩個(gè)亞族包括血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)亞族和Tie受體亞族。第III類RTKs包括VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3。Shibuya，M.等，Oncogene 5，519-525(1990)；Terman，B.等，Oncogene 6，1677-1683(1991)；Aprelikova，O.等，Cancer Res.52，746-748(1992)。據(jù)述，VEGF亞族的成員可誘導(dǎo)血管滲透性的增加以及血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，并且被進(jìn)一步確定為血管生成和血管再生的主要誘導(dǎo)物。Ferrara，N.等，Endocrinol.Rev.18，4-25(1997)。已知，VEGF可特異性地結(jié)合于RTKs(包括VEGFR-1和VEGFR-2)。DeVries，C.等，Science 255，989-991(1992)；Quinn，T.等，Proc.Natl.Acad.Sci.90，7533-7537(1993)。在體內(nèi)和體外，VEGF均能刺激內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和增殖，并誘導(dǎo)血管生成。Connolly，D.等，J.Biol.Chem.264，20017-20024(1989)；Connolly，D.等，J.Clin.Invest.84，1470-1478(1989)；Ferrara，N.等，Endocrino.Rew.18，4-25(1997)；Leung，D.等，Science 246，1306-1309(1989)；Plouet，J.等，EMBO J 8，3801-3806(1989)。因?yàn)橐阎苌蓪?duì)于癌的生長十分關(guān)鍵，并且該過程由VEGF和VEGF-RTK所調(diào)控，因此，人們付諸了大量的努力試圖開發(fā)出VEGF-RTK的拮抗劑用于抑制或延緩血管生成，并且希望此類療法能夠干擾或阻止腫瘤的增生。血小板衍生生長因子受體激酶(PDGFRK)是RTK的另一種類型。從神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤到前列腺癌等多種不同的實(shí)體瘤中，均顯示有PDGF的表達(dá)。在這些不同的腫瘤類型中，PDGF信號(hào)的生物學(xué)作用是多種多樣的，有的是通過自分泌作用刺激癌細(xì)胞的生長，也有更復(fù)雜的涉及鄰近基質(zhì)和血管生成作用的旁分泌交互作用。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮為VEGF-RTK、PDGF-RTK和其它受體酪氨酸激酶(如成纖維細(xì)胞生長因子受體(FGF-RTK))的小分子抑制劑。該化合物已記載于一項(xiàng)專利和幾項(xiàng)專利的申請(qǐng)中，出于所有目的，這些文獻(xiàn)均全文引入本文作為參考美國專利號(hào)6,605,617，U.S.S.N.10/644,055、美國臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?0/405,729、60/428,210和60/484,048。該化合物的特定施用方法與用于確定本有效抗癌劑的代謝情況的方法一樣是需要的。
發(fā)明概述本發(fā)明提供治療癌癥(包括白血病和實(shí)體瘤)的方法。具體地，提供了一種方法，使得對(duì)象血液中4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮的濃度達(dá)到足以抑制癌癥的生長。該化合物為受體酪氨酸激酶的抑制劑。還提供了作為生物指標(biāo)的化合物，以及用這些化合物來監(jiān)測對(duì)象體內(nèi)抑制劑的分布和代謝情況的方法。此外，本發(fā)明還提供了含有此抑制劑的藥物組合物和藥物，以及其用法。這樣，依據(jù)本發(fā)明，我們提供了癌癥的治療方法，該方法包括給癌癥患者施用足量的式I化合物 施用該化合物藥學(xué)上可接受的鹽、該化合物的互變體，或該互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，從而使得對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約20至4000ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約40至8000ng/mL。在一些實(shí)施例中，施用的該化合物的量足以使得對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約35至2000ng/mL或使得對(duì)象血液中該化合物的Cmax達(dá)到大約70至4000ng/mL，對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約50至500ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約100至1000ng/mL，對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約50至250ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約100至500ng/mL，對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約75至150ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約150至300ng/mL，對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約100至2000ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約200至4000ng/mL，或者對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約100至1000ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約200至2000ng/mL。在一些實(shí)施例中，施用于對(duì)象的是式I化合物的乳酸鹽，且在某些這些實(shí)施例中對(duì)象是人。所述化合物、其互變體或其鹽類可以被制備為丸劑、膠囊、片劑、軟膠囊(gelcaps)、小膠囊、懸浮液、水溶液，或本文描述的其它形式。在某些這樣的實(shí)施例中，乳酸鹽是以水溶液的形式給人體對(duì)象口服的。在其它一些實(shí)施例中，該化合物可通過注射給藥。在另一方面，本發(fā)明提供了治療癌癥的方法，包括給癌癥患者施用足量的式I的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其互變體，或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，使得對(duì)象在給藥后24小時(shí)，其血漿中該化合物的濃度達(dá)到約10至2000ng/mL或其血液中化合物的濃度達(dá)到約20至4000ng/mL。在一些實(shí)施例中，所施用的化合物的數(shù)量足以在給藥后24小時(shí)使給藥對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約20至1000ng/mL或其血液中化合物的濃度達(dá)到約40至2000ng/mL，在給藥后24小時(shí)對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約40至500ng/mL或其血液中化合物的濃度達(dá)到約80至1000ng/mL的化合物，或在給藥后24小時(shí)對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約40至250ng/mL或其血液中化合物的濃度達(dá)到約80至500ng/mL。在一些實(shí)施例中，施藥對(duì)象是人。通常，在應(yīng)用本方法治療癌癥時(shí)，施用于對(duì)象的是式I化合物的乳酸鹽。在某些這樣的實(shí)施例中，乳酸鹽是以丸劑、膠囊、片劑、軟膠囊、小膠囊、懸浮液或水溶液的形式給對(duì)象口服。這樣，在施用本方法治療癌癥某些實(shí)施例中，式I化合物是以含有果糖的藥物組合物或藥物的形式給藥的。在一些此類實(shí)施例中，藥物組合物還含有矯味劑，如橘子味(tetrarome mandarine flavor)。在其它一些實(shí)施例中，藥物組合物還含有水。因此，本癌癥治療方法還可包括在給對(duì)象施用化合物之前，將式I的固態(tài)化合物與水混合，形成含水的混合物。本發(fā)明還提供了將式I化合物用于制備癌癥治療藥物的方法。在此描述的其它一些癌癥治療方法的實(shí)施例中，該化合物以下列的藥物組合物的形式給藥顆粒劑、粉劑、懸浮液、片劑、丸劑、膠囊、軟膠囊(gelcaps)、小膠囊、乳劑、糖漿、酏劑、漿劑(slurry)、噴霧劑、氣霧劑、栓劑或溶液。優(yōu)先的藥物組合物形式為片劑、丸劑、膠囊、軟膠囊或小膠囊。在此描述的其它一些癌癥治療方法的實(shí)施例中，該化合物通過注射的形式給藥，如短期丸劑注射(short bolus)、緩慢輸注或長期輸注。每日的注射次數(shù)可以為一次、兩次、三次或四次。在本癌癥治療方法的一些實(shí)施例中，施用于對(duì)象的式I化合物的劑量在0.25至30mg/kg對(duì)象體重之間。在其它的一些實(shí)施例中，施用于對(duì)象的化合物的量約在25至1500mg/日之間，較佳地在約200至500mg/日。本癌癥治療方法可有效治療多種癌癥，其中包括一些實(shí)體瘤或白血病形式的癌癥。特別地，本方法可用于治療例如以下癌癥前列腺癌、結(jié)直腸癌、乳房癌、多發(fā)性骨髓瘤、胰腺癌、小細(xì)胞癌、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、骨髓增生性疾病、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、慢性淋巴性白血病、肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、甲狀腺癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、腎細(xì)胞癌、胃癌、胃腸道基質(zhì)瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦癌或膀胱癌。在一些實(shí)施例中，在此描述的癌癥治療方法還包括施用式I化合物，作為治療周期的一部分。這樣，治療周期可包括每日施用一定量的式I化合物并持續(xù)7、14、21或28日，隨后的7或14日停止施用。在一些實(shí)施例中，治療周期包括每日施用一定量的該化合物，持續(xù)7日，隨后的7日停止施用。一個(gè)治療周期可以重復(fù)一次或多次，提供一個(gè)療程。此外，該化合物可在治療周期的給藥期內(nèi)，每日施用一次、兩次、三次或四次。在其它的一些實(shí)施例中，本方法還包括在一個(gè)療程內(nèi)，每日或隔天施用一定量的化合物一次、兩次、三次或四次。還提供了治療癌癥的方法，它包括步驟給癌癥患者施用足量的下式化合物 其藥學(xué)上可接受的鹽，或其互變體，或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，使得對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約500至60,000ng*h/mL的AUC或?qū)ο笱褐谢衔锏臐舛冗_(dá)到約750至120,000ng*h/mL的AUC。在其它這樣的實(shí)施例中，施用的藥量能使得對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約1,000至30,000ng*h/mL的AUC或?qū)ο笱褐谢衔锏臐舛冗_(dá)到約1,500至60,000ng*h/mL的AUC。在其它這樣的實(shí)施例中，對(duì)象血漿中化合物的濃度約為2,000至15,000ng*h/mL的AUC或?qū)ο笱褐谢衔锏臐舛燃s為3,000至30,000ng*h/mL的AUC。本發(fā)明還進(jìn)一步提供了一種治療癌癥的方法，包括給癌癥患者施用具有式I的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，其中在首個(gè)治療周期中該化合物的施用量為每日25mg，在隨后的治療周期中，化合物的施用量逐漸提高，直到每日施用于對(duì)象的化合物達(dá)到1500mg，或者直到在施用對(duì)象身上已經(jīng)觀察到了限制劑量的毒性。通常，在這樣的實(shí)施例中，化合物的施用量在首次給藥后隨著每個(gè)后續(xù)治療周期而加倍。在一些實(shí)施例中，治療周期包括每日施用相同量的化合物，持續(xù)7日，隨后的7日停止施用。在另一方面，本發(fā)明提供了另一種治療癌癥的方法，包括給癌癥患者施用足量的式I化合物 其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，并且使對(duì)象暴露于一種或兩種選自式II和式III的化合物
II或 其中，式II和式III化合物中的一種或兩種是通過對(duì)象對(duì)式I化合物的代謝而產(chǎn)生的，從而使得一種或多種式I、式II和式III化合物的合并Cmax在對(duì)象的血漿中達(dá)到約20至約4000ng/ml，或其中的一種或多種式I、式II和式III化合物的合并Cmax在對(duì)象的血液中達(dá)到約40至約8000ng/ml。在另一方面，本發(fā)明提供了一種癌癥治療方法，包括步驟給癌癥患者施用足量的一種或多種下式化合物 其活性代謝產(chǎn)物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，使得對(duì)象血漿中一種或多種化合物的合并Cmax達(dá)到約20至4000ng/mL，或?qū)ο笱褐幸环N或多種化合物的合并Cmax達(dá)到約40至8000ng/mL。在一些實(shí)施例中，一種或多種化合物的量使對(duì)象血漿中某一化合物的Cmax達(dá)到約35至2600ng/mL，或?qū)ο笱褐心骋换衔锏腃max達(dá)到約35至6000ng/mL。在其它一些實(shí)施例中，一種或多種化合物的量使對(duì)象血漿中某一化合物的Cmax達(dá)到約35至1200ng/mL，或?qū)ο笱褐心骋换衔锏腃max達(dá)到約50至2400ng/mL。在本發(fā)明的其它方面，提供了測定式I化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽在施用對(duì)象體內(nèi)代謝情況的方法，該方法包括測定取自對(duì)象的一種或多種樣品(尿液、血液或組織)中該化合物的至少一種代謝產(chǎn)物的數(shù)量。在這樣一些的實(shí)施例中，至少一種代謝產(chǎn)物為具有式II的N-氧化物 在這樣的一些實(shí)施例中，至少有一種代謝產(chǎn)物為具有式III的N-去甲基化合物 在這樣的一些實(shí)施例中，至少有一種代謝產(chǎn)物還進(jìn)一步包括作為第二代謝產(chǎn)物，該代謝產(chǎn)物是式II的N-氧化物。這些代謝產(chǎn)物的數(shù)量可以用包括紫外線(UV)光譜和/或液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)在內(nèi)的技術(shù)來測定。在本發(fā)明的其它方面，提供了測定對(duì)象體內(nèi)式I化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽的數(shù)量的方法，該方法包括在將化合物施用于對(duì)象以后，測定取自對(duì)象的樣品(尿液、血液或組織)中該化合物的數(shù)量。本方法還包括測定樣品中該化合物代謝產(chǎn)物的數(shù)量。這些可被測定的代謝產(chǎn)物包括(但并不限于)式II的N-氧化物和/或式III的N-去甲基化合物。在一些實(shí)施例中，本方法還可包括在式I的化合物施用于對(duì)象后，在不同時(shí)間從對(duì)象提取兩個(gè)或多個(gè)樣品進(jìn)行測定。在隨后的詳細(xì)描述中，本發(fā)明的其它對(duì)象、特征和優(yōu)點(diǎn)將更為顯而易見。然而可以理解的是，本文中的詳細(xì)描述和具體實(shí)例，盡管表述了本發(fā)明的某些具體實(shí)施例，但是僅作為詮釋而給出，這是因?yàn)閼{借此詳細(xì)描述，在本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)所作的各種變動(dòng)和修改對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見的。
附圖簡述

圖1顯示由式I化合物引發(fā)的KM12L4a腫瘤抑制。圖2顯示KM12L4a荷瘤小鼠中，Cmax和AUC值與KM12L4a腫瘤生長的抑制百分比之間的關(guān)系。
詳細(xì)描述本發(fā)明涉及用式I化合物治療癌癥的方法，測定取自對(duì)象的生物樣品中的式I化合物和/或其代謝產(chǎn)物的數(shù)量的方法，和包含式I化合物的藥物組合物和藥物，及其使用方法。下列定義的術(shù)語和慣用語通篇使用于本說明書中。如本文所用，“AUC”是指在血漿中化合物濃度隨時(shí)間變化的曲線圖中曲線下所圍的面積。如本文所用，“Cmax”是指化合物施用于對(duì)象后，在對(duì)象的血漿、組織或血液中該化合物的最大濃度。Cmax通常在將化合物施用于對(duì)象后的幾個(gè)小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)。限制劑量的毒性是根據(jù)不良反應(yīng)通用術(shù)語標(biāo)準(zhǔn)(CommonTerminology Criteria of Adverse Events)3.0版(CTCAE)而定義的。這樣，在該化合物施用于對(duì)象后，如果在藥物治療周期內(nèi)觀察到以下任一情況，那么應(yīng)當(dāng)認(rèn)為限制劑量的毒性出現(xiàn)4級(jí)嗜中性白細(xì)胞減少癥(即，絕對(duì)嗜中性白細(xì)胞計(jì)數(shù)(ANC)500個(gè)細(xì)胞/mm3)連續(xù)5日或更多日，或發(fā)燒性嗜中性白細(xì)胞減少癥(即，發(fā)燒38.5℃并且ANC 1000個(gè)細(xì)胞/mm3)；4級(jí)血小板減少癥(即，25,000個(gè)細(xì)胞/mm3或需要血小板輸液的出血事件)；4級(jí)疲乏，或ECOG功能狀態(tài)下降2分；盡管使用了足夠的/最大的醫(yī)療干預(yù)，仍出現(xiàn)3級(jí)或更嚴(yán)重的惡心、腹瀉、嘔吐和/或肌痛；3級(jí)或更嚴(yán)重的非血液毒性(除了疲乏)；由于使用化合物1治療而引起的毒性恢復(fù)延遲癥狀超過2周；2級(jí)或更嚴(yán)重的具備臨床意義的心臟毒性(如，靜態(tài)射出分率下降至40％-50％或收縮分?jǐn)?shù)下降至15％-24％；心臟肌鈣蛋白T 0.05ng/mL)。藥學(xué)上可接受的鹽包括無機(jī)堿、有機(jī)堿、無機(jī)酸、有機(jī)酸、或堿性或酸性氨基酸的鹽。本發(fā)明所包括的無機(jī)堿的鹽有，堿金屬(如鈉或鉀)，堿土金屬(如鈣和鎂，鋁，和氨)。作為有機(jī)堿的鹽，本發(fā)明包括例如三甲胺、三乙胺、嘧啶、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺鹽。作為無機(jī)酸的鹽，本發(fā)明包括例如鹽酸、硼氫酸(hydroboric acid)、硝酸、硫酸和磷酸的鹽。作為有機(jī)酸的鹽，本發(fā)明包括例如乳酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、富馬酸、草酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、琥珀酸、蘋果酸、甲磺酸、苯磺酸和對(duì)甲苯磺酸的鹽。作為堿性氨基酸的鹽類，本發(fā)明包括例如精氨酸、賴氨酸和鳥氨酸的鹽。酸性氨基酸的鹽包括例如天冬氨酸和谷氨酸的鹽。應(yīng)理解，本發(fā)明的有機(jī)化合物可以呈現(xiàn)互變異構(gòu)現(xiàn)象。由于本說明書內(nèi)的化學(xué)結(jié)構(gòu)僅能描繪某一時(shí)刻下的一種可能的互變(異構(gòu))形式，所以應(yīng)理解，本發(fā)明包括了所繪結(jié)構(gòu)的任何互變(異構(gòu))形式。例如，式I化合物及其一個(gè)互變(異構(gòu))體，即互變體Ia，如下所示
互變體Ia式I化合物的其它互變體，互變體Ib和互變體Ic，如下所示 互變體Ib 互變體Ic正如本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解的那樣，許多功能基團(tuán)和其它結(jié)構(gòu)均可產(chǎn)生互變異構(gòu)現(xiàn)象，所以，任何式I化合物的互變體均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。如本文所用，術(shù)語“對(duì)象”是指任何可以受益于本發(fā)明方法的有益效果的動(dòng)物。這樣，依照本發(fā)明所提供的癌癥治療方法，式I化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，可以施用于任何能夠受益于該化合物有益效果的動(dòng)物。所說的動(dòng)物優(yōu)先為哺乳動(dòng)物，尤其是人類，盡管本發(fā)明并不局限于此。其它合適的動(dòng)物包括(但并不限于)大鼠、小鼠、猴、狗、貓、牛、馬、豬、羊等等。在本發(fā)明上下文中，“治療”意指與病癥或疾病有關(guān)的癥狀的減輕，或這些癥狀的進(jìn)一步發(fā)展或惡化過程的停止，或疾病或病癥的防止與預(yù)防。例如，在癌癥情況下，成功的治療可包括癥狀的減輕或疾病進(jìn)程的停止，這可以通過腫瘤生長率的降低、腫瘤生長的停止、腫瘤大小的減小、癌癥部分或完全的消退、或生存率或臨床受益的提高來衡量。一方面，本發(fā)明提供了癌癥的治療方法，它包括給癌癥患者施用足量的式I化合物
該化合物藥學(xué)上可接受的鹽、該化合物的互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，使得對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約20至4000ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約40至8000ng/mL。在一些實(shí)施例中，施用的該化合物的量足以使得對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約35至2000ng/mL或使得對(duì)象血液中該化合物的Cmax達(dá)到大約70至4000ng/mL，對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約50至500ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約100至1000ng/mL，對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約50至250ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約100至500ng/mL，對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約75至150ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約150至300ng/mL，對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約100至2000ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約200至4000ng/mL的，對(duì)象血漿中該化合物的Cmax達(dá)到大約100至1000ng/mL或?qū)ο笱褐性摶衔锏腃max達(dá)到大約200至2000ng/mL。較佳地，化合物的施用量足以使對(duì)象血漿中化合物的的Cmax達(dá)到約75至150ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約150至300ng/mL。這樣，應(yīng)理解，式I化合物、互變體及其鹽類的用量足以使Cmax落入給定的范圍內(nèi)。另一方面，本發(fā)明提供了一種治療癌癥的方法，它包括給癌癥患者施用足量的式I化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，使得在對(duì)象血漿中化合物的濃度在給藥后24小時(shí)達(dá)到約10至2000ng/mL或在其血液中化合物的濃度達(dá)到約20至4000ng/mL。在一些實(shí)施例中，所施用的化合物的數(shù)量足以在給藥后24小時(shí)使得對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約20至1000ng/mL或其血液中化合物的濃度達(dá)到約40至2000ng/mL，在給藥后24小時(shí)對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約40至500ng/mL或其血液中化合物的濃度達(dá)到約80至1000ng/mL的化合物，或在給藥后24小時(shí)對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約40至250ng/mL或其血液中化合物的濃度達(dá)到約80至500ng/mL。通常，在此描述的癌癥治療方法中，式I化合物或其互變體一般以藥學(xué)上可接受的鹽施用。諸如以各種摩爾比和互變體或消旋形式存在的乳酸鹽、蘋果酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、酒石酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、鹽酸鹽、檸檬酸鹽或馬來酸鹽都是合適的。較佳地，將式I化合物的乳酸鹽施用于諸如人之類的對(duì)象。乳酸鹽可以很方便地以丸劑、膠囊、片劑、軟膠囊、小膠囊、懸浮液或水溶液的形式給藥，并其可給病人口服。在其它的實(shí)施例中，該化合物或其鹽類可如下所述通過注射方式給藥。這樣，在使用本本發(fā)明的癌癥治療方法的某些實(shí)施例中，式I化合物是以含有果糖的藥物組合物或藥物的形式給藥的。在一些此類實(shí)施例中，藥物組合物還含有矯味劑，如橘子味(tetrarome mandarine flavor)之類的矯味劑和/或稀釋液，比如水。因此，本癌癥治療方法還可包括在給對(duì)象施用化合物之前，將式I的固態(tài)化合物與水混合，形成含水的混合物。本發(fā)明還提供了將化合物1用于制備癌癥治療藥物的方法。在本治療癌癥的方法的一些實(shí)施例中，施用于對(duì)象的式I化合物的藥量在O.25至30mg/kg對(duì)象體重之間。在其它的一些實(shí)施例中，每日施用于對(duì)象的化合物的藥量約為25至1500mg/對(duì)象，或每日約為100至1000mg/對(duì)象，或每日約為200至500mg/對(duì)象。本治療癌癥的方法可有效地對(duì)抗多種癌癥，也包括一些實(shí)體瘤或白血病形式的癌癥。本方法尤其可以用于治療諸如前列腺癌、結(jié)直腸癌、乳房癌、多發(fā)性骨髓瘤、胰腺癌、小細(xì)胞癌、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、骨髓增生性疾病、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、慢性淋巴性白血病、肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、甲狀腺癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、腎細(xì)胞癌、胃癌、胃腸道基質(zhì)瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦癌或膀胱癌的癌癥。盡管不希望被理論所束縛，但是據(jù)信由于式I化合物是作為血管生成抑制劑起作用的，所以本癌癥治療方法能夠有效地對(duì)抗實(shí)體瘤。更具體地，據(jù)信式I化合物及其活性代謝產(chǎn)物能夠選擇性地抑制與腫瘤的血管生成和白血病有關(guān)的某些受體酪氨酸激酶。在一些實(shí)施例中，本癌癥治療方法還包括施用式I化合物，作為治療周期的一部分。治療周期包括給藥期(此期間內(nèi)化合物定期地施予對(duì)象)和假期(此期間內(nèi)停止給藥)。例如，治療周期可包括每日施用一定量的式I化合物，持續(xù)7、14、21或28日，隨后的7或14日停止施用。在一些實(shí)施例中，治療周期包括每日施用一定量的該化合物，持續(xù)7日，隨后的7日停止施用。一個(gè)治療周期可重復(fù)一次或多次，以提供一個(gè)療程。此外，該化合物可在治療周期的給藥期內(nèi)，每日施用一次、兩次、三次或四次。在其它的實(shí)施例中，本方法還包括在一個(gè)療程內(nèi)，每日或隔日施用該化合物一次、兩次、三次或四次的量。療程是指對(duì)象經(jīng)歷用本方法進(jìn)行癌癥治療的一段時(shí)期。因此，療程可以歷時(shí)一個(gè)或多個(gè)治療周期，或者指對(duì)象每日或間斷地接受式I化合物劑量的一段時(shí)期。本文還進(jìn)一步提供了一種癌癥治療方法，它包括給癌癥患者施用足量的式I化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，使得對(duì)象血漿中化合物的AUC值達(dá)到約500至60,000ng*h/mL(納克×小時(shí)/毫升)或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC值達(dá)到約750至120,000ng*h/mL(納克×小時(shí)/毫升)。在其它這樣的實(shí)施例中，化合物的用量足以使對(duì)象血漿中化合物的AUC值達(dá)到約1,000至30,000ng*h/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC值達(dá)到約1,500至60,000ng*h/mL。在其它這樣的實(shí)施例中，對(duì)象血漿中化合物的AUC值約為2,000至15,000ng*h/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC值約為3,000至30,000ng*h/mL。另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽的用途，它們被用于制備治療癌癥的藥物(作為單位劑型)，其中藥物的每個(gè)單位劑量足以提供下列的至少一項(xiàng)(a)在施用于對(duì)象后，對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約20至4000ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約40至8000ng/mL；(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約10至2,000ng/mL或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度達(dá)到約20至4,000ng/mL；或者(c)在施用于對(duì)象后，對(duì)象血漿中化合物的AUC值達(dá)到約500至60,000ng*h/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC值達(dá)到約750至120,000ng*h/mL。在式I化合物用于制備癌癥治療藥物的用途的一些實(shí)施例中，每個(gè)單位劑量足以提供下列的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的Cmax到達(dá)約50至500ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max到達(dá)約100至1000ng/mL；(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度到達(dá)約20至1,000ng/mL或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度約達(dá)40至2,000ng/mL；或者(c)對(duì)象血漿中化合物的AUC到達(dá)約1,000至30,000ng*h/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC到達(dá)約1,500至60,000ng*h/mL。在其它實(shí)施例中，每個(gè)單位劑量足以提供下列中的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的Cmax約達(dá)50至250ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max約達(dá)100至500ng/mL；(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度約達(dá)40至500ng/mL或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度約達(dá)80至1,000ng/mL；或(c)對(duì)象血漿中化合物的AUC約為2,000至15,000ng*h/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC約為3,000至30,000ng*h/mL。在其它另一些實(shí)施例中，每個(gè)單位劑量足以提供下列的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的Cmax約達(dá)75至150ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max約達(dá)150至300ng/mL；或(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度約達(dá)40至250ng/mL或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度約達(dá)80至500ng/mL。在另一實(shí)施例中，每個(gè)單位劑量足以使對(duì)象血漿中化合物的Cmax約達(dá)100至2000ng/mL或使對(duì)象血液中化合物的Cmax約達(dá)200至4000ng/mL；或?qū)ο笱獫{中化合物的Cmax約達(dá)100至1000ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max約達(dá)200至2000ng/mL。通常，在此描述的式I化合物的用法中，一般使用該化合物的乳酸鹽來制備藥物。這樣的藥物適合于口服給藥。藥物的單位劑量形式包括(但并不限于)丸劑、膠囊、片劑、軟膠囊、小膠囊、懸浮液或水溶液。另外，本藥物也適合于用丸劑快速注射(short bolus)、緩慢輸注或長期輸注的方式注射給藥。式I、式II和式III的化合物可附有描述本發(fā)明的任一種方法的使用說明。因此，在一些實(shí)施例中，本發(fā)明至少一種式I、式II和/或與式III化合物，并附有治療癌癥方法或分析式I化合物的代謝情況的說明。本發(fā)明還進(jìn)一步提供了治療癌癥的方法，它包括給癌癥患者施用式I化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，其中在首次治療周期中化合物的施藥量為每日25mg，而后化合物的施用量隨著每個(gè)后續(xù)治療周期而逐漸提高，直至每日施用于對(duì)象的化合物的用量到達(dá)1500mg，或者在對(duì)象身上觀察到限制劑量的毒性。在這樣的實(shí)施例中，通?；衔锏氖┯昧吭谑状谓o藥后隨著每個(gè)后續(xù)治療周期而翻倍。在一些實(shí)施例中，治療周期包括每日施用相同量的化合物，持續(xù)7日，隨后7日停止施用。同樣地，在此描述的用式I化合物制備藥物的一些實(shí)施例中，藥物的每個(gè)單位劑量包含基于對(duì)象體重而定的每kg體重施用0.25至30mg化合物、其互變體和/或其鹽類。此外，藥物的每個(gè)單位劑量可以包含25至1500mg范圍內(nèi)的該化合物、其互變體和/或其鹽類。本藥物可以置于藥盒(kit)中，此藥盒含有7、14、21或28個(gè)上述的每日使用的單位劑量，以便適用于下述治療周期，所述治療周期為連續(xù)7、14、21或28日每日施用固定的藥量，隨后的7或14日則停止施用。另一方面，本發(fā)明提供了癌癥的治療方法，包括給癌癥患者施用足量的式I化合物 其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，并且使對(duì)象暴露于式II和式III的化合物中的一種或兩種 II或
其中，式II和式III化合物中的一種或兩種是通過對(duì)象對(duì)式I化合物的代謝而產(chǎn)生的，從而使得一種或多種式I、式II和式III化合物的合并Cmax在對(duì)象的血漿中達(dá)到約20至約4000ng/ml，或其中的一種或多種式I、式II和式III化合物的合并Cmax在對(duì)象的血液中達(dá)到約40至約8000ng/ml。而另一方面，本發(fā)明提供了治療癌癥的方法，它包括給癌癥患者施用足量的一種或多種選自下式的化合物 其活性代謝產(chǎn)物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，使得對(duì)象血漿中一種或多種化合物的合并Cmax達(dá)到約20至4000ng/mL，或?qū)ο笱褐幸环N或多種化合物的合并Cmax達(dá)到約40至8000ng/mL。在一些實(shí)施例中，一種或多種化合物的量使對(duì)象血漿中某一化合物的Cmax達(dá)到約35至2600ng/mL，或?qū)ο笱褐心骋换衔锏腃max達(dá)到約35至6000ng/mL。在其它一些實(shí)施例中，一種或多種化合物的量使對(duì)象血漿中某一化合物的Cmax達(dá)到約35至1200ng/mL，或?qū)ο笱褐心骋换衔锏腃max達(dá)到約50至2400ng/mL。在一些實(shí)施例中，將下式化合物
其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽施用于對(duì)象。在其它實(shí)施例中，將下式化合物 其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽施用于對(duì)象。在另一些其它實(shí)施例中，將下式化合物 其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽施用于對(duì)象。在確定式I化合物對(duì)特定疾病的安全性和/或功效時(shí)，重要的一點(diǎn)是在該化合物施用以后，能夠監(jiān)測到對(duì)象體內(nèi)化合物的藥物代謝動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)。因此，依照本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了測定對(duì)象體內(nèi)式I化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽的代謝情況的方法。本方法包括測定取自對(duì)象的一種或多種樣品(尿液、血液或組織)中該化合物的至少一種代謝產(chǎn)物的數(shù)量。可以通過本方法測定的代謝產(chǎn)物，包括具有式II的N-氧化物化合物 (該化合物也稱為4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-4-氧化哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基)]喹啉-2(1H)-酮)，以及具有式III的N-去甲基化合物
III(該化合物也稱為4-氨基-5-氟-3-[6-(哌嗪-1-基))-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮。在一些這樣的測定式I化合物的代謝情況的方法中，本方法包括測定式II的代謝產(chǎn)物和式III的代謝產(chǎn)物的數(shù)量。代謝產(chǎn)物的數(shù)量可以應(yīng)用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)來測定，包括紫外(UV)光譜或液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)。在本發(fā)明的其它方面，提供了測定對(duì)象體內(nèi)式I化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽的數(shù)量的方法。本方法包括在化合物施用于對(duì)象后，測定其在取自對(duì)象的樣品(尿液、血液或組織)中的數(shù)量。本方法還以可包含測定樣品中該化合物的代謝產(chǎn)物的數(shù)量。可被測定的代謝產(chǎn)物包括(但并不限于)式II的N-氧化物化合物和/或式III的N-去甲基化合物。在一些實(shí)施例中，本方法還包括在式I化合物施用于對(duì)象以后，在不同時(shí)間從對(duì)象身上提取兩種或多種樣品。另一方面，提供了將式I化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽用于癌癥治療的方法，該方法包括給癌癥患者施用一定量的所述化合物，該用量足以提供以下的至少一項(xiàng)(a)施用于對(duì)象后，對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約20至4000ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約40至8000ng/mL；(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約10至2,000ng/mL或施藥后24小時(shí)。對(duì)象血液中化合物的濃度達(dá)到約20至4,000ng/mL；或(c)施用于對(duì)象后，對(duì)象血漿中化合物的AUC值達(dá)到約500至60,000ng*h/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC值達(dá)到約750至120,000ng*h/mL。在將該化合物用于癌癥治療的方法的一些實(shí)施例中，每個(gè)單位劑量至少足以提供下列中的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的Cmax到達(dá)約50至500ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max到達(dá)約100至1000ng/mL；(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度到達(dá)約20至1,000ng/mL或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度約達(dá)40至2,000ng/mL；或(c)對(duì)象血漿中化合物的AUC到達(dá)約1,000至30,000ng*h/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC到達(dá)約1,500至60,000ng*h/mL。在將該化合物用于癌癥治療方法的其它實(shí)施例中，每個(gè)單位劑量足以提供下列中的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的Cmax約達(dá)50至250ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max約達(dá)100至500ng/mL；(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度約達(dá)40至500ng/mL或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度約達(dá)80至1,000ng/mL；或(c)對(duì)象血漿中化合物的AUC約為2,000至15,000ng*h/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC約為3,000至30,000ng*h/mL。在其它另一些使用該化合物作為癌癥治療方法的實(shí)施例中，每個(gè)單位劑量足以提供下列中的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的Cmax約達(dá)75至150ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max約達(dá)150至300ng/mL的；或(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度約達(dá)40至250ng/mL或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度約達(dá)80至500ng/mL。
在另一些實(shí)施例中，每個(gè)單位劑量足以使對(duì)象血漿中化合物的Cmax約達(dá)100至2000ng/mL或使對(duì)象血液中化合物的Cmax約達(dá)200至4000ng/mL；或者每一單位劑量足以使對(duì)象血漿中化合物的Cmax約達(dá)100至1000ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max約達(dá)200至2000ng/mL。還提供了將某一代謝產(chǎn)物用于測定式I的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽在對(duì)象體內(nèi)的代謝情況的用途，所述的代謝產(chǎn)物至少包含以下一種下式的N-氧化物 或下式的N-去甲基化合物 本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，所述的藥物組合物可通過將一種或多種本發(fā)明的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變體，與藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、粘合劑、稀釋劑等混合制備而成，從而用于治療或改善多種疾病。這樣的疾病包括(但并不限于)癌癥，其中包括前列腺癌、結(jié)直腸癌、乳房癌、多發(fā)性骨髓瘤、胰腺癌、小細(xì)胞癌、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、骨髓增生性疾病、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、慢性淋巴性白血病、肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、甲狀腺癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、腎細(xì)胞癌、胃癌、胃腸道基質(zhì)瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦癌或膀胱癌。進(jìn)一步指出，治療有效劑量是指本發(fā)明的一種或多種化合物的用量足以導(dǎo)致疾病癥狀改善。本發(fā)明的藥物組合物可通過本領(lǐng)域熟知的方法制造，例如傳統(tǒng)方法中的?；?、混合、溶解、膠囊化、凍干、乳化或研磨等技術(shù)。組合物可以是顆粒、粉末、片劑、膠囊、糖漿、栓劑、注射劑、乳劑、酏劑、懸浮液或溶液的形式。本組合物可為不同的給藥途徑而配制，例如，口服給藥、鼻內(nèi)給藥、經(jīng)粘膜給藥、直腸給藥、或皮下給藥，以及鞘內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)或心室內(nèi)注射。本發(fā)明的一種或多種化合物也可以是局部給藥而非全身給藥，比如以緩釋劑型注射給藥。給出以下劑型主要是用作舉例，而不解釋為對(duì)于本發(fā)明的限定。對(duì)于口服、口腔和舌下的給藥，粉末、懸浮液、顆粒、片劑、丸劑、膠囊、軟膠囊和小膠囊是可接受的固體劑型。這些可以通過諸如將本發(fā)明的一種或多種化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變體，與至少一種添加劑或賦形劑(如淀粉或其它添加劑)混合的方式制備。適合的添加劑或賦形劑有果糖、蔗糖、乳糖、纖維素糖、甘露醇、麥芽糖醇、右旋糖苷、山梨糖醇、淀粉、瓊脂、藻酸鹽、甲殼質(zhì)、殼聚糖、果膠、黃蓍膠、阿拉伯膠、明膠、膠原、酪蛋白、白蛋白、合成或半合成的聚合物或甘油酯、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素和/或聚乙烯吡咯烷酮?？诜┬瓦€可以含有其它成份以協(xié)助給藥，例如惰性的稀釋劑，或潤滑劑(如硬脂酸鎂)，或防腐劑(如對(duì)羥基苯甲酸酯或山梨酸)，或抗氧化劑(如抗壞血酸、生育酚或半胱氨酸)，崩解劑，粘合劑，增稠劑，緩沖劑，甜味劑，增香劑或加香劑。此外，染料或色素也可被添加作為標(biāo)示。片劑和丸劑還可用本領(lǐng)域已知的合適包被材料加以處理。適于口服的液體劑型可以為藥學(xué)上可接受的乳劑、糖漿、酏劑、懸浮液、漿液和溶液的形式，還可以含有非活性稀釋劑(如水)。藥物制劑可用無菌液體制成液體懸浮液或溶液，可用的液體例如(但并不限于)，油、水、醇及其組合。還可以添加藥學(xué)上合適的表面活性劑、懸浮劑、乳化劑，以便用于口腔或胃腸道給藥。如上所述，懸浮液可包括油。這樣的油包括(但并不限于)花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油和橄欖油。懸浮液制劑還可包括由脂肪酸形成的酯類，比如油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、脂肪酸甘油酯和乙酰脂肪酸甘油酯。懸浮液制劑可包括各種醇，例如(但并不限于)，乙醇、異丙醇、十六醇、甘油和丙二醇。諸如但不限于聚乙二醇、石油烴(如礦物油和凡士林)的醚類以及水也可用于懸浮液劑型。對(duì)于鼻內(nèi)給藥(例如將化合物遞送至大腦)，或通過吸入給藥(如通過肺遞送藥物)，藥物制劑可以是溶液、噴霧、干粉，或氣溶膠，這些藥物可以含有任何合適的溶劑也可任選地加入其它化合物，比如(但不限于)，穩(wěn)定劑、抗菌劑、抗氧化劑、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、生物可利用性改良劑(bioavailabilitymodifiers)及其混合物。鼻內(nèi)給藥制劑的和給藥方法的例子，可在WO 01/41782，WO 00/33813，WO 91/97947，美國專利號(hào)6,180,603，和美國專利號(hào)5,624,898中找到。適合于氣溶膠配方的氣霧推進(jìn)劑可以含有壓縮空氣、氮?dú)?、二氧化碳或低沸點(diǎn)的烴類溶劑。本發(fā)明的一種或多種化合物能夠十分方便地由噴霧器等裝置以氣溶膠噴霧的形式遞送?？勺⑸鋭┬屯ǔ０ㄋ畱腋∫夯蛴蛻腋∫?，懸浮液可用合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑制備?？勺⑸鋭┬涂梢允侨芤籂顟B(tài)也可以是懸浮液形式，它們由溶劑或稀釋劑制備。可接受的溶劑或載體包括無菌水、Ringer氏溶液或等滲的鹽水溶液。無菌油可作為溶劑或懸浮劑使用。油類或脂肪酸優(yōu)先為非揮發(fā)性的，包括天然的或合成的油類、脂肪酸、甘油一酯、甘油二酯或甘油三酯。對(duì)于注射劑，藥物制劑可以是適合用合適溶液重建的粉末。這樣的粉末包括(但并不限于)冷凍干燥粉末、旋轉(zhuǎn)干燥粉末或噴霧干燥粉末，無定形粉末，顆粒，沉淀物，或微粒。對(duì)于注射劑，該藥物配方可以任選地含有穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、生物可利用性改良劑及其混合物。該化合物也可以制備成適合胃腸外給藥的形式，例如通過丸劑注射(bolus injection)或持續(xù)輸注給藥。注射的單位劑型可以在安瓿中，也可以在多劑量的容器中。因此，在描述于此的本癌癥治療方法中，該化合物可以通過注射(如短期丸劑注射(a short bolus)、緩慢輸注或長期輸注)給藥。每日的注射次數(shù)可以是一次、兩次、三次或四次。通常，短期丸劑注射(a short bolus)所需的注射時(shí)間約為1至30分鐘；緩慢輸注通常約需30分鐘至6小時(shí)時(shí)間；長期輸注通常要持續(xù)6小時(shí)以上至約7天的時(shí)間。對(duì)于直腸給藥，藥物制劑可以是能在腸、乙狀結(jié)腸和/或直腸內(nèi)釋放出化合物的栓劑、藥膏、灌腸劑、片劑或霜?jiǎng)┑男问?。直腸栓劑是將一種或多種本發(fā)明的化合物、或藥學(xué)上可接受的鹽或該化合物的互變體，與可接受的賦形劑(例如，可可油或聚乙二醇)混合而制備的，其在正常的貯藏溫度下呈固態(tài)，而在體內(nèi)適合藥物釋放的溫度下(如在直腸中)呈現(xiàn)液態(tài)。在制備軟膠型制劑和栓劑時(shí)也可使用油類。水、鹽水、含水葡萄糖和相關(guān)糖溶液，以及甘油都可用于懸浮型制劑的制備，所述的懸浮型制劑還可含有懸浮劑(如果膠、卡波姆、甲基纖維素、羥丙基纖維素或羧甲基纖維素)，以及緩沖液和防腐劑。除了上述那些有代表性的劑型，藥學(xué)上可接受的賦形劑和載體通常是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所知的，因此也包括于本發(fā)明中。這樣的賦形劑和載體在諸如“Remington’s Pharmaceutical Sciences”Mack出版公司，新澤西州(1991)的書籍中都有描述，該文獻(xiàn)在此引入作為參考。本發(fā)明的制劑可以設(shè)計(jì)為如下所述的適合短效、速釋、長效和持續(xù)釋放的劑型。因此，這些藥物也可以制備成控釋或緩釋的劑型。本組和物還可以含有諸如膠束或脂質(zhì)體的物質(zhì)，或其它的膠囊形式，或者可以用長期釋放的方式給藥，以達(dá)到長期的藥物貯藏和/或輸送效果。因此，藥物可以壓縮入小球或圓柱體中并植入肌內(nèi)或者皮下，作為長效注射劑(depotinjections)或作為植入物(如移植片)。這樣的植入物可以使用已知的惰性材料，如硅樹脂和可生物降解的聚合物來制備。治療有效劑量是指導(dǎo)致癥狀改善的化合物的量。具體劑量可依照疾病情況、年齡、體重、總體健康狀況、性別、對(duì)象的飲食、劑量間隔、給藥途徑、排泄率和藥物聯(lián)合而進(jìn)行調(diào)整。任何含有有效藥量的上述劑型都正好屬于常規(guī)實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，也因此正好落于本發(fā)明的范圍內(nèi)。治療有效劑量可依照給藥途徑和劑型而有所變化。本發(fā)明優(yōu)選的一種或多種化合物是具有高治療指數(shù)的藥物。治療指數(shù)是毒性和療效之間的劑量比，可以用LD50和ED50之間的比率來表示。LD50是指50％群體的致死劑量，而ED50是指50％群體的治療有效劑量。LD50和ED50可通過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)程序進(jìn)行測定。本發(fā)明還提供了增強(qiáng)人類或非人類動(dòng)物抗癌能力的方法。本方法包括給所述的哺乳動(dòng)物或非人類動(dòng)物施用有效量的本發(fā)明的化合物或組合物。本發(fā)明的化合物的有效用量包括那些能夠抑制RTK的用量，這些用量可以用諸如在此處描述的測定方法進(jìn)行檢測，或者采用任何其它的本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法加以檢測，這些方法通過G-蛋白偶聯(lián)受體的激活來檢測生化途徑中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，例如通過測定cAMP水平的上升并與對(duì)照模型的比較。有效用量還可以包括能夠通過抑制RTK來使得RTK紊亂癥狀減輕的用量。RTK紊亂癥、或RTK介導(dǎo)的疾病可以通過所提供的那些方法加以治療，包括任何涉及RTK的生物紊亂或疾病，或者抑制RTK后導(dǎo)致紊亂或疾病狀態(tài)下有缺陷的生化途徑加以改善的生物紊亂或疾病。此類疾病的例子有癌癥，例如前列腺癌、結(jié)直腸癌、乳房癌、多發(fā)性骨髓瘤、胰腺癌、小細(xì)胞癌、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、骨髓增生性疾病?；衔?的合成已在美國專利號(hào)6,605,617中公開。為了確定化合物2和3的種類，化合物1的代謝產(chǎn)物(化合物2和3)是獨(dú)立合成的，如實(shí)施例6中所示。因此，通過參考以下的實(shí)施例，所概述的本發(fā)明將更容易被理解。以下的實(shí)施例僅以詮釋的方式給出，而并不用于限制本發(fā)明。
具體實(shí)施例方式以下的縮寫和術(shù)語通篇使用于各實(shí)施例中ATP三磷酸腺苷AUC曲線下面積BSA牛血清白蛋白DMSO 二甲亞砜EDTA 乙二胺四乙酸ERK胞外調(diào)節(jié)激酶
HepesN-(2-羥乙基)哌嗪-N’-(2-乙磺酸)HPLC 高效液相色譜HMVEC人微血管內(nèi)皮細(xì)胞kg 千克LC 液相色譜MAPK 絲裂原活化蛋白激酶MS 質(zhì)譜MeOH甲醇mg 毫克mL 毫升MTS [3-(4，5-二甲基-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑，內(nèi)鹽nM 納摩爾PBS 磷酸鹽緩沖液NMR 核磁共振譜RT-PCR 逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)SCF 干細(xì)胞因子TFA 三氟乙酸T1/2半衰期，即50％的化合物從生物系統(tǒng)中被清除所需的時(shí)間μg 微克μL 微升μM 微摩爾UV 紫外光譜實(shí)施例1 測試了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮(化合物1)對(duì)于大量的癌細(xì)胞系和原代非惡性細(xì)胞系的抗增生活性。方法如下細(xì)胞鋪于96孔板；讓貼壁細(xì)胞系的聚集3至5個(gè)小時(shí)后，添加化合物的稀釋液，3天后，通過添加MTS溶液(Promega)來測定活細(xì)胞的數(shù)目。檢測490nm處的吸光度，利用非線性回歸法計(jì)算EC50的值。對(duì)于HMVEC的測定，在有5ng/mLVEGF存在的情況下，將化合物與細(xì)胞孵育3天。對(duì)于SCF/c-KIT測定，TF-1和H526細(xì)胞分別在有40ng/mL和100ng/mL重組SCF存在下孵育3天。通過加入MTS溶液和測定490nm處的吸光度來檢測細(xì)胞的增殖情況。用非線性回歸法計(jì)算EC50。結(jié)果列于表1。
在癌細(xì)胞系的和上皮細(xì)胞的子集中，細(xì)胞增殖受到抑制，其EC5050nM，這與它們依賴于化合物1所靶向的RTK是一致的(MV4；11組成型表達(dá)有活性的FLT3；HMVECVEGFR2介導(dǎo)的增殖；TF-1c-KIT介導(dǎo)的增殖)，KM12L4a細(xì)胞系除外。雖然此細(xì)胞系確實(shí)表達(dá)一些靶向的RTKs(如通過RT-PCR測定的VEGFR 1/2和PDGFR)，但是實(shí)驗(yàn)表明，這些RTKs的單獨(dú)抑制并不能充分解釋所觀察到的化合物1的有效抗增殖作用。這一發(fā)現(xiàn)提示，此細(xì)胞系中，由化合物1介導(dǎo)的抗增殖作用是由于多種RTKs受到抑制而引起的，或者是由一些尚未明確的作用所引起的。
與EC50在1至10μM之間的化合物1一同孵育時(shí)，大多數(shù)的細(xì)胞系均顯示了抗增殖反應(yīng)，其中包括兩種原代細(xì)胞系HMEC(正常的人乳腺上皮細(xì)胞)和PrEC(正常的人前列腺上皮細(xì)胞)。與體外結(jié)果一致的是，化合物1有效地抑制KM12L4a和MV4；11異種移植物在小鼠體內(nèi)的生長。
表1

a除非另有說明，所有的測試細(xì)胞系均為人體來源。
實(shí)施例2 通過2周的毒性研究，化合物1的兩個(gè)代謝產(chǎn)物在混合大鼠血漿中被識(shí)別和部分鑒定。所分析的對(duì)象為每日1次口服劑量30或80mg/kg的動(dòng)物組，在第1天和第14天服藥后用UV和LC/MS分析動(dòng)物血漿。兩個(gè)鑒別的代謝產(chǎn)物為式II的哌嗪N-氧化物化合物(化合物2)和式III的N-去甲基化合物(化合物3)(這些化合物的合成及特征見實(shí)施例6)。代謝產(chǎn)物水平的評(píng)估(基于紫外吸收結(jié)果以及與以前分析中相同樣品中化合物1的已知定量水平的比較而得出的)，在表2中給出。已發(fā)現(xiàn)，在所有快速給藥的混合血漿樣品中，N-去甲基代謝產(chǎn)物的豐度均比化合物1的豐度要低得多。有關(guān)N-氧化物代謝產(chǎn)物的豐度，除了在80mg/kg劑量組第14天的24小時(shí)和30mg/kg劑量組第1天的1-2小時(shí)以外，其余各觀察到的豐度值都比化合物1的豐度值低(表2)。代謝情況并不隨著劑量或劑量持續(xù)時(shí)間的變化而變化。通常隨著劑量的增加，代謝產(chǎn)物的水平會(huì)隨化合物1的水平一同升高。
對(duì)于兩個(gè)劑量組，不同的劑量持續(xù)時(shí)間(1天或是14天)似乎并未引起單獨(dú)的血漿代謝產(chǎn)物水平的升高(表2)，也沒有引起代謝產(chǎn)物相對(duì)于化合物1水平的升高。化合物1的水平隨著劑量的持續(xù)時(shí)間的延長而降低，這也可以從代謝產(chǎn)物水平的降低中得以顯現(xiàn)。這提示，時(shí)間依賴型的暴露于化合物1的減少并不反映于增加的代謝。第14天，24小時(shí)的樣品中所含的化合物1和其代謝產(chǎn)物的水平低于第1天24小時(shí)的樣品中這兩者的水平，這就說明使用每天1次30或80mg/kg的劑量的療法時(shí)，不會(huì)有代謝產(chǎn)物或化合物1的蓄積。在80mg/kg劑量組的所有檢測時(shí)間點(diǎn)和30mg/kg劑量組的所有時(shí)間點(diǎn)(除了第1天后24小時(shí)這一時(shí)間點(diǎn)外)，N-氧化物代謝產(chǎn)物的豐度要高于N-去甲基代謝產(chǎn)物的豐度。N-去甲基代謝產(chǎn)物水平的下降較化合物1水平的下降緩慢，這就提示該代謝產(chǎn)物具有較長的T1/2，同時(shí)表明此代謝產(chǎn)物的血漿水平很可能由其清除速率而并非其生成的速率所決定(而N-氧化物則很可能與此相反)。
表2.大鼠血漿中化合物1水平和化合物1的代謝產(chǎn)物的評(píng)估水平

1代謝產(chǎn)物的評(píng)估水平基于對(duì)代謝產(chǎn)物紫外吸收面積與化合物1紫外面積的比較，并且使用先前報(bào)道的化合物1的水平。2在先前的另一項(xiàng)單獨(dú)研究中，此處分析所用的相同血漿樣品中化合物1的水平已進(jìn)行了定量。
實(shí)施例3受體酪氨酸激酶的體外激酶檢測 一系列蛋白酪氨酸激酶的激酶活性采用以下方式進(jìn)行測定提供ATP以及合適的含有可以發(fā)生磷酸化作用的酪氨酸殘基的多肽或蛋白質(zhì)，并分析磷酸基團(tuán)向酪氨酸殘基的轉(zhuǎn)移。對(duì)應(yīng)于FLT-1(VEGFR1)、VEGFR2、VEGFR3、Tie-2、PDGFRα、PDGFRβ和FGFR1受體的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)域的重組蛋白，是利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(InVitrogen)在Sf9昆蟲細(xì)胞中表達(dá)的，并且可以通過Glu抗體相互作用(適合于帶有Glu-抗原決定簇標(biāo)記的構(gòu)建物)或通過金屬離子色譜(適合于帶有His6(SEQ ID NO1)的構(gòu)建物)進(jìn)行純化。對(duì)于每項(xiàng)檢測，測試的化合物都用DMSO連續(xù)稀釋，然后與加了ATP的合適的激酶反應(yīng)緩沖液相混合。添加激酶蛋白和合適的生物素化的多肽底物，使得終體積達(dá)到50-100μL，該反應(yīng)物在室溫下孵育1-3小時(shí)，然后加入25-50μL的45mM EDTA和50mM Hepes(pH 7.5)終止反應(yīng)。終止的反應(yīng)混合物(75μL)轉(zhuǎn)移至鏈親和素包被的微量滴定板(Boehringer Mannheim)中并孵育1小時(shí)。磷酸化的多肽產(chǎn)物用DELFIA時(shí)差熒光系統(tǒng)(Wallac或PE Biosciences)檢測，其中所使用的抗磷酸酪氨酸抗體PT66是用銪標(biāo)記的，并且改進(jìn)之處在于在DELFIA檢測緩沖液中添加了1mM MgCl2用于稀釋抗體。時(shí)差熒光在Wallac 1232 DELFIA熒光儀或PE Victor II多信號(hào)讀取儀上讀取。每個(gè)化合物的50％抑制(IC50)濃度都利用XL Fit數(shù)據(jù)分析軟件用非線性回歸加以計(jì)算。
FLT-1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR3、Tie-2和FGFR1激酶，在50mMHepes(pH 7.0)、2mM MgCl2、10mM MnCl2、1mM NaF、lmM DTT、1mg/mL BSA、2μM ATP和0.20-0.50μM相應(yīng)的生物素化多肽底物存在下，加以檢測。添加的FLT-1、VEGFR2、VEGFR3、Tie-2和FGFR1激酶分別為0.1μg/mL、0.05μg/mL或0.1μg/mL。對(duì)于PDGFR激酶檢測，使用120μg/mL的酶與上述相同的緩沖條件，除了將ATP和肽底物的濃度改成1.4μM ATP和0.25μM生物素-GGLFDDPSYVNVQNL-NH2(SEQ ID NO2)肽底物。對(duì)于FLT-1、VEGFR2、VEGFR3和FGFR1，以上各種化合物顯示的IC50值均低于10μM。
重組的具有活性的酪氨酸激酶Fyn和Lck是可商業(yè)化獲得的，可購自Upstate Biotechnology。對(duì)于每項(xiàng)檢測，測試的化合物在DMSO中連續(xù)稀釋，然后與合適的加了10nM33P γ-標(biāo)記ATP的激酶反應(yīng)緩沖液相混合。添加激酶蛋白以及合適的生物素化多肽底物后，使得終體積達(dá)到150μL。反應(yīng)物在室溫下孵育3-4小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移至含有100μl終止反應(yīng)緩沖液(100mM EDTA和50μM未標(biāo)記的ATP)的鏈親和素包被的微量滴定板(Thermo Labsystems)而終止反應(yīng)。孵育1小時(shí)后，用PBS清洗鏈親和素板，并在每個(gè)孔中添加200μL Microscint 20閃爍溶液。將板封閉后，使用TopCount進(jìn)行計(jì)數(shù)。利用XL Fit數(shù)據(jù)分析軟件使用非線性回歸計(jì)算每個(gè)化合物的50％抑制(IC50)濃度。
Fyn、Lck和c-ABL的激酶反應(yīng)緩沖液含有50mM Tris-HCl(pH 7.5)、15mM MgCl2、30mM MnCl2、2mM DTT、2mM EDTA、25mM β-甘油磷酸、0.01％BSA/PBS、0.5μM適合的多肽底物(生物素化的Src多肽底物對(duì)Fyn和Lck，生物素-GGGGKVEKIGEGTYGVVYK-NH2(SEQ ID NO3))、1μM未標(biāo)記ATP和1nM激酶。
c-Kit和FLT-3的激酶活性采用如下方法測定提供ATP和合適的含有可進(jìn)行磷酸化作用的酪氨酸殘基的多肽或蛋白質(zhì)，檢測磷酸基團(tuán)對(duì)酪氨酸殘基的轉(zhuǎn)移。c-Kit和FLT-3受體的胞質(zhì)域所對(duì)應(yīng)的重組蛋白是買來的(Proquinase)。一種代表性化合物，如4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮在DMSO中稀釋，然后與加了ATP的如下所述的激酶反應(yīng)緩沖液混合用于測試。加入激酶蛋白(c-Kit和FLT-3)和生物素化多肽底物(生物素-GGLFDDPSYVNVQNL-NH2(SEQ ID NO2))，使得終體積達(dá)100μL。這些反應(yīng)物在室溫下孵育2小時(shí)，然后添加50μL的45mM EDTA和50mM HEPES(pH 7.5)終止反應(yīng)。終止的反應(yīng)混合物(75μL)轉(zhuǎn)移至鏈親和素包被的微量滴定板(Boehringer Mannheim)并孵育1小時(shí)。磷酸化的肽產(chǎn)物用DELFIA時(shí)差熒光系統(tǒng)(Wallac or PE Biosciences)檢測，所使用的抗磷酸酪氨酸抗體PT66是用銪標(biāo)記的，并且改進(jìn)之處在于在DELFIA檢測緩沖液中添加了1mM MgCl2用于稀釋抗體。時(shí)差熒光在Wallac 1232DELFIA熒光儀或PE Victor II多信號(hào)讀取儀上讀取。每個(gè)化合物的50％抑制(IC50)濃度都利用XL Fit數(shù)據(jù)分析軟件用非線性回歸加以計(jì)算。
FLT-3和c-Kit激酶在50mM Hepes(pH 7.5)、1mM NaF、2mM MgCl2、10mM MnCl2和1mg/mL BSA、8μM ATP和1μM相應(yīng)的生物素化多肽底物(生物素-GGLFDDPSYVNVQNL-NH2(SEQ ID NO2))存在下進(jìn)行檢測。FLT-3和c-Kit激酶在濃度為2nM下進(jìn)行檢測。
檢測了化合物1的代謝產(chǎn)物的IC50值，并示于表3，與化合物1的IC50進(jìn)行比較。
表3.

實(shí)施例4 此項(xiàng)單劑研究評(píng)估了，在KM12L4a人結(jié)腸癌模型中化合物1的每日口服劑量。
在7-8周齡的雌性Nu/Nu小鼠(Charles River)的右側(cè)腹部，皮下接種2×106個(gè)KM12L4a細(xì)胞。7天后當(dāng)平均腫瘤體積達(dá)到125mm3時(shí)開始治療。這天定為研究日1。化合物1用10mM的H3PO4制備成溶液形式，通過管飼的方式口服給藥。
本項(xiàng)研究包括7個(gè)治療組(n＝10/組)載體(水)口服(p.o.)，1次/日(q.d.)；六個(gè)施用化合物1組，劑量為3，10，30，100，200，300mg/kg口服(p.o.)，1次/日(q.d.)。
在不同天內(nèi)，從每個(gè)劑量組的個(gè)別動(dòng)物身上抽取血漿樣品，以此測定化合物1在荷瘤小鼠體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征(N＝2/時(shí)間點(diǎn)/劑量組)。在第22日給藥后的8和24小時(shí)，檢測從100和200mg/kg劑量組的動(dòng)物身上采集的樣品組織和腫瘤中化合物1的濃度(N＝2/時(shí)間點(diǎn)/劑量組)。
血漿化合物1的濃度用未經(jīng)確證的LC/MS/MS分析來測定，其校正范圍為1-8000ng/mL，定量下限(LLOQ)為1ng/mL(Charles River Laboratories，Worcester，MA)。組織和腫瘤中化合物1的濃度還使用另一未經(jīng)確證的LC/MS/MS分析而測定，其校正范圍為20至43740ng/g，定量下限(LLOQ)為20ng/g。
合并的藥代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)(Cmax和AUC)采用標(biāo)準(zhǔn)的非區(qū)域化分析獲得，即在每個(gè)取樣日分析各劑量組的平均血漿化合物的濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)(WinNonlin Professional，版本4)。報(bào)道的AUC值是用3個(gè)濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)點(diǎn)確定的。報(bào)道的給藥前的濃度值是剛好在給藥前所觀測到的濃度。
通過4-7日的治療，所有的劑量組中均觀察到顯著的劑量依賴性的腫瘤生長抑制(見表4)。計(jì)算所得的ED50值為17mg/kg。在大部分的施用量為200和300mg/kg化合物1的小鼠中，觀察到的腫瘤消退程度均超過其初始大小的50％，然而這些劑量并非在整個(gè)研究期間均可被耐受。到第12-16天，施用300mg/kg藥量進(jìn)行治療的小鼠其體重降低了20-30％并被無痛處死。施用200mg/kg藥量進(jìn)行治療的小鼠，其中的十分之一到第14天有22％的體重降低并被無痛處死，其余小鼠降低的體重超過25％，于第21-24日被無痛處死。以100mg/kg藥量持續(xù)37天給藥的小鼠，其體重保持在初始體重的98％；在這個(gè)劑量下，腫瘤也保持穩(wěn)定(圖1)。載體組的小鼠在第9日病倒，并計(jì)算腫瘤生長抑制(TGI)(表4)。
表4.化合物1的劑量反應(yīng)活性
在給藥次日(第2日)，化合物1的血漿濃度在所有劑量組中均隨著劑量(表5)成比例地升高。在至少2周施用不同劑量的藥物后，血漿濃度與第2日的濃度仍具有可比性，這表示在每日一次給藥的情況下，藥物在小鼠內(nèi)無蓄積(表5)。同樣地，收集于第3、8和15日的化合物1的前劑量血漿濃度在每個(gè)劑量組中是相似的，這就表示第2日后達(dá)到了穩(wěn)態(tài)。因此，這些數(shù)據(jù)提示化合物1在荷瘤小鼠中顯示出劑量非依賴性和時(shí)間非依賴性的藥物代謝動(dòng)力學(xué)。
35-60％的腫瘤生長抑制分別在10和30mg/kg劑量組中觀察到。用Cmax和AUC值可以評(píng)估對(duì)應(yīng)的化合物1的血漿接觸劑量，其范圍分別為163-742ng/mL和1420-5540ng*hr/mL(圖2)。給藥前，相應(yīng)的血漿濃度在2-135ng/mL之間。
表5.以每日1次口服劑量給SC KM1214a荷瘤小鼠施藥后，化合物1的復(fù)合藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)和血漿濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)

1根據(jù)3個(gè)濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)對(duì)而計(jì)算出的AUC-未測定*給藥前濃度 在第22日的2個(gè)取樣時(shí)間(施藥后的8和24小時(shí))時(shí)，100和200mg/kg的劑量組，其組織中化合物1的濃度高于血漿中的濃度(表6)。腦和心臟的化合物1的濃度較血漿中的濃度高13至34倍；但是在這兩個(gè)劑量組中，施藥后的8或24小時(shí)時(shí)，肝、肺和腎的濃度較血漿中濃度高40至126倍。通常，在8小時(shí)的組織-血漿濃度比與在24小時(shí)的具有可比性。此外，24小時(shí)處的組織濃度總是低于8小時(shí)處的濃度低。結(jié)合起來，這些結(jié)果提示組織中化合物1的濃度似乎與血漿中的濃度平行下降。因此，化合物1似乎與血漿成比例地廣泛分布于組織中(包括腦)，但是并不隨著多次口服給藥而在組織中蓄積。
表6.以100或200mg/kg/日的劑量每日1次給KM12L4a荷瘤小鼠施用化合物1后，第22日時(shí)組織、腫瘤和血漿中的平均濃度

N＝2/時(shí)間點(diǎn)/劑量組，除了在200mg/kg組中24hr時(shí)，N＝1 在100和200mg/kg劑量組中，每組在第22日的2個(gè)取樣時(shí)間(施藥后8和24小時(shí))時(shí)，腫瘤化合物1的濃度比血漿中的濃度高37至354倍。然而，在這兩個(gè)劑量組中，施藥后24小時(shí)的腫瘤濃度僅比施藥后8小時(shí)的濃度低17至65％，這就提示該化合物從腫瘤中清除的速率比它從其它正常組織中(如腦、心、肝、肺和腎)清除的速率要慢。因此，相對(duì)于血漿，化合物1似乎更廣泛地分布于腫瘤，但是相對(duì)于在血漿或正常組織中，該化合物在腫瘤中則更優(yōu)先滯留。
總的來說，化合物1的功效和耐受性是與劑量相關(guān)的，4至7日治療后出現(xiàn)顯著的抑制效果。在300和200mg/kg組中觀察到腫瘤消退；這些劑量是每日耐受的，分別持續(xù)約14和21日。體重降低是與毒性相關(guān)的臨床癥狀。100mg/kg的劑量耐受了37日，無不利的臨床癥狀出現(xiàn)，與對(duì)照相比80％的腫瘤生長得到抑制。30mg/kg的劑量抑制60％的腫瘤生長?；衔?在荷瘤小鼠中呈現(xiàn)出不依賴于劑量和時(shí)間的藥代謝動(dòng)力學(xué)。與35-60％的腫瘤生長抑制有關(guān)的血漿中化合物1的Cmax、AUC和Gmin值的范圍分別在163-742ng/mL、1420-5540ng*hr/mL和2-135ng/mL?；衔?廣泛分布于組織，然而似乎不隨著多次口服給藥而在組織中蓄積?？诜o藥后，相對(duì)于在其它組織，化合物1有在腫瘤中優(yōu)先滯留的傾向。
實(shí)施例5 此項(xiàng)單劑研究評(píng)估了，在PC3人前列腺腫瘤模型中，化合物1的間隔口服劑量。
雄性SCID小鼠，9-10周齡，腹部皮下接種5百萬個(gè)PC3人前列腺細(xì)胞。當(dāng)平均腫瘤體積達(dá)到150mm3時(shí)，開始治療。此日即定為研究日1?；衔?制備為水溶液，經(jīng)管飼口服給藥。
本研究包括5個(gè)治療組(n＝10/組)載體(水)口服(p.o.)，1次/日(q.d.)；和100mg/kg化合物1劑量的四個(gè)組(1次/日(q.d.)，1次/2日(q.2.d.)，1次/3日(q.3.d.)，1次/4日(q.4.d.))。
如表7中所示，在所有治療組中均觀察到顯著的和近似的腫瘤抑制結(jié)果。對(duì)于每日給藥組，此研究在第11日暫停。對(duì)于剩余組，此研究于研究的第25日結(jié)束，然后測量平均腫瘤體積并與載體組比較。作為毒性的臨床指征，每組的體重降低百分率均被測定。
表7

實(shí)施例6 為了確定化合物1的已確認(rèn)的代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)，代謝產(chǎn)物被單獨(dú)合成。
化合物2(化合物1的N-氧化物代謝產(chǎn)物)，如以下流程中所示進(jìn)行合成?；衔?在乙醇、二甲基乙酰胺和過氧化氫的混合物中加熱。反應(yīng)接近完成時(shí)，用過濾的方式分離化合物2，并用乙醇清洗。如果必要，產(chǎn)物可通過柱色譜而進(jìn)一步純化。
化合物3(化合物1的N-去甲基代謝產(chǎn)物)，如以下流程中所示進(jìn)行合成。用哌嗪處理5-氯-2-硝基苯胺產(chǎn)生化合物4，隨后用叔丁氧基羰基(Boc)保護(hù)化合物4，產(chǎn)生化合物5。還原硝基，接著與3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯縮合得到化合物6。用六甲基二硅胺烷鉀(potasssium hexamethyldisilazide)作為堿，將化合物6與6-氟氨基苯甲腈縮合，得到化合物7。粗產(chǎn)物7用鹽酸水溶液處理，產(chǎn)生所需的代謝產(chǎn)物，純化后得到的是黃/棕色固體。
實(shí)施例7化合物1的乳酸鹽的制備 3000mL 4-頸的帶夾套的燒瓶安裝了冷凝器、溫度探頭、N2氣體進(jìn)口和機(jī)械攪拌器。反應(yīng)容器用N2吹洗至少15分鐘，然后充入4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基))-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮(484g，1.23mol)。制備D，L-乳酸鹽(243.3g，1.72mol單體-見以下段落)、水(339mL)和乙醇(1211mL)的溶液，然后將其加入反應(yīng)瓶。以中等速率開始攪拌，加熱反應(yīng)物至其內(nèi)部溫度達(dá)到68-72℃。將反應(yīng)的內(nèi)部溫度保持在68-72℃，維持15-45分鐘，然后停止加熱。得到的混合物用10-20微米的玻璃過濾器過濾，收集濾液至12L的燒瓶內(nèi)。12L的燒瓶安裝了內(nèi)部溫度探頭、回流冷凝器、附加漏斗、氣體進(jìn)出口和上方攪拌器。然后，該濾液以中等的速率攪拌，并加熱至回流(內(nèi)部溫度達(dá)到約78℃)。在維持緩和的回流時(shí)，在20分鐘的時(shí)間內(nèi)將乙醇(3,596mL)充入燒瓶。然后，在15-25分鐘內(nèi)將反應(yīng)瓶冷卻至其內(nèi)部溫度的范圍約為64-70℃，并且維持該溫度約30分鐘。檢查反應(yīng)器內(nèi)是否出現(xiàn)結(jié)晶。如果未呈現(xiàn)結(jié)晶，那么將4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮(484mg，0.1mol％)的乳酸鹽結(jié)晶加入燒瓶，在64-70℃的溫度條件下攪拌30分鐘，再次檢查燒瓶內(nèi)是否有結(jié)晶。一旦出現(xiàn)結(jié)晶，就將攪拌速率降低，并且在64-70℃再攪拌90分鐘。然后，在約2小時(shí)的時(shí)間內(nèi)將反應(yīng)物冷卻至0℃，得到的混合物用25-50微米的玻璃濾器過濾。反應(yīng)器用乙醇(484mL)清洗并攪拌直至內(nèi)部溫度約為0℃。用冷乙醇清洗濾餅，并重復(fù)此步驟2次。收集到的固體在真空烘箱內(nèi)50℃條件下真空干燥至恒重，產(chǎn)出510.7g(85.7％)的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基))-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮的黃色乳酸鹽結(jié)晶。通常，在過濾的過程中會(huì)使用橡膠屏障(rubber dam)或惰性條件。雖然干燥的固體似乎不是非常吸濕，但濕濾餅容易吸收水分而變得有粘性。應(yīng)小心以避免濕濾餅過久地暴露于空氣中。
市售的乳酸通常含約8-12％w/w的水，且除了單體乳酸外還含有二聚體和三聚體。乳酸二聚體和單體的摩爾比通常約為1.0∶4.7。商品等級(jí)的乳酸可用于上一段中所述的程序，因?yàn)閱稳樗猁}優(yōu)選從反應(yīng)混合物中沉淀出來。乳酸單體按照以下程序純化。
實(shí)施例8 此項(xiàng)研究評(píng)估了化合物1在添加FGF的Matrigel模型中的抗血管生成潛力。
11-12周齡的雌性BDF1小鼠(Charles River，Wilmington，MA)，皮下植入0.5mL添加了2μg FGF-2的Matrigel(BD生物科學(xué)，Bedford，MA)。通過測定從動(dòng)物中取出的Matrigel塞中的血色素水平而定量檢測添加了FGF-2后的血管形成情況(血管再生或血管生成)。
實(shí)驗(yàn)藥物的口服給藥開始于植入Matrigel的前1天，并以每日1次的劑量持續(xù)施藥8次?；衔?用10mM H3PO4制備為溶液。12個(gè)治療組包括載體(10mM H3PO4)口服(p.o.)，1次/日(q.d.)×8日(2個(gè)對(duì)照組；植入了未添加FGF的Matrigel(基線血色素水平)或添加FGF的Matrigel(陽性對(duì)照)的小鼠)；化合物1以3、10、30、100、200、300mg/kg口服(p.o.)，1次/日(q.d.)×8日的劑量給藥。每組有8只小鼠，除了給藥劑量為200和300mg/kg的小鼠組為每組4只。
將施用化合物治療的小鼠的血色素水平與用載體治療的小鼠相比，所得的血色素的百分比抑制率可表明此化合物的抗血管生成的功效。結(jié)果以每個(gè)Matrigel塞的總血色素(mg/dL)表示。ED50定義為有效抑制約50％血管生成的劑量。從小鼠體內(nèi)取出并快速冷凍的Matrigel塞經(jīng)過均質(zhì)化后，使用Drabkin’s試劑(Sigma Diagnostic，St.Louis，MO)通過吸收光譜來確定血色素濃度。
為了評(píng)估化合物1的血漿暴露度，在8次連續(xù)劑量(第8日)后的2和24小時(shí)收集血液。在200和300mg/kg劑量組中，僅在2小時(shí)時(shí)間點(diǎn)收集血液?；衔?的血漿濃度采用未經(jīng)驗(yàn)證的LC/MS/MS分析而測定，其校正范圍1-8000ng/mL，定量下限(LLOQ)為1ng/mL(Charles River Laboratories，Worcester，MA)。
第8日測定Matrigel塞中的血色素水平和化合物1的血漿濃度。整個(gè)研究中，動(dòng)物的體重均被觀察并測量。
與載體組處理組動(dòng)物的Matrigel塞相比，由于化合物1的施用，各評(píng)估劑量組動(dòng)物體內(nèi)的Matrigel塞內(nèi)血色素的濃度均被顯著抑制(表8)。計(jì)算所得的ED50為2.6mg/kg。3和10mg/kg劑量分別引起54％和57％的抑制，而30、100、200和300mg/kg劑量組的血色素水平則降低至未添加FGF的Matrigel的水平，與添加FGF的對(duì)照組比較，抑制率為70-92％。在第8日服藥后2小時(shí)，化合物1的血漿濃度與施用劑量成比例地升高，濃度范圍從3mg/kg組的44ng/mL到300mg/kg組的3920ng/mL(表9)。所有劑量都很好地被耐受，未觀察到體重的減輕。
表8.化合物1口服給藥后，在Matrigel中的血色素濃度和劑量依賴型Matrigel塞中的血色素濃度受抑制而降低

表9.在8次連續(xù)給藥后測定的化合物1的血漿濃度

a血漿濃度低于定量檢測的下限(≤1ng/mL)NS＝未收集樣品#給藥后2小時(shí)和24小時(shí)收集的樣品 化合物1的血漿濃度(給藥后2小時(shí))隨劑量成比例升高。在Matrigel塞內(nèi)，觀察到依賴于劑量和血漿濃度的血色素含量的減少。44ng/mL的血漿濃度(給藥后2小時(shí)，第8日)似乎與此模型中的抗血管生成活性有關(guān)。
總的來說，化合物1對(duì)于血色素的抑制是劑量依賴性的，治療8日后有顯著的抑制。在所有劑量的化合物1的給藥情況下，都觀察到統(tǒng)計(jì)上顯著的血色素的抑制。所有劑量均被良好耐受，未觀察到體重降低或不利的臨床癥狀。44ng/mL的化合物1血漿濃度(給藥后2小時(shí))與此模型中的抗血管生成活性有關(guān)。
實(shí)施例9 在第1和14個(gè)給藥日的樣品中，測定來自5mg/kg每日2次(BID)多次口服給藥劑量組的猴血漿中化合物1的代謝情況。一種通過去甲基化(化合物3)而產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物是通過LC/UV和LD/MS/MS而鑒定的。母(P)化合物1的m/z＝393.3(M+H+)，其色譜保留時(shí)間為18.3分鐘。去甲基的代謝產(chǎn)物(P-CH3)經(jīng)鑒定，其m/z＝379.3(M+H+)，其色譜保留時(shí)間為18.1分鐘。代謝產(chǎn)物和化合物1間的14道爾頓的質(zhì)量差別與去甲基后的化合物1相一致。代謝產(chǎn)物的質(zhì)量和色譜保留時(shí)間與單獨(dú)合成的化合物3是一致的。在此劑量水平，化合物1的哌嗪N-氧化物(N-氧化物化合物2)相應(yīng)的代謝產(chǎn)物未被檢測到。在356nm的吸收譜測定中，位于17.7和18.5分鐘的UV信號(hào)處的成分，通過與化合物1的UV譜相比較并且由于它們?cè)诳瞻籽獫{中同樣存在(時(shí)間0，劑量日1)，而被確定是基質(zhì)成分而非代謝產(chǎn)物。
評(píng)估的去甲基代謝產(chǎn)物的水平在表1中給出。所評(píng)估的代謝產(chǎn)物的水平(以化合物1等價(jià)物形式)，是基于代謝產(chǎn)物與此分析中獲得的化合物1的UV吸收峰高度比，用此吸收率之比乘以先前定量分析研究的相同樣品中已確定的化合物1的水平來外推代謝產(chǎn)物的水平。發(fā)現(xiàn)在所有的混合時(shí)間點(diǎn)，母化合物的豐度均高于代謝產(chǎn)物的豐度。發(fā)現(xiàn)在第14日的樣品中化合物1的水平相當(dāng)?shù)停c之相平行的是N-去甲基代謝產(chǎn)物基本檢測不到。在給藥的第1或14日，血漿樣品中未檢測到其它的代謝產(chǎn)物，包括共軛相的II型代謝產(chǎn)物(葡萄糖苷酸或硫酸鹽)。
表10.化合物1的多次口服劑量給藥后(5mg/kg，每日2次(BID))，大鼠血漿(N＝2)
中化合物1的水平和所評(píng)估的化合物1代謝產(chǎn)物的水平。

a.以12小時(shí)的時(shí)間間隔(T＝0和T＝12小時(shí))給大鼠給藥(劑量5/mg/kg化合物1每日2次)。
b.基于代謝產(chǎn)物與此分析中獲得的化合物1的UV吸收峰高度比，用此吸收率之比乘以先前定量分析研究的相同樣品中已確定的化合物1的水平，來得出代謝產(chǎn)物的水平。
c.此表中所列出的化合物1的水平是在先前的單獨(dú)研究中已定量的水平的平均值。
ND無法檢測到實(shí)施例10 收集用化合物1治療后的小鼠的血漿和腫瘤進(jìn)行研究，用以評(píng)估潛在的藥效終點(diǎn)。施用化合物1治療以后，分析KM12L4a腫瘤中的靶向調(diào)節(jié)，結(jié)果顯示VEGFR1、VEGFR2、PDGFRβ和FGFR1的磷酸化以時(shí)間依賴性和劑量依賴性方式受到抑制。例如，HMVEC細(xì)胞顯示出VEGF介導(dǎo)的VEGFR2磷酸化的抑制，其IC50約為0.1μM。此外，施用化合物1處理的內(nèi)皮細(xì)胞通過VEGF的介導(dǎo)而抑制MAPK和Akt的磷酸化。
此外，還觀察到了時(shí)間依賴性和劑量依賴性的對(duì)于ERK(MAPK)活化的抑制。ERK是受體酪氨酸激酶的下游目標(biāo)。觀察到的KM12L4A細(xì)胞中的IC50范圍在0.1至0.5μM。(KM12L4A細(xì)胞在其表面表達(dá)PDGFR β和VEGFR1/2)。KM12L4A細(xì)胞同化合物1在無血清的DMEM中孵育3h。采集后，裂解液用SDS-PAGE分離并用磷-ERK1/2和ERK1/2抗體檢測。使用ECL試劑(Amersham)來檢測?；衔?對(duì)受體磷酸化和ERK活性的抑制效果在治療后持續(xù)了24小時(shí)?；衔?以劑量-依賴的方式抑制MV4-11細(xì)胞中ERK1/2的磷酸化，其IC50為0.01至0.1μM。
在HCT116人結(jié)腸腫瘤模型中觀察到了顯著的體內(nèi)活性。在HCT116腫瘤中，化合物1以劑量依賴性和時(shí)間依賴性方式抑制ERK(MAPK)的磷酸化，并且在腫瘤組織學(xué)分析中觀察到了的顯著改變。
這些在臨床前模型中的PK/PD的評(píng)估表明，化合物1表現(xiàn)出對(duì)目標(biāo)受體和下游信號(hào)分子ERK(MAPK)的時(shí)間依賴性和劑量依賴性的抑制作用。這些研究將有助于鑒別潛在的生物標(biāo)記，以支持臨床試驗(yàn)中化合物1生物活性的監(jiān)測。
實(shí)施例11 將14C-標(biāo)記的化合物1(在喹啉酮環(huán)的4-位)以單一口服(PO)劑量(5mg/kg)施藥給雄性和雌性Sprague Dawley(SD)大鼠后，通過全身放射自顯影術(shù)(WBA)檢測其組織中放射性的分布。用于WBA的血液和尸體在給藥后24小時(shí)后的特定時(shí)間點(diǎn)采集。尸體冷凍于正己烷/干冰浴中，引流，吸干，并放置于干冰上或儲(chǔ)存于約-70℃至少2小時(shí)。凍結(jié)的尸體包埋于冷凍的羧甲基纖維素中，與包埋的放射自顯影標(biāo)準(zhǔn)品一同冷凍成塊，儲(chǔ)存于-20℃直至分析。在徑向平面(sagital plane)的5個(gè)感興趣的水平面上，收集適當(dāng)?shù)?0μm厚的切片，置于膠帶。所有主要組織、器官和生物液體均被呈現(xiàn)。磷光顯像屏暴露于切片并進(jìn)行掃描，產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線，以便內(nèi)推得出組織中14C標(biāo)記的化合物1的濃度。用液體閃爍計(jì)數(shù)(LSC)來分析血漿中的放射性濃度。說明性的結(jié)果列于表11中。
14C-化合物1口服給藥后，來自14C-化合物1的放射性在給藥后的1小時(shí)廣泛分布于所有的組織中，在給藥后的4小時(shí)在大多數(shù)組織中達(dá)到Cmax。在雄性和雌性組織中放射性的總體分布是相似的。來自14C-化合物1的放射性從組織中的清除率要慢于從血漿中的清除率。在雄性和雌性中，最高的14C-化合物1的組織濃度(除了24小時(shí)通過胃腸道的情況)，在副淚腺、腎上腺、腎髓質(zhì)、眼眶內(nèi)淚腺和眼眶外淚腺中檢測到的。來自14C-化合物1的放射性在口服劑量給藥后穿過血/腦屏障。
表11.在給雄性大鼠口服一劑化合物1(5mg/kg)后，在特定時(shí)間通過全身放射自顯影術(shù)測定的組織血漿濃度比


NA不適用的 應(yīng)理解的是，此述的實(shí)施例用于解釋，而本發(fā)明并不僅限于這些實(shí)施例而應(yīng)包含所附權(quán)利要求范圍內(nèi)的所有形式。
權(quán)利要求
1.一種下式的化合物 其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療癌癥的藥物中的用途，其中所述的藥物是單位劑型，并且藥物的每個(gè)單位劑量足以提供下列的至少一項(xiàng)(a)在施用于對(duì)象后，對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約20至4000ng/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約40至8000ng/mL；(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約10至2,000ng/mL或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度達(dá)到約20至4,000ng/mL；或者(c)在施用于對(duì)象后，對(duì)象血漿中化合物的AUC值達(dá)到約500至60,000ng*h/mL或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC值達(dá)到約750至120,000ng*h/mL。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，每個(gè)單位劑量足以提供下列的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約50至500ng/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約100至1000ng/mL；(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約20至1,000ng/mL，或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度達(dá)到約40至2,000ng/mL，或(c)對(duì)象血漿中化合物的AUC達(dá)到約1,000至30,000ng*h/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC達(dá)到約1,500至60,000ng*h/mL。
3.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，每個(gè)單位劑量足以提供下列中的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的約50至250ng/mL的Cmax或?qū)ο笱褐谢衔锏募s100至500ng/mL的Cmax；(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約40至500ng/mL，或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度達(dá)到約80至1,000ng/mL；或(c)對(duì)象血漿中化合物的AUC達(dá)到約2,000至15,000ng*h/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC達(dá)到約3,000至30,000ng*h/mL。
4.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，每個(gè)單位劑量足以提供下列中的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約75至150ng/mL，或?qū)ο笱褐谢衔顲max達(dá)到約150至300ng/mL；或(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約40至250ng/mL，或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度達(dá)到約80至500ng/mL。
5.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，每個(gè)單位劑量足以使對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約100至2000ng/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約200至4000ng/mL。
6.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，每個(gè)單位劑量足以使對(duì)象血漿中化合物Cmax達(dá)到約100至1000ng/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約200至2000ng/mL。
7.如權(quán)利要求1-6中任一任一權(quán)利要求所述的用途，其特征在于，將該化合物的乳酸鹽用于制備藥物。
8.如權(quán)利要求1-7中任一權(quán)利要求所述的用途，其特征在于，所述藥物適合于口服給藥。
9.如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述的藥物的單位劑量形式為丸劑、膠囊、片劑、軟膠囊、小膠囊、懸浮液或水溶液。
10.如權(quán)利要求1-7中任一權(quán)利要求所述的用途，其特征在于，所述的藥物適合通過短期快速注射、緩慢輸注或長期輸注進(jìn)行注射給藥。
11.如權(quán)利要求1-10的任一權(quán)利要求所述的用途，其特征在于，所述藥物的每個(gè)單位劑量包含基于對(duì)象體重的0.25至30mg/kg的該化合物、互變體和/或其鹽。
12.如權(quán)利要求1-10中任一權(quán)利要求所述的用途，其特征在于，所述的藥物的每個(gè)單位劑量包含25至1500mg的該化合物、互變體和/或其鹽。
13.如權(quán)利要求1-12中任一權(quán)利要求所述的用途，其特征在于，所述的藥物裝在包含7、14、21或28個(gè)日單位劑量的藥盒中，該藥盒適合一治療周期，所述的治療周期包括7、14、21或28日每日施藥，隨后的7或14日停止施藥。
14.一種具有下式的化合物 其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于，該化合物用于治療癌癥的方法，所述方法包括給癌癥患者施用所述的化合物，其施用量足以提供下列中的至少一項(xiàng)(a)施用于對(duì)象后，對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約20至4000ng/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約40至8000ng/mL；(b)在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約10至2,000ng/mL或施用于對(duì)象后的24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度達(dá)到約20至4,000ng/mL；或(c)施用于對(duì)象后，對(duì)象血漿中化合物的AUC達(dá)到約500至60,000ng*h/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC達(dá)到約750至120,000ng*h/mL。
15.權(quán)利要求14所述的化合物，其特征在于，每個(gè)單位劑量足以提供下列各項(xiàng)中的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約50至500ng/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約100至1000ng/mL，(b)給藥后的24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約20至1,000ng/mL，或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度達(dá)到約40至2,000ng/mL，或(c)對(duì)象血漿中化合物的AUC達(dá)到約1,000至30,000ng*h/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC達(dá)到約1,500至60,000ng*h/mL。
16.如權(quán)利要求14所述的化合物，其特征在于，每個(gè)單位劑量足以提供下列中的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約50至250ng/mL的，或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約100至500ng/mL；(b)給藥后的24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約40至500ng/mL，或在給藥后24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度達(dá)到約80至1,000ng/mL；或(c)對(duì)象血漿中化合物的AUC達(dá)到約2,000至15,000ng*h/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腁UC達(dá)到約3,000至30,000ng*h/mL。
17.如權(quán)利要求14所述的化合物，其特征在于，每個(gè)單位劑量足以提供下列中的至少一項(xiàng)(a)對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約75至150ng/mL的或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約150至300ng/mL；或(b)給藥后的24小時(shí)，對(duì)象血漿中化合物的濃度達(dá)到約40至250ng/mL，或給藥后的24小時(shí)，對(duì)象血液中化合物的濃度達(dá)到約80至500ng/mL。
18.如權(quán)利要求14所述的化合物，其特征在于，每個(gè)單位劑量足以使對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約100至2000ng/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約200至4000ng/mL。
19.如權(quán)利要求14所述的化合物，其特征在于，每個(gè)單位劑量足以使對(duì)象血漿中化合物的Cmax達(dá)到約100至1000ng/mL，或?qū)ο笱褐谢衔锏腃max達(dá)到約200至2000ng/mL。
20.一種代謝產(chǎn)物的用途，所述的代謝產(chǎn)物用于測定下式化合物 其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽在對(duì)象中的代謝情況，其特征在于，所述的代謝產(chǎn)物包含至少一種以下化合物下式的N-氧化物 或下式的N-去甲基化合物
21.一種測定下式化合物 其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽在對(duì)象中的代謝情況的方法，其特征在于，該方法包括在取自對(duì)象的一種或多種尿液、血液或組織樣品中，測定所述化合物的至少一種代謝產(chǎn)物的數(shù)量。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征在于，至少一種代謝產(chǎn)物是具有下式的N-氧化物化合物 或具有下式的N-去甲基化合物
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，該方法包括測定N-氧化物化合物和N-去甲基化合物兩者的數(shù)量。
24.如權(quán)利要求21-23中任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，所述的代謝產(chǎn)物通過紫外光譜或液相色譜-質(zhì)譜測定。
25.一種測定下式化合物 其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽在對(duì)象中的數(shù)量的方法，其特征在于，該方法包括在將所述化合物施用于對(duì)象后，測定取自對(duì)象的尿液、血液或組織樣品中所述化合物的量。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于，還包括測定樣品中所述化合物的代謝產(chǎn)物的數(shù)量。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，所述的代謝產(chǎn)物是下式的N-氧化物
28.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，所述的代謝產(chǎn)物是下式的N-去甲基化合物
29.如權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于，還包括在將化合物施用于對(duì)象后，在不同時(shí)間從對(duì)象提取兩個(gè)或多個(gè)樣品。
30.一種下式化合物 其藥學(xué)上可接受的鹽、其互變體、或互變體的藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療癌癥的藥物中的用途，其中所述的藥物是單位劑型，并且所述藥物的每個(gè)單位劑量包含25mg至1000mg的所述化合物。
全文摘要
提供了用4－氨基－5－氟－3－[6－(4－甲基哌嗪－1－基)－1H－苯并咪唑－2－基]喹啉－2(1H)－酮治療癌癥的方法。具體地，本方法可有效治療實(shí)體瘤或白血病，包括前列腺癌、結(jié)直腸癌、乳房癌、多發(fā)性骨髓瘤、胰腺癌、小細(xì)胞癌、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病或骨髓增生性疾病。還提供了測定4－氨基－5－氟－3－[6－(4－甲基哌嗪－1－基)－1H－苯并咪唑－2－基]喹啉－2(1H)－酮的數(shù)量的方法和測定代謝情況的方法。
文檔編號(hào)A61K31/496GK1711088SQ200380103178
公開日2005年12月21日 申請(qǐng)日期2003年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月13日
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