專利名稱：嘧啶化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的2-取代的-4-雜芳基-嘧啶衍生物以及其在治療中的用途。更具體地，本發(fā)明涉及具有改進溶解性能的2-取代的-4-雜芳基-嘧啶衍生物。
背景技術(shù)：
我們以前公開了2-取代的-4-雜芳基-嘧啶以及其在治療增生性疾病中的用途(Fischer PM，Wang S.PCT Intl.Patent Appl.Publ.WO 01/072745；CyclacelLimited，UK，2001)。這些化合物抑制細胞周期蛋白-依賴性蛋白激酶(CDKs)，尤其是CDK4/細胞周期蛋白D、CDK2/細胞周期蛋白E、CDK2/細胞周期蛋白A以及CDK1/細胞周期蛋白B，即人細胞周期進程中重要的酶復(fù)合物。此外，2-苯基氨基-4-雜芳基-嘧啶對廣泛的人腫瘤細胞具有體內(nèi)和體外選擇性的抗增生活性(Wang S，Blake D，Clarke R，Duff S，McClue SJ，McInnes C，Melville J，Stewart K，Taylor P，Westwood R，Wood G，Wu S-Y，Zhelev NZ，Zheleva DI，Walkinshaw M，Lane DP，F(xiàn)ischer PM.Proc.Amer.Assoc.CancerRes.2002；434202)。
本發(fā)明尋求提供其他的2-取代的-4-雜芳基-嘧啶化合物。更具體地，本發(fā)明優(yōu)選地尋求提供顯示改進的溶解度和/或生物利用度的2-取代的-4-雜芳基-嘧啶化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明第一方面涉及式I化合物或其可藥用鹽，
其中(A)X1和X2之一為S，且X1和X2中另一個為N；“a”為單鍵；“b”、“c”、“d”、“e”和“f”為單或雙鍵以形成噻唑基環(huán)；R2獨立地同如下述對R1、R3-8的定義；或(B)X1和X2之一為S，并且X1和X2中另一個為NR17；“a”和“d”各為雙鍵；“b”、“c”、“e”和“f”各為單鍵；R2為氧代基團；以及R17為H或烷基；其中Z為NH、NHCO、NHSO2、NHCH2、CH2、CH2CH2、CH＝CH、SO2或SO；R1、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自獨立地是H、烷基、烷基-R9、芳基、芳基-R9、芳烷基、芳烷基-R9、鹵素、NO2、CN、OH、O-烷基、COR9、COOR9、O-芳基、O-R9、NH2、NH-烷基、NH-芳基、N-(烷基)2、N-(芳基)2、N-(烷基)(芳基)、NH-R9、N-(R9)(R10)、N-(烷基)(R9)、N-(芳基)(R9)、COOH、CONH2、CONH-烷基、CONH-芳基、CON-(烷基)(R9)、CON(芳基)(R9)、CONH-R9、CON-(R9)(R10)、SO3H、SO2-烷基、SO2-烷基-R9、SO2-芳基、SO2-芳基-R9、SO2NH2、SO2NH-R9、SO2N-(R9)(R10)、CF3、CO-烷基、CO-烷基-R9、CO-芳基、CO-芳基-R9或R11，其中烷基、芳基、芳烷基可進一步被一或多個選自鹵素、NO2、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基團取代；其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中至少一個為含R9或R10的基團，或為R11；R9和R10各自獨立地是增溶基團，選自(i)-單-、二-或多羥基化的脂環(huán)族基團；-二-或多羥基化的脂肪族或芳香基團；-碳水化合物衍生物；-含O-和/或S雜環(huán)基，任選被一或多個羥基取代；-脂肪族或芳香基團，包含酰胺、亞碸、碸或磺酰胺官能團；或-鹵代烷基羰基；(ii)COOH、SO3H、OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(iii)Y，其中Y選自脂環(huán)族、芳香或雜環(huán)基，包含官能團＝N-、-O-、-NH2、-NH-、季胺鹽、胍和脒中的一個或多個，其中Y任選被選自下列基團中的一個或多個取代基取代-SO2-烷基；-烷基，任選被一或多個OH基團取代；-CO-烷基；-芳烷基；-COO-烷基；以及-醚基，任選被一或多個OH基團取代；以及其中Y不是吡啶基；(iv)天然的或非天然的氨基酸、肽或肽衍生物；各R11為如上述針對R9和R10定義中的(i)或(iv)的增溶基團；或選自(v)OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(vi)如上定義的Y，但不是胍和季胺鹽；(vii)NHCO(CH2)m[NHCO(CH2)m’]p[NHCO(CH2)m”]qY或NHCO(CH2)tNH(CH2)t’Y，其中p和q各為0或1，并且m、m’、m”、t和t’各自獨立地是從1到10的整數(shù)；以及(viii)(CH2)nNR14COR12、(CH2)n’NR15SO2R13或SO2R16，其中R12、R13和R16各自為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且其任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2的取代基取代，R14和R15各自獨立地是H或烷基，并且n和n’各自獨立地是0、1、2或3；(ix)醚或聚醚，任選被一或多個羥基或一或多個Y基團取代；
(x)(CH2)rNH2；其中r為0、1、2或3；(xi)(CH2)r’OH；其中r’為0、1、2或3；條件是所述的化合物不是2-氯-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-乙酰胺；N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-甲磺酰胺；2-氯-N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺；{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-甲醇；2-{4-[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-乙醇；或2-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-乙醇。
本發(fā)明第二方面涉及一種藥物組合物，包括如上定義的式I化合物以及可藥用稀釋劑、賦形劑或載體。
本發(fā)明第三方面涉及如上定義的式I化合物在制備用于治療增生性疾病的藥物中的用途。
本發(fā)明第四方面涉及式Ia化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療病毒性疾病的藥物中的用途， 其中(A)X1和X2之一為S，并且X1和X2中另一個為N；“a”為單鍵；“b”、“c”、“d”、“e”和“f”為單或雙鍵以形成噻唑基環(huán)；R2獨立地同如下述對R1、R3-8的定義；或(B)X1和X2之一為S，并且X1和X2中另一個為NR17；“a”和“d”各為雙鍵；“b”、“c”、“e”和“f”各為單鍵；
R2為氧代基團；以及R17為H或烷基；其中Z為NH、NHCO、NHSO2、NHCH2、CH2、CH2CH2、CH＝CH、SO2或SO；R1、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自獨立地是H、烷基、烷基-R9、芳基、芳基-R9、芳烷基、芳烷基-R9、鹵素、NO2、CN、OH、O-烷基、COR9、COOR9、O-芳基、O-R9、NH2、NH-烷基、NH-芳基、N-(烷基)2、N-(芳基)2、N-(烷基)(芳基)、NH-R9、N-(R9)(R10)、N-(烷基)(R9)、N-(芳基)(R9)、COOH、CONH2、CONH-烷基、CONH-芳基、CON-(烷基)(R9)、CON(芳基)(R9)、CONH-R9、CON-(R9)(R10)、SO3H、SO2-烷基、SO2-烷基-R9、SO2-芳基、SO2-芳基-R9、SO2NH2、SO2NH-R9、SO2N-(R9)(R10)、CF3、CO-烷基、CO-烷基-R9、CO-芳基、CO-芳基-R9或R11，其中烷基、芳基、芳烷基可進一步被一或多個選自鹵素、NO2、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基團取代；其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中至少一個為含R9或R10基團，或為R11；R9和R10各自獨立地是增溶基團，選自(i)-單-、二-或多羥基化的脂環(huán)族基團；-二-或多羥基化的脂肪族或芳香基團；-碳水化合物衍生物；-含O-和/或S雜環(huán)基，任選被一或多個羥基取代；-脂肪族或芳香基團，包含酰胺、亞碸、碸或磺酰胺官能團；或-鹵代烷基羰基；(ii)COOH、SO3H、OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(iii)Y，其中Y選自脂環(huán)族、芳香或雜環(huán)基，包含官能團＝N-、-O-、-NH2、-NH-、季胺鹽、胍和脒中的一個或多個，其中Y任選被選自下列基團中的一個或多個取代基取代-SO2-烷基；-烷基，任選被一或多個OH基團取代；-CO-烷基；-芳烷基；
-COO-烷基；以及-醚基，任選被一或多個OH基團取代；以及其中Y不是吡啶基；(iv)天然的或非天然的氨基酸、肽或肽衍生物；各R11為如上述針對R9和R10定義中的(i)或(iv)的增溶基團；或選自(v)OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(vi)如上定義的Y，但不是胍和季胺鹽；(vii)NHCO(CH2)m[NHCO(CH2)m’]p[NHCO(CH2)m”]qY或NHCO(CH2)tNH(CH2)t’Y，其中p和q各為0或1，并且m、m’、m”、t和t’各自獨立地是從1到10的整數(shù)；以及(viii)(CH2)nNR14COR12、(CH2)n’NR15SO2R13或SO2R16，其中R12、R13和R16各自為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且其任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2中的取代基取代，R14和R15各自獨立地是H或烷基，并且n和n’各自獨立地是0、1、2或3；(ix)醚或聚醚，任選被一或多個羥基或一或多個Y基團取代；(x)(CH2)rNH2；其中r為0、1、2或3；(xi)(CH2)r’OH；其中r’為0、1、2或3。
本發(fā)明第五方面涉及如上定義的式I化合物抑制蛋白激酶的用途。
本發(fā)明第六方面涉及如上定義的式I化合物在用于鑒定其他能抑制細胞周期蛋白依賴性激酶的候選化合物的分析中的用途。
詳細描述這里使用的術(shù)語“烷基”包括既有1～8個碳原子的支鏈和直鏈烷基，如甲基、乙基丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基等，并且術(shù)語“低級烷基”同樣地用于表示具有1～4個碳原子的基團。
這里使用的術(shù)語“芳基”指取代的(單-或多-)或未取代的單芳香或多芳香體系，其中所述的多芳香體系可為稠合的或未稠合的。優(yōu)選地，術(shù)語“芳基”包括具有6～10個碳原子的基團，如苯基、萘基等。術(shù)語“芳基”與術(shù)語“芳香”同義。
術(shù)語“芳烷基”為如上給出的術(shù)語烷基和芳基的連接詞。
術(shù)語“脂環(huán)族”指環(huán)狀的脂肪族基團。
術(shù)語“脂肪族”取本技術(shù)領(lǐng)域的通常含義并包括非-芳香基團如烷烴、烯烴和炔烴以及其取代的衍生物。
這里使用的術(shù)語“碳水化合物衍生物”指通式Cx(H2O)y化合物或其衍生物。優(yōu)選地，所述的碳水化合物為單-、二-或三糖。單糖可以直鏈或環(huán)形分子，并根據(jù)其具有的碳原子數(shù)目進行分類；丙糖具有3個碳原子，丁糖具有4個碳原子，戊糖具有5個碳原子，己糖具有6個碳原子。這些次級基團可進一步分成醛糖和酮糖，取決于分子中是否包含醛基(-CHO)或酮基(C＝O)。單糖的典型實例包括葡萄糖、果糖以及半乳糖。二糖由兩個相連的單糖分子組成，并包括例如，麥芽糖以及乳糖。三糖由三個相連的單糖分子組成。
這里使用的術(shù)語″衍生物″包括實體的化學(xué)修飾。所述化學(xué)修飾的例舉實例為氫被鹵素、烷基、?；虬被鎿Q。
術(shù)語“雜環(huán)”指在環(huán)中包含一個或多個雜原子的飽和的或不飽和的環(huán)狀基團。
這里使用的短語“藥物的制備”包括將式I化合物直接用作藥物的用途以及其在用于其他的抗病毒劑篩選過程(screening programme)中的用途或在所述藥物的制備的任何階段的用途。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及式Ib化合物或其可藥用鹽， 其中X1和X2之一為S，X1和X2中的另一個為N，并且Z、R1-8如上定義。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及式Ic化合物或其可藥用鹽，
其中X1和X2之一為S，X1和X2中的另一個為N；Z為NH、NHCO、NHSO2、NHCH2、CH2、CH2CH2、CH＝CH、SO2或SO；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自獨立地是H、烷基、烷基-R9、芳基、芳基-R9、芳烷基、芳烷基-R9、鹵素、NO2、CN、OH、O-烷基、COR9、COOR9、O-芳基、O-R9、NH2、NH-烷基、NH-芳基、N-(烷基)2、N-(芳基)2、N-(烷基)(芳基)、NH-R9、N-(R9)(R10)、N-(烷基)(R9)、N-(芳基)(R9)、COOH、CONH2、CONH-烷基、CONH-芳基、CON-(烷基)(R9)、CON(芳基)(R9)、CONH-R9、CON-(R9)(R10)、SO3H、SO2-烷基、SO2-烷基-R9、SO2-芳基、SO2-芳基-R9、SO2NH2、SO2NH-R9、SO2N-(R9)(R10)、CF3、CO-烷基、CO-烷基-R9、CO-芳基、CO-芳基-R9或R11，其中烷基、芳基、芳烷基可進一步被一或多個選自鹵素、NO2、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基團取代；其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中至少一個為含R9或R10的基團，或為R11；R9和R10各自獨立地是增溶基團，選自(i)-單-、二-或多羥基化的脂環(huán)族基團；-二-或多羥基化的脂肪族或芳香基團；-碳水化合物衍生物；-含O-和/或S雜環(huán)基，任選被一或多個羥基取代；-脂肪族或芳香基團，包含酰胺、亞碸、碸或磺酰胺官能團；或-鹵代烷基羰基；(ii)COOH、SO3H、OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(iii)Y，其中Y選自脂環(huán)族、芳香或雜環(huán)基，包含官能團＝N-、-O-、-NH2、-NH-、季胺鹽、胍和脒中的一個或多個，其中Y任選被選自下列基團中的一個或多個取代基取代-SO2-烷基；-烷基，任選被一或多個OH基團取代；-CO-烷基；-芳烷基；-COO-烷基；以及-醚基，任選被一或多個OH基團取代；以及其中Y不是吡啶基；(iv)天然的或非天然的氨基酸、肽或肽衍生物；各R11為如上述針對R9和R10定義中的(i)或(iv)的增溶基團；或選自(v)OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(vi)如上定義的Y，但不是胍和季胺鹽；(vii)NHCO(CH2)m[NHCO(CH2)m’]p[NHCO(CH2)m”]qY，其中p和q各為0或1，且m、m’和m”各自為從1到10的整數(shù)；以及(viii)NHCOR12或NHSO2R13，其中R12和R13各自為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且其任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2的取代基取代；(ix)醚或聚醚，任選被一或多個羥基取代；條件是所述的化合物不是N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-甲磺酰胺；2-氯-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-乙酰胺；或2-氯-N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺。
優(yōu)選地，式I化合物帶有單-或二-取代的噻唑-3-基或噻唑-5-基，所述的基團通過一個環(huán)個碳原子連接至嘧啶環(huán)。更優(yōu)選地，所述的雜環(huán)為噻唑-5-基。
因此，在一個優(yōu)選的本發(fā)明實施方案中，X1為S且X2為N。
下述優(yōu)選的特征適用于式I、Ia、Ib和Ic化合物。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，Z為NH。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，R3為H。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，R2、R5、R6或R7中至少一個為含R9或R10的基團或為R11。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，X1為S，X2為N，Z為NH，R1為Me，R2為烷基或氨基，R3為H，R5、R6和R7中的一個或兩個為CF3、OH、O-烷基、鹵素、NO2、NH2、NH-烷基或N-(烷基)2，并且R2、R5、R6或R7中至少一個為含R9或R10的基團或為R11。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中至少一個為R11。
在一個優(yōu)選的實施方案中，R11為如上述針對R9和R10定義中的(i)-(iv)或(v)-(x)所定義的增溶基團。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，R11為如上述針對R9和R10定義中的(i)-(iv)或(v)-(vii)、(ix)-(x)所定義的增溶基團或選自-(CH2)nNR14COR12，其中R12為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且所述的基團任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2和NO2的取代基取代，-(CH2)n’NR15SO2R13，其中R13為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且所述的基團任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2的取代基取代，-SO2R16，其中R16為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且所述的基團任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2的取代基取代；以及R14和R15各自獨立地是H或烷基，并且n和n’各自獨立地是0、1、2或3。
優(yōu)選地，所述的增溶基團為R11并且是(a)如上定義的Y，但是排除胍，其中Y也可為包含一或多個＝N-基團的脂環(huán)族、芳香或雜環(huán)基；(b)NHCO(CH2)m[NHCO(CH2)m’]p[NHCO(CH2)m”]qY或NHCO(CH2)tNH(CH2)t’Y，其中p和q各為0或1，并且m、m’、m”、t和t’各自為從1到10的整數(shù)；或(c)(CH2)nNR14COR12、(CH2)n’NR15SO2R13或SO2R16，其中R12、R13和R16各自為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且所述的基團任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2的取代基取代，R14和R15各自獨立地是H或烷基，并且n和n’各自獨立地是0、1、2或3。
優(yōu)選地，所述的增溶基團為R11，并且R11是(a)如上定義的Y，但是排除胍，其中Y也可為包含一或多個＝N-基團的脂環(huán)族、芳香或雜環(huán)基；(b)NHCO(CH2)m[NHCO(CH2)m’]p[NHCO(CH2)m”]qY，其中p和q各為0或1，并且m、m’、m”、t和t’各自為從1到10的整數(shù)；(c)NHCOR12或NHSO2R13，其中R12和R13各自為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且所述的基團任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2的取代基取代。
甚至更優(yōu)選地，Y為包含官能團-O-、NH2、-NH-、＝N-、季胺鹽或脒中的一個或多個的脂環(huán)族基團，并且其中Y任選被如上定義的一個或多個取代基取代。
更優(yōu)選地，Y為嗎啉或哌嗪，各基團任選被一個或多個選自SO2-烷基、任選被一或多個OH基團取代的烷基、CO-烷基、芳烷基、COO-烷基和任選被一或多個OH基團取代的醚基。
在一個特別優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，Y為2-氧代-六氫-噻吩并[3，4-d]咪唑基。
在一個優(yōu)選的實施方案中，R2、R6或R7中至少一個為R11。
對于該實施方案，優(yōu)選地R11選自下述基團

CH2CH2OHSO2MeCH2OHCH2NH2 在一個特別優(yōu)選的實施方案中，R6或R7為R11。更優(yōu)選地，R6為R11且R2、R4、R5、R7和R8各自獨立地選自烷基、H、CF3、OH、O-烷基、鹵素、NO2、NH2、NH-烷基和N-(烷基)2。更優(yōu)選地，R6為R11且R2、R4、R5、R7和R8各自獨立地選自烷基、H、O-烷基、鹵素、NO2、NH2和NH-烷基。甚至更優(yōu)選地，R6為R11且R4、R5、R7和R8都為H且R2選自烷基、O-烷基、NH2和NH-烷基。
甚至更優(yōu)選地，對于該實施方案，R11選自 SO2MeCH2CH2OH在另一個優(yōu)選的實施方案中，R7為R11且R4、R5、R6、R8都為H，且R2選自烷基、O-烷基、NH2和NH-烷基。優(yōu)選地，對于該實施方案，R11選自
SO2MeCH2OHCH2NH2 在另一個優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，R2或R6中至少一個為R11。
對于該實施方案，R11優(yōu)選地選自下述基團
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，R6為R11。
對于該實施方案，其中R6為R11，優(yōu)選地R2、R4、R5、R7和R8各自獨立地選自烷基、H、CF3、OH、O-烷基、鹵素、NO2、NH2、NH-烷基和N-(烷基)2。
甚至更優(yōu)選地，R2、R4、R5、R7和R8各自獨立地選自烷基、H、O-烷基、鹵素、NO2、NH2和NH-烷基。
更優(yōu)選地，R4、R5、R7和R8都為H且R2選自烷基、O-烷基、NH2和NH-烷基。
更優(yōu)選地，R11選自
在替代性的優(yōu)選的實施方案中，R2為R11。
對于該實施方案，R2為R11，優(yōu)選地R4、R5、R6、R7和R8各自獨立地選自烷基、H、CF3、OH、O-烷基、鹵素、NO2、NH2、NH-烷基和N-(烷基)2。
更優(yōu)選地，R4、R5、R6、R7和R8各自獨立地選自H、O-烷基、鹵素、N-(烷基)2、NO2。
更優(yōu)選地，R5或R7之一選自NO2、烷氧基、鹵素和N-(烷基)2，并且R4、R5、R6、R7和R8中的其他基團都為H。
更優(yōu)選地，R11選自
在一個優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，R1為甲基，Z為NH且R3為H。
在另一個實施方案中，所述的本發(fā)明化合物為式Id化合物或其可藥用鹽， 優(yōu)選地，R1和R3-8為如上述針對式I、Ia、Ib和Ic化合物中的定義。優(yōu)選地，R17為烷基，更優(yōu)選地甲基。
在一個優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，式I化合物選自在表1中所列出的化合物，但是排除化合物[24]、[32]和[33]。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，式I化合物選自下述化合物[4-(2-甲氧基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；[4-(2-N-甲基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉代苯基)-胺；[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；1-(4-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙酮；[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-哌嗪-1-基-苯基)-胺；[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-[4-(4’-2”-乙氧基乙醇哌嗪基)-苯基]-胺；3-(4-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-基)-丙-1-醇；2-(4-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇；[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-[4-(4-甲磺?；?哌嗪-1-基)-苯基]-胺；[4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯基]-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺；[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺；[4-(2-甲氧基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺；3-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丙酰胺；(2S)-2-氨基-3-羥基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丙酰胺；(2R，3R)-2-氨基-3-羥基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺；(2R)-2-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺；
(2S，3S)-2-氨基-3-羥基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺；4-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺；3-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丙酰胺；3-溴-N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-丙酰胺；N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-3-嗎啉-4-基-丙酰胺；N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-3-嗎啉-4-基-丙酰胺；N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙酰胺；2-氯-N-{5-[2-(3-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺；2-氯-N-{5-[2-(3-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺；2-氯-N-{5-[2-(4-二甲基氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺；4-({4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基氨基甲酰基}-甲基)-哌嗪-1-羧酸叔丁基酯；N-{5-[2-(4-二甲基氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-2-[2-(2-羥基-乙氧基)-乙基氨基]-乙酰胺；6-[5-(2-氧代-六氫-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-基)-戊酰基氨基]-己酸(2-{4-甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基氨基甲?；鶀-乙基)-酰胺；N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-甲磺酰胺；3-溴-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丙酰胺；3-(1-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌啶-4-基)-丙-1-醇；2-氨基-3-羥基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺；以及2-氯-N-{5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺。
在另一個優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，所述的化合物式I選自下述化合物[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；[4-(2-N-甲基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉代苯基)-胺；(2R，3R)-2-氨基-3-羥基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺；(2R)-2-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺；以及N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-3-嗎啉-4-基-丙酰胺。
在一個優(yōu)選的實施方案中，式I的化合物能在人細胞系中顯示抗增生效果，如利用標準的72小時MTT細胞毒性分析所測量。優(yōu)選地，用所述的MTT分析測量，式I的化合物顯示的IC50值小于10μM，更優(yōu)選地小于5μM，甚至更優(yōu)選地小于1μM，更優(yōu)選地，式I的化合物選自下述化合物[4]、[8]、[12]、[14]、[16]、[22]、[24]、[25]、[29]、[32]、[33]、[39]、[40]、[50]、[53]、[61]、[57]、[62]、[63]、[64]、[65]和[77]。更優(yōu)選地，所述的化合物顯示的IC50值小于0.5μM，更優(yōu)選地小于0.2μM。甚至更優(yōu)選地，所述的化合物選自下述化合物[24]、[25]、[32]、[33]、[50]、[62]和[64]。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，式I的化合物選自[1]、[11]、[15]和[16]。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，式I的化合物能抑制一或多種蛋白激酶，如利用實施例部分中描述的分析測量得到。優(yōu)選地，式I的化合物顯示的IC50值小于10μM，更優(yōu)選地小于5μM，甚至更優(yōu)選地小于1μM或小于0.5μM，更優(yōu)選地小于0.1μM。更優(yōu)選地，式I的化合物選自下述化合物[11]、[13]、[14]、[15]、[20]、[21]、[22]、[24]、[25]、[32]、[50]、[53]、[54]、[55]、[56]、[57]、[59]、[61]、[62]、[64]、[68]、[71]、[82]、83]、[84]和[85]。更優(yōu)選地，所述的化合物顯示小于0.01μM的IC50值。甚至更優(yōu)選地，所述的化合物選自下述化合物[11]、[22]、[24]、[32]、[50]、[62]、[71]和[85]。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，式I的化合物選自[1]、[3]、[11]、[15]和[16]。
本發(fā)明提供了一些列2-苯基氨基-4-雜芳基-嘧啶系統(tǒng)的苯基和/或雜芳基環(huán)上帶有增溶官能團的化合物。利用增溶部分的修飾保持了需要的體外生物活性(對轉(zhuǎn)化的人細胞的CDKs抑制和細胞毒性)并在一些情況下導(dǎo)致令人吃驚以及出人意料的效力的增加。此外，利用這里提供的增溶策略，體內(nèi)吸收并且尤其是口服生物利用度也得到改善。
治療用途已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式I化合物具有抗增殖活性并因此相信可用于治療增生性疾病如癌癥、白血病以及其他的與不受控制的細胞增殖有關(guān)的疾病如牛皮癬和再狹窄。正如這里定義，本發(fā)明范圍內(nèi)的抗增殖活性可通過在體外全細胞分析中抑制細胞增殖的活性得到證實，例如利用細胞系A(chǔ)GS、H1299或SJSA-1或通過在適當?shù)姆治鲋酗@示出的HDM2和p53之間的相互作用的抑制得到證實。這些分析包括評價其性能的方法，在伴隨的實施例中有更詳細的描述。利用這些分析，可以確定化合物是否具有本發(fā)明所述的抗增殖活性。
因此優(yōu)選的本發(fā)明實施方案涉及一種或多種式I化合物在治療增生性疾病中的用途。優(yōu)選地，所述的增生性疾病為癌癥或白血病。這里使用的術(shù)語“增殖性疾病”在廣泛意義上包括任何需要控制細胞周期的疾病，例如心血管疾病如再狹窄和心臟病、自身免疫性疾病如腎小球腎炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、皮膚病如牛皮癬、抗炎性、抗真菌、抗寄生蟲疾病如瘧疾、氣腫和禿發(fā)癥。在這些疾病中，本發(fā)明的化合物可按照需要在所需的細胞內(nèi)誘導(dǎo)凋亡或保持停滯。
本發(fā)明的化合物可抑制細胞周期的任何步驟或階段，例如，核膜的形成、從細胞周期靜止期(G0)的脫出、G1行進、染色體解凝聚、核膜破壞、START、DNA復(fù)制的啟動、復(fù)制的行進、DNA復(fù)制的終止、中心體復(fù)制、G2行進、有絲分裂或減數(shù)分裂功能的激活、染色體凝聚、中心體分離、微管成核、紡錘體形成以及發(fā)揮作用、與微管動力蛋白的相互作用、染色單體分離以及分離、有絲分裂作用失活、收縮環(huán)的形成以及胞質(zhì)分裂作用。具體地，本發(fā)明的化合物可能影響一些基因功能如染色質(zhì)結(jié)合、復(fù)制復(fù)合物的形成、復(fù)制準許、磷酸化或其他的次級修飾活性、蛋白酶解、微管結(jié)合、肌動蛋白結(jié)合、隔蛋白結(jié)合、微管形成中心成核活性以及結(jié)合至細胞周期信號傳導(dǎo)通路的成分。
在本發(fā)明的一個實施方案中，式I或Ia的化合物以足以抑制至少一種CDK酶的量給予。
在更優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，式I的化合物優(yōu)選地以足以抑制涉及一或多種病毒復(fù)制的宿主細胞CDKs的量給予，即CDK2、CDK7、CDK8和CDK9[Wang D，De la Fuente C，Deng L，Wang L，Zilberman I，Eadie C，Healey M，Stein D，Denny T，Harrison LE，Meijer L，Kashanchi F.Inhibition ofhuman immunodeficiency virus type I transcription by chemicalcyclin-dependent kinase inhibitors.J.Virol.2001；757266-7279]。
如這里定義，本發(fā)明范圍內(nèi)的抗病毒效果可通過抑制CDK2、CDK7、CDK8或CDK9的活性得到證實。用于確定CDK活性的分析在伴隨的實施例中進行了更詳細的描述。利用所述的酶分析，可以確定化合物是否具有本發(fā)明定義的抗病毒活性。
在特別優(yōu)選的實施方案中，所述的式Ia化合物可用于治療病毒性疾病，如人巨細胞病毒(HCMV)、1型單純皰疹病毒(HSV-1)、I型人免疫缺陷病毒(HIV-1)和水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)。
在特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種或多種式Ia化合物在治療CDK依賴性或敏感性的病毒性疾病中的應(yīng)用。CDK依賴性疾病與一種或多種CDK酶的超過正?；钚运接嘘P(guān)。這類疾病優(yōu)選與CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9的異?；钚运接嘘P(guān)。CDK敏感性疾病為CDK水平的失常不是主因而是下游初級異謝失常導(dǎo)致的疾病。在這種情況下，CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9被認為是敏感性代謝途徑的一部分，并且CDK抑制劑可因此在治療這類疾病中有活性。
本發(fā)明優(yōu)選的一個實施方案涉及式Ie化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療病毒性疾病的藥物中的用途， 其中X1和X2之一為S，X1和X2中的另一個為N；
Z為NH、NHCO、NHSO2、NHCH2、CH2、CH2CH2、CH＝CH、SO2或SO；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自獨立地是H、烷基、烷基-R9、芳基、芳基-R9、芳烷基、芳烷基-R9、鹵素、NO2、CN、OH、O-烷基、COR9、COOR9、O-芳基、O-R9、NH2、NH-烷基、NH-芳基、N-(烷基)2、N-(芳基)2、N-(烷基)(芳基)、NH-R9、N-(R9)(R10)、N-(烷基)(R9)、N-(芳基)(R9)、COOH、CONH2、CONH-烷基、CONH-芳基、CON-(烷基)(R9)、CON(芳基)(R9)、CONH-R9、CON-(R9)(R10)、SO3H、SO2-烷基、SO2-烷基-R9、SO2-芳基、SO2-芳基-R9、SO2NH2、SO2NH-R9、SO2N-(R9)(R10)、CF3、CO-烷基、CO-烷基-R9、CO-芳基、CO-芳基-R9或R11，其中烷基、芳基、芳烷基可進一步被一或多個選自鹵素、NO2、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基團取代；其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中至少一個為含R9或R10基團，或為R11；R9和R10各自獨立地是增溶基團，選自(i)-單-、二-或多羥基化的脂環(huán)族基團；-二-或多羥基化的脂肪族或芳香基團；-碳水化合物衍生物；-含O-和/或S雜環(huán)基，任選被一或多個羥基取代；-脂肪族或芳香基團，包含酰胺、亞碸、碸或磺酰胺官能團；或-鹵代烷基羰基；(ii)COOH，SO3H，OSO3H，PO3H2或OPO3H2；(iii)Y，其中Y選自脂環(huán)族、芳香或雜環(huán)基，包含官能團＝N-、-O-、-NH2、-NH-、季胺鹽、胍和脒中的一個或多個，其中Y任選被選自下列基團中的一個或多個取代基取代-SO2-烷基；-烷基，任選被一或多個OH基團取代；-CO-烷基；-芳烷基；-COO-烷基；以及-醚基，任選被一或多個OH基團取代；以及其中Y不是吡啶基；
(iv)天然的或非天然的氨基酸、肽或肽衍生物；R11為如上述針對R9和R10定義中的(i)或(iv)的增溶基團；或選自(v)OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(vi)如上定義的Y，但不是胍和季胺鹽；(vii)NHCO(CH2)m[NHCO(CH2)m’]p[NHCO(CH2)m”]qY，其中p和q各為0或1，且m、m’和m”各自為從到10的整數(shù)；以及(viii)NHCOR12或NHSO2R13，其中R12和R13各自為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且所述的基團任選被一或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2的取代基取代；(ix)醚或聚醚，任選被一或多個羥基取代；優(yōu)選的特征同如上針對式I、Ia、Ib和Ic化合物的定義。
在優(yōu)選的實施方案中，式I的化合物選自在表1中所列出的那些化合物。
更優(yōu)選地，所述的式Ia化合物選自下述化合物[1]、[3]、[4]、[15]和[53]。
對于用于治療病毒性疾病，優(yōu)選地式I的化合物能抑制CK2、CDK7和/或CDK9并選自下述化合物[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；2-氨基-3-羥基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺；2-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺；[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；3-(1-{4-[4-(2，4-二-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌啶-4-基)-丙-1-醇；N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-3-嗎啉-4-基-丙酰胺；3-溴-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丙酰胺；N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-3-嗎啉-4-基-丙酰胺；N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙酰胺；[4-(2-甲氧基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺；[4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯基]-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺；以及3-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丙酰胺。
觀察下述化合物為特別有效的抗病毒劑，如用基于細胞的分析所證實[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺。
本發(fā)明另一方面涉及式I或Ia化合物作為抗有絲分裂劑。
本發(fā)明另一方面涉及式I或Ia化合物用于治療神經(jīng)退行性疾病的用途。
優(yōu)選地，所述的神經(jīng)退行性疾病為神經(jīng)元細胞凋亡。
本發(fā)明另一方面涉及式I或Ia化合物用作抗病毒劑的用途。
因此，本發(fā)明另一方面涉及本發(fā)明的化合物在制備用于治療病毒性疾病，如人巨細胞病毒(HCMV)、1型單純皰疹病毒(HSV-1)、I型人免疫缺陷病毒(HIV-1)以及水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)的藥物中的用途。
在更優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，所述的本發(fā)明的化合物以足以抑制一或多種涉及病毒復(fù)制的宿主細胞CDKs的量給予，即CDK2、CDK7、CDK8和CDK9[Wang D，De la Fuente C，Deng L，Wang L，Zilberman I，Eadie C，Healey M，Stein D，Denny T，Harrison LE，Meijer L，Kashanchi F.Inhibition ofhuman immunodeficiency virus type I transcription by chemicalcyclin-dependent kinase inhibitors.J.Virol.2O01；757266-7279]。
如這里定義，本發(fā)明范圍內(nèi)的抗病毒效果可通過抑制CDK2、CDK7、CDK8或CDK9的活性得到證實。
在特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種或多種本發(fā)明化合物在治療CDK依賴性或敏感性的病毒性疾病中的應(yīng)用。CDK依賴性疾病與一種或多種CDK酶的超過正?；钚运接嘘P(guān)。這類疾病優(yōu)選與CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9的異常活性水平有關(guān)。CDK敏感性疾病為CDK水平的失常不是主因而是下游初級異謝失常導(dǎo)致的疾病。在這種情況下，CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9被認為是敏感性代謝途徑的一部分，并且CDK抑制劑可因此在治療這類疾病中有活性。
本發(fā)明另一方方面涉及式I或Ia化合物或其可藥用鹽在用于制備治療糖尿病的藥物中的用途。
在特別優(yōu)選的實施方案中，所述的糖尿病為II型糖尿病。
GSK3為磷酸化糖原合成酶(GS)的數(shù)種蛋白激酶中的一種。骨骼肌中胰島素對的糖原合成的刺激源自GS的去磷酸化以及活化。因此，GSK3對GS的作用導(dǎo)致后者的失活并因此抑制肌肉中葡萄糖向糖原的轉(zhuǎn)化。
II型糖尿病(非-胰島素依賴性糖尿病)是一種多因素疾病。高血糖癥是由于肝臟、肌肉以及其他組織中的胰島素抗性以及受損的胰島素分泌導(dǎo)致的。骨骼肌是胰島素-刺激的葡萄糖攝取的主要部位，在那里其離開循環(huán)或轉(zhuǎn)化成糖原。肌肉糖原沉積是葡萄糖調(diào)節(jié)平衡作用中的主要決定環(huán)節(jié)，并且II型糖尿病具有缺乏的肌肉糖原貯存。有證據(jù)表明GSK3活性活性的增加在II型糖尿病中很重要[Chen，Y.H.；Hansen，L.；Chen，M.X.；Bjorbaek，C.；Vestergaard，H.；Hansen，T.；Cohen，P.T.；Pedersen，O.Diabetes，1994，43，1234]。此外，已經(jīng)證實GSK3在II型糖尿病的肌肉細胞中過表達并且在骨骼肌GSK3活性和胰島素作用之間存在逆相關(guān)[Nikoulina，S.E.；Ciaraldi，T.P.；Mudaliar，S.；Mohideen，P.；Carter，L.；Henry，R.R.Diabetes，2000，49，263]。
因此，GSK3的抑制在治療糖尿病尤其是II型糖尿病以及糖尿病神經(jīng)病變中有治療意義。
已知GSK3磷酸化除GS以外的許多底物，并因此參與多種生化通路的調(diào)節(jié)。例如，GSK在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中高表達。
因此本發(fā)明另一方面涉及式I或Ia化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療CNS疾病例如神經(jīng)退行性疾病的藥物中的用途。
優(yōu)選地，所述的CNS疾病為阿耳茨海默氏病。
Tau為參與阿耳茨海默氏病的病因?qū)W的GSK-3底物。在健康的神經(jīng)細胞中，Tau與微管蛋白共聚成微管。但是，在阿耳茨海默氏病中，tau形成了大的絲狀纏結(jié)，破壞了神經(jīng)細胞中的微管結(jié)構(gòu)，從而損壞營養(yǎng)的傳輸以及神經(jīng)信息的傳遞。
希望不被理論所局限，相信GSK3抑制劑能預(yù)防和/或逆轉(zhuǎn)微管-相關(guān)蛋白tau的異常高度磷酸化，后者是阿耳茨海默氏病以及許多其他的神經(jīng)退行性疾病如進行性核上性麻痹、皮質(zhì)基質(zhì)變性以及皮克氏病的不變特征。tau基因中的突變引起額顳癡呆的遺傳形式，進一步支持tau蛋白功能障礙與神經(jīng)退行性變化之間的關(guān)系[Goedert，M.Curr.Opin.Gen.Dev.，2001，11，343]。
本發(fā)明另一方面涉及式I或Ia化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療雙相性精神障礙(bipolar disorder)的藥物中的用途。
另一方面，本發(fā)明涉及式I或Ia化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療中風(fēng)的藥物中的用途。
降低神經(jīng)元細胞凋亡是頭外傷、中風(fēng)、癲癇癥以及運動神經(jīng)元疾病中的一個重要的治療目標[Mattson，M.P.Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.，2000，1，120]。因此，作為神經(jīng)元細胞中的促細胞凋亡因子，GSK3使該蛋白激酶成為設(shè)計用于治療這些疾病的抑制性藥物中有吸引力的治療靶標。
本發(fā)明另一方面涉及式I或Ia化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療禿發(fā)癥(alopecia)的藥物中的用途。
毛發(fā)生長受Wnt信號通路尤其是Wnt-3信號通路的控制。在皮膚的組織培養(yǎng)模型體系中，β-聯(lián)蛋白的不可降解的突變體的表達導(dǎo)致推定的干細胞的數(shù)量的顯著增加，其具有更大的增殖活性[Zhu，A.J.；Watt，F(xiàn).M.Development，1999，126，2285]。這種干細胞群體表達高水平的非-鈣粘蛋白-相關(guān)的β-聯(lián)蛋白[DasGupta，R.；Fuchs，E.Development，1999，126，4557]，其可促進高的增殖活性。此外，皮膚中過量表達截短的β-聯(lián)蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)生全新的發(fā)-囊形態(tài)發(fā)生，正常情況下只在胚胎形成中才發(fā)生。因此GSK3抑制劑的異常使用可用于治療光禿并可用于化療誘導(dǎo)的禿發(fā)癥的頭發(fā)生長的恢復(fù)。
本發(fā)明另一方面涉及治療GSK3-依賴性疾病的方法，所述的方法包括對需要的對象以足以抑制GSK3的量施用如上定義式I化合物或Ia或其可藥用鹽。
優(yōu)選地，所述的本發(fā)明的化合物或其可藥用鹽，以足以抑制GSK3β的量給予。
在一種本發(fā)明的實施方案中，所述的本發(fā)明化合物以足以抑制至少一種PLK酶的量給予。
polo樣激酶(PLKs)由絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族組成。在polo位點的有絲分裂果蠅melanogaster突變顯示出紡錘體異常[Sunkel等，J.Cell Sci.，1988，89，25]并且發(fā)現(xiàn)polo編碼有絲分裂激酶[Llamazares等，Genes Dev.，1991，5，2153]。在人體中，存在三種高度相關(guān)的PLKs[Glover等，Genes Dev.，1998，12，3777]。其包含高度同源的氨基-端催化性激酶結(jié)構(gòu)域并且其羧基端包含兩個或三個保守區(qū)域，polo盒。目前不完全了解polo盒的功能，但是其參與將PLKs靶向亞細胞區(qū)[Lee等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1998，95，9301；Leung等，Nat.Struct.Biol.，2002，9，719]、調(diào)節(jié)與其他蛋白的相互作用[Kauselmann等，EMBO J.，1999，18，5528]或構(gòu)成了自調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域部分[Nigg，Curr.Opin.Cell Biol.，1998，10，776]。此外，polo盒-依賴性PLK1活性對正確的中期/后期轉(zhuǎn)換以及胞質(zhì)分裂是必須的[Yuan等，Cancer Res.，2002，62，4186；Seong等，J.Biol.Chem.，2002，277，32282]。
研究表明人PLKs調(diào)節(jié)有絲分裂的一些基本方面[Lane等，J.Cell.Biol.，1996，135，1701；Cogswell等，Cell Growth Differ.，2000，11，615]。具體地，據(jù)信PLK1活性對G2后期/前期早期中的中心體的功能性成熟以及隨后的雙極紡錘體的形成是必需的。通過小的干擾RNA(siRNA)技術(shù)消耗細胞內(nèi)PLK1已經(jīng)證實該蛋白對多重有絲分裂過程以及胞質(zhì)分裂的完成是必需的[Liu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2002，99，8672]。
在更優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，所述的本發(fā)明的化合物以足以抑制PLK1的量給予。
在三種人PLK中，PLK1表征最為充分；其調(diào)節(jié)多種細胞裂分周期活性包括有絲分裂的起始[Toyoshima-Morimoto等，Nature，2001，410，215；Roshak等，Cell.Signalling，2000，12，405]、DNA-損害關(guān)卡激活[Smits等，Nat.CellBiol.，2000，2，672；van Vugt等，J.Biol.Chem.，2001，276，41656]、調(diào)節(jié)后期促進復(fù)合物[Sumara等，Mol.Cell，2002，9，515；Golan等，J.Biol.Chem.，2002，277，15552；Kotani等，Mol.Cell，1998，1，371]、蛋白酶體的磷酸化[Feng等，Cell Growth Differ.，2001，12，29]以及中心體的復(fù)制以及成熟[Dai等，Oncogene，2002，21，6195]。
具體地，有絲分裂的啟動要求活化M-期促進因子(MPF)，細胞周期蛋白依賴性激酶CDK1和B-型細胞周期蛋白之間的復(fù)合物[Nurse，Nature，1990，344，503]。后者在細胞周期的S和G2期聚集并促進WEE1、MIK1和MYT1激酶對MPF復(fù)合物的磷酸化的抑制作用。在G2期末期，由雙重-特異性磷酸酶CDC25C導(dǎo)致的相應(yīng)脫磷酸作用引發(fā)MPF的活化[Nigg，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.，2001，2，21]。在分裂間期，細胞周期蛋白B定位至細胞質(zhì)[Hagting等，EMBO J.，1998，17，4127]，然后在前期磷酸化并且該事件引起核易位[Hagting等，Curr.Biol.，1999，9，680；Yang等，J.Biol.Chem.，2001，276，3604]。在前期的活性的MPF的核聚集被認為對啟動M-期事件很重要[Takizawa等，Curr.Opin.Cell Biol.，2000，12，658]。但是，由于WEE1，核MPF保持無活性，除非被CDC25C中和。磷酸酶CDC25C自身在分裂間期定位至細胞質(zhì)，并在前期在核中聚集[Seki等，Mol.Biol.Cell，1992，3，1373；Heald等，Cell，1993，74，463；Dalal等，Mol.Cell.Biol.，1999，19，4465]。細胞周期蛋白B[Toyoshima-Morimoto 等，Nature，2001，410，215]和CDC25C[Toyoshima-Morimoto等，EMBO Rep.，2002，3，341]二者的核進入可被PLK1的磷酸化促進[Roshak等，Cell.Signalling，2000，12，405]。這種激酶是M-期啟動的重要調(diào)節(jié)因子。
在一種特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物為ATP-拮抗性PLK1抑制劑。
在本發(fā)明中，ATP拮抗性指抑制劑化合物減少或防止PLK催化活性，即從ATP磷酸轉(zhuǎn)移至大分子PLK底物的活性，以一種削弱或破壞ATP結(jié)合的方式可逆地或不可逆地結(jié)合酶活性位點。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述的本發(fā)明化合物以足以抑制PLK2和/或PLK3的量給予。
哺乳動物PLK2(已知也為SNK)和PLK3(已知也為PRK和FNK)最初顯示為直接的早期基因產(chǎn)物。PLK3激酶活性似乎在S后期和G2期達到高峰。其也在DNA損害關(guān)卡活化以及嚴重的氧化應(yīng)激期間活化。PLK3也在細胞中微管動力學(xué)和中心體功能的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，并且PLK3表達下調(diào)導(dǎo)致細胞周期停滯和細胞凋亡[Wang等，Mol.Cell.Biol.，2002，22，3450]。PLK2是三種PLKs中了解最少的。PLK2和PLK3二者可能還具有其他的重要的有絲分裂后功能[Kauselmann等，EMBO J.，1999，18，5528]。
本發(fā)明另一方面涉及式I化合物用于抑制蛋白激酶的用途。
在該方面優(yōu)選的實施方案中，蛋白激酶為細胞周期蛋白依賴性激酶。優(yōu)選地，所述的蛋白激酶為CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8或CDK9，更優(yōu)選地CDK2。
本發(fā)明的另一方面涉及抑制蛋白激酶的方法，所述的方法包括將所述的蛋白激酶與式I化合物接觸。
在該方面優(yōu)選的實施方案中，蛋白激酶為細胞周期蛋白依賴性激酶，甚至更優(yōu)選地CDK2。
藥物組合物本發(fā)明的其他方面涉及一種藥物組合物，包括如第一方面定義的式I化合物與一種或多種可藥用稀釋劑、賦形劑或載體混合。甚至盡管本發(fā)明的化合物(包括其可藥用鹽、酯以及可藥用溶劑合物)可單獨給藥，通常它們與可藥用載體、賦形劑或稀釋劑一起給藥，尤其是用于人治療的時候。藥物組合物可用于人和獸醫(yī)中的人或動物使用。
對這里記載的藥物組合物的各種不同形式的合適的賦形劑的實例可見于“Handbook of Pharmaceutical Excipients，2ndEdition，(1994)，由A Wade和PJWeller編著。
治療用途的可接受的載體或稀釋劑是制藥領(lǐng)域中公知的，并且，在例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)中進行了記載。
合適的載體的實例包括乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、甘露醇、山梨醇等。合適的稀釋劑的實例包括乙醇、甘油和水。
藥用載體、賦形劑或稀釋劑可根據(jù)將要使用的給藥途徑以及標準的制藥規(guī)范進行選擇。藥物組合物可包含作為或除了載體、賦形劑或稀釋劑以外的任何合適的粘合劑、潤滑劑、助懸劑、包衣劑、助溶劑。
合適的粘合劑的實例包括淀粉、明膠、天然糖類如葡萄糖、無水乳糖、自由流動的乳糖、β-乳糖、玉米甜料、天然和合成的橡膠，如阿拉伯樹膠、黃蓍樹膠或藻酸鈉、羧基甲基纖維素和聚乙二醇。
合適的潤滑劑的實例包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。
防腐劑、穩(wěn)定劑、染料以及甚至調(diào)味劑可在藥物組合物中提供。防腐劑的實例包括苯甲酸鈉、山梨酸以及p-羥基苯甲酸的酯類。也可使用抗氧化劑以及助懸劑。
鹽/酯式I或Ia化合物可以鹽或酯尤其是藥物可接受的鹽或酯的形式提供。
本發(fā)明化合物的藥物可接受鹽包括它們合適的酸加成鹽或堿加成鹽。合適藥物鹽的綜述可見Berge等人的J.Pharm Sci，66，1-19(1977)。鹽為與例如以下酸形成的鹽強無機酸，如礦物酸，例如硫酸、磷酸或氫鹵酸；強有機羧酸，如未取代或取代(如被鹵代)的1至4個碳原子的鏈烷羧酸，例如乙酸；飽和或不飽和的二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或四鄰苯二甲酸(tetraphthalic)；羥基羧酸，例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或與有機磺酸，如未取代或取代(如被鹵代)的(C1-C4)烷基磺酸或芳基磺酸，如甲磺酸或?qū)妆交撬帷?br> 取決于被酯化的官能團，使用有機酸或醇/氫氧化物形成酯。有機酸包括羧酸，如未取代或取代(如被鹵代)的1至12個碳原子的鏈烷羧酸，例如乙酸；飽和或不飽和的二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或四鄰苯二甲酸；羥基羧酸，例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或與有機磺酸，如未取代或取代(如被鹵代)的(C1-C4)烷基磺酸或芳基磺酸，如甲磺酸或?qū)妆交撬?。合適的氫氧化物包括無機氫氧化物，如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋁。醇包括未取代或取代(如被鹵代)的1至12個碳原子的鏈烷醇。
對映異構(gòu)體/互變異構(gòu)體在前述討論的本發(fā)明的所有方面中，本發(fā)明還適當?shù)匕ㄊ絀或Ia化合物的全部對映異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能認識到具有光學(xué)性質(zhì)(一個或多個手性碳原子)或互變異構(gòu)特征的化合物?？赏ㄟ^本領(lǐng)域中已知的方法分離/制備相應(yīng)的對映異構(gòu)體和/或互變異構(gòu)體。
立體異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體本發(fā)明的一些化合物可以立體異構(gòu)體和/或幾何異構(gòu)體的形式存在，例如它們可具有一個或多個不對稱和/或幾何中心，并因此可以二種或多種立體異構(gòu)和/或幾何形式存在。本發(fā)明包括這些抑制劑藥劑所有的單獨立體異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體及它們的混合物的使用。權(quán)利要求中使用的術(shù)語包括這些形式，只要所述形式保留適當?shù)墓δ芑钚?但不必到相同程度)。
本發(fā)明還包括藥劑或其藥物可接受鹽的所有合適的同位素變體。本發(fā)明藥劑或其藥物可接受鹽的同位素變體定義為其中至少一個原子被具有相同原子序數(shù)但原子質(zhì)量與自然界中通常發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量不同的原子取代的物質(zhì)?？杀粨饺氲剿巹┖推渌幬锟山邮茺}的同位素的例子包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分別如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。藥劑和其藥物可接受鹽的一些同位素變體，例如結(jié)合放射性同位素如3H或14C的那些化合物，在藥物和/或底物組織分布研究中是有用的。含氚的即3H和碳-14即14C同位素因其容易制備和可檢測性而特別優(yōu)選。此外，用同位素如氘即2H的取代可因較大的代謝穩(wěn)定性而提供特定的治療益處，例如體內(nèi)半衰期增加或劑量要求降低，并因此可在一些情況下被優(yōu)選。通常可使用合適試劑的適當同位素變體通過常規(guī)過程制備本發(fā)明藥劑和其藥物可接受鹽的同位素變體。
溶劑合物本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的溶劑合物形式的用途。權(quán)利要求中使用的術(shù)語包括這些形式。
多晶型物本發(fā)明還涉及各種結(jié)晶形式、多晶型形式和無水/水合形式的本發(fā)明的化合物。眾所周知，在藥物工業(yè)中可通過稍微改變這種化合物合成制備中所用溶劑的純化方法和或分離形式來分離得到化合物的任意這類形式。
前體藥物本發(fā)明還包括前體藥物形式的本發(fā)明的化合物。這種前體藥物通常為一個或多個適當基團已被修飾以使在對人或哺乳動物對象給藥后所述的修飾可被逆轉(zhuǎn)的式I化合物。雖然為了實現(xiàn)體內(nèi)逆轉(zhuǎn)可與這種前體藥物一起給藥第二種藥劑，但通常通過在這類對象中天然存在的酶實現(xiàn)這種逆轉(zhuǎn)。這類修飾的例子包括酯(例如上述那些中的任一種)，其中可通過酯酶等進行逆轉(zhuǎn)。其它這類系統(tǒng)為本領(lǐng)域中那些技術(shù)人員所熟知。
給藥可使本發(fā)明的藥物組合物適于口服、直腸、陰道、腸胃外、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、支氣管內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、鼻、口腔或舌下給藥途徑。
對于口服給藥，特別利用壓縮片劑、藥丸、片劑、凝膠(gellules)、滴劑和膠囊。優(yōu)選地，這些組合物每劑包含1-250mg和更優(yōu)選10-100mg的有效成分。
其它給藥形式包括溶液或乳液，它們可經(jīng)靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)或肌內(nèi)給藥，并由無菌或可滅菌溶液制備。本發(fā)明的藥物組合物還可為栓劑、陰道栓劑、混懸劑、乳液、洗液、軟膏、乳膏劑、凝膠、噴霧劑、溶液或撲粉(dusting powder)的形式。
經(jīng)皮給藥的替代方式是利用皮膚貼片。例如，可將有效成分摻入到由聚乙二醇含水乳液或液體石蠟組成的乳膏劑內(nèi)。還可以1-10wt％的濃度將有效成分摻入到由白蠟或白色軟石蠟基質(zhì)與所需要的穩(wěn)定劑和防腐劑共同組成的軟膏內(nèi)。
可注射形式每劑可包含10-1000mg、優(yōu)選10-250mg的有效成分。
組合物可被配制成單元劑型，即包含單元劑量或單元劑量的多重單位或亞單位的形式的離散部分。
在一種特別優(yōu)選的實施方案中，靜脈內(nèi)給藥本發(fā)明的聯(lián)合或藥物組合物。
劑量本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員不用額外試驗就可容易地確定對患者給藥的本發(fā)明的組合物的適宜劑量。典型地，醫(yī)師會確定對個體患者最適合的實際劑量，并且根據(jù)各種因素進行調(diào)整，包括使用的具體化合物的活性、化合物的代謝穩(wěn)定性和作用長短、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥方式和時間、排泄速度、藥物聯(lián)合、特定病癥的嚴重程度和個體正接受的治療。本文公開的劑量為一般情況的示例。當然也可有有益的較高或較低劑量范圍個別情況，這都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
根據(jù)需要，可以0.01-30mg/kg體重，如0.1-10mg/kg體重，更優(yōu)選0.1-1mg/kg體重的劑量給藥所述藥劑。
在示例性的實施方案中，對病人施用一或多劑10～150mg/天用于治療惡性腫瘤。
組合在特別優(yōu)選的實施方案中，一或多種本發(fā)明的化合物與一或多種其他的抗癌癥劑組合給藥，例如，市場上提供的現(xiàn)有的抗癌癥藥物。在這種情況下，本發(fā)明的化合物可連續(xù)地、同時地或先后地與一或多種抗癌癥劑組合給藥。
抗癌癥藥通常在組合使用的時候更有效。尤其地，組合療法可以避免主要毒性作用、作用機制以及耐藥機制的重疊。此外，也可以以最大耐受劑量并在這些劑量之間以最小的時間間隔施用大多數(shù)藥物。治療藥物組合的主要優(yōu)勢在于可能通過生化相互作用促進加和的或可能的協(xié)同作用，并且也可能降低在早期腫瘤細胞中的耐藥性的出現(xiàn)，后者響應(yīng)于用單藥進行的初始化療。在選擇藥物組合時候利用生化相互作用的實例通過下述事實得到證實施用亞葉酸增加5-氟尿嘧啶的活性細胞內(nèi)代謝物對其靶標胸苷酸合酶的結(jié)合，從而增加其細胞毒性活性。
許多組合目前已經(jīng)用于癌癥和白血病的治療中。醫(yī)學(xué)實踐的更廣泛的評論可見″Oncologic Therapies″，由E.E.Vokes和H.M.Golomb編著，由Springer出版。
可通過研究受試化合物與已知的或認為在最初治療具體的癌癥中或衍生自癌癥的細胞系中有價值的化合物的抑制活性而暗示有利的組合。這種方法也可用于測定施用藥劑的順序，即，之前、同時或之后。所述的給藥方案可為這里鑒定的所有的細胞周期作用藥物的特征。
天然的/非天然的氨基酸在一種優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，R9、R10或R11可為天然的或非天然的氨基酸。
這里使用的術(shù)語“非天然的氨基酸”指氨基酸的衍生物，并且可以例如包括α和α-二取代的氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸、天然氨基酸鹵代衍生物如三氟酪氨酸、p-Cl-苯基丙氨酸、p-Br-苯基丙氨酸、p-I-苯基丙氨酸、L-烯丙基-甘氨酸、β-丙氨酸、L-α-氨基丁酸L-γ-氨基丁酸、L-α-氨基異丁酸、L-ε-氨基己酸、7-氨基庚酸、L-甲硫氨酸砜、L-正亮氨酸、L-正纈氨酸、p-硝基-L-苯基丙氨酸、L-羥基脯氨酸、L-硫代脯氨酸、苯基丙氨酸(Phe)的甲基衍生物如4-甲基-Phe、五甲基-Phe、L-Phe(4-氨基)、L-Tyr(甲基)、L-Phe(4-異丙基)、L-Tic(1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸)、L-二氨基丙酸以及L-Phe(4-芐基)。
裝置在一種優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，R9、R10或R11基團容許將2-苯基氨基-4-雜芳基-嘧啶化合物固定至載體上。例如，R9、R10或R11基團可包含化學(xué)官能團，用來共價連接至固相，如通常見于基質(zhì)(微量滴定板的孔、微珠、膜等)的功能化的聚合物(如瓊脂糖、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯等)上，或用于生化分析或親和色譜?；蛘撸琑9、R10或R11基團可連接至其他的小分子(如生物素)或多肽(如抗原)，其可用于非共價固定，通過結(jié)合至固定的受體(如在生物素的情形下為親和素或鏈親和素，或在抗原的情形下為特定的抗體)。
分析本發(fā)明另一方面涉及如前定義的式I或Ia化合物在用于鑒別其他的候選化合物的分析中的用途，所述候選化合物影響一或多種CDK酶的活性。
優(yōu)選地，所述的分析能鑒別能抑制一或多種CDK酶、GSK或PLK酶的候選化合物。
更優(yōu)選地，所述的分析為競爭性結(jié)合分析。
優(yōu)選地，候選化合物通過對本發(fā)明的化合物進行常規(guī)的SAR修飾而產(chǎn)生。
這里使用的術(shù)語“常規(guī)的SAR修飾”指本領(lǐng)域中公知的通過化學(xué)衍生改變給定化合物的標準方法。
因此，一方面，鑒別的化合物可用作模型(例如，模板)，用于開發(fā)其他的化合物。在這些測試中使用的化合物可為溶液中的游離狀態(tài)、固定到固相支持物上、結(jié)合至細胞表面或位于細胞內(nèi)。可測量在所述的化合物和測試的試劑之間的結(jié)合復(fù)合物的形成或活性的缺失。
本發(fā)明的分析可為一種篩選，其中測試大量的試劑。一方面，本發(fā)明的分析方法為高通量篩選。
本發(fā)明還包括利用競爭性藥物篩選分析，其中能結(jié)合化合物的中和抗體特異地與受試化合物競爭結(jié)合化合物。
用于篩選的另一種技術(shù)為對物質(zhì)具有合適的結(jié)合親和力的試劑的高通量篩選(HTS)，并且基于在WO 84/03564中詳細描述的方法。
預(yù)期本發(fā)明的分析方法適于小和大規(guī)模的受試化合物的篩選以及用于定量分析。
優(yōu)選地，競爭結(jié)合分析包括在所述的CDK酶的已知底物存在下將式I或Ia化合物與CDK酶接觸，并檢測所述的CDK酶和所述的已知底物之間的相互作用的任何變化。
本發(fā)明另一方面提供了一種用于檢測配體結(jié)合至CDK酶的方法，所述的包括下述步驟(i)在所述的CDK酶已知底物存在下將配體與CDK酶接觸；(ii)檢測所述的CDK酶和所述的已知底物之間的相互作用的任何變化；并且其中所述的配體為式I或Ia化合物。
本發(fā)明一方面涉及一種方法，包括下述步驟(a)進行上述的分析方法；(b)鑒別一或多種能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；以及(c)制備一定量的所述的一或多種配體。
本發(fā)明另一方面提供了一種方法，包括下述步驟(a)進行上述的分析方法；(b)鑒別一或多種能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；以及(c)制備包括所述的一或多種配體的藥物組合物。
本發(fā)明另一方面涉及一種方法，包括下述步驟(a)進行上述的分析方法；(b)鑒別一或多種能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；以及(c)修飾一或多種所述的能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；(d)進行上述的分析方法；(e)任選制備包括所述的一或多種配體的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及利用上述方法鑒定的配體。
本發(fā)明另一方面還涉及包括利用上述方法鑒定的配體的藥物組合物。
本發(fā)明另一方面涉及利用上述方法鑒定的配體在制備用于治療增生性疾病的藥物組合物中的用途。
上述方法可用于篩選可用作一或多種CDK酶的抑制劑的配體。
本發(fā)明進一步通過舉例進行說明。
實施例實施例1化學(xué)合成增溶成分的共價連接可通過本領(lǐng)域公知的許多不同方式實現(xiàn)(WermuthCG.Preparation of water-soluble compounds by covalent attachment ofsolubilizing moieties.InPractice of Medicinal Chemistry；Academic PressLondon，UK，1996；pp 755-776)。例如，2-苯基氨基-4-雜芳基-嘧啶衍生物或其合成前體中的氨基取代基可用適當增溶成分前體中的羰基官能團進行酰基化或烷基化。類似地，2-苯基氨基-4-雜芳基-嘧啶衍生物中的羰基可用適當?shù)脑鋈艹煞智绑w進行氨化或烷基化。苯基氨基-4-雜芳基-嘧啶或前體中的芳香C上的鹵素基團可用增溶成分前體中的親核基團進行取代。合適的2-苯基氨基-4-雜芳基-嘧啶前體可根據(jù)Fischer等的教導(dǎo)進行制備(Fischer PM，Wang S.PCT Intl.Patent Appl.Publ.WO 01/072745；Cyclacel Limited，UK，2001)。一些合成以及分析細節(jié)例如本發(fā)明化合物(參見表1)在下面實施例2中給出。
實施例2[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺[1]。
通過N′-[5-(3-二甲基氨基-丙烯?；?-4-甲基-噻唑-2-基]-N，N-二甲基-甲脒(從1-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-乙酮和N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛制備得到)以及N-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胍硝酸鹽之間的縮合反應(yīng)制備得到。
黃色固體。M.p.300-304℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.46(s，3H，CH3)，3.07(m，4H，CH2)，3.76(m，4H，CH2)，6.85(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，6.92(m，2H，Ph-H)，7.53(br.s，1H，NH)，7.67(m，2H，Ph-H)，8.30(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.25(br.s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 369[M+H]+(C18H20N6OS理論值368.5)。-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺[2]。
利用3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胍硝酸鹽之間的縮合反應(yīng)制備得到?；野咨墓腆w。
1H-NMR(CDCl3)δ2.69(s，3H，CH3)，2.70(s，3H，CH3)，3.14(t，4H，J＝4.8Hz，CH2)，3.72(t，4H，J＝4.9Hz，CH2)，6.89(d，1H，J＝5.1Hz，嘧啶基-H)，6.95(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，6.98(br.s，1H，NH)，7.53(d，2H，J＝9.1Hz，Ph-H)，8.38(d，1H，J＝5.1Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 368[M+H]+(C19H21N5OS理論值367.5)。-(4-嗎啉代苯基)-胺[3]利用3-二甲基氨基-1-(4-甲基-2-甲基氨基噻唑-5-基)-丙烯酮(從1-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-乙酮和N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛制備得到)和N-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胍硝酸鹽之間的縮合反應(yīng)制備得到?；野咨墓腆w。
分析RP-HPLCtR＝10.8分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.83(s，3H，CH3)，2.84(s，3H，CH3)，3.01(t，4H，J＝5.0Hz，CH2)，3.72(t，4H，J＝5.0Hz，CH2)，6.81(d，2H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，6.87(m，2H，Ph-H)，7.61(m，2H，Ph-H)，8.12(br.s，1H，NH)，8.26(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.19(br.s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 383[M+H]+(C19H22N6OS理論值382.5)。-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺[4]。
利用3-二甲基氨基-1-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮(從1-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-乙酮和N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛制備得到)和N-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胍硝酸鹽之間的縮合反應(yīng)制備得到?；野咨墓腆w。
分析RP-HPLCtR＝19.4分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.16(t，J＝7.5Hz，3H，CH3)，2.48(s，3H，CH3)，3.26(m，2H，CH2)，3.01(t，4H，J＝5.0Hz，CH2)，3.72(t，4H，J＝5.0Hz，CH2)，6.80(d，2H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，6.86(d，2H，J＝9.0Hz，Ph-H)，7.60(d，2H，J＝9.0Hz，Ph-H)，8.25(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)，8.50(s，1H，NH)，9.16(br.s，1H，NH)。
1-(4-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙酮[5]
將1-氟-4-硝基苯(6.7g，47.5mmol)、1-哌嗪-1-基-乙酮(6.7g，52.3mmol)和K2CO3(6.6g，47.5mmol)在DMSO(60mL)中的溶液在100℃加熱18小時。冷卻后，將混合物傾入到H2O(0.5L)中。過濾形成的黃色沉淀并用H2O洗滌得到1-[4-(4-硝基-苯基)-哌嗪-1-基]-乙酮(11.9g)。將其部分溶解在EtOH(100mL)和AcOH(50mL)中。將混合物溫?zé)嶂良s65℃并以每次1-g的量加入鐵粉(-325目，12.0g，215mmol)。將混合物加熱回流2小時并濾過Celite墊。蒸發(fā)濾液得到黑色油狀物，加入2M NaOH水溶液調(diào)節(jié)堿性并用EtOAc萃取。將合并的有機物用鹽水洗滌，在MgSO4上干燥，過濾并真空蒸發(fā)得到黃色固體的1-[4-(4-氨基-苯基)-哌嗪-1-基]-乙酮(6.7g)。將部分該物質(zhì)(2.0g，9.12mmol)溶解在EtOH(5mL)中并加入HNO3(69％水溶液，1.26mL，19.61mmol)，然后加入氨腈(50％w/v水溶液，2.48mL，31.92mmol)。將形成的混合物加熱回流18小時。冷卻至室溫并傾入到Et2O(100mL)中。分出醚層并濃縮。過濾形成的沉淀并用iPrOH/Et2O洗滌，然后用純凈的Et2O洗滌。將淺褐色的固體干燥得到N-[4-(4-乙?；?哌嗪-1-基)-苯基]-胍硝酸鹽(1.2g)。將該物質(zhì)(1.1g，2.84mmol)溶解在2-甲氧基乙醇(14mL)中并加入K2CO3(0.79g，5.68mmol)，然后加入3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮(0.60g，2.84mmol)。將得到的混合物在115℃加熱18小時。冷卻并濃縮。將殘留物經(jīng)SiO2色譜(9:1 EtOAc/2M NH3的MeOH溶液)純化并從iPr2O/MeOH中重結(jié)晶得到淺褐色固體的標題化合物(930mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ2.15(s，3H，CH3)，2.69(s，3H，CH3)，2.71(s，3H，CH3)，3.12(t，2H，J＝5.4Hz，CH2)，3.15(t，2H，J＝5.4Hz，CH2)，3.63(t，2H，J＝5.4Hz，CH2)，3.79(t，2H，J＝5.4Hz，CH2)，6.90(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，6.96(m，2H，Ph-H)，6.98(br.s，1H，NH)，7.54(m，2H，Ph-H)，8.39(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 409.6(C21H24N6OS理論值408.5)。-(4-哌嗪-1-基-苯基)-胺[6]。
向1-(4-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙酮(0.67g，1.64mmol)在EtOH(3mL)的溶液中以穩(wěn)定的速度加入2M aqHCl(25mL)。將混合物加熱回流1小時，冷卻并加入固體Na2CO3調(diào)節(jié)堿性。將產(chǎn)物用EtOAc萃取。將合并的有機物用鹽水洗滌，在Na2SO4上干燥，過濾并蒸發(fā)得到黃色固體的標題化合物(580mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ2.62(s，3H，CH3)，2.63(s，3H，CH3)，2.99(m，4H，CH2)，3.06(m，4H，CH2)，6.81(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，6.89(m，3H，Ph-H，NH)，7.44(m，2H，Ph-H)，8.31(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 367(C19H22N6S理論值366.5)。-[4-(4’-2”-乙氧基乙醇哌嗪基)-苯基]-胺[7]將[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-哌嗪-1-基-苯基)-胺(0.1g，0.27mmol)、2-(2-氯-乙氧基)-乙醇(35μL，0.33mmol)、NaI(49mg，0.33mmol)和K2CO3(37mg，0.27mmol)在MeCN(2mL)中的混合物在密封管中利用微波反應(yīng)器(SmithCreator，Personal Chemistry Ltd)在170℃加熱15分鐘。蒸發(fā)溶劑至干并將殘留物經(jīng)SiO2色譜(98:2 to 95:5EtOAc/2M NH3的MeOH溶液)純化得到黃色泡沫的標題化合物(78mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ2.69(s，3H，CH3)，2.71(s，3H，CH3)，2.80-2.91(m，6H，CH2)，3.30(m，4H，CH2)，3.67(m，2H，CH2)，3.73(m，2H，CH2)，3.79(m，2H，CH2)，6.89(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，6.97(m，3H，Ph-H & NH)，7.52(m，2H，Ph-H)，8.02(br.s，1H，OH)，8.38(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 456(C23H30N6O2S理論值454.6)。
3-(4-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-基)-丙-1-醇[8]黃色固體。
1H-NMR(CDCl3)δ2.69(s，3H，CH3)，2.71(s，3H，CH3)，2.75(m，2H，CH2)，3.21(m，2H，CH2)，3.84(t，2H，J＝5.1Hz，CH2)，6.89(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，6.95(m，2H，Ph-H)，6.98(br.s，1H，NH)，7.51(m，2H，Ph-H)，8.38(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶-H)。
MS(ESI+)m/z 425.8(C22H28N6OS理論值424.6)。
2-(4-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇[9]
黃色固體。
1H-NMR(CDCl3)δ2.55(t，2H，J＝5.4Hz，CH2)，2.62(m，10H，CH3& CH2)，3.12(t，4H，J＝4.9Hz，CH2)，3.60(t，2H，J＝5.4Hz，CH2)，6.81(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，6.88(m，2H，Ph-H)，7.05(b r.s，1H，NH)，7.45(m，2H，Ph-H)，8.30(d，1H，J＝5.1Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 411.7(C21H26N6OS理論值410.5)。-[4-(4-甲磺?；?哌嗪-1-基)-苯基]-胺[10]向[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-哌嗪-1-基-苯基)-胺(86mg，0.23mmol)在無水CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入Et3N(39μL，0.28mmol)。冷卻至0℃后，滴加甲磺酰氯(22μL，0.28mmol)。攪拌15分鐘后，將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭⒗^續(xù)攪拌18小時。蒸發(fā)后，將殘留物經(jīng)SiO2色譜(98:2～95:5EtOAc/2M NH3的MeOH溶液)純化得到黃色固體的標題化合物(61mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ2.69(s，3H，CH3)，2.71(s，3H，CH3)，2.84(s，3H，CH3)，3.26(t，4H，J＝5.1Hz，CH2)，3.41(t，4H，J＝5.1Hz，CH2)，6.91(d，1H，J＝5.1Hz，嘧啶基-H)，6.98(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，7.10(br.s，1H，NH)，7.56(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，8.30(d，1H，J＝5.1Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 446(C20H24N6O2S2理論值444.6)。-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[11]將4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯基胺(2.17g，8.12mmol)部分地溶解在EtOH(5mL)中并滴加HNO3(69％水溶液，1.05mL，16.32mmol)，然后加入氨腈(50％水溶液，1.13mL，16.32mmol)。將混合物加熱回流18小時。后處理后，得到為紫色固體的N-[4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯基]-胍硝酸鹽(1.16g)。將該物質(zhì)(2.66mmol)、3-二甲基氨基-1-(4-甲基-2-甲基氨基噻唑-5-基)-丙烯酮(0.60g，2.66mmol)以及K2CO3(0.74g，5.32mmol)在2-甲氧基乙醇(15mL)中的混合物在120℃加熱18小時。冷卻后，將其傾入到EtOAc(100mL)中并濾過硅膠墊。蒸發(fā)濾液，并將殘留物經(jīng)SiO2色譜(庚烷/EtOAc)純化得到淺棕褐色的標題化合物(442mg)。
1H-NMR(CD3OD)δ2.44(s，3H，CH3)，2.56-2.58(m，4H，CH2)，2.91(s，3H，CH3)，3.09(m，4H，CH2)，3.51(s，2H，CH2)，6.70(d，1H，J＝5.6Hz，嘧啶基-H)，6.87(m，2H，Ph-H)，7.22(m，1H，Ph-H)，7.27(m，4H，Ph-H)，7.43(m，2H，Ph-H)，8.15(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 473.2(C26H29N7S理論值471.6)。-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺[12]利用3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胍硝酸鹽之間的縮合反應(yīng)制備得到。亮黃色固體。
1H-NMR(CDCl3)δ2.37(s，3H，CH3)，2.61(m，4H，CH2)，2.69(s，3H，CH3)，2.70(s，3H，CH3)，3.20(m，4H，CH2)，6.88(d，1H，J＝5.1Hz，嘧啶基-H)，6.94(s，1H，NH)，6.96(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，7.51(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，8.38(d，1H，J＝5.1Hz，嘧啶基-H)。
3-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丙酰胺[13]將[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺(0.12g，0.37mmol)、Boc-βAla-OH(0.18g，0.93mmol)、1，3-二異丙基碳二亞胺(0.07mL，0.45mmol)和4-N，N-二甲基氨基吡啶(36mg，0.3mmol)在干燥DMF(2mL)中的混合物室溫攪拌24小時。將混合物傾入到水中并用EtOAc萃取。將有機層合并并用鹽水洗滌，過濾，并在MgSO4上干燥。蒸發(fā)溶劑得到褐色的殘留物，將其經(jīng)SiO2色譜(1:1 EtOAc/PE)純化得到亮黃色固體的({4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基氨基甲?；?-甲基)-氨基甲酸叔丁基酯。
分析RP-HPLCtR＝19.5分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞93％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.11(s，9H，CH3)，2.54(s，3H，CH3)，3.62(m，2H，CH2)，5.38(m，2H，CH2)，7.06(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.46(m，1H，Ph-H)，7.72(m，1H，Ph-H)，8.15(m，1H，Ph-H)，8.45(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，8.77(s，1H，NH)。
將該物質(zhì)(97mg，0.19mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液用CF3COOH(1ml)處理。室溫攪拌22小時后，蒸發(fā)反應(yīng)混合物并經(jīng)制備性RP-HPLC(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫40分鐘，9mL/分鐘)純化得到為亮黃色固體的標題化合物(34mg)。
分析RP-HPLCtR＝14.0分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞93％)。
1H-NMR(CD3OD)δ2.64(s，3H，CH3)，3.30(m，2H，CH2)，3.33(m，2H，CH2)，7.14(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.52(t，1H，J＝8.2Hz，Ph-H)，7.63(m，1H，Ph-H)，7.96(m，1H，Ph-H)，8.46(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，8.88(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 400.6(C17H17N7O3S理論值399.4)。
(2S)-2-氨基-3-羥基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丙酰胺[14]從Boc-L-Ser-OH制備得到。灰白色的固體。
分析RP-HPLCtR＝13.7分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞93％)。
1H-NMR(CD3OD)δ2.45(s，3H，CH3)，3.65-3.77(m，3H，CH & CH2)，3.95(br.s，1H，OH)，7.03(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.36(t，1H，J＝6.5Hz，Ph-H)，7.63(m，1H，Ph-H)，7.97(m，1H，Ph-H)，8.41(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，8.63(s，1H，NH)。
(2R，3R)-2-氨基-3-羥基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺[15]從Boc-D-Thr-OH制備得到。黃色固體。
1H-NMR(CD3OD)δ1.35(d，3H，J＝6.1Hz，CH3)，2.66(s，1H，CH)，3.95(d，1H，J＝5.4Hz，CH)，7.17(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.51(m，1H，Ph-H)，7.97(m，1H，Ph-H)，8.51(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，8.92(m，1H，Ph-H)。
(2R)-2-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺[16]。
從Boc-D-Abu-OH制備得到。黃色固體。
1H-NMR(DMSO-d6)δ0.93(t，3H，J＝7.6Hz，CH3)，0.94(m，2H，CH2)，1.60(s，3H，CH3)，3.00(t，1H，J＝6.9Hz，CH)，6.10(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，6.44(m，1H，Ph-H)，6.77(m，1H，Ph-H)，6.87(m，1H，Ph-H)，7.42(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)和7.86(br.s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 414.6(C18H19N7O3S理論值413.5)。
(2S，3S)-2-氨基-3-羥基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺[17]從Boc-L-Thr-OH制備得到。黃色固體。
1H-NMR(CD3OD)δ1.19(d，3H，J＝6.6Hz，CH3)，2.63(s，3H，CH3)，3.89(m，1H，CH)，4.10(m，1H，CH)，7.20(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.55(t，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.81(d，1H，J＝8.5Hz，Ph-H)，8.16(d，1H，J＝8.5Hz，Ph-H)，8.58(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，8.80(s，1H，Ph-H)和10.17(s，1H，NH)。
4-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丁酰胺[18]。
黃色固體。
1H-NMR(CD3OD)δ1.87(m，2H，CH2)，2.52(s，3H，CH3)，2.56(m，2H，CH2)，2.84(m，2H，CH2)，7.17(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.55(t，1H，J＝8.3Hz，Ph-H)，7.79(m，1H，Ph-H)，8.13(m，1H，Ph-H)，8.54(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，8.83(s，1H，Ph-H)和10.12(s，1H，NH)。
3-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丙酰胺[19]。
黃色固體。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.57(m，2H，CH2)，2.71(s，3H，CH3)，2.92(m，2H，CH2)，3.02(m，4H，CH2)，3.73(m，4H，CH2)，6.87(d，2H，J＝8.0Hz，Ph-H)，6.95(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.61(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，8.38(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)和9.32(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 439(C21H25N7O2S理論值439.5)。
3-溴-N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-丙酰胺[20]。
將[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺(0.3g，1.0mmol)在DMF(2mL)中的溶液在冰浴上冷卻并用2-溴代丙酰氯(0.17g，1.0mmol)處理。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物在室溫攪拌18小時。將其傾入到水中并用CH2Cl2萃取。合并有機物，用鹽水洗滌，在MgSO4上干燥，并蒸發(fā)溶劑得到褐色的殘留物。將其經(jīng)SiO2色譜(1∶1 EtOAc/PE)純化得到亮黃色固體的標題化合物。
分析RP-HPLCtR＝17.1分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞93％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.99(m，2H，CH2)，2.68(s，3H，CH3)，4.65(m，2H，CH2)，7.02(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，7.11(m，2H，Ph-H)，7.62(m，2H，Ph-H)，8.19(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-3-嗎啉-4-基-丙酰胺[21]。
將3-溴-N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-丙酰胺(20mg，0.046mmol)和嗎啉(8μL，0.092mmol)在DMF(2mL)中的溶液室溫攪拌2小時。將反應(yīng)混合物經(jīng)制備性RP-HPLC(0-60％MeCN在0.1％aqCF3COOH中的溶液洗脫40分鐘，9mL/分鐘)純化得到蒼白色固體的標題化合物。
分析RP-HPLCtR＝13.3分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞93％)。
1H-NMR(CD3OD)δ2.66(s，3H，CH3)，3.23(m，2H，CH2)，3.33(m，2H，CH2)，3.41(m，4H，CH2)，3.87(m，2H，CH2)，4.13(m，2H，CH2)，7.04-7.09(m，3H，嘧啶基-H & Ph-H)，7.68(m，2H，Ph-H)，8.39(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 443.3(C21H23FN6O2S理論值442.5)。
N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-3-嗎啉-4-基-丙酰胺[22]黃色固體。
1H-NMR(CD3OD)δ2.64(s，3H，CH3)，3.23(m，2H，CH2)，3.33(m，2H，CH2)，3.41(m，4H，CH2)，3.87(m，2H，CH2)，4.13(m，2H，CH2)，7.04-7.09(m，3H，嘧啶基-H & Ph-H)，7.68(m，2H，Ph-H)，8.39(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 443.3(C21H23FN6O2S理論值442.5)。
N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙酰胺[23]黃色固體。
1H-NMR(CD3OD)δ2.94(s，3H，CH3)，3.01(m，2H，CH2)，3.24-3.43(m，4H，CH2)，3.65(m，2H，CH2)，7.14(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.52(m，1H，Ph-H)，7.86(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.99(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，8.44(m，1H，Ph-H)和8.79(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 485(C22H26N8O3S理論值482.6)。
2-氯-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-乙酰胺[24]將[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺(0.33g，1.0mmol)在干燥DMF(3mL)中的溶液在冰浴上冷卻。加入氯代乙酰氯(0.22g，2.0mmol)和吡啶(80μL)。室溫攪拌18小時后，將反應(yīng)混合物濃縮，傾入到水中并用CH2Cl2萃取。合并有機相，用鹽水洗滌，在MgSO4上干燥并蒸發(fā)至干。將得到的綠色殘留物經(jīng)SiO2色譜(1∶1 EtOAc/PE)純化得到灰色固體的標題化合物。
分析RP-HPLCtR＝20.6分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞97％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.45(s，3H，CH3)，4.12(s，2H，CH2)，7.03(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，7.42(m，1H，Ph-H)，7.63(m，1H，Ph-H)，8.01(m，1H，Ph-H)，8.41(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，8.64(s，1H，Ph-H)。
2-氯-N-{5-[2-(3-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺[25]褐色固體。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.65(s，3H，CH3)，4.42(s，2H，CH2)，7.01(m，1H，Ph-H)，7.25(m，1H，Ph-H)，7.61(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.98(s，1H，Ph-H)，8.75(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)和10.09(br.s，1H，NH)。
2-氯-N-{5-[2-(3-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺[26]褐色固體。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.58(s，3H，CH3)，3.78(s，3H，CH3)，4.36(s，2H，CH2)，6.51(m，1H，Ph-H)，7.08(d，1H，J＝5.5，嘧啶基-H)，7.14(t，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.23(m，1H，Ph-H)，7.59(s，1H，Ph-H)和8.45(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
2-氯-N-{5-[2-(4-二甲基氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺[27]黃色固體。
1H-NMR(CD3OD)δ2.57(s，3H，CH3)，3.23(s，6H，CH3)，4.22(s，2H，CH2)，7.06(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.57(d，2H，J＝9.5Hz，Ph-H)，7.73(d，2H，J＝9.5Hz，Ph-H)，8.14(br.s，1H，NH)和8.35(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
4-({4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基氨基甲酰基}-甲基)-哌嗪-1-羧酸叔丁基酯[28]將2-氯-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-乙酰胺(40mg，0.1mmol)在DMF(2mL)中的溶液在冰浴上冷卻。加入哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(40mg，0.21mmol)。室溫攪拌16小時后，將反應(yīng)混合物經(jīng)制備性RP-HPLC(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫40分鐘，9mL/分鐘)純化得到亮黃色固體的標題化合物(20mg)。
分析RP-HPLCtR＝16.9分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞97％)。
1H-NMR(CD3OD)δ2.65(s，3H，CH3)，2.87(m，4H，CH2)，3.36(m，4H，CH2)，4.66(s，2H，CH2)，7.71(m，1H，嘧啶基-H)，7.89(t，1H，J＝8.1Hz，Ph-H)，8.15(m，1H，Ph-H)，7.42(m，1H，Ph-H)，7.67(m，2H，嘧啶基-H & Ph-H)。
N-{5-[2-(4-二甲基氨基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-2-[2-(2-羥基-乙氧基)-乙基氨基]-乙酰胺[29]分析RP-HPLCtR＝10.52分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞97％)。
1H-NMR(CD3OD)δ3.28(s，3H，CH3)，3.41(s，6H，CH3)，4.04(m，2H，CH2)，4.28(m，2H，4H，CH2)，4.34(m，2H，CH2)，4.50(m，2H，CH2)，4.94(br.s，2H，CH2)，7.92(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，8.00(d，2H，J＝9.0Hz，Ph-H)，8.41(m，1H，J＝9.0Hz，Ph-H)，8.87(b r.s，1H，NH/OH)，9.31(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
6-[5-(2-氧代-六氫-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-基)-戊?；被鵠-己酸(2-{4-甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基氨基甲?；鶀-乙基)-酰胺[30]將3-氨基-N-{4-甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-丙酰胺(75mg，0.17mmol)在DMF(1mL)中的溶液用琥珀酰亞胺基-6-(生物素酰胺)己酸酯(32mg，0.085mmol)處理。室溫攪拌3小時后，反應(yīng)混合物經(jīng)制備性RP-HPLC(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫40分鐘，9mL/分鐘)純化得到橙色固體的標題化合物。
分析RP-HPLCtR＝13.2分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞97％)。
MS(ESI+)m/z 776(C37H50N10O5S2理論值778.9)。
N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-甲磺酰胺[31]該化合物利用甲基磺酰氯和Et3N在DMF中處理[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺制備得到?；疑腆w。
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.31(s，3H，CH3)，3.63(s，3H，CH3)，7.32(m，1H，嘧啶基-H)，7.42(m，2H，Ph-H)，8.11(m，2H，Ph-H)，8.63(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)。
N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-甲磺酰胺[32]向[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺(1.0mmol，0.33g)和甲基磺酰氯(2.0mmol，0.22g)在干燥DMF(2mL)中的混合物中加入Et3N(0.28mL)。將反應(yīng)混合物室溫攪拌20小時。冷卻后，將混合物用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，并在MgSO4上干燥。蒸發(fā)溶劑并將殘留物經(jīng)制備性RP-HPLC純化，利用從10-70％MeCN的0.1％aq CF3COOH溶液洗脫40分鐘。得到橙色固體的標題化合物。
分析RP-HPLCtR＝17.4分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞97％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.10(s，3H，CH3)，3.25(s，3H，CH3)，7.05(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，7.42(m，1H，Ph-H)，7.63(m，1H，Ph-H)，7.98(m，1H，Ph-H)，8.21(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，8.42(s，1H，Ph-H)，9.18(s，1H，NH)。
2-氯-N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺[33]。
該化合物從[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺制備得到。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.94(s，3H，CH3)，4.75(s，2H，CH2)，7.44(m，3H，嘧啶基-H & Ph-H)，8.09(m，2H，Ph-H)，8.28(s，1H，NH)，8.80(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)。
2-氯-N-{5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺[34]該化合物利用[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氯-苯基)-胺的氯代乙?；苽涞玫?。褐色固體。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.65(s，3H，CH3)，4.42(s，2H，CH2)，7.01(m，1H，Ph-H)，7.25(m，1H，Ph-H)，7.61(d，1H，J＝5.5，嘧啶基-H)，7.98(s，1H，Ph-H)，8.75(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，10.09(br.s，1H，NH)。
N-{5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基)-3-嗎啉-4-基-丙酰胺[35]。
將3-氯-N-{5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-丙酰胺用嗎啉處理。
分析RP-HPLCtR＝12.7分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.50(m，2H，CH2)，2.52(s，3H，CH3)，3.05-3.78(m，8H，CH2)，3.81(m，2H，CH2)，7.12(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.30(d，2H，J＝7.0Hz，Ph-H)，7.80(d，2H，J＝7.0Hz，Ph-H)，8.51(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)，9.80(brs，1H，NH)。
N-{5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-3-(2-二乙基氨基-乙基氨基)-丙酰胺[36]。
將3-溴-N-{5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-丙酰胺用N1，N1-二乙基-乙烷-1，2-二胺處理。
分析RP-HPLCtR＝11.8分鐘(10-70％MeCN，純度＞97％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ1.20(t，6H，J＝7.0Hz，CH3)，1.53(d，2H，J＝6.5Hz，CH2)，2.52(s，6H，CH3)，3.18(m，4H，CH2)，3.28(m，4H，CH2)，7.13(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)，7.30(m，2H，Ph-H)，7.81(m，2H，Ph-H)，8.51(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)，9.82(brs，1H，NH)。
N-{5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-3-(2-嗎啉-4-基-乙基氨基)-丙酰胺[37]。
將3-溴-N-{5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-丙酰胺用2-嗎啉-4-基-乙基胺處理(或者將3-氨基-N-{5-[2-(4-氯-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-丙酰胺用4-(2-氯-乙基)-嗎啉處理。
分析RP-HPLCtR＝11.5分鐘(10-70％MeCN，純度＞97％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ1.52(d，2H，J＝7.0Hz，CH2)，2.48(m，2H，CH2)，2.52(s，3H，CH3)，3.05-3.11(m，4H，CH2)，3.25-3.28(m，6H，CH2)，4.08(m，2H，CH2)，7.13(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.29(m，2H，Ph-H)，7.82(m，2H，Ph-H)，8.51(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.82(brs，1H，NH)。
N-{5-[2-(4-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-3-嗎啉-4-基-丙酰胺[38]。
將3-溴-N-{5-[2-(4-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-丙酰胺用嗎啉處理。
分析RP-HPLCtR＝12.7分鐘(0-60％MeCN，純度＞90％)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.20(m，2H，CH2)，2.54-2.63(m，7H，CH3and CH2)，3.34(m，2H，CH2)，3.80(m，5H，CH3and o)，4.03(m，2H，CH2)，6.87-6.92(m，3H，嘧啶基-H和Ph-H)，7.17(brs，1H，NH)，7.53(m，2H，Ph-H)，8.35(m，1H，嘧啶基-H)，10.33(brs，1H，NH)。
N-{5-[2-(3-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-3-嗎啉-4-基-丙酰胺[39]。
將3-溴-N-{5-[2-(3-甲氧基苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-丙酰胺用嗎啉處理。
分析RP-HPLCtR＝13.6分鐘(0-60％MeCN，純度＞94％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ1.20(m，2H，CH2)，2.48(m，4H，CH2)，2.58(s，3H，CH3)，3.41-3.57(m，6H，CH2)，3.79(s，3H，CH3)，6.52(d，1H，J＝7.0Hz，Ph-H)，7.07(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.15(t，1H，J＝7.3Hz，Ph-H)，7.22(m，1H，Ph-H)，7.62(brs，1H，Ph-H)，8.46(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.58(brs，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 456.01[M+H]+(C22H26N6SO3理論值454.55)。
N-{5-[2-(4-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙酰胺[40]。
將3-溴-N-(5-[2-(4-甲氧基苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-丙酰胺用1-甲基-哌嗪處理。
分析RP-HPLCtR＝13.0分鐘(0-60％MeCN，純度＞94％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ1.17(m，2H，CH2)，2.11(m，2H，CH2)，2.48(m，4H，CH2)，2.57(s，3H，CH3)，3.28(s，3H，CH3)，3.30(m，4H，CH2)，3.72(s，3H，CH3)，6.85(m，2H，Ph-H)，6.97(m，1H，嘧啶基-H)，7.63(m，2H，Ph-H)，8.38(d，1H，J＝5.1Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 468.57[M+H]+(C23H26N7SO2理論值467.59)。
N-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-乙酰胺[45]。
利用3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(4-乙酰胺基苯基)-胍硝酸鹽之間的縮合反應(yīng)制備得到?；野咨墓腆w。Mp.219-220℃。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.00(s，3H，CH3)，2.61(s，3H，CH3)，2.64(s，3H，CH3)，7.04(d，1H，J＝4.9Hz，嘧啶基-H)，7.48(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，7.64(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，8.47(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.58(s，1H，NH)，9.82(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 340.02[M+H]+(C17H17N5OS理論值339.42)。
N-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-N-甲基-乙酰胺[48]。
利用3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(4-N-甲基乙酰胺基苯基)-胍硝酸鹽之間的縮合反應(yīng)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ1.75(s，3H，CH3)，2.62(s，3H，CH3)，2.64(s，3H，CH3)，3.11(s，3H，CH3)，7.11(d，1H，J＝4.9Hz，嘧啶基-H)，7.24(d，2H，J＝7.8Hz，Ph-H)，7.83(d，2H，J＝7.8Hz，Ph-H)，8.53(d，1H，J＝4.9Hz，嘧啶基-H)，9.83(brs，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 354.88[M+H]+(C18H19N5OS理論值353.44)。
1-(4-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-基)-丙-2-醇[49]。
將[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-哌嗪-1-基-苯基)-胺用1-氯-2-丙醇處理。
1H-NMR(CDCl3)δ1.10(d，3H，J＝6.0Hz，CH3)，2.26-2.33(m，2H，CH2)，2.49-2.53(m，2H，CH2)，2.61(s，3H，CH3)，2.63(s，3H，CH3)，2.76-2.80(m，2H，CH2)，3.07-3.13(m，4H，CH2)，3.83(m，1H，CH)，6.81(d，1H，J＝4.4Hz，嘧啶基-H)，6.88(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，7.02(brs，1H，OH)，7.44(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，8.30(d，1H，J＝4.4Hz，嘧啶基-H)。
2-氯-N-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-乙酰胺[50]。
將[4-(2，4-二甲基噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氨基苯基)-胺用氯代乙酰氯處理。Mp.217-219℃。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.61(s，3H，CH3)，2.64(s，3H，CH3)，4.22(s，2H，CH2)，7.05(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.50(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，7.70(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，8.49(d，1H，J＝4.9Hz，嘧啶基-H)，9.65(s，1H，NH)，10.20(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 374.47[M+H]+(C17H16ClN5OS理論值373.86)。
N-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-2-嗎啉-4-基-乙酰胺[51]。
將2-氯-N-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-乙酰胺用嗎啉處理。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.61(s，3H，CH3)，2.64(s，3H，CH3)，3.09(s，2H，CH2)，3.27-3.31(m，4H，CH2)，3.62-3.64(m，4H，CH2)，7.04(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.54(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，7.67(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，8.48(d，1H，J＝4.9Hz，嘧啶基-H)，9.59(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 425.01[M+H]+(C21H24N6O2S理論值424.52)。
N-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-2-[1，2，4]三唑-1-基-乙酰胺[52]。
將2-氯-N-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-乙酰胺用1H-[1，2，4]三唑處理。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.61(s，3H，CH3)，2.63(s，3H，CH3)，5.10(s，2H，CH2)，7.05(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.50(d，2H，J＝8.3Hz，嘧啶基-H)，7.69(d，2H，J＝8.9Hz，Ph-H)，7.98(s，1H，芳基-H)，8.48(d，1H，J＝4.9Hz，嘧啶基-H)，8.53(s，1H，芳基-H)，9.62(brs，1H，NH)，10.30(brs，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 406.97(C19H18N8OS理論值406.47)。
N-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-2-吡咯烷-1-基-乙酰胺[53]。
將2-氯-N-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-乙酰胺用吡咯烷處理。
1H-NMR(DMSO-D6)δ1.74(m，4H，CH2)，2.58(m，4H，CH2)，2.61(s，3H，CH3)，2.64(s，3H，CH3)，3.20(s，2H，CH2)，7.04(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.55(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，7.66(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，8.48(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.55(s，1H，NH)，9.58(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 406.97[M+H]+(C21H24N6OS理論值408.52)。
N-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-2-咪唑-1-基-乙酰胺[54]。
將用2-氯-N-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-乙酰胺用1H-咪唑處理。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.61(s，3H，CH3)，2.63(s，3H，CH3)，4.86(s，2H，CH2)，6.88(s，1H，芳基-H)，7.04(d，1H，J＝5.9Hz，嘧啶基-H)，7.15(s，1H，芳基-H)，7.50(d，2H，J＝7.8Hz，Ph-H)，7.62(s，1H，芳基-H)，7.68(d，2H，J＝7.8Hz，Ph-H)，8.48(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.60(s，1H，NH)，10.18(brs，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 406.02[M+H]+(C20H19N7OS理論值405.48)。
3-[4-(4-甲基-2-嗎啉-4-基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚[55]。
將嗎啉-4-腈(10g，89.19mmol)在EtOH(65mL)中的溶液在冰浴上冷卻。將無水的NH3鼓泡通入溶液5分鐘，然后通入硫化氫。導(dǎo)入H2S后不久觀察到白色的沉淀。再加入兩種氣體45分鐘，停止加入NH3將H2S繼續(xù)加入15分鐘。收集形成的沉淀，用冷水、MeOH洗滌并再高真空下得到嗎啉-4-硫代羥酸酰胺(12.83g)。
Mp.173-174℃。
1H-NMR(DMSO-D6)δ3.54(t，4H，J＝4.9Hz，CH2)，3.70(m，4H，CH2)，7.46(brs，2H，NH2)。
將其首先利用3-溴-戊烷-2，4-二酮處理轉(zhuǎn)化成1-(4-甲基-2-嗎啉-4-基-噻唑-5-基)-乙酮，然后按照通常的方式用二甲氧基甲基-二甲基-胺處理得到3-二甲基氨基-1-(4-甲基-2-嗎啉-4-基-噻唑-5-基)-丙烯酮。后者烯胺酮與N-(3-羥基-苯基)-胍硝酸鹽縮合得到灰白色的固體的標題化合物。
Mp.227-229C。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.49(s，3H，CH3)，3.46(t，4H，J＝4.4Hz，CH2)，3.71(t，4H，J＝4.4Hz，嘧啶基-H)，6.34(d，1H，J＝8.8Hz，Ph-H)，6.91(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.03(t，1H，J＝7.8Hz，Ph-H)，7.20-7.22(m，2H，Ph-H)，8.34(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.17(s，1H，OH/NH)，9.32(s，1H，NH/OH)。
MS(ESI+)m/z 370.10[M+H]+(C18H19N5O2S理論值369.44)。-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺[56]。
將3-二甲基氨基-1-(4-甲基-2-嗎啉代-噻唑-5-基)-丙烯酮用N-(4-嗎啉代苯基)-胍硝酸鹽處理?；野咨墓腆w。Mp.229-231℃。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.48(s，3H，CH3)，3.02(t，4H，J＝4.0Hz，CH2)，3.46(t，4H，J＝4.0Hz，CH2)，3.70-3.73(m，8H，CH2)，6.86(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，6.89(d，2H，J＝9.3Hz，Ph-H)，7.60(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，8.30(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.22(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 439.03[M+H]+(C22H26N6O2S理論值438.55)。
N，N-二甲基-N′-[4-(4-甲基-2-嗎啉-4-基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯-1，4-二胺[57]。
處理3-二甲基氨基-1-(4-甲基-2-嗎啉代-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(4-N，N-二甲基氨基苯基)-胍硝酸鹽。黃色固體。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.48(s，3H，CH3)，2.82(s，6H，CH3)，3.46(t，4H，J＝4.9Hz，嘧啶基-H)，3.70(t，4H，J＝4.9Hz，CH2)，6.70(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，6.82(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.53(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，8.27(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.09(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 397.03[M+H]+(C20H24N6OS理論值396.51)。
2-{4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-乙醇[59]。
利用3-二甲基氨基-1-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-[4-(2-羥基-乙基)-苯基]-胍硝酸鹽之間的縮合反應(yīng)制備得到?；野咨墓腆w。
Mp 216-218℃。
分析RP-HPLCtR＝9.1分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.46(s，3H，CH3)，3.05(s，3H，CH3)，3.55(m，2H，CH2)，4.58(m，2H，CH2)，6.85(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.08(m，2H，Ph-H)，7.64(m，2H，Ph-H)，8.01(m，1H，OH)，8.29(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.30(brs，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 363.99[M+H]+Na(C17H19N5SONa理論值364.43)。
1-(4-{4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙酮[61]。
利用3-二甲基氨基-1-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-[4-(4-乙酰基-哌嗪-1-基)-苯基]-胍硝酸鹽之間的縮合反應(yīng)制備得到。黃色固體。
Mp 213-214℃。
分析RP-HPLCtR＝8.8分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.43(s，3H，CH3)，3.02(s，3H，CH3)，3.23(s，3H，CH3)，2.99(m，2H，CH2)，3.06(t，2H，CH2)，3.57(t，4H，CH2)，6.82(d，1H，J＝6.0Hz，嘧啶基-H)，6.89(d，2H，J＝9.0Hz，Ph-H)，7.62(d，2H，J＝9.5Hz，Ph-H)，8.26(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.18(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 424.07[M+H]+(C21H25N7OS理論值423.54)。-(4-哌嗪-1-基-苯基)-胺[62]。
通過1-(4-{4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙酮在2M aq HCl中水解。
黃色固體。
分析RP-HPLCtR＝8.8分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.45(3，3H，CH3)，2.83(t，4H，J＝5.9Hz，CH2)，2.85(d，3H，J＝4.9Hz，CH2)，2.95(t，4H，J＝4.9Hz，CH2)，6.81(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，6.85(d，2H，J＝9.3Hz，Ph-H)，7.58(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，7.99(m，1H，NH)，8.26(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.14(brs，1H)。
N-{3-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐基}-乙酰胺[63]。
通過縮合3-二甲基氨基-1-(2-甲基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(3-胍基-芐基)-乙酰胺硝酸鹽。黃色固體。
Mp 253-255℃。
分析RP-HPLCtR＝11.3分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)1H NMR(DMSO)δ1.86(s，3H，CH3)，2.46(s，3H，CH3)，2.85(s，2H，CH2)，3.09(s，3H，CH3)，6.82(d，1H，J＝8.0Hz，ph-H)，6.88(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.2(t，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.60(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.73(s，1H，Ph-H)，和8.32(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 391.55[M+Na](C18H20N6OSNa理論值391.46)。
N-{3-[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐基}-乙酰胺[64]。
通過縮合3-二甲基氨基-1-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(3-胍基-芐基)-乙酰胺硝酸鹽。黃色固體。
分析RP-HPLCtR＝12.7分鐘(0-60％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(CD3OD)δ1.17(t，3H，J＝7.5Hz，CH3)，1.98(s，3H，CH3)，2.51(s，3H，CH3)，3.36(q，2H，J＝7.1Hz，CH2)，4.39(s，2H，CH2)，6.92(m，2H，嘧啶基-H和Ph-H)，7.25(t，1H，J＝7.6Hz，Ph-H)，7.49(m，1H，Ph-H)，7.79(sbr，1H，Ph-H)，8.25(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 383.46[M+H]+(C19H22N6OS理論值382.48)。
(3-氨基甲基-苯基)-[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[65]。
通過水解N-{3-[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐基}-乙酰胺。黃色固體。
Mp 290-292℃。
分析RP-HPLCtR＝10.6分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ1.31(t，3H，J＝7.0Hz，CH3)，2.64(s，3H，CH3)，3.54(m，2H，CH2)，4.11(m，2H，CH2)，7.14(d，1H，J＝6.0Hz，嘧啶基-H)，7.22(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.45(t，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.74(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.95(s，1H，Ph-H)，8.53(d，1H，J＝6.0Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 341.20[M+H]+(C17H20N6S理論值340.45)。
N-{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐基}-乙酰胺[66]。
處理3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(3-胍基-芐基)-乙酰胺硝酸鹽。黃色固體。
Mp 206-207℃。
分析RP-HPLCtR＝13.6分鐘(0-60％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ1.99(s，3H，CH3)，2.65(s，3H，CH3)，2.68(s，3H，CH3)，4.38(s，2H，CH2)，6.94(d，1H，J＝7.5Hz，Ph-H)，7.01(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.26(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.56(d，1H，J＝7.5Hz，Ph-H)，7.70(s，1H，Ph-H)，8.40(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 345.42[M+H]+(C18H19N5OS理論值353.44)。
(3-氨基甲基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[67]。
將N-{3-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐基}-乙酰胺用HCl/MeOH處理。黃色固體。Mp 287-289℃。
分析RP-HPLCtR＝10.1分鐘(0-60％MeCN，純度92％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.68(s，3H，CH3)，3.17(s，3H，CH3)，4.17(m，2H，CH2)，7.23(d，1H，J＝6.0Hz，嘧啶基-H)，7.27(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.50(t，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.70(d，1H，J＝7.5Hz，Ph-H)，7.75(s，1H，Ph-H)，8.44(d，1H，J＝6.0Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 327.37[M+H]+(C16H18N6S理論值326.42)。
{3-[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-甲醇[68]。
通過縮合3-二甲基氨基-1-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(3-羥基甲基-苯基)-胍硝酸鹽。黃色固體。
分析RP-HPLCtR＝12.6分鐘(0-60％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(CD3OD)δ1.28(t，3H，J＝7.3Hz，CH3)，2.52(s，3H，CH3)，3.35(q，2H，J＝7.1Hz，CH2)，4.63(s，2H，CH2)，5.49(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.63(d，1H，J＝7.6Hz，Ph-H)，7.27(t，1H，J＝7.9Hz，Ph-H)，7.52(m，1H，Ph-H)，7.79(sbr，1H，Ph-H)，8.26(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 346.44[M+H]+(C17H19N5OS理論值341.43)。-(3-硝基-苯基)-胺[71]。
通過縮合3-二甲基氨基-1-(4-甲基2-嗎啉-4-基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(3-硝基-苯基)-胍硝酸鹽。黃色固體。
分析RP-HPLCtR＝16.7分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.51(s，3H，CH3)，3.50(t，4H，J＝4.5Hz，CH2)，3.72(t，4H，J＝4.5Hz，CH2)，7.06(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.55(t，1H，J＝8.5Hz，Ph-H)，7.77(d，1H，J＝8.5Hz，Ph-H)，7.97(d，1H，J＝8.5Hz，Ph-H)，8.44(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.03(s，1H，Ph-H)，10.06(sbr，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 399.20[M+H]+(C18H18N6O3S理論值398.44)。
{2-氯-5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-甲醇[72]。
通過縮合3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(4-氯-3-羥基甲基-苯基)-胍硝酸鹽。黃色固體。Mp 245-246℃。
分析RP-HPLCtR＝14.6分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.62(s，3H，CH3)，2.63(s，3H，CH3)，4.53(d，2H，J＝5.5Hz，CH2)，5.34(m，1H，OH)，7.08(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.29(m，1H，Ph-H)，7.73(m，1H，Ph-H)，7.94(s，1H，Ph-H)，8.51(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.78(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 347.11[M+H]+(C16H15ClN4OS理論值346.84)。
{2-氯-5-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-甲醇[73]。
通過縮合3-二甲基氨基-1-(2-甲基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(4-氯-3-羥基甲基-苯基)-胍硝酸鹽。黃色固體。Mp 191-193℃。
分析RP-HPLCtR＝11.5分鐘(10-70％MeCN，純度＞90％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.46(s，3H，CH3)，3.08(s，3H，CH3)，4.52(d，2H，J＝6.0Hz，CH2)，5.29(m，1H，OH)，6.89(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.25(d，1H，J＝8.5Hz，Ph-H)，7.73(m，1H，Ph-H)，7.94(s，1H，Ph-H)，8.03(sbr，1H，NH)，8.32(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.55(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 361.89[M](C16H16ClN5OS理論值361.85)。-(4-甲磺酰基-苯基)-胺[76]。
通過縮合N′-[5-(3-二甲基氨基-丙烯?；?-4-甲基-噻唑-2-基]-N，N-二甲基-甲脒和N-(4-甲磺?；?苯基)-胍硝酸鹽。黃色固體。
分析RP-HPLCtR＝13.2分鐘(0-60％MeCN，純度＞97％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.98(s，3H，CH3)，2.54(s，3H，CH3)，7.06(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.80(m，2H，Ph-H)，8.00(m，2H，Ph-H)，8.45(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，10.05(sbr，2H，NH2)。
MS(ESI+)m/z 362.38[M+H]+(C15H15N5O2S2理論值361.44)。-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[77]。
通過用2-甲氧基-乙醇烷基化[4-(2-氨基甲基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-3-硝基苯基)-胺。黃色固體。
分析RP-HPLCtR＝12.8分鐘(10-70％MeCN，純度＞90％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.41(s，3H，CH3)，2.86(d，3H，J＝4.5Hz，CH3)，3.24(s，3H，CH3)，3.66(m，2H，CH2)，4.23(m，2H，CH2)，6.93(d，1H，J＝6.0Hz，嘧啶基-H)，7.32(d，1H，J＝5.0Hz，Ph-H)，7.79(m，1H，Ph-H)，8.08(d，1H，J＝5.0Hz，Ph-H)，8.35(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)，8.54(m，1H，NH)，9.68(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 417.08[M+H]+(C18H20N6O4S理論值416.46)。-[3-(2-嗎啉-4-基-乙氧基甲基)-苯基]-胺[81]。
通過利用4-(2-氯-乙基)-嗎啉烷基化{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-甲醇。黃色固體。
分析RP-HPLCtR＝8.5分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-D6)δ2.56(s，3H，CH3)，2.57(s，3H，CH3)，2.63(m，2H，CH2)，3.58(m，4H，J＝4.5Hz，CH2x2)，4.14(t，2H，J＝7.5Hz，CH2)，4.58(d，2H，J＝5.0Hz，CH2)，5.28(t，1H，J＝5.5Hz，NH)，7.06(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.26(m，2H，Ph-H)，7.36(s，1H，Ph-H)，7.42(m，1H，Ph-H)，8.43(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.12(sbr，1H，Ph-H)。
MS(ESI+)m/z 426.46[M+H]+(C22H27N5O2S理論值425.55)。
C，C，C-三氟-N-{3-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐基}-甲磺酰胺[82]。
將(3-氨基甲基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺用三氟-甲磺酰氯處理。黃色固體。
分析RP-HPLCtR＝11.6分鐘(0-60％MeCN，純度～90％)。
1H-NMR(CD3OD)δ2.53(s，3H，CH3)，2.97(s，3H，CH3)，4.39(s，2H，CH2)，6.94(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.01(d，1H，J＝7.5Hz，Ph-H)，7.31(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.60(d，1H，J＝7.5Hz，Ph-H)，7.67(s，1H，Ph-H)，8.28(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 459.33[M+H]+(C17H17F3N6O2S理論值458.48)。
N-{3-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐基}-甲磺酰胺[83]。
將(3-氨基甲基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺用甲磺酰氯處理。黃色固體。
分析RP-HPLCtR＝12.8分鐘(0-60％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(CD3OD)δ2.53(s，3H，CH3)，2.88(s，3H，CH3)，2.98(s，3H，CH3)，4.28(s，2H，CH2)，6.94(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.02(d，1H，J＝7.5Hz，Ph-H)，7.29(t，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.52(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，7.90(s，1H，Ph-H)，7.98(s，1H，NH)，8.28(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。-(3-甲磺酰基-苯基)-胺[84]。
通過縮合N′-[5-(3-二甲基氨基-丙烯?；?-4-甲基-噻唑-2-基]-N，N-二甲基-甲脒和N-(3-甲磺酰基-苯基)-胍硝酸鹽。黃色固體。
分析RP-HPLCtR＝13.1分鐘(0-60％MeCN，純度＞97％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.55(s，3H，CH3)，3.19(s，3H，CH3)，6.97(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.47(m，1H，Ph-H)，7.54(t，1H，J＝7.5Hz，Ph-H)，8.08(m，1H，Ph-H)，8.34(brs，1H，Ph-H)，8.40(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.86(sbr，2H，NH2)。
MS(ESI+)m/z 362.38[M+H]+(C15H15N5O2S2理論值361.44)。-(4-甲磺酰基-苯基)-胺[85]。
通過縮合3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和N-(4-甲磺酰基-苯基)-胍硝酸鹽。黃色固體。
分析RP-HPLCtR＝16.6分鐘(0-60％MeCN，純度＞97％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.65(s，3H，CH3)，2.66(s，3H，CH3)，3.15(s，3H，CH3)，7.22(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.84(d，2H，J＝9.0Hz，Ph-H)，8.03(d，2H，J＝9.0Hz，Ph-H)，8.61(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，10.23(sbr，1H，NH)。MS(ESI+)m/z 361.17[M+H]+(C16H16N4O2S2理論值361.46)。
3，4-二甲基-5-[2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-3H-噻唑-2-酮[92]。
甲基銨N-甲基硫代-氨基甲酸鹽(13.1g，0.105mol；從甲基胺和二硫化碳依照方法Y.Gelernt等1974，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2610進行制備)部分地溶解在MeOH(150mL)中。室溫下滴加3-氯-戊烷-2，4-二酮(14.9mL，0.125mol)，逐漸放熱至40℃。室溫攪拌1小時后，真空蒸發(fā)溶劑。將殘留物用H2O(50mL)處理并用CH2Cl2(3×50mL)萃取。將合并地有機級分洗滌(鹽水)，干燥(Na2SO4)、過濾并真空蒸發(fā)得到琥珀色油狀物。將其經(jīng)色譜純化(300g SiO2，用1∶1庚烷/Et2O洗脫得到未環(huán)化的加合物，然后用Et2O洗脫得到5-乙?；?3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮，從EtOH中重結(jié)晶得到無色的針狀晶體(14.2g)。
1H-NMR(CDCl3)δ2.34(s，3H)，2.59(s，3H)，3.33(s，3H)。
IR(ATR)1655和1621cm-1(CO str)。
將5-乙?；?3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(4.64g，27.10mmol)和二甲基甲酰胺二甲基縮醛(8.4mL，59.62mmol)在干燥的、充過氬氣的燒瓶中混合并在100℃加熱3小時。將混合物冷卻，產(chǎn)生一些沉淀，加入等體積的Et2O后沉淀增多。過濾形成的橙色固體并用Et2O洗滌得到2.73g的5-(3-二甲基氨基-丙烯?；?-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮。
1H-NMR(d6-DMSO)δ2.52(s，3H)，2.82(bs，3H)，3.11(bs，3H)，3.22(s，3H)，5.10(d，1H，J＝12.2Hz)，7.61(d，1H，J＝11.7Hz)。
IR(ATR)1669和1630cm-1(CO str)。
5-(3-二甲基氨基-丙烯?；?-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮和N-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胍硝酸鹽之間的縮合得到標題化合物。
分析RP-HPLCtR＝17.5分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.48(3H，s，CH3)，3.03(4H，m，2x morph-NCH2)，3.08(3H，s，CH3)，3.72(4H，m，2x morph-OCH2)，6.85(1H，d，J＝5.2，pyrim-H)，6.89(2H，d，J＝9.2，2x ArH)，7.57(2H，d，J＝9.2，2x ArH)，8.36(1H，d，J＝5.2，嘧啶-H)和9.35(1H，s，NH)。
MS(ESI+)m/z 384[M+H]+(C19H21N5O2S理論值383.5)。
3，4-二甲基-5-{2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-3H-噻唑-2-酮[93]。
該化合物利用5-(3-二甲基氨基-丙烯酰基)-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮和N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胍硝酸鹽之間的縮合反應(yīng)制備得到?；野咨墓腆w。
分析RP-HPLCtR＝10.9分鐘(0-60％MeCN在0.1％aq CF3COOH中的溶液洗脫20分鐘，1mL/分鐘，純度＞97％)。
1H-NMR(CDCl3)δ2.42(m，4H，CH2)，2.53(s，3H，CH3)，3.04(m，4H，CH2)，3.28(s，3H，CH3)，6.84(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，6.86(d，2H，J＝9.0Hz，Ph-H)，7.54(d，2H，J＝9.0Hz，Ph-H)，8.35(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，和9.33(s，1H，NH)。
實施例3激酶分析考察上述實施例2的化合物抑制多種蛋白激酶酶活性的能力。通過測量來自ATP的放射活性磷酸對適當?shù)亩嚯牡孜锏膿饺攵鴮崿F(xiàn)。制備或通過商業(yè)途徑得到重組蛋白激酶和激酶復(fù)合物。分析利用96-孔板以及適當?shù)姆治鼍彌_液(通常為25mM β-甘油磷酸，20mM MOPS，5mM EGTA，1mM DTT，1mM Na3VO3，pH 7.4)進行，向其中加入2-4μg活性酶以及適當?shù)牡孜?。通過加入Mg/ATP混合物(15mM MgCl2+100μM ATP以及30-50kBq/孔的[γ-32p]-ATP)啟動反應(yīng)并將混合物在30℃下按照需要孵育。將反應(yīng)在冰上終止，然后濾過p81濾板或GF/C濾板(Whatman Polyfiltronics，Kent，UK)。用75mM正磷酸水溶液洗滌3次后，將板干燥，加入閃爍體并在閃爍計數(shù)器(TopCount，Packard Instruments，Pangbourne，Berks，UK)上測量摻入的放射活性。用于激酶分析的化合物配制成10mM的DMSO儲存液并用分析緩沖液稀釋成10％DMSO的溶液。利用曲線擬合軟件(GraphPad Prism version 3.00for Windows，GraphPad Software，San Diego California USA)分析數(shù)據(jù)以確定IC50值(50％地抑制激酶活性的測試化合物的濃度)。
CDK7和9分析CTD肽底物(生物素基-Ahx-(Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser)4-NH2；1-2mg/mL)以及重組人CDK7/細胞周期蛋白H、CDK9/細胞周期蛋白T1或CDK9/細胞周期蛋白K(0.5-2μg)在不同量的測試化合物存在下在20mMMOPS pH 7.2，25mM β-甘油磷酸，5mM EGTA，1mM DTT，1mM釩酸鈉，15mM MgCl2和100M ATP(包含微量的32PγATP)以總體積25μL在96-孔微量滴定板中在30℃孵育45分鐘。將反應(yīng)放置在冰上2分鐘終止反應(yīng)。向各孔中加入親和素(50μg)，并將板在室溫孵育30分鐘。將樣品轉(zhuǎn)移至96-孔P81濾板上，并用75mM磷酸洗滌(4×200μL/孔)。向各孔中加入Microscint 40液態(tài)閃爍體(50μL)，并用Packard Topcount微量板閃爍計數(shù)器測定每個樣品中32p的摻入量。
Aurora-A(人)激酶分析通過測量在商業(yè)得到的aurora-A激酶的磷酸化作用下從ATP的放射活性磷酸對Kemptide底物(LRRASLG)的摻入而實現(xiàn)。分析利用96-孔板和適當?shù)姆治鼍彌_液(8mM MOPS，0.2mM EDTA，pH 7.0)進行，向其中加入5-10ng活性酶以及200μM底物(Kemptide)。加入Mg/ATP混合物(10mM乙酸鎂+15μM ATP以及30-50kBq/孔的[γ-33p]-ATP)啟動反應(yīng)，并將混合物在室溫孵育40分鐘。加入3％磷酸終止反應(yīng)，然后濾過p81濾板(WhatmanPolyfiltronics，Kent，UK)。用75mM正磷酸水溶液洗滌5次并用甲醇洗滌1次后，干燥板，加入閃爍體，并在閃爍計數(shù)器(TopCount，Packard Instruments，Pangbourne，Berks，UK)上測量摻入的放射活性。用于激酶分析的化合物配制成10mM的DMSO儲存液并用分析緩沖液稀釋成10％DMSO的溶液。利用曲線擬合軟件(XLfit version 2.0.9，IDBS，Guildford，Surrey，UK)分析數(shù)據(jù)以確定IC50值(50％抑制激酶活性的測試化合物的濃度)。
結(jié)果總結(jié)在表2中，并且針對選擇化合物的更深入的激酶選擇性研究方案顯示在表3中。
實施例4MTT細胞毒性分析將實施例2的化合物進行標準的細胞增殖分析，利用從ATCC(AmericanType Culture Collection，10801 University Boulevard，Manessas，VA 20110-2209，USA)得到的人腫瘤細胞系。進行標準的72-小時MTT(噻唑藍；3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑溴化物)分析(Haselsberger，K.；Peterson，D.C.；Thomas，D.G.；Darling，J.L.Anti Cancer Drugs 1996，7，331-8；Loveland，B.E.；Johns，T.G.；Mack ay，I.R.；Vaillant，F(xiàn).；Wang，Z.X.；Hertzog，P.J.BiochemistryInternational 1992，27，501-10)。簡言之將細胞根據(jù)倍增時間接種到96-孔板上并在37℃培養(yǎng)過夜。將測試化合物配制成DMSO溶液并以1/3連續(xù)稀釋配制成100μL細胞培養(yǎng)基溶液，加入至細胞(一式三份)中并在37℃培養(yǎng)72小時。將MTT制備成5mg/mL在細胞培養(yǎng)基中的儲存液并過濾滅菌。從細胞中移去培養(yǎng)基然后用200μL PBS洗滌。然后將MTT溶液以20μL/孔加入并在37℃避光培養(yǎng)4小時。移出MTT溶液并將細胞再次以200μL PBS洗滌。在振蕩下將MTT染料用200μL/孔的DMSO溶解。在540nm處讀取吸光度并利用曲線擬合軟件(GraphPad Prism version 3.00 for Windows，GraphPad Software，San Diego California USA)進行數(shù)據(jù)分析以測定IC50值(抑制50％細胞生長的測試化合物的濃度)。結(jié)果總結(jié)在表4中并且選擇化合物的更廣泛數(shù)據(jù)顯示在表5中。
實施例5在新鮮人PBMCs中進行抗HIV活性評價利用臨床兒科HIV株RoJo或WeJo，測試代表性的本發(fā)明化合物在人外周血單核細胞(PBMCs)中對HIV-1的抗病毒活性。將PBMCs在促進細胞生存以及HIV復(fù)制的條件下進行培養(yǎng)。測量6-9個log10連續(xù)稀釋的100μM化合物的DMSO貯存溶液的抗病毒活性。得到下述參數(shù)IC50和IC90(分別50和90％抑制地病毒復(fù)制的濃度，TC50(減少細胞存活50％的濃度)以及TI(治療指數(shù)TC50/IC50)。
對HIV和HBV呈血清反應(yīng)陰性的新鮮PBMCs，從篩選的捐贈血(Interstate Blood Bank，Inc.Memphis，TN)分離得到。通過低速離心并再懸浮在PBS中將細胞沉淀/洗滌2-3次以除去污染的血小板。將去除白細胞的血然后用Dulbecco's磷酸鹽緩沖液(DPBS)稀釋并加入到在50mL離心管中的Lymphocyte Separation Medium(LSM；Cellgro_，Mediatech，Inc.；密度1.078±0.002g/mL；Cat.#85-072-CL)上并且然后離心。輕輕地從形成的接觸面上吸出成帶的PBMCs，并隨后在低速離心下用PBS洗滌。最終洗滌后，將細胞通過臺盼藍排斥計數(shù)，并再懸浮在補充胎牛血清(FBS)以及L-谷氨酸、植物凝集素(PHA-P，Sigma)的RPMI 1640中。將細胞在37℃培養(yǎng)。培養(yǎng)后，離心PBMCs，并再懸浮在加有FBS、L-谷氨酸、青霉素、鏈霉素、慶大霉素以及重組人IL-2(R&D Systems，Inc)的RPMI 1640中。在培養(yǎng)基中包括IL-2以維持由PHA促有絲分裂的刺激啟動的細胞分裂。將PBMCs保持在其中，兩周換一次培養(yǎng)基，直至用于分析步驟中。將細胞培養(yǎng)最多兩周，一旦認為太老不適于用于分析就丟棄。由于附著至組織培養(yǎng)瓶，單核細胞從培養(yǎng)中耗盡。
對于標準的PBMC分析，匯合至少兩名正常供體的PHA-P刺激的細胞，稀釋并鋪板至96-孔圓底微量滴定板的內(nèi)部孔中。從多于一個供體富集得到的單核細胞用來最小化不同捐贈個體之間的差異，后者源自HIV感染以及初級淋巴細胞種群對PHA和IL-2的總體響應(yīng)的定量和定性差異。各板包括病毒/細胞對照孔(細胞加病毒)、實驗孔(藥物加細胞加病毒)以及化合物對照孔(藥物加無細胞的培養(yǎng)基，對于MTS監(jiān)測細胞毒性是必須的)。由于HIV-1對PBMCs而言不會引起細胞病變，這就容許使用同樣的分析板進行抗病毒活性和細胞毒性測量。在微量滴定管中進行測試藥物的稀釋，并且使用標準的形式將各濃度放置在適當?shù)目字小⒉《緝Υ嬉旱念A(yù)定稀釋放置在各測試孔(最終MOI O.1)中。感染后，PBMC培養(yǎng)物在37℃，5％CO2下保持7天。之后，收集無細胞的上清液樣品用于分析逆轉(zhuǎn)錄酶活性和/或HIV p24含量。取出上清液樣品后，將MTS加入至板中以測定細胞成活力化合物來測量細胞毒性。通過顯微鏡檢查各孔并記錄任何異常。
逆轉(zhuǎn)錄酶活性分析利用基于微量滴定板的逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)反應(yīng)(Buckheit等，AIDS Research and human Retroviruses 7295-302，1991)。氚代的三磷酸胸苷(3H-TTP，80Ci/mmol，NEN)以1∶1 dH2O∶乙醇的溶液且活性為1mCi/mL接受。聚rA寡dT模板引物(Pharmacia)制備成儲存溶液，然后分裝并在-20℃凍存。RT反應(yīng)緩沖液在每天使用的基礎(chǔ)上新鮮制備。制備最終的反應(yīng)混合物通過混合3H-TTP、dH2O、聚rA寡dT儲存液以及反應(yīng)緩中液。將該反應(yīng)混合物放置在圓底微量滴定板中并加入含病毒的上清液并混合。將板在37℃培養(yǎng)60分鐘。培養(yǎng)后，將反應(yīng)體積噴點至在磷酸鈉緩沖液或2×SSC(Life Technologies)中的DE81 filter-mats(Wallac)中。然后，在蒸餾水、在70％乙醇中洗滌，然后干燥。利用標準的液閃技術(shù)定量摻入的放射活性(每分鐘計數(shù)，CPM)。選擇的本發(fā)明化合物結(jié)果顯示在下表6中。
在不偏離本發(fā)明的范圍和精神情形下，描述的本發(fā)明方面的各種修飾以及變體對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是顯而易見的。盡管本發(fā)明結(jié)合具體的優(yōu)選的實施方案進行了描述，應(yīng)該理解為要求保護的本發(fā)明不應(yīng)該過度地限制到所述的具體的實施方案。實際上，對相關(guān)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言明顯的實施本發(fā)明的多種修飾都包括在下述權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。
表1.實施例化合物












表2.實施例化合物(參見表1)對蛋白激酶的抑制作用
1，縮寫解釋參見表3；2，ARK-2aurora激酶-2(已知也為aurora A激酶)。
表3.選擇化合物的激酶特異性(IC50，μM)
1，CDK2/周期蛋白E復(fù)合物；2，CDK2/周期蛋白A復(fù)合物；3，CDK1/周期蛋白B1復(fù)合物；4，CDK4/周期蛋白D1復(fù)合物；5，CDK7/周期蛋白H/MAT 1復(fù)合物；6，CDK9/周期蛋白T1復(fù)合物；7，細胞外-信號-調(diào)節(jié)激酶2；8，p70核糖體蛋白S6激酶；9，酪蛋白激酶2；10，蛋白激酶Cα；11，蛋白激酶B；12，cAMP-依賴性蛋白激酶；13，應(yīng)激-活化蛋白激酶2a；14，polo-樣激酶1；15，鈣調(diào)蛋白-依賴性激酶II；16，Ableson酪氨酸激酶；17，糖原合成酶激酶3β。
表4.作用于人癌癥細胞系的抗增生活性(參見)
表5.選擇的化合物的體外抗增生活性(72-小時MTT，IC50，μM)
表6.抗-HIV活性總結(jié)
a，AZT齊多夫定；臨床上使用的抗HIV藥物作為陽性對照。
權(quán)利要求
1.式I化合物或其可藥用鹽， 其中(A)X1和X2之一為S，且X1和X2中另一個為N；“a”為單鍵；以及“b”、“c”、“d”、“e”和“f”為單或雙鍵以形成噻唑基環(huán)；R2獨立地同如下述對R1、R3-8的定義；或(B)X1和X2之一為S，并且X1和X2中另一個為NR17；“a”和“d”各為雙鍵；以及“b”、“c”、“e”和“f”各為單鍵；R2為氧代基團；以及R17為H或烷基；其中Z為NH、NHCO、NHSO2、NHCH2、CH2、CH2CH2、CH＝CH、SO2或SO；R1、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自獨立地是H、烷基、烷基-R9、芳基、芳基-R9、芳烷基、芳烷基-R9、鹵素、NO2、CN、OH、O-烷基、COR9、COOR9、O-芳基、O-R9、NH2、NH-烷基、NH-芳基、N-(烷基)2、N-(芳基)2、N-(烷基)(芳基)、NH-R9、N-(R9)(R10)、N-(烷基)(R9)、N-(芳基)(R9)、COOH、CONH2、CONH-烷基、CONH-芳基、CON-(烷基)(R9)、CON(芳基)(R9)、CONH-R9、CON-(R9)(R10)、SO3H、SO2-烷基、SO2-烷基-R9、SO2-芳基、SO2-芳基-R9、SO2NH2、SO2NH-R9、SO2N-(R9)(R10)、CF3、CO-烷基、CO-烷基-R9、CO-芳基、CO-芳基-R9或R11，其中烷基、芳基、芳烷基可進一步被一或多個選自鹵素、NO2、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基團取代；其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中至少一個為含R9或R10基團，或為R11；R9和R10各自獨立地是增溶基團，選自(i)-單-、二-或多羥基化的脂環(huán)族基團；-二-或多羥基化的脂肪族或芳香基團；-碳水化合物衍生物；-含O-和/或S雜環(huán)基，任選被一或多個羥基取代；-脂肪族或芳香基團，包含酰胺、亞砜、砜或磺酰胺官能團；或-鹵代烷基羰基；(ii)COOH、SO3H、OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(iii)Y，其中Y選自脂環(huán)族、芳香或雜環(huán)基，包含官能團＝N-、-O-、-NH2、-NH-、季胺鹽、胍和脒中的一個或多個，其中Y任選被選自下列基團中的一個或多個取代基取代-SO2-烷基；-烷基，任選被一或多個OH基團取代；-CO-烷基；-芳烷基；-COO-烷基；以及-醚基，任選被一或多個OH基團取代；以及其中Y不是吡啶基；(iv)天然的或非天然的氨基酸、肽或肽衍生物；各R11為如上述針對R9和R10定義中的(i)或(iv)的增溶基團；或選自(v)OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(vi)如上定義的Y，但不是胍和季胺鹽；(vii)NHCO(CH2)m[NHCO(CH2)m’]p[NHCO(CH2)m”]qY或NHCO(CH2)tNH(CH2)t’Y，其中p和q各為0或1，并且m、m’、m”、t和t’各自獨立地是從1到10的整數(shù)；以及(viii)(CH2)nNR14COR12、(CH2)n’NR15SO2R13或SO2R16，其中R12、R13和R16各自為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且其任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2的取代基取代，R14和R15各自獨立地是H或烷基，并且n和n’各自獨立地是0、1、2或3；(ix)醚或聚醚，任選被一或多個羥基或一或多個Y基團取代；(x)(CH2)rNH2；其中r為0、1、2或3；(xi)(CH2)r’OH；其中r’為0、1、2或3；條件是所述的化合物不是2-氯-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-乙酰胺；N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-甲磺酰胺；2-氯-N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺；{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-甲醇；2-{4-[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-乙醇；或2-{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-乙醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式Ib化合物或其可藥用鹽， 其中X1和X2之一為S，且X1和X2中的另一個為N，且Z、R1-8如權(quán)利要求1中定義。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中X1為S且X2為N。
4.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中Z為NH。
5.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R3為H。
6.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R2、R5、R6或R7中至少一個為含R9或R10的基團或為R11。
7.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中X1為S，X2為N，Z為NH，R1為Me，R2為烷基或氨基，R3為H，R5、R6和R7中的一個或兩個為CF3、OH、O-烷基、鹵素、NO2、NH2、NH-烷基或N-(烷基)2，并且R2、R5、R6或R7中至少一個為含R9或R10的基團或為R11。
8.權(quán)利要求1～5中任一項的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中至少一個為R11。
9.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中所述的增溶基團為R11，并且R11為(a)如權(quán)利要求1中定義的Y，但是排除胍，其中Y也可為包含一或多個＝N-基團的脂環(huán)族、芳香或雜環(huán)基；(b)NHCO(CH2)m[NHCO(CH2)m’]p[NHCO(CH2)m”]qY或NHCO(CH2)tNH(CH2)t’Y，其中p和q各為0或1，并且m、m’、m”、t和t’各自為從1到10的整數(shù)；或(c)(CH2)nNR14COR12、(CH2)n’NR15SO2R13或SO2R16，其中R12、R13和R16各自為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且所述的基團任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2的取代基取代，R14和R15各自獨立地是H或烷基，并且n和n’各自獨立地是0、1、2或3。
10.權(quán)利要求9的化合物，其中Y為包含官能團-O-、NH2、-NH-、＝N-、季胺鹽或脒中的一個或多個的脂環(huán)族基團，并且其中Y任選如權(quán)利要求1中的定義被一個或多個取代基取代。
11.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中Y為嗎啉或哌嗪基，各基團任選被一個或多個選自SO2-烷基、任選被一或多個OH基團取代的烷基、CO-烷基、芳烷基、COO-烷基，和任選被一或多個OH基團取代的醚基。
12.權(quán)利要求1～9中任一項的化合物，其中Y為2-氧代-六氫-噻吩并[3，4-d]咪唑基。
13.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R2、R6或R7中至少一個為R11。
14.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R11選自下述基團
15.權(quán)利要求13或14的化合物，其中R6或R7為R11。
16.權(quán)利要求15的化合物，其中R6為R11且R2、R4、R5、R7和R8各自獨立地選自烷基、H、CF3、OH、O-烷基、鹵素、NO2、NH2、NH-烷基和N-(烷基)2。
17.根據(jù)權(quán)利要求15或16的化合物，其中R6為R11且R2、R4、R5、R7和R8各自獨立地選自烷基、H、O-烷基、鹵素、NO2、NH2和NH-烷基。
18.根據(jù)權(quán)利要求15～17中任一項的化合物，其中R6為R11且R4、R5、R7和R8都為H且R2選自烷基、O-烷基、NH2和NH-烷基。
19.根據(jù)權(quán)利要求15～18中任一項的化合物，其中R11選自
20.根據(jù)權(quán)利要求15的化合物，其中R7為R11且R4、R5、R6、R8都為H，且R2選自烷基、O-烷基、NH2和NH-烷基。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的化合物，其中R11選自
22.根據(jù)權(quán)利要求13或14的化合物，其中R2為R11。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，其中R2為R11且R4、R5、R6、R7和R8各自獨立地選自烷基、H、CF3、OH、O-烷基、鹵素、NO2、NH2、NH-烷基和N-(烷基)2。
24.根據(jù)權(quán)利要求22或23的化合物，其中R2為R11且R4、R5、R6、R7和R8各自獨立地選自H、O-烷基、鹵素、N-(烷基)2、NO2。
25.根據(jù)權(quán)利要求22～24中任一項的化合物，其中R2為R11，R5或R7之一選自NO2、烷氧基、鹵素和N-(烷基)2，并且R4、R5、R6、R7和R8中的其他基團都為H。
26.根據(jù)權(quán)利要求22～24中任一項的化合物，其中R11選自
27.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R1為甲基，Z為NH且R3為H。
28.根據(jù)權(quán)利要求1的式Id化合物，或其可藥用鹽，
29.根據(jù)權(quán)利要求28的化合物，其中R1和R3-8如權(quán)利要求4、9-12、14-17、19、21中任一項中定義。
30.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，選自下述化合物
31.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，選自下述化合物[4]、[8]、[12]、[14]、[16]、[22]、[24]、[25]、[29]、[32]、[33]、[39]、[40]、[50]、[53]、[61]、[57]、[62]、[63]、[64]、[65]和[77]。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的化合物，選自下述化合物[24]、[25]、[32]、[33]、[50]、[62]和[64]。
33.根據(jù)權(quán)利要求1～30中任一項的化合物，選自下述化合物[11]、[13]、[14]、[15]、[20]、[21]、[22]、[24]、[25]、[32]、[50]、[53]、[54]、[55]、[56]、[57]、[59]、[61]、[62]、[64]、[68]、[71]、[82]、83]、[84]和[85]。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的化合物，所述的化合物選自下述化合物[11]、[22]、[24]、[32]、[50]、[62]、[71]和[85]。
35.一種藥物組合物，包括根據(jù)權(quán)利要求1～34中任一項的化合物以及可藥用稀釋劑、賦形劑或載體。
36.根據(jù)權(quán)利要求1～26中任一項的化合物在制備用于治療增生性疾病的藥物中的用途。
37.根據(jù)權(quán)利要求36的用途，其中所述的增生性疾病為癌癥或白血病。
38.根據(jù)權(quán)利要求36或37的用途，其中所述的化合物與一或多種其他的抗癌化合物組合給藥。
39.式Ia化合物，或其可藥用鹽在制備用于治療病毒性疾病的藥物中的用途， 其中(A)X1和X2之一為S，且X1和X2中另一個為N；“a”為單鍵；“b”、“c”、“d”、“e”和“f’為單或雙鍵以形成噻唑基環(huán)；R2獨立地同如下述對R1、R3-8的定義；或(B)X1和X2之一為S，并且X1和X2中另一個為NR17；“a”和“d”各為雙鍵；“b”、“c”、“e”和“f”各為單鍵；R2為氧代基團；以及R17為H或烷基；其中Z為NH、NHCO、NHSO2、NHCH2、CH2、CH2CH2、CH＝CH、SO2或SO；R1、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自獨立地是H、烷基、烷基-R9、芳基、芳基-R9、芳烷基、芳烷基-R9、鹵素、NO2、CN、OH、O-烷基、COR9、COOR9、O-芳基、O-R9、NH2、NH-烷基、NH-芳基、N-(烷基)2、N-(芳基)2、N-(烷基)(芳基)、NH-R9、N-(R9)(R10)、N-(烷基)(R9)、N-(芳基)(R9)、COOH、CONH2、CONH-烷基、CONH-芳基、CON-(烷基)(R9)、CON(芳基)(R9)、CONH-R9、CON-(R9)(R10)、SO3H、SO2-烷基、SO2-烷基-R9、SO2-芳基、SO2-芳基-R9、SO2NH2、SO2NH-R9、SO2N-(R9)(R10)、CF3、CO-烷基、CO-烷基-R9、CO-芳基、CO-芳基-R9或R11，其中烷基、芳基、芳烷基可進一步被一或多個選自鹵素、NO2、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基團取代；其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中至少一個為含R9或R10基團，或為R11；R9和R10各自獨立地是增溶基團，選自(i)-單-、二-或多羥基化的脂環(huán)族基團；-二-或多羥基化的脂肪族或芳香基團；-碳水化合物衍生物；-含O-和/或S雜環(huán)基，任選被一或多個羥基取代；-脂肪族或芳香基團，包含酰胺、亞砜、砜或磺酰胺官能團；或-鹵代烷基羰基；(ii)COOH、SO3H、OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(iii)Y，其中Y選自脂環(huán)族、芳香或雜環(huán)基，包含官能團＝N-、-O-、-NH2、-NH-、季胺鹽、胍和脒中的一個或多個，其中Y任選被選自下列基團中的一個或多個取代基取代-SO2-烷基；-烷基，任選被一或多個OH基團取代；-CO-烷基；-芳烷基；-COO-烷基；以及-醚基，任選被一或多個OH基團取代；以及其中Y不是吡啶基；(iv)天然的或非天然的氨基酸、肽或肽衍生物；各R11為如上述針對R9和R10定義中的(i)或(iv)的增溶基團；或選自(v)OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(vi)如上定義的Y，但不是胍和季胺鹽；(vii)NHCO(CH2)m[NHCO(CH2)m’]p[NHCO(CH2)m”]qY或NHCO(CH2)tNH(CH2)t’Y，其中p和q各為0或1，并且m、m’、m”、t和t’各自獨立地是從1到10的整數(shù)；以及(viii)(CH2)nNR14COR12、(CH2)n’NR15SO2R13或SO2R16，其中R12、R13和R16各自為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且其任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2的取代基取代，R14和R15各自獨立地是H或烷基，并且n和n’各自獨立地是0、1、2或3；(ix)醚或聚醚，任選被一或多個羥基或一或多個Y基團取代；(x)(CH2)rNH2；其中r為0、1、2或3；(xi)(CH2)r’OH；其中r’為0、1、2或3。
40.根據(jù)權(quán)利要求39的用途，其中所述的式Ia化合物如權(quán)利要求2～30中任一項所定義。
41.根據(jù)權(quán)利要求39的用途，其中所述的式Ia化合物如權(quán)利要求30中所定義或另外地選自下述化合物N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}甲磺酰胺[32]；2-氯-N-{4-甲基-5-[2-(3-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-噻唑-2-基}-乙酰胺[24]；以及2-氯-N-{5-[2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺[33]。
42.根據(jù)權(quán)利要求中39～41任一項的用途，其中所述式Ia的化合物選自下述化合物[1]、[3]、[4]、[15]和[53]。
43.根據(jù)權(quán)利要求39～42中任一項的用途，其中所述的病毒性疾病選自人巨細胞病毒(HCMV)、1型單純皰疹病毒(HSV-1)、I型人免疫缺陷病毒(HIV-1)以及水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)。
44.權(quán)利要求1～34中任一項的化合物用于抑制蛋白激酶的用途。
45.根據(jù)權(quán)利要求44的用途，其中所述的蛋白激酶為細胞周期蛋白依賴性激酶。
46.根據(jù)權(quán)利要求45的用途，其中所述的蛋白依賴性激酶選自CDK2、CDK7、CDK8和CDK9。
47.一種治療增生性疾病方法，所述的方法包括對哺乳動物施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1～34中任一項的化合物。
48.一種治療病毒性疾病的方法，所述的方法包括對哺乳動物施用治療有效量的式Ia化合物或其可藥用鹽， 其中(A)X1和X2之一為S，且X1和X2中另一個為N；“a”為單鍵；以及“b”、“c”、“d”、“e”和“f”為單或雙鍵以形成噻唑基環(huán)；R2獨立地同如下述對R1、R3-8的定義；或(B)X1和X2之一為S，并且X1和X2中另一個為NR17；“a”和“d”各為雙鍵；“b”、“c”、“e”和“f”各為單鍵；R2為氧代基團；以及R17為H或烷基；其中Z為NH、NHCO、NHSO2、NHCH2、CH2、CH2CH2、CH＝CH、SO2或SO；R1、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自獨立地是H、烷基、烷基-R9、芳基、芳基-R9、芳烷基、芳烷基-R9、鹵素、NO2、CN、OH、O-烷基、COR9、COOR9、O-芳基、O-R9、NH2、NH-烷基、NH-芳基、N-(烷基)2、N-(芳基)2、N-(烷基)(芳基)、NH-R9、N-(R9)(R10)、N-(烷基)(R9)、N-(芳基)(R9)、COOH、CONH2、CONH-烷基、CONH-芳基、CON-(烷基)(R9)、CON(芳基)(R9)、CONH-R9、CON-(R9)(R10)、SO3H、SO2-烷基、SO2-烷基-R9、SO2-芳基、SO2-芳基-R9、SO2NH2、SO2NH-R9、SO2N-(R9)(R10)、CF3、CO-烷基、CO-烷基-R9、CO-芳基、CO-芳基-R9或R11，其中烷基、芳基、芳烷基可進一步被一或多個選自鹵素、NO2、OH、O-甲基、NH2、COOH、CONH2和CF3的基團取代；其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中至少一個為含R9或R10基團，或為R11；R9和R10各自獨立地是增溶基團，選自(i)-單-、二-或多羥基化的脂環(huán)族基團；-二-或多羥基化的脂肪族或芳香基團；-碳水化合物衍生物；-含O-和/或S雜環(huán)基，任選被一或多個羥基取代；-脂肪族或芳香基團，包含酰胺、亞砜、砜或磺酰胺官能團；或-鹵代烷基羰基；(ii)COOH、SO3H、OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(iii)Y，其中Y選自脂環(huán)族、芳香或雜環(huán)基，包含官能團＝N-、-O-、-NH2、-NH-、季胺鹽、胍和脒中的一個或多個，其中Y任選被選自下列基團中的一個或多個取代基取代-SO2-烷基；-烷基，任選被一或多個OH基團取代；-CO-烷基；-芳烷基；-COO-烷基；以及-醚基，任選被一或多個OH基團取代；以及其中Y不是吡啶基；(iv)天然的或非天然的氨基酸、肽或肽衍生物；各R11為如上述針對R9和R10定義中的(i)或(iv)的增溶基團；或選自(v)OSO3H、PO3H2或OPO3H2；(vi)如上定義的Y，但不是胍和季胺鹽；(vii)NHCO(CH2)m[NHCO(CH2)m’]p[NHCO(CH2)m”]qY或NHCO(CH2)tNH(CH2)t’Y，其中p和q各為0或1，并且m、m’、m”、t和t’各自獨立地是從1到10的整數(shù)；以及(vii)(CH2)nNR14COR12、(CH2)n’NR15SO2R13或SO2R16，其中R12、R13和R16各自為任選包括一或多個雜原子的烷基，并且其任選被一個或多個選自O(shè)H、NH2、鹵素和NO2的取代基取代，R14和R15各自獨立地是H或烷基，并且n和n’各自獨立地是0、1、2或3；(ix)醚或聚醚，任選被一或多個羥基或一或多個Y基團取代；(x)(CH2)rNH2；其中r為0、1、2或3；(xi)(CH2)r’OH；其中r’為0、1、2或3。
49.如權(quán)利要求1～34中任一項定義的式I化合物在用于鑒定能抑制一或多種細胞周期蛋白依賴性激酶、GSK和PLK酶的其他候選化合物的分析中用途。
50.根據(jù)權(quán)利要求49的用途，其中所述的分析為競爭性結(jié)合分析。
51.根據(jù)權(quán)利要求50的用途，其中所述的競爭性結(jié)合分析包括將如權(quán)利要求1～34中任一項定義的式I化合物與細胞周期蛋白依賴性激酶以及候選化合物接觸并檢測式I化合物和細胞周期蛋白依賴性激酶之間相互作用的任何變化。
52.根據(jù)權(quán)利要求36的用途，其中所述的增生性疾病為腎小球腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬或慢性阻塞性肺病。
53.式I或Ia化合物，或其可藥用鹽在制備用于治療CNS疾病的藥物中的用途。
54.根據(jù)權(quán)利要求53的用途，其中所述的CNS疾病為阿耳茨海默氏病或雙相性精神障礙。
55.式I或Ia化合物，或其可藥用鹽在制備用于治療禿發(fā)癥的藥物中的用途。
56.式I或Ia化合物，或其可藥用鹽，在制備用于治療中風(fēng)的藥物中的用途。
57.根據(jù)權(quán)利要求36、37或52～56中任一項的用途，其中化合物以足以抑制至少一種PLK酶的量給予。
58.根據(jù)權(quán)利要求57的用途，其中所述的PLK酶為PLK1。
59.根據(jù)權(quán)利要求36、37或52～56中任一項的用途，其中化合物以足以抑制至少一種CDK酶的量給予。
60.根據(jù)權(quán)利要求59的用途，其中所述的CDK酶為CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9。
61.根據(jù)權(quán)利要求36、37或52～56中任一項的用途，其中化合物以足以抑制aurora激酶的量給予。
62.式I或Ia化合物，或其可藥用鹽在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途。
63.根據(jù)權(quán)利要求62的用途，其中所述的糖尿病為II型糖尿病。
64.根據(jù)權(quán)利要求62或63中任一項的用途，其中化合物以足以抑制GSK的量給予。
65.根據(jù)權(quán)利要求64的用途，其中化合物以足以抑制GSK3β的量給予。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I的取代嘧啶化合物、其制備方法、包含該化合物的藥物組合物以及其用作細胞周期蛋白－依賴性激酶(CDKs)抑制劑的用途并因此其在治療增生性疾病和/或病毒性疾病中的用途。
文檔編號A61K31/513GK1711258SQ200380103318
公開日2005年12月21日 申請日期2003年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月14日
發(fā)明者王淑東, 克里斯托弗·米德斯, 加文·伍德, 賈尼絲·奧博伊爾, 坎貝爾·麥金尼斯, 彼得·費希爾 申請人:西克拉塞爾有限公司