專利名稱：達(dá)巴霉素在治療細(xì)菌感染的藥物制備中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請(qǐng)案涉及達(dá)巴霉素(dalbavancin)組合物及在治療細(xì)菌感染的方法中使用所述組合物的方法。
背景技術(shù)：
根據(jù)美國(guó)疾病控制及預(yù)防中心(U.S.Center for Disease Controland Prevention)，醫(yī)院血流感染為導(dǎo)致美國(guó)死亡發(fā)生的主要原因。在美國(guó)每年所插入的7百萬個(gè)中心靜脈導(dǎo)管(CVC)中約有5％與至少一個(gè)血流感染事件有關(guān)(每年約350,000件)。當(dāng)細(xì)菌通過靜脈導(dǎo)管進(jìn)入血流時(shí)則發(fā)生導(dǎo)管相關(guān)的血流感染且可能危及生命。
皮膚及軟組織感染(SSTI)為常見的醫(yī)學(xué)病癥且常在創(chuàng)傷及手術(shù)程序后發(fā)生。金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)及化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes)為最常見的自深層軟組織感染患者分離出的病原體，雖然包括彼等在正常皮膚上發(fā)現(xiàn)的任何病原生物體均可造成感染。許多SSTI之嚴(yán)重度為輕度或中度，允許以口服殺菌劑及局部清洗進(jìn)行成功的治療。相反，常發(fā)生在有潛在危險(xiǎn)因素患者中的更加嚴(yán)重或復(fù)雜的感染(例如，血管損害、糖尿病)和/或由難治性或多重抗藥菌造成的感染可能需要有效的靜脈內(nèi)殺菌治療及積極的外科清創(chuàng)。
葡萄球菌為臨床及治療問題且自20世紀(jì)60年代早期開始逐漸與醫(yī)院感染有關(guān)。凝固酶陽(yáng)性物種抗二甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌(MRSA)已成為社區(qū)獲得性及醫(yī)院感染長(zhǎng)期以來的問題，且已將若干凝固酶陰性葡萄球菌認(rèn)定為機(jī)會(huì)性人病原體，尤其是在重癥監(jiān)護(hù)室危重患者的治療中。臨床關(guān)注的另一個(gè)主要原因?yàn)樵谑澜缭S多地方抗青霉素肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)株的分離增加。
糖肽抗生素萬古霉素(Vancomycin)及替考拉寧(teicoplanin)已用于對(duì)抗由下列物質(zhì)所造成的嚴(yán)重醫(yī)院感染抗多種藥物的革蘭氏陽(yáng)性病原體尤其是MRSA、凝固酶陰性葡萄球菌(CoNS)及腸球菌。萬古霉素及替考拉寧可用于MRSA引起的感染，且直至最近，所有分離菌均受到影響。然而，目前據(jù)報(bào)導(dǎo)具有中等敏感性或抗替考拉寧及萬古霉素的金黃色葡萄球菌的分離菌株出現(xiàn)頻率逐漸增加。已報(bào)導(dǎo)了基于抗藥性機(jī)制而被分為“VahA”、“VanB”或“VanC”的許多抗萬古霉素株。因此，需要替代的治療選擇。
在對(duì)抗多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌中替考拉寧至少與萬古霉素活性相當(dāng)且似乎造成更少不良事件。兩種治療形式均需要至少每日一個(gè)劑量以實(shí)現(xiàn)完全康復(fù)。目前，由所述病原體中的某些所造成的嚴(yán)重感染的治療選擇相當(dāng)受限。革蘭氏陽(yáng)性病原體對(duì)萬古霉素的新興抗藥性使得可能使用具有增加高度需要功效之潛力的新抗生素。
此外，需要與當(dāng)前可用的治療相比投藥次數(shù)較少的投藥方案以增加患者的舒適度，尤其是用于非經(jīng)腸(例如，靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi))投與抗生素。有時(shí)對(duì)于需要以非經(jīng)腸方式投與多日(multi-daily)抗生素的情況住院為必要的，且投藥次數(shù)較少的投藥將有利于允許待實(shí)施于門診病人的所述治療。
雖然，投藥次數(shù)較少的投藥為抗生素投藥方案所要的特征，但是所投與抗生素的“醫(yī)藥窗”(即毒性曲線)必須被充分接受以允許待投與的較大的單個(gè)劑量而無在被治療患者中造成嚴(yán)重不良反應(yīng)的危害性治療。另外，即使當(dāng)抗生素呈現(xiàn)適合的醫(yī)藥窗時(shí)，僅在抗生素呈現(xiàn)適當(dāng)?shù)难灏胨テ跁r(shí)可能進(jìn)行投藥次數(shù)較少的投藥以維持經(jīng)過投藥間隔期所需的治療功效?？股氐难灏胨テ谝?guī)定活體內(nèi)藥物的壽命及投藥后血清水平將達(dá)到最小最低水平的時(shí)間長(zhǎng)度，而所述水平仍可有效殺菌。投與抗生素的第一劑量后隨著時(shí)間產(chǎn)生的血清最低水平規(guī)定何時(shí)必須投與另一劑量以保持活體內(nèi)抗生素的最小殺菌水平。
基于上述觀點(diǎn)，具有對(duì)抗抗一種或多種抗生素的菌株(尤其是MRSA)活性的抗生素將具有商業(yè)價(jià)值且將滿足長(zhǎng)期以來此項(xiàng)技術(shù)中的需要，此抗生素可以每5-7日或更長(zhǎng)時(shí)間一次的投藥間隔來投與。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供用于以達(dá)巴霉素治療或預(yù)防細(xì)菌感染的組合物、方法及套件。令人驚訝的是，已發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定的達(dá)巴霉素調(diào)配物呈現(xiàn)醫(yī)藥窗及延長(zhǎng)的血漿半衰期以允許約每5-7日或更長(zhǎng)時(shí)間一次的治療方案，同時(shí)保持活體內(nèi)的抗菌特性。
因此，一方面，提供包括單位劑量達(dá)巴霉素、穩(wěn)定劑及醫(yī)藥上可接受的載劑的醫(yī)藥組合物，所述達(dá)巴霉素的量足以為個(gè)體提供治療或預(yù)防上有效的達(dá)巴霉素血漿水平至少5日。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物通常以用于投與個(gè)體的醫(yī)藥上可接受的形式來調(diào)配，例如，醫(yī)藥上可接受的含水調(diào)配物。所述醫(yī)藥組合物較佳為非經(jīng)腸路徑投與，例如，經(jīng)靜脈內(nèi)或經(jīng)肌肉內(nèi)。因此，在此較佳實(shí)施例中，所述醫(yī)藥組合物通常為無菌的。
在某些實(shí)施例中，在投與個(gè)體之前，單位劑量的達(dá)巴霉素是以干粉(例如凍干)形式提供并且于醫(yī)藥上可接受的載劑中復(fù)水，諸如無菌含水調(diào)配物。在一實(shí)施例中，醫(yī)藥上可接受的載劑包括水中的5％右旋糖。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可投與需要治療或預(yù)防細(xì)菌感染的哺乳動(dòng)物，諸如人。在某些實(shí)施例中，醫(yī)藥組合物可包括至少一種非達(dá)巴霉素抗生素，諸如對(duì)革蘭氏陰性菌具有有效(例如殺菌)抗性的抗生素和/或?qū)_(dá)巴霉素所不能有效抗的革蘭氏陽(yáng)性物種(諸如抗VanA萬古霉素的菌株)具有有效抗性的抗生素。
在投與個(gè)體之前，使用一種或多種穩(wěn)定化物質(zhì)抑制一種或多種達(dá)巴霉素組份在作為干粉(例如凍干)調(diào)配物和/或含水調(diào)配物儲(chǔ)存期間降解。降解可隨著時(shí)間導(dǎo)致不合需要地形成活性較低和/或非活性組份，其可以在活體內(nèi)潛在地引起不良效果。優(yōu)選的穩(wěn)定劑包括非離子性組份，諸如糖或糖醇，例如單、二或多糖或其衍生物，例如甘露醇、乳糖、蔗糖、山梨醇、甘油、纖維素、海藻糖、麥芽糖或右旋糖或其混合物。
另一方面，提供在有需要的個(gè)體中治療細(xì)菌感染的方法，包括以足以在個(gè)體中提供治療上有效的達(dá)巴霉素血漿水平持續(xù)至少5天的量投與至少一個(gè)單位劑量的達(dá)巴霉素與醫(yī)藥上可接受的載劑。治療上有效的達(dá)巴霉素血漿水平通常是每升血漿中至少約4mg達(dá)巴霉素。在一實(shí)施例中，所投與的達(dá)巴霉素的劑量的量是在臨床上有效并且對(duì)比以諸如替考拉寧與萬古霉素的藥物進(jìn)行護(hù)理的標(biāo)準(zhǔn)、也具有減少的不良副作用的量。
達(dá)巴霉素可作為單劑量或多劑量投與。在某些實(shí)施例中，投與約100mg到約4000mg(例如3000mg)的單劑量的達(dá)巴霉素。在各種實(shí)施例中，單個(gè)達(dá)巴霉素劑量可包括0.1、0.25、0.5、1、1.5、2、2.5或3克中的至少一個(gè)。
在其它實(shí)施例中，間隔約5到約10天投與兩個(gè)劑量，例如間隔約1周。第一劑量可以是約500到約5000mg達(dá)巴霉素并且第二劑量可以是約250mg到約2500mg達(dá)巴霉素。第一劑量通常包括第二劑量中所含的達(dá)巴霉素量的約1.5到約3倍，通常至少是約2倍。舉例而言，第一劑量可以是約1000mg并且第二劑量可以是約500mg達(dá)巴霉素。在其中投與兩個(gè)劑量的方法中，在投與第二劑量之前個(gè)體中的達(dá)巴霉素的血漿最低水平通常是每升血漿中至少約4mg，通常至少約10mg，通常至少約20mg，更通常至少約30mg達(dá)巴霉素，并且更通常是每升血漿中至少約40mg達(dá)巴霉素。
本發(fā)明的方法通常包括非經(jīng)腸投藥，例如靜脈內(nèi)投藥。在某些實(shí)施例中，投藥是以受控投藥速率在靜脈內(nèi)進(jìn)行，以便投藥發(fā)生經(jīng)至少約30分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間。
本發(fā)明的方法可用于治療革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌感染，例如金黃色葡萄球菌或化膿性鏈球菌皮膚及軟組織感染。在某些實(shí)施例中，所述感染是抗青霉素及/抗多種藥物的。
另一方面，提供用于預(yù)防細(xì)菌感染的方法，包括以足以在個(gè)體中提供預(yù)防上有效的達(dá)巴霉素血漿水平持續(xù)至少約1天、3天、5天、1周或10天或更長(zhǎng)時(shí)間的量投與至少一個(gè)單位劑量的達(dá)巴霉素與醫(yī)藥上可接受的載劑。例如，達(dá)巴霉素的劑量可以是約100mg到約1000mg。在某些實(shí)施例中，在治療程序或住院之前、期間或之后投與達(dá)巴霉素。
本發(fā)明的治療或預(yù)防方法可包括投與至少一種非達(dá)巴霉素抗生素，優(yōu)選的是對(duì)革蘭氏陰性菌具有有效抗性的抗生素和/或?qū)_(dá)巴霉素所不能有效抗的革蘭氏陽(yáng)性菌株(諸如VanA菌株)具有有效抗性的抗生素。
一方面，提供套件，其包括至少一個(gè)單位劑量的達(dá)巴霉素和用于細(xì)菌感染的治療或預(yù)防方法中的說明書，所述達(dá)巴霉素的量足以在個(gè)體中提供治療上有效的達(dá)巴霉素血漿水平持續(xù)至少約5天或預(yù)防上有效的達(dá)巴霉素血漿水平持續(xù)至少約1天。套件可含有兩個(gè)單位劑量，其中第一劑量包括1.5到3倍、經(jīng)常是至少約兩倍于第二劑量中所包括的達(dá)巴霉素量。套件也包括非達(dá)巴霉素的抗生素，優(yōu)選地對(duì)革蘭氏陰性菌具有有效抗性。
在一實(shí)施例中，提供套件，其包括含有干粉(例如凍干)達(dá)巴霉素組合物的第一容器與含有用于與達(dá)巴霉素組合物混合的預(yù)定量的生理上可接受的水溶液的第二容器。所述溶液優(yōu)選地是無菌水溶液。在一實(shí)施例中，套件包括用于將達(dá)巴霉素組合物投與個(gè)體的傳遞裝置，例如注射器或靜脈內(nèi)投藥裝置。


圖1描述接受靜脈內(nèi)輸注單個(gè)1000mg達(dá)巴霉素后達(dá)巴霉素血漿濃度對(duì)比時(shí)間的曲線。
圖2描述達(dá)巴霉素與人血清白蛋白結(jié)合(最高)的等溫滴定量熱法數(shù)據(jù)及與測(cè)定自達(dá)巴霉素∶蛋白的2∶1結(jié)合模式的曲線相擬合的數(shù)據(jù)(最低)的圖形表示。
圖3描述達(dá)巴霉素的電噴射電離質(zhì)譜。
圖4是達(dá)巴霉素濃度對(duì)比達(dá)巴霉素多聚體與單體的群體比率的圖表，并描述達(dá)巴霉素多聚體與單體的群體比隨著達(dá)巴霉素濃度增加而增加。
圖5是pH對(duì)比達(dá)巴霉素多聚體與單體的群體比率的圖表，并描述達(dá)巴霉素多聚體與單體的群體比隨著pH增加而增加。
圖6描述甲酸銨5mM pH5溶液中的達(dá)巴霉素的電噴射電離質(zhì)譜。
圖7描述甲酸銨50mM pH5溶液中的達(dá)巴霉素的電噴射電離質(zhì)譜。
圖8描述甲酸銨100mM pH5溶液中的達(dá)巴霉素的電噴射電離質(zhì)譜。
圖9描述水中的替考拉寧(50μg/mL)的電噴射電離質(zhì)譜。
圖10描述水中的替考拉寧(100μg/mL)的電噴射電離質(zhì)譜。
圖11描述HSA對(duì)26℃(pH7.4)下的達(dá)巴霉素/三肽結(jié)合作用的表觀離解常數(shù)的影響。
圖12描述使用相同三肽溶液在相同條件下，三肽與萬古霉素及達(dá)巴霉素結(jié)合的等溫量熱(ITC)數(shù)據(jù)的對(duì)比。
圖13A與13B描述達(dá)巴霉素單體及多聚體(包括二聚體)與三肽配位基及HSA的可能的相互作用。
圖13A描述在溶液中的單體-二聚體平衡下作為單體與HSA上的兩個(gè)獨(dú)立位點(diǎn)結(jié)合的達(dá)巴霉素。
圖13B描述與溶液中的達(dá)巴霉素二聚體結(jié)合并更弱地與連接到HSA上的達(dá)巴霉素單體結(jié)合的配位基。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供改良的劑量方案及新穎達(dá)巴霉素組合物及治療耐抗生素細(xì)菌感染的改良方法。特定言之，本發(fā)明提供具有抗一種或多種抗生素抗性菌株(諸如MRSA)的活性的達(dá)巴霉素組合物，其可以每隔5-7天或更長(zhǎng)時(shí)間投與1次的定量方案投藥。
在科學(xué)文獻(xiàn)中也稱作BI397或VER001的達(dá)巴霉素是半合成糖肽混合物，其特性已報(bào)導(dǎo)于美國(guó)專利第5,606,036號(hào)、第5,750,509號(hào)、第5,843,679號(hào)及第5,935,238號(hào)中。
如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“達(dá)巴霉素”指的是包含如下的組合物一種或多種(優(yōu)選為兩種或兩種以上)如下所述緊密相關(guān)的被稱作“A0”、“A1”、“B0”、“B1”、“C0”及“C1”的同系物、或其單體、多聚體(即二聚體或更高階的多聚體)、互變異構(gòu)體、酯、溶劑化物或醫(yī)藥上可接受的鹽。如本文中所用，“二聚體”或“多聚體”指的是同型二聚體或同型多聚體，即由相同達(dá)巴霉素同系物單體構(gòu)成的二聚體或多聚體；或異型二聚體或異型多聚體，即由至少兩種不同的達(dá)巴霉素同系物單體構(gòu)成的二聚體或多聚體。達(dá)巴霉素通常包括如下所述的非同系物變體“MAG”。達(dá)巴霉素同系物與MAG有時(shí)候被單獨(dú)稱作“達(dá)巴霉素組份”。
如Malabarba與Donadio的(1999)Drugs of the Future24(8)839-846中所述，通過化學(xué)修飾天然糖肽復(fù)合物A-40，926制備達(dá)巴霉素。達(dá)巴霉素的主要組份是B0，其占整個(gè)復(fù)合物＞75％。
達(dá)巴霉素組合物中所存在的各組份的量是由各種因素規(guī)定，包括(例如)天然糖肽復(fù)合物A-40926(達(dá)巴霉素的前驅(qū)物(例如參見美國(guó)專利第5,843,679號(hào)))的制備中所用的發(fā)酵條件、用于自發(fā)酵肉湯回收A-40926的條件、用于選擇性酯化A-40926的糖部分的羧基的化學(xué)反應(yīng)、用于酰胺化肽酰羧基的條件、用于皂化N-酰胺基葡糖醛酸官能基的羧基的酯的條件、用于自合成混合物回收達(dá)巴霉素的條件及類似條件。
在優(yōu)選實(shí)施例中，達(dá)巴霉素組合物包含至少約80到至少98重量％的B0組份。在特別優(yōu)選的實(shí)施例中，達(dá)巴霉素包含如下量的B0表1.達(dá)巴霉素組合物中B0組份的優(yōu)選量

1各范圍代表相對(duì)于包括MAG的達(dá)巴霉素組合物中所存在的全部達(dá)巴霉素組份的B0的摩爾％若干達(dá)巴霉素組份的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下式I所述


所有上述達(dá)巴霉素組份對(duì)多種革蘭氏陽(yáng)性菌具有殺菌活性。然而，稱作“MAG”的一種非同系達(dá)巴霉素組份(其缺少其它組份中所存在的葡糖胺)與其它達(dá)巴霉素組份相比在活體內(nèi)與活體外的殺菌效力均較低。認(rèn)為MAG為一種或多種其它達(dá)巴霉素組份的分解產(chǎn)物。因此在一優(yōu)選實(shí)施例中，達(dá)巴霉素中MAG的量低于約4、3.5、3、2.5、2、1.5、1或0.5摩爾百分比的所存在的包括MAG的所有達(dá)巴霉素組份。
認(rèn)為達(dá)巴霉素通過結(jié)合肽聚糖的D-丙氨酰-D-丙胺酸-終止型前驅(qū)物來抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的生物合成。達(dá)巴霉素的二聚體或更高階的多聚體通過親脂側(cè)鏈與細(xì)菌的細(xì)胞質(zhì)膜相互作用可具有其它殺菌特性。例如參見Malabarba與Ciabatti等人(2001)Current Medicinal Chemistry 81759-1773。對(duì)達(dá)巴霉素多聚體的另一份詳細(xì)研究可見于題為″DALBAVANCIN COMPOSITIONSFOR TREATMENT OF BACTERIAL INFECTIONS″的美國(guó)第10/---號(hào)，，其與代理人案號(hào)第34231-20052.00號(hào)同時(shí)申請(qǐng)，其揭示內(nèi)容全文以引用方式并入本文中。
在活體外，非臨床與臨床數(shù)據(jù)表明達(dá)巴霉素有益于治療由MRSA與CoNS及所有鏈球菌及非VanA腸球菌物種(包括對(duì)萬古霉素不太敏感或具有抗性的VanB與VanC表現(xiàn)型)所引起的嚴(yán)重革蘭氏陽(yáng)性感染。
達(dá)巴霉素在活體外對(duì)于抗葡萄球菌(包括某些抗替考拉寧的菌株)比替考拉寧與萬古霉素更具活性。達(dá)巴霉素對(duì)于抗鏈球菌(包括抗青霉素的菌株)比替考拉寧或萬古霉素具有更好的活性。達(dá)巴霉素在活體外與活體內(nèi)對(duì)于抗多種革蘭氏陽(yáng)性菌(包括抗大部分藥物的菌株)均具有活性。
達(dá)巴霉素通常作為達(dá)巴霉素組合物投與個(gè)體。如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“達(dá)巴霉素組合物”或“達(dá)巴霉素調(diào)配物”指的是組合物，通常是包含上述達(dá)巴霉素與一種或多種其它非達(dá)巴霉素組份的醫(yī)藥組合物，所述非達(dá)巴霉素組份例如是醫(yī)藥上可接受的載劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑或其它類似組份。
如實(shí)例1中所示，達(dá)巴霉素在劑量間隔為一周時(shí)有效。因此，達(dá)巴霉素對(duì)比其它治療選擇的優(yōu)點(diǎn)在于基于每周一次投與此抗生素的能力，從而使患者依從性達(dá)到最大并且潛在地最小化非經(jīng)腸抗生素投藥的住院需求或?qū)⒎墙?jīng)腸抗生素投藥的住院期降至最低。頻率更低的投藥通常允許基于門診患者的治療，因此降低治療費(fèi)用。如實(shí)例1中進(jìn)一步所示，在投與第一劑量約一周后，達(dá)巴霉素的第二劑量意外地提供治療功效上的顯著改良，其中第二劑量約為第一劑量的一半。
使用方法提供將達(dá)巴霉素投與需要細(xì)菌感染治療的個(gè)體的方法。治療可包括預(yù)防、治療或治愈。方法包括以治療上或預(yù)防上有效的量投與一個(gè)或多個(gè)單位劑量的達(dá)巴霉素。
如本文中所用，“治療上有效量”指的是將提供所要治療結(jié)果(例如減少或消除細(xì)菌感染)的達(dá)巴霉素的量。治療上有效量可以一個(gè)或多個(gè)劑量投與?！邦A(yù)防上有效量”指的是當(dāng)投與易患和/或(例如)由于治療程序或住院或暴露于患有細(xì)菌感染的個(gè)體而可能染上細(xì)菌感染的個(gè)體時(shí)，足以防止或減輕未來細(xì)菌感染的嚴(yán)重程度的達(dá)巴霉素的量。達(dá)巴霉素通常在醫(yī)藥上可接受的載劑中投與。
達(dá)巴霉素通常作為可易于溶于水中的鹽酸鹽提供。
達(dá)巴霉素通常作為達(dá)巴霉素調(diào)配物中的“單位劑量”投與，其包括當(dāng)投與個(gè)體時(shí)量足以提供治療上或預(yù)防上有效的達(dá)巴霉素血漿水平并持續(xù)若干天(通常至少約5天、1周或10天)的達(dá)巴霉素。
如本文中所用，“個(gè)體”指的是脊椎動(dòng)物，通常指哺乳動(dòng)物，常常指人。
盡管認(rèn)為MAG比其它同系物具有更短的半衰期，但上述達(dá)巴霉素的所有同系物于血漿中均呈現(xiàn)延長(zhǎng)的半衰期，通常是9天或更長(zhǎng)。長(zhǎng)半衰期允許比萬古霉素或替考拉寧更長(zhǎng)的劑量間隔。如實(shí)例1中所述，與經(jīng)常用于萬古霉素的每天兩次投藥計(jì)劃或通常用于替考拉寧的每天一次計(jì)劃相比，達(dá)巴霉素僅需每周投藥一次即可有效控制細(xì)菌感染。尤其就改良的便利性和患者對(duì)治療方案的依從性而言，以較低頻率投與達(dá)巴霉素可提供優(yōu)于萬古霉素和替考拉寧的顯著治療優(yōu)點(diǎn)?？梢员绕渌捎弥委熯x擇要低的投藥頻率投與異常高的劑量(即導(dǎo)致異常高的及持久的血清水平)。因?yàn)樵趯?shí)施低頻率投藥所需的濃度下達(dá)巴霉素在活體內(nèi)呈現(xiàn)最小的不良效果(表明大醫(yī)藥窗)，并且進(jìn)一步因?yàn)檫_(dá)巴霉素血液水平維持在整個(gè)治療方案的最低殺菌水平以上(表明延長(zhǎng)的達(dá)巴霉素血清半衰期)，因此可用于達(dá)巴霉素的新穎劑量方案可提高功效。延長(zhǎng)的血清半衰期與大醫(yī)藥窗的組合允許以較低頻率投與達(dá)巴霉素。
另外，優(yōu)選地將達(dá)巴霉素與可抑制一種或多種達(dá)巴霉素組份降解的穩(wěn)定劑一起調(diào)配。在一優(yōu)選實(shí)施例中，達(dá)巴霉素與1∶2重量比的甘露醇達(dá)巴霉素一起調(diào)配。在另一優(yōu)選實(shí)施例中，達(dá)巴霉素以1∶1∶4重量比的甘露醇乳糖達(dá)巴霉素調(diào)配。
在某些實(shí)施例中，以可使治療上有效(即殺菌)的藥物血漿水平持續(xù)若干天(經(jīng)常是至少約5到約10天，經(jīng)常是至少約一周)的劑量投與達(dá)巴霉素調(diào)配物。達(dá)巴霉素通常在血漿中維持在約4mg/l的最低殺菌濃度或以上持續(xù)至少5天。達(dá)巴霉素經(jīng)常維持在至少約5mg/l、經(jīng)常至少約10mg/l、經(jīng)常至少約20mg/l、經(jīng)常至少約30mg/l、經(jīng)常至少約40mg/l的血漿水平，持續(xù)至少5天、常持續(xù)至少約一周或更長(zhǎng)。達(dá)巴霉素血漿水平可以此項(xiàng)技術(shù)中所熟知的方法測(cè)量，諸如液相色譜法、質(zhì)譜法或微生物生物檢定。在實(shí)例5中提供一種用于定量血漿中達(dá)巴霉素的方法的一實(shí)例。
達(dá)巴霉素血漿濃度水平的上限通常是由抑制所治療患者人群中不可接受的不良效果的劑量來規(guī)定。
達(dá)巴霉素組合物可以單劑量或多劑量投與。當(dāng)作為單劑量投與時(shí)，優(yōu)選地將達(dá)巴霉素組合物調(diào)配成含有足量達(dá)巴霉素以實(shí)現(xiàn)活體內(nèi)的殺菌活性持續(xù)至少5天，優(yōu)選為至少7天并且更優(yōu)選為至少10天。
當(dāng)采用多劑量時(shí)，可每周一次投與達(dá)巴霉素持續(xù)兩周或兩周以上。在一實(shí)施例中，達(dá)巴霉素以至少兩個(gè)劑量投與，經(jīng)常間隔約5到約10天以兩個(gè)劑量，更經(jīng)常地每周一次持續(xù)兩周投與。如實(shí)例1中所示，所述投藥方案提供優(yōu)于常規(guī)抗生素治療計(jì)劃的顯著優(yōu)點(diǎn)。
達(dá)巴霉素組合物也可間隔兩天或兩天以上或間隔至少一周以多劑量投與或以一個(gè)或多個(gè)兩周一次的劑量投與。在某些實(shí)施例中，達(dá)巴霉素組合物可每周投與一次，隨后兩周投與一次或每月投與一次。在某些實(shí)施例中，達(dá)巴霉素每隔一周投與一次持續(xù)2、3、4、5、6或更多周。
最有利地，不需要每天投藥，因?yàn)槭褂酶蟮牡皖l率劑量。例如，單個(gè)或多次劑量可在約0.1到約5克范圍內(nèi)?？赏杜c約0.1到約4克(例如約3克)的單劑量以用于各種感染治療。當(dāng)投與多劑量時(shí)(例如每周一次)，各劑量例如可在約0.25到約5.0克范圍內(nèi)。
就其中投與單劑量治療感染的實(shí)施例而言，劑量的量(例如)可以是約0.1到約5克、或約0.5到約4克、或約1到約3.5克、或約2到約3克，例如約3克。在某些實(shí)施例中，投與約1、1.5、2、2.5或3克的單劑量治療細(xì)菌感染。就其中投與單劑量進(jìn)行預(yù)防的實(shí)施例而言，劑量的量(例如)可以是約0.1到約3克、或約0.1到約1克，例如約0.5到約0.25克。
在包括多劑量的投藥方案中，單個(gè)劑量可相同或不同。在某些實(shí)施例中，投與比一個(gè)或多個(gè)隨后劑量更高的第一劑量，即例如高出約1.5到3倍。例如，第一劑量可以是約0.5克到約5克并且第二劑量可以是約0.25克到約2.5克，第一劑量可以是約0.8克到約2克并且第二劑量可以是約0.4克到約1克，或者第一劑量可以是約0.4克到約3克并且第二劑量可以是約0.2克到1.5克。
在某些實(shí)施例中，投與至少兩個(gè)劑量，其中第一劑量包括約兩倍于隨后劑量的達(dá)巴霉素。在一實(shí)施例中，第一劑量包括約1克達(dá)巴霉素并且隨后劑量包括約0.5克。在另一實(shí)施例中，第一劑量包括約0.5克達(dá)巴霉素并且隨后劑量包括約0.25克。
在某些實(shí)施例中，間隔兩天或兩天以上或間隔至少約一周以量相同或不同的兩個(gè)劑量投與達(dá)巴霉素組合物。經(jīng)常間隔約5到約10天、更經(jīng)常地間隔約1周投與兩個(gè)約0.2到約1.5克達(dá)巴霉素的劑量。在一實(shí)施例中，間隔約1周投與約1克達(dá)巴霉素的第一劑量與約0.5克達(dá)巴霉素的第二劑量。
在多劑量方案中，劑量之間的時(shí)間例如可在約5到約10天范圍內(nèi)，經(jīng)常是約一周。劑量頻率例如可以是每周兩個(gè)劑量或每周多個(gè)劑量。投藥間隔或劑量之間的時(shí)間例如可以是約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多天中的任一個(gè)。所給的劑量數(shù)目例如可以是1、2、3、4、5、6或更多劑量，首次劑量之后的各劑量是在所選劑量間隔后給出。
在多次投藥方案中，“最低水平”或在達(dá)巴霉素的第一劑量之后和投與第二劑量之前血漿中的達(dá)巴霉素水平為至少約4mg/l。在諸如約一周的投藥間隔的末期，最低水平優(yōu)選地為至少約20mg/l，更優(yōu)選地為至少約30mg/l，并且最優(yōu)選地為至少約40mg/l。
達(dá)巴霉素可非經(jīng)腸投與，例如經(jīng)肌肉內(nèi)(i.m.)、靜脈內(nèi)(i.v.)、皮下(s.c.)、腹膜內(nèi)(i.p.)或鞘內(nèi)(i.t.)。投藥計(jì)劃與所投與的實(shí)際劑量可視諸如感染性質(zhì)與嚴(yán)重程度、年齡、體重、患者的整體健康及特定患者對(duì)達(dá)巴霉素的耐受性而有所變化，但對(duì)于健康專家而言是可確定的。在一實(shí)施例中，在達(dá)巴霉素的1克靜脈內(nèi)劑量一周后之后，隨后以0.5克靜脈內(nèi)劑量。
將藥物投與及傳遞到患者(例如靜脈內(nèi))可以受控速率進(jìn)行，以便血液中的濃度不會(huì)增加太快或者發(fā)生沉淀。在某些實(shí)施例中，以適當(dāng)速率投與達(dá)巴霉素以便藥物與血流中的內(nèi)源蛋白形成復(fù)合物。不受限于特定理論，據(jù)信諸如人血清白蛋白的內(nèi)源蛋白可在活體內(nèi)與一或兩個(gè)達(dá)巴霉素同系物單體分子形成復(fù)合物。當(dāng)存在足量達(dá)巴霉素時(shí)，據(jù)信高達(dá)兩個(gè)達(dá)巴霉素同系物分子將結(jié)合到內(nèi)源蛋白上，并且進(jìn)一步據(jù)信通過在兩個(gè)不同的結(jié)合位點(diǎn)上結(jié)合獨(dú)立的達(dá)巴霉素同系物分子來形成此復(fù)合物。或者，二聚體達(dá)巴霉素結(jié)合到內(nèi)源蛋白的單個(gè)結(jié)合位點(diǎn)上也是可能的。對(duì)以上討論的達(dá)巴霉素-內(nèi)源蛋白復(fù)合物的另一份詳細(xì)研究可見于題為″COMPOSITIONS AND METHODS FORTREATING BACTERIAL INFECTIONS WITH PROTEIN DALBAVANCIN COMPLEXES″的美國(guó)第10/---號(hào)，，其與代理人案號(hào)第34231-20053.00號(hào)同時(shí)申請(qǐng)，其揭示內(nèi)容全文以引用方式并入本文中。
輸注持續(xù)時(shí)間例如可以是約1分鐘到約2小時(shí)。舉例而言，可使用約30分鐘的輸注持續(xù)時(shí)間，其中劑量是約0.5到約1克。在受控速率條件下進(jìn)行靜脈內(nèi)投藥可產(chǎn)生比在活體外的生理pH下于溶液相中可達(dá)成的濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)過量的體內(nèi)達(dá)巴霉素濃度。盡管不希望受限于理論，但此可歸因于達(dá)巴霉素與諸如血清白蛋白的內(nèi)源蛋白形成復(fù)合物，其可增加血漿吸收達(dá)巴霉素的容量。
在活體外(in vitro或ex vivo)形成達(dá)巴霉素復(fù)合物可允許更快的投藥，諸如至少約1分鐘、至少約10分鐘或至少約20分鐘。通過混合人血清白蛋白和/或另一內(nèi)源蛋白與達(dá)巴霉素可達(dá)成所述復(fù)合物，從而在活體外形成復(fù)合物，并且接著將此復(fù)合物投與所治療患者。或者，人血清白蛋白或其它內(nèi)源蛋白可從自體來源獲得或自經(jīng)修飾以含有用于所述蛋白的基因的微生物通過表達(dá)來獲得。
所投與的達(dá)巴霉素的量可以是任何本文中所揭示的劑量。通常選擇達(dá)巴霉素劑量以便藥物將以治療上或預(yù)防上有效(即殺菌)的血漿水平保持延長(zhǎng)時(shí)期，經(jīng)常是至少5天，更經(jīng)常地是約一周或更長(zhǎng)。優(yōu)選投與可產(chǎn)生并維持殺菌濃度至少約一周(或約5到約10天)的達(dá)巴霉素劑量。殺菌濃度定義為經(jīng)24小時(shí)殺死至少99％活體外實(shí)驗(yàn)最初所存在的細(xì)菌所需要的達(dá)巴霉素濃度。血漿中達(dá)巴霉素的最小殺菌濃度通常是約4mg/l。
可治療的適應(yīng)癥的實(shí)例包括并發(fā)性與非并發(fā)性皮膚及軟組織感染(SSTI)、血流感染(BSI)、與導(dǎo)管相關(guān)的血流感染(CRBSI)、骨髓炎、假體接頭感染、外科預(yù)防、心內(nèi)膜炎、醫(yī)院或社區(qū)獲得性肺炎、肺炎球菌肺炎、發(fā)燒性白細(xì)胞過低癥的經(jīng)驗(yàn)治療、關(guān)節(jié)間隙感染及裝置感染(例如起博器與內(nèi)部心臟除顫器)。可治療革蘭氏陽(yáng)性或耐抗生素的細(xì)菌感染，諸如葡萄球菌(Staphylococcus)、鏈球菌(Streptococcus)、奈瑟氏菌(Neisseria)或芽孢梭菌(Clostridium)屬感染，特定言之是金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、溶血葡萄球菌(Staphylococcus hemolyticus)、化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、A與C群鏈球菌、淋病奈瑟氏菌(Neisseriagonorrhoeae)或芽孢桿菌(Clostridium difficile)。
本發(fā)明提供治療皮膚及軟組織感染(SSTI)的方法。受益于此治療的患者可具有深度或淺度感染。SSTI可包括更深度的軟組織感染和/或需要顯著外科干預(yù)的感染，諸如嚴(yán)重膿腫、感染性潰瘍、嚴(yán)重灼傷或深度與大面積蜂窩組織炎。也可治療受感染的外科傷口。
皮膚與皮膚結(jié)構(gòu)感染的臨床表現(xiàn)可自輕度毛囊炎至嚴(yán)重壞死性肌膜炎而有所不同。獲得模式也可隨社區(qū)獲得性皮膚與皮膚結(jié)構(gòu)感染而有所變化，所述感染之前是由偶然暴露或娛樂活動(dòng)引起的損傷并通常與病原體較大的多樣性相關(guān)。醫(yī)院獲得性皮膚與皮膚組織感染通常與外科程序、褥瘡及導(dǎo)管插入相關(guān)。后外科感染是第三常見的醫(yī)院感染并占全國(guó)院內(nèi)感染監(jiān)測(cè)系統(tǒng)(NNIS)報(bào)導(dǎo)的所有醫(yī)院感染的17％。最常見的感染源是患者的內(nèi)源菌群。金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌及腸球菌屬是最經(jīng)常自SSTI分離的病原體。
SSTI感染的癥狀可包括紅斑、觸痛或疼痛、發(fā)熱或局部溫暖、排液或淌液、腫脹或硬化、發(fā)紅或波動(dòng)。受益于以本發(fā)明的方法進(jìn)行治療的患者包括具有深度或并發(fā)感染或需要外科干預(yù)的感染的患者或具有潛伏性糖尿病或外周血管疾病的患者。所述感染經(jīng)常是由革蘭氏陽(yáng)性菌引起，諸如葡萄球菌或鏈球菌種，諸如金黃色葡萄球菌或化膿性鏈球菌。治療皮膚或軟組織細(xì)菌感染的方法包括以一定量并根據(jù)如上所述的投藥方案將治療上有效量的達(dá)巴霉素投與需要治療的個(gè)體。在某些實(shí)施例中，分兩個(gè)劑量經(jīng)靜脈內(nèi)投與達(dá)巴霉素組合物，經(jīng)常是間隔約5到約10天，更經(jīng)常地是間隔約1周。在某些實(shí)施例中，第一劑量包括至少兩倍于第二劑量的達(dá)巴霉素。在一實(shí)施例中，第一劑量是約1000mg并且第二劑量是約500mg。
本發(fā)明還提供用于預(yù)防性防止細(xì)菌感染發(fā)作的方法，所述感染例如是由金黃色葡萄球菌或奈瑟氏菌屬或芽孢梭菌屬細(xì)菌引起的感染。在本發(fā)明的預(yù)防方法中，將預(yù)防上有效量的達(dá)巴霉素投與(例如)通過治療程序可能易染上細(xì)菌感染的個(gè)體。達(dá)巴霉素經(jīng)常是以足以提供預(yù)防上有效的血漿水平持續(xù)至少約1天、至少約3天、至少約5天或至少約1周或更長(zhǎng)時(shí)間的量來投與。達(dá)巴霉素組合物可在外科手術(shù)之前或之后作為抗感染的預(yù)防步驟(例如)非經(jīng)腸投與，例如經(jīng)肌肉內(nèi)(i.m.)、靜脈內(nèi)(i.v.)、腹膜內(nèi)(i.p.)、皮下(s.c.)或鞘內(nèi)(i.t.)注射?？稍谥T如外科手術(shù)的侵襲性治療程序或在諸如醫(yī)院的醫(yī)療護(hù)理機(jī)構(gòu)中住院之前、之后(之前或之后一或多天或約一周)或期間投與達(dá)巴霉素組合物以預(yù)防感染。預(yù)防方法可用于其中個(gè)體可能或很可能染上細(xì)菌感染的任何情形中，包括其中個(gè)體已暴露于或很可能暴露于細(xì)菌感染個(gè)體的情形。就預(yù)防方法而言，達(dá)巴霉素組合物可作為單劑量投與，或作為兩個(gè)或兩個(gè)以上相等或不同量的劑量間隔若干天到約一周投與。在一實(shí)施例中，達(dá)巴霉素組合物可在插入靜脈內(nèi)導(dǎo)管之前或同時(shí)投與以預(yù)防血流的相關(guān)感染。
就預(yù)防方法而言，達(dá)巴霉素組合物可根據(jù)如上所述的任何投藥方案以單劑量或多劑量投與。達(dá)巴霉素組合物經(jīng)常是作為包含約0.1到約3克或約0.1到約1克(例如約0.25克或約0.5克)的單劑量投與。在一實(shí)施例中，經(jīng)約2分鐘到約1小時(shí)(例如約30分鐘)的時(shí)限經(jīng)靜脈內(nèi)投與約0.25克的單劑量。在另一實(shí)施例中，與另一醫(yī)藥(例如抗生素)治療的投與同時(shí)經(jīng)靜脈內(nèi)投與達(dá)巴霉素組合物。
在任何上述治療或預(yù)防方法中，達(dá)巴霉素組合物可與至少一種其它抗生素同時(shí)或相繼投與。在某些實(shí)施例中，除達(dá)巴霉素之外還投與至少一種其它抗生素，其有效對(duì)抗(例如殺菌)一種或多種革蘭氏陰性菌類和/或達(dá)巴霉素不能有效對(duì)抗的革蘭氏陽(yáng)性菌株。在某些實(shí)施例中，達(dá)巴霉素與有效對(duì)抗(例如殺菌)至少一種革蘭氏陰性菌類的至少一種抗生素是作為達(dá)巴霉素組合物中的混合物投與。
醫(yī)藥組合物本發(fā)明提供為根據(jù)上述方法投與達(dá)巴霉素而調(diào)配的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可呈達(dá)巴霉素的單位劑量形式，其包括當(dāng)組合物投與個(gè)體時(shí)量足以提供治療上或預(yù)防上有效的達(dá)巴霉素血漿水平持續(xù)若干天(經(jīng)常是至少約3天、至少約5天、或至少約1周或更長(zhǎng)時(shí)間)的達(dá)巴霉素及醫(yī)藥上可接受的載劑。治療上或預(yù)防上有效的達(dá)巴霉素血漿水平通常是每升血漿中至少約4mg。達(dá)巴霉素血漿水平可以諸如上述方法的此項(xiàng)技術(shù)中熟知的方法測(cè)量。
達(dá)巴霉素可視情況呈醫(yī)藥上可接受的用于投與個(gè)體的形式，視情況作為醫(yī)藥上可接受的無毒性鹽。
達(dá)巴霉素的合適鹽的實(shí)例包括通過與有機(jī)及無機(jī)酸發(fā)生標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)所形成的鹽，所述酸例如是鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、琥珀酸、檸檬酸、抗壞血酸、乳酸、馬來酸、谷胺酸、樟腦酸、戊二酸、乙醇酸、鄰苯二甲酸、酒石酸、月桂酸、硬脂酸、水楊酸、甲磺酸、苯磺酸、山梨酸、苦味酸、苯甲酸、肉桂酸及類似酸?？膳c達(dá)巴霉素形成鹽的鹽的代表性實(shí)例包括堿金屬或堿土金屬氫氧化物，諸如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂及氫氧化鋇；氨與脂族、脂環(huán)族或芳族有機(jī)胺，諸如甲胺、二甲胺、二乙胺、乙醇胺及甲基吡啶。(例如參見美國(guó)專利第5,606,036號(hào))在某些實(shí)施例中，提供適于非經(jīng)腸(例如靜脈內(nèi)注射)投與的醫(yī)藥上可接受的達(dá)巴霉素的含水調(diào)配物。為制備所述含水調(diào)配物，可使用此項(xiàng)技術(shù)中熟知的方法并且可使用此項(xiàng)技術(shù)中通常所用的任何醫(yī)藥上可接受的載劑、稀釋劑、賦形劑或其它添加劑。在一實(shí)施例中，用于靜脈內(nèi)注射的醫(yī)藥上可接受的含水調(diào)配物包括5％右旋糖。
用于非經(jīng)腸投與的醫(yī)藥組合物包括達(dá)巴霉素與生理上可接受的稀釋劑，諸如去離子水、生理鹽水、5％右旋糖、水混溶性溶劑(例如乙醇、聚乙二醇、丙二醇等)、非水性媒劑(例如油，諸如玉米油、棉籽油、花生油及芝麻油)或其它常用稀釋劑。調(diào)配物可另外包括諸如聚乙二醇、聚丙二醇或其它已知增溶劑的增溶劑、用于穩(wěn)定溶劑的緩沖劑(例如檸檬酸鹽、乙酸鹽及磷酸鹽)和/或抗氧化劑(例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉)。(例如參見美國(guó)專利第6,143,739號(hào))其它合適的醫(yī)藥載劑及其調(diào)配物描述于E.W.Martin的″Remington′s Pharmaceutical Sciences″中。如此項(xiàng)技術(shù)中所已知，還可將本發(fā)明的醫(yī)藥制劑制備成含有可接受水平的顆粒(例如無粒子)及制備成非熱解性(例如符合美國(guó)藥典中的可注射要求)。
在一實(shí)施例中，通過將經(jīng)干燥(例如凍干)的達(dá)巴霉素劑量溶解于一定量的水中并優(yōu)選地溶解于體積足以進(jìn)行溶解的去離子水中來提供醫(yī)藥組合物，其經(jīng)常含有穩(wěn)定劑或穩(wěn)定劑混合物。足以進(jìn)行溶解的水的量通常是大約10mL并且達(dá)巴霉素溶液的所得pH值高于3.0并且是約3.5到4.5。通過將此溶液添加到經(jīng)常含有5％右旋糖的第二種量的含水稀釋劑(諸如用于靜脈內(nèi)投藥的滴液袋中所含的量)中來稀釋此溶液，從而將達(dá)巴霉素溶液的pH值升高到約5到約5.5。在另一實(shí)施例中，滴液袋中達(dá)巴霉素溶液的pH值是約4.5。第二種量的含水溶液可以是去離子的或無菌的、或是既去離子又無菌的。在一實(shí)施例中，含水稀釋劑是5％右旋糖。
可在其中可保持達(dá)巴霉素的殺菌有效性的條件下在無菌小瓶中構(gòu)成用于非經(jīng)腸投與的醫(yī)藥組合物，其含有上述治療上或預(yù)防上有效量的一個(gè)或多個(gè)單位劑量的達(dá)巴霉素，視情況包括賦形劑。組合物可呈(例如)干粉形式。在使用前可添加生理上可接受的稀釋劑并通過注射器取出溶液以投與患者。上述醫(yī)藥調(diào)配物可通過任何可接受的方式消毒，所述方式例如包括電子束或伽馬消毒方法或通過無菌過濾。
用于非經(jīng)腸投與的典型調(diào)配物可包括達(dá)巴霉素，其濃度例如是每毫升最終制劑中約0.1到約100mg、約0.5到約50mg、約1到約100mg、或約2到約4mg達(dá)巴霉素。
在某些實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)藥組合物包括達(dá)巴霉素與一種或多種額外抗生素的混合物。優(yōu)選地，混合物中的至少一種非達(dá)巴霉素抗生素為有效對(duì)抗(例如殺菌)一種或多種革蘭氏陰性菌類(諸如阿茲羅南(aztheronam))和/或有效對(duì)抗(例如殺菌)達(dá)巴霉素所不能有效對(duì)抗的一種或多種革蘭氏陽(yáng)性菌株(諸如依佐立德(ilnezolide)或達(dá)托霉素(daptomycin))?；旌衔镆部砂ㄉ鲜鲠t(yī)藥上可接受的載劑。
在某些實(shí)施例中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物包括一種或多種抑制一種或多種達(dá)巴霉素組份降解為活性較低或非活性材料(例如MAG)的穩(wěn)定化物質(zhì)。如本文中所用，“穩(wěn)定化物質(zhì)”或“穩(wěn)定劑”指的是穩(wěn)定組合物中一種或多種達(dá)巴霉素組成組份(例如B0)的水平的穩(wěn)定劑?！胺€(wěn)定上有效量”指的是足以提高達(dá)巴霉素組合物的一種或多種組份的長(zhǎng)期穩(wěn)定性的穩(wěn)定劑的量。在某些實(shí)施例中，可通過兩種或兩種以上穩(wěn)定化物質(zhì)的混合物提供穩(wěn)定上有效量，其中各物質(zhì)不是以足以提供穩(wěn)定化效果的量單獨(dú)存在。
穩(wěn)定劑的實(shí)例例如包括非離子物質(zhì)，諸如糖，例如單、二或多糖或其衍生物；糖醇；或多元醇。所述穩(wěn)定化物質(zhì)例如包括甘露醇、乳糖、蔗糖、山梨醇、甘油、纖維素、海藻糖、麥芽糖、棉子糖或其混合物。
在一實(shí)施例中，醫(yī)藥組合物包括重量比是1∶2的甘露醇達(dá)巴霉素。在另一實(shí)施例中，醫(yī)藥組合物包括重量比是1∶1∶4的甘露醇乳糖達(dá)巴霉素。令人吃驚地，已發(fā)現(xiàn)甘露醇與乳糖的組合比單獨(dú)物質(zhì)提供更好的穩(wěn)定化效果。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的pH值例如經(jīng)常是約3到約5，例如約3.5或約4.5。
在某些實(shí)施例中，可使用一個(gè)或多個(gè)程序減少M(fèi)AG形成。例如，在諸如甘露醇的穩(wěn)定化物質(zhì)存在下冷凍干燥達(dá)巴霉素可用于減少所形成的MAG的量。
達(dá)巴霉素組合物的儲(chǔ)存經(jīng)常是在低于周圍溫度的溫度下(諸如在約5℃下)以提高穩(wěn)定性。
改良的功效與減少的副作用如本文實(shí)例所證明，每周一次以高劑量水平(即導(dǎo)致異常高及持久的血清水平)投藥達(dá)巴霉素顯示異常好的安全性曲線，其類似于或優(yōu)于每天一次甚或每天2-4次投與較低劑量的常規(guī)抗生素的標(biāo)準(zhǔn)治療所觀察到的安全性曲線。可以比其它抗生素更低的頻率投與異常高的劑量(即導(dǎo)致異常高及持久的血清水平)的達(dá)巴霉素并不具有不良副作用，從而能夠改良功效和患者依從性。
如實(shí)例1中所討論，以達(dá)巴霉素進(jìn)行治療致使低的不良事件發(fā)生頻率。嚴(yán)重不良事件包括在任何劑量下發(fā)生的導(dǎo)致死亡、危及生命、導(dǎo)致住院或住院延長(zhǎng)或持久的或顯著的能力喪失或無力的任何不良藥物經(jīng)歷。在實(shí)例1中所述的階段II試驗(yàn)中，90％的諸如腹瀉、惡心、高血糖、肢體疼痛、嘔吐及便秘的不良反應(yīng)在嚴(yán)重程度上是輕度到中度。在實(shí)例1的試驗(yàn)中使用達(dá)巴霉素未導(dǎo)致與研究藥物治療相關(guān)的嚴(yán)重不良事件。
套件本發(fā)明也提供用于細(xì)菌感染的治療或預(yù)防方法中的套件。套件包括本發(fā)明的醫(yī)藥組合物(例如包括至少一個(gè)單位劑量的達(dá)巴霉素)與向健康護(hù)理提供者提供治療或預(yù)防細(xì)菌感染的用法的相關(guān)信息的說明書。說明書可以印刷形式、或以諸如軟盤、CD或DVD的電子介質(zhì)形式、或以其中可獲得所述說明書的網(wǎng)址形式提供。單位劑量的達(dá)巴霉素經(jīng)常包括當(dāng)投與個(gè)體時(shí)使得治療上或預(yù)防上有效的達(dá)巴霉素血漿水平在個(gè)體內(nèi)維持至少5天的劑量。在某些實(shí)施例中，套件包括間隔至少5天、經(jīng)常間隔約1周有待投與的兩個(gè)單位劑量，經(jīng)常包括比第二劑量高出約1.5到約3倍的第一劑量的達(dá)巴霉素。經(jīng)常包括作為無菌含水醫(yī)藥組合物或干粉(例如凍干)組合物的達(dá)巴霉素。
提供合適的封裝。如本文中所用，“封裝”指的是通常用于系統(tǒng)的并且能夠?qū)⑦m于投與個(gè)體的達(dá)巴霉素組合物保持在固定范圍內(nèi)的固體基質(zhì)或材料。所述材料包括玻璃與塑料(例如聚乙烯、聚丙烯及聚碳酸酯)瓶、小瓶、紙、塑料及塑料箔層壓的封套及其類似物。如果使用電子束消毒技術(shù)，那么封裝應(yīng)具有足夠低的密度以允許對(duì)內(nèi)容物消毒。
套件還可視情況包括用于投與達(dá)巴霉素的設(shè)備，例如用于靜脈內(nèi)投與的注射器或設(shè)備；和/或用于制備供投與用的組合物的干粉(例如凍干)的無菌溶液，例如，諸如5％右旋糖的稀釋劑。
本發(fā)明的套件除達(dá)巴霉素之外還可包括非達(dá)巴霉素抗生素或非達(dá)巴霉素抗生素的混合物以如以上方法中所述與達(dá)巴霉素一起使用。
在以下實(shí)例中，下列縮寫具有下列含義。如果未對(duì)縮寫進(jìn)行定義，那么其具有通常所被接受的含義。
AcOH＝乙酸AcONa ＝乙酸鈉aq. ＝含水AST ＝天冬胺酸胺基轉(zhuǎn)移酶ALT ＝丙胺酸胺基轉(zhuǎn)移酶BV ＝柱床體積CV ＝變異系數(shù)d＝直徑D＝道爾頓DCC ＝二環(huán)己基碳二酰胺DMEPA＝3-(二甲基胺基)-丙胺DMSO ＝二甲基磺酰胺eq ＝當(dāng)量EU ＝內(nèi)毒素單位g＝克GC ＝氣相層析法HCl ＝鹽酸H2O ＝水HOBT ＝水合1-羥基苯并噻唑
HPLC＝高效液相層析法H2SO4 ＝硫酸IPA ＝異丙胺IU ＝國(guó)際單位KF ＝氟化鉀Kg ＝千克L ＝升LC/MS/MS＝液相層析/質(zhì)譜/質(zhì)譜LDH ＝乳酸脫氫酶LSC ＝液體閃爍計(jì)數(shù)m3 ＝立方米MeOH ＝甲醇mg ＝毫克mL ＝毫升mol ＝摩爾MW ＝分子量N ＝正常NaOH ＝氫氧化鈉NMP ＝N-甲基-2-吡咯烷酮QTD ＝定量組織分布Rt ＝滯留時(shí)間sd ＝標(biāo)準(zhǔn)偏差TEA ＝三乙胺下列實(shí)例旨在說明本發(fā)明，但不欲限制其。
實(shí)例實(shí)例1.每周一次的達(dá)巴霉素在深度皮膚及軟組織感染中的功效及安全性此隨機(jī)化的受控研究評(píng)估兩個(gè)達(dá)巴霉素劑量方案的安全性及功效。將包括深度皮膚結(jié)構(gòu)或需要外科干預(yù)的皮膚及軟組織感染(SSTI)成年患者隨機(jī)分成三組研究分組1在第1天通過靜脈內(nèi)注射(IV)接受1100mg達(dá)巴霉素；研究分組2在第1天通過IV接受1g達(dá)巴霉素并在第8天通過IV接受500mg達(dá)巴霉素；研究分組3接受“標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理”(standard of care)。評(píng)定臨床與微生物反應(yīng)及不良事件。
用于分析的群體有62名患者隨機(jī)分入研究中；所有患者均接受至少一個(gè)劑量的研究藥物。評(píng)估4組研究群體的安全性及功效并定義如下意向治療型(ITT)群體包括所有接受至少一個(gè)劑量的研究藥物的患者(所有隨機(jī)化的受試者)。微生物意向治療型(MITT)群體是具有經(jīng)培養(yǎng)證實(shí)的基準(zhǔn)革蘭氏陽(yáng)性病原體的ITT患者。將臨床上可評(píng)估的群體定義為如下群體1)滿足所有研究進(jìn)入標(biāo)準(zhǔn)，2)除了口服遞減治療(僅用于標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理組)，在第4天后的革蘭氏陽(yáng)性感染的抗菌治療中無變化，3)繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)(FU)評(píng)定回訪(除非治療失敗)，及4)不接受非協(xié)議認(rèn)可的伴隨抗菌劑(除非治療失敗)。微生物學(xué)上可評(píng)估的群體是具有經(jīng)培養(yǎng)證實(shí)的基準(zhǔn)革蘭氏陽(yáng)性病原體的臨床上可評(píng)估的患者亞組。
研究群體示于表2中。
表2.用于達(dá)巴霉素SSTI治療的研究群體


ITT-意向治療型MITT-具有經(jīng)培養(yǎng)證實(shí)的革蘭氏陽(yáng)性感染的ITT群體亞組EOT-治療結(jié)束FU-后續(xù)受試者的中位數(shù)年齡是50-55歲(18-86歲的范圍)。治療分組之間的年齡無明顯差異。治療分組之間的性別存在差異，但整個(gè)研究登記了相等數(shù)目的男性與女性?；颊呷后w主要是高加索人。對(duì)于ITT與臨床上可評(píng)估的群體而言所述結(jié)果是一致的。
登記了62名患者，研究分組1中有20名并且研究分組2與3中各有21名。標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理的最常見的對(duì)比物是克林霉素(clindamycin)、頭孢曲松(ceftriaxone)、萬古霉素及頭孢唑啉(cefazolin)。研究分組3中的治療平均持續(xù)時(shí)間是15天。
基準(zhǔn)病原體與敏感性在62名ITT患者中，66％(14名單劑量達(dá)巴霉素，13名兩劑量達(dá)巴霉素，14名標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理)具有經(jīng)分離的預(yù)先治療革蘭氏陽(yáng)性病原體(MITT群體)。最常見的病原體是金黃色葡萄球菌。基準(zhǔn)病原體的分布示于表3中。
表3.MITT群體的基準(zhǔn)革蘭氏陽(yáng)性病原體及達(dá)巴霉素MIC范圍

臨床與微生物反應(yīng)通過評(píng)定患者的臨床反應(yīng)與經(jīng)證明或假定的微生物反應(yīng)來判定三個(gè)治療方案的有效性。主要的功效終點(diǎn)是臨床上可評(píng)估的群體于后續(xù)回訪時(shí)的臨床反應(yīng)。EOT與FU回訪的臨床反應(yīng)均分類為成功(治愈或改善)或失敗(包括不確定結(jié)果)。歸類為成功的患者必須未接受用于其感染的額外的全身性抗菌治療。失敗是定義為一個(gè)或多個(gè)SSTI的局部或全身指征與癥狀存留，使得需要新型或額外的全身性抗菌劑以用于SSTI。
在具有微生物學(xué)經(jīng)證明的SSTI(即至少一個(gè)經(jīng)確定的基準(zhǔn)病原體)的患者亞組中評(píng)定次要的功效變數(shù)微生物結(jié)果。在基準(zhǔn)處評(píng)定經(jīng)確定的各革蘭氏陽(yáng)性病原體的微生物反應(yīng)(即根除、推測(cè)根除、存留、推測(cè)存留)。對(duì)于未進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)的患者而言，以臨床反應(yīng)為基礎(chǔ)推測(cè)基準(zhǔn)病原體的微生物反應(yīng)。EOT與FU回訪時(shí)患者的微生物反應(yīng)分級(jí)為成功(即所有革蘭氏陽(yáng)性有機(jī)體根除或推測(cè)根除)或失敗(即至少一種革蘭氏陽(yáng)性有機(jī)體存留或推測(cè)存留，多種病原體部分根除)。在EOT與FU回訪時(shí)均評(píng)定拓殖與重復(fù)感染。在FU回訪時(shí)患者的細(xì)菌學(xué)反應(yīng)也可包括復(fù)發(fā)。
臨床功效臨床成功率示于表4中。在臨床上可評(píng)估的群體中，單劑量達(dá)巴霉素組中的61.5％患者、兩劑量達(dá)巴霉素組中的94.1％患者及標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理組中的76.2％患者在FU評(píng)定時(shí)被歸類為成功。在分類為于基準(zhǔn)處具有深度或并發(fā)SSTI的那些患者的試探性子分析中，相比于各自是58.3％與73.7％的單劑量達(dá)巴霉素治療與標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理治療，兩劑量達(dá)巴霉素治療也提供較高的臨床成功率(93.8％)。
在接受兩劑量達(dá)巴霉素治療后始終傾向于具有更有利的反應(yīng)的支援性ITT與微生物學(xué)上可評(píng)估的群體中，在EOT與FU評(píng)定中發(fā)現(xiàn)類似的成功率(表3)。就MITT群體而言，具有抗甲氧苯青霉素的金黃色葡萄球菌(MRSA)的患者在FU評(píng)定時(shí)單劑量達(dá)巴霉素的臨床成功率是50％(3/6)，兩劑量達(dá)巴霉素是80％(4/5)，并且以標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理方案治療的患者是50％(1/2)。
表4.通過分析群體與治療組所得的臨床成功率

微生物功效關(guān)于不同病原體的不同治療方案的成功率示于表5中。就微生物學(xué)可評(píng)估的群體而言，在FU評(píng)定時(shí)所有有機(jī)體的根除/推測(cè)根除率是58.3％(7/12)，就兩劑量達(dá)巴霉素而言是92.3％(12/13)，并且就標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理組中的患者而言是70.6％(12/17)。就存留的分離菌而言，在達(dá)巴霉素MIC中無變化。在FU中，兩劑量達(dá)巴霉素組的金黃色葡萄球菌的根除率(90％)與單劑量達(dá)巴霉素(50％)及標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理(60％)治療相比較高。觀察到MITT群體的類似發(fā)現(xiàn)；兩劑量達(dá)巴霉素根除80％的MRSA分離菌(表5)。
表5.在FU評(píng)定時(shí)微生物ITT群體的病原體成功率

就微生物學(xué)上可評(píng)估的MITT群體而言，EOT與FU時(shí)的微生物成功率總結(jié)于表6中。在以兩劑量達(dá)巴霉素及標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理方案治療的患者的回訪中均報(bào)導(dǎo)了相當(dāng)?shù)奈⑸锍晒β?大約64％到77％)，而那些提供單劑量達(dá)巴霉素的具有較低的成功率(＜40％)。微生物學(xué)上可評(píng)估的群體中的EOT/FU微生物成功率平行于臨床反應(yīng)發(fā)現(xiàn)就單劑量達(dá)巴霉素而言是38.5％/27.3％，就兩劑量達(dá)巴霉素而言是72.7％/72.7％，并且就標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理治療而言是71.4％/64.3％。觀察到MITT群體的類似發(fā)現(xiàn)(數(shù)據(jù)未顯示)。
表6.微生物成功率


藥物動(dòng)力學(xué)分析就隨機(jī)分入達(dá)巴霉素治療組的患者而言，在第8天獲得5ml血液以測(cè)定達(dá)巴霉素血漿濃度。對(duì)于在第8天隨機(jī)接受500mg達(dá)巴霉素劑量的患者而言，在即將投與第二劑量前獲得血液。就隨機(jī)分入單劑量達(dá)巴霉素組的患者而言在第10天與第24天獲得額外的5ml血液樣本，并且就接受兩劑量達(dá)巴霉素的患者而言在第20天與第34天獲得額外的5ml血液樣本。
使用經(jīng)驗(yàn)證的液相層析法與質(zhì)譜分光光度計(jì)方法測(cè)定達(dá)巴霉素血漿濃度。對(duì)血漿而言定量的下限是500μg/ml。
在單劑量方案中于第8、10及24天收集的平均達(dá)巴霉素濃度分別是31.1±7.1、25.2±4.8及10.2±3.5mg/l(平均值±SD)。接受兩劑量方案的達(dá)巴霉素濃度在第8(第二劑量之前)、20及34天分別是30.4±8.2、21.2±10.0及9.0±4.4mg/l。如所期望的，所有患者接受第一劑量第一周內(nèi)均具有高于20mg/l的達(dá)巴霉素濃度，在第8天以靜脈內(nèi)的額外500mg劑量使高于20mg/l的水平維持額外一周。最大殺菌濃度通常是約4到10mg/l。
安全性評(píng)估通過監(jiān)測(cè)不良事件(AE)來評(píng)估接受至少一個(gè)劑量的研究藥物的各患者(ITT群體)的藥物安全性，所述不良事件包括異常的臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)試結(jié)果與生命指征。由研究者根據(jù)AE的嚴(yán)重程度將AE分級(jí)(輕度、中度、嚴(yán)重、危及生命)，并以與研究藥物的關(guān)系分級(jí)(不相關(guān)、不太可能相關(guān)、可能相關(guān)或很可能相關(guān))。
AE數(shù)據(jù)的總結(jié)呈現(xiàn)于表7中。認(rèn)為大部分不良反應(yīng)(90％)在嚴(yán)重程度上是輕度到中度。所有嚴(yán)重的不良反應(yīng)(5名患者中有8起事件)均與研究藥物治療無關(guān)。報(bào)導(dǎo)有至少一個(gè)治療緊急AE的所有患者中大約59％(19單劑量達(dá)巴霉素，16兩劑量達(dá)巴霉素，21治療標(biāo)準(zhǔn))經(jīng)歷由研究者分類為與研究藥物可能或很可能相關(guān)的事件。在11(55％)單劑量達(dá)巴霉素、10(48％)兩劑量達(dá)巴霉素及12(57％)標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理患者中明確報(bào)導(dǎo)了與藥物相關(guān)的AE。在達(dá)巴霉素與標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理無治療組中最常見的經(jīng)報(bào)導(dǎo)的藥物相關(guān)AE是腹瀉與惡心。不同治療組的所觀察的AE類型的總結(jié)呈現(xiàn)于表8中。
沒有一個(gè)經(jīng)達(dá)巴霉素治療的患者由于AE過早地中斷治療。標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理方案的21名患者中有3名(14％)由于AE過早地中斷治療，包括1名患者在第1天出現(xiàn)很可能與藥物相關(guān)的蕁麻疹，及2名患者具有與研究藥物無關(guān)的AE(重復(fù)感染銅綠假單孢菌(P.aeruginosa)與提高的萬古霉素最低水平)。
表7.不良事件(AE)數(shù)據(jù)的總結(jié)


表8.最常見的不良事件

討論此開放標(biāo)記的隨機(jī)化的階段II試驗(yàn)顯示達(dá)巴霉素可有效治療具有SSTI的成人。大部分經(jīng)登記患者具有深度或并發(fā)感染(＞90％)與需要外科干預(yù)的感染(-70％)，而大約45％具有潛伏性糖尿病。
每周兩次的達(dá)巴霉素劑量具有數(shù)字上比單劑量達(dá)巴霉素或標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理方案更高的臨床反應(yīng)率。來自ITT與臨床上可評(píng)估的群體的數(shù)據(jù)表明每周兩次相繼的注射式達(dá)巴霉素劑量(每周1000mg，500mg)在SSTI治療上很有效。以13天的中位數(shù)持續(xù)時(shí)間治療標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理組。在后繼回訪中，相比于提供標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理方案的患者中的76％與接受單劑量達(dá)巴霉素的患者中的61.5％，認(rèn)為以兩劑量達(dá)巴霉素治療的臨床上可評(píng)估的患者中的94％是臨床成功。
金黃色葡萄球菌是基準(zhǔn)處最常見的分離有機(jī)體。在此試驗(yàn)中，大約83％的患者感染金黃色葡萄球菌并且所有金黃色葡萄球菌中38％是MRSA。大多數(shù)感染(80％)是由單個(gè)病原體引起。達(dá)巴霉素抗革蘭氏陽(yáng)性分離菌(包括MRSA)的MIC在0.016到0.25mg/L范圍內(nèi)。
微生物成功率平行于臨床上可評(píng)估的群體的臨床反應(yīng)的成功率。就經(jīng)組合的所有有機(jī)體而言，相比于單劑量達(dá)巴霉素治療(58％)與標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理治療(71％)，以每周兩個(gè)劑量達(dá)巴霉素的方案進(jìn)行治療在治療2周后的評(píng)定時(shí)可提供較高的根除率(92％)?？偠灾?，在90％、50％及60％的患者中分別觀察到金黃色葡萄球菌根除率。就MITT群體而言，對(duì)比于單劑量達(dá)巴霉素治療與標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理治療的50％，兩劑量達(dá)巴霉素方案的MRSA根除率是80％。
在每周單劑量與兩劑量的治療期結(jié)束時(shí)(分別是第10天或第20天)獲得的達(dá)巴霉素濃度相類似，表明接受第二個(gè)每周劑量后藥物積累很少。觀察到的兩劑量方案的較高臨床成功率表明時(shí)間依賴性殺滅效應(yīng)，其中以間隔1周的兩個(gè)達(dá)巴霉素劑量提供持續(xù)的藥物水平或藥物暴露。在每周投藥間隔末期測(cè)量的達(dá)巴霉素血漿水平大體上高于所報(bào)導(dǎo)的對(duì)大部分SSTI負(fù)責(zé)的病原體的MIC90(＜0.03到0.5mg/L)，包括此試驗(yàn)中所發(fā)現(xiàn)的MIC90。所述水平也高于4到10mg/l的最低殺菌濃度。
達(dá)巴霉素方案與標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理組的總體不良反應(yīng)率類似。與胃腸道藥物相關(guān)的不良事件(即腹瀉與惡心)在三個(gè)治療組中最經(jīng)常地有所報(bào)導(dǎo)。大部分所述事件是輕度與自我限制的。沒有一個(gè)以達(dá)巴霉素治療的患者由于不良反應(yīng)自研究早期撤離，也未見任何可歸因于所報(bào)導(dǎo)糖肽的嚴(yán)重不良事件，但標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理組中有14％由于不良效應(yīng)撤離。新穎劑量方案與標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理相比因此具有減少的不良副作用。來自此試驗(yàn)的數(shù)據(jù)未發(fā)現(xiàn)達(dá)巴霉素誘導(dǎo)任何程度的臨床上顯著的肝中毒或腎臟中毒的任何證據(jù)。
兩劑量達(dá)巴霉素方案顯得對(duì)治療具有并發(fā)SSTI的患者很有效。在兩個(gè)劑量下達(dá)巴霉素在此臨床試驗(yàn)中均被很好地耐受，同時(shí)具有與標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理組類似的不良事件曲線。
實(shí)例2.健康受試者中的達(dá)巴霉素藥代動(dòng)力學(xué)及腎排泄此項(xiàng)研究的主要目的是為了將達(dá)巴霉素的藥代動(dòng)力學(xué)特征化及計(jì)算接受治療劑量藥物的健康受試者的腎排泄程度。此為開放標(biāo)記、非對(duì)照性研究。
研究藥物治療將單個(gè)1000mg IV劑量的達(dá)巴霉素經(jīng)30分鐘注入18到65歲之間的健康男性及女性受試者。
記錄6個(gè)受試者(1名女性及5名男性)接受研究藥物及所完成的研究的所有方面。3名受試者為高加索人且3名受試者為美籍非洲人。平均年齡為29.8歲(從22到63)。平均高度為68.6英寸(從63到75)且平均體重為179.6lbs(從140到244)。
藥代動(dòng)力學(xué)在研究的第1、2、3、4、5、6、7、14、21、28及42日收集血液及尿(24小時(shí)收集)。將血液樣本抽吸入肝素化的管子中且進(jìn)行離心。分離血漿且于-20℃下冷凍儲(chǔ)存直到檢定時(shí)間。使用有效的LC/MS/MS方法來檢定血漿及尿樣本中的達(dá)巴霉素。尿及血漿定量檢定的下限為500ng/mL。
使用WinNonlinTM軟件(Pharsight Corporation)通過非間隔方法估計(jì)達(dá)巴霉素藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。濃度峰值(Cmax)直接由觀察的數(shù)據(jù)獲得。使用線性梯形法則計(jì)算血漿濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)。以劑量/AUC來計(jì)算清除率(CL)。通過log濃度對(duì)時(shí)間曲線的log-線性部分的線性回歸來估計(jì)消除半衰期(t1/2)。使用回歸參數(shù)計(jì)算估計(jì)的體積分布(Vz)，同時(shí)由第一時(shí)刻曲線下面積(AUMC)乘以劑量且除以AUC來計(jì)算穩(wěn)態(tài)下的體積分布(Vss)。以尿排泄率(AURC)的被積函數(shù)來確定排泄于尿中的達(dá)巴霉素累積量。以AURC/AUC的比率來計(jì)算CLr或腎臟清除率CLR＝AURC/AUC。
所有受試者的達(dá)巴霉素血漿濃度對(duì)時(shí)間的關(guān)系皆顯示于圖1中。藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)呈現(xiàn)于表9中。所有受試者中的濃度是相似的。血漿峰值濃度約為300mg/L且在注入結(jié)束時(shí)立即達(dá)到。達(dá)巴霉素顯示大于10L的表觀體積分布且因而認(rèn)為其可在細(xì)胞外液中極好的分布。
達(dá)巴霉素以9-12日的t1/2緩慢地消除?？偹幬锴宄蕿?.0431±0.0074L/hr。排泄于尿中的未變化藥物部分估計(jì)為投與劑量的42％，且估計(jì)腎臟清除率為0.018L/h。在受試者中所觀察到的可變性很低且在所有藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)中的變化系數(shù)小于22％。
表9.藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

安全性評(píng)估記錄不良事件且評(píng)估嚴(yán)重性及其與研究藥物的關(guān)系。收集實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)(化學(xué)盤，具有差異的CBC，尿分析)且評(píng)估來自基線與超出范圍值的變化。獲得ECG、身體檢查及生命征象，且評(píng)估來自基線的變化。
達(dá)巴霉素在此項(xiàng)研究中耐受性良好。在研究期間無受試者死亡或嚴(yán)重不良事件的報(bào)導(dǎo)且沒有由于AE而過早地自研究中退出的受試者。
據(jù)報(bào)導(dǎo)所有志愿者均出現(xiàn)至少一起不良事件，所有的不良事件均為輕度。據(jù)報(bào)導(dǎo)3名志愿者出現(xiàn)可能與研究藥物有關(guān)的不良事件一受試者出現(xiàn)升高的ALT(值46IU/L，正常上限40IU/L)；一受試者出現(xiàn)以下所有的不良事件嗜酸粒細(xì)胞增多(值0.5×103/μL，正常上限0.4×103/μL)，升高的LDH(值303IU/L，正常上限90IU/L)，升高的ALT(值54IU/L，正常上限40IU/L)，升高的AST(值42IU/L，正常上限40IU/L)；及一受試者出現(xiàn)耳鳴。
沒有發(fā)現(xiàn)后基準(zhǔn)(post-baseline)血液學(xué)、化學(xué)、生命征象及ECG結(jié)果的傾向。
討論1000mg IV單個(gè)劑量的達(dá)巴霉素耐受良好。在經(jīng)靜脈內(nèi)注入單個(gè)1000mg之后，大于45mg/l的達(dá)巴霉素血漿濃度維持至少7日。此值高于已知的殺菌濃度(4-32mg/l)。此結(jié)果支持達(dá)巴霉素每周一次的使用方案。尿消除曲線表明腎臟排泄為重要的消除路徑，大約40％在尿中排泄。此項(xiàng)發(fā)現(xiàn)與動(dòng)物中的觀察結(jié)果一致。由于腎臟并非唯一消除路線，對(duì)達(dá)巴霉素的劑量調(diào)節(jié)可為腎臟受損患者所必需的。
實(shí)例3.使用等溫滴定微量熱法測(cè)量達(dá)巴霉素的蛋白結(jié)合使用Microcal VP-ITC儀器在20mM磷酸鹽，150mM NaCl，25及37℃下pH7.4中通過等溫滴定微量熱法(ITC)測(cè)量達(dá)巴霉素與蛋白的結(jié)合。在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)中，將25×10μl蛋白(-150μM)注入含有達(dá)巴霉素溶液(-5μM)的熱量計(jì)單元(calorimeter cell)中。通過測(cè)量280nm的吸收率來測(cè)定蛋白及達(dá)巴霉素的實(shí)際濃度。對(duì)照實(shí)驗(yàn)包括將蛋白注入緩沖劑中(在達(dá)巴霉素不存在時(shí))以解決在相同條件下蛋白稀釋所產(chǎn)生的熱。為了進(jìn)行對(duì)照，使用替考拉寧執(zhí)行類似的具有某些必要修改的實(shí)驗(yàn)。
用以下各蛋白來進(jìn)行達(dá)巴霉素的實(shí)驗(yàn)人白蛋白、狗白蛋白、大鼠白蛋白、牛白蛋白及人a-糖蛋白。用人白蛋白及a-糖蛋白來研究替考拉寧。在兩種不同溫度下結(jié)合親和性的對(duì)照顯示于表10中。
表10.表觀結(jié)合親和性的對(duì)照(Ka，X105 M-1)25℃ 37℃達(dá)巴霉素人白蛋白1.35(±0.2) 1.33(±0.15)
大鼠白蛋白 3.1(±0.5) 2.8(±1.8)狗白蛋白0.62(±0.09)0.50(±0.13)牛白蛋白1.38(±0.14)a-糖蛋白1.84(±0.36)4.8(±2.3)替考拉寧人白蛋白0.96(±0.08)a-糖蛋白0.07(±0.01)所引用的±誤差為由適當(dāng)?shù)睦谐绦蛩@得的標(biāo)準(zhǔn)偏差。
在對(duì)稀釋的熱進(jìn)行校正之后，通過使用以標(biāo)準(zhǔn)Microcal ORIGIN軟件包的簡(jiǎn)單的單個(gè)位點(diǎn)結(jié)合模型的非線性回歸分析綜合熱效應(yīng)。綜合各次注射的原始數(shù)據(jù)(μcal/sec)經(jīng)過加法得到總熱效應(yīng)，接著除以注射量以得到注射劑的平均熱量kcal/mole。相同的綜合應(yīng)用于對(duì)照稀釋效應(yīng)，且以實(shí)際滴定數(shù)據(jù)減去此。此舉提供結(jié)合曲線的微分，其中結(jié)合程度與總熱量釋放(或吸收)成比例。接著通過各種標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合模型的非線性回歸方法來分析此。最簡(jiǎn)單的模型假設(shè)簡(jiǎn)單的非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合平衡，且給出三個(gè)參數(shù)Ka(＝1/Kdiss)為結(jié)合關(guān)聯(lián)(解離常數(shù))ΔH＝結(jié)合的焓(與結(jié)合有關(guān)信號(hào)的大小)N＝結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目(假設(shè)結(jié)合模型為正確的)假設(shè)為非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，N為使樣本中所有可利用的結(jié)合位點(diǎn)飽和而需要的注射劑的摩爾(相對(duì))數(shù)目。就達(dá)巴霉素實(shí)驗(yàn)而言，達(dá)巴霉素為“樣本”且蛋白(HSA等)為“注射劑”。所述的初步結(jié)果表明結(jié)合為相對(duì)弱的且由于達(dá)巴霉素較差的溶解性，要清楚的測(cè)定結(jié)合化學(xué)計(jì)量(N)十分困難。然而，如圖2所示，在所有狀況下，數(shù)據(jù)與N＜1極好的匹配(意即蛋白與達(dá)巴霉素的結(jié)合小于1比1)。因此，N＝0.5的值意謂僅需要一半摩爾數(shù)的預(yù)期蛋白去結(jié)合達(dá)巴霉素。換言之，每個(gè)蛋白顯然結(jié)合兩個(gè)達(dá)巴霉素分子。達(dá)巴霉素可能形成與蛋白1∶1結(jié)合的二聚體。結(jié)合化學(xué)計(jì)量模型結(jié)果表明的是兩個(gè)達(dá)巴霉素分子結(jié)合到一個(gè)蛋白分子，而替考拉寧與達(dá)巴霉素不同，其呈現(xiàn)1∶1的結(jié)合。
假設(shè)人血清白蛋白(6×10-4M)及a-糖肽(1.5×10-5M)的生理濃度，表11表示抗生素濃度在1-500μM范圍內(nèi)所計(jì)算出的結(jié)合百分?jǐn)?shù)。為了使其與臨床情況有關(guān)，人的達(dá)巴霉素峰值濃度大約為300mg/L或165μM。
表11.替考拉寧及達(dá)巴霉素結(jié)合到血漿蛋白所計(jì)算出的百分?jǐn)?shù)

ND＝未進(jìn)行在所述實(shí)驗(yàn)中，達(dá)巴霉素結(jié)合到人血清白蛋白的量超過98％。結(jié)合分?jǐn)?shù)在選定的達(dá)巴霉素濃度范圍內(nèi)保持恒定，即1-500μM。此范圍涵蓋人的治療濃度。達(dá)巴霉素結(jié)合至α-糖蛋白的百分?jǐn)?shù)遠(yuǎn)高于替考拉寧。達(dá)巴霉素證實(shí)了大容量及與其不同來源血漿蛋白的低親和性，同時(shí)在來自被測(cè)試的所有種類的蛋白中有相似的Ka值。所述結(jié)果有助于解釋達(dá)巴霉素的某些獨(dú)特的藥代動(dòng)力學(xué)特征。2∶1達(dá)巴霉素∶蛋白復(fù)合物的結(jié)合與形成也解釋了延長(zhǎng)的半衰期及表觀分布體積，其接近細(xì)胞外液的水體積。低親和性有助于解釋活體內(nèi)所觀察到的活性，其大大超過具有游離分?jǐn)?shù)接近1％的化合物所預(yù)期的活性。對(duì)血漿蛋白的大容量有助于解釋雖然在生理pH值下化合物溶解性較差但卻達(dá)到相對(duì)高的血漿濃度。
實(shí)例4.大鼠中達(dá)巴霉素的藥代動(dòng)力學(xué)特征及組織分布在投與單個(gè)IV注入20mg/kg[3H]-達(dá)巴霉素的大鼠中執(zhí)行兩項(xiàng)研究。在投藥后的70日內(nèi)收集排泄物及大于40個(gè)的不同組織，且測(cè)定源自藥物放射性的組織分布及藥代動(dòng)力學(xué)。
將HPLC-純化的[3H]-達(dá)巴霉素用于所述研究中。經(jīng)由氚交換產(chǎn)生放射性同位素標(biāo)記的藥物且通過HPLC將其純化。
大鼠質(zhì)量平衡研究在向雄性大鼠單個(gè)經(jīng)靜脈內(nèi)(IV)注入達(dá)巴霉素之后進(jìn)行質(zhì)量平衡研究以確定達(dá)巴霉素的排泄類型。
15只雄性Sprague-Dawley大鼠接受單個(gè)IV劑量的3H-達(dá)巴霉素(20mg/kg，100μCi/大鼠)。在投藥之后，于投藥后間隔的14、36及70日(3只大鼠/最終收集時(shí)間)收集24小時(shí)的尿及糞便。也收集水及甲醇籠清洗物。在收集期結(jié)束分析畜體。通過液體閃爍計(jì)數(shù)(LSC)分析所有樣本的總放射性含量。
在向大鼠經(jīng)靜脈內(nèi)投與3H-達(dá)巴霉素之后，源自藥物的放射性在尿(-2/3排泄的放射性)及糞便(-1/3排泄的放射性)中消除。第一周之內(nèi)在尿及糞便中消除所投與的大約一半的放射性，其與大約一周的血漿t1/2一致。在投藥后的第70日，僅4.5％的劑量保留于畜體中。在籠沖洗物中回收可忽略的放射性。實(shí)際上對(duì)研究期間所有投與的放射性都有說明(尿、糞便、畜體、籠沖洗物及氚交換)。
大鼠定量組織分布(QTD)研究在達(dá)巴霉素單個(gè)IV注入雄性大鼠之后進(jìn)行定量組織分布研究以評(píng)估達(dá)巴霉素的組織分布。
41只雄性Sprague-Dawley大鼠接受3H-達(dá)巴霉素的單個(gè)IV注入(20mg/kg，50μCi/rat)。在投藥后第12、24、48、72、96、120、144、168、336、840、1176及1680小時(shí)對(duì)大鼠(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)3只)施行安樂死以收集血液、血漿及組織(包括畜體)。通過LSC分析所有樣本。
確定包括腎、肝、脾、血液、血漿、肺及皮膚的多于40個(gè)組織的濃度-時(shí)間曲線。包括皮膚的組織中源自藥物放射性的濃度及t1/2值與在血漿中所觀察到的相當(dāng)。發(fā)現(xiàn)在注入后12小時(shí)內(nèi)達(dá)巴霉素快速及廣泛地分布于所有組織中且同時(shí)組織中具有源自藥物放射性的可計(jì)量的濃度。在投藥后24h內(nèi)大多數(shù)組織達(dá)到最大濃度(Cmax)。5日后在任何單個(gè)組織中回收的放射性＜劑量的5％。在投藥后的第70日，僅畜體保持＞投與的放射性的1％(2.34％)。因此，達(dá)巴霉素不在任何單個(gè)組織、器官和血液細(xì)胞組份中積聚。在此健康動(dòng)物模型中CNS中的放射性濃度較低但可檢測(cè)。發(fā)現(xiàn)達(dá)巴霉素透過皮膚且伴隨等于或高于血漿中濃度的源自藥物的放射性濃度。隨著時(shí)間源自藥物放射性的血液與血漿比率維持相對(duì)恒定且＜1。
作為QTD研究的一部分，在投藥后的384h(16日)中收集來自插入大鼠(4只動(dòng)物)的膽管的膽汁樣本。投藥后經(jīng)過384h幾乎11％的劑量在膽汁中回收。此結(jié)果說明大多數(shù)源自藥物的放射性發(fā)現(xiàn)于糞便中。
實(shí)例5.通過HPLC-MS/MS來定量確定血漿中的達(dá)巴霉素如下所述，開發(fā)HPLC-MS/MS方法來定量測(cè)量血漿中的達(dá)巴霉素。
達(dá)巴霉素校準(zhǔn)及質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的制備在通過將達(dá)巴霉素溶解于去離子水中以制備1000ug/ml溶液來制備達(dá)巴霉素儲(chǔ)備溶液之后，在去離子水中進(jìn)行連續(xù)稀釋以制備500、50及10μg/ml溶液。
通過以如上所述制備的1000μg/ml達(dá)巴霉素儲(chǔ)備溶液使人血漿形成峰值來制備100、60及40μg/ml達(dá)巴霉素濃度的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)。通過以適當(dāng)體積500μg/ml達(dá)巴霉素的儲(chǔ)備溶液使人血漿形成峰值來制備20及10μg/ml濃度的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)，及通過以適當(dāng)體積10μg/ml儲(chǔ)備溶液使人血漿形成峰值來制備0.5μg/ml的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)。
通過以適當(dāng)體積如上所述制備的1000μg/ml達(dá)巴霉素的儲(chǔ)備溶液使人血漿形成峰值制備90及30μg/ml達(dá)巴霉素的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。通過以適當(dāng)體積50μg/ml溶液使人血漿形成峰值來制備1.5μg/ml的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備30μg/ml內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)的工作溶液BI-K0098為A-40926的二乙基-氨基-丙基-氨基衍生物，其是由如下操作來制備。將大約10mg BI-K0098溶解于大約10ml流動(dòng)相A(80％的10mM甲酸銨/甲酸，pH3(v/v)，10％乙腈(v/v)及10％2-丙醇(v/v))中以得到1000μg/ml內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。接著以流動(dòng)相A將儲(chǔ)備溶液(300μl)稀釋到體積10ml以得到30μg/ml內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液。
分析樣本的制備如下所述制備用于定量測(cè)定血漿中達(dá)巴霉素濃度的樣本。將100μl的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)工作標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到50μl如上所制備的校準(zhǔn)或質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)液中并混和。允許混合物在室溫下平衡5分鐘，隨后添加250μl乙腈。接著將混合物渦流10秒，隨后在ALC micro-centrifugette 4214上以約10,000rpm的轉(zhuǎn)速離心1分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到清潔的試管中且在Savant Speed-Vac系統(tǒng)中于約40℃下蒸發(fā)至干燥。接著將樣本懸浮于150μl的流動(dòng)相A中。
分析方法將如上所述出于分析而制備的50μl樣本注入Phenomenex Jupiter C18柱(50×2mm，C18 5μm 300A)中，且以流動(dòng)速率0.3ml/min在梯度HPLC條件下進(jìn)行分析。梯度條件為最初，80％流動(dòng)相A/20％流動(dòng)相B(20％10mM甲酸銨/甲酸，pH3(v/v)，40％乙腈(v/v)，40％2-丙醇(v/v))；1分鐘，20％流動(dòng)相A/80％流動(dòng)相B；2分鐘，20％流動(dòng)相A/80％流動(dòng)相B；2.5分鐘，回到最初條件。
將HPLC系統(tǒng)耦合到PE SCIEX API-2000三倍四極質(zhì)譜儀中，以陽(yáng)性離子化模式操作渦輪離子噴霧。使用空氣以產(chǎn)生離子源的噴霧。將探針溫度設(shè)于500℃且以氮作為氣簾氣體。使用氮作為碰撞氣體來利用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。通過以下離子遷移來檢測(cè)分析物達(dá)巴霉素為909.3Da→1429.3Da，且內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)為923.3Da→1457.3Da(BI-K0098)。為了避免質(zhì)譜儀收到污染，在層析操作開始的第1分鐘及2.5分鐘執(zhí)行柱后分流。
將軟件樣本控制(Software Sample Control)1.4用于數(shù)據(jù)分析的獲取且將軟件MacQuan 1.6用于層析峰值的綜合及統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)評(píng)價(jià)。
校準(zhǔn)曲線通過檢定校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)來評(píng)估線性及檢定方法以產(chǎn)生校準(zhǔn)曲線。通過計(jì)算達(dá)巴霉素與內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)之間的峰面積比率確定血漿樣本中達(dá)巴霉素的濃度。
使用等式y(tǒng)＝A+Bx(1/x加權(quán))構(gòu)建在0.5-100μg達(dá)巴霉素/ml人血漿的分析范圍內(nèi)達(dá)巴霉素濃度的校準(zhǔn)曲線，其中A表示曲線截距，B表示曲線斜率，x表示校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)的達(dá)巴霉素濃度(μg/ml)，且y表示達(dá)巴霉素與內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)的峰面積比。構(gòu)建三個(gè)分離的校準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示達(dá)巴霉素/內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)面積比及達(dá)巴霉素濃度在分析范圍內(nèi)呈線性變化。定量的下限(LLOQ)為0.5μg達(dá)巴霉素/ml人血漿。校準(zhǔn)曲線的斜率為可復(fù)現(xiàn)的且其相關(guān)系數(shù)大于0.9995。
血漿中達(dá)巴霉素的穩(wěn)定性通過分析如上所制備的人血漿樣本的三個(gè)復(fù)制質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)來測(cè)定血漿樣本中達(dá)巴霉素的穩(wěn)定性，所述人血漿樣本為兩種不同濃度，分別為1.5及90ug/ml。在三個(gè)周期的凍融治療之后可檢測(cè)的達(dá)巴霉素濃度為穩(wěn)定的。室溫下24小時(shí)后在處理樣本中的達(dá)巴霉素濃度為穩(wěn)定的。未觀察到關(guān)于時(shí)間零點(diǎn)樣本的達(dá)巴霉素濃度的降低。
實(shí)例6.達(dá)巴霉素質(zhì)譜分析調(diào)查溶液中達(dá)巴霉素多聚體的性質(zhì)且通過電噴霧離子質(zhì)譜法(ESI-MS)確定對(duì)達(dá)巴霉素多聚體至達(dá)巴霉素單體的群體比率有影響的條件。
使用配備有TurboIonSpray來源、Triple Quadrupole分析器且在陽(yáng)離子模式中操作的Applied Biosystem API III+質(zhì)譜儀執(zhí)行實(shí)驗(yàn)。優(yōu)選條件列于如下表12中。
表12用于應(yīng)用生物系統(tǒng)API 111+質(zhì)譜儀上達(dá)巴霉素分析的儀器條件。

溶液中的達(dá)巴霉素在含有0.1mg/ml溶于8∶2水∶異丙醇溶液的達(dá)巴霉素的達(dá)巴霉素溶液下調(diào)整儀器參數(shù)。在溶液直接注射之后獲得的溶液中光譜范圍為500-2000amu的達(dá)巴霉素。如圖3中所示所得光譜表明達(dá)巴霉素多聚體的存在。作為非限制性實(shí)例，光譜的一個(gè)跡線可歸因于Bo的同源多聚體，將其表示為(2nM+y(+3))離子種類，其中n為正整數(shù)，表示同源多聚體的多樣性，舉例而言，當(dāng)多聚體為同源二聚體時(shí)，n＝1；且當(dāng)多聚體為同源四聚體時(shí)，n＝2，M表示單體的質(zhì)量，y＝n且+3表示加上的三個(gè)離子電荷。例如，當(dāng)n＝1，y＝1且M＝Bo的質(zhì)量時(shí)，提供Bo的同源二聚體。將此二聚體種類歸屬于質(zhì)譜中(2M+3)離子跡線。
達(dá)巴霉素濃度對(duì)達(dá)巴霉素多聚體到單體的群體比率的影響使用上述條件通過質(zhì)譜學(xué)評(píng)價(jià)達(dá)巴霉素濃度對(duì)多聚體到單體的群體比率的影響。通過直接注入濃度為20、40、60及80μg/mL的達(dá)巴霉素溶液來獲得光譜。據(jù)報(bào)導(dǎo)將主峰強(qiáng)度作為達(dá)巴霉素濃度的函數(shù)且如圖4所示測(cè)定達(dá)巴霉素多聚體到單體的群體比率。
數(shù)據(jù)表明達(dá)巴霉素多聚體至達(dá)巴霉素單體的群體比率隨著濃度增加而增加。此可有助于解釋可投與個(gè)體的藥物的大容量容量。多聚體作為單體庫(kù)房的作用可減少高濃度樣本形成沉淀物的趨勢(shì)且提高可投與個(gè)體的濃度。多聚體的存在也可允許達(dá)巴霉素的劑量快速地投與個(gè)體。
例如，如圖3所示，通過測(cè)定離子A與B峰強(qiáng)度之間的比率提供測(cè)定達(dá)巴霉素多聚體到單體的群體比率的方法中的非限制性實(shí)例。以峰A強(qiáng)度除以峰B強(qiáng)度提供達(dá)巴霉素多聚體到單體的群體比率的測(cè)量值。
pH對(duì)達(dá)巴霉素多聚體到單體的群體比率的影響在上述儀器條件及在以下溶液pH值2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0及5.5下評(píng)價(jià)溶液pH值對(duì)達(dá)巴霉素多聚體到單體的群體比率的影響。如圖5所示在每個(gè)pH值下測(cè)定達(dá)巴霉素多聚體到單體的群體比率且將pH值繪成線。確信達(dá)巴霉素多聚體到單體的群體比率隨著pH值的增加而增加。
不受理論限制，據(jù)信離子基團(tuán)(例如，在第一達(dá)巴霉素單體上的羧基)通過在第二達(dá)巴霉素單體上以相反電荷的離子(例如，第三氮族)形成離子相互作用而有助于達(dá)巴霉素多聚體的穩(wěn)定。所述離子相互作用可受到pH值的影響。據(jù)信在較高pH值下達(dá)巴霉素作為多聚體存在的增加的趨勢(shì)表明離子間相互作用在多聚體穩(wěn)定性中很重要。特定地，據(jù)信達(dá)巴霉素多聚體在較低pH值下不穩(wěn)定，估計(jì)可能是由于離子相互作用的干擾形成了多聚體的穩(wěn)定性，由于特定的官能基(例如，羧基)可在較低pH值下質(zhì)子化。
溶液離子強(qiáng)度對(duì)達(dá)巴霉素多聚體到單體的群體比率的影響通過質(zhì)譜學(xué)確定溶液離子強(qiáng)度對(duì)達(dá)巴霉素多聚體到單體的群體比率的影響。使用Ultramark 1621、咖啡堿及MRFA(L-蛋氨?；?精氨?；?苯基丙氨酰-精氨酸)在先前以電噴霧模式調(diào)整及校準(zhǔn)的Finnigan LCQDeca離子阱儀器上獲得電噴霧陽(yáng)極模式的質(zhì)譜。使用表13所列條件記錄所有質(zhì)譜。所要調(diào)查的樣本參數(shù)列于表14中。
表13.MS條件

表14.樣本參數(shù)


經(jīng)由Harward注射泵以10μL/min的速度注入樣本水溶液且獲得如圖6-8所示的質(zhì)譜。
所獲得的光譜表明達(dá)巴霉素多聚體到單體的群體比率受到離子強(qiáng)度的影響。發(fā)現(xiàn)緩沖劑濃度的增加對(duì)應(yīng)于多聚體質(zhì)量跡線的降低及由此達(dá)巴霉素多聚體到單體群體比率的降低。
如文中所述，據(jù)信離子相互作用在達(dá)巴霉素多聚體穩(wěn)定性中十分重要。增加的離子強(qiáng)度與多聚體質(zhì)量跡線強(qiáng)度降低有關(guān)這一實(shí)事證實(shí)了離子相互作用在多聚體穩(wěn)定性中的作用。然而，由于在較高離子強(qiáng)度下仍存在多聚體質(zhì)量跡線，多聚體穩(wěn)定可涉及另一個(gè)第二相互作用。
在不受任何理論限制的情況下，據(jù)信疏水相互作用在穩(wěn)定達(dá)巴霉素多聚體種類中十分重要。若所述非共價(jià)達(dá)巴霉素多聚體的穩(wěn)定性僅是由于離子相互作用，則希望離子強(qiáng)度的增加將導(dǎo)致多聚體質(zhì)量種類的全部損失。換言之，希望隨著溶液離子強(qiáng)度的增加，穩(wěn)定多聚體的離子相互作用將由于溶液中增加的離子總數(shù)受到破壞，其單體將更易于締合。因此，溶液離子強(qiáng)度將使多聚體分解為單體組份且所得質(zhì)譜將與任何的多聚體質(zhì)量跡線無關(guān)。然而，甚至在高溶液離子強(qiáng)度(例如，100mM甲酸銨)下，也可在質(zhì)譜中偵測(cè)到達(dá)巴霉素多聚體的存在。因此，認(rèn)為達(dá)巴霉素多聚體是由于疏水性相互作用而穩(wěn)定，至少一部分穩(wěn)定。
結(jié)構(gòu)上類似的化合物據(jù)信達(dá)巴霉素改良的功效至少部分是由于其形成多聚體的能力。認(rèn)為結(jié)構(gòu)非常類似的化合物并不具有所述的獨(dú)特特征，通過質(zhì)譜分析調(diào)查具有化學(xué)結(jié)果類似于達(dá)巴霉素的化合物其形成多聚體的能力。使用Ultramark 1621、咖啡堿及MRFA(L-蛋氨?；?精氨?；?苯基丙氨酰-精氨酸)在先前以電噴霧模式調(diào)整及校準(zhǔn)的Finnigan LCQDeca離子阱儀器上獲得電噴霧陽(yáng)極模式的質(zhì)譜。使用表15所列條件記錄所有質(zhì)譜。所調(diào)查的樣本參數(shù)列于表16中。經(jīng)由Harward注射泵以10μL/min的速度注入樣本水溶液且獲得如圖9及10所示的質(zhì)譜。
表15質(zhì)譜條件

表16.樣本參數(shù)


n.a.＝未調(diào)節(jié)類似的糖肽抗生素(替考拉寧)在各種濃度溶液中不顯示多聚體復(fù)合物。此結(jié)果支持結(jié)構(gòu)類似化合物不能在溶液中形成多聚體物質(zhì)的說法，且此現(xiàn)象可在達(dá)巴霉素活性中發(fā)揮重要作用。
實(shí)例7.蛋白-達(dá)巴霉素復(fù)合物的基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間(MALDI-TOF)質(zhì)譜學(xué)將10μl HSA，0.150mM與10μl達(dá)巴霉素溶液(從0.075mM、0.15mM、0.3mM到1.5mM)混合且于37℃下培育60分鐘。使用干燥小滴技術(shù)制備分析用的樣本。使用標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白、獲取及200個(gè)激光發(fā)射產(chǎn)生的平均光譜在先前調(diào)整及校準(zhǔn)的BRUKER FLEX III、飛行時(shí)間質(zhì)譜儀上獲得光譜?；|(zhì)9份DHB-9(2，5-二羥基-苯甲酸)飽和于乙腈/H2O(50∶50)中，1份芥子酸飽和于乙腈/H2O(50∶50)中。將0.5μl樣本溶液與0.5μl基質(zhì)溶液混合且置于激光靶上。
達(dá)巴霉素結(jié)合到作為單體的蛋白(1 HSA+1達(dá)巴霉素)。，可觀察到以極高的達(dá)巴霉素蛋白結(jié)合率(1∶2，1∶10)的含有2分子達(dá)巴霉素/分子蛋白的復(fù)合物的存在。
實(shí)例8.在人血清白蛋白存在下達(dá)巴霉素結(jié)合到N，N′-二乙?；?Lys-D-Ala-D-Ala的等溫滴定熱量測(cè)定法25℃下在一定濃度范圍的HSA(高達(dá)600μM)存在下通過等溫滴定熱量測(cè)定法(ITC)調(diào)查達(dá)巴霉素到N，N′-二乙?；?Lys-D-Ala-D-Ala的結(jié)合，所述物質(zhì)為達(dá)巴霉素細(xì)胞壁靶上的肽類似物，在37℃下進(jìn)行某些另外的測(cè)量。HSA增加達(dá)巴霉素的溶解性且降低其與三肽配位體的結(jié)合親和性。將結(jié)果與萬古霉素的結(jié)果進(jìn)行比較。所觀察的效應(yīng)在相對(duì)低的HSA濃度下保持平穩(wěn)，其與非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合模型一致，此模型允許配位體結(jié)合到達(dá)巴霉素(兩者在溶液中呈游離態(tài))及(更弱)結(jié)合到達(dá)巴霉素-HSA復(fù)合物。
初步實(shí)驗(yàn)證實(shí)在血清蛋白存在時(shí)，達(dá)巴霉素與萬古霉素顯示類似的結(jié)合曲線兩者均在結(jié)合到N，N’-二乙?；?Lys-D-Ala-D-Ala上后放熱，但沒有證據(jù)表明結(jié)合到二肽(D-Ala-D-Ala)或Lys-D-Ala-D-乳酸鹽。就達(dá)巴霉素/三肽相互作用而言，數(shù)據(jù)與以Kdiss＝1-10μM進(jìn)行的結(jié)合一致，類似于在相同條件下的萬古霉素，所述結(jié)合將取決于溫度。在HSA存在下，達(dá)巴霉素的溶解性顯著增加且與三肽的結(jié)合親和性以與抗生素與HSA競(jìng)爭(zhēng)性或非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合一致的方式降低。設(shè)計(jì)此實(shí)例中所述實(shí)驗(yàn)是為了(a)比較不同溫度下(25及37℃)及不同HSA濃度時(shí)達(dá)巴霉素/三肽的測(cè)量值；(b)使用所述數(shù)據(jù)來構(gòu)建結(jié)合模型以與觀察到的數(shù)字相比較。
由Biosearch Italia供應(yīng)達(dá)巴霉素。其它試劑來自Sigma鹽酸萬古霉素(Sigma V-2002，fw 1485.7)、N，N′-二乙?；?Lys-D-Ala-D-Ala(SigmaD-9904，fw 372.4)、人白蛋白(HSA；Sigma A-3782；mw 69，366)。
在即將進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前將抗生素及肽溶于含有HSA的含水緩沖劑(20mM磷酸鈉，150mM NaCl，pH7.4)中伴隨輕微攪拌。通過重量來測(cè)定肽濃度。使用摩爾消光系數(shù)ε＝12430(達(dá)巴霉素，A2801％＝68.42)，ε280＝6690(萬古霉素)通過重量或通過UV吸收率來測(cè)定達(dá)巴霉素濃度。通過UV吸收率(HSA，ε280＝37，700；A2801％＝5.44)測(cè)定HSA濃度。室溫下使用ShimadzuUV-160A或UV-1601分光光度計(jì)在1cm通路長(zhǎng)度石英比色杯中記錄光譜，若需要給出0.1-1范圍的吸收率，則以緩沖劑定量稀釋樣本。
使用Microcal VP-ITC儀器于25℃及37℃下使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行等溫滴定熱量測(cè)定法。參閱，例如，Wiseman等人.，anal.Biochem.(1989)179，131-137；Cooper，等人，Philos.Trans.R.Soc.Lond.Ser.A-MathPhys.Eng Sci.(1993)345，23-35；Cooper，A，Isothermal TitrationMicrocalorimetry in C.Jones，B.Mulloy and A.H.Thomas(Eds.)，Microscopy，Optical Spectroscopy，and Macroscopic Techniques.Humana Press，Totowa，NJ，(1994)第137-150頁(yè)；Cooper，A.，Microcalorimetryof Protein-protein Interactions in J.E.Ladbury and B.Z.Chowdhry(Eds.)；BiocalorimetryThe Applications of Calorimetry in theBiological Sciences.Wiley，(1998)第103-111頁(yè)；及Cooper，A.，Curr.Opin.Chem.Biol.(1999)3，557-563。在裝載前將樣本小心脫氣以避免在熱量計(jì)單元中形成氣泡。每個(gè)實(shí)驗(yàn)通常包含將25×10μl肽溶液(≈1mM)注射到熱量計(jì)單元中(體積≈1.4ml)含有抗生素溶液(≈20-100μM)。對(duì)照實(shí)驗(yàn)涉及在相同條件下將配位體注入緩沖劑中以測(cè)定肽稀釋的熱量，且將所述值用于分析前原始結(jié)合數(shù)據(jù)的較正。在各溫度下重復(fù)達(dá)巴霉素/三肽結(jié)合實(shí)驗(yàn)若干次。使用標(biāo)準(zhǔn)Microcal ORIGINTM軟件分析ITC結(jié)合數(shù)據(jù)以測(cè)定結(jié)合位點(diǎn)(N)的表觀數(shù)目、結(jié)合親和性(Kass＝1/Kdiss)及結(jié)合焓(ΔH)。
表17通過ITC假定簡(jiǎn)單的非共同結(jié)合模型來測(cè)定三肽結(jié)合到達(dá)巴霉素及萬古霉素的熱力學(xué)數(shù)據(jù)溫度及HSA效應(yīng)。
T NKass KdissΔH ΔS℃ M-1 μM kcal/mol eu μM達(dá) 10 0.59 6.70E+0 1.49 -10.26 -9.6010 0.59 9.20E+0 1.09 -8.95-4.30510 0.59 6.85E+0 1.46 -10.30 -9.60510 0.56 6.24E+0 1.60 -10.30 -9.90525 0.6 3.13E+0 3.19 -10.10 -8.90525 X3.30E+0 3.03 -11.30 -12.605
25 X 3.20E+0 3.13 -11.70 -14.00525 X 2.80E+0 3.57 -14.30 -23.00525 0.573.03E+0 3.30 -12.60 -17.00525 0.743.19E+0 3.13 -11.20 -12.50525 0.543.93E+0 2.54 -12.90 -17.605與25 0.371.18E+0 8.47 -26.40 -65.50HSA 5與25 0.351.18E+0 8.47 -27.80 -70.10HSA 5與25 0.683.50E+0 28.57-20.00 -46.20HSA 4與250.83 2.76E+0 36.23 -16.90 -36.50 80.7HSA4與251.38 3.49E+0 28.65 -18.60 -41.70 104HSA4與250.9 3.10E+0 32.26 -21.05 -50.00 288HSA 4與251.2422.84E+0 35.21 -19.50 -44.90 430HSA4與250.86 2.18E+0 45.87 -15.00 -30.40 601HSA 4370.82 1.30E+0 7.69 -12.50 -16.80 05370.6 1.10E+0 9.09 -17.40 -33.20 05與370.1791.25E+0 80.00 -98.60 -299.00482HSA4與370.5 9568104.52-26.60 -67.60 516
萬′ 1.1 6.90E+0 1.45 -9.49-6.800古霉素10 525 0.91 3.40E+0 2.94 -10.70 -10.60 0525 0.97 3.60E+0 2.78 -12.90 -17.80 05與 25 1.05 2.90E+0 3.45 -10.09 -8.80513HSA5在不存在HSA的情況下三肽與達(dá)巴霉素的結(jié)合ITC實(shí)驗(yàn)給出就結(jié)合親和力而言相一致的數(shù)據(jù)，其中在37℃下平均Kdiss分別處于1.4、3.1及8.4μM的區(qū)間內(nèi)(表17)。結(jié)合是放熱的。此處的濃度計(jì)算表明N在所述條件下更接近0.5。此與所述條件下每個(gè)達(dá)巴霉素二聚體對(duì)應(yīng)一個(gè)三肽分子的結(jié)合相一致。所述結(jié)合親和力及結(jié)合焓與在相同條件下對(duì)萬古霉素所觀察到的相當(dāng)(表17與D.McPhail，A.Cooper，J.Chem.Soc-Faraday Trans.(1997)93，2283-2289)。也提到萬古霉素在較高濃度下經(jīng)歷配位體誘導(dǎo)的二聚作用。
盡管結(jié)合顯然地放熱更多，但向達(dá)巴霉素混合物中添加HSA可降低三肽與達(dá)巴霉素的表觀結(jié)合親和力(表17)。在25℃下HSA濃度對(duì)此的依賴性示于圖11中。表觀Kdiss最初升到(漸弱)35μM HSA之后，接近生理水平(600μM)的較高HSA濃度仍保持相對(duì)穩(wěn)定。在高HSA濃度(Kdiss≈35μM)下的平穩(wěn)水平對(duì)應(yīng)于比不存在HSA時(shí)要弱約10-12倍的結(jié)合親和力。在37℃下觀察類似降低。
HSA效應(yīng)并不歸因于與三肽的相互作用。在HSA存在下萬古霉素與三肽的結(jié)合對(duì)照ITC實(shí)驗(yàn)給出與不存在HSA時(shí)所觀察的結(jié)果相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果(參見表17)。此表明肽或緊密相關(guān)的抗生素萬古霉素均不與溶液中的HSA相互作用。其遵循HSA對(duì)達(dá)巴霉素/三肽相互作用的任何效應(yīng)均必須歸因于HSA與達(dá)巴霉素的相互作用。
盡管不希望受縛于理論，但以上數(shù)據(jù)與非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合模式相一致。此模式假設(shè)三肽配位體(L)可與游離狀態(tài)的達(dá)巴霉素(D)及達(dá)巴霉素-HSA復(fù)合物中的達(dá)巴霉素(D)相結(jié)合。
D+LD+L；KL＝[D][L]/[DL]D+HSAD.HSA；KHsa＝[D][HSA]/[D.HSA]D.HSA+LLD.HSA；KLDHsa＝[D.HSA][L]/[LD.HSA]表觀(所觀察到的)配位體結(jié)合離解常數(shù)(非競(jìng)爭(zhēng)性)Kapp，L＝[總D][L]/[總DL復(fù)合物]＝([D]+[D.HSA])[L]/([DL]+[LD.HSA])＝KL{1+[HSA]/KHSA}/{1+[HSA].KL/KHSA.KLDHSA}此顯示Kapp，L對(duì)游離HSA濃度的雙曲線依賴性，其與所觀察的數(shù)據(jù)很好地一致(圖11)。在高[HSA]下此達(dá)到漸近(平穩(wěn))值。
Kapp，L＝KLDHSA(大[HSA])此表明相比于游離達(dá)巴霉素的3μM(25℃圖)，當(dāng)達(dá)巴霉素結(jié)合于HSA上時(shí)其對(duì)三肽的結(jié)合親和力是約35μM。
可依據(jù)達(dá)巴霉素在與肽或蛋白的相互作用中是否充當(dāng)單體或二聚體來表明其它機(jī)制。直接比較達(dá)巴霉素與萬古霉素(其顯示在所述低濃度下明確的1∶1結(jié)合)顯示在較低摩爾比(較低N)下達(dá)巴霉素的結(jié)合完成(圖12)。此與2∶1達(dá)巴霉素肽復(fù)合物相一致。
然而，在HSA存在下表觀N值增加(表17)并且可與1∶1復(fù)合作用更加一致。盡管不希望受縛于理論，圖13中所示的模式與所述觀察相一致，所述模式顯示達(dá)巴霉素單體及二聚體與三肽配位體及HSA的可能相互作用。圖13A描繪呈溶液中單體-二聚體均衡態(tài)(主要作為二聚體)的達(dá)巴霉素，但作為單體結(jié)合于HSA的兩個(gè)獨(dú)立位點(diǎn)上。此與由ITC對(duì)血清蛋白結(jié)合于達(dá)巴霉素上所觀察到的N＝0.5值相一致(實(shí)例3)。圖13B描繪配位體于溶液中結(jié)合于達(dá)巴霉素二聚體上，并且(更弱地)結(jié)合于與HSA相連接的達(dá)巴霉素單體上。此與達(dá)巴霉素以變化的表觀化學(xué)計(jì)量與三肽及HSA的非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合相一致。
總而言之，此實(shí)例顯示HSA以與非競(jìng)爭(zhēng)性機(jī)制相一致的方式降低達(dá)巴霉素對(duì)三肽配位體的結(jié)合親和力，并且與HSA結(jié)合的達(dá)巴霉素保留其結(jié)合三肽配位體的能力，雖然親和力降低。所述結(jié)果也與其中達(dá)巴霉素呈溶液中單體-多聚體均衡態(tài)(主要是多聚體)的模式相一致，其中多聚體對(duì)肽配位體具有很強(qiáng)的親和力。游離的及與血清白蛋白結(jié)合的達(dá)巴霉素單體也可以降低親和力與肽結(jié)合。
實(shí)例9.A-40926與達(dá)巴霉素制備制備A-40926通過發(fā)酵所產(chǎn)生的天然糖肽A-40926是產(chǎn)生達(dá)巴霉素的起始材料。其是作為A-40926與其乙酰基衍生物的混合物由Nonomuria sp ATCC 39727產(chǎn)生(參見美國(guó)專利第4,935,238與B.Golstain等人.Antimicrobial Agentand Chemotherapy，Dec.1987，第1961-1966頁(yè))。首先將乙?；苌锩撘阴；葾-40926。脫乙?；饔弥笸ㄟ^如下所述的聚酰胺管柱層析將A-40926純化。下列描述代表當(dāng)前產(chǎn)生方法。此處所報(bào)導(dǎo)的量是工業(yè)制備中通常所運(yùn)作的量的約1/4。
脫乙酰化A-40926在攪拌同時(shí)以NaOH 30％調(diào)節(jié)10m3含有總共約1g/L A-40926及其乙酰基衍生物的發(fā)酵肉湯(23℃)處于pH11.4。持續(xù)攪拌6小時(shí)，接著將溫度降至15℃并微過濾肉湯(具有0.12m2陶瓷膜0.1μ的Koch Protosep IV微過濾器)。在微過濾期間將水連續(xù)添加至滯留物中以在過程結(jié)束時(shí)獲得20-25m3的滲出液與4.5-5m3的滯留物(起始值的一半)。
通過HPLC分析含有A-40926的滲出液。當(dāng)脫乙?；饔猛瓿蓵r(shí)，以30％硫酸調(diào)節(jié)滲出液溶液的pH處于pH7(儲(chǔ)存于20℃下)。在此實(shí)例中，獲得25m3含有6.62kg A-40926(268mg/L)的經(jīng)過濾肉湯。脫乙?；a(chǎn)率是66.2％。如果微過濾過程進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間并且此過程中所用的萃取體積更高，則產(chǎn)率可增加至90％。
在聚酰胺管柱上純化A-40926萃取后將經(jīng)過濾肉湯中所含的A-40926于如下所述的聚酰胺管柱上純化。此描述中所報(bào)導(dǎo)的量是工業(yè)制備中通常所運(yùn)作的量的約1/10并且代表當(dāng)前產(chǎn)生方法。
將500L聚酰胺樹脂SC6(得自Macherey Nagel)懸浮于軟化水中并裝載至管柱中。接著通過以至少2BV(柱床體積)的緩沖溶液洗提管柱來調(diào)節(jié)樹脂處于pH6-6.5，所述緩沖溶液是通過將4kg碳酸鈉溶解于800L水中并以乙酸調(diào)節(jié)所得溶液的pH來制備。
將A-40926經(jīng)過濾肉湯(9000L；檢定率0.275mg/L；A-40926 2475g；pH6±0.2；溫度10±3℃)以每升樹脂約5g活性的比率(通常使用5-8g/L的活性/樹脂比率)裝載至管柱中。以下列溶液洗滌管柱3BV(1500L)處于pH6的溶液，其是通過將7.5kg碳酸鈉溶解于1500L軟化水中并以乙酸調(diào)節(jié)pH來制備；4BV(2000L)處于pH8的溶液，其是通過將10kg碳酸鈉溶解于2000L軟化水中并以乙酸調(diào)節(jié)pH來制備；1.5BV(750L)處于pH9的溶液，其是通過將4kg碳酸鈉溶解于750L軟化水中并以乙酸調(diào)節(jié)pH來制備。
通過以4BV(2000L)處于pH10的緩沖溶液洗提自管柱回收A-40926，所述緩沖溶液是通過將10kg碳酸鈉溶解于2000L軟化水中并以乙酸調(diào)節(jié)pH來制備。收集含有經(jīng)純化A-40926的部分(A-40926濃度大于0.5g/L并且主要組份(B0+B1)的HPLC面積％大于80％)，以1N HCl中和并通過HPLC進(jìn)行分析。獲得約2000L的最終透明溶液。
以1.5BV的異丙醇/5％NaOH的1∶1混合物將用于純化的樹脂再生，隨后以5BV軟化水洗滌。
A-40926濃度使來自柱的溶液經(jīng)受若干輪稀釋/濃度步驟以消除溶液大多數(shù)的無機(jī)鹽。使用切割為250D的薄膜通過納米過濾將溶液濃縮至80L，以80L的軟化水來稀釋，且于起始柱(80L)處通過納米過濾重新濃縮。將此項(xiàng)操作重復(fù)至少5次。以23％HCl調(diào)節(jié)最終溶液的pH值(80L，pH7.5)至6.3。接著以80L的丙酮稀釋溶液，且以23％HCl再次調(diào)節(jié)其pH值至pH2.6。
脫色攪拌中將680g木炭PA 200C(-0.3g/g A-40926)添加至以上步驟所獲得的溶液(160L)中。室溫下繼續(xù)攪拌至少30分鐘，接著添加約0.5-0.6Kg助濾劑(DIF-BO)。經(jīng)過濾筒過濾混合物。將所獲得的澄清溶液于真空中(45℃)濃縮以使丙酮低于10％。最終體積為約100L。接著以含水NaOH調(diào)節(jié)pH值為6.7且使用常用的納米過濾繼續(xù)濃縮步驟直至A-40926濃度約為100g/L。獲得20L濃溶液(A-40926 1884g，94.2g/L)。
沉淀及干燥在攪拌的同時(shí)以20L丙酮稀釋先前溶液，并且以10％HCl調(diào)節(jié)其pH值維持5.1。向此溶液添加額外的5倍體積丙酮(100L)以完成A-40926沉淀作用。如果此時(shí)水含量＜15％，則添加額外的丙酮。2小時(shí)后將懸浮液離心并以3×10L新鮮丙酮洗滌固體。分析母液并在確定不存在產(chǎn)物后將母液排出。
在靜態(tài)干燥器中于30-35℃及減壓下干燥固體A-40926直至殘余丙酮低于2％并且水少于10％。接著經(jīng)50目篩網(wǎng)將產(chǎn)物篩濾，獲得2.08kg經(jīng)純化A-40926(HPLC檢定率81.4％；水6.2％；硫酸化灰份4.8％)。起始自裝載于管柱上的活性的產(chǎn)率是68.4％。
合成達(dá)巴霉素通過Malabarba與Donadio(1999)，Drugs of the Future，24(8)839-846中所述的三步驟合成自天然糖肽A-40926制備達(dá)巴霉素(BI-397)。特定言之，A-40926首先經(jīng)受酯化步驟以制造MA，其接著經(jīng)受酰胺化步驟以制造MA-A-1。最終的水解步驟接著將MA-A-1轉(zhuǎn)化成達(dá)巴霉素。
酯化步驟(步驟1)下列描述代表使用中的當(dāng)前方法。
制備H2SO4 96％/MeOH(溶液A)在配備有機(jī)械攪拌器與溫度計(jì)的15L圓底燒瓶中，將2.28L H2SO4 96％(每千克A-40926粉末對(duì)應(yīng)-300mL H2SO4 96％)逐滴添加至7.9L MeOH中。使用外置冰浴維持溫度介于0與5℃之間。
反應(yīng)程序在140L搪玻璃反應(yīng)器中將起始材料A-40926(7.6kg；批號(hào)019，檢定率85.09％；活性6.46kg；3.73mol)懸浮于MeOH(46L)中，并在0℃±2℃下冷卻所得懸浮液。在此溫度下以先前所制備的溶液A(H2SO4/MeOH)處理懸浮液。將所得溶液在0℃下攪拌22-26小時(shí)，同時(shí)每隔兩小時(shí)通過HPLC分析來監(jiān)測(cè)反應(yīng)(以1∶1乙腈/水混合物將反應(yīng)等分試樣稀釋100倍)。當(dāng)以HPLC面積％計(jì)算、殘余A-40926少于5％并且二酯不超過10％時(shí)認(rèn)為酯化作用完成。
酯(MA)分離當(dāng)反應(yīng)完成時(shí)，在-5℃(+/-2℃)下冷卻混合物并在保持溫度低于5℃的情況下以相同體積的冷水(54L)稀釋。通過緩慢添加10.2L三乙胺(TEA)調(diào)節(jié)溶液pH在5.5(+/-0.2)，藉此沉淀產(chǎn)物(MA)。在0-2℃下持續(xù)攪拌額外1小時(shí)，接著離心所獲得的固體，以水(每千克A-40926對(duì)應(yīng)10L)洗滌并最終以先前在10-15℃下冷卻的MeOH(每千克起始A-40926對(duì)應(yīng)3LMeOH)洗滌。在自MA中移除硫酸鹽之前以水洗滌。
各自分析母液與洗液并且如果含有少于1-2％的活性則將其排出。在真空(50mmHg)中于35-40℃(外部溫度)下干燥產(chǎn)物直至殘余水少于10％。獲得7.6kg呈淺褐色粉末的MA(5.63kg活性，3.23mol)。
分析顯示下列HPLC面積％的值MA 89.8、A-40926 3.2、二酯衍生物5.9。HPLC檢定率是74.2％，活性5.637Kg；3.23mol；產(chǎn)率＝86.5％。此材料不經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟中。
酰胺化步驟(步驟2)下列描述代表當(dāng)前產(chǎn)生方法。
制備DMSO/HCl混合物(溶液B)將DMSO(1.6L)置于配備有機(jī)械攪拌器與溫度計(jì)的10L圓底燒瓶中，并以低于10℃的冰浴冷卻。接著在保持混合物溫度低于25℃的情況下于攪拌同時(shí)緩慢添加HCl 37％(1L)。
酰胺化程序(產(chǎn)生MA-A-1)在室溫下于攪拌同時(shí)將起始材料MA 5.95kg(檢定率76.3％，KF 8.9％；2.68mol)緩慢溶解于19.2L的1∶1 DMSO/MeOH混合物(每千克MA粉末對(duì)應(yīng)-1.6L DMSO與1.6L MeOH)中。攪拌1小時(shí)后將709mL的3-(二甲基胺基)-丙胺(DMEPA，MW 102.1；密度＝0.812g/mL；5.63mol；每摩爾起始MA對(duì)應(yīng)1.96mol)與325g的1-羥基苯并三唑水合物(HOBTH2O；MW 153.1；2.04mol；每摩爾起始MA對(duì)應(yīng)0.71mol)添加至反應(yīng)混合物中。持續(xù)攪拌直至獲得完全溶液，接著通過緩慢添加約2.0L溶液B(DMSO/HCl)調(diào)節(jié)混合物處于pH3-3.1(以水將反應(yīng)等分試樣稀釋10倍后進(jìn)行測(cè)量)。
在10分鐘內(nèi)將二環(huán)己基碳二酰胺(DCC)溶液(通過將1.03kg DCC(4.99mol；MW 206.3；每摩爾MA對(duì)應(yīng)1.74mol)溶解于4.1L的1∶1 DMSO/MeOH混合物中來制備)添加至經(jīng)攪拌反應(yīng)混合物中。持續(xù)攪拌5小時(shí)，接著將額外的51.5g固體DCC(0.25mol)添加至反應(yīng)混合物中直至殘余MA降低至低于5％，同時(shí)維持異脲水平低于4-5％。異脲是由達(dá)巴霉素與過量DCC進(jìn)一步反應(yīng)所產(chǎn)生的一組副產(chǎn)物。
通常在額外2小時(shí)后(總共7小時(shí))反應(yīng)完成。在結(jié)束時(shí)以水(60L)稀釋混合物以降低DMSO濃度至15％(v/v)并以HCl 1N(0.85L)調(diào)節(jié)處于pH2.3以消滅任何殘余DCC。
將MA-A-1水解成達(dá)巴霉素(步驟3)30分鐘后以15％ NaOH(8L)調(diào)節(jié)混合物處于pH12.0-12.1。持續(xù)攪拌4小時(shí)，同時(shí)通過少量添加NaOH 15％維持混合物處于此pH下。此后以HPLC面積％計(jì)算的殘余MA-A-1少于0.2％。
接著在pH3.0時(shí)以1N HCl(19L)酸化混合物，并過濾懸浮液以移除所形成的二環(huán)己基脲。在過濾器上以軟化水(2×20L)洗滌固體濾餅。將洗液與濾液收集在一起從而獲得透明溶液，通過HPLC對(duì)其進(jìn)行分析。獲得152.8L含有21.74g/L達(dá)巴霉素的溶液(總活性3322g；1.828mol，產(chǎn)率＝68.2％)。
純化達(dá)巴霉素下列描述代表當(dāng)前產(chǎn)生方法。
將獲得自水解步驟并含有3322g達(dá)巴霉素活性的152.8L溶液分成兩份，并在含有400L聚酰胺的相同層析柱上分別純化各份。在所述兩個(gè)純化運(yùn)作中活性/樹脂比率分別是4.3與4.0g/L。
聚酰胺管柱制備根據(jù)樹脂再生程序(見下)清潔含有400L聚酰胺樹脂的搪玻璃管柱(內(nèi)徑＝40cm，h＝320cm)并以2BV(800L)經(jīng)4L AcOH(pH＝3.2)酸化的軟化水調(diào)節(jié)。
純化第一份以H2O(56L)稀釋第一份76.4L起始溶液以降低DMSO含量低于5％(v/v)并以1N HCl(3.4L)酸化至pH2.78。接著將此溶液以150L/h的流動(dòng)速率裝載至管柱上。裝載后以下列溶液洗滌樹脂4BV(1600L)經(jīng)AcOH(8L)酸化的H2O，pH＝3.2；5BV(2000L)AcONa 0.1M，pH＝8.2；1BV(400L)經(jīng)AcOH(1L)酸化的H2O，pH＝3.2。以4BV(2400L)經(jīng)AcOH(6L)酸化并且pH＝3.4的H2O/MeOH(8∶2)洗提達(dá)巴霉素。
在洗提步驟中收集各自是50-60L的22份并通過HPLC分析。將9至25份(達(dá)巴霉素濃度高于0.5g/L并且(B0+B1)的HPLC面積％≥80％)收集在一起，從而獲得969L具有1.56kg達(dá)巴霉素的溶液(產(chǎn)率＝93.9％)。接著通過毫微過濾使此溶液濃縮，從而獲得125.7L具有1.38kg達(dá)巴霉素的溶液。將850L含有145g不純達(dá)巴霉素(8.7％)的滲出液中和并排出。
樹脂再生在再使用之前以下列溶液洗滌樹脂2.5BV(1000L)經(jīng)乙酸(2.5mL/L)酸化的1∶1MeOH/水；2.5BV(1000L)1∶1 0.5％NaOH/異丙醇；10BV(4000L)軟化水。接著以2BV(800L)經(jīng)乙酸(2.5mL/L)酸化的水使樹脂再均衡。
純化第二份以H2O(56L)稀釋來自水解步驟的第二份起始溶液(76.5L)以降低DMSO含量低于5％(v/v)并以3.0L 1N HCl酸化至pH2.87。接著如先前第一份的純化作用中所述將第二份純化。通過毫微過濾使經(jīng)收集的部分(體積＝972L，達(dá)巴霉素1.54kg，產(chǎn)率＝92.7％)濃縮，從而獲得133L具有1.46kg活性的溶液。排出850L含有73g達(dá)巴霉素(4.3％)的滲出液。
將來自兩個(gè)純化步驟的濃溶液再分析并收集在一起，從而得到258L含有2840g經(jīng)純化達(dá)巴霉素的溶液。純化產(chǎn)率是86％。起始自MA的總產(chǎn)率是58.3％。
最終聚酰胺再生在第二個(gè)純化運(yùn)作之后，以經(jīng)pH＝3.4的AcOH(2.5L)酸化的2.5BV的1∶1 MeOH-水、2.5BV的1∶1 0.5％NaOH-異丙醇、10BV軟化水使聚酰胺再生。
達(dá)巴霉素的脫色與沉淀將每摩爾達(dá)巴霉素中1.5mol 1N HCl與每克達(dá)巴霉素中0.3g炭CG1(0.85kg，得自NORIT)添加至以上獲得的258L溶液中。在室溫下攪拌混合物至少45分鐘。pH值是3.1。接著在SUPRA DISC筒模上過濾懸浮液。以50L H2O/MeOH 8∶2洗滌得自SEITZ-SCHENK的SDP-EK1與濾餅。分析濾液并使用臨界值是250 D的MPS 44膜通過毫微過濾再次濃縮。獲得21.3L含有119g/L達(dá)巴霉素的濃溶液(pH4.1；MeOH 1.9％，GC)。最終添加909mL 1N HCl以調(diào)節(jié)pH處于2.63，其對(duì)應(yīng)于1.65mol HCl/mol達(dá)巴霉素的成鹽比率。
在攪拌同時(shí)將溶液(22.2L)傾倒入200L丙酮中。將傾析后所獲得的固體離心并以14L新鮮丙酮洗滌。接著在減壓(50mmHg)下于35℃下干燥產(chǎn)物，同時(shí)維持內(nèi)部溫度低于30℃保持17小時(shí)。在干燥過程中，于3與5小時(shí)后將1L不含發(fā)熱原的水(＜250EU/mL)(分成各0.5L的兩部分)噴灑至固體上以移除以其它方式難以消除的殘余丙酮。接著篩濾(50目)產(chǎn)物，從而獲得2592g達(dá)巴霉素(HPLC檢定率82.4％；水(KF)14％；Cl-3.0％)。
實(shí)例10.用于A-40926與達(dá)巴霉素制備的替代方法下述方法是可用于A-40926與達(dá)巴霉素制備過程中的替代方法。
XAD-7HP上的A-40926制備脫乙?；c菌絲體微過濾在室溫下(24℃)下將150L含有A-40926的發(fā)酵肉湯(pH7)于合適反應(yīng)器中攪拌，并以2.5N NaOH溶液(2.5L)調(diào)節(jié)處于pH11.5。攪拌4小時(shí)后，以15％HCl調(diào)節(jié)肉湯處于pH10.6，并經(jīng)0.2微米膜進(jìn)行微過濾。收集439L透明滲出液并接著使用臨界值是250 D的MPS 44膜通過毫微過濾進(jìn)行濃縮。調(diào)節(jié)所獲得的A-40926濃溶液(58.6L；3.89g/L)處于pH6.4并儲(chǔ)存于4℃下直至使用。
管柱制備與純化將XAD-7HP樹脂(8L)懸浮于1∶1水/甲醇溶液中，過濾并以蠕動(dòng)泵裝載至適當(dāng)玻璃管柱(內(nèi)徑12cm)中。
接著以水洗滌樹脂并以經(jīng)緩沖處于pH6的6BV碳酸鈉水溶液使其均衡，所述碳酸鈉水溶液是通過每升水中溶解5g碳酸鈉并以乙酸調(diào)節(jié)pH來制備。
將一部分含有194g A-40926的濃肉湯裝載至XAD-7HP管柱中。接著以1/2BV/小時(shí)的流動(dòng)速率用下列兩種經(jīng)緩沖溶液洗滌樹脂以消除所存在的一部分親水性及有色物質(zhì)3BV(24L)0.5％乙酸水溶液，其經(jīng)30％氫氧化鈉調(diào)節(jié)處于pH5；5BV(40L)8∶2水/丙酮混合物，其經(jīng)5mL乙酸/L水酸化。
最終以8BV(64L)經(jīng)5mL乙酸/L水酸化的1∶1水/丙酮混合物洗提A-40926。收集16份各自是4L的部分。將其中A-40926濃度大于0.5g/L的濃部分(5至15)聚集在一起從而獲得含有163.4g A-40926的溶液(43L，3.8g/L)。管柱產(chǎn)率是81.3％。排出含有0.23g/L(45.3g；22.2％)純度較差的A-40926的其它部分(200L)。
在洗提后以6BV(55L)NaOH 0.5％/異丙醇(1∶1)混合物使樹脂再生，并最終以10BV水洗滌至中性。
炭處理以HCl 37％(70mL)調(diào)節(jié)所收集的部分處于pH2.5并接著以50g炭PA 200型(0.3g/g A-40926)脫色。將所獲得的懸浮液于室溫下攪拌2小時(shí)并接著經(jīng)KS 50過濾器(d＝25cm，時(shí)間＝2.5小時(shí))過濾，從而獲得45.6L微黃色A-40926溶液(3.5g/L；產(chǎn)率＝96.4％)。
以NaOH 30％(230mL)調(diào)節(jié)經(jīng)脫色溶液處于pH7并通過毫微過濾及超濾來濃縮。使用所述技術(shù)對(duì)于消除在Rt＝2-4分鐘時(shí)于HPLC層析上所偵測(cè)到的親水性物質(zhì)而言很重要。當(dāng)將滯留物濃縮成起始體積的1/10(4L)時(shí)，添加相同體積的水并將所獲得的溶液再次濃縮。重復(fù)此濃縮/稀釋步驟三次以減少殘余丙酮至0.25％。通過HPLC分析最終溶液(2.2L，146.3gA-40926，66.5g/L，產(chǎn)率＝91.5％)。純化產(chǎn)率是75.4％。
A-40926結(jié)晶通過使用實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的超濾器將300mL份的A-40926溶液(19.9gA-40926)進(jìn)一步濃縮成100mL并接著在60-65℃下加熱。調(diào)節(jié)(30％NaOH)此溶液的pH處于7，并在此溫度下向每毫升濃溶液中逐滴添加1.2mL 5∶1丙酮/異丙醇混合物。使所得混合物在20℃下冷卻。1.5小時(shí)后，將所獲得的固體過濾，于過濾器上以丙酮洗滌并在40℃下干燥15小時(shí)。獲得20.6g產(chǎn)物(HPLC檢定率82.0％；A-40926 16.9g)。沉淀產(chǎn)率是84.9％。起始自經(jīng)過濾肉湯的總產(chǎn)率是約64％。
于CG-71上的A-40926制備管柱制備將CG-71樹脂(350mL)傾倒入玻璃管柱(內(nèi)徑＝4cm)中并以水洗滌。以3BV碳酸鈉溶液使樹脂均衡，所述碳酸鈉溶液是通過將5g碳酸鈉溶解于以乙酸使pH處于6的水中來制備。將250mL含有14.7g A-40926的發(fā)酵肉湯(pH7)裝載至管柱(42g/L樹脂)中。以下列三種溶液洗滌樹脂1050mL(3BV)經(jīng)乙酸調(diào)節(jié)處于pH6的碳酸鈉水溶液(5g/L)；1750mL(5BV)經(jīng)乙酸調(diào)節(jié)處于pH8的碳酸鈉水溶液(5g/L)；3150mL(9BV)經(jīng)乙酸調(diào)節(jié)處于pH9的碳酸鈉水溶液(5g/L)。
接著以10BV軟化水洗提活性。收集各自是500mL的20份。將12至15份收集在一起，從而獲得2.2L含有11.7g A-40926的經(jīng)純化溶液(產(chǎn)率＝79.6％)。接著通過超濾濃縮此溶液并以軟化水進(jìn)一步稀釋濃溶液并再次超濾。在減壓下將所獲得的溶液進(jìn)一步濃縮至50mL。
A-40926結(jié)晶在60℃下加熱濃溶液并在攪拌同時(shí)以5∶1丙酮/IPA混合物(60mL)處理。接著在室溫下緩慢冷卻混合物。將所獲得的固體過濾，在過濾器上以丙酮洗滌并在真空中于35℃下干燥80小時(shí)。獲得8.9g經(jīng)純化A-40926(HPLC檢定率84.2％)?？偖a(chǎn)率是51％。
達(dá)巴霉素合成中使用N-甲基-2-吡咯烷(NMP)作為溶劑的替代酰胺化步驟在攪拌同時(shí)將MA混合物逐份添加至1∶1 NMP/MeOH混合物(64mL)中。在20-25℃下持續(xù)攪拌直至完全溶液，接著添加DMEPA(2.42mL；1.96mol/eqMA)與HOBT(1.06g；0.71mol/eqMA)。以NMP中的9.37mL 15％HCl(先前自溶解于57.7mL NMP中的34.0mL HCl 37％制備)調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物(檢查以水稀釋成1∶10的樣本)的pH值至3.0。接著在攪拌同時(shí)添加DCC(3.17g；1.57mol/eqMA)于NMP/MeOH 1∶1(12.7mL)中的溶液。通過HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。在約6小時(shí)后反應(yīng)完成(MA-A-188.9％，MA 7.3％，ISO3.7％)。此實(shí)驗(yàn)表明NMP可以是用于酰胺化反應(yīng)的DMSO的便利替代物。整個(gè)過程不受此溶劑改變影響并且所獲得的最終達(dá)巴霉素在化學(xué)上等同于其它批次。
達(dá)巴霉素制備的替代方法一鍋型程序在室溫下于100mL玻璃反應(yīng)器中將10g A-40926復(fù)合物(HPLC滴定度80.66％，4.6mmole)在攪拌同時(shí)懸浮于24mL MeOH中。在0℃下冷卻混合物，并添加4g HCl(g)于16.4mL MeOH中的溶液以完成產(chǎn)物溶解作用。接著使溫度升至20℃，同時(shí)持續(xù)攪拌額外24小時(shí)。
此后將40mL DMSO與0.4g HOBT添加至反應(yīng)混合物中。
接著添加1，1-二甲胺丙胺，藉此調(diào)節(jié)所得反應(yīng)混合物的pH值介于3-3.1之間(在以水稀釋樣本至9∶1后進(jìn)行測(cè)量)。接著添加1.8g固體DCC并持續(xù)攪拌額外15小時(shí)。此時(shí)將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移入1L玻璃反應(yīng)器中并以80mL水稀釋。接著通過添加240mL 15％NaOH使pH值達(dá)到12。持續(xù)攪拌額外60分鐘，并以260mL 15％HCl水溶液酸化混合物處于pH2.8。獲得約800mL含有6.4g達(dá)巴霉素的最終透明溶液(產(chǎn)率＝76％)。
HPLC分析顯示所獲得的產(chǎn)物的概況與以其它制造方法獲得的產(chǎn)物的概況相當(dāng)。
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盡管已經(jīng)為清晰理解的目的通過說明和實(shí)例詳細(xì)地描述了前述發(fā)明，但所述領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)明白在不偏離本發(fā)明的精神和范疇下可實(shí)施某些改變與修正。因此，所述描述不應(yīng)理解為限制由附加權(quán)利要求所描繪的本發(fā)明范疇。
本文所引用的所有公開案、專利及專利申請(qǐng)案均以全文引用方式并入本文中以用于各種目的，并且特定及個(gè)別地揭示的各個(gè)公開案、專利或?qū)＠暾?qǐng)案在某種程度上并入本文中。
權(quán)利要求
1.一種醫(yī)藥組合物，其包含一醫(yī)藥上可接受的載劑、一穩(wěn)定劑及一單位劑量的達(dá)巴霉素(dalbavancin)，其中所述單位劑量包含足以在一個(gè)體中提供至少5日治療有效血漿水平的量的達(dá)巴霉素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中所述組合物為無菌的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中所述組合物為凍干的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中所述組合物為用于投與個(gè)體的醫(yī)藥上可接受的形式。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的醫(yī)藥組合物，其中所述組合物為醫(yī)藥上可接受的含水調(diào)配物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中所述個(gè)體為哺乳動(dòng)物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的醫(yī)藥組合物，其中所述個(gè)體為人類。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其進(jìn)一步包含一非達(dá)巴霉素的抗生素。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的醫(yī)藥組合物，其中所述非達(dá)巴霉素的抗生素有效地對(duì)抗革蘭氏陰性菌。
10.一種用于治療一有其需要的個(gè)體中之細(xì)菌感染的方法，所述方法包含投與所述個(gè)體一單位劑量的達(dá)巴霉素和一醫(yī)藥上可接受的載劑，其中所述單位劑量包含一足以在所述個(gè)體中提供至少5日治療有效血漿水平的量的達(dá)巴霉素。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述單位劑量包含約100mg到約4000mg的達(dá)巴霉素。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述單位劑量包含約3000mg的達(dá)巴霉素。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述治療有效血漿水平為每升血漿至少約4mg的達(dá)巴霉素。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述達(dá)巴霉素為非經(jīng)腸投藥。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述非經(jīng)腸投藥包含靜脈內(nèi)投藥。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述靜脈內(nèi)投藥發(fā)生歷經(jīng)至少約30分鐘。
17.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述細(xì)菌感染包含革蘭氏陽(yáng)性菌。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述革蘭氏陽(yáng)性菌為抗青霉素細(xì)菌。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述革蘭氏陽(yáng)性菌為抗多種藥物的細(xì)菌。
20.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述細(xì)菌感染包含皮膚及軟組織感染(SSTI)。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述SSTI包含金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染。
22.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述SSTI包含化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes)感染。
23.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述個(gè)體為人類。
24.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其進(jìn)一步包含投與所述個(gè)體一非達(dá)巴霉素的抗生素。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述非達(dá)巴霉素的抗生素有效對(duì)抗革蘭氏陰性菌。
26.一種用于治療有其需要的個(gè)體中的細(xì)菌感染的方法，所述方法包含投與所述個(gè)體一第一單位劑量和一第二單位劑量的達(dá)巴霉素及一醫(yī)藥上可接受的載劑，且其中一治療有效血漿水平的達(dá)巴霉素在個(gè)體中維持至少5日。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述第一和第二劑量相隔約5到約10日投與。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述第一與第二劑量相隔約一周投與。
29.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中在投與所述第二劑量的達(dá)巴霉素之前所述個(gè)體具有每升血漿至少約4mg達(dá)巴霉素的達(dá)巴霉素血漿最低水平。
30.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述第一單位劑量包含約500mg到約5000mg的達(dá)巴霉素且所述第二單位劑量包含約250mg到約2500mg的達(dá)巴霉素。
31.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述第一單位劑量包含約1.5到約3倍于所述第二單位劑量中所含達(dá)巴霉素量的達(dá)巴霉素。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述第一單位劑量包含約1000mg的達(dá)巴霉素且所述第二單位劑量包含約500mg的達(dá)巴霉素。
33.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述達(dá)巴霉素為非經(jīng)腸投藥。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述非經(jīng)腸投藥包含靜脈內(nèi)投藥。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述靜脈內(nèi)投藥發(fā)生歷經(jīng)至少約30分鐘。
36.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述細(xì)菌感染包含革蘭氏陽(yáng)性菌。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述革蘭氏陽(yáng)性菌為抗青霉素細(xì)菌。
38.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述革蘭氏陽(yáng)性菌為抗多種藥物的細(xì)菌。
39.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述細(xì)菌感染包含皮膚及軟組織感染(SSTI)。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中所述SSTI包含金黃色葡萄球菌感染。
41.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中所述SSTI包含化膿性鏈球菌感染。
42.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述個(gè)體為人類。
43.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其進(jìn)一步包含投與所述個(gè)體一非達(dá)巴霉素的抗生素。
44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法，其中所述非達(dá)巴霉素的抗生素有效對(duì)抗革蘭氏陰性菌。
45.一種用于治療有其需要的個(gè)體中的細(xì)菌感染的方法，所述方法包含投與所述個(gè)體一第一單位劑量和一第二單位劑量的達(dá)巴霉素及一醫(yī)藥上可接受的載劑，其中所述第一單位劑量包含足以在所述個(gè)體中提供治療有效達(dá)巴霉素血漿水平達(dá)約一周的量的達(dá)巴霉素，其中所述第一單位劑量包含約兩倍于所述第二單位劑量中所含達(dá)巴霉素量的達(dá)巴霉素，其中所述第一和第二單位劑量相隔約一周投與，且其中在投與所述第二劑量達(dá)巴霉素之前所述個(gè)體具有每升血漿至少約20mg達(dá)巴霉素的血漿最低水平。
46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述第一單位劑量包含約1000mg且所述第二單位劑量包含約500mg的達(dá)巴霉素。
47.一種用于預(yù)防一個(gè)體中細(xì)菌感染發(fā)作的方法，所述方法包含投與所述個(gè)體一單位劑量的達(dá)巴霉素及一醫(yī)藥上可接受的載劑，其中所述單位劑量包含足以在所述個(gè)體中提供預(yù)防上有效的達(dá)巴霉素血漿水平達(dá)至少5日的量的達(dá)巴霉素。
48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中所述單位劑量為在治療程序之前、期間或之后投與。
49.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中所述單位劑量為在住院之前、期間或之后投與。
50.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中所述單位劑量包含約100mg到約1000mg的達(dá)巴霉素。
51.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其進(jìn)一步包含投與一非達(dá)巴霉素的抗生素。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述非達(dá)巴霉素的抗生素有效對(duì)抗革蘭氏陰性菌。
53.一種套組，其包含至少一個(gè)單位劑量的達(dá)巴霉素和在細(xì)菌感染治療方法中使用的說明書，所述達(dá)巴霉素的量足以在個(gè)體中提供治療上有效的達(dá)巴霉素血漿水平達(dá)至少約5日。
54.根據(jù)權(quán)利要求53所述的套組，其中所述套組包含第一及第二單位劑量的達(dá)巴霉素，其中所述第一單位劑量包含約1.5到約3倍于所述第二單位劑量中所含達(dá)巴霉素量的達(dá)巴霉素。
55.一種套組，其包含至少一個(gè)單位劑量的達(dá)巴霉素及在預(yù)防細(xì)菌感染發(fā)作方法中使用的說明書，所述達(dá)巴霉素的量足以在個(gè)體中提供預(yù)防上有效的達(dá)巴霉素血漿水平達(dá)至少約5日。
56.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中在投與所述第二劑量的達(dá)巴霉素之前所述個(gè)體具有每升血漿至少約20mg達(dá)巴霉素的達(dá)巴霉素血漿最低水平。
全文摘要
本發(fā)明提供用于治療細(xì)菌感染的方法及組合物。本發(fā)明方法包括投與用于治療細(xì)菌感染，尤其是皮膚及軟組織革蘭氏陽(yáng)性菌感染的達(dá)巴霉素(dalbavancin)。投藥方案包括每周一次投與達(dá)巴霉素，達(dá)巴霉素常常在血流中保持至少一周的治療水平，提供對(duì)抗細(xì)菌感染的延長(zhǎng)的治療作用。
文檔編號(hào)A61K38/14GK1711102SQ200380103406
公開日2005年12月21日 申請(qǐng)日期2003年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月18日
發(fā)明者馬爾科·卡瓦萊里, 蒂莫西·亨克爾, 達(dá)尼埃拉·亞貝斯, 阿德里亞諾·馬拉巴爾巴, 喬治·莫斯科尼, 馬丁·斯托哥尼, 理查德·J·懷特 申請(qǐng)人:維克倫制藥股份有限公司