專(zhuān)利名稱：用epa治療亨廷頓氏病的制作方法
亨廷頓氏病(HD)是由于人4號(hào)染色體上的亨廷頓蛋白基因的突變而導(dǎo)致的致命性遺傳疾病。呈任何合適藥物劑型的脂肪酸-二十碳五烯酸(EPA)可用于治療HD(如歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)1148873所述)。
本發(fā)明涉及HD的治療，并且本發(fā)明是基于下述發(fā)現(xiàn)EPA的治療效果特別地出現(xiàn)于那些具有HD特定遺傳型的病人。
本發(fā)明提供了一種鑒別患有HD的病人、或那些處于HD發(fā)病危險(xiǎn)中的的個(gè)體、那些特別可能對(duì)用呈任何合適形式的EPA治療響應(yīng)的個(gè)體的方法，其包括進(jìn)行測(cè)試以確定亨廷頓蛋白基因中的CAG重復(fù)數(shù)和鑒定具有45或以下重復(fù)數(shù)的那些受試者的步驟。
如果受試者具有小于36的重復(fù)數(shù)，則表明其為正常個(gè)體。在優(yōu)選的測(cè)試中，所選的受試者具有44或以下、或者36-44的CAG重復(fù)數(shù)。
僅僅出于分析的目的，可以從受試者上采集的樣本進(jìn)行測(cè)試且不用讓樣本返回受試者。該診斷步驟將在體外進(jìn)行。
本發(fā)明還提供了一種治療HD的方法，和一種預(yù)防處于HD發(fā)病危險(xiǎn)中的的個(gè)體的癥狀發(fā)展的方法，其包括下述步驟確定受試者的亨廷頓蛋白基因中的CAG重復(fù)數(shù)，并且如果CAG重復(fù)數(shù)為45或以下，則向受試者給予呈任何可生物利用形式的EPA。在優(yōu)選的測(cè)試中，選定給藥EPA的受試者具有44或以下、或者36-44的CAG重復(fù)數(shù)。
用于本發(fā)明方法的EPA優(yōu)選是乙基-EPA。
CAG重復(fù)數(shù)46或以上的受試者對(duì)于給藥安慰劑與給藥EPA的治療完全沒(méi)有顯示出任何不同。相反，出人意料地，CAG重復(fù)數(shù)45或以下的患HD病人對(duì)于給藥EPA顯示出很大的受益。
雖然所有的HD病人具有相同基因的遺傳異常，但不是所有的病人具有相同的異常。亨廷頓蛋白的正常基因含有CAG重復(fù)序列，其編碼該基因自身的聚谷氨酰胺序列。即使在正常個(gè)體中，聚谷氨酰胺序列也具有可變化的長(zhǎng)度，但是只要其含有小于36的CAG重復(fù)數(shù)，也即是聚谷氨酰胺序列中含有小于36個(gè)谷氨酰胺，個(gè)體將是正常的。但是，當(dāng)該序列含有36或以上的CAG重復(fù)數(shù)以及谷氨酰胺序列時(shí)，將發(fā)展為HD?；加蠬D的病人可具有36至大于100的CAG重復(fù)數(shù)中的任何CAG重復(fù)數(shù)。
HD通常從運(yùn)動(dòng)失調(diào)開(kāi)始，特別是影響面部、頭部和頸部及四肢。這些進(jìn)展常伴隨精神異常和認(rèn)知缺損導(dǎo)致癡呆。該異常起初是由對(duì)紋狀體的神經(jīng)元的亨廷頓蛋白損傷而引起的，但隨后涉及到大范圍的腦部。最終，病人變得臥床不起并完全不能自理。他們通常在發(fā)病后10-25年死去。
CAG重復(fù)數(shù)對(duì)于發(fā)病年齡有強(qiáng)烈的影響。重復(fù)數(shù)恰好超過(guò)35的病人直到50歲或60歲或者更晚一些才會(huì)得病。重復(fù)數(shù)超過(guò)60的病人在青春期或者甚至在幼年期就會(huì)得病。但是，大多數(shù)病人在30-50歲得病。一旦開(kāi)始發(fā)病，具有大的CAG重復(fù)數(shù)的病人趨向于病情發(fā)展得更快，雖然該作用與上述對(duì)發(fā)病年齡的強(qiáng)烈作用相比是微弱的。
CAG重復(fù)數(shù)可以通過(guò)基于聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的診斷測(cè)試進(jìn)行鑒定。這種測(cè)試提供了可靠的HD診斷，并且當(dāng)然可應(yīng)用于未顯示出癥狀的病人。但是，那些處于HD基因攜帶者危險(xiǎn)之中的相對(duì)少的未顯示出癥狀的個(gè)體，和在某一時(shí)候必然發(fā)病的個(gè)體會(huì)給測(cè)試帶來(lái)麻煩。許多具有HD癥狀的人也未進(jìn)行測(cè)試。不進(jìn)行測(cè)試的主要觀點(diǎn)在于目前沒(méi)有HD的治療方法，即使能精確地知道該基因存在以及該基因的類(lèi)型也沒(méi)有意義。
二十碳五烯酸乙酯(乙基-EPA)的HD臨床試驗(yàn)為EPA對(duì)HD的有益效果提供了強(qiáng)有力的證據(jù)，并且完全出人意料地，為CAG遺傳測(cè)試的價(jià)值也提供了強(qiáng)有力的證據(jù)。
讓135位已經(jīng)遺傳確認(rèn)的HD病人進(jìn)行1年的試驗(yàn)。將他們隨機(jī)分組，給藥2g/天的乙基-EPA或外觀相同的安慰劑。在基線、6個(gè)月和12個(gè)月時(shí)用Unified Huntington’s Disease Rating Scale(UHDRS)的全運(yùn)動(dòng)計(jì)分(TMS)測(cè)量對(duì)他們進(jìn)行評(píng)估。UHDRS是標(biāo)準(zhǔn)的分級(jí)評(píng)定，用于監(jiān)測(cè)HD的發(fā)展。TMS是UHDRS的組成部分，其改變最可靠、快捷且一致，因而適合用來(lái)監(jiān)測(cè)臨床試驗(yàn)的結(jié)果。
一年結(jié)束時(shí)，比較安慰劑組和乙基-EPA組的TMS變化?？偟恼f(shuō)來(lái)，乙基-EPA比安慰劑有更好的結(jié)果，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著。但是，當(dāng)按照CAG重復(fù)數(shù)將病人分層次時(shí)，揭示出乙基-EPA引人注目的益處。CAG重復(fù)數(shù)為46或以上的病人對(duì)于安慰劑和乙基-EPA完全沒(méi)有顯示出任何不同。相反，CAG重復(fù)數(shù)低于45的病人顯示出乙基-EPA的很大益處。CAG重復(fù)數(shù)45及以下的安慰劑病人平均惡化了5.3％。相反，乙基-EPA組病人一年后改善了19.3％。該差別對(duì)于協(xié)方差分析或卡方檢驗(yàn)均有很高的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。特別驚人的是，絕大多數(shù)乙基-EPA組病人實(shí)質(zhì)上已有所改善。以前，對(duì)于神經(jīng)變性疾病如HD最希望的是延緩的惡化而非任何實(shí)質(zhì)的改善。由于一年之后，乙基-EPA組病人比安慰劑組病人改善了3.5倍還多，這意味著一年之后，EPA病人已與安慰劑病人相隔了大于4.5年的病程。換句話說(shuō)，受治療的病人獲得了至少4.5年的有用生活。相反，CAG重復(fù)數(shù)46或以上的病人對(duì)于乙基-EPA和安慰劑治療沒(méi)有顯示出任何不同。
優(yōu)選地，在本發(fā)明治療方法中和在延緩或預(yù)防亨廷頓氏病發(fā)病的方法中，所述EPA治療實(shí)質(zhì)上是在歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)1148873中所述的。
優(yōu)選使用純的或幾乎純的EPA及EPA衍生物。DHA和相關(guān)的脂肪酸不僅無(wú)效，而且實(shí)際上會(huì)降低EPA及其衍生物的功效。
優(yōu)選的制劑包含呈合適的可吸收形式的EPA，其中制劑中所有脂肪酸的至少90％、優(yōu)選至少95％是EPA形式，小于5％并優(yōu)選小于3％的脂肪酸是二十二碳六烯酸。
優(yōu)選地，在存在的其它脂肪酸中各自分別有小于5％并優(yōu)選小于3％的AA或DPA-n-3。同樣的優(yōu)選適用于任何會(huì)與EPA競(jìng)爭(zhēng)的其它脂肪酸。
優(yōu)選，DHA、AA和/或DPA-n-3的總含量小于總脂肪酸的10％，并優(yōu)選小于5％。
EPA可以是乙基-EPA、EPA鋰、EPA的甘油單酯、雙酯或三酯、或者EPA的任何其它酯或鹽、或者EPA的游離酸形式。EPA還可以是2-取代的衍生物或其它衍生物形式，其減慢了氧化的速率但并不在任何實(shí)質(zhì)程度上改變其對(duì)精神或腦失調(diào)的生物作用(N.Willumsen等人，BiochimicaBiophysica Acta，1998，1369193-203)。
EPA可以與主要作用于神經(jīng)遞質(zhì)代謝或受體的藥物聯(lián)用。適合與EPA制劑聯(lián)合用藥的藥物是氯氮平；和任何一種典型或非典型神經(jīng)鎮(zhèn)靜劑，包括氯丙嗪、氟哌啶醇、利哌利酮、奧氮平、舍吲哚、齊拉西酮、佐替平或阿米舒必利(amisulpiride)。用于緩解亨廷頓氏病的一些癥狀的標(biāo)準(zhǔn)抗精神分裂癥藥、抗抑郁藥、鎮(zhèn)靜劑、和抗癲癇藥，可以與EPA制劑一起給藥。
根據(jù)EP申請(qǐng)1148873的一個(gè)治療亨廷頓氏病的例子，對(duì)7名處于亨廷頓氏病晚期的嚴(yán)重失能的病人設(shè)定了96％純的乙基-EPA的隨機(jī)試驗(yàn)。所有的病人均需要24小時(shí)護(hù)理，患有嚴(yán)重的運(yùn)動(dòng)失調(diào)，易怒且部分癡呆。根據(jù)雙盲基準(zhǔn)將他們隨機(jī)分為給藥2g/天乙基-EPA或2g/天安慰劑，并給藥6個(gè)月。6個(gè)月期間，4名病人呈現(xiàn)進(jìn)展惡化，而3名病人逆轉(zhuǎn)了病程并呈現(xiàn)出下述改善異常運(yùn)動(dòng)減少，情緒不穩(wěn)定和易怒減少，以及記憶力和認(rèn)識(shí)功能改善。當(dāng)編號(hào)公開(kāi)時(shí)發(fā)現(xiàn)惡化的4名病人均是給藥安慰劑，而改善的3名病人均是給藥乙基-EPA。在2名給藥乙基-EPA和2名給藥安慰劑的4名病人中，在研究開(kāi)始和結(jié)束時(shí)用核磁共振成像(MRI)評(píng)定腦退化。MRI能提供側(cè)腦室大小、腦半球中充液空間的準(zhǔn)確評(píng)定。隨著亨廷頓氏病的進(jìn)展，側(cè)腦室變大，這表明腦組織喪失。6個(gè)月后，給藥安慰劑的2名病人的側(cè)腦室如預(yù)料到的變大。MRI顯示給藥乙基-EPA的2名病人的側(cè)腦室大小減小，這表明實(shí)質(zhì)上逆轉(zhuǎn)了腦組織喪失。
上述處于由異常蛋白質(zhì)積聚導(dǎo)致的以前不能治療疾病的末期的病人的引人注目的結(jié)果證明了乙基-EPA對(duì)于神經(jīng)變性疾病的價(jià)值。
本發(fā)明提供了通過(guò)分析亨廷頓蛋白基因鑒定那些可能對(duì)上述治療響應(yīng)的病人的顯著進(jìn)展。本發(fā)明提供了下述優(yōu)點(diǎn)可以鑒定那些處于發(fā)病危險(xiǎn)中的病人，并向他們給予EPA以預(yù)防或延緩該疾病癥狀的發(fā)展。
呈90％并優(yōu)選95％或更純一些的形式的EPA制劑均可以通過(guò)本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的輸送體系口服給藥，包括軟和硬明膠膠囊、粉狀微膠囊、片劑或膠囊劑、固體化合物EPA鋰的片劑、或者用合適的天然或合成乳化劑包括磷脂或半乳糖脂形成的乳劑。該化合物還可以直接地給藥或配制成各種油狀或乳劑或分散劑經(jīng)腸胃外給藥，利用靜脈、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑。使用膜片術(shù)或者陰道或直腸應(yīng)用劑型的局部應(yīng)用也在本發(fā)明范圍內(nèi)。
當(dāng)與用于減輕亨廷頓氏病癥狀的藥物聯(lián)合使用時(shí)，EPA化合物和其它藥物可以以其各自的劑型分別給藥。它們可以分別包裝或者存在于同一總包裝中?；蛘?，使用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的技術(shù)，可以將EPA和其它藥物一起配制，由此EPA的每日劑量為0.1-10g/天，并優(yōu)選0.5-5g/天，并伴有其它藥物的正常日劑量。
當(dāng)單獨(dú)給藥時(shí)，EPA的有效日劑量可以為0.05-50g/天，優(yōu)選0.1-10g/天，更優(yōu)選優(yōu)選0.5-5g/天。
實(shí)施例制劑在下述各個(gè)實(shí)施例中，產(chǎn)品純度為至少90％，并優(yōu)選95％或更純。這一點(diǎn)非常重要，因?yàn)槠渌舅釙?huì)與EPA競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合位點(diǎn)并降低其功效。具體地，脂肪酸例如DHA、AA、DPA-n-3各自存在的濃度小于5％并優(yōu)選小于3％。上述競(jìng)爭(zhēng)化合物的總累加值必須小于10％并優(yōu)選小于5％。純度還對(duì)于最小化每天必須服用的物質(zhì)的體積有用，這是有助于精神病人順從性的主要因素，其中缺乏順從性是這類(lèi)病人中的一個(gè)嚴(yán)重的問(wèn)題。
1.由硬或軟明膠制成的膠囊，其含有250mg、500mg、或1000mg的乙基-EPA、EPA甘油三酯或其它合適形式的EPA。
2.含有250mg、500mg、或1000mg EPA鋰的片劑或含有類(lèi)似量的硬明膠膠囊。
3.乳劑、溶液或分散劑，其中EPA鋰、乙基-EPA、EPA甘油三酯或其它合適形式的EPA配制成適于口服給藥的可口液體形式。
4.栓劑或陰道環(huán)，其中配制有100mg-5g的一種EPA化合物。
5.靜脈注射溶液或乳劑，含有10mg-500mg/ml的一種EPA化合物。
6-10.與實(shí)施例1-5一樣，但使用2-取代的EPA衍生物。
11-20.與實(shí)施例1-10一樣，但其中將EPA化合物與有效量的用于治療亨廷頓氏病癥狀的任何其它藥物一起配制。
權(quán)利要求
1.一種鑒定患有亨廷頓氏病的病人、或那些處于亨廷頓氏病發(fā)病危險(xiǎn)之中的個(gè)體、那些將會(huì)對(duì)用呈任何生物可利用形式的EPA治療響應(yīng)的個(gè)體的方法，包括確定亨廷頓蛋白基因中的CAG重復(fù)數(shù)，并鑒定具有45或以下重復(fù)數(shù)的那些受試者的步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中治療包括給藥乙基-EPA。
3.一種治療亨廷頓氏病的方法，其包括步驟鑒定亨廷頓蛋白基因中的CAG重復(fù)數(shù)為45或以下的病人，并且向那些病人給予呈任何可生物利用形式的EPA。
4.一種預(yù)防處于亨廷頓氏病發(fā)病危險(xiǎn)之中的個(gè)體的癥狀發(fā)展的方法，其包括步驟鑒定亨廷頓蛋白基因中的CAG重復(fù)數(shù)為45或以下的病人，并且向那些個(gè)體給予呈任何可生物利用形式的EPA。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4的方法，其中給予的EPA是呈乙基-EPA形式。
全文摘要
亨廷頓基因的分析提供了一種鑒定可能對(duì)用二十碳五烯酸(EPA)治療亨廷頓氏病響應(yīng)的病人的方法。
文檔編號(hào)A61K31/00GK1717497SQ200380104420
公開(kāi)日2006年1月4日 申請(qǐng)日期2003年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月2日
發(fā)明者戴維·F·霍羅賓 申請(qǐng)人:阿馬林神經(jīng)科學(xué)有限公司