專利名稱：格瑞林在治療胃切除個體營養(yǎng)不良中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及格瑞林(ghrelin)及其類似物在治療經(jīng)歷胃切除術(shù)后個體的營養(yǎng)不良中的用途。具體地，本發(fā)明涉及格瑞林或其類似物在增加胃切除個體的體重、身體脂肪重量、食欲和健康中的用途。
胃被認(rèn)為具有幾種重要功能如最初的食物貯藏室并通過與胃酸和胃蛋白酶的混合消化食物。此后，食物以穩(wěn)定的速率逐步地釋放至小腸內(nèi)。世界范圍內(nèi)大量的患者因?yàn)椴煌倪m應(yīng)癥進(jìn)行了胃切除術(shù)。他們大多數(shù)是因?yàn)槭野?ventricle cancer)，一些是因?yàn)槲笣冇绕涫窃趪?yán)重的出血或破裂之后。多年來進(jìn)行了多種不同的胃切除術(shù)。一類用于胃潰瘍的治療是竇切除術(shù)與選擇性迷走神經(jīng)切斷術(shù)相聯(lián)合。此外，根據(jù)Billroth I和II的包含竇切除的外科手術(shù)被用于治療胃潰瘍。另一類用于治療室癌的外科手術(shù)是使用所謂的魯氏Y(Roux-en-Y)完全室切除，食管空腸造口術(shù)(oesophago-Jejunostomi)。胃切除術(shù)，尤其是使用魯氏Y完全室切除，導(dǎo)致外胃迷走神經(jīng)部分的切斷，即，完全迷走神經(jīng)切除。目前，在已進(jìn)行胃癌外科手術(shù)的患者中超過四分之三已進(jìn)行全胃切除術(shù)。
盡管胃切除術(shù)可為腫瘤或胃潰瘍并發(fā)癥提供治療，但是其伴隨各種后續(xù)的病癥。在這些患者中，已觀察到大部分和全部胃切除術(shù)均導(dǎo)致外科手術(shù)后最先的六月內(nèi)體重?fù)p失約10％，已顯示所述損失主要是由于身體脂肪的損失，而身體細(xì)胞的重量和肌肉重量基本上保持不變(Liedman等，WorldJ Surg 21，(1997)，416-20)。還注意到存在食欲缺乏和吸收不良，這也被認(rèn)為是體重?fù)p失的原因。
此外，胃切除的患者還遭受疲勞、骨質(zhì)疏松以及腹瀉的困擾，其被認(rèn)為是由脂肪吸收的能力減少而引起的。而且，因鐵吸收減少和維生素B12的缺乏而導(dǎo)致貧血，維生素B12的缺乏是由于胃中正常產(chǎn)生的內(nèi)因子的缺乏而引起的。
盡管向胃切除患者例行給予維生素B12、鐵和鈣的替換治療，他們?nèi)栽馐芷凇⒅局亓繐p失和骨質(zhì)疏松(Fischer等，Complication of Surgery，InSchwartz(Ed)，Principles of surgery，(1999)，第7版，McGraw-Hill，New York，470-472頁)?？赡艽嬖诘膯栴}是將失去起始貯藏和消化攝取食物的場所。
因此，本發(fā)明的問題在于緩解外科手術(shù)后胃切除患者所遇到的癥狀，特別是提供方法以消除患者無法保持體重和身體脂肪的缺陷。
該問題通過提供格瑞林或其類似物在制備治療胃切除個體的體重和身體脂肪損失的藥物的應(yīng)用而得以解決。
背景技術(shù)：
格瑞林是乙酰化的長度為28氨基酸的肽，其分離自人胃的特殊細(xì)胞，即所謂的A細(xì)胞，其主要位于胃體和胃底的胃腺內(nèi)。它們包含附著于絲氨酸殘基的辛酰酯(Kojima等，Nature，402，(1999)，656-660)。格瑞林及其類似物已知是動物和人體內(nèi)生長激素的釋放劑。這些肽通過7-跨膜G-蛋白偶聯(lián)受體起效，所述受體既存在于下丘腦又存在于腦下垂體中(Smith等，EndocrRev 18，(1997)，621-45)。
格瑞林、其受體和通過該受體起效的合成化合物闡明了獨(dú)特的“反向”順序。在八十年代中，發(fā)現(xiàn)一系列阿片樣肽中的合成六肽能夠從離體的垂體細(xì)胞中釋放生長激素(GH)(Bowers CY，Momany F，Reynolds GA，Chang D，Hong A，Chang K 1980 Structure-activity relationships of a syntheticpentapeptide that specifically releases growth hormone in vitro.Endocrinology106663-667)。由于這一作用不依賴于生長激素釋放激素(GHRH)受體，一些制藥公司著手基于這一六肽GH促分泌素(GHS)及其假定受體的藥物開發(fā)項(xiàng)目。因此在九十年代中期描述了幾類強(qiáng)效的肽和非肽GH促分泌素(BowersCY，Mo-many FA，Reynolds GA，Hong A 1984On the in vitro and in vivoactivity of a new synthetic hexapeptide that acts on the pituitary to specificallyrelease growth hormone.Endocrinology 1141537-1545；PatchettAA，NargundRP，Tata JR，Chen MH，Barn kat KJ，Johnston DB，Cheng K，Chan Ww，Butler B，Hickey G，.1995 Design and biological activities of L-163，191(MK-0677)apotent，orally active growth hormone secretagogue.Proc NatI Acad Sci USA927001-7005；Smith RG，Cheng K，Schoen WR，Pong SS，Hickey G，Jacks T，Butler B，Chan Ww，Chaung LY，Judith F.1993 A nonpeptidyl growth hormonesecretagogue.Science 2601640-1643)。
幾年以后，最終克隆了這些人工GH促分泌素所作用的受體并顯示其是7TM G蛋白偶聯(lián)受體家族成員(Howard AD，F(xiàn)eighner SD，Cully DF，ArenaJP，Liberator PA，Rosenbium Cl，Hamelin M，Hreniuk DL，Palyha OC，AndersonJ，Paress PS，Diaz C，Chou M，Liu KK，Mckee KK，Pong 55，Chaung LY，Elbrecht A，Dashkevicz M，Heavens R，Rigby M，Sirinathsinghji DJ，Dean DC，Melillo DG，Van Der Ploeg LH，1996 A receptor in pituitary and hypothalamusthat functions in growth hormone release.Science 27397-977；Smith RG,VanDer Ploeg LH，Howard AD，F(xiàn)eighner SD，Cheng K，Hickey GJ，Wyvratt MJ，Jr.，F(xiàn)isher MH，Nargund RP，Patchett AA 1997 Peptidomimetic regulation of growthhormone secretion.Endocr Rev 18621-645)。在1999年，最終發(fā)現(xiàn)了這一受體的內(nèi)源性配體，激素格瑞林(Kojima M，Hosoda H，Date Y，Nakazato M，Matsuo H，Kangawa K 1999 ghrelin is a growth-hormone-releasing acylatedpeptide from stomach.Nature 402656-660)。生產(chǎn)格瑞林的主要位點(diǎn)是胃，其中在胃粘膜的經(jīng)典內(nèi)分泌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)該肽。
據(jù)報道格瑞林在胃腸道，特別是胃中起效，因?yàn)槠浔话l(fā)現(xiàn)可刺激胃酸生成和胃腸蠕動(Asakawa等，Gastroenterology 120(2001)，337-345；Masuda等，Biochem Biophys Res.Commun.276(2000)，905-908)。
已知完全胃切除術(shù)患者將循環(huán)格瑞林水平減少至正常個體的30％(Ariyasu等，J.Clin.Ecdocrinol Metab 86(2001)，4753-4817)。在大鼠中，外科手術(shù)除去胃中生成酸的瘤胃和胃底部分后，循環(huán)中的格瑞林水平降低至正常的20％(Dornonville de la Cour等，Regul.Pept.99(2001)，141-150)。
盡管已發(fā)現(xiàn)格瑞林是食欲刺激性信號，但已指出這一刺激效果在迷走神經(jīng)切斷后喪失(Asakawa，supra)，使得大家注意到格瑞林的適當(dāng)作用需要胃的存在。
與一般的觀點(diǎn)相反，本發(fā)明人現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)格瑞林及其類似物在胃切除個體中仍然有效，這里不執(zhí)行胃中的潛在局部效果。這些發(fā)現(xiàn)是令人驚奇的，因?yàn)橐褕蟮栏袢鹆诸愃莆飳ξ故澈拖虑鹉XNPY表達(dá)的刺激取決于未受損的迷走神經(jīng)分布(Asakawa，supra)。
本發(fā)明還包含格瑞林類似物的用途，在本申請上下文中，格瑞林類似物被理解為在體內(nèi)實(shí)質(zhì)上執(zhí)行與格瑞林同樣生理作用的任何肽或非肽化合物。例示性的非肽格瑞林類似物描述于EP 0869 974和EP 1060 190中，其舉例說明了大量格瑞林類似物，該文獻(xiàn)在此引物作為參考。
根據(jù)本發(fā)明，格瑞林可按照熟知的乙酰化28氨基酸肽進(jìn)行應(yīng)用且可通過化學(xué)合成或重組技術(shù)制備。生成肽并向3號絲氨酸連接上辛酰酯的技術(shù)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知?？蛇x擇地，可利用上面參考文獻(xiàn)中提到的任何類似物。優(yōu)選的化合物是具有以下命名的化合物如NN 703[5-氨基-5-methylex-2-烯酸N-甲基-N-((1R)-1-(甲基-((1R)-1-甲基氨基甲酰基-2-苯乙基氨基甲?；?-2-(萘基(naphtalen)-2-基)乙基)酰胺]和MK677[有時稱為MKO677，cf.Drug Discovery Today，vol.4，No.11，11月1999，497-506]或NNC26-1291，或NNC 26-1187是非肽基的生長激素促分泌素，分別描述于WO99/58501和WO 00/26252中，所有文獻(xiàn)在此引入作為參考。
簡言之，本發(fā)明提供了用于長期治療發(fā)生于胃切除術(shù)后的體重?fù)p失、脂肪重量損失等的方法，其中向患者給予藥學(xué)有效量的物質(zhì)，該物質(zhì)給予胃切除患者時導(dǎo)致格瑞林受體激動劑水平增加。
優(yōu)選地，該治療包含增加個體的食欲和增加個體的身體脂肪重量，其最終將改善個體的健康感覺和生活質(zhì)量。
此外，格瑞林和/或其類似物還可與另一種胃衍生因子(stomach derivedfactor)聯(lián)合應(yīng)用，從而改善所觀察的結(jié)果。例示性提到的因子是胰抑素(pacreastatin)、促胃液素、組胺、抵抗素(resistine)、前列腺素如前列腺素E2以及內(nèi)因子。
此外，格瑞林和/或其類似物可與另一種體重和身體脂肪誘導(dǎo)因子聯(lián)合應(yīng)用。例示性提到的因子為黑色素濃縮激素(MCH)、MCH受體激動劑尤其是MCH受體1激動劑、神經(jīng)肽Y(NPY)、NPY受體1激動劑、NPY受體5激動劑、以及包含肽YY(PYY)和PYY(3-36)的NPY受體2拮抗劑、α-促黑色素細(xì)胞激素(α-MSH、α-黑皮質(zhì)素(melanocortin))、黑皮質(zhì)素-3受體(MC3R)拮抗劑、黑皮質(zhì)素-4受體(MC4R)拮抗劑、與刺鼠相關(guān)的肽(Agrp)、Agrp-激動劑、可卡因-和安非他明-調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄(CART)的拮抗劑、阿立新(orexin)受體1和受體2激動劑、生長激素(GH)、GH受體激動劑、胰島素樣生長因子-I(IGF-1)和IGF-1受體1激動劑。
此外，本發(fā)明涉及包含格瑞林或其類似物的組合物，其用于治療胃切除個體中的營養(yǎng)不良，特別是增加其食欲、體重，具體為其身體脂肪重量，以及最終提高健康狀況。例如，可增加脂肪重量的化合物可以基于其在體外脂肪細(xì)胞中刺激葡萄糖合成甘油三酯的能力而鑒定。
該組合物將包含活性成分與可藥用載體或稀釋劑，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)給藥途徑選擇所述載體或稀釋劑。所應(yīng)用的藥物載體或稀釋劑可以是常規(guī)的固態(tài)或液態(tài)載體，例如乳糖、環(huán)糊精、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、硬脂酸鎂、纖維素衍生物、或糖漿、橄欖油、磷脂、聚氧乙烯或僅是水。相似地，載體和稀釋劑可以包含本領(lǐng)域已知的任何緩釋材料，如單獨(dú)或與一種或多種蠟混合的甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。這些組合物可以是常規(guī)的形式，如膠囊、片劑、氣溶膠、溶液、懸浮液或局部給藥。
對于本發(fā)明，劑量將根據(jù)所應(yīng)用的化合物和給藥方式而改變。劑量水平將在每天約0.01μg/kg體重至10mg/kg體重，優(yōu)選在約0.01μg/kg體重至1mg/kg體重范圍內(nèi)，更優(yōu)選在0.1μg至10μg/kg體重范圍內(nèi)。給藥途徑可以是任何有效地將活性化合物輸送至合適或所需作用位點(diǎn)的途徑，如經(jīng)口、經(jīng)鼻、經(jīng)肺部、透皮或胃腸外給藥，優(yōu)選經(jīng)口或經(jīng)肺部的途徑。
目標(biāo)化合物可以以可藥用酸加成鹽，或者合適時以堿金屬或堿土金屬或低級烷基銨鹽給予。據(jù)信這樣的鹽形式顯示了與游離堿形式大致相同的活性順序。適宜的劑量在約50mg至約200mg范圍內(nèi)，優(yōu)選約20mg至約100mg的式I化合物與可藥用載體或稀釋劑混合。
發(fā)明簡介本發(fā)明涉及格瑞林或其類似物在治療經(jīng)歷胃切除術(shù)個體中營養(yǎng)不良癥狀中的用途。具體地，本發(fā)明屬于格瑞林或其類似物或其促分泌素在增加胃切除個體的體重、身體脂肪重量、食欲以及健康中的用途。
附圖簡介在附圖中，

圖1圖示了使用GH促分泌素MK677治療胃切除的大鼠的體重增加；圖2圖示了接受治療的動物顯示了較高的脂肪墊重量；圖3顯示使用GH促分泌素MK677治療胃切除的大鼠增加了下丘腦中NPY mRNA的水平。
定義氨基酸實(shí)體，其包含由包含碳原于或碳原子鏈的中間部分分離的氨基末端部分(NH2)和羧基末端部分(COOH)，其包含至少一個側(cè)鏈或官能團(tuán)。NH2是指存在于氨基酸或肽的氨基末端的氨基，COOH是指存在于氨基酸或肽的羧基末端的羧基。一般的術(shù)語氨基酸包含天然和非天然氨基酸。列于J.Biol.Chem.，2433552-59(1969)并在37C.F.R.，第1.822(b)(2)節(jié)被采用的標(biāo)準(zhǔn)命名法的天然氨基酸屬于列于下面表1中的氨基酸組。非天然氨基酸沒有列于表1中。非天然氨基酸的例子包含那些列于如37C.F.R.，第1.822(b)(4)節(jié)的那些氨基酸，其被全部引入作為參考。其它的非天然氨基酸的例子列于下文。此處描述的氨基酸殘基可以是“D”或“L”異構(gòu)體形式。
表1.天然氨基酸及其代號
食欲通過測量食物的攝入量和通過評價個體對進(jìn)食的渴望以評價個體的食欲。典型地通過一周幾次隨機(jī)給予個體短期問卷而評價食欲(即，饑餓)。典型地，使用不是全部必需的1至5的類似物標(biāo)度，通過回答下面的問題受試者評價他們的饑餓度、對食物的偏見以及渴望進(jìn)食較大量的和不同類型的食物。
氨基酸殘基術(shù)語“氨基酸殘基”意在包含無論是標(biāo)準(zhǔn)氨基酸、非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸還是假氨基酸的氨基酸，其可與至少一種其它種類如2種、例如3種、如多于3種其它種類的氨基酸反應(yīng)。特別地，氨基酸殘基可包含代替游離羧基的?；I和/或代替游離氨基的氨鍵。此外，反應(yīng)后的氨基酸殘基可包含代替酰胺鍵的酯或硫酯鍵。
BMI體重參數(shù)(BMI)測量個體的高度/體重比。其是通過將體重(千克)被高度(米)的平方來除而測定的。BMI的“正常”范圍是19-22。
身體脂肪重量身體脂肪重量可通過例如脂肪折疊技術(shù)測定。在這一技術(shù)中，通過測量身體上代表性位點(diǎn)的皮膚折疊厚度使用鉗型測徑器測量皮下脂肪。然后或者通過從不同測量中增加數(shù)量并將這些值作為個體間相對肥胖程度的指征，或者通過使用已開發(fā)的預(yù)測身體脂肪百分?jǐn)?shù)的數(shù)學(xué)等式的測量，將這些皮膚折疊測量用于計算身體脂肪。
惡病質(zhì)一種消耗紊亂，其癥狀包含體重?fù)p失、肌肉消耗、食欲損失和整體的虛弱。這些癥狀通常與慢性疾病相關(guān)。
濃度等價濃度等價是等價的劑量，其被定義為當(dāng)根據(jù)劑量-應(yīng)答曲線評價時在體外和/或體內(nèi)具有與野生型格瑞林相同應(yīng)答的格瑞林樣化合物的劑量。
胃切除此處，“胃切除”被定義為除去、失去或減少個體的全部或部分胃的大小。所述除去或失去優(yōu)選外科手術(shù)除去。
胃切除個體此處，術(shù)語“胃切除個體”是指經(jīng)歷胃切除術(shù)的個體，即所有或部分所述個體的胃優(yōu)選通過外科手術(shù)的方法經(jīng)受了除去、失去或大小的減少。
格瑞林如Kojima M，Hosoda H，DateY，Nakazato M，Matsuo H，KangawaK 1999 ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach.Nature 402656-660描述的多肽。。人28氨基酸格瑞林具有SEQ ID NO1的氨基酸。
GHS生長激素促分泌素GHS-R 1aGHS受體。GHR-R 1a也表示為GHS 1a。
個體活的動物或人類。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，受試者是哺乳動物，其包含人和非人哺乳動物如狗、貓、豬、牛、綿羊、山羊、馬、大鼠和小鼠。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，該受試者是人。
分離用于描述任何不同的格瑞林樣化合物，此處公開的多肽和核苷酸已經(jīng)從其天然環(huán)境的成分中鑒定和分離和/或恢復(fù)。其天然環(huán)境的污染成分是典型地干預(yù)多肽的診斷或治療應(yīng)用的物質(zhì)，其可以包含酶、激素和其它蛋白質(zhì)的或非蛋白質(zhì)的溶液。在優(yōu)選實(shí)施方案中，將純化該多肽。
“體重?fù)p失”本文中定義為BMI的減少。
“身體脂肪損失”本文中定義為個體總脂肪重量的減少或個體身體脂肪百分比上的減少。
肽多個共價鍵連接的氨基酸殘基限定的序列并通過酰胺鍵連接。該術(shù)語可與寡肽和多肽類似使用。氨基酸可以是天然氨基酸和非天然氨基酸，包含其任何的組合。天然和/或非天然氨基酸可通過肽鍵或非肽鍵連接。術(shù)語肽還包含由本領(lǐng)域已知的化學(xué)或酶催化反應(yīng)誘導(dǎo)的翻譯后修飾物。如果需要，這樣的翻譯后修飾物可在分離前誘導(dǎo)。如此處指定的氨基酸將優(yōu)選是L-立體異構(gòu)體形式?？墒褂冒被犷愃莆锎?0種天然存在的氨基酸。已知幾種這樣的類似物，包含氟代苯并氨酸、正亮氨酸、吖丁啶-2-羧酸、S-氨基乙基半胱氨酸、4-甲基色氨酸等。
此外，應(yīng)指出在氨基酸殘基序列的起點(diǎn)或末端的破折號表示與一個或多個氨基酸殘基的其它序列的肽鍵，或者與氨基末端基團(tuán)如NH2或乙酰基或與羧基末端如COOH的共價鍵。
受體受體是可特異地(非隨機(jī)的)結(jié)合于另一分子的分子，如蛋白、糖蛋白等。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防胃切除個體的體重?fù)p失和相關(guān)病情的格瑞林或其類似物。因此，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防體重和身體脂肪損失、刺激體重增加和增加身體脂肪重量。特別地，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防體重和身體脂肪損失或刺激體重增加，更優(yōu)選治療和/或預(yù)防體重和身體脂肪損失。當(dāng)已停止提高體重?fù)p失且開始獲得體重增加時可觀察到治療和預(yù)防的效果。這可能是由于格瑞林或其類似物在刺激胃切除個體的食欲，從而刺激食物攝入方面的令人驚奇的效果。本發(fā)明還涉及刺激胃切除個體的食欲和刺激食物攝入，更具體地是刺激食欲。本發(fā)明因此涉及預(yù)防或治療胃切除個體的惡病質(zhì)。
在另一個實(shí)施方案中，觀察到格瑞林可用作增加合成代謝因子IGF-1的物質(zhì)，并因此導(dǎo)致體重增加和/或預(yù)防體重和身體脂肪損失。
本發(fā)明一方面屬于格瑞林或其類似物在制備治療胃切除個體的體重和身體脂肪損失的藥物中的用途。
“格瑞林類似物”和“格瑞林樣化合物”在此處可替換使用，并將其理解為是指在體內(nèi)實(shí)質(zhì)上執(zhí)行與格瑞林同樣生理作用的任何肽或非肽化合物。例示性的非肽格瑞林類似物描述于EP 0869 974和EP 1 060 190中，其舉例說明了大量格瑞林類似物，該文獻(xiàn)在此引物作為參考。
優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的格瑞林樣化合物為包含式I定義的結(jié)構(gòu)的化合物Z1-(X1)m-(X2)-(X3)n-Z2，其中Z1是任選存在的保護(hù)基，各X1獨(dú)立選自氨基酸，其中所述氨基酸選自天然存在和合成的氨基酸，X2選自任何天然存在和合成的氨基酸，所述氨基酸被大疏水基團(tuán)修飾，優(yōu)選?；蛑舅?，各X3獨(dú)立選自氨基酸，其中所述氨基酸選自天然存在和合成的氨基酸，其中一個或多個X1和X3任選被大疏水基團(tuán)修飾，優(yōu)選?；蛑舅?，Z2是任選存在的保護(hù)基，m是1-10范圍內(nèi)的整數(shù)n是0或是1-35范圍內(nèi)的整數(shù)。
因此，術(shù)語“格瑞林樣化合物”包含天然存在的28氨基酸人格瑞林，該氨基酸序列示于SEQ ID NO1中，以及天然存在的27氨基酸人格瑞林，該氨基酸序列示于SEQ ID NO2中。因此，本發(fā)明涉及格瑞林或其肽類似物的用途。格瑞林由Kojima描述于Nature(1999)，vol.402，656-660中。
本發(fā)明包含非對映異構(gòu)體及其消旋的和已分離對映體的純形式。格瑞林樣化合物可包含D-氨基酸、L-氨基酸、α-氨基酸、β-氨基酸、γ-氨基酸、天然氨基酸和合成氨基酸等或其組合。優(yōu)選地，格瑞林樣化合物中的氨基酸是L-對映體。
格瑞林樣化合物包含經(jīng)大疏水基團(tuán)修飾的氨基酸。修飾氨基酸的N-末端氨基酸數(shù)目在1-9范圍內(nèi)。因此，m優(yōu)選是選自1-9范圍內(nèi)的整數(shù)，如選自1-8，如選自1-7，如選自1-6，如選自1-5，如選自1-4，如選自1-3，如選自1-2，如2。
修飾氨基酸的N-末端氨基酸數(shù)目更優(yōu)選較低，如選自1-3，如選自1-2。最優(yōu)選2個氨基酸位于修飾氨基酸的N-末端。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中(X1)m在該序列的N-末端部分具有Gly殘基。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方案中(X1)m選自下面的序列Gly，Gly-Ser，Gly-Cys，Gly-Lys，Gly-Asp，Gly-Glu，Gly-Arg，Gly-His，Gly-Asn，Gly-Gln，Gly-Thr，以及Gly-Tyr。
更優(yōu)選的(X1)m選自Gly-Ser和Gly-Cys，最優(yōu)選選自Gly-Ser。
換言之，在優(yōu)選的實(shí)施方案中格瑞林樣化合物選自式IIZ1-Gly-(X1)m-1-(X2)-(X3)n-Z2，式IIIZ1-Gly-Ser-(X2)-(X3)n-Z2，以及式IVZ1-Gly(X2)-(X3)n-Z2。
以及格瑞林樣化合物更加優(yōu)選為式III。
如上所述，X2可以是大疏水基團(tuán)修飾的任何氨基酸。特別地，X2選自修飾的Ser、Cys、Asp、Lys、Trp、Phe、Ile和Leu。更加優(yōu)選地，X2選自修飾的Ser、修飾的Cys和修飾的Lys，以及最優(yōu)選地X2選自修飾的Ser。
此外，(X1)m-(X2)優(yōu)選為Gly-Xaa-Ser*，或Gly-Xaa-Cys*，其中Xaa為任何氨基酸，更優(yōu)選(X1)m-(X2)為Gly-Ser-Ser*或Gly-Ser-Cys*，其中*表示大疏水基團(tuán)修飾的氨基酸殘基。
(X3)n優(yōu)選包含格瑞林片斷的序列，或格瑞林片斷的變體，如人格瑞林。因此，(X3)n優(yōu)選包含選自一種或多種如下所示序列的序列Phe Leu Ser Pro Glu His GlnPhe Leu Ser Pro Glu HisPhe Leu Ser Pro GluPhe Leu Ser ProPhe Leu SerPhe LeuPhe在一個優(yōu)選實(shí)施方案中，格瑞林樣化合物的長度與人格瑞林，即27或28個氨基酸的長度基本相似。因此，n優(yōu)選1-25范圍內(nèi)的整數(shù)，如選自1-24，如選自1-15，如選自1-10，如選自10-25，如選自10-24，如選自15-25，如選自15-24。
(X3)n可以選自任何的格瑞林片斷，如人格瑞林，因此，(X3)n可以選自一種或多種如下所示的序列或其類似物
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu Gln Pro ArgPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu Gln ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys LeuPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla LysPhe Leu Ser Pro Glu Hls Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAlaPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu SerPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys GluPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln ArgPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg ValPhe Leu Ser Pro Glu His Gln ArgPhe Leu Ser Pro Glu His GlnPhe Leu Ser Pro Glu HisPhe Leu Ser Pro GluPhe Leu Ser ProPhe Leu SerPhe LeuPhe或選自
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu Gln Pro ArgPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu Gln ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys LeuPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAlaPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu SerPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys GluPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln ArgPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys ValPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys或選自
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu Gln Pro ArgPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu Gln ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys LeuPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAlaPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys Glu SerLys Lys Pro ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys Glu SerPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg Lys GluPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln Arg LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln Gln ArgPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala Gln GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala或選自
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu Gln Pro ArgPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu Gln ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys LeuPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAlaPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys Glu Ser LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys Glu SerPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys GluPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln ArgPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala在另一實(shí)施方案中，(X3)n優(yōu)選包含或由選自下列的序列組成Phe Leu Ser Pro Glu His GlnPhe Leu Ser Pro Glu HisPhe Leu Ser Pro GluPhe Leu Ser ProPhe Leu SerPhe LeuPhe功能性此處所述的格瑞林樣化合物在GHS受體處有活性。這些化合物可結(jié)合于受體，且優(yōu)選刺激受體活性。
可使用不同的技術(shù)如檢測細(xì)胞內(nèi)GHS受體構(gòu)象的改變、G-蛋白偶聯(lián)活性的改變和/或細(xì)胞內(nèi)信使的改變而測量GHS受體的活性。
一種簡單的測量格瑞林樣化合物激活格瑞林受體能力的測量是測量其EC50，即，化合物可以激活受體信號至該化合物最大作用一半時的劑量。
格瑞林受體可以是在初步細(xì)胞培養(yǎng)物上的內(nèi)源性表達(dá)，例如垂體細(xì)胞，或者在轉(zhuǎn)染格瑞林受體的細(xì)胞上表達(dá)。根據(jù)測試的類型可以使用整體細(xì)胞測試或使用由任一這些細(xì)胞類型制備的膜進(jìn)行測試。
由于格瑞林受體通常被認(rèn)為是與Gq信號通路初步偶聯(lián)，可以使用任何監(jiān)測在Gq/G11信號通路中活性的適宜測試，例如1)測試法，其為了提高信噪比例如通過檢測與例如抗-G□q或-11抗體沉淀結(jié)合的GTPgS結(jié)合進(jìn)行檢測Gq/G11的激活。此測試還可以檢測與其它G-蛋白而不是Gq/11的偶聯(lián)。
2)例如通過測量磷酸肌醇酯的累積，測試磷脂酶C(PLC)的活性的測試法，所述磷脂酶C是一種在通路中最初的下游效應(yīng)分子，所述磷酸肌醇酯是PLC的一種產(chǎn)物。
3)在信號級聯(lián)中更下游的是細(xì)胞內(nèi)貯存的活化鈣(mobilization ofcalcium)4)還可測量更加下游的信號分子如不同類的MAP激酶(p38，jun，等)的活性、NF-K-B轉(zhuǎn)位和CRE驅(qū)動基因翻譯。
替換地，還可向活化格瑞林受體上結(jié)合熒光標(biāo)記抑制蛋白。
在一個實(shí)施方案中，化合物與受體GHS-R 1A的結(jié)合可使用上面描述的測試進(jìn)行測量。
當(dāng)使用上文描述的測試測量，根據(jù)本發(fā)明的格瑞林樣化合物優(yōu)選具有相對于28氨基酸人格瑞林至少約50％，至少約60％，至少約70％，至少約80％，至少約90％的功能活性；和/或EC50高于約1,000，高于約100，或高于約50或高于約10。高于是指效能，因此顯示了為獲得結(jié)合抑制需要較低的量。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，化合物在GHS-R 1A上的效能(EC50)低于約500nM。在另一個實(shí)施方案中，該化合物在GHSR 1A上的效能(EC50)低于約100nM，如低于80nM，例如低于60nM，如低于40nM，例如低于20nM，如低于10nM，例如低于5nM，如低于1nM，例如低于0.5nM，如低于0.1nM，例如低于0.05nM，如低于0.01nM。
在另一個實(shí)施方案中，化合物的離解常數(shù)(Kd)低于500nM。在另一個實(shí)施方案中，配體的離解常數(shù)(Kd)低于100nM，如低于80nM，例如低于60nM，如40nM，例如低于20nM，如低于10nM，例如低于5nM，如低于1nM，例如低于0.5nM，如低于0.1nM，例如低于0.05nM，如低于0.01nM。
可使用存在于不同環(huán)境中的重組制備的GHS受體多肽進(jìn)行結(jié)合測試。這樣的環(huán)境包括，例如，包含由重組核苷酸或天然存在的核苷酸表達(dá)的GHS受體多肽的細(xì)胞提取物和純化細(xì)胞提取物；還包括，例如，應(yīng)用由重組方法或從被引入不同環(huán)境的天然存在的核苷酸制備的純化GHS受體多肽。
使用重組表達(dá)的GHS受體提供了一些優(yōu)勢，如在所定義的細(xì)胞系統(tǒng)中表達(dá)受體的能力，以便在GHS受體處對化合物的應(yīng)答可更易區(qū)別于在其它受體處的應(yīng)答。例如，GHS受體可在如HEK 293、COS7和CHO的細(xì)胞系中表達(dá)，所述細(xì)胞系無法通過表達(dá)載體(expression vector)正常地表達(dá)受體，其中不含表達(dá)載體的相同細(xì)胞系可用作對照。
同一性和同源性術(shù)語“同一性”或“同源性”應(yīng)被解釋為意指如果需要獲得整體序列的最大同一性百分比且不考慮任何保守取代基作為序列同一性的部分，在排序并引入裂隙后，氨基酸殘基在候補(bǔ)序列中的百分比與所比較的相應(yīng)序列的殘基是相一致的。N-或C-末端的伸展或插入均不解釋為降低同一性或同源性。排列的方法和計算機(jī)程序是為本領(lǐng)域所熟知的?？墒褂眯蛄蟹治鲕浖?例如，Sequence Analysis Software Package，Genetics Computer Group，University of Wisconsin Biotechnology Center，1710 University Ave，Madison，Wis 53705)測定序列同一性。這一軟件通過指定對于各種取代、刪除或其它修飾的同源性程度進(jìn)行相似序列的匹配。
與所定義的序列相比，此處指定的一種或多種同源物序列可以有一個或多個氨基酸不同，但可以表現(xiàn)相同的功能，即同源物可視為預(yù)定序列的功能等價物。
如上所述，此處任一預(yù)定序列的同源物可被定義為i)同源物包含能夠被受體識別的氨基酸序列，所述受體可以識別28氨基酸人格瑞林，優(yōu)選乙?；?8氨基酸人格瑞林，和/或ii)同源物包含能夠選擇性結(jié)合于GHS-R la的氨基酸序列，和/或
iii)與28氨基酸人格瑞林，優(yōu)選乙?；?8氨基酸人格瑞林相比較，同源物具有對GHS-R 1a基本相似或更高的親和力。
在上面的實(shí)施方案中，28氨基酸人格瑞林具有示于SEQ ID NO1中的序列，且當(dāng)乙?；瘯r是在3位進(jìn)行乙酰化。
此處所用抗體可以是與格瑞林的N-末端部分或C-末端部分結(jié)合的抗體，優(yōu)選與格瑞林N-末端部分結(jié)合的抗體。該抗體可以是如Ariyasu等在“Delayed short-term secretory regulation of ghrelin in obese animalsEvidensed by a specific RIA for the active form of ghrelin，Endocrinology143(9)3341-3350，2002”中描述的抗體。
同源物的例子包含一個或多個保守的氨基酸取代基，所述氨基酸取代基在預(yù)定氨基酸的相同組的范圍內(nèi)包含一個或多個保守的氨基酸取代基，同源物或者包含多種保守的氨基酸取代基，其中各保守取代基通過在預(yù)定氨基酸的不同組的范圍內(nèi)進(jìn)行取代而生成。
同源物因此可包含相互獨(dú)立的保守取代基，其中所述同源物的至少一個甘氨酸(Gly)被選自丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸的氨基酸和其同源物所獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個所述丙氨酸(Ala)被選自甘氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸的氨基酸和其同源物所獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個纈氨酸(Val)被選自甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸和異亮氨酸的氨基酸和其同源物獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個所述亮氨酸(Leu)被選自甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸和異亮氨酸的氨基酸和其同源物獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個異亮氨酸(Ile)被選自甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸和亮氨酸的氨基酸和其同源物獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個所述天冬氨酸(Asp)被選自谷氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺的氨基酸和其同源物獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個所述苯丙氨酸(Phe)被選自酪氨酸、色氨酸、組氨酸、脯氨酸的氨基酸，優(yōu)選選自酪氨酸和色氨酸，以及其同源物獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個所述酪氨酸(Tyr)被選自苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸、脯氨酸的氨基酸，優(yōu)選選自苯丙氨酸和色氨酸，以及其同源物獨(dú)立地取代，其中所述片斷中至少一個所述精氨酸(Arg)被選自賴氨酸和組氨酸的氨基酸和其同源物獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個賴氨酸(Lys)被選自精氨酸和組氨酸的氨基酸和其同源物獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個所述天冬酰胺(Asn)被選自天冬氨酸、谷氨酸和谷氨酰胺的氨基酸和其同源物獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個谷氨酰胺(Gln)被選自天冬氨酸、谷氨酸和天冬酰胺的氨基酸和其同源物獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個脯氨酸(Pro)被選自苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和組氨酸的氨基酸和其同源物獨(dú)立地取代，其中所述同源物的至少一個所述半胱氨酸(Cys)被選自天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的氨基酸所取代。
保守取代基可引入優(yōu)選預(yù)定序列的任何位置。但是引入非保守的取代基也可能是所期望的，特別是但不限于在任何一個或多個位置引入非保守取代基。
其中導(dǎo)致形成功能等價同源物序列的非保守取代基例如i)在極性上實(shí)質(zhì)不同，例如用非極性側(cè)鏈(丙氨酸、亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)的殘基來取代具有極性側(cè)鏈的殘基或帶電荷的氨基酸，或者用帶電荷的或極性殘基來取代非極性殘基，其中所述極性側(cè)鏈如甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺，所述帶電荷的氨基酸如天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸或賴氨酸；和/或ii)實(shí)質(zhì)改變其對多肽骨架定位的作用如使用其它殘基取代為或來取代(substitution of or for)脯氨酸或谷氨酸；和/或iii)在電荷上實(shí)質(zhì)不同，例如用負(fù)電荷殘基如谷氨酸或天冬氨酸來取代正電荷殘基如賴氨酸、組氨酸或精氨酸(反之亦然)；和/或iv)在立體大小上實(shí)質(zhì)不同，例如用大殘基如組氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸取代一種小側(cè)鏈的氨基酸例如丙氨酸、天冬氨酸或絲氨酸(反之亦然)。
在一個實(shí)施方案中氨基酸取代是基于其疏水和親水值以及氨基酸側(cè)鏈取代基的相對相似性而進(jìn)行的，所述相似性包含電荷、大小等。考慮各種前述特征的例示性氨基酸取代為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知且包含精氨酸和賴氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；絲氨酸和蘇氨酸；谷氨酸和天冬酰胺；以及纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸。
在一個優(yōu)選實(shí)施方案中，結(jié)合區(qū)包含與SEQ ID NO 1至少有60％同源性的氨基酸序列的同源物。
更優(yōu)選地，同源性是與SEQ ID NO 1至少有65％，如至少70％，如至少75％，如至少80％，如至少85％，如至少90％，如至少95％，如至少98％的同源性。
在一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述百分比涉及與SEQ ID NO1相比同源物序列的相一致。
SEQ ID NO1的同源物可以是27氨基酸人格瑞林SEQ ID NO2、大鼠格瑞林SEQ ID NO3。其它同源物可以是描述于EP 1197496(Kangawa)的變異體，在此并入作為參考。
大的疏水基根據(jù)本發(fā)明的格瑞林樣化合物的大疏水基是當(dāng)3位的絲氨酸殘基被大疏水基修飾時，能提供與GHS-R la具有結(jié)合親和力的脫乙酰28氨基酸人格瑞林的任意大疏水基。
當(dāng)所修飾的氨基酸包含例如-OH、-SH、-NH或-NH2作為其側(cè)鏈取代基時，優(yōu)選通過?；@樣的取代基而形成基團(tuán)。因此連接的方式可以選自酯、醚、硫酯、硫醚、酰胺和尿素。
例如，如果修飾的氨基酸是絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸或羥脯氨酸，該氨基酸在側(cè)鏈具有羥基。如果修飾的氨基酸是半胱氨酸，該氨基酸在側(cè)鏈具有巰基。如果修飾的氨基酸是賴氨酸、精氨酸、組氨酸、色氨酸、脯氨酸或羥脯氨酸，其在側(cè)鏈具有氨基或亞胺基團(tuán)。
因此上述的羥基、巰基、氨基和亞胺基可以是化學(xué)修飾的。也就是說，羥基或巰基可以被醚化、酯化、硫醚化或硫酯化。亞胺基團(tuán)可以被亞胺醚化、亞胺硫醚化或烷基化。氨基可以被酰胺化、硫酰胺化或氨基甲?；?carbamidate)。
此外，巰基可被二硫化，亞胺基可被酰胺化或硫酰胺化，以及氨基可以被烷化或硫代氨基甲?；?。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，修飾的氨基酸是通過酯鍵與連接于疏水基的偶聯(lián)絲氨酸。
疏水基可以是飽和或不飽和的包含一個或多個碳原子的烷基或?；娜我换鶊F(tuán)。在一個實(shí)施方案中，大疏水基是?；?，其包含通過從有機(jī)酸、有機(jī)磺酸或有機(jī)磷酸中除去羥基所形成的基團(tuán)。有機(jī)羧酸包含例如脂肪酸，并且其碳原子數(shù)優(yōu)選1至35。在有機(jī)磺酸或有機(jī)磷酸中，其碳原子數(shù)優(yōu)選1至35。
因此，?；鶅?yōu)選選自C1-C35酰基，如C1-C20?；鏑1-C15?；鏑6-C15?；?，如C6-C12?；鏑8-C12?；?。
更優(yōu)選地，?；x自C7?；?、C8?；9?；?、C10酰基、C11?；虲12酰基。這樣的酰基可由辛酸(優(yōu)選辛酸)(octanoic acid(preferably caprylicacid))、癸酸(優(yōu)選癸酸)(decanoic acid(preferably capric acid))或十二酸(優(yōu)選月桂酸)以及其單烯或多烯脂肪酸形成。
在一個實(shí)施方案中，酰基選自C8?；虲10?；?。這樣的?；梢杂尚了?優(yōu)選辛酸)或癸酸(優(yōu)選癸酸)形成。
在一個實(shí)施方案中，?；x自C7酰基、C9酰基和C11?；?，如選自C9?；虲11酰基。
此外，修飾的氨基酸可以是任一氨基酸，其中基團(tuán)如EP 1197496(Kangawa)所描述的進(jìn)行修飾，其在此引入作為參考。
保護(hù)基團(tuán)根據(jù)本發(fā)明的格瑞林樣化合物還可在N-末端或C-末端或兩端包含保護(hù)基。
在體內(nèi)條件下，共價鍵連接于N-末端氨基酸的保護(hù)基減少氨基末端的反應(yīng)性。氨基保護(hù)基包含-C1-10烷基、-C1-10取代烷基、-C2-10烯基、-C2-10取代烯基、芳基、-C1-6烷基芳基、-C(O)-(CH2)1-6-COOH、-C(O)C1-6烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-O-C1-6烷基或-C(O)-O-芳基。優(yōu)選地，氨基末端保護(hù)基是乙?；?、丙基、丁二?；⑵S基、芐氧羰基或叔丁氧羰基。
在體內(nèi)條件下，共價鍵連接于C-末端羧基的保護(hù)基減少羧基末端的反應(yīng)性。羧基末端保護(hù)基優(yōu)選連接于最后氨基酸的a-羰基。羧酸末端保護(hù)基包含酰胺、甲酰胺和乙酰胺。
共軛物格瑞林樣化合物還可以以與另一實(shí)體共軛的形式給予，從而例如延長其半衰期。
在一個實(shí)施方案中，共軛物是格瑞林或其衍生物或同源物和Ac-RYY(RK)(WI)RK)-NH2的共軛物，其中括號表示可允許氨基酸殘基的變化。共軛物中肽的例子還可見于美國專利申請2003040472中。
藥物治療指征在本發(fā)明的一個方面，格瑞林或其類似物用于制備供需要這樣治療的個體使用的藥物。優(yōu)選地，所述藥物用于治療胃切除個體的體重和/或身體脂肪的損失。在另一個實(shí)施方案中，該治療刺激食欲和/或防止個體的營養(yǎng)不良。術(shù)語“營養(yǎng)不良”是指個體無法消耗、吸收或維持體內(nèi)足夠水平的一種或多種大量或微量營養(yǎng)物以保持身體健康。在另一個等同的實(shí)施方案中，該治療包含改善胃切除個體的健康感覺和生活質(zhì)量。
在此處描述的任一治療中，格瑞林或其類似物可與一種或多種其它胃衍生因子聯(lián)合使用。這一其它的胃衍生因子可包含任何激素、?；蚍酋；碾?、氨基酸衍生物、核苷酸、脂肪酸衍生物、碳水化合物或其它衍生于或從胃分泌的物質(zhì)，以及可優(yōu)選(但不排除)下列物質(zhì)胰抑素、胃泌素、組胺、抵抗素、前列腺素如前列腺素E2、內(nèi)因子。
除了“胃衍生因子”格瑞林還可用于與任何作用于“起源于胃的因子”相同受體的合成的低或高分子量激動劑聯(lián)合使用。
藥物組合物雖然本發(fā)明的化合物或鹽可以以原化合物的形式給予，但是其優(yōu)選存在于藥物組合物中。因此，本發(fā)明還提供用于醫(yī)學(xué)用途的藥物組合物，其包含如此處定義的格瑞林或其類似物或可藥用鹽，以及可藥用載體。所述的本發(fā)明的組合物優(yōu)選以任何方式給藥至個體以獲得有益的效果，優(yōu)選通過刺激食欲和/或防治營養(yǎng)不良，和/或改善個體的健康感覺或生活質(zhì)量。在一個優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物提供經(jīng)口、經(jīng)鼻、經(jīng)肺、透皮或胃腸外途徑給予。更優(yōu)選地，該組合物提供經(jīng)口或經(jīng)肺途徑給予。還可以考慮其它可有效地將藥物遞送至靶點(diǎn)或?qū)⑺幬镆胙旱慕o藥方法。
本發(fā)明的化合物可與至少一種其它化合物一起給予。這些化合物可以同時給予，或按照分開的組合物或者組合于單一劑型中的形式給予，或者相繼給予。
在一個優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)為了治療目的向個體給予時，該藥物組合物不是免疫原，除非其目的是誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。
優(yōu)選地，該組合物包含用于治療胃切除個體的體重和身體脂肪損失的格瑞林或其類似物或可藥用鹽和可藥用載體、媒介物和/或賦形劑和/或轉(zhuǎn)運(yùn)分子。
轉(zhuǎn)運(yùn)分子通過合并于或瞄向本發(fā)明化合物而起作用?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適宜的轉(zhuǎn)運(yùn)分子。轉(zhuǎn)運(yùn)分子例如可以是脂質(zhì)體、微囊和/或微球。
許多方法可用于制備脂質(zhì)體，如在例如Szoka等，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9467(1980)，美國專利4,235,871，4,501,728和4,837,028中所描述的，所有文獻(xiàn)在此引入作為參考。
微囊可通過表面活性劑(包含疏水部分和一個或多個離子或強(qiáng)親水基團(tuán)的分子)在水溶液中形成。隨著固體表面活性劑濃度的增加，其吸附于空氣/水或玻璃/水界面的單層充填得如此緊密，以至進(jìn)一步的占據(jù)需要過度壓縮已成為兩個單層的表面活性劑分子。進(jìn)一步增加溶解的表面活性劑的量使其超過這一濃度，導(dǎo)致等量于新分子的量聚集成微囊。這一過程起始于被稱為“臨界微囊濃度”的特征化濃度。
在稀釋的表面活性劑溶液中形成的微囊的形狀是近乎球形的。表面活性劑分子的極性端排列在球形殼的外面而他們的烴鏈朝向中心，形成微囊的球核。烴鏈隨機(jī)盤繞糾纏且微囊內(nèi)部具有非極性的液體樣特性。在聚氧乙烯非離子性清潔劑的微囊中，聚氧乙烯部分朝向外面并被水浸潤。這一排列是能量有利的，因?yàn)橛H水端基團(tuán)與水接觸，且烴部分離開了水媒介并被極性端基團(tuán)部分地掩蔽而不與水接觸。位于微囊內(nèi)的表面活性劑分子的該烴末端相互間通過弱的范德華力相互作用。
微囊的大小或其聚集的數(shù)目很大程度上受幾何因素支配。烴核的半徑不能超過表面活性劑伸展的烴鏈的長度。因此，增加該鏈的長度或增加同源系列提高了球形微囊的聚集數(shù)目。如果表面活性劑的濃度增加到超過某一百分比以及如果加入電解液(離子性表面活性劑時)或提高溫度(非離子性表面活性劑時)，微囊的大小增加。在這些情況下，微囊過大而無法維持球形變成橢圓體、圓柱體或最終成為片形。
本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常用表面活性劑可用于本發(fā)明的微囊。適宜的表面活性劑包含月桂酸鈉、油酸鈉、月桂基硫酸鈉、八氧乙烯乙二醇單十二烷基醚、辛苯聚醇9(octoxynol 9)和PLURONIC F-127(Wyandotte ChemicalsCorp.)。優(yōu)選的表面活性劑為與靜脈內(nèi)注射相適合的非離子性聚氧乙烯和聚氧丙烯清潔劑，如吐溫-80、PLURONIC F-608、正辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷等。此外，磷脂如那些描述可用于制備脂質(zhì)體的磷脂也可用于形成微囊。
此處所用的用于指示組合物、載體、稀釋劑和藥物的術(shù)語“可藥用”、“生理上可耐受的”以及其語法上的變化可以相互替換使用，并代表可給予或施于個體而不產(chǎn)生不合意的生理作用如惡心、頭昏、心嘈等的物質(zhì)。
本領(lǐng)域熟知包含溶解的或分散的活性成分的藥物組合物的制備。典型地，這樣的組合物被制備為無菌注射液或懸浮液，水溶液或非水溶液，但也可制備適用于溶液或懸浮液的固體形式，所述固體形式在應(yīng)用前溶于液體中。還可被制備為乳劑。
活性成分可與賦形劑相混合，所述賦形劑為可藥用并與活性成分相兼容的，所述賦形劑的用量應(yīng)適用于此處描述的治療方法。適宜的賦形劑為例如水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等或其組合物。此外，如果需要，該組合物可包含少量的輔助物質(zhì)如潤濕劑或乳化劑、pH緩沖劑等以增強(qiáng)活性成分的效果。
本發(fā)明的藥物組合物可包含該化合物可藥用鹽?？伤幱名}包含酸加成鹽(與多肽的游離氨基形成的)。
這樣的鹽包含可藥用加成鹽、可藥用金屬鹽、銨鹽和烷基化銨鹽。酸加成鹽包含無機(jī)酸以及有機(jī)酸的鹽。適宜無機(jī)酸的代表性的例子包含鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸、硫酸和硝酸等。適宜的有機(jī)酸的代表性的例子包含甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、安息香酸、肉桂酸、檸檬酸、富馬酸、乙醇酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水楊酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、酒石酸、抗壞血酸、撲酸(pamoic)、二甲撐基水楊酸、乙烷二磺酸、葡糖酸、檸康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕櫚酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、對-氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸和對甲苯磺酸等?？伤幱脽o機(jī)或有機(jī)酸加成鹽的其它例子包含列于J.Pharm.Sci.1977，66，2中的可藥用鹽，其在此引入作為參考。金屬鹽的例子包含鋰、鈉、鉀和鎂鹽等。
銨和烷基化的銨鹽的例子包含銨、甲基銨鹽、二甲基銨鹽、三甲基銨鹽、乙基銨鹽、羥乙基銨鹽、二乙基銨鹽、丁基銨鹽和四甲銨鹽等。
游離羧基所形成的鹽還可以源自于無機(jī)堿如鈉、鉀、銨、鈣或鐵的氫氧化物，以及有機(jī)堿如異丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等。
在本發(fā)明上下文中，還包含在本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物或其可藥用酸加成鹽是其任何的水合物(水合形式)。
液體組合物還可以包含除水以外的液體相。這些其它的液體相的例子是甘油、植物油如棉子油、有機(jī)酯如油酸乙酯和水油乳液(water-oilemulsions)。
合適的藥物載體包含惰性固體稀釋劑或填料，無菌的水溶液和各種的有機(jī)溶劑。固體載體的例子為乳糖、石膏粉、蔗糖、環(huán)糊精、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸或纖維素的低級烷基醚。液體載體的例子為糖漿、花生油、橄欖油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧乙烯或水。
然后將通過組合本發(fā)明的化合物和可藥用載體所形成的藥物組合物以各種適宜于公開的給藥途徑方便地給予。該組合可方便地存在于通過藥物領(lǐng)域已知的方法所形成的單元劑型中。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，該組合物包含格瑞林樣化合物或其鹽作為凍干物，以及該組合物進(jìn)一步包含溶劑。在另一個實(shí)施方案中，該組合物是格瑞林樣化合物或其鹽。優(yōu)選地，溶劑可以是任何適宜的溶劑，如此處描述的，且優(yōu)選的溶劑是鹽水或生理緩沖液樣的磷酸緩沖液。
本發(fā)明還涉及制備包含本發(fā)明的化合物的藥物或藥物組合物的方法，所述方法包含混合至少一種如上述的格瑞林樣化合物和生理上可接受的載體。
在另一方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含作為活性成分的如上述的化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體。
從而，該組合物還可包含如上述的轉(zhuǎn)運(yùn)分子。
在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明的化合物可與其它已知增加體重的藥學(xué)活性物質(zhì)組合給藥，所述物質(zhì)例如黑色素濃縮激素(MCH)、MCH受體激動劑尤其是MCH受體1激動劑、神經(jīng)肽Y(NPY)、NPY受體1激動劑和NPY受體5激動劑、包含肽YY(PYY)和PYY(3-36)的NPY受體2拮抗劑、α-促黑色素細(xì)胞激素(α-MSH，α-黑皮質(zhì)素)、黑皮質(zhì)素-3受體(MC3R)拮抗劑、黑皮質(zhì)素4受體(MC4R)拮抗劑、與刺鼠相關(guān)的肽(Agrp)、Agrp激動劑、可卡因-和安非他明-調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄(CART)的拮抗劑、阿立新受體1和受體2激動劑、生長激素(GH)、GH受體激動劑、和胰島素樣生長因子-1(IGF-1)、IGF-1受體1激動劑或其它的藥學(xué)活性物質(zhì)。此外，其它活性物質(zhì)可以包含其它胃衍生因子包含但不限于，一種或多種胃泌素、胰抑素、組胺、抵抗素、前列腺素如前列腺素E2、內(nèi)因子。其組合可以是用分份試劑盒(kit-in-part)系統(tǒng)的形式，其中組合的活性物質(zhì)可以同時、相繼或分別給予。
經(jīng)口給予的組合物本發(fā)明的化合物可被配制為多種經(jīng)口劑型。藥物組合物和劑型可包含本發(fā)明的化合物或其可藥用鹽或其結(jié)晶形式作為活性成分?？伤幱幂d體可以是固體或液體。固體性質(zhì)的制劑包含粉劑、片劑、丸劑、膠囊、扁囊劑、栓劑和分散顆粒。固體載體可以是一種或多種物質(zhì)，其可用作稀釋劑、芳香劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、防腐劑、潤濕劑、片劑的崩解劑或成膠囊的材料。
優(yōu)選地，該組合物將含有約0.5％至75％重量份的本發(fā)明的化合物，其余由適宜的藥物賦形劑組成。對于經(jīng)口給藥，這樣的賦形劑包含藥物級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石粉、纖維素、凝膠、碳酸鎂等。
在粉劑中，載體是細(xì)分的固體，其是與細(xì)分的活性成分的混合物。在片劑中，該活性成分與具有必需的粘合能力的載體以適宜的比例混合并壓縮至所需的形狀和大小。該粉劑和片劑優(yōu)選包含一至七十百分比的活性化合物。適宜的載體是碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點(diǎn)的臘、可可油等。術(shù)語“制劑”意在包含活性化合物與作為載體提供膠囊的包封材料的組合物以及載體或不含載體，其中所述膠囊中為活性組分，所述組合物被與其相關(guān)聯(lián)的載體所包圍。相似地，包含扁囊劑和錠劑。片劑、粉劑、膠囊、丸劑、扁囊劑和錠劑可以是適于經(jīng)口的固體形式。
根據(jù)本發(fā)明的滴劑可以包含無菌或非無菌水或油的溶液或懸浮液，并可通過在適宜的水溶液中溶解活性成分而制備，任選包含抗細(xì)菌劑和/或抗真菌劑和/或任何其它適宜的防腐劑，以及任選包含表面活性劑。然后，所得溶液可經(jīng)過濾澄清，轉(zhuǎn)移至適宜的容器后密封并經(jīng)高壓滅菌或維持在98-100℃半小時?？蛇x擇地，該溶液可經(jīng)過濾滅菌并無菌地轉(zhuǎn)移至容器中。適用于滴劑的抗細(xì)菌劑和抗真菌劑的例子為硝酸苯汞或乙酸苯汞(0.002％)、笨扎氯銨(0.01％)和氯己啶(0.01％)。油溶液制劑中適宜的溶劑包含乙二醇、稀釋的乙醇和丙二醇。
還包含固體形式的制劑，所述制劑意在使用前不久轉(zhuǎn)變成經(jīng)口的液體形式的制劑。這樣的液體形式包含溶液、懸浮液和乳液。這些制劑可包含活性成分以及矯色劑、香味劑、穩(wěn)定劑、緩沖液、人工的和天然的甜味劑、分散劑、增稠劑、增溶劑等。
其它適用作經(jīng)口給予的形式包含液體形式的制劑，其包含乳劑、糖漿劑、酏劑、水溶液、含水懸浮液、貼牙劑、凝膠潔牙劑、口香糖，或者意在使用前不久轉(zhuǎn)變成液體形式制劑的固體形式制劑。乳劑可在丙二醇水溶液中制備或可包含乳化劑如卵磷脂、山梨聚糖單油酸酯或阿拉伯膠。水溶液可通過在水中溶解活性成分并加入適宜的矯色劑、芳香劑、穩(wěn)定劑和增稠劑而制備。含水懸浮液可通過在水中分散細(xì)分的活性成分和粘性物質(zhì)而制備，所述粘性物質(zhì)如天然或合成的樹膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和其它熟知的懸浮劑。固體形式的制劑包含溶液、懸浮液和乳液，并可包含活性成分以及矯色劑、芳香劑、穩(wěn)定劑、緩沖液、人工的和天然的甜味劑、分散劑、增稠劑、增溶劑等。
胃腸外給藥的組合物本發(fā)明的組合物可被配制為胃腸外給藥(例如通過注射，例如快速注射或持續(xù)灌注)并可以按照單位劑量形式存在于添加防腐劑的安瓿、預(yù)填充的注射器、小容積的輸液或多劑量容器中。該組合物可以采取在油或水媒介劑中的懸浮液、溶液或乳液的形式，例如在聚乙二醇的水溶液中。油或非水載體、稀釋劑、溶劑或媒介劑的例子包含丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄欖油)以及可注射的有機(jī)酯(例如，油酸乙酯)，并且可以包含配制試劑如保存、潤濕、乳化或懸浮、穩(wěn)定和/或分散的試劑?？蛇x擇地，該活性成分可以為通過無菌分離了無菌固體或通過冷凍干燥溶液而獲得粉末形式，所述粉末在使用前與適宜的媒介劑例如無菌無熱原的水進(jìn)行配制。如果必要的話，水溶液應(yīng)該是合適的緩沖液，并且該液體稀釋劑首先加入足夠的鹽水或葡萄糖使其等滲。該水溶液特別適用于靜脈注射、肌肉注射、皮下注射和腹膜內(nèi)給藥。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可容易地得到所有應(yīng)用無菌的水介質(zhì)。
格瑞林或其類似物或可藥用鹽的溶液，(和例如抗原決定簇和蛋白酶抑制劑)可以在水或鹽水中制備，并且任選與無毒的表面活性劑混合。用于靜脈注射或動脈內(nèi)給藥的組合物可能包含無菌水溶液，同時可以包含緩沖液、脂質(zhì)體、稀釋劑以及其它合適的添加劑。
適用于腸胃外組合物的油包含石油、動物、植物或合成的油類。適用于這些組合物的特定油的例子包含花生、大豆、芝麻、棉籽、谷物、橄欖、凡士林油和礦物中的油。適用于腸胃外組合物的脂肪酸包含油酸、硬脂酸和異硬脂酸。油酸乙酯和肉豆蔻酸異丙酯是合適的脂肪酸酯。
適用于腸胃外組合物的脂肪酸鹽包含脂肪酸的堿金屬、銨和三乙醇胺鹽，合適的清潔劑包含(a)陽離子清潔劑例如二甲基二烷基銨鹵化物、和烷基吡啶鎓鹵化物；(b)陰離子清潔劑例如烷基、芳基和烯烴的磺酸鹽，烷基、烯烴、醚和單甘油酯的硫酸鹽和磺基丁二酸鹽，(c)非離子的清潔劑例如脂肪胺氧化物、脂肪酸烷醇胺和聚氧乙烯丙烯共聚物，(d)兩性清潔劑如烷基-β-氨基丙酸和2-烷基-咪唑啉季銨鹽，以及(e)其混合物。
在溶液中，該胃腸外組合物典型地將包含約0.5至約25％重量份的活性成分。可以使用防腐劑和緩沖液。為了使注射位點(diǎn)的刺激最小化或完全消除，這樣的組合物可包含一種或多種親水-親脂平衡(HLB)約12至17的非離子性表面活性劑。這樣的組合物中表面活性劑的量典型地在約5至約15％重量份范圍內(nèi)。適宜的表面活性劑包含聚乙烯山梨聚糖脂肪酸酯如山梨聚糖單油酸酯以及環(huán)氧乙烯和疏水基形成的高分子量加合物，所述加合物可通過環(huán)氧丙烯與丙二醇縮合而形成。該胃腸外組合物可存在于單一劑量或多劑量的密封容器中，如安培和小瓶，并可在冷凍干燥(凍干)條件下貯存，在使用前僅需要加入無菌液體賦形劑例如水用于注射。臨時的注射溶液和懸浮液可由先前所述種類的無菌粉末、顆粒和片劑制備。
適于注射或灌注的藥物劑型可包含無菌水溶液或分散劑，所述的無菌水溶液或分散劑包含通過包封于脂質(zhì)體中而適于給予的活性成分。在所有的情況中，最終的劑型在制備和貯存條件下必需是無菌的、液態(tài)的且穩(wěn)定的。
無菌注射液通過在適當(dāng)?shù)娜軇┲泻喜⑺枇康母袢鹆只蚱漕愃莆锘蚩伤幱名}以及各種其它上面列舉的所需成分后，過濾滅菌而制備。
局部給藥的組合物本發(fā)明的化合物還可局部給藥。局部給藥的區(qū)域包含皮膚表面以及直腸、鼻腔、口腔和喉嚨的粘膜組織。經(jīng)由皮膚和粘膜局部給藥的組合物不應(yīng)增加刺激的征兆，如腫脹或發(fā)紅。
該局部組合物可以包含適用于局部給藥的可藥用載體。因此，該組合物可以為例如懸浮液、溶液、軟膏、洗劑、乳劑、泡沫、氣霧劑、噴霧劑、栓劑、植入劑、吸入劑、片劑、膠囊、干粉、糖漿、香膏(balm)或錠劑。制藥工業(yè)中熟知這樣的組合物的制備方法。
本發(fā)明的化合物可被配制成表皮的局部給藥如軟膏、乳膏或洗劑和透皮貼劑。配制軟膏或乳膏時可以使用例如水性或油性基質(zhì)并加入適宜的增稠和/或凝膠劑。配制洗劑時可以使用水性或油性基質(zhì)，且通常還將包含一種或多種乳化劑、穩(wěn)定劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑或矯色劑。適用于在口腔中局部給藥的組合物包含錠劑，所述錠劑包含在芳香的基質(zhì)中的活性試劑，該基質(zhì)通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠；藥錠包含在惰性基質(zhì)如凝膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中的活性成分；漱口劑包含在適宜的液體載體中的活性成分。
根據(jù)本發(fā)明的乳膏、軟膏或貼劑是用于外敷的活性成分的半固體組合物。它們是通過混合細(xì)粉或粉末形式的活性成分與具有適宜的機(jī)械性質(zhì)的輔料以及油脂的或非油脂的基質(zhì)混合而制備的，其中所述活性成分單獨(dú)存在或在含水或不含水液體的溶液或懸浮液中。這一基質(zhì)可以包含烴如硬質(zhì)、軟質(zhì)或液態(tài)的石蠟、甘油、蜂蠟、金屬皂；如粘液；天然來源的油如杏仁、谷物、落花生、蓖麻或橄欖油；羊毛脂或其衍生物或者脂肪酸如硬脂酸或油酸連同醇如丙二醇或大粒凝膠。該組合物可以并入任何適宜的表面活性劑如陰離子型、陽離子型或非離子表面活性劑如山梨聚糖酯或其聚乙二醇衍生物。還可包含懸浮劑如天然樹膠、纖維素衍生物或無機(jī)物如silicaceoussilica，以及其它成分如羊毛脂。
根據(jù)本發(fā)明的洗劑包含那些適用于皮膚或眼睛的洗劑。眼用洗劑可以包含無菌水溶液，任選包含抗菌素并可通過相似于制備滴劑的方法制備。用于皮膚的洗劑或搽劑還可包含快速干燥和冷卻皮膚的試劑如乙醇和丙酮，和/或潤濕劑如甘油或油如蓖麻油或花生油。
此處描述的藥物試劑-化學(xué)調(diào)節(jié)物復(fù)合物可透皮給藥。透皮給藥典型地包含將用于經(jīng)皮通道遞送的藥物釋放入患者的體循環(huán)。該皮膚位點(diǎn)包含用于透皮給藥的解剖區(qū)域并包含前臂、腹部、胸部、背部、臀部、乳頭區(qū)域等。
透皮釋放通過使患者皮膚接觸復(fù)合物源較長的時間而得以實(shí)現(xiàn)。透皮貼劑具有增加提供控釋藥物-化學(xué)調(diào)節(jié)物復(fù)合物至體內(nèi)的優(yōu)勢。參見Transdermal Drug DeliveryDevelopmental Issues and Research Initiatives，Hadgraft and Guy(eds.)，Marcel Dekker，Inc.，(1989)；Controlled Drug DeliveryFundamentals and Applications，Robinson and Lee(eds.)，Marcel Dekker Inc..(1987)；and Transdermal Delivery ofDmgs，1-3卷，Kydonjeus and Berner(eds.)，CRC Press，(1987)。這樣的劑型可通過溶解、分散或?qū)⑺幬?化學(xué)調(diào)節(jié)物復(fù)合物并入適當(dāng)媒介如彈性基質(zhì)材料中而進(jìn)行制備。還可應(yīng)用吸收增強(qiáng)劑來提高化合物穿過皮膚的通量(flux)。其通量速率可通過提供速率控制膜或?qū)⒒衔锓稚⒂诰酆衔锘|(zhì)或樹膠中而得以控制。
許多類型的透皮貼劑可用于此處描述的方法中。例如，簡單的粘連貼劑可由背板材料和丙烯酸酯膠粘劑制備。藥物-化學(xué)調(diào)節(jié)物復(fù)合物和任何增強(qiáng)劑被配制入粘性熔鑄溶液中并使其徹底混合。將該溶液直接熔鑄在背板材料上并在烘箱中蒸發(fā)熔鑄溶劑，形成粘連膜?？筛郊俞尫乓r墊以完成該系統(tǒng)。
可選擇地，聚氨基甲酸乙酯基質(zhì)貼劑可用于釋放藥物-化學(xué)調(diào)節(jié)物復(fù)合物。該貼劑的各層包含背板、聚氨基甲酸乙酯藥物/增強(qiáng)劑基質(zhì)、膜、膠粘劑和釋放襯墊。在室溫處理下固化聚氨基甲酸乙酯前聚物制備該聚氨基甲酸乙酯基質(zhì)。加入水、醇和前聚物的復(fù)合物導(dǎo)致形成膠粘牢固的彈性體，所述彈性體僅可直接熔鑄背板材料。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案將利用水凝膠基質(zhì)貼劑。典型地，該水凝膠基質(zhì)將包含醇、水、藥物和一些親水聚合物。該水凝膠基質(zhì)可以并入在背板和粘連層之間的透皮貼劑。
儲存液體的貼劑也可用于此處描述的方法中。該貼劑包含不可滲透的或半透的熱密封的背板材料、熱密封的膜、丙烯酸酯壓敏皮膚膠粘劑、和硅化處理的釋放襯墊。該背板熱密封于膜上以形成儲藏室，在所述儲藏室中填充復(fù)合物、增強(qiáng)劑、膠凝劑和其它賦形劑的溶液。
除了膠凝的藥物-化學(xué)調(diào)節(jié)物溶液被限制于薄的泡沫層，典型地為聚氨基甲酸乙酯中，泡沫基質(zhì)貼劑的樣式和成分與液體儲存系統(tǒng)相似。該泡沫層位于背板和熱密封于貼劑周圍的膜之間。
對于被動釋放系統(tǒng)，釋放速率典型地受位于儲藏室和皮膚間的膜、從整體裝置的擴(kuò)散或者在釋放系統(tǒng)中作為速率-控制屏障的皮膚自身的控制。參見美國專利號4,816,258；4,927,408；4,904,475；4,588,580，4,788,062等。藥物釋放的速率將部分取決于膜的性質(zhì)。例如藥物穿過體內(nèi)膜的釋放通常高于穿過皮膚屏障的速率。復(fù)合物從裝置釋放至膜的速率受儲藏室和皮膚間限速膜的最顯著地控制。假定皮膚對復(fù)合物具有足夠的滲透性(即，穿過皮膚的吸收大于通過膜的速率)，膜將用于控制患者的劑量速率。
適宜的滲透膜材料可基于所需的滲透度、復(fù)合物的屬性和與構(gòu)建裝置相關(guān)的機(jī)理考慮進(jìn)行選擇。例示性的滲透膜材料包含廣泛的天然和合成聚合物，如聚二甲硅氧烷(硅酮橡膠)、乙烯基乙酸乙烯酯共聚物(EVA)、聚氨基甲酸乙脂、聚氨基甲酸乙脂-聚醚共聚物、聚乙烯、聚酰胺、聚氯乙烯(PVC)、聚丙烯、聚碳酸酯、聚四氟乙烯(PTFE)、纖維素材料例如三乙酸纖維素和硝酸/醋酸纖維素、以及水凝膠例如甲基丙烯酸-2-羥乙酯(HEMA)。
取決于所要求的裝置特性，該裝置中可包含其它的項(xiàng)目，如其它常規(guī)的治療產(chǎn)品組分。例如，根據(jù)本發(fā)明的組分也可包含一種或多種防腐劑或者抑菌劑，例如羥基苯甲酸甲酯、羥基苯酸丙酯、氯甲酚、苯扎氯銨等。這些藥學(xué)組分還可包含其它活性成分如抗微生物藥物特別是抗生素、麻醉劑、鎮(zhèn)痛劑和止癢劑。
作為栓劑給藥的組合物本發(fā)明的組合物可以配制為栓劑給藥。低熔點(diǎn)的蠟如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物首先熔融并例如通過攪拌可將活性成分均勻地分散。然后將該熔融均勻的化合物傾入適宜大小的鑄模中，使冷卻并固化。
該活性化合物可被配制成包含例如約0.5％至約50％本發(fā)明化合物的置于聚乙二醇(PEG)載體(例如PEG 1000[96％]和PEG 4000[4％])中的栓劑。
經(jīng)鼻給藥的化合物本發(fā)明的化合物可被配置用于經(jīng)鼻給藥。通過常規(guī)的方法將溶液或懸浮液直接應(yīng)用于鼻腔，例如使用滴管、移液管或噴霧器。該組合物可以以單劑或多劑形式提供。在使用滴管或移液管的時候，可以通過向患者給予適當(dāng)?shù)念A(yù)定體積的溶液或懸浮液而實(shí)現(xiàn)。在使用噴霧器的時候，可以通過例如測量離子化噴霧泵的方式而實(shí)現(xiàn)。
用于氣溶膠給藥的化合物本發(fā)明的化合物可被配置用于氣溶膠給藥，特別是用于呼吸道并包含鼻內(nèi)給藥。該化合物通常將具有小的粒徑例如5微米級或更小。這樣的粒徑可以通過本領(lǐng)域已知的方法獲得，例如通過微?；?。該活性成分是以與適宜的噴射劑如氟氯化碳(CFC)如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適宜的氣體的壓縮物的形式提供。該氣溶膠還可適宜地包含表面活性劑如卵磷脂。藥物的劑量可通過計量閥控制。可選擇地，可以以干燥粉末混合物的形式提供活性成分，例如在適宜粉末基質(zhì)如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羥丙甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)中的化合物粉末混合物。粉末載體將在鼻腔中形成凝膠。粉末組合物可以以單元劑量的形式存在，例如膠囊或可通過吸入器裝置給予粉末的明膠或泡包裝的筒。
應(yīng)用芐醇或其它適宜的防腐劑、增強(qiáng)生物利用度的吸收促進(jìn)劑、應(yīng)用氟化碳和/或應(yīng)用其它增溶劑或分散劑，可將通過氣溶膠給予的組合物制備成例如鹽水中的溶液。
可藥用鹽本發(fā)明還意在包含這些化合物的可藥用鹽，所述可藥用鹽是可制備的。這些鹽將是用于藥學(xué)用途時可接受的鹽。即該鹽將保持母體化合物的生理活性且該鹽在用于治療疾病時將不會具有不適當(dāng)?shù)幕蛴泻Φ男Ч?br> 以標(biāo)準(zhǔn)的方式制備可藥用鹽。如果母體化合物是堿，在適宜的溶劑中使用過量的有機(jī)或無機(jī)酸處理。如果母體化合物是酸，在適宜的溶劑中使用過量的有機(jī)或無機(jī)堿處理。
本發(fā)明的化合物以其堿金屬或堿土金屬鹽的形式，按照有效的劑量并存地、同時地或與可藥用載體或稀釋劑一起給予，特別且優(yōu)選其藥物組合物的形式為經(jīng)口、直腸、或胃腸外(包含皮下)的途徑給予。
用于本發(fā)明藥物組合物的可藥用酸加成鹽的例子包含來源于礦酸的鹽如鹽酸、氫溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸，以及有機(jī)酸如酒石酸、醋酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸、苯甲酸、乙醇酸、葡糖酸、琥珀酸、對甲苯磺酸和芳基磺酸。
給藥-劑量方案此處所述的藥物制劑優(yōu)選為單元劑型。在這樣的劑型中，制劑被細(xì)分為包含合適量活性組分的單元劑量。該單元劑型可以是包裝的制劑，該包裝中包含離散量的制劑，如分包裝的片劑、膠囊和小瓶或安瓿中的粉末。此外，該單元劑型可以是膠囊、片劑、扁囊劑或錠劑本身，或其可以是適當(dāng)量的包裝形式的任何這些劑型。需要時，組合物可以制備成適于緩釋或控釋給予活性成分的腸溶衣。
在本發(fā)明的一方面，向需要這種治療的個體以藥學(xué)有效量給予此處所述的組合物的適宜劑量。此處，“藥學(xué)有效量”被定義為給予包含藥物或藥物組合物或方法中各活性組分的總量，所述方法足以顯示有益的療效。此處所用的術(shù)語“單元劑型”是指適用于人或動物受試者的物理離散單元，各單元僅包含預(yù)定量的化合物或與其它藥劑組合的預(yù)定量的化合物，所述預(yù)定量的化合物與可藥用稀釋劑、載體或媒介劑為足以產(chǎn)生所需效果。對于本發(fā)明單元劑型的規(guī)格取決于所應(yīng)用的特殊化合物和所達(dá)到的效果以及各化合物在宿主體內(nèi)的藥物動力學(xué)。給藥量應(yīng)為“有效量”或在個體患者體內(nèi)達(dá)到“有效水平”的必需量。
劑量需求將隨著所應(yīng)用的具體藥物組合物、給藥途徑和所治療的具體受試者而變化。理想地，本方法所治療的患者將接受在最大耐受劑量之內(nèi)的藥學(xué)有效量的化合物，所述藥學(xué)有效量是在發(fā)生耐藥性之前最大耐受劑量通常不高于所需劑量。適宜的劑量方案優(yōu)選考慮本領(lǐng)域熟知的因素而確定，這些因素包含給藥的受試者類型；受試者的年齡、體重、性別和醫(yī)療條件；給藥途徑；受試者的腎和肝的功能；所需的效果；以及所應(yīng)用的具體化合物。
在實(shí)現(xiàn)療效卻無毒性范圍內(nèi)最準(zhǔn)確地獲得藥物濃度的給藥方案，需要基于藥物在靶點(diǎn)生物利用度的動力學(xué)。這包含對藥物的分布、平衡和清除的考慮。
根據(jù)本發(fā)明應(yīng)用的組合物的優(yōu)選劑量為相當(dāng)于約0.1mg至約10mg格瑞林每千克體重的濃度，其優(yōu)選每天給藥。更優(yōu)選地，該藥物包含約5至約250mg，更優(yōu)選約20mg至約200mg，更優(yōu)選約20mg至約100mg的格瑞林或其類似物的單元劑量。本發(fā)明的格瑞林樣化合物可與可藥用載體或稀釋劑混合給予。
應(yīng)指出，飯前發(fā)生的正常格瑞林應(yīng)答為格瑞林血漿濃度的短期突增，由于該肽半衰期短，靜脈注射格瑞林將確保獲得相似的格瑞林濃度的短暫峰。給藥途徑必需確保不降解，該肽的生物活性形式將是循環(huán)中的主要形式，所述活性形式將到達(dá)格瑞林受體并刺激它們。因此，為了獲得藥物的最大效果，優(yōu)選每天給藥一次至三次，各次給藥在進(jìn)食90分鐘內(nèi)，如進(jìn)食85分鐘內(nèi)、如進(jìn)食80分鐘內(nèi)、如進(jìn)食75分鐘內(nèi)，如進(jìn)食70分鐘內(nèi)、如進(jìn)食65分鐘內(nèi)、如進(jìn)食60分鐘內(nèi)、如進(jìn)食55分鐘內(nèi)、如進(jìn)食50分鐘內(nèi)、如進(jìn)食45分鐘內(nèi)，如進(jìn)食40分鐘內(nèi)、如進(jìn)食35分鐘內(nèi)、如進(jìn)食30分鐘內(nèi)、如進(jìn)食25分鐘內(nèi)，如進(jìn)食20分鐘內(nèi)、如進(jìn)食15分鐘內(nèi)、如進(jìn)食10分鐘內(nèi)、如進(jìn)食5分鐘內(nèi)。更優(yōu)選在各次主食前給藥，如每天給藥三次。
對于本發(fā)明，劑量將依據(jù)所應(yīng)用的化合物和給藥方式而變化。劑量水平將在每天約0.01μg/kg體重至10mg/kg體重間，優(yōu)選在約0.01μg/kg體重至1mg/kg體重間，更優(yōu)選在0.1μg/kg至10μg/kg體重間變化。對于應(yīng)用此處公開的化合物的所有方法，每日經(jīng)口劑量方案將優(yōu)選約0.01μg至約80mg/kg總體重。每日胃腸外劑量方案為約0.01μg至約80mg/kg總體重。每日局部劑量方案將優(yōu)選從0.01μg至150mg，每天給藥一次至四次，優(yōu)選兩次或三次。每日吸入劑量方案將優(yōu)選每日從約0.01μg/kg至約1mg/kg。本領(lǐng)域技術(shù)人員還將認(rèn)識到，化合物或其可藥用鹽的個體劑量的最佳量和間隔將由所治療病情的屬性或程度、給藥的形式、途徑和位點(diǎn)、以及所治療的具體患者所決定，且這樣的最佳值可通過常規(guī)技術(shù)測定。本領(lǐng)域技術(shù)人員還將理解的是最佳的療程，即在確定的天數(shù)內(nèi)每天給予的化合物或其可藥用鹽的藥劑數(shù)目，可由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常規(guī)的療程測定測試而確定。
此外，由于“有效水平”用作優(yōu)選的劑量端點(diǎn)，實(shí)際的劑量和給藥計劃可以依據(jù)個體在藥物動力學(xué)、藥物分布和代謝中的差異而變化?！坝行健笨杀欢x為例如患者體內(nèi)所需的與本發(fā)明的一種或多種化合物濃度相應(yīng)的血液或組織水平。
格瑞林的制備方法可以使用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)制備格瑞林樣化合物。例如，格瑞林樣化合物的多肽區(qū)域可以經(jīng)化學(xué)或生物化學(xué)的方法合成和修飾。本領(lǐng)域熟知用于化學(xué)合成多肽的方法。(參見例如，Vincent在Peptide and Protein DrugDelivery，New York，N.Y.，Dekker，1990中的描述。)包含將核酸引入細(xì)胞并表達(dá)核酸的生物化學(xué)合成技術(shù)的例子提供于Ausubel，Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley，1987-1998，和Sambrook等，in MolecularCloning，A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989。
包含本發(fā)明化合物的藥物組合物可以經(jīng)常規(guī)的技術(shù)制備，例如RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy 1995，E.W.Martin主編，Mack Publishing Company，第19版，Easton，Pa中所描述的。該組合物可以是常規(guī)的形式例如膠囊、片劑、氣溶膠、溶液、懸浮液或局部應(yīng)用。
實(shí)施例下面的實(shí)施例舉例說明了本發(fā)明，而非對其限制。
實(shí)施例1Lehto-Axtelius D.等在Osteopenia after gastrectomy，fundectomy orantrectomyan experimental study in the rat，Regul.Pept.78(1998)，41-50中描述了進(jìn)行全胃切除術(shù)并隨后在食管和十二指腸之間進(jìn)行端-端吻合。該胃切除術(shù)在賁門水平伴隨著全部的迷走神經(jīng)切斷術(shù)。通過打開腹部并切除胃進(jìn)行了類似的手術(shù)(sham operation)。
在類似的胃切除大鼠中，格瑞林水平為2.06±0.22ng/ml，然而在胃切除術(shù)后它們低于測驗(yàn)的最低可檢測的水平即0.25ng/ml。胃切除術(shù)四周后，動物通過管飼法每天一次給予水或格瑞林類似物MK-0677(4mg/kg/天)。
試驗(yàn)全過程的每天都測量食物攝入量和體重。使用格瑞林治療的動物顯示了對食物的需求增加。治療兩周后，對動物進(jìn)行斷頭、收集血液和組織并快速冷凍。剝離性腺、腸系膜的和腹膜后的脂肪墊并稱重，然后計算總重。使用購自所述Phoenix Pharmaceuticals(Dornonville de Ia Cour，supra)的試劑盒來測量血清中的格瑞林。
使用GH促分泌素MK677治療胃切除大鼠，令人驚奇地增加了體重。此外，該治療導(dǎo)致剝離的脂肪墊重量增加，以及下丘腦神經(jīng)肽Y(NPY)mRNA的水平增加。
實(shí)施例2競爭性結(jié)合測試轉(zhuǎn)染COS-7的細(xì)胞在轉(zhuǎn)染一天后，以密度為每孔1×105個細(xì)胞被轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)板中，為得到5-8％放射性配體的結(jié)合。轉(zhuǎn)染兩天后，在4□C使用25pM的125I-格瑞林進(jìn)行3小時的競爭性結(jié)合試驗(yàn)(Amersham，Little Chalfont，UK)。結(jié)合測試是在0.5ml的50mM Hepes緩沖液，pH7.4，補(bǔ)充有1mM CaCl2，5mM MgCl2，和0.1％(w/v)小牛血清白蛋白，40□g/ml桿菌肽中進(jìn)行的。在1□M未標(biāo)記的格瑞林存在下的結(jié)合中檢測到了非特異性結(jié)合。在0.5ml冰冷的緩沖液中洗滌細(xì)胞兩次，并加入0.5-1ml溶胞緩沖液(8M脲，2％NP4O于3M乙酸中)，計算結(jié)合放射性。重復(fù)進(jìn)行該測定。最初的試驗(yàn)顯示在這些條件下與放射性配體達(dá)到穩(wěn)態(tài)結(jié)合。
實(shí)施例3受體激活測試一種簡單測量格瑞林樣化合物激活格瑞林受體能力的方法是測量其EC50，即化合物能夠激活受體信號直至該化合物最大效果的一半時的劑量。格瑞林受體可以在初級細(xì)胞培養(yǎng)物例如垂體細(xì)胞上內(nèi)源性表達(dá)，或者在轉(zhuǎn)染格瑞林受體的細(xì)胞上異源性表達(dá)。根據(jù)測試的類型可以使用整體細(xì)胞測試或使用所有由這些細(xì)胞類型所制備的膜測試。
由于格瑞林受體通常被認(rèn)為與Gq信號通路初步偶聯(lián)，可以使用監(jiān)測Gq/G11信號通路活性的任何適宜的測試，例如1)測試法，其為了提高信噪比例如通過檢測與例如抗-G□q或-11抗體沉淀結(jié)合的GTPgS結(jié)合進(jìn)行檢測Gq/G11的激活。此測試還可以檢測與其它G-蛋白而不是Gq/11的偶聯(lián)。
2)例如通過測量磷酸肌醇酯的累積，測試磷脂酶C(PLC)的活性的測試法，所述磷脂酶C是一種在通路中最初的下游效應(yīng)分子，所述磷酸肌醇酯是PLC的一種產(chǎn)物。
3)在信號級聯(lián)中更下游的是細(xì)胞內(nèi)貯存的活化鈣4)還可測量更加下游的信號分子如不同類的MAP激酶(p38，iun，等)的活性、NF-K-B轉(zhuǎn)位和CRE驅(qū)動基因翻譯。
5)替換地，還可向活化格瑞林受體上結(jié)合熒光標(biāo)記抑制蛋白。
實(shí)施例4格瑞林樣化合物的合成方法氨基酸衍生物和合成試劑可以由商業(yè)途徑獲得。主要通過使用由Perkin Elmer生產(chǎn)的Applied Biosystem 433A合成子進(jìn)行肽鏈的延伸，通過Boc或Fmoc方法構(gòu)建保護(hù)的肽衍生樹脂。通過Boc法獲得的保護(hù)的肽樹脂使用無水氫氟酸(HF)在對甲酚存在下脫保護(hù)從而釋放肽，然后進(jìn)行純化。通過Fmoc法獲得的保護(hù)的肽樹脂使用三氟乙酸(TFA)或包含各種凈化劑的稀釋TFA脫保護(hù)，并純化所釋放的肽。在反相HPLC的C4或C18柱上進(jìn)行純化。純化產(chǎn)品的純度通過反相HPLC確定，其結(jié)構(gòu)通過氨基酸組合物分析和質(zhì)譜確定。
本發(fā)明的肽通過常規(guī)的肽合成方法生產(chǎn)。具體地，下面例示了?；蛲榛牡暮铣?。此外，來源于人的格瑞林(此后縮寫為h格瑞林)或來源于大鼠的格瑞林(此后縮寫為r格瑞林)與胰島素或糜蛋白酶或與兩種酶相繼反應(yīng)以獲得下面的格瑞林片斷19.格瑞林(16-18)，20.h格瑞林(1-15)，21.r格瑞林(1-15)，23h格瑞林(1-11)，24.r格瑞林(1-11)，25.格瑞林(1-10)，26.格瑞林(1-9)，27.格瑞林(1-8)和30.格瑞林(1-4)。然后，通過分析HPLC分離這些片斷并測量它們的活性。41.[N-乙?；鵠-格瑞林(1-10)通過使用N-乙酰基丁二酰亞胺處理格瑞林(1-10)的常規(guī)方式而制備。人和大鼠格瑞林還可以通過使用天然材料而制備。
序列表<210>1<211>28<212>PRT<213>人<220>
<221>MOD_RES<222>(3)..(3)<223>3位氨基酸經(jīng)脂肪酸修飾<400>1Gly Ser Ser Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys1 5 10 15Glu Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lys Leu Gln Pro Arg20 25<210>2<211>27<212>PRT<213>人
<220>
<221>MOD_RES<222>(3)..(3)<223>3位氨基酸經(jīng)脂肪酸修飾<400>2Gly Ser Ser Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Arg Lys Glu1 5 10 15Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lys Leu Gln Pro Arg20 25<210>3<211>28<212>PRT<213>黑鼠<220>
<221>MOD_RES<222>(3)..(3)<223>3位氨基酸經(jīng)脂肪酸修飾
<400>3Gly Ser Ser Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys1 5 10 15Glu Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lys Leu Gln Pro Arg20 2權(quán)利要求
1.格瑞林或其類似物在制備具有下列一種或多種應(yīng)用的藥物中的用途，所述應(yīng)用為在胃切除個體中，治療和/或預(yù)防體重和身體脂肪損失，和/或預(yù)防或治療惡病質(zhì)，和/或刺激食欲和/或刺激食物攝入和/或刺激體重增加和/或增加身體脂肪重量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中格瑞林或其類似物是格瑞林樣化合物或其可藥用鹽其中格瑞林樣化合物包含式I定義的結(jié)構(gòu)Z1-(X1)m-(X2)-(X3)n-Z2，其中Z1是任選存在的保護(hù)基各X1獨(dú)立選自氨基酸，其中所述氨基酸選自天然存在和合成的氨基酸，X2為任何選自天然存在和合成的氨基酸，所述氨基酸被大疏水基團(tuán)，優(yōu)選酰基或脂肪酸所修飾，各X3獨(dú)立選自氨基酸，其中所述氨基酸選自天然存在和合成的氨基酸，其中一個或多個X1和X3任選地被大疏水基團(tuán)，優(yōu)選?；蛑舅崴揎?，Z2為任選存在的保護(hù)基，m是1-10范圍內(nèi)的整數(shù)n是0或是1-35范圍內(nèi)的整數(shù)。
3.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中m是選自1-9范圍內(nèi)的整數(shù)，如選自1-8，如選自1-7，如選自1-6，如選自1-5，如選自1-4，如選自1-3，如選自1-2，如2。
4.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中X2選自修飾的絲氨酸、修飾的半胱氨酸和修飾的賴氨酸，如其中X2為修飾的絲氨酸。
5.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中格瑞林樣化合物選自式II Z1-Gly-(X1)m-1-(X2)-(X3)n-Z2，式III Z1-Gly-Ser-(X2)-(X3)n-Z2，以及式IV Z1-Gly-(X2)-(X3)n-Z2。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中格瑞林樣化合物為式III。
7.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中(X3)n包含選自一種或多種如下所示的序列Phe Leu Ser Pro Glu His GlnPhe Leu Ser Pro Glu HisPhe Leu Ser Pro GluPhe Leu Ser ProPhe Leu SerPhe LeuPhe
8.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中n選自1-25范圍內(nèi)的整數(shù)，如選自1-24，如選自1-15，如選自1-10，如選自10-25，如選自10-24，如選自15-25，如選自15-24。
9.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中(X3)n為選自一種或多種如下所示的序列Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu Gln Pro ArgPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu Gln ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys Leu GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla Lys LeuPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAla LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProAlaPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys ProPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu SerPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys GluPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg LysPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln ArgPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val GlnPhe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg ValPhe Leu Ser Pro Glu His Gln ArgPhe Leu Ser Pro Glu His GlnPhe Leu Ser Pro Glu HisPhe Leu Ser Pro GluPhe Leu Ser ProPhe Leu SerPhe LeuPhe
10.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中酰基選自C1-C35?；鏑1-C20?；?，如C1-C15酰基，如C6-C15酰基，如C6-C12?；鏑8-C12?；?br> 11.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中?；x自C7酰基、C8?；9?；?、C10?；?、C11?；虲12酰基。
12.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中?；x自C8酰基和C10?；?。
13.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中?；x自C7酰基、C9酰基和C11?；邕x自C9?；虲11?；?。
14.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中藥物包含格瑞林樣化合物或其鹽的溶液。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的用途，其中溶劑是鹽水。
16.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中的治療刺激食欲并預(yù)防個體營養(yǎng)不良。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-15一項(xiàng)或多項(xiàng)的用途，其中的治療包含改善個體的健康感覺和生活質(zhì)量。
18.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途與另一種胃衍生因子相聯(lián)合。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的用途，其中胃衍生因子選自胰抑素、胃泌素、組胺、抵抗素、前列腺素如前列腺素E2、內(nèi)因子。
20.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途與另一種體重和/或身體脂肪誘導(dǎo)因子相聯(lián)合。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的用途，其中所述因子選自黑色素濃縮激素(MCH)、MCH受體激動劑尤其是MCH受體1激動劑、神經(jīng)肽Y(NPY)、NPY受體1激動劑、NPY受體5激動劑、以及包含肽YY(PYY)和PYY(3-36)的NPY受體2拮抗劑、α-促黑色素細(xì)胞激素(α-MSH、α-黑皮質(zhì)素)、黑皮質(zhì)素-3受體(MC3R)拮抗劑、黑皮質(zhì)素-4受體(MC4R)拮抗劑、與刺鼠相關(guān)的肽(Agrp)、Agrp-激動劑、可卡因-和安非他明-調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄(CART)的拮抗劑、阿立新受體1和受體2激動劑、生長激素(GH)、GH受體激動劑、胰島素樣生長因子-I(IGF-1)和IGF-1受體1激動劑。
22.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中藥物適于經(jīng)口、經(jīng)鼻、透皮、經(jīng)肺部或胃腸外給藥。
23.根據(jù)權(quán)利要求1-22的用途，其中藥物是用于經(jīng)口給藥的制劑。
24.根據(jù)權(quán)利要求1-22的用途，其中藥物是用于經(jīng)鼻給藥的制劑。
25.根據(jù)權(quán)利要求1-22的用途，其中藥物是用于透皮給藥的制劑。
26.根據(jù)權(quán)利要求1-22的用途，其中藥物是用于經(jīng)肺部給藥的制劑。
27.根據(jù)權(quán)利要求1-22的用途，其中藥物是用于胃腸外給藥的制劑。
28.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中活性化合物按照每天約0.01μg/kg體重至10mg/kg體重，優(yōu)選0.1至10μg/kg體重進(jìn)行給予。
29.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中藥物以相當(dāng)于10ng至10mg格瑞林每千克體重的濃度給予。
30.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中藥物在進(jìn)食之前或期間給予。
31.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中藥物每天給予一次至三次，各次給藥在進(jìn)食期間或最多進(jìn)食90分鐘內(nèi)，如最多進(jìn)食85分鐘內(nèi)、如最多進(jìn)食80分鐘內(nèi)、如最多進(jìn)食75分鐘內(nèi)，如最多進(jìn)食70分鐘內(nèi)、如最多進(jìn)食65分鐘內(nèi)、如最多進(jìn)食60分鐘內(nèi)、如最多進(jìn)食55分鐘內(nèi)、如最多進(jìn)食50分鐘內(nèi)、如進(jìn)食前最多45分鐘內(nèi)，如進(jìn)食前最多40分鐘內(nèi)、如進(jìn)食前最多35分鐘內(nèi)、如進(jìn)食前最多30分鐘內(nèi)、如進(jìn)食前最多25分鐘內(nèi)，如進(jìn)食前最多20分鐘內(nèi)、如進(jìn)食前最多15分鐘內(nèi)、如進(jìn)食前最多10分鐘內(nèi)、如進(jìn)食前最多5分鐘內(nèi)。
32.根據(jù)前述權(quán)利要求的用途，其中藥物每天給予3次。
33.組合物，其包含用于治療胃切除個體體重和身體脂肪損失的格瑞林或其類似物。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的組合物，其用于增加胃切除個體的食欲、健康感覺和生活質(zhì)量、并降低營養(yǎng)不良。
35.根據(jù)權(quán)利要求33或34的組合物，其包含可藥用載體或稀釋劑。
36.根據(jù)權(quán)利要求33至36任一項(xiàng)的組合物，其在單元劑型中包含約5至約250mg的格瑞林或其類似物或其可藥用鹽。
37.根據(jù)權(quán)利要求33至36任一項(xiàng)的組合物，其中格瑞林或其類似物包含一種或多種權(quán)利要求2-31的特征。
全文摘要
本發(fā)明涉及格瑞林或其類似物在制備具有下列一種或多種應(yīng)用的藥物中的用途，所述應(yīng)用為在胃切除個體中，治療和/或預(yù)防體重和身體脂肪損失、預(yù)防或治療惡病質(zhì)、刺激食欲、刺激食物攝入、刺激體重增加或增加身體脂肪重量。
文檔編號A61P3/00GK1723035SQ200380105708
公開日2006年1月18日 申請日期2003年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月10日
發(fā)明者約翰－奧洛夫·詹森 申請人:加斯特羅泰克藥物公司