專利名稱：具有改善的生物耐受性的造影劑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及放射照相造影劑(RCM)。本發(fā)明特別涉及二聚非離子造影劑且尤其是二聚伯甲酰胺iosimenol和通過在含有有機胺類和羧酸類的緩沖劑中配制這類造影劑而改善生物耐受性的方法。
背景技術(shù)：
放射照相造影劑是對體腔和器官體系進行醫(yī)學(xué)成像必不可少的工具。一般將他們作為高度濃縮的溶液和以大體積供給且由此必須具有較高度的生物耐受性。RCM必須是無毒性的。由于使用的體積較大，所以可行的是可以通過標準高壓滅菌法、即在121℃下20分鐘來對RCM滅菌。而在生理pH和環(huán)境溫度下、在高溫下化學(xué)-物理穩(wěn)定的所有RCM，包括二聚非離子RCM，諸如iosimenol(N，N′-雙[3-氨基甲酰基-5-(2，3-二羥丙基-氨基甲?；?-2，4，6-三碘苯基]-N，N′-雙(2，3-二羥丙基)-丙二酰胺)在N-羥基烷基的β-位上含有羥基，除非在酸性pH下，否則它們就可能發(fā)生由釋放游離碘化物而顯示出的部分分解。高濃度的游離碘化物出現(xiàn)危害了甲狀腺功能且由此可能是不需要的。盡管大量常用緩沖劑諸如檸檬酸鹽和其它羧酸鹽、乳酸鹽、氨基甲酸鹽、乙酸鹽/乙酸、磷酸鹽、甘氨酸等廣泛用于制備許多非腸道溶液，但是它們無法防止RCM在高壓滅菌過程中接觸高溫、尤其是在超過7.0的pH范圍條件下失去穩(wěn)定性。
通常將靜脈內(nèi)藥物緩沖至生理上可接受的5.5-7.5的pH范圍。通常使用有機胺類、諸如TRIS和無機酸，諸如HCl并加入少量諸如Ca/Na EDTA的螯合劑緩沖在臨床應(yīng)用中的所有RCM水溶液。當單獨使用有機羧酸時，已知它們在高溫下使RCM不穩(wěn)定，由此產(chǎn)生部分破壞作用。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，以中和當量比向RCM中添加有機胺與羧酸可以在高壓滅菌和儲存過程中改善RCM的穩(wěn)定性。然而，這種手段不適合于每種RCM且表明特別對iosimenol不起作用。如果按照使用由胺中和的羧酸的現(xiàn)有技術(shù)方法配制，那么在高壓滅菌條件下的iosimenol令人意外地變得比使用TRIS占優(yōu)的比例的TRIS與羧酸或常用的TRIS/HCl緩沖劑配制時不穩(wěn)定。
概述本發(fā)明基于令人意外的發(fā)現(xiàn)，即二聚非離子造影劑，諸如iosimenol在新發(fā)現(xiàn)的含有羧酸，諸如檸檬酸和胺的制劑中非常耐受高壓滅菌，而這類制劑的體系性生物耐受性與標準制劑相比令人意外和顯著地增加。在某些實施方案中，對胺與酸的比例進行選擇以提供更大的生物耐受性。
詳細描述本發(fā)明涉及二聚非離子造影劑(RCM)，諸如iosimenol的某些獨特性質(zhì)的應(yīng)用，基于伯甲酰胺類(primary carboxamides)的該造影劑代表了一類新的RCM。如同其它RCM，水溶液形式的Iosimenol以大體積用于注入心血管和其它器官體系和體腔。由于RCM僅為默認的診斷裝置和藥物，所以它們應(yīng)盡可能在生物學(xué)上無活性，尋找改進制劑的目的應(yīng)在于貢獻。本發(fā)明的實施方案基于現(xiàn)有技術(shù)的制劑的改善方面在于它們在一般需要以大量供給用于放射照相時可提供更大的生物耐受性。盡管已經(jīng)進行了改善RCM的深入研究，但是現(xiàn)有技術(shù)的配制方法仍然不是最佳的。特別是如上所述，如現(xiàn)有技術(shù)的RCM，使用含有胺類和無機酸配制諸如iosimenol的二聚體尚未提供最佳的生物耐受性。
一般來說，使用降低高壓滅菌中的pH的緩沖劑體系基本上可以減少RCM的分解。這類溫度依賴性緩沖劑包括臨床使用的RCM的普通制劑且利用了某些胺類，包括緩血酸胺(TRIS)，一般的添加濃度為10-20mM(Rakli等，美國專利US 4,396,597，將該文獻的全部內(nèi)容引入作為參考)。不同于無機緩沖劑，TRIS/HCl在高壓滅菌過程中暫時降低pH且一旦環(huán)境溫度達到，則該溶液的pH就恢復(fù)到開始的值。然而，上述專利的發(fā)明人明確說明了″在使用TRIS配制用于高壓滅菌的溶液的過程中，一般優(yōu)選確保沒有諸如羧酸根的陰離子存在″。
Sachse等的具有290196優(yōu)先權(quán)的德國專利DE19648650C2(在這里全文引入作為參考)中描述了他們通過向TRIS或N-甲基葡糖胺中添加至少一種有機酸、包括羧酸改善了包括RCM在內(nèi)的許多非腸道制劑的穩(wěn)定性。為了證實用于增加穩(wěn)定性目的的這類合并的緩沖劑的優(yōu)點，上述專利的發(fā)明人使用了已知的非離子單體RCM、即碘普羅胺。他們通過實施例證實按照標準高壓滅菌法，通過將pH調(diào)節(jié)至6.5-7.5，在始終以等摩爾比的TRIS與各種羧酸中配制的碘普羅胺具有的碘化物釋放(表示分解)基本上比用TRIS/HCl緩沖劑配制時減少。假定這一發(fā)現(xiàn)可能適合于所有的RCM且任意比例的有機胺與有機酸，所以作者已經(jīng)公布了相應(yīng)的一般權(quán)利要求，它不涉及等摩爾比，而僅涉及用于上述增加RCM穩(wěn)定性目的的胺與有機酸的混合物。
我們發(fā)現(xiàn)如現(xiàn)有技術(shù)單體RCM發(fā)現(xiàn)的改善的穩(wěn)定性不適合于二聚非離子造影劑，包括iosimenol。在約6.5-7.5范圍的pH下的含有20mM TRIS和5mM檸檬酸的緩沖劑中，iosimenol的穩(wěn)定性始終稍低于或等于使用摩爾當量比的TRIS/HCl緩沖劑或TRIS/檸檬酸鹽高壓滅菌時的穩(wěn)定性(表1)。這意味著通過將TRIS與檸檬酸按摩爾當量濃度混合沒有改善二聚非離子造影劑、諸如iosimenol的穩(wěn)定性，且在概念上與其它RCM不同的iosimenol的分子結(jié)構(gòu)未發(fā)生如Sachse等所公開的單體非離子RCM在TRIS/檸檬酸鹽緩沖劑中的穩(wěn)定性改善。
因此，在本發(fā)明的某些實施方案中，TRIS與檸檬酸鹽的摩爾比高于約3∶1。在其他的實施方案中，該比例高于約3-約10、高于約3-約9、高于約3-約8、高于約3-約7、高于約3-約6、高于約3-約5且高于約3-約4。因此，如果TRIS的濃度為10mM，那么檸檬酸鹽的濃度應(yīng)低于約3.3mM；如果TRIS的濃度為20mM，那么檸檬酸鹽的濃度應(yīng)低于約6.6mM；且如果TRIS的濃度為30mM，那么檸檬酸鹽的濃度應(yīng)低于約10mM。在包括具有不同于TRIS(3當量/摩爾)或檸檬酸(1當量/摩爾)當量數(shù)的有機胺類和/或羧酸的其它實施方案中，理想的有機胺與羧酸的當量比為大于1∶1(即與羧酸相比胺的當量過量)。
因為諸如iosimenol的二聚非離子造影劑具有2倍的碘原子數(shù)/摩爾RCM，所以RCM在溶液中的總分子濃度低于具有相同碘濃度的單體RCM的總分子濃度。因此，就指定的總碘濃度而言，二聚RCM的重量滲透摩爾濃度始終低于單體RCM的重量滲透摩爾濃度。為了確保臨床使用的溶液具有生理滲透壓，這類RCM溶液可以包括其它生理上可接受的物質(zhì)，諸如濃度增加的TRIS或本發(fā)明的緩沖劑或生理上可接受的無機或有機鹽。
為了制備如上所述的制劑，將二聚RCM與含有羧酸和胺的緩沖劑混合。因此，在本發(fā)明的某些實施方案中，TRIS與檸檬酸鹽的摩爾比高于約3∶1。在其他的實施方案中，該比例高于約3-約10、高于約3-約9、高于約3-約8、高于約3-約7、高于約3-約6、高于約3-約5，和高于約3-約4。因此，如果TRIS的濃度為10mM，那么檸檬酸鹽的濃度應(yīng)低于約3.3mM；如果TRIS的濃度為20mM，那么檸檬酸鹽的濃度應(yīng)低于約6.6mM；且如果TRIS的濃度為30mM，那么檸檬酸鹽的濃度應(yīng)低于約10mM。在包括具有不同于TRIS(3當量/摩爾)或檸檬酸(1當量/摩爾)當量數(shù)的有機胺類和/或羧酸的其它實施方案中，理想的有機胺與羧酸的當量比為大于1∶1(即與羧酸相比胺的當量過量)。配制后，諸如通過高壓滅菌對該混合物滅菌且然后包裝。
為了使用本發(fā)明的制劑，使受治療者準備進行放射鏡檢查和二聚RCM在含有羧酸和胺的緩沖劑中的所需量?？梢造o脈內(nèi)注射制劑或?qū)⑵渥⑷肴我馑璧捏w腔。當RCM制劑充分分布時，使用常規(guī)方法(例如，諸如x-射線)對器官或組織進行放射鏡檢查。
可以理解除iosimenol外，還可以使用本發(fā)明的緩沖體系有利地配制其它二聚RCM。其它這類二聚RCM包括碘克沙醇、碘曲侖等。
實施例下列實施例說明本發(fā)明的方法和制劑且不用來限定本發(fā)明的范圍。在不脫離本發(fā)明的范圍和不進行過多實驗的情況下可以研發(fā)和使用其它具體實施方案。認為所有這類實施方案均為本發(fā)明的組成部分。
實施例1在TRIS和檸檬酸鹽存在下高壓滅菌的Iosimenol的穩(wěn)定性用20mM TRIS+5mM檸檬酸，TRIS/HCl和10mM TRIS+3.3mM檸檬酸鹽配制Iosimenol樣品。然后在121℃下將樣品高壓滅菌20分鐘并測定游離碘的量。將結(jié)果列在表1a-Ic中。
表1a-1e121℃下20分鐘后的Iosimenol穩(wěn)定性表1a 表1b緩沖劑20mM TRIS+ 緩沖劑20mM5mM檸檬酸 TRIS/HCl


表1c緩沖劑10mM TRIS+3.3mM檸檬酸鹽

在獨立的研究中，非當量比例的TRIS/檸檬酸配制的iosimenol在高壓滅菌(121℃20分鐘)后具有的穩(wěn)定性低于用TRIS/HCl緩沖劑使用在pH 7.00下預(yù)高壓滅菌的穩(wěn)定性，并具有Ca/Na EDTA 0.1mg/ml和RCM濃度為340-355mg I/ml，觀察到如下結(jié)果(表2)。
表2Iosimenol在TRIS/HCl和當量TRIS/檸檬酸中的穩(wěn)定性

因此，盡管我們已經(jīng)證實與TRIS/HCl相比不能通過由當量比例TRIS和檸檬酸組成的緩沖劑改善iosimenol溶液的穩(wěn)定性，但是我們發(fā)現(xiàn)20mMTRIS與5mM檸檬酸的制劑令人意外地基本上改善了iosimenol的體系耐受性(參見下文的實施例2)。
實施例2Iosimenol的體內(nèi)耐受性為了檢驗本發(fā)明的TRIS/檸檬酸鹽緩沖體系對生物耐受性的作用，我們使用標準方法評價了用TRIS/HCl或用新的TRIS/檸檬酸緩沖劑配制的iosimenol的鼠和大鼠靜脈內(nèi)LD50，并將結(jié)果與對臨床使用的非離子二聚體碘克沙醇公布的結(jié)果(用TRIS/HCl緩沖劑配制；Heglund IF等，Acta Radiol.Suppl.199539969-82)進行比較。通過以1ml/分鐘注射340mg I/ml得到鼠和大鼠的LD50；將7天時和基于50％動物存活的數(shù)據(jù)表示為g I/kg bw(表3)。令人意外的是，我們意想不到地發(fā)現(xiàn)用20mM TRIS與5mM檸檬酸鹽配制的iosimenol的LD50統(tǒng)計學(xué)上顯著高于用20mM TRIS/HCl配制的iosimenol的LD50。
表3緩沖劑對Iosimenol*在鼠和小鼠中的體系性(靜脈內(nèi))耐受性的作用

盡管尚未確定這一發(fā)現(xiàn)的機制，但是本發(fā)明的新TRIS/檸檬酸鹽制劑顯著改善了iosimenol的體系性耐受性且預(yù)計在臨床應(yīng)用上具有這類耐受性。
TRIS和檸檬酸為研究的惰性物質(zhì)且根據(jù)1996年1月FDA指南21CFR210.3(B)8，7的定義、經(jīng)審定可以用作靜脈內(nèi)溶液中用于緩沖目的的賦形劑。已經(jīng)證實向非離子RCM中添加6mM檸檬酸鹽不會誘發(fā)臨床上明顯的心血管改變，這些改變小于由離子二聚體碘克酸誘發(fā)的改變(Morris和Rubinstein，1991)。
因為典型iosimenol診斷溶液的重量滲透摩爾濃度在未調(diào)節(jié)時可能小于310mOsm的生理值，所以可以使用更濃的緩沖劑，例如50mM、更優(yōu)選10-25mM的TRIS，且可以將可接受的離子物質(zhì)、諸如NaCl或氨基酸鹽用于調(diào)節(jié)RCM溶液的重量滲透摩爾濃度。
用于配制生理和藥物上可接受的二聚非離子造影劑，包括iosimenol的溶液的方法包括下列步驟使用至少3∶1比例的TRIS/檸檬酸鹽進行配制，然后將所得溶液在121℃下高壓滅菌20分鐘?？梢岳斫獾氖强梢允褂梅荰RIS和檸檬酸鹽的其它有機胺類和其它羧酸類，條件是有機胺與羧酸的當量比大于1∶1。
新緩沖劑制劑改善了iosimenol在本文所述的體內(nèi)研究中的體系性耐受性且這些結(jié)果可以直接應(yīng)用于人和其它物種的臨床應(yīng)用。
實施例3RCM制劑的碘化物含量測定方法1.通過HPLC測定碘化物用含有7ml/L 40％氫氧化四丁基銨的30％乙腈/70％0.05M KH2PO4洗脫5微米C18柱25cm×4.6mm ID。20ul的10ug I-/ml為標準品。注射20ul的iosimenol測試樣品并在230nm，0.2AU下測定UV吸收度。在這些條件下，在5.6分鐘后洗脫下碘化物標準品且得到″X″計數(shù)的面積。注射高壓滅菌的造影劑溶液的實驗樣品且在5.6分鐘時的碘化物峰得到″Y″的面積計數(shù)。實驗樣品的碘化物濃度為Y/X×10μg/ml＝Zμg I-/ml。
2.通過分光光度法測定碘化物可以選擇通過按照USP24/NF19，p 911(1995)的提取和分光光度法測定碘化物。一般來說，在有酸存在下使用亞硝酸鈉氧化含有碘化物的溶液且然后提取入甲苯，隨后在500nm波長下讀取。將標準樣品與實驗樣品進行比較得到存在于樣品中的碘化物量。
結(jié)論二聚非離子造影劑，諸如在含有有機胺和羧酸，諸如檸檬酸的緩沖劑中的iosimenol產(chǎn)生了具有改善的生物耐受性的伯甲酰胺二聚RCM的制劑，其中胺與酸的摩爾比至少為3∶1。公開的制劑可以產(chǎn)生明顯較大耐受劑量的RCM。這種耐受劑量的增加完全令人意外且應(yīng)為標題化合物在醫(yī)學(xué)成像方面提供了高的安全性。
工業(yè)實用性本發(fā)明應(yīng)用于衛(wèi)生保健工業(yè)，其中將不透射線的造影劑用于使體內(nèi)空間顯影，諸如血管、體腔、身體器官內(nèi)的腔或神經(jīng)體系中的腔。這些制劑還應(yīng)用于制備銷售給臨床醫(yī)師、醫(yī)院、診斷中心和其他衛(wèi)生保健提供者的不透射線的造影劑和試劑盒的制藥工業(yè)。
權(quán)利要求
1.制劑，包括iosimenol(N，N′-雙[3-氨基甲?；?5-(2，3-二羥丙基-氨基甲?；?-2，4，6-三碘苯基]-N，N′-雙(2，3-二羥丙基)-丙二酰胺)的水溶液和含有有機胺和羧酸的緩沖劑。
2.權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述的有機胺為N-甲基葡糖胺。
3.權(quán)利要求1或2所述的制劑，其中所述的羧酸為檸檬酸。
4.權(quán)利要求1-3之-所述的制劑，其中所述的緩沖劑包括TRIS和檸檬酸，所述的TRIS的當量濃度高于所述的檸檬酸的當量濃度。
5.權(quán)利要求4所述的制劑，其中TRIS的濃度在約5mM-約40mM的范圍。
6.權(quán)利要求4所述的制劑，其中TRIS與檸檬酸的摩爾比在大于3∶1-約10∶1的范圍。
7.權(quán)利要求1-6之一所述的制劑，進一步包括螯合劑。
8.權(quán)利要求7所述的制劑，其中所述的螯合劑選自Ca/Na EDTA和EDTA組成的組。
9.制劑，包括二聚非離子造影劑；和含有有機胺和羧酸的緩沖劑。
10.權(quán)利要求9所述的制劑，其中所述的有機胺為TRIS。
11.權(quán)利要求9或10所述的制劑，其中所述的羧酸為檸檬酸。
12.權(quán)利要求9-11之一所述的制劑，其中所述的二聚非離子造影劑為iosimenol。
13.權(quán)利要求9-11之一所述的制劑，其中所述的二聚非離子造影劑選自iosimenol、碘克沙醇和碘曲侖組成的組。
14.權(quán)利要求9-13之一所述的制劑，其中所述有機胺與所述羧酸的當量比大于1∶1。
15.權(quán)利要求9-14之一所述的制劑，具有生理上可接受的pH和重量滲透摩爾濃度。
16.用于放射照相檢查的試劑盒，包括含有溶液的小瓶，所述的溶液包括二聚非離子造影劑；和緩沖劑，該緩沖劑含有有機胺，和羧酸；和使用說明書。
17.權(quán)利要求16所述的試劑盒，其中所述的二聚非離子造影劑為iosimenol。
18.權(quán)利要求16或17所述的試劑盒，其中所述的緩沖劑包括TRIS和檸檬酸，其中所述TRIS與所述檸檬酸的當量比大于1∶1。
19.二聚不透射線的非離子造影劑制劑的制備方法，包括a.提供二聚不透射線的非離子造影劑；b.將所述的造影劑與緩沖劑混合，所述的緩沖劑包括i.羧酸，和ii.胺；和c.對所述制劑滅菌。
20.對受治療者進行放射照相檢查的方法，包括a.將如權(quán)利要求9-15之一所述的造影劑遞送至所述受治療者身體的顯影區(qū)域；和b.使所述區(qū)域顯影。
全文摘要
本發(fā)明包括新的放射照相造影劑制劑，包括二聚非離子造影劑與有機胺和羧酸。本發(fā)明的制劑可增加這類造影劑的生物耐受性，由此增加其安全性。
文檔編號A61K9/00GK1738651SQ200380109016
公開日2006年2月22日 申請日期2003年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月12日
發(fā)明者米洛斯·索瓦克, 艾倫·L·塞利格森, 羅納德·C·特里 申請人:生物物理公司