專利名稱：黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)促進(jìn)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及鑒定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的細(xì)胞因子反應(yīng)性的篩選方法和其中所用的產(chǎn)物和測(cè)定法，其含有黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)或者它們的混合物，還涉及診斷人和獸醫(yī)動(dòng)物中細(xì)胞因子表型的方法；鑒定處于與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中的受試者的方法；鑒定飲食和/或藥物干預(yù)以調(diào)節(jié)與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的方法；和用所選的黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)或者它們的混合物預(yù)防性或者治療性治療人或者獸醫(yī)動(dòng)物的方法。
背景黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)已經(jīng)表現(xiàn)出調(diào)節(jié)與血管健康有關(guān)的多種因子的潛力。所述潛力包括抗氧化作用(Lotito LB等人，BiochemBioplzys Res Commun 2000；276945-951，Arteel和Sies，F(xiàn)EBS Lett 1999；462167-170；Sanbongi等人，Cell Immunol 1997；177s 129-136)，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子產(chǎn)生(Mao等人，J Medicinal Foods 2002；517-22；Mao等人，Life Sciences 2000；661377-1386；Mao等人，Medicinal Foods 2000；3107-114)，調(diào)節(jié)類十二烷酸和NO和過硝酸鹽水平和一般的抗炎特征(Osakabe等人，Biosci Biotechnol Biochem1998；621535-1538；Arteel和Sies，F(xiàn)EBSLett 1999；462167-170)。還公開了黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的其他有益作用，例如，作為抗血小板和抗微生物劑，和用于癌癥治療(美國專利號(hào)5,554,645和6,297,273)。
TGF-β1是心血管系統(tǒng)的強(qiáng)力調(diào)節(jié)劑，從而大量研究致力于操縱其產(chǎn)生和用于治療目的的活性。已經(jīng)提出了多種試劑用于增加TGF-β1的產(chǎn)生。Metcalfe等人提出它莫西芬減小了脂質(zhì)病變的形成，這部分是通過攝入高脂肪食物的小鼠中TGF-β1的循環(huán)濃度上升所致(Densem等人，J Heart Lung Trans 2000；19551-556)；而與此吻合的是，Diurovic報(bào)導(dǎo)經(jīng)歷激素替代療法的絕經(jīng)后婦女顯示出TGF-β1的血漿濃度增加，表明用于減小心血管疾病的危險(xiǎn)的可能方法(Grainger等人，Nat Med 1995；11067-1073)。TGF-β1的拮抗劑的發(fā)現(xiàn)可能在治療纖維樣變性疾病中有用。核心蛋白聚糖——TGFβ1的天然抑制劑——已經(jīng)成功地用于抑制大鼠腎中TGF-β1介導(dǎo)的組織纖維樣變性(Isaka等人，Nat Med 1996；2418-423)。此外，已經(jīng)報(bào)導(dǎo)一種食用植物多酚白藜蘆醇具有針對(duì)血管平滑肌細(xì)胞中功能異常的保護(hù)作用，這部分是由于白藜蘆醇能夠抑制TGF-β1mRNA(Mizutani等人，Biochem Biophys Res Comm 2000；27461-67)?？紤]到TGF-β1的重要性，需要其他方法用以調(diào)節(jié)人或者獸醫(yī)動(dòng)物的體內(nèi)TGF-β1應(yīng)答。
申請(qǐng)人現(xiàn)在已經(jīng)令人驚奇地發(fā)現(xiàn)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)及它們的混合物能夠促進(jìn)細(xì)胞因子內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，包括TGF-β1內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，并且可用作篩選工具以鑒定受試者中細(xì)胞因子反應(yīng)性，包括TGF-β1反應(yīng)性或者確定所述細(xì)胞因子反應(yīng)性的表型。這使得內(nèi)科醫(yī)生、臨床醫(yī)生和獸醫(yī)以及營養(yǎng)學(xué)家以鑒定受試者(人或者獸醫(yī)動(dòng)物)為處于與炎癥或者免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥，如心血管疾病、關(guān)節(jié)炎和癌癥的低或者高危險(xiǎn)性中，并且可以根據(jù)所述受試者的表型設(shè)計(jì)適宜的飲食和/或藥物干預(yù)。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)，和它們的混合物的篩選、診斷、預(yù)防、治療和營養(yǎng)應(yīng)用，用于診斷、預(yù)防和/或治療與炎癥和/或者免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥。本發(fā)明還涉及用于人和/或獸醫(yī)動(dòng)物的定制藥物和/或飲食方案(即，干預(yù))的設(shè)計(jì)，所述方案用于處理通過本文描述的篩選方法學(xué)鑒定的人或獸醫(yī)動(dòng)物的健康組織。
一方面，提供了使用黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)，和它們的混合物鑒定人或者獸醫(yī)動(dòng)物中細(xì)胞因子反應(yīng)性的篩選方法學(xué)和測(cè)定法。用于確定人或者獸醫(yī)動(dòng)物中身體樣品中體外基線細(xì)胞因子水平的診斷測(cè)定法也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
另一方面，本發(fā)明涉及根據(jù)人或動(dòng)物的表型(即，細(xì)胞因子反應(yīng)性)設(shè)計(jì)人或者獸醫(yī)動(dòng)物的飲食和/或藥物方案(即，干預(yù))的方法，所述方案可有效防止或者治療通過所述篩選方法學(xué)和測(cè)定法診斷的健康狀況。在某些實(shí)施方案中，該方案可包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)，或它們的混合物。
在再一方面，提供了人或者獸醫(yī)動(dòng)物的預(yù)防或者治療性治療的方法，該方法包括基于人或者動(dòng)物的細(xì)胞因子表型，即細(xì)胞因子反應(yīng)性設(shè)計(jì)所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物的飲食和/或藥物方案，該方案可有效防止或者治療通過所述篩選方法學(xué)和測(cè)定法診斷的健康狀況。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)該方案，所述預(yù)防/治療包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)，或它們的混合物。
本發(fā)明還涉及確定未知具有細(xì)胞因子調(diào)節(jié)性質(zhì)的多酚的治療價(jià)值的方法，通過在含有至少一種低細(xì)胞因子產(chǎn)生者和至少一種高細(xì)胞因子產(chǎn)生者的身體樣品的測(cè)定中體外試驗(yàn)所述多酚，并將身體樣品與多酚孵育以確定低和高細(xì)胞因子產(chǎn)生者中的細(xì)胞因子水平是否受到多酚的存在的影響來實(shí)現(xiàn)所述治療價(jià)值的測(cè)定。
附圖簡(jiǎn)述

圖1代表所試驗(yàn)的所有個(gè)體(n＝13)和它們對(duì)每種可可黃烷醇/矢車菊苷配質(zhì)(FLO)級(jí)分的響應(yīng)的散布圖。每個(gè)空心圓代表個(gè)體的百分?jǐn)?shù)改變(相對(duì)于基線對(duì)照)形式的值。
圖2代表可可黃烷醇/矢車菊苷配質(zhì)(FLO)對(duì)低基線細(xì)胞因子產(chǎn)生者中TGF-β1的分泌的影響。在單獨(dú)的可可級(jí)分(25μg/ml)的存在下將PBMC孵育72小時(shí)后萃取上清液用于ELISA分析(平均±SEM；n＝7)。使用具有雙尾p值的學(xué)生成對(duì)t檢驗(yàn)將可可處理誘導(dǎo)的值與對(duì)照值(即，沒有可可的中值基線)比較(*認(rèn)為p＜0.05為顯著)。
圖3代表可可黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)(FLO)對(duì)高基線細(xì)胞因子產(chǎn)生者中TGF-β1分泌的影響。在單獨(dú)的可可級(jí)分(25μg/ml)的存在下將PBMC孵育72小時(shí)后萃取上清液用于ELISA分析(平均±SEM；n＝7)。使用具有雙尾p值的學(xué)生成對(duì)t檢驗(yàn)將可可處理誘導(dǎo)的值與對(duì)照值(即，沒有可可的中值基線)比較(*認(rèn)為p＜0.05為顯著)。
發(fā)明詳述將該申請(qǐng)中引用的所有專利、專利申請(qǐng)和參考文獻(xiàn)并入本文作為參考。對(duì)于任何不一致的情況，以本公開為準(zhǔn)。
本發(fā)明涉及黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)，或它們的混合物的篩選、診斷、預(yù)防、治療和營養(yǎng)應(yīng)用，用作篩選工具以鑒定人或者獸醫(yī)動(dòng)物中細(xì)胞因子反應(yīng)性，并且用于診斷、預(yù)防和/或治療與炎癥和/或者免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥。本文中所用的“炎癥途徑”是哺乳動(dòng)物的活機(jī)體在應(yīng)答有害刺激和/或組織損傷中發(fā)生的生物化學(xué)途徑。“免疫調(diào)節(jié)途徑”是能夠調(diào)節(jié)或者調(diào)整哺乳動(dòng)物的活機(jī)體中免疫功能的生物化學(xué)途徑。獸醫(yī)動(dòng)物的實(shí)例為貓、狗和馬。
本發(fā)明還涉及用于人或獸醫(yī)動(dòng)物的定制藥物和/或飲食方案(即，干預(yù))的設(shè)計(jì)，所述方案用于處理通過本文描述的篩選方法學(xué)鑒定的人和/或獸醫(yī)動(dòng)物的健康組織。一旦鑒定了健康組織或者病癥，就可以使用用于預(yù)防或者治療病癥的任何方法。在某些實(shí)施方案中，該方案可包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)，或它們的混合物。
化合物和組合物用于本發(fā)明的化合物為黃烷醇，如表兒茶酸、兒茶酸和它們的沒食子酸形式，如表兒茶酸沒食子酸和兒茶酸沒食子酸。還可以使用矢車菊苷配質(zhì)，其為了本申請(qǐng)的目的被定義為黃烷醇的寡聚體并且可以含有至少一種沒食子酸化單體。矢車菊苷配質(zhì)包括B型和A型矢車菊苷配質(zhì)。
黃烷醇為單體化合物并且包括(+)兒茶酸、(-)表兒茶酸和它們各自的差向異構(gòu)體(例如，(-)兒茶酸和(+)表兒茶酸)并且具有結(jié)構(gòu) 矢車菊苷配質(zhì)寡聚體可以具有2到約18，優(yōu)選2到約12，最優(yōu)選2到約10個(gè)單體單位。至少某些單體單位可以沒食子酸化。例如，寡聚體可以是二聚體、三聚體、四聚體、五聚體、六聚體、七聚體、八聚體、九聚體和十聚體。在B型寡聚體中，上面所示的單體通過(4→6)和/或(4→8)的黃烷間鍵連接。僅具有(4→8)鍵的寡聚體是線性的；而存在至少一個(gè)(4→6)鍵導(dǎo)致具有分枝的寡聚體。
通過下式代表線性寡聚體，其中n為0到16的整數(shù) 用下式代表分枝寡聚體的實(shí)例，其中A和B獨(dú)立地為1到15的寡聚體，在最終寡聚體中A和B的和為3到18
本發(fā)明中還可以使用A型矢車菊苷配質(zhì)，即含有C2-O-C7和C4→C8或者C4→C6的雙連接的寡聚體(含有上述單體)。
用于本發(fā)明中的化合物可以是天然來源或者合成制備。天然發(fā)生的化合物可以從含有多種多酚的化合物，例如，從可可、葡萄種子、花生、蔓越橘、蘋果和其他來源分離。本領(lǐng)域中技術(shù)人員基于可用性和/或成本選擇天然或者合成化合物。
為了簡(jiǎn)單起見，將從可可得到的用于本發(fā)明的黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)在此處稱為“可可多酚”(CP)。CP可來源于可可豆、可可?；蛘呖煽沙煞?。術(shù)語“可可成分”指來源于無殼的可可粒的含有可可固體的物質(zhì)，如巧克力液體和部分或者完全脫脂的可可固體(例如，蛋糕或者粉劑)。CP可以以可可成分、提取物、提取級(jí)分或者合并的提取級(jí)分包含在本發(fā)明的組合物中。
通過從可可豆、可可粒或者可可成分，如巧克力液體和部分脫脂的可可固體，和/或者完全脫脂的可可固體制備可可多酚。優(yōu)選地，從完全或者部分脫脂的可可粉制備提取物?？梢允褂脕碜钥煽蓪?Theobroma)的任何種(例如，T.cacao和T.grandiflorum)、Herrania或者它們的種間和種內(nèi)雜種的可可豆?？梢詮慕?jīng)發(fā)酵、發(fā)酵不足或者未發(fā)酵的豆制備提取物，所發(fā)酵的豆具有最少量的可可多酚，未發(fā)酵的具有最多可可多酚。豆的選擇可以基于豆的發(fā)酵因子，例如，可以從發(fā)酵因子為275或者更小的豆制備提取物?？梢匀鐕H專利申請(qǐng)?zhí)朠CT/US97/15893(以WO98/09533出版，相應(yīng)于美國專利號(hào)6,015,913，這里引用其相關(guān)部分作為參考)中描述的通過控制發(fā)酵的程度優(yōu)化可可成分中多酚水平和其提取。
可以從可可成分提取可可多酚，其中已經(jīng)使用可可加工的常規(guī)方法(例如，在Industrial Chocolate Manufacture and Use，編者Beckett，S.T.，Blackie Acad.& Professional，New York，1997，如1、5、和6章中描述)或者Kealey等的美國專利號(hào)6,015,913中描述的改良加工方法加工了所述可可成分，所述改良方法與常規(guī)加工方法相比通過防止多酚破壞而保存了多酚。所述改良可可加工方法省略了常規(guī)的焙燒步驟。從而，可以使用通過(a)將可可豆加熱一定時(shí)間和溫度，其足夠使可可殼變松而不焙燒可可粒；(b)從可可殼風(fēng)選可可粒；(c)螺旋壓榨可可粒和(d)回收可可油和部分脫脂的可可固體，其合有可可多酚的保存水平得到的可可成分。該方法比常規(guī)方法保留高得多的矢車菊苷配質(zhì)寡聚體。通過該方法產(chǎn)生的可可固體可以含有每克脫脂固體20,000μg總矢車菊苷配質(zhì)；優(yōu)選大于25,000μg/g，更優(yōu)選大于28,000μg/g，最優(yōu)選大于30,000μg/g。為了本發(fā)明的目的，如Hammerstone等人，(J.Agric.Food Chem.，472490-496，1999)描述的確定總矢車菊苷配質(zhì)量，本文引用該文獻(xiàn)作為參考。
可以使用溶劑從上面所述來源提取可可多酚，其中多酚溶于所述溶劑中。適宜的溶劑包括水或者有機(jī)溶劑，如甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇和乙酸乙酯?？梢允褂萌軇┗旌衔?。當(dāng)用水作為溶劑時(shí)，可以將其用例如乙酸輕微酸化。優(yōu)選溶劑為水和有機(jī)溶劑，例如，水性甲醇、乙醇或者丙酮的混合物。水性有機(jī)溶劑可以含有，例如，約50％到約95％有機(jī)溶劑。從而，可以使用水中的50％、60％、70％、80％和90％有機(jī)溶劑。該溶液還可以含有少量酸，如乙酸，例如，量為約0.5％到約1.0％。提取物的組成，即表現(xiàn)度(即寡聚體圖)和矢車菊苷配質(zhì)寡聚體的量將取決于溶劑的選擇。例如，水提取物主要含有單體，乙酸乙酯提取物含有單體和低級(jí)寡聚體，主要為二聚體和三聚體，水性甲醇、乙醇或者丙酮提取物含有單體和一系列高級(jí)寡聚體。用于提取單體和高級(jí)矢車菊苷配質(zhì)寡聚體的優(yōu)選溶劑之一是70％丙酮。然而，在本發(fā)明中可以使用含有多酚的任何提取物。可可多酚提取的方法是本領(lǐng)域中公知的并且在例如，美國專利號(hào)5,554,645(Romanczyk等人)和國際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US97/05693(以WO97/36497出版)中描述，這里引用這兩篇文獻(xiàn)作為參考。從而，在一個(gè)實(shí)施方案中，通過將可可豆減小為可可粉，將其脫脂，提取可可多酚，并純化該提取物制備可可提取物。將可可豆和漿冷凍干燥，將冷凍干燥的可可豆去漿和去殼，并研磨去殼的豆可以制備可可粉。
例如，通過除去咖啡因和/或可可堿，并通過凝膠滲透層析和/或高壓液相層析(HPLC)可以純化可可多酚提取物。例如，可以使用凝膠滲透層析(例如，在Sephadex LH-20上)富集高級(jí)矢車菊苷配質(zhì)寡聚體的提取物。例如，直到所選的寡聚體開始從柱子洗脫才可以收集含有單體和低級(jí)寡聚體的洗脫物。這種提取的一個(gè)實(shí)例是本領(lǐng)域中公知的并且在國際專利申請(qǐng)PCT/US97/05693(以WO97/36497出版，現(xiàn)在為美國專利號(hào)6,297,273，將其相關(guān)部分并入本文作為參考)的實(shí)施例5中描述。通過使用制備HPLC，例如，正相HPLC，可以將提取物分級(jí)分離成單體級(jí)分和含有按重量計(jì)至少50％單體或者特定寡聚體的寡聚體級(jí)分。當(dāng)級(jí)分含有單體和低級(jí)寡聚體(最多并且包括四聚體)時(shí)，所述級(jí)分含有按重量計(jì)約90到95％的特定寡聚體級(jí)分?？梢詫⑺Ｍ募?jí)分分離后合并以得到所選寡聚體的聯(lián)合，例如，得到寡聚體3-10或5-10。本領(lǐng)域技術(shù)人員考慮本說明書的指導(dǎo)、本領(lǐng)域中的一般知識(shí)和，例如，美國專利號(hào)5,554,645(Romanczyk等人)和國際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US97/05693(以97/36497出版，現(xiàn)在為美國專利號(hào)6,297,273)，WO可以操縱層析條件以實(shí)現(xiàn)所希望的矢車菊苷配質(zhì)圖。
通過含有多酚的可可成分，或者通過包括巧克力，可以在本發(fā)明的組合物中提供可可多酚，所述巧克力可以是奶、甜食和半甜食，并且優(yōu)選為暗色巧克力，和低脂巧克力?？煽沙煞挚梢酝ㄟ^使用常規(guī)可可加工方法制備，但是優(yōu)選使用Kealey等人的美國專利號(hào)6,015,913中描述的方法制備。備選地，為了提高可可多酚的水平，可以使用從發(fā)酵因子為275或者更小的可可豆制備的可可液體和可可固體。這些成分的可可多酚含量高于使用常規(guī)可可加工方法(例如，使用焙燒)和完全發(fā)酵的可可豆得到的可可多酚含量。使用常規(guī)技術(shù)從上述成分可以制備巧克力或者使用如國際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US99/05414(以WO99/45788出版，現(xiàn)在為美國專利號(hào)6,399,139，將其相關(guān)部分并入本文作為參考)描述改良方法以在巧克力生產(chǎn)期間保存可可多酚也可以制備巧克力。通過下面的非常規(guī)方法的至少一種制備的巧克力在本文中優(yōu)選稱為“具有保存量的可可多酚的巧克力”(i)從發(fā)酵不足或者未發(fā)酵的可可豆制備；(ii)在可可成分生產(chǎn)過程中保存可可多酚；和(iii)在巧克力生產(chǎn)過程中保存可可多酚。
也可使用合成矢車菊苷配質(zhì)并且其通過本領(lǐng)域中公知的方法制備并且如例如在國際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US98/21392(以WO99/19319出版，現(xiàn)在為美國專利號(hào)6,207,842，將其相關(guān)部分并入本文作為參考)描述。
黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的衍生物也可用于本發(fā)明中。這些衍生物包括沒食子酸化單體和寡聚體、糖基化單體和寡聚體、和它們的混合物；單體和寡聚體的代謝物，如硫酸化、葡糖醛酸化和甲基化形式；和由結(jié)腸微生物群落代謝或者內(nèi)在的哺乳動(dòng)物代謝產(chǎn)生的矢車菊苷配質(zhì)的酶切割產(chǎn)物。所述衍生物的實(shí)例和它們的產(chǎn)生方法是本領(lǐng)域中眾所周知的，如例如，在國際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US00/335331(以WO01/41775出版，將其相關(guān)部分并入本文作為參考)中描述。所述衍生物可以來源于天然來源或者合成制備。
篩選和診斷測(cè)定法本發(fā)明的黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)可以用作篩選工具以鑒定受試者、人或者獸醫(yī)動(dòng)物中的細(xì)胞因子反應(yīng)性，從而用黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)治療。確定受試者的細(xì)胞因子反應(yīng)性的重要優(yōu)點(diǎn)取決于基于個(gè)體設(shè)計(jì)藥物和/或飲食干預(yù)的能力。
細(xì)胞因子包括白介素、淋巴因子、趨化因子、TNF、干擾素和TGF。在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞因子為TGF beta[此處“TGF-β”]，例如，TGF beta 1[此處“TGF-β1”]。細(xì)胞因子的實(shí)例為IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、和TNF-α(alpha)。與這些細(xì)胞因子有關(guān)的疾病或者病癥的診斷和治療在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
用于鑒定人或者獸醫(yī)動(dòng)物中細(xì)胞因子反應(yīng)性的篩選測(cè)定法包括(i)體外確定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；和(ii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平改變的條件下，將所述身體樣品與一系列黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)，或者它們的混合物孵育，并測(cè)量所得細(xì)胞因子水平。該測(cè)定法可以還包括將基線細(xì)胞因子水平與步驟(ii)中所得細(xì)胞因子水平比較以確定人或者獸醫(yī)動(dòng)物中對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的細(xì)胞因子反應(yīng)性。
本文中所用的“基線細(xì)胞因子水平”指當(dāng)人或者獸醫(yī)動(dòng)物未受到經(jīng)設(shè)計(jì)用于調(diào)節(jié)或者導(dǎo)致調(diào)節(jié)該細(xì)胞因子水平的任何飲食或者藥物治療時(shí)，體外確定的所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體中的細(xì)胞因子水平。
使用如實(shí)施例2中描述的測(cè)定法可以鑒定細(xì)胞因子反應(yīng)性。從而，從受試者、人或者獸醫(yī)動(dòng)物得到血液；分離外周血單核細(xì)胞(PBMB)并將其與單獨(dú)的黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)孵育。在加入黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)之前和之后測(cè)量培養(yǎng)上清液中所分泌的細(xì)胞因子，例如，TGF-β1的水平。使用一系列單獨(dú)試驗(yàn)的個(gè)體黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)，例如，如實(shí)施例2中所示的單體、二聚體到十聚體，或者備選地，使用單一試驗(yàn)樣品中的黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的混合物可以鑒定細(xì)胞反應(yīng)性。適宜的混合物是含有黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)寡聚體2-18，例如，單體和寡聚體2-10的可可提取物。也可以使用適于測(cè)量黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)對(duì)身體樣品中細(xì)胞因子分泌和/或水平的影響的其他測(cè)定法。
分析結(jié)果以確定細(xì)胞因子對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的反應(yīng)性。例如，對(duì)每種試驗(yàn)的黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)，或者在備選方法中，對(duì)黃烷醇/矢車菊苷配質(zhì)混合物計(jì)算細(xì)胞因子分泌相對(duì)于受試者的基線水平的百分?jǐn)?shù)改變。結(jié)果為三倍重要性。
首先，可以將受試者鑒定為低基線細(xì)胞因子產(chǎn)生者或者高基線細(xì)胞因子產(chǎn)生者。這點(diǎn)是重要的，因?yàn)閮H通過觀察該受試者的基線細(xì)胞因子水平不能鑒定細(xì)胞因子反應(yīng)性；需要使用黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的孵育步驟。從而，如果黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)，或者它們的混合物增加基線細(xì)胞因子水平，那么將受試者鑒定為“低基線產(chǎn)生者”。相比，如果黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)，或者它們的混合物降低基線細(xì)胞因子水平，那么將受試者鑒定為“高基線產(chǎn)生者”。如實(shí)施例2中所示，所有黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)都具有細(xì)胞因子內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定或者調(diào)節(jié)活性，即它們根據(jù)受試者的細(xì)胞因子表型增加或者降低(盡管程度不同)細(xì)胞因子水平。換句話說，相同的黃烷醇或矢車菊苷配質(zhì)根據(jù)受試者的基線細(xì)胞因子水平可以降低或者增加細(xì)胞因子水平。例如，如關(guān)于TGF-β1所示，盡管某些黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)在一種情況中比另一種情況中更具活性，但是每個(gè)個(gè)體中每種化合物的一般作用是相似的，因?yàn)樗鼈兇碳GF-β1從低基線產(chǎn)生者釋放，并抑制TGF-β1從高基線產(chǎn)生者分泌。
其次，根據(jù)細(xì)胞因子，鑒定受試者為低或者高細(xì)胞因子產(chǎn)生者可以診斷該受試者中以前未診斷的健康狀況。其還提供了根據(jù)個(gè)體進(jìn)行治療的機(jī)會(huì)。從而，低基線細(xì)胞因子產(chǎn)生者可能需要增加細(xì)胞因子水平，高基線細(xì)胞因子產(chǎn)生者可能需要降低細(xì)胞因子水平，兩者的目的都是促進(jìn)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。本文中公開的化合物可用于實(shí)現(xiàn)該作用。本領(lǐng)域中技術(shù)人員將理解，“內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定”指生物的正常身體狀態(tài)中穩(wěn)定性的傾向，其通過控制機(jī)理體系實(shí)現(xiàn)。
再次，對(duì)治療需要該治療的受試者最有效的黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)可以通過選擇對(duì)基線細(xì)胞因子水平產(chǎn)生最顯著作用的黃烷醇/矢車菊苷配質(zhì)來鑒定。例如，在實(shí)施例2中，這些最有效的黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)對(duì)于低基線產(chǎn)生者是單體和二聚體，對(duì)于高基線產(chǎn)生者是高級(jí)寡聚體。
上面描述的測(cè)定法可用于為任何細(xì)胞因子產(chǎn)生一組標(biāo)準(zhǔn)，細(xì)胞因子可以在許多受試者(包括低、正常和高細(xì)胞因子水平的那些受試者)之間試驗(yàn)它們對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的應(yīng)答。這些標(biāo)準(zhǔn)有助于根據(jù)受試者的基線細(xì)胞因子水平為該受試者設(shè)計(jì)飲食和/或藥物方案——將受試者的基線細(xì)胞因子水平與所述標(biāo)準(zhǔn)相比并設(shè)計(jì)適宜的定制方案，例如，黃烷醇/矢車菊苷配質(zhì)方案。當(dāng)為一系列細(xì)胞因子得到時(shí)，所述標(biāo)準(zhǔn)尤其有用。根據(jù)基線細(xì)胞因子水平，可以設(shè)計(jì)飲食和/或藥物方案以調(diào)節(jié)受試者中細(xì)胞因子水平，即促進(jìn)人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體中細(xì)胞因子水平的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。
如上面提到的，上面提到的篩選方法和測(cè)定法可進(jìn)一步用于早期鑒定(診斷)處于與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中的受試者，甚至不存在可見的癥狀時(shí)也可鑒定。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以基于與所述篩選測(cè)定中試驗(yàn)的細(xì)胞因子有關(guān)本領(lǐng)域中的知識(shí)鑒定這些病癥。
例如，認(rèn)為TGF-β1是參與多種生理過程的多功能蛋白質(zhì)(Grainger和Metcalfe，The Endothelium in Clinical Practice，Rubanyi和Dzau，編著(Marcel Dekker Inc，New York)1997；203-243；Kenny等人，Am Heart J 1994；1271456-1461)。尤其，TGF-β1受到作為心血管保護(hù)的潛在介質(zhì)的關(guān)注，因?yàn)镚rainger和Metcalfe提出了他們的保護(hù)性細(xì)胞因子假說(Baxter等人，J Cardiovasc Phare 2001；38930-939，Mao等人，Int J Immunotherapy 1999；1523-29)。該假說基于如下證據(jù)TGF-β1保持動(dòng)脈血管壁中內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的正常生理表型，從而抑制內(nèi)皮細(xì)胞的活化，以及抑制導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化劑誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞的遷移、去分化和增殖。體內(nèi)研究已經(jīng)表明患有晚期動(dòng)脈粥樣硬化的受試者中TGF-β1的活性形式的水平下降(Baxter等人，J Cardiovasc Phare 2001；38930-939)，該結(jié)果支持TGF-β1作為動(dòng)脈粥樣硬化形成的抑制劑。另一方面，TGF-β1的過量產(chǎn)生可導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)積累，這對(duì)于受傷的血管壁是不利的，因此導(dǎo)致心臟纖維樣變性(Pearson等人，Methods Enzymol 2001；335350-360)。對(duì)TGF-β1和冠心病(CHD)之間關(guān)系的研究表明TGF-β1的活性形式的增加與CHD的發(fā)生和嚴(yán)重性有關(guān)(Grainger等人，HuMol Gen 1999；893-97)。此外，另一個(gè)研究表明高產(chǎn)生的TGF-β1基因型和心臟移植后冠狀動(dòng)脈病變的早發(fā)作相關(guān)(Wang等人，Cardiovasc Res 1997；34404-410)。最后，暗示TGF-β1是腎病/腎衰竭的主要因素。因此，在診斷測(cè)定中確定受試者中的異?；€細(xì)胞因子水平可以有助于受試者的早期診斷和治療。從而，確定受試者中TGF-β1水平可以導(dǎo)致上面提到的疾病(例如，心血管疾病、冠心病、心臟纖維樣變性、動(dòng)脈粥樣硬化、腎病/腎衰竭)的早期診斷和治療。例如，使用本發(fā)明的篩選方法學(xué)，可以將人或者獸醫(yī)動(dòng)物(例如，貓、狗)診斷為具有血管和腎健康問題，如處于心血管疾病、冠心病、心臟纖維樣變性、動(dòng)脈粥樣硬化、和/或腎病或衰竭的危險(xiǎn)中或者患有心血管疾病、冠心病、心臟纖維樣變性、動(dòng)脈粥樣硬化、和/或腎病或衰竭。
類似地，IL-4水平與變態(tài)反應(yīng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Gallagher等人，Curr.Opin.Rheumatol.，11(5)372-6，1999)和哮喘(Pauwels等人，Clin.Exp.Allergy，28Suppl.31-5，1998)和炎癥免疫疾病(Rocken等人，Immunol Today 17(5)225-31，1996)有關(guān)。IL-4還可能在預(yù)防依賴胰島素的糖尿病的發(fā)作中有作用(Cameron等人，Crit Rev Immunol17(5-6)537-44，1997)。IL-6的下調(diào)已經(jīng)用于治療炎性腸病(Rogler等人，World J Surg 22(4)382-9，1998)。IL-6在炎性皮膚病的誘導(dǎo)中起重要作用，表明IL-6產(chǎn)生的下調(diào)可以治療該病癥(Sawamura等人，J Immunol，161(10)5633-9，1998)。已經(jīng)暗示IL-5作為在炎癥和諸如哮喘和牙周病中起重要作用。并且TNFα與炎性腸病(Sandborn等人，Inflamm.Bowel Dis.5(2)，119-33，1999)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Ohshima等人，J Clin Immunol，19(5)305-13，1999)有關(guān)。使用本發(fā)明的篩選方法學(xué)可以在早期診斷與這些和其他細(xì)胞因子有關(guān)的病癥。
飲食和藥物方案的設(shè)計(jì)具體人或者獸醫(yī)動(dòng)物的飲食和/或藥物方案或者干預(yù)可以基于該人或者動(dòng)物的細(xì)胞因子表型，即，細(xì)胞因子產(chǎn)生進(jìn)行定制設(shè)計(jì)，并且可以有利地優(yōu)化用于預(yù)防性或治療性治療的方法。使用，例如，黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)的施用可以實(shí)現(xiàn)所述預(yù)防性或治療性治療，然而，可以使用公知治療與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的其他預(yù)防或者治療。
設(shè)計(jì)飲食和/或藥物方案的方法通常包括(i)在體外確定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；和(ii)基于基線細(xì)胞因子水平設(shè)計(jì)用于保持該受試者的健康狀況或者用于預(yù)防和/或治療與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的藥物和/或飲食方案(取決于該受試者的狀況)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞因子是TGFβ，更具體地，TGF-β1。
該定制設(shè)計(jì)的方案可以保持、增加、或者減小人或者獸醫(yī)動(dòng)物中的基線細(xì)胞因子水平或者防止與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的健康狀況的發(fā)展，或者治療該健康狀況。在某些實(shí)施方案中，所述藥物和/或飲食方案將考慮施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體。然而，可以使用公知預(yù)防與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥、預(yù)防所述病癥的發(fā)展和/或治療所述病癥的任何其他方案。甚至本領(lǐng)域中公知的療法也可以有利地和出乎意料地從確定所述受試者的細(xì)胞因子表型和反應(yīng)性中受益。
該方法可以還包括用于鑒定細(xì)胞因子對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的反應(yīng)性(例如，TGFβ，更具體地TGFβ1反應(yīng)性)的篩選測(cè)定法?？梢匀缜懊嬲鹿?jié)和實(shí)施例2中描述的實(shí)施該測(cè)定法。
在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了設(shè)計(jì)人或者獸醫(yī)動(dòng)物的飲食和/或藥物方案的方法，該方法包括(i)在體外確定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)基于基線細(xì)胞因子水平診斷該人或者獸醫(yī)動(dòng)物是否處于與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中或者患有該病癥；和(iii)設(shè)計(jì)可有效預(yù)防性或者治療性治療步驟(ii)中診斷的病癥的藥物和/或飲食方案。該方案可以包括施用黃烷醇、矢車菊苷配質(zhì)或者它們的混合物，但是也可以使用本領(lǐng)域中技術(shù)人員顯而易見的其他方法。
在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了設(shè)計(jì)人或者獸醫(yī)動(dòng)物的飲食和/或藥物方案的方法，該方法包括(i)在體外確定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平變化的條件下將所述身體樣品與一系列黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)孵育，并測(cè)量所得細(xì)胞因子水平；(iii)將基線細(xì)胞因子水平與步驟(ii)中所得細(xì)胞因子水平比較以確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的細(xì)胞因子反應(yīng)性；和(iv)基于細(xì)胞因子反應(yīng)性，設(shè)計(jì)促進(jìn)所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物中內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的細(xì)胞因子水平的藥物和/或飲食方案；其中所述藥物和/或飲食方案包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體，或者它們的混合物。
本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括設(shè)計(jì)人或者獸醫(yī)動(dòng)物的飲食和/或藥物方案的方法，該方法包括(i)在體外確定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平變化的條件下將所述身體樣品與一系列黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)孵育，并測(cè)量所得細(xì)胞因子水平；(iii)將基線細(xì)胞因子水平與步驟(ii)中所得細(xì)胞因子水平比較以確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的細(xì)胞因子反應(yīng)性；(iv)基于細(xì)胞因子反應(yīng)性診斷該人或者獸醫(yī)動(dòng)物是否處于與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中或者患有該病癥；和(v)設(shè)計(jì)可有效預(yù)防性或者治療性治療步驟(iv)中診斷的病癥的藥物和/或飲食方案。該藥物和/或飲食方案可以包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體，但是也可以使用其他適宜的方案?？梢栽\斷的病癥的實(shí)例為心血管疾病、冠心病、心臟纖維樣變性、動(dòng)脈粥樣硬化、和/或腎病或腎衰竭。
根據(jù)人或者獸醫(yī)動(dòng)物是否需要增加、減小或者保持細(xì)胞因子水平設(shè)計(jì)方案，該方案包括施用所選的黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)，或者它們的混合物。本發(fā)明還可用于具有正常基線細(xì)胞因子水平的受試者，因?yàn)槭┯么颂幟枋龅幕衔锏幕旌衔锟梢灶A(yù)防以保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的細(xì)胞因子水平。例如，可以設(shè)計(jì)飲食或者藥物方案，并且該方案包括使用低級(jí)和高級(jí)矢車菊苷配質(zhì)寡聚體的混合物，所述混合物將保持基線細(xì)胞因子水平。
治療方法預(yù)防性或者治療性治療人或者獸醫(yī)動(dòng)物的方法也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。該方法包括基于如上述的人或者動(dòng)物的細(xì)胞因子表型為所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物設(shè)計(jì)飲食和/或藥物方案，并根據(jù)該方案施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法提供了人或者獸醫(yī)動(dòng)物的預(yù)防性或者治療性治療，所述方法包括(i)在體外確定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平變化的條件下將所述身體樣品與一系列黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)孵育，并測(cè)量所得細(xì)胞因子水平；(iii)將基線細(xì)胞因子水平與步驟(ii)中所得細(xì)胞因子水平比較以確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的細(xì)胞因子反應(yīng)性；(iv)基于細(xì)胞因子反應(yīng)性，設(shè)計(jì)促進(jìn)所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物中內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的細(xì)胞因子水平的藥物和/或飲食方案；其中所述藥物和/或飲食方案包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體；和(v)根據(jù)步驟(iv)中設(shè)計(jì)的藥物和/或飲食方案對(duì)所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體；或者它們的混合物。
還提供了人或者獸醫(yī)動(dòng)物的預(yù)防性或者治療性治療的方法，所述方法包括(i)在體外確定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)基于基線細(xì)胞因子水平診斷該人或者獸醫(yī)動(dòng)物是否處于與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中或者患有該病癥；和(iii)設(shè)計(jì)可有效預(yù)防性或者治療性治療步驟(ii)中診斷的病癥的藥物和/或飲食方案；和(iv)根據(jù)步驟(iii)中設(shè)計(jì)的藥物和/或飲食方案治療所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物。在某些實(shí)施方案中，該藥物和/或飲食方案可以包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體，但是也可以使用其他方法。所診斷的病癥的實(shí)例為心血管疾病、冠心病、心臟纖維樣變性、動(dòng)脈粥樣硬化、和/或腎病或腎衰竭。
另一實(shí)施方案包括人或者獸醫(yī)動(dòng)物的預(yù)防性或者治療性治療的方法，所述方法包括(i)在體外確定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平變化的條件下將所述身體樣品與一系列黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)孵育，并測(cè)量所得細(xì)胞因子水平；(iii)將基線細(xì)胞因子水平與步驟(ii)中所得細(xì)胞因子水平比較以確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的細(xì)胞因子反應(yīng)性；(iv)基于基線細(xì)胞因子水平診斷所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物是否處于與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中或者患有該病癥；(v)設(shè)計(jì)可有效預(yù)防性或者治療性治療步驟(iv)中診斷的病癥的藥物和/或飲食方案；和(vi)根據(jù)步驟(v)中設(shè)計(jì)的藥物和/或飲食方案治療所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物。該藥物和/或飲食方案可以包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體，但是也可以使用本領(lǐng)域中技術(shù)人員顯而易見的其他方法。所要治療的病癥可以為心血管疾病、冠心病、心臟纖維樣變性、動(dòng)脈粥樣硬化、和/或腎病或腎衰竭。
在更具體的實(shí)施方案中，考慮治療低基線TGF-β1產(chǎn)生者和高基線TGF-β1產(chǎn)生者的方法。從而，下面的兩種方法也在本發(fā)明的范圍內(nèi)(i)治療受試者的方法，所述受試者為低基線TGF-β產(chǎn)生者，所述方法包括對(duì)該受試者施用至少一種黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體，其選自單體、二聚體、三聚體、四聚體和五聚體，或者它們的任何混合物，所用的量可有效刺激該受試者中TGF-β的水平，其中所述受試者為人或者獸醫(yī)動(dòng)物；和(ii)治療受試者的方法，所述受試者為高基線TGF-β產(chǎn)生者，所述方法包括對(duì)該受試者施用至少一種矢車菊苷配質(zhì)寡聚體6-10，或者它們的任何混合物，所用的量可有效刺激該受試者中TGF-β的水平，其中所述受試者為人或者獸醫(yī)動(dòng)物。
可以如本文中描述的對(duì)處于與炎癥和/或調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中或者患有所述病癥的患者確定表型、診斷和/或治療。這些病癥的實(shí)例為心血管疾病、冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、心臟纖維樣變性、血栓形成(例如，深靜脈血栓形成)和通常其他的血管病癥，以及哮喘、炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、Chron氏病、牙齦炎、牙周炎、急性水腫、和關(guān)節(jié)炎(例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)。
以有效量施用黃烷醇、矢車菊苷配質(zhì)和其衍生物。本領(lǐng)域中技術(shù)人員使用本領(lǐng)域中的常識(shí)和本申請(qǐng)中的教導(dǎo)可以確定有效量。例如，可以以每天至少約50mg到每天約數(shù)克量的施用本發(fā)明化合物。最高終末量沒有限制。在一個(gè)實(shí)施方案中，有效量為約100mg到約2克，或者約100mg到約1.5g，或者約200到約600mg?？紤]到所述化合物在受試者的身體中的半壽期，每天可以施用所述化合物一次或數(shù)次(例如，2或3次)。所述化合物可以以本領(lǐng)域中技術(shù)人員設(shè)計(jì)的方案施用或者每天、每周、每月施用，等等。
黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)可以以食物、食物添加劑、飲食補(bǔ)充劑，或者藥物的形式施用。這些組合物可以含有載體、稀釋劑，或者賦形劑。根據(jù)所計(jì)劃的用途，可以選擇所述載體、稀釋劑或者賦形劑以適于人或者獸醫(yī)用途、食物、添加劑、補(bǔ)充品或者藥物用途。
本文中所用的“食物”為基本上由蛋白質(zhì)、碳水化合物和/或脂肪組成的物質(zhì)，其用于生物的機(jī)體中以維持生長、修復(fù)和重要過程和供給能量。食物還可以含有補(bǔ)充物質(zhì)，如礦物質(zhì)、維生素和調(diào)味劑。見Merriam-Webster′s Collegiate Dictionary，第10版，1993。術(shù)語食物包括適于人或者動(dòng)物消費(fèi)的飲料。本文中所用“食物添加劑”由FDA在21 C.F.R.170.3(e)(1)中定義并且包括直接和間接添加劑。本文中所用“藥物”為醫(yī)學(xué)藥物。見Merriam-Webster′s Collegiate Dictionary，第10版，1993。藥物還可以指藥劑。本文中所用“飲食補(bǔ)充劑”是計(jì)劃補(bǔ)充飲食的產(chǎn)品(除了煙草之外)，其具有或者含有一種或多種下面的飲食成分維生素、礦物質(zhì)、草本或者其他植物性藥材、氨基酸、由人用來通過增加總的日攝取量補(bǔ)充飲食的飲食物質(zhì)、或者濃縮物、代謝物、組分、提取物或者這些成分的組合。
本發(fā)明范圍包括通過增加黃烷醇/矢車菊苷配質(zhì)水平改進(jìn)的任何常規(guī)食物，包括任何飲料。
對(duì)于可可多酚的情況，通過(i)向不含有可可多酚的食物加入可可多酚或者其衍生物或者(ii)當(dāng)食物通常含有可可多酚，如巧克力，通過增強(qiáng)在常規(guī)制備的食物中發(fā)現(xiàn)的多酚水平以實(shí)現(xiàn)提高?？梢酝ㄟ^加入額外的可可多酚，例如，提取物形式的可可多酚；或者加入與含有另一種多酚的成分(例如，堅(jiān)果皮)聯(lián)合的可可多酚；通過操作可可成分加工和可可豆選擇，如上述，以保存用于生產(chǎn)食品的可可成分中的可可多酚來實(shí)現(xiàn)所述增強(qiáng)。從而，這些食物(包括飲料)與常規(guī)食物(包括飲料)相比含有“升高的多酚水平”(包括可可矢車菊苷配質(zhì))。當(dāng)巧克力生產(chǎn)商將含有可可多酚的可可提取物加入其以前通過商業(yè)途徑可得到的產(chǎn)品中時(shí)，得到了具有多酚的升高水平的巧克力的實(shí)例。所述食物可以稱為“高可可多酚食物”，即，它們含有比它們的常規(guī)食物更高的多酚水平。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述食物是糖果，如身份標(biāo)準(zhǔn)(SOI)或者非SOI巧克力，如奶、甜的和半甜巧克力，包括黑色巧克力、低脂巧克力和糖果，其可以是巧克力包裹的糖果。其他實(shí)例包括烘焙產(chǎn)品(例如，核仁巧克力餅、烘焙小吃、小甜餅、餅干)、調(diào)味品、格蘭諾拉麥片、太妃咀嚼糖、食品替代條、涂抹品、糖漿、粉狀飲料混合物、可可或巧克力香味的飲料、布丁、年糕、稻米混合物、調(diào)味沙司等等。如果希望，所述食物可以是巧克力或者可可味的。食品可以還含有L-精氨酸和/或膽固醇降低劑。
所述組合物可以為了預(yù)防的目的施用于健康哺乳動(dòng)物或者施用于需要治療或者具有至少一種相關(guān)危險(xiǎn)因素的哺乳動(dòng)物。具有與血管健康問題有關(guān)的至少一種危險(xiǎn)因素的任何個(gè)體都是此處描述的組合物所施用的受試者。具有膽固醇水平升高的家族史的個(gè)體、絕經(jīng)期間或者絕經(jīng)后女性、絕經(jīng)后女性/心肌缺血后損傷、手術(shù)或者化學(xué)誘導(dǎo)的雌激素不足的女性、老年人、患有高血糖、糖尿病、高血壓和肥胖的人，和吸煙者都是需要此處描述的治療的敏感個(gè)體。易于產(chǎn)生血管健康問題或者使用本文中描述的測(cè)定法已經(jīng)鑒定為處于發(fā)生與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中的哺乳動(dòng)物的其他群體也可以根據(jù)所設(shè)計(jì)的方案接受所述組合物。
其他多酚的篩選本發(fā)明還涉及設(shè)計(jì)用于評(píng)估其他多酚是否能夠促進(jìn)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的方法。
根據(jù)哺乳動(dòng)物的細(xì)胞因子產(chǎn)生確定多酚調(diào)節(jié)該哺乳動(dòng)物中細(xì)胞因子水平的治療價(jià)值的方法可通過在含有來自至少一個(gè)低細(xì)胞因子應(yīng)答者和至少一個(gè)高細(xì)胞因子應(yīng)答者(如使用黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)在本文中描述的篩選測(cè)定法中確定)的身體樣品的測(cè)定法中在體外試驗(yàn)多酚并將該多酚對(duì)低細(xì)胞因子應(yīng)答者的效果與對(duì)高細(xì)胞因子應(yīng)答者的效果相比較以確定哪種哺乳動(dòng)物細(xì)胞因子表型(如果存在)受到多酚的存在的影響來實(shí)施。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及確定多酚調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中細(xì)胞因子水平的治療價(jià)值的方法，該方法包括(i)從至少一個(gè)低細(xì)胞因子產(chǎn)生者和至少一個(gè)高細(xì)胞因子產(chǎn)生者得到身體樣品；(ii)確定該身體樣品中基線細(xì)胞因子水平；(iii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平變化的條件下將所述身體樣品與不知道具有細(xì)胞因子調(diào)節(jié)性質(zhì)的多酚孵育；(iv)確定步驟(iii)的孵育后細(xì)胞因子水平；和(v)將基線細(xì)胞因子水平與步驟(iv)的細(xì)胞因子水平比較以確定所述多酚是否具有細(xì)胞因子調(diào)節(jié)性質(zhì)。
在下面的非限制性實(shí)施例中進(jìn)一步描述本發(fā)明。
實(shí)施例實(shí)施例1-提取和純化矢車菊苷配質(zhì)提取步驟方法1使用Jalal和Collin(“可可的成熟植物、幼苗和組織培養(yǎng)物的多酚”，Phytochemistry，6，1377-1380，1977)描述的方法的改良方法從脫脂、未發(fā)酵的凍干可可豆提取矢車菊苷配質(zhì)。用2×400mL 70％丙酮/去離子水，然后用400mL 70％甲醇/去離子水從脫脂可可塊的50克批量提取矢車菊苷配質(zhì)。合并提取物并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在部分真空下45℃蒸發(fā)除去溶劑。將所得水相用去離子水稀釋到1L并用2×400mLCHCl3萃取。丟棄溶劑相。然后用4×500mL乙酸乙酯萃取水相。通過在Sorvall RC 28S離心機(jī)上以2,000×g 10℃下離心30分鐘以破壞任何所得乳液。向合并的乙酸乙酯萃取物中加入100-200mL去離子水。用部分真空下的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在45℃下蒸發(fā)溶劑。所得水相在液氮中冷凍，然后在LABCONCO凍干系統(tǒng)上凍干。從不同可可基因型得到的矢車菊苷配質(zhì)粗品產(chǎn)率在表1中列出。
表1矢車菊苷配質(zhì)粗品產(chǎn)率
方法2備選地，用70％水性丙酮從脫脂、未發(fā)酵的凍干可可豆提取矢車菊苷配質(zhì)。將10克脫脂材料用100mL溶劑勻漿5-10分鐘。將漿液在4℃以3000×g離心15分鐘，并將所得上清液穿過玻璃棉。濾液在部分真空下蒸餾并將所得水相在液氮中冷凍，然后在LABCONCO凍干系統(tǒng)上凍干。矢車菊苷配質(zhì)粗品的產(chǎn)率為15-20％。
不希望被任何特定理論所束縛，認(rèn)為粗品產(chǎn)率的不同反映了不同基因型、地理起源、園藝品種、和制備方法的不同。
通過凝膠滲透層析部分純化可可矢車菊苷配質(zhì)方法1通過Sephadex LH-20(28×2.5cm)上的液相層析部分純化如上述得到的矢車菊苷配質(zhì)。通過從去離子水到甲醇的分級(jí)梯度幫助分離。最初梯度組成以去離子水中的15％甲醇開始，然后每30分鐘逐步用去離子水中的25％甲醇、去離子水中的35％甲醇、去離子水中的70％甲醇，最后為100％甲醇。將黃嘌呤生物堿類(咖啡因和可可堿)的洗脫后的流出液作為單一級(jí)分收集。該級(jí)分產(chǎn)生了沒有黃嘌呤生物堿類的亞級(jí)分，將其進(jìn)一步細(xì)分級(jí)以產(chǎn)生5種亞級(jí)分，將它們稱為MM2A到MM2E。通過部分真空中的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在45℃下蒸發(fā)從每個(gè)亞級(jí)分除去溶劑。所得水相在液氮中冷凍并在LABCONCO凍干系統(tǒng)上過夜凍干。以該方法細(xì)分級(jí)了約100mg物質(zhì)。
層析條件柱子28×2.5cm Sephadex LH-20，移動(dòng)相甲醇/水分級(jí)梯度，15∶85，25∶75，35∶65，70∶30，100∶0，以1/2小時(shí)間隔分級(jí)，流速1.5mL/分鐘，檢測(cè)器lambda1(λ1)＝254nm，λ2＝365nm下UV，記錄紙速度0.5mm/分鐘，柱負(fù)荷120mg。
方法2通過Sephadex LH 20(72.5×2.5cm)上液相層析部分純化如上描述的矢車菊苷配質(zhì)，使用100％甲醇作為洗脫溶劑，流速為3.5mL/分鐘。頭1.5小時(shí)后收集洗脫液級(jí)分，并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮級(jí)分，將其再溶于水中并凍干。將這些級(jí)分稱作富含五聚體的級(jí)分。
可以如美國專利號(hào)5,554,645和6,297,273(它們的相關(guān)部分并入本文作為參考)描述的使用HPLC將黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)在單獨(dú)的級(jí)分中分離。
實(shí)施例2-黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)對(duì)TGF-β1的作用可可級(jí)分制備從高矢車菊苷配質(zhì)含量的可可粉(Cocoapro，Mars，Incorporated；Hackettstown，NJ)制備水溶性黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)(FP)級(jí)分。根據(jù)Kealey等人的美國專利號(hào)6,015,913(這里并入本文作為參考)中描述的方法制備粉末。如實(shí)施例1中描述的用丙酮/水提取可可粉得到粗提物。根據(jù)Adamson等人(J Agric Food Chem 1999；474184-4188.)描述的使用高效液相層析(HPLC)從粗提物純化級(jí)分。研究從單體到十聚體的純化級(jí)分。所純化的FP級(jí)分含有0.5％(w/w)以下的總生物堿類(可可堿和咖啡因)。在表2中顯示了通過HPLC估計(jì)的單體和矢車菊苷配質(zhì)組成，和這些制備物的分子量。將所有樣品懸浮在含有10％熱失活的胎牛血清(Atlanta Biologicals，Noreross，GA)的RPMI1640(Gibco BRL，Gaithersburg，MD)中。將它們用相同的培養(yǎng)基稀釋到終濃度25μg/ml。
PBMC分離將來自健康志愿者的外周血收集到含有檸檬酸鈉的試管中并用沒有氯化鈣、氯化鎂或者硫酸鎂的Hanks平衡鹽溶液(HBSS；Gibco BRL)混合。然后將稀釋的血液用Histopaque-1077梯度(Sigma，St.Louis，MO)分層并以500×g在室溫下離心30分鐘。從界面層收獲PBMC，將其用HBSS洗滌兩次，然后計(jì)數(shù)。將細(xì)胞重懸浮在含有10％胎牛血清并補(bǔ)加0.1％50mg/ml慶大霉素溶液(Gibco BRL)的RPMI 1640中。通過錐蟲藍(lán)排除測(cè)定估計(jì)生存力后將PBMC濃度調(diào)節(jié)到2×106個(gè)活細(xì)胞/ml。生存力總是大于96％。
用可可FP級(jí)分培養(yǎng)PBMC將500μl 1.0×106個(gè)細(xì)胞懸浮液用等體積多種可可處理液在37℃、5％CO2的48孔板中培養(yǎng)。用25μg/ml單獨(dú)的可可FP級(jí)分孵育靜息PBMC。所有處理都一式兩份地進(jìn)行。孵育72小時(shí)后，收獲上清液級(jí)分用于ELISA分析。
TGF-β1(ELISA)72小時(shí)后收獲培養(yǎng)上清液級(jí)分并保存在-20℃直到通過ELISA分析。將96孔Costar EIA板(Cat.#2592)用DuoSet人TGF-β1ELISA顯色試劑盒(R & D Systems，Minneapolis，MN)中提供的小鼠抗TGF-β1包被。含有潛伏形式的TGF-β1的細(xì)胞培養(yǎng)上清液在酸性環(huán)境(0.5ml樣品+(0.1ml 1N HCl)中活化并用0.1ml 1.2N NaOH/0.5M HEPES中和。隨后，根據(jù)生產(chǎn)商的推薦測(cè)量經(jīng)活化的上清液中的TGF-β1濃度。ELISA系統(tǒng)的最低TGF-β1標(biāo)準(zhǔn)為31.3pg/ml。
統(tǒng)計(jì)在未刺激的靜息PBMC中檢查了不同可可FP級(jí)分對(duì)TGF-β1分泌的影響。通過具有兩尾p值的學(xué)生成對(duì)t檢驗(yàn)比較結(jié)果(即，沒有可可類黃酮的對(duì)照細(xì)胞對(duì)用單獨(dú)的FP級(jí)分處理的細(xì)胞)。認(rèn)為p＜0.05是顯著的。
結(jié)果制備未刺激的靜息PBMC并將其與25μg/ml單獨(dú)的可可FP級(jí)分孵育。孵育72小時(shí)后在上清液級(jí)分中估計(jì)TGF-β1產(chǎn)生。
ELISA分析表明在所試驗(yàn)的13名受試者中個(gè)體間差異明顯。圖1描繪了以相對(duì)于每名受試者的中值基線的百分?jǐn)?shù)改變形式表示的這些個(gè)體對(duì)可可FP級(jí)分的波動(dòng)應(yīng)答。然而，當(dāng)基于TGF-β1的基線產(chǎn)生對(duì)個(gè)體歸類時(shí)，在TGF-β1分泌受到可可FP級(jí)分的影響方面觀察到明顯趨勢(shì)。有7名低基線產(chǎn)生者(LBP)，他們的基線TGF-β1濃度小于6000pg/ml(3604±568pg/ml)，而剩下的被分配到高基線產(chǎn)生組(HBP；7910±695pg/ml)。單獨(dú)的可可FP級(jí)分可刺激低LBP組中的TGF-β1釋放(圖2)。通常，低分子量FP級(jí)分(≤五聚體)在增大中比較大的寡聚體更有效，誘導(dǎo)從基線增加30％到68％(表3)，而較大的寡聚體(≥六聚體)僅相對(duì)于基線中度增加TGF-β1分泌(15％到20％，表3)。單體和二聚體FP級(jí)分顯著增加了LBP組中的TGF-β1分泌，分別產(chǎn)生5981±666(p＝0.0035)和6062±667(p＝0.0027)pg/ml的濃度。與LBP組相比，單獨(dú)的可可FP級(jí)分抑制HBP中TGF-β1分泌(圖3)。三聚體到十聚體FP級(jí)分相對(duì)于基線顯著抑制TGF-β128％到62％(表3)，而單體和二聚體顯示出中度減小(分別為17％和23％)。
結(jié)果表明可可FP級(jí)分能夠通過根據(jù)個(gè)體的基線TGF-β1水平增加或者抑制TGF-β1釋放而促進(jìn)TGF-β1的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定水平。
在本研究中，對(duì)TGF-β1的基線分泌的評(píng)估表明所檢查的受試者中大的個(gè)體間差異。Grainger等人已經(jīng)表明TGF-β1的循環(huán)濃度可以基于該個(gè)體的遺傳背景非常不同(Hu Mol Gen 1999；893-97)?？梢岳斫饪紤]到TGF-β1基因的多態(tài)性可以影響其產(chǎn)生，所以觀察到TGF-β1的這些不同的基線水平。不幸的是，在當(dāng)前研究中沒有對(duì)所試驗(yàn)的受試者進(jìn)行基因型分析。然而，很明顯，可可FP級(jí)分可以刺激來自TGF-β1的基線水平低(3604±568pg/ml)的受試者的PBMC中TGF-β1蛋白質(zhì)分泌。與低基線受試者相比，來自高基線產(chǎn)生個(gè)體(7910±695pg/ml)的PBMC在與FP級(jí)分孵育后顯示出TGF-β1產(chǎn)生受到抑制。因?yàn)闆]有對(duì)低和高TGF-β1產(chǎn)生個(gè)體進(jìn)行基因型分析，所以還可能在從這些受試者收集血液前HBP就被引發(fā)產(chǎn)生TGF-β1。不過，可可FP級(jí)分仍然分別有效減小或者增加了HBP和LBP中的TGF-β1分泌。
以前用表現(xiàn)出對(duì)細(xì)胞因子產(chǎn)生具有不同效果的較大和較小矢車菊苷配質(zhì)級(jí)分觀察到可可FP對(duì)細(xì)胞因子產(chǎn)生的效果—雙相類型的效果。在靜息PBMC中，較大的FP寡聚體(六聚體和以上)顯著刺激IL-1β和IL-4釋放，而較小的級(jí)分抑制它們的分泌(Mao等人，Life Sciences2000；661377-1386；Mao等人，J Medicinal Foods 2000；3107-114)。然而，在本研究中，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)FP對(duì)TGF-β1釋放的效果不僅取決于FP級(jí)分的分子大小，而且取決于PBMC分泌TGF-β1的能力。某些級(jí)分更具活性，可可級(jí)分在每個(gè)個(gè)體中的一般效果是類似地，因?yàn)樗鼈兇碳GF-β1從LBP釋放，并抑制TGF-β1從HBP分泌。考慮到上面的情況，與可可FP對(duì)血小板反應(yīng)性、類十二烷酸產(chǎn)生和血管反應(yīng)性的影響呼應(yīng)的是可可FP還通過促進(jìn)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的TFG-β1水平的保持對(duì)心血管系統(tǒng)具有保護(hù)效果。
表2.單獨(dú)的可可FLO級(jí)分圖
表3.FLO級(jí)分對(duì)低(n＝7)和高(n＝6)基線產(chǎn)生者中TGF-β分泌的影響。值表達(dá)為相對(duì)于中值基線對(duì)照的平均百分?jǐn)?shù)變化。

權(quán)利要求
1.設(shè)計(jì)人或者獸醫(yī)動(dòng)物的飲食和/或藥物方案的方法，該方法包括(i)在體外確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；和(ii)基于基線細(xì)胞因子水平，設(shè)計(jì)促進(jìn)所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物中內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的細(xì)胞因子水平的藥物和/或飲食方案；其中所述藥物和/或飲食方案包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體和/或其衍生物。
2.設(shè)計(jì)人或者獸醫(yī)動(dòng)物的飲食和/或藥物方案的方法，該方法包括(i)在體外確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)基于基線細(xì)胞因子水平診斷該人或者獸醫(yī)動(dòng)物是否處于與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中或者患有該病癥；和(iii)設(shè)計(jì)可有效預(yù)防性或者治療性治療步驟(ii)中診斷的病癥的藥物和/或飲食方案。
3.權(quán)利要求2的方法，其中藥物和/或飲食方案包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體和/或其衍生物。
4.權(quán)利要求2的方法，其中所述病癥為心血管疾病、冠心病、心臟纖維樣變性、動(dòng)脈粥樣硬化、和/或腎病或腎衰竭。
5.設(shè)計(jì)人或者獸醫(yī)動(dòng)物的飲食和/或藥物方案的方法，該方法包括(i)在體外確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平變化的條件下，將所述身體樣品與一系列黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)和/或其衍生物，或者它們的混合物孵育，并測(cè)量所得細(xì)胞因子水平；(iii)將基線細(xì)胞因子水平與步驟(ii)中所得細(xì)胞因子水平比較以確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的細(xì)胞因子反應(yīng)性；(iv)基于細(xì)胞因子反應(yīng)性，設(shè)計(jì)促進(jìn)所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物中內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的細(xì)胞因子水平的藥物和/或飲食方案；其中所述藥物和/或飲食方案包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體；和/或其衍生物，或者它們的混合物。
6.設(shè)計(jì)人或者獸醫(yī)動(dòng)物的飲食和/或藥物方案的方法，該方法包括(i)在體外確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平變化的條件下將所述身體樣品與一系列黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)和/或其衍生物，或者它們的混合物孵育，并測(cè)量所得細(xì)胞因子水平；(iii)將基線細(xì)胞因子水平與步驟(ii)中所得細(xì)胞因子水平比較以確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)的細(xì)胞因子反應(yīng)性；(iv)基于細(xì)胞因子反應(yīng)性，診斷所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物是否處于與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中或者患有該病癥；和(v)設(shè)計(jì)可有效預(yù)防性或者治療性治療步驟(iv)中診斷的病癥的藥物和/或飲食方案。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述藥物和/或飲食方案包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體和/或其衍生物。
8.權(quán)利要求6的方法，其中所述病癥為心血管疾病、冠心病、心臟纖維樣變性、動(dòng)脈粥樣硬化、和/或腎病或腎衰竭。
9.預(yù)防性或者治療性治療人或者獸醫(yī)動(dòng)物的方法，該方法包括(i)在體外確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；和(ii)基于基線細(xì)胞因子水平，設(shè)計(jì)促進(jìn)所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物中內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的細(xì)胞因子水平的藥物和/或飲食方案；其中所述藥物和/或飲食方案包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體；和(iii)根據(jù)步驟(ii)中設(shè)計(jì)的藥物和/或飲食方案對(duì)所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體和/或其衍生物。
10.預(yù)防性或者治療性治療人或者獸醫(yī)動(dòng)物的方法，該方法包括(i)在體外確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)基于基線細(xì)胞因子水平診斷該人或者獸醫(yī)動(dòng)物是否處于與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中或者患有該病癥；和(iii)設(shè)計(jì)可有效預(yù)防性或者治療性治療步驟(ii)中診斷的病癥的藥物和/或飲食方案；和(iv)根據(jù)步驟(iii)中設(shè)計(jì)的藥物和/或飲食方案治療所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述藥物和/或飲食方案包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體和/或其衍生物。
12.權(quán)利要求10的方法，其中所述病癥為心血管疾病、冠心病、心臟纖維樣變性、動(dòng)脈粥樣硬化、和/或腎病或腎衰竭。
13.預(yù)防性或者治療性治療人或者獸醫(yī)動(dòng)物的方法，該方法包括(i)在體外確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平變化的條件下將所述身體樣品與一系列黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)和/或其衍生物，或者它們的混合物孵育，并測(cè)量所得細(xì)胞因子水平；(iii)將基線細(xì)胞因子水平與步驟(ii)中所得細(xì)胞因子水平比較以確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)和/或其衍生物的細(xì)胞因子反應(yīng)性；(iv)基于細(xì)胞因子反應(yīng)性，設(shè)計(jì)促進(jìn)所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物中內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的細(xì)胞因子水平的藥物和/或飲食方案；其中所述藥物和/或飲食方案包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體和/或其衍生物；和(v)根據(jù)步驟(iv)中設(shè)計(jì)的藥物和/或飲食方案對(duì)所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體和/或其衍生物，或者它們的混合物。
14.預(yù)防性或者治療性治療人或者獸醫(yī)動(dòng)物的方法，該方法包括(i)在體外確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；(ii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平變化的條件下將所述身體樣品與一系列黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)和/或其衍生物，或者它們的混合物孵育，并測(cè)量所得細(xì)胞因子水平；(iii)將基線細(xì)胞因子水平與步驟(ii)中所得細(xì)胞因子水平比較以確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)和/或其衍生物的細(xì)胞因子反應(yīng)性；(iv)基于基線細(xì)胞因子水平，診斷所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物是否處于與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中或者患有該病癥；和(v)設(shè)計(jì)可有效預(yù)防性或者治療性治療步驟(iv)中診斷的病癥的藥物和/或飲食方案；和(vi)根據(jù)步驟(v)中設(shè)計(jì)的藥物和/或飲食方案治療所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述藥物和/或飲食方案包括施用黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體和/或其衍生物。
16.權(quán)利要求14的方法，其中所述病癥為心血管疾病、冠心病、心臟纖維樣變性、動(dòng)脈粥樣硬化、和/或腎病或腎衰竭。
17.權(quán)利要求1、2、5、6、9、10、13或14的方法，其中所述細(xì)胞因子是TGF-β。
18.權(quán)利要求1、2、5、6、9、10、13或14的方法，其中所述細(xì)胞因子是TGF-β1。
19.用于鑒定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的細(xì)胞因子反應(yīng)性的篩選測(cè)定法，其包括(i)體外確定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的身體樣品中基線細(xì)胞因子水平，其中所述細(xì)胞因子與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)；和(ii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平改變的條件下，將所述身體樣品與一系列黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)和/或其衍生物，或者它們的混合物孵育，并測(cè)量所得細(xì)胞因子水平。
20.權(quán)利要求19的篩選測(cè)定法，其還包括將基線細(xì)胞因子水平與步驟(ii)中所得細(xì)胞因子水平比較以確定所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物對(duì)黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)和/或其衍生物的細(xì)胞因子反應(yīng)性。
21.權(quán)利要求20的篩選測(cè)定法，其還包括診斷所述人或者獸醫(yī)動(dòng)物是否處于心血管疾病、冠心病、心臟纖維樣變性、動(dòng)脈粥樣硬化、或腎病或腎衰竭的危險(xiǎn)中或者患有這些疾病。
22.確定多酚調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中細(xì)胞因子水平的治療價(jià)值的方法，該方法包括(i)從至少一個(gè)低細(xì)胞因子產(chǎn)生者和至少一個(gè)高細(xì)胞因子產(chǎn)生者得到身體樣品；(ii)確定該身體樣品中基線細(xì)胞因子水平；(iii)在足夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平變化的條件下將所述身體樣品與不知道具有細(xì)胞因子調(diào)節(jié)性質(zhì)的多酚孵育；(iv)確定步驟(iii)的孵育后細(xì)胞因子水平；和(v)將基線細(xì)胞因子水平與步驟(iv)的細(xì)胞因子水平比較以確定所述多酚是否具有細(xì)胞因子調(diào)節(jié)性質(zhì)。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
24.權(quán)利要求22的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是獸醫(yī)動(dòng)物。
25.治療受試者的方法，所述受試者為低基線TGF-β產(chǎn)生者，所述方法包括對(duì)該受試者施用至少一種黃烷醇和/或矢車菊苷配質(zhì)寡聚體，所述矢車菊苷配質(zhì)寡聚體選自單體、二聚體、三聚體、四聚體和五聚體，或者它們的任何混合物或衍生物，所用的量可有效刺激該受試者中TGF-β的水平，其中所述受試者為人或者獸醫(yī)動(dòng)物。
26.權(quán)利要求25的方法，其中TGF-β為TGF-β1。
27.治療受試者的方法，所述受試者為高基線TGF-β產(chǎn)生者，所述方法包括對(duì)該受試者施用至少一種矢車菊苷配質(zhì)寡聚體6-10，或者它們的任何混合物或衍生物，所用的量可有效刺激該受試者中TGF-β的水平，其中所述受試者為人或者獸醫(yī)動(dòng)物。
28.權(quán)利要求27的方法，其中TGF-β為TGF-β1。
全文摘要
本發(fā)明包括鑒定人或者獸醫(yī)動(dòng)物的細(xì)胞因子反應(yīng)性的篩選方法和其中所用的產(chǎn)物和測(cè)定法，其含有黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)和/或其衍生物，或者它們的混合物，還涉及診斷人和獸醫(yī)動(dòng)物中細(xì)胞因子表型的方法；鑒定處于與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的危險(xiǎn)中的受試者的方法；鑒定飲食和/或藥物干預(yù)以調(diào)節(jié)與炎癥和/或免疫調(diào)節(jié)途徑有關(guān)的病癥的方法；和用所選的黃烷醇和矢車菊苷配質(zhì)和/或其衍生物，或者它們的混合物預(yù)防性或者治療性治療人或者獸醫(yī)動(dòng)物的方法。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK1758917SQ200380109418
公開日2006年4月12日 申請(qǐng)日期2003年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月2日
發(fā)明者H·H·施米茨 申請(qǐng)人:馬爾斯公司