專利名稱：一種蓮子心生物堿提取物其制備方法及其在制備心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蓮子心生物堿提取物、其制備方法及其在制備心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
心血管疾病是人類最為常見的一類疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告，心血管疾病是當(dāng)今世界人口的第一大死因。據(jù)估計(jì)，現(xiàn)在全球至少有7～8億人以上患有一種或多種心血管疾病。在我國，心腦血管疾病發(fā)生率及死亡率居各病之首，并呈逐年上升趨勢。開發(fā)出療效確切、安全經(jīng)濟(jì)的治療藥物，是全世界科學(xué)工作者的研究方向。天然藥物以其安全、環(huán)保、副作用小而倍受青睞。
中藥蓮子心系睡蓮科蓮屬植物(Nelumbo Nucifer Gaertn)成熟種子中的干燥幼葉及胚根，具有“清心安神，交通心腎，澀精止血”之功效，歸心、肺、腎三經(jīng)并收載于中國藥典。
在二十世紀(jì)六十年代，國內(nèi)外報(bào)道蓮子心中含有蓮心堿(liensinine)、異蓮心堿(isoliensinine)、甲基蓮心堿(neferine)、荷葉堿(nuciferine)、前荷葉堿(pronuciferine)、蓮心季銨堿(lotusine)、甲基紫堇杷靈(methylcorypalline)、去甲基烏藥堿(demehtylcoclaurine)。八十年代我國學(xué)者郭毛娣等對(duì)大陸產(chǎn)蓮子心中酚性生物堿進(jìn)行了研究，分離得到了蓮心堿、異蓮心堿、甲基蓮心堿(郭毛娣，等，中草藥，1984，15(7)291))。藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，蓮子心生物堿具有降壓作用、抗心率失常作用、抗心肌缺血、抑制平滑肌收縮、抗Ca++、擴(kuò)張血管、抗羥自由基、抑制血小板聚集和血栓形成等作用。這充分表明，蓮子心生物堿具有相當(dāng)強(qiáng)的生物活性。
但是，蓮子心中生物堿含量相對(duì)較低，這成為阻礙其開發(fā)應(yīng)用的主要障礙。目前，對(duì)于蓮子心中生物堿的富集方法主要采用溶劑萃取法獲得脂溶性總堿，再用層析法(制備高效液相法、制備性薄層或柱層析法)獲得有效部位或單體。工藝復(fù)雜、成本昂貴、收得率低，不適宜大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用。公開號(hào)為CN 1117735C的中國專利公開了從蓮子心中提取純化異蓮心堿和蓮心堿的制備方法，但該專利提供的方法仍采用有機(jī)溶劑萃取法，工藝中需使用氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑，大量有機(jī)溶劑的使用會(huì)產(chǎn)生環(huán)保的壓力，而且也不適合于大規(guī)模工業(yè)化的應(yīng)用。本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，提供一種安全、環(huán)保、經(jīng)濟(jì)、高收得率，適合于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的技術(shù)方案。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種蓮子心生物堿提取物及其制備方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供這種蓮子心生物堿提取物在制備心腦血管疾病中的應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種蓮子心生物堿提取物的制備方法，包括以下步驟1)提取以蓮子心為原料，用水、低級(jí)醇或含水低級(jí)醇提?。?)過濾提取后蒸去低級(jí)醇，過濾；3)除雜濾液經(jīng)非極性大孔樹脂吸附并用水或含水低級(jí)醇淋洗除去雜質(zhì)；4)洗脫用含水低級(jí)醇洗脫非極性大孔樹脂柱；5)吸附將洗脫液通過大孔強(qiáng)酸聚苯乙烯系陽離子交換樹脂；6)再洗脫用含水低級(jí)醇洗脫吸附于陽離子交換樹脂上的蓮子心生物堿；7)干燥洗脫液減壓濃縮至干，經(jīng)干燥粉碎得蓮子心生物堿提取物。
所述提取用含水低級(jí)醇為乙醇或甲醇；濃度為X，60％≤X≤95％，優(yōu)選70％≤X≤80％。提取液濃度小于60％會(huì)使提取液中水溶性雜質(zhì)含量增高，增大后續(xù)處理步驟的難度；當(dāng)提取液濃度大于95％，會(huì)使得提取液中蓮子心生物堿含量降低。實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)提取液濃度在70％～80％時(shí)，生物堿的提取效率最高并可有效降低雜質(zhì)的溶出。
所述非極性大孔樹脂是以苯乙烯為骨架材料的非極性樹脂。例如D101、H103、H107、D3520、D4006、D4020等。
所述除雜用的含水低級(jí)醇為乙醇或甲醇；濃度為X，0＜X≤20％.實(shí)驗(yàn)證明，在該洗脫濃度下，雜質(zhì)能夠得到去除而使蓮子心生物堿得到富集。
所述洗脫用含水低級(jí)醇為乙醇或甲醇；濃度為X，40％≤X≤70％，優(yōu)選50％≤X≤55％。實(shí)驗(yàn)表明，在該洗脫濃度下，得到產(chǎn)品中的蓮子心生物堿含量較高。
所述吸附用樹脂為大孔強(qiáng)酸聚苯乙烯系陽離子交換樹脂。例如D72、D61、D001cc、D001ss，優(yōu)選為G-6104所述再洗脫用含水低級(jí)醇為乙醇或甲醇；濃度為X，50％≤X≤95％，優(yōu)選90％≤X≤95％。
提取方法包括煎煮、回流、浸漬、滲漉等，最好為浸漬、滲漉。提取液蒸去低級(jí)醇后可直接用非極性大孔樹脂吸附，為了保護(hù)樹脂柱，最好過濾。
蓮子心生物堿提取物的干燥方法為真空干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等，最好為真空干燥或冷凍干燥。
一種蓮子心生物堿提取物，該提取物采用上述方法制備得到。
一種蓮子心生物堿提取物的應(yīng)用，將所述的蓮子心生物堿提取物用于制備治療心腦血管疾病的藥劑。
一種蓮子心生物堿提取物制劑，該制劑所述的蓮子心生物堿提取物為主要活性成分，加入藥劑學(xué)可接受的輔料，制成藥劑學(xué)可接受的劑型。所述輔料選自淀粉、微晶纖維素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、維生素C、半胱氨酸、檸檬酸和亞硫酸鈉中的任意一種或幾種。所述的藥劑學(xué)可接受的劑型為口服劑或注射劑，為片劑、丸劑、膠囊、滴丸、水針、粉針、或輸液。
利用本發(fā)明得到的蓮子心生物堿提取物制備所需藥物的各種劑型時(shí)，可以按照藥劑學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。如將該提取物與一種或多種載體混合，然后制成相應(yīng)的劑型。
本發(fā)明得到的生物堿提取物有很好的降壓、抗心率失常作用，可用于多種心腦血管疾病的治療。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明所提供的蓮子心生物堿提取物，其制備工藝簡單、含量高(生物堿含量可達(dá)90％以上(以蓮心堿、甲基蓮心堿、異蓮心堿計(jì)))。運(yùn)用兩種樹脂對(duì)蓮子心生物堿進(jìn)行富集，安全、易于操作、不需高溫高壓和特殊設(shè)備、成本低廉。
以下通過具體實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明技術(shù)方案，并不以此限定本發(fā)明的實(shí)施范圍。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例15公斤蓮子心藥材，裝入回流提取罐，以30L60％乙醇回流提取3小時(shí)，過濾，殘?jiān)儆?5L60％乙醇回流提取2小時(shí)，過濾，合并兩次提取液，濃縮蒸去乙醇，過濾，將濾液吸附于D101樹脂，用水洗去雜質(zhì)，再用40％乙醇洗脫，將洗脫液吸附于D72樹脂，再以50％乙醇洗脫，濃縮洗脫液，加壓干燥，得蓮子心生物堿45g，生物堿含量可達(dá)90％(以蓮心堿、甲基蓮心堿、異蓮心堿計(jì))。
實(shí)施例25公斤蓮子心藥材，以70％乙醇浸泡3小時(shí)，裝入滲漉筒，以70％乙醇滲漉，收集40L滲漉液，濃縮蒸去乙醇，過濾，將濾液吸附于H103樹脂，用5％乙醇洗去雜質(zhì)，再用50％乙醇洗脫，將洗脫液吸附于D61樹脂，再以60％乙醇洗脫，濃縮洗脫液，噴霧干燥，得蓮子心生物堿41g，生物堿含量可達(dá)90％(以蓮心堿、甲基蓮心堿、異蓮心堿計(jì))。
實(shí)施例35公斤蓮子心藥材，以30L80％乙醇浸漬20小時(shí)，過濾，殘?jiān)儆?5L85％乙醇浸漬15小時(shí)，合并兩次浸泡液，濃縮蒸去乙醇，過濾，將濾液吸附于H107樹脂，用10％乙醇洗去雜質(zhì)，再用55％乙醇洗脫，將洗脫液吸附于G-6104樹脂，再以70％乙醇洗脫，濃縮洗脫液，噴霧干燥，得蓮子心生物堿39g，生物堿含量可達(dá)90％(以蓮心堿、甲基蓮心堿、異蓮心堿計(jì))。
實(shí)施例45公斤蓮子心藥材，裝入回流提取罐，以40L90％乙醇回流提取2小時(shí)，過濾，殘?jiān)儆?5L90％乙醇回流提取2小時(shí)，過濾，合并兩次提取液，濃縮蒸去乙醇，過濾，將濾液吸附于D3520樹脂，用15％乙醇洗去雜質(zhì)，再用60％乙醇洗脫，將洗脫液吸附于D001CC樹脂，再以90％乙醇洗脫，濃縮洗脫液，冷凍干燥，得蓮子心生物堿37g，生物堿含量可達(dá)90％(以蓮心堿、甲基蓮心堿、異蓮心堿計(jì))。
實(shí)施例55公斤蓮子心藥材，以95％乙醇浸泡3小時(shí)，裝入滲漉筒，以95％乙醇滲漉，收集40L滲漉液，濃縮蒸去乙醇，過濾，將濾液吸附于D4020樹脂，用20％乙醇洗去雜質(zhì)，再用70％乙醇洗脫，將洗脫液吸附于G-6104樹脂，再以95％乙醇洗脫，濃縮洗脫液，噴霧干燥，得蓮子心生物堿35g，生物堿含量可達(dá)90％(以蓮心堿、甲基蓮心堿、異蓮心堿計(jì))。
實(shí)施例6取實(shí)施例1下蓮子心生物堿25g，加淀粉20g，微晶纖維素10g，以40％乙醇制粒，壓片，得片劑，共制成1000片。
實(shí)施例7取實(shí)施例1下蓮子心生物堿3g，以1％HCL溶解，再用1％NaOH調(diào)節(jié)pH值至5，加1％活性炭去熱原，過0.22um微孔濾膜，分裝于300支10ml西林瓶中，冷凍干燥，得注射用粉針劑。
規(guī)格10mg/支用量1～2支/次，供靜脈或肌注使用。
本發(fā)明質(zhì)量穩(wěn)定、劑量可控、無污染，便于操作、運(yùn)輸、儲(chǔ)藏，適于大規(guī)模生產(chǎn)。
實(shí)施例8取體重180±20gWistar大鼠，分為兩組，制作腎性及醋酸去氧皮質(zhì)酮鹽型高血壓模型，待高血壓形成后，測量血壓，并給藥觀察。以3％戊巴比妥鈉25mg/kgip作淺麻醉，在手術(shù)切口處放置1％鹽酸利多卡因浸濕的棉球，頸動(dòng)脈插管及測量血壓，在肋緣下腹正中作2.5cm切口，找出胃及十二指腸，待血壓穩(wěn)定后，經(jīng)十二指腸給藥。
大鼠經(jīng)十二指腸給蓮子心生物堿提取物15mg/kg，給藥后20至40分鐘，平均血壓下降值與給藥前16.3±2.4kPa無明顯差異。給藥后60分鐘，下降到11.9±4.4kPa，下降了28±18％。從給藥后100分鐘到180分鐘，平均血壓下降值穩(wěn)定在35％左右，在相應(yīng)時(shí)間內(nèi)心率無明顯變化。
結(jié)果表明蓮子心生物堿提取物經(jīng)消化道吸收能產(chǎn)生平穩(wěn)的降壓作用。
實(shí)施例9對(duì)氯仿誘發(fā)小鼠室顫模型的影響取體重27～32g小鼠，雌雄各半，按體重平均分成3組，每組10只，分別給予蓮子心生物堿提取物樣品、利多卡因及生理鹽水。各組均按10mg/kg的劑量尾靜脈注射給藥。然后逐一將小鼠放入含有3～4ml氯仿棉球(以后每換一只小鼠加入1ml氯仿)倒置的600ml燒杯內(nèi)至呼吸停止，立即取出，迅速剖開胸腔，肉眼觀察心室顫動(dòng)發(fā)生率，直至心臟停搏。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分組進(jìn)行率檢驗(yàn)。
生理鹽水組、利多卡因組、蓮子心生物堿提取物組給藥劑量均為10mg/kg，動(dòng)物只數(shù)均為10。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)精確概率法檢驗(yàn)，生物堿提取物組與模型組比較P＜0.01，具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。生物堿提取物樣品組可以顯著性的抑制氯仿所引起小鼠室顫的發(fā)生。見表1。
表1.對(duì)氯仿誘發(fā)小鼠室顫模型的影響組別 劑量 動(dòng)物數(shù)發(fā)生 室顫發(fā)生(mg/kg)(只) 數(shù)(只)率(％)模型 -- 1010100利多卡因 10 100 0**生物堿 10 104 40**樣品**P＜0.01與模型組比較
權(quán)利要求
1.一種蓮子心生物堿提取物的制備方法，包括以下步驟1)提取以蓮子心為原料，用水、低級(jí)醇或含水低級(jí)醇提取；2)過濾提取后蒸去低級(jí)醇，過濾；3)除雜濾液經(jīng)非極性大孔樹脂吸附并用水或含水低級(jí)醇淋洗除去雜質(zhì)；4)洗脫用含水低級(jí)醇洗脫非極性大孔樹脂柱；5)吸附將洗脫液通過大孔強(qiáng)酸聚苯乙烯系陽離子交換樹脂；6)再洗脫用含水低級(jí)醇洗脫吸附于陽離子交換樹脂上的蓮子心生物堿；7)干燥洗脫液減壓濃縮至干，經(jīng)干燥粉碎得蓮子心生物堿提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮子心生物堿提取物的制備方法，其特征在于所述提取用含水低級(jí)醇為乙醇或甲醇；濃度為X，60％≤X≤95％。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蓮子心生物堿提取物的制備方法，其特征在于所述提取用含水低級(jí)醇的濃度為X，70％≤X≤80％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮子心生物堿提取物的制備方法，其特征在于所述非極性大孔樹脂為苯乙烯為骨架材料的非極性樹脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮子心生物堿提取物的制備方法，其特征在于所述除雜用的含水低級(jí)醇為乙醇或甲醇，濃度為X，0＜X≤20％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮子心生物堿提取物的制備方法，其特征在于所述洗脫用含水低級(jí)醇為乙醇或甲醇，濃度為X，40％≤X≤70％。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的蓮子心生物堿提取物的制備方法，其特征在于所述洗脫用含水低級(jí)醇濃度為X，50％≤X≤55％。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮子心生物堿提取物的制備方法，其特征在于所述吸附用樹脂為大孔強(qiáng)酸聚苯乙烯系陽離子交換樹脂。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮子心生物堿提取物的制備方法，其特征在于所述再洗脫用含水低級(jí)醇為乙醇或甲醇，濃度為X，50％≤X≤95％。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的蓮子心生物堿提取物的制備方法，其特征在于所述再洗脫用含水低級(jí)醇濃度為X，90％≤X≤95％。
11.一種蓮子心生物堿提取物，其特征在于該提取物采用權(quán)利要求1至10中任何一項(xiàng)所述的方法制備得到。
12.一種蓮子心生物堿提取物制劑，其特征在于該制劑以權(quán)利要求11所述的蓮子心生物堿提取物為主要活性成分，加入藥劑學(xué)可接受的輔料，制成藥劑學(xué)可接受的劑型。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的蓮子心生物堿提取物制劑，其特征在于所述輔料選自淀粉、微晶纖維素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、維生素C、半胱氨酸、檸檬酸和亞硫酸鈉中的任意一種或幾種。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的蓮子心生物堿提取物制劑，其特征在于所述的藥劑學(xué)可接受的劑型為口服劑或注射劑，為片劑、丸劑、膠囊、滴丸、水針、粉針或輸液。
15.權(quán)利要求11所述的蓮子心生物堿提取物用于制備治療心腦血管疾病的制劑的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蓮子心生物堿提取物的制備及其心腦血管疾病的治療用途，該提取物可由下述方法制得以蓮子心為原料，含水低級(jí)醇提取，將提取液先后通過非極性大孔樹脂柱和大孔強(qiáng)酸聚苯乙烯系陽離子交換樹脂，再用高濃度含水低級(jí)醇洗脫，將洗脫液濃縮至干，經(jīng)干燥粉碎得蓮子心生物堿。所得到的蓮子心生物堿提取物可在治療心腦血管疾病中應(yīng)用，可制成口服劑和注射劑等。本發(fā)明所提供的蓮子心生物堿提取物，其制備工藝簡單、含量高(生物堿含量可達(dá)90％)、安全、易于操作、不需高溫高壓和特殊設(shè)備、成本低廉。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1670026SQ20041000877
公開日2005年9月21日 申請(qǐng)日期2004年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月18日
發(fā)明者李家政 申請(qǐng)人:天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司