專利名稱：化合物菠蘿黃酮苷及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一組新穎的化合物菠蘿黃酮苷及其制備和制藥的用途，具體說是從菠蘿葉中分離制備的新穎的化合物菠蘿黃酮苷，以及該化合物在制備治療體內(nèi)過氧化物升高、氧化型低密度和高密度脂蛋白升高所引起的多種疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
菠蘿，為鳳梨科植物鳳梨Ananas comosus(L.)Merr.[Bromelia comosa L.；A.sativusSchult.Et Schult.f.]的果實(shí)，又稱菠蘿。原產(chǎn)美洲，現(xiàn)廣植于熱帶地區(qū)，我國福建、廣東、海南、廣西、云南等地均有種植。本品始載于清.吳其?！吨参锩麑?shí)圖考》，以露兜子為名。該書記載“露兜子產(chǎn)廣東，一名波羅，生山野間，實(shí)如蘿卜，上生葉一簇，尖長深齒，味色香具佳。果熟金黃色，皮堅(jiān)如魚鱗狀，去皮食肉，香甜無渣，六月熟”。
古時(shí)對于菠蘿葉無明確記載，現(xiàn)代人們常用菠蘿葉纖維為編織和造紙的原料(《中國高等植物圖鑒.第5冊》科學(xué)出版社1976)。近時(shí)有記載菠蘿葉具有消食和胃，止瀉的功效，主治夏日暑瀉，消化不良，胃脘脹痛等(《中華本草.第8卷》上?？茖W(xué)技術(shù)出版社1999)。
菠蘿葉作為藥用的記載比較少見，尤其是未見報(bào)道菠蘿黃酮苷在治療體內(nèi)過氧化物過多、氧化型低密度或氧化型高密度脂蛋白升高等疾病的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一組新的具有藥用價(jià)值的化合物菠蘿黃酮苷及其在醫(yī)療方面的用途。
具體地說是本發(fā)明提供的化合物菠蘿黃酮苷，其結(jié)構(gòu)通式如(I)所示 其中R1＝H R2＝O-β-D-GlcR1＝OCH3R2＝O-β-D-GlcR1＝OH R2＝O-β-D-Glc
R1＝O-β-D-Glc R2＝OH所述的新化合物菠蘿黃酮苷的理化性質(zhì)及其各種波譜特征如下菠蘿黃酮苷A(ananaflavoside A，5，4′-dihydroxy-7，3′，5′-trimethoxyflavone-4′-O-β-D-glucopyranoside)黃色粉末，mp 196-198℃；UV(MeOH)nm321，273，220；HRFABMSm/z 507.1490[M+1]+(calcd for C24H27O12，507.1496)；1H-NMR(DMSO-d6)12.86(OH-5)，7.37(H-2′，6′)，7.14(H-3)，6.78(H-8)6.39(H-6)，5.15(H-1″)，3.88(OCH3-3′，5′)，3.87(OCH3-7)；13C NMR(DMSO-d6)163.3(C-2)，104.8(C-3)，182.1(C-4)，161.1(C-5)，98.1(C-6)，165.3(C-7)，92.9(C-8)，157.5(C-9)，105.0(C-10)，121.5(C-1′)，104.3(C-2′)，148.2(C-3′)，137.7(C-4′)，148.2(C-5′)，104.3(C-6′)，101.9(C-1″)，74.1(C-2″)，76.6(C-3″)，69.8(C-4″)，77.4(C-5″)，60.7(C-6″)，56.1(OCH3-7)，56.7(OCH3-3′，5′)。
菠蘿黃酮苷B(ananaflavoside B，5，4′-dihydroxy-6，7，3′，5′-tetramethoxyflavone-4′-O-β-D-glucopyranoside)黃色粉末，mp206-207℃；UV(MeOH)nm328，281，220；HRFABMSm/z 537.1607[M+1]+(calcd for C25H29O13，537.1602)；1HNMR(DMSO-d6)12.84(OH-5)，7.38(H-2′，6′)，7.14(H-3)，7.02(H-8)，5.15(H-1″)，3.87(OCH3-7)，3.89(OCH3-3′，5′)，3.60(OCH3-6)；13C NMR(DMSO-d6)163.2(C-2)，104.6(C-3)，182.3(C-4)，152.9(C-5)，131.9(C-6)，158.7(C-7)，91.8(C-8)，152.7(C-9)，105.2(C-10)，125.5(C-1′)，104.9(C-2′)，152.8(C-3′)，137.6(C-4′)，152.8(C-5′)，104.9(C-6′)，101.8(C-1″)，74.1(C-2″)，76.5(C-3″)，69.8(C-4″)，77.4(C-5″)，60.7(C-6″)，60.0(OCH3-6)，56.5(OCH3-7)，56.7(OCH3-3′，5′)。
菠蘿黃酮苷C(ananaflavoside C，5，6，4′-trihydroxy-7，3′，5′-trimethoxyflavone-4′-O-β-D-glucopyranoside)黃色粉末，mp153-155℃；UV(MeOH)nm329，221，219；HRFABMSm/z523.1443[M+1]+(calcd for C24H27O13，523.1446)；1H-NMR(DMSO-d6)12.56(OH-5)，8.76(OH-6)，7.37(H-2′，6′)，7.09(H-3)，7.00(H-8)，5.14(H-1″)，3.93(3H，s，OCH3-7)，3.89(OCH3-3′，5′)；13C NMR(DMSO-d6)162.9(C-2)，104.4(C-3)，182.3(C-4)，146.0(C-5)，130.0(C-6)，154.4(C-7)，91.3(C-8)，149.7(C-9)，105.1(C-10)，125.2(C-1′)，104.8(C-2′)，152.8(C-3′)，137.5(C-4′)，152.8(C-5′)，104.8(C-6′)，101.9(C-1″)，74.1(C-2″)，76.5(C-3″)，69.8(C-4″)，77.4(C-5″)，60.7(C-6″)，56.3(OCH3-7)，56.7(OCH3-3′，5′)。
菠蘿黃酮苷D(ananaflavoside D，5，6，4′-trihydroxy-7，3′，5′-trimethoxyflavone-6-O-β-D-glucopyranoside)。黃色粉末，mp206℃；
UV(MeOH)nm339，255，221；HRFABMSm/z521.1306[M-1]-(calcd for C24H25O13，521.1300)；1H-NMR(DMSO-d6)13.06(OH-5)，9.31(OH-4′)，7.38(H-2′，6′)，7.03(H-3)，6.98(H-8)，5.15(H-1″)，3.92(OCH3-7)，3.91(OCH3-3′，5′)；13C NMR(DMSO-d6)163.9(C-2)，103.4(C-3)，182.3(C-4)，151.6(C-5)，128.2(C-6)，158.5(C-7)，91.8(C-8)，152.6(C-9)，105.0(C-10)，120.3(C-1′)，104.4(C-2′)，148.2(C-3′)，140.0(C-4′)，148.2(C-5′)，104.3(C-6′)，102.0(C-1″)，74.1(C-2″)，76.6(C-3″)，69.9(C-4″)，77.4(C-5″)，60.9(C-6″)，56.4(OCH3-7)，56.6(OCH3-3′，5′)。
本發(fā)明所提供的化合物菠蘿黃酮苷的用途是在制備治療體內(nèi)過氧化物升高及其由此引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所提供的化合物菠蘿黃酮苷的用途是在制備治療體內(nèi)氧化型低密度脂蛋白和高密度脂蛋白升高的藥物中的應(yīng)用。
所述的化合物作為藥物使用時(shí)，可以是單獨(dú)應(yīng)用，也可以是與其它成分混合使用。
在臨床應(yīng)用時(shí)，以常規(guī)的制劑工藝，單獨(dú)使用或與其他藥物配合制備成在臨床上可以使用的各種不同劑型的藥物。如散劑，丸劑，膠囊劑，片劑，微囊劑，軟膠囊劑，膜劑，栓劑，注射劑，膏劑，酊劑，散劑，沖劑，氣霧劑，各種外用制劑等。
在多年的研究中，本發(fā)明人從菠蘿葉中分離制備出一組新的化合物---菠蘿黃酮苷。藥理實(shí)驗(yàn)表明，菠蘿黃酮苷A-D具有抗氧化和抑制氧化型低密度脂蛋白升高的作用，可以用來治療體內(nèi)過氧化物升高所引起的病癥，以及低密度脂蛋白升高所引起的相關(guān)性疾病，如脂代謝紊亂，動脈粥樣硬化，冠心病等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，菠蘿黃酮苷A-D具有明顯的抑制腦過氧化物MDA升高的作用。體外給藥，最小有效終濃度為1×10-6g/ml，隨著濃度的增加，抑制作用增強(qiáng)。體外給藥，能夠明顯抑制氧化型低密度脂蛋白的生成，有效濃度為0.3-3ug/ml。


圖1為本發(fā)明所提供的化合物菠蘿黃酮苷A-D的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
具體實(shí)施例方式
先將藥材重量的5～10倍的醇溶劑在50℃～90℃下進(jìn)行加熱提取，得到提取液；將提取液在50～90℃溫度下減壓濃縮后，用藥材重量的2～5倍水溶解，離心或靜止過濾，棄去沉淀，取上清液；將上清液通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，洗脫液廢棄，再用濃度大于70％的乙醇洗脫，將洗脫液在溫度50～90℃下減壓濃縮，然后減壓干燥或冷凍干燥，得到菠蘿葉提取物；將菠蘿葉提取物用乙醇溶劑溶解，再用硅膠拌樣，用硅膠柱色譜分離，用氯仿∶甲醇或石油醚∶丙酮或氯仿∶丙酮梯度洗脫，用葡聚糖凝膠純化，先后得到化合物---菠蘿黃酮苷A、B、C、D。
菠蘿黃酮苷A-D分離制備的來源植物，可以是菠蘿葉，也包括其它任何一種植物。
在藥劑應(yīng)用上就是將菠蘿黃酮苷A-D單獨(dú)地或者加入復(fù)方中以常規(guī)的制劑工藝制備成藥劑。其藥劑可以是臨床上能夠使用的各種不同劑型。
下述藥物實(shí)驗(yàn)資料使本發(fā)明所說的菠蘿黃酮苷的制備及其用途得以證實(shí)，同時(shí)又不應(yīng)將下列實(shí)施例看作是對本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1菠蘿黃酮苷A的分離制備及其理化和波譜數(shù)據(jù)首先用藥材重量的5倍的80％乙醇將菠蘿葉在50℃加熱提取3次，每次為1小時(shí)。然后提取液在減壓(壓力98Kpa)，溫度在50℃濃縮后，用藥材重量的2倍水溶解，離心，棄去沉淀，上清液通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，洗脫液廢棄，再用80％乙醇洗脫，洗脫液在溫度為50℃(壓力98Kpa)減壓濃縮，濃縮物減壓(壓力98Kpa)干燥，得到菠蘿葉提取物。菠蘿葉提取物用60％乙醇溶解，再用硅膠拌樣，用硅膠柱色譜分離，石油醚∶丙酮梯度洗脫，用葡聚糖凝膠純化，先得到該化合物---菠蘿黃酮苷A。
理化性質(zhì)和波譜特征菠蘿黃酮苷A(ananaflavoside A，5，4′-dihydroxy-7，3′，5′-trimethoxyflavone-4′-O-β-D-glucopyranoside)黃色粉末，mp 196-198℃；UV(MeOH)nm321，273，220；HRFABMSm/z 507.1490[M+1]+(calcd for C24H27O12，507.1496)；1H NMR(DMSO-d6)12.86(OH-5)，7.37(H-2′，6′)，7.14(H-3)，6.78(H-8)6.39(H-6)，5.15(H-1″)，3.88(OCH3-3′，5′)，3.87(OCH3-7)；13C NMR(DMSO-d6)163.3(C-2)，104.8(C-3)，182.1(C-4)，161.1(C-5)，98.1(C-6)，165.3(C-7)，92.9(C-8)，157.5(C-9)，105.0(C-10)，121.5(C-1′)，104.3(C-2′)，148.2(C-3′)，137.7(C-4′)，148.2(C-5′)，104.3(C-6′)，101.9(C-1″)，74.1(C-2″)，76.6(C-3″)，69.8(C-4″)，77.4(C-5″)，60.7(C-6″)，56.1(OCH3-7)，56.7(OCH3-3′，5′)。
實(shí)施例2菠蘿黃酮苷B的分離制備及其理化和波譜數(shù)據(jù)首先用藥材重量的6倍的70％乙醇將菠蘿葉在60℃加熱提取2次，每次為1小時(shí)。然后提取液在減壓(壓力98Kpa)，溫度在50℃濃縮后，用藥材重量的2倍水溶解，離心，棄去沉淀，上清液通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，洗脫液廢棄，再用80％乙醇洗脫，洗脫液在溫度為50℃(壓力98Kpa)減壓濃縮，濃縮物減壓(壓力98Kpa)干燥，得到菠蘿葉提取物。菠蘿葉提取物用70％乙醇溶解，再用硅膠拌樣，用硅膠柱色譜分離，氯仿∶甲醇梯度洗脫，用葡聚糖凝膠純化，繼菠蘿黃酮苷A后得到該化合物---菠蘿黃酮苷B。
理化性質(zhì)和波譜特征菠蘿黃酮苷B(ananaflavoside B，5，4′-dihydroxy-6，7，3′，5′-tetramethoxyflavone-4′-O-β-D-glucopyranoside)黃色粉末，mp206-207℃；UV(MeOH)nm328，281，220；HRFABMSm/z 537.1607[M+1]+(calcd for C25H29O13，537.1602)；1H NMR(DMSO-d6)12.84(OH-5)，7.38(H-2′，6′)，7.14(H-3)，7.02(H-8)，5.15(H-1″)，3.87(OCH3-7)，3.89(OCH3-3′，5′)，3.60(OCH3-6)；13C NMR(DMSO-d6)163.2(C-2)，104.6(C-3)，182.3(C-4)，152.9(C-5)，131.9(C-6)，158.7(C-7)，91.8(C-8)，152.7(C-9)，105.2(C-10)，125.5(C-1′)，104.9(C-2′)，152.8(C-3′)，137.6(C-4′)，152.8(C-5′)，104.9(C-6′)，101.8(C-1″)，74.1(C-2″)，76.5(C-3″)，69.8(C-4″)，77.4(C-5″)，60.7(C-6″)，60.0(OCH3-6)，56.5(OCH3-7)，56.7(OCH3-3′，5′)。
實(shí)施例3菠蘿黃酮苷C的分離制備及其理化和波譜數(shù)據(jù)首先用藥材重量的7倍的60％乙醇將菠蘿葉在70℃加熱提取3次，每次為2小時(shí)。然后提取液在減壓(壓力98Kpa)，溫度在50℃濃縮后，用藥材重量的2倍水溶解，離心，棄去沉淀，上清液通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，洗脫液廢棄，再用80％乙醇洗脫，洗脫液在溫度為50℃(壓力98Kpa)減壓濃縮，濃縮物減壓(壓力98Kpa)干燥，得到菠蘿葉提取物。菠蘿葉提取物用50％乙醇溶解，再用硅膠拌樣，用硅膠柱色譜分離，氯仿∶丙酮梯度洗脫，用葡聚糖凝膠純化，繼菠蘿黃酮苷B后得到該化合物---菠蘿黃酮苷C。其理化性質(zhì)和波譜特征菠蘿黃酮苷C(ananaflavoside C，5，6，4′-trihydroxy-7，3′，5′-trimethoxyflavone-4′-O-β-D-glucopyranoside)黃色粉末，mp153-155℃；UV(MeOH)nm329，221，219；HRFABMSm/z523.1443[M+1]+(calcd for C24H27O13，523.1446)；1H NMR(DMSO-d6)12.56(OH-5)，8.76(OH-6)，7.37(H-2′，6′)，7.09(H-3)，7.00(H-8)，5.14(H-1″)，3.93(3H，s，OCH3-7)，3.89(OCH3-3′，5′)；13C NMR(DMSO-d6)162.9(C-2)，104.4(C-3)，182.3(C-4)，146.0(C-5)，130.0(C-6)，154.4(C-7)，91.3(C-8)，149.7(C-9)，105.1(C-10)，125.2(C-1′)，104.8(C-2′)，152.8(C-3′)，137.5(C-4′)，152.8(C-5′)，104.8(C-6′)，101.9(C-1″)，74.1(C-2″)，76.5(C-3″)，69.8(C-4″)，77.4(C-5″)，60.7(C-6″)，56.3(OCH3-7)，56.7(OCH3-3′，5′)。
實(shí)施例4菠蘿黃酮苷D的分離制備及其理化和波譜數(shù)據(jù)首先用藥材重量的10倍的50％乙醇將菠蘿葉在70℃加熱提取3次，每次為3小時(shí)。然后提取液在減壓(壓力98Kpa)，溫度在50℃濃縮后，用藥材重量的2倍水溶解，離心，棄去沉淀，上清液通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，洗脫液廢棄，再用80％乙醇洗脫，洗脫液在溫度為50℃(壓力98Kpa)減壓濃縮，濃縮物減壓(壓力98Kpa)干燥，得到菠蘿葉提取物。菠蘿葉提取物用80％乙醇溶解，再用硅膠拌樣，用硅膠柱色譜分離，石油醚∶丙酮梯度洗脫，用葡聚糖凝膠純化，繼菠蘿黃酮苷C后得到該化合物---菠蘿黃酮苷D。其理化性質(zhì)和波譜特征菠蘿黃酮苷D(ananaflavoside D，5，6，4′-trihydroxy-7，3′，5′-trimethoxyflavone-6-O-β-D-glucopyranoside)。黃色粉末，mp206℃；UV(MeOH)nm339，255，221；HRFABMSm/z521.1306[M-1]-(calcd for C24H25O13，521.1300)；
1H NMR(DMSO-d6)13.06(OH-5)，9.31(OH-4′)，7.38(H-2′，6′)，7.03(H-3)，6.98(H-8)，5.15(H-1″)，3.92(OCH3-7)，3.91(OCH3-3′，5′)；13C NMR(DMSO-d6)163.9(C-2)，103.4(C-3)，182.3(C-4)，151.6(C-5)，128.2(C-6)，158.5(C-7)，91.8(C-8)，152.6(C-9)，105.0(C-10)，120.3(C-1′)，104.4(C-2′)，148.2(C-3′)，140.0(C-4′)，148.2(C-5′)，104.3(C-6′)，102.0(C-1″)，74.1(C-2″)，76.6(C-3″)，69.9(C-4″)，77.4(C-5″)，60.9(C-6″)，56.4(OCH3-7)，56.6(OCH3-3′，5′)。
實(shí)施例5對腦MDA生成的影響觀察本發(fā)明菠蘿黃酮苷對小鼠腦MDA生成的抑制作用。本發(fā)明所用菠蘿黃酮苷A-D，批號990418。用時(shí)以生理鹽水配制成所需濃度。實(shí)驗(yàn)所用動物為雄性ICR小鼠，非近交系封閉群，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，合格證號SCXK(京)2002-0003，體重18-22g。實(shí)驗(yàn)室室溫20-22℃，相對濕度40％～60％，換氣扇通氣，自然光源12h/日，籠養(yǎng)，每籠10只，每三日清掃籠舍一次。
取正常小鼠，處死后取腦，加入生理鹽水做勻漿液(與腦比例為5∶1)。4℃冰箱靜置5分鐘，取上部均勻混濁液。每管加入腦組織液150uL，加入不同濃度藥液50ul，37℃水浴孵育30分。依次加入10％SDS 0.1ml，50％冰醋酸硫代巴比妥酸液0.5ml和1％鹽酸液2ml。沸水浴15分鐘，取出后冷水置10分鐘，1500轉(zhuǎn)離心15分鐘，取上清于532nm處測吸光度A值。每組做三復(fù)管。計(jì)算抑制率＝[(對照組A-給藥組A)/對照組A×100％]。
所得數(shù)據(jù)經(jīng)EXCEL軟件處理。組間t檢驗(yàn)。
本試驗(yàn)菠蘿黃酮苷A-D給藥終濃度分別為1×10-4g/ml，1×10-5g/ml，1×10-5g/ml。
本試驗(yàn)為體外實(shí)驗(yàn)。本試驗(yàn)空白對照為等體積生理鹽水.陽性藥對照為維生素E，購自Sigma公司。實(shí)驗(yàn)終濃度為1×10-5g/ml。本試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以Excel軟件處理。
表1菠蘿黃酮苷體外對腦MDA生成的抑制作用(x±s)分組 藥物終濃度 Umol/g(g/ml)生理鹽水 104.43±9.95維生素C1×10-342.38±1.66**菠蘿黃酮苷A1×10-442.47±1.84**菠蘿黃酮苷A1×10-559.±5.92**菠蘿黃酮苷A1×10-669.77±5.09**菠蘿黃酮苷B1×10-441.93±1.76**菠蘿黃酮苷B1×10-558.7±5.11**菠蘿黃酮苷B1×10-667.38±3.93**菠蘿黃酮苷C1×10-447.91±4.06**菠蘿黃酮苷C1×10-560.7±3.83**
菠蘿黃酮苷C1×10-666.49±5.55**菠蘿黃酮苷D1×10-456.05±4.4**菠蘿黃酮苷D1×10-559.0±3.28**菠蘿黃酮苷D1×10-678.39±6.22*與生理鹽水組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝3本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，菠蘿黃酮苷A-D體外有較強(qiáng)地抑制缺糖缺氧腦組織MDA生成的作用，最低有效濃度為1×10-6g/ml。提示菠蘿黃酮苷A-D具有一定的抗氧化的作用。
實(shí)施例6體外對氧化型低度脂蛋白升成的抑制作用本發(fā)明所用雄性家兔，體重2.26±0.47Kg。由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外醫(yī)院動物室提供。合格證號京動管質(zhì)字(96)第006號。
本發(fā)明試驗(yàn)LDL的提取制備。25％的烏拉坦耳緣靜脈麻醉(2ml-4ml/kg)，耳靜脈體內(nèi)肝素抗凝，頸總動脈取血100ml左右，用終濃度為0.4mg/ml的EDTA抗氧化。1500rpm離心10min，取血漿。
配密度梯度液d＝1.0即0液的配制0.01％EDTA，PH＝7.4-8.0d＝1.1液的配制取0液 100mL+NaBr 13.5gd＝1.2液的配制取0液 100mL+NaBr 29.5gd＝1.21液的配制 取0液 100mL+NaBr 30gd＝1.3液的配制取血漿100mL+NaBr 40g鋪梯度密度層先用長針頭管吸取0液7mL鋪于容量為25.9mL的Beckman離心管底部，而后小心將吸取了約7mL的d＝1.1液長針頭插入Beckman試管底部緩緩加入液體，使0液上浮，余下依此法加入d＝1.3液的血漿，注意一定要使各液面分層。
超速離心角度轉(zhuǎn)頭Ti50.2，XL-90 Beckman離心管25.9mL，45000rpm，1.4h，10℃。
透析透析袋的處理以2％(W/V)NaHCO3+1mmoL/LEDTA(PH8.0)1000mL煮10分鐘(稱2gNaHCO3溶于100mLD.W.中，稱0.37gEDTA溶于1000mLD.W.中即可)。用重蒸餾水洗后，再用1mmoL/LEDTA(PH8.0)煮10分鐘。冷至4℃?zhèn)溆?。用前用重蒸餾水透析袋洗內(nèi)壁。
透析液配制0.85％NaCl 8.5g，0.02Mtris-HCl 2.42g，0.01％EDTA 0.1g，0.03％NaN30.3g，共1000mL(pH7.4)。
透析條件避光，密閉，4℃，24h，換4-5次液。
將PEG-20000覆蓋于透析袋上，隨時(shí)觀察濃縮情況(一般濃縮為1mg/mL左右)。
蛋白定量。用1.0mg/mL的牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品，于UV-280nm處測LDL中蛋白濃度。將LDL蛋白濃度稀釋到0.25mg/mL，2mL。用時(shí)2倍稀釋，即蛋白濃度0.125mg/mL。每個(gè)劑量做3復(fù)管。
LDL測試。取0.125mg/mL的LDL的液內(nèi)加入測試藥物，即時(shí)測OD值，然后水浴(20℃)30分鐘后加入CuSO4H2O 5umoL/L，水浴30分鐘后測定OD234nm，以加入CuSO4H2O后30分鐘的OD值與加入CuSO4H2O前所測OD值的差值[OD(30分鐘)-OD(0分鐘)]，表明其氧化型低密度脂蛋白生成的速率，以此反應(yīng)藥物的抑制作用。
本發(fā)明所用蒸餾水為空白對照。陽性對照藥為維生素C(分析純)，批號011206。北京芳草醫(yī)藥化工研制公司生產(chǎn)。
結(jié)果表2不同藥物對氧化低密脂蛋白生成的影響(x±s)劑量(ug/ml) D(30分鐘)-OD(0分鐘)生理鹽水0.008±0.0026模型+生理鹽水 0.0963±0.0121##模型+維生素C 0.5 0.03±0.0075**模型+菠蘿黃酮苷A 0.3 0.05±0.0114*模型+菠蘿黃酮苷A 3 0.0263±0.0116**模型+菠蘿黃酮苷B 0.3 0.0437±0.0074*模型+菠蘿黃酮苷B 3 0.0157±0.006**模型+菠蘿黃酮苷C 0.3 0.0493±0.0116*模型+菠蘿黃酮苷C 3 0.0333 ±0.0075**模型+菠蘿黃酮苷D 0.3 0.065±0.013*模型+菠蘿黃酮苷D 3 0.0453±0.0055**與生理鹽水組相比，##P＜0.01。與模型+生理鹽水組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝3。
菠蘿黃酮苷A-D在終濃度為0.3，3ug/ml時(shí)，對Cu2SO4誘導(dǎo)的LDL氧化為氧化型LDL(ox-LDL)有明顯的抑制作用。陽性對照藥VC，具有明顯的抑制ox-LDL產(chǎn)生的作用。已知ox-LDL對于動脈平滑肌有明顯的侵蝕作用，它可以使內(nèi)皮細(xì)胞受損，從而使血管內(nèi)壁受損，而使血栓形成并附壁。因此菠蘿黃酮苷苷A-D的這種抑制ox-LDL的作用對于防止冠心病和腦血栓具有重要的臨床意義。
權(quán)利要求
1.化合物菠蘿黃酮苷，其化學(xué)結(jié)構(gòu)通式如下 其中菠蘿黃酮苷AR1＝H R2＝O-β-D-Glc菠蘿黃酮苷BR1＝OCH3R2＝O-β-D-Glc菠蘿黃酮苷CR1＝OHR2＝O-β-D-Glc菠蘿黃酮苷DR1＝O-β-D-Glc R2＝OH
2.如權(quán)利要求1所述化合物菠蘿黃酮苷在制備治療體內(nèi)過氧化物升高及由此引起的疾病的藥物中的用途
3.如權(quán)利要求1所述化合物菠蘿黃酮苷在制備治療體內(nèi)氧化型低密度脂蛋白和高密度脂蛋白升高的藥物中的
全文摘要
化合物菠蘿黃酮苷及用途，涉及從菠蘿葉中提取的一組新穎的化合物菠蘿黃酮苷及其在醫(yī)療方面的用途。經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)表明，該組化合物具有明顯的抗氧化和抑制氧化型低密度脂蛋白升高的作用，可用來治療體內(nèi)過氧化物升高所引起的病癥，以及低密度脂蛋白升高所引起的相關(guān)性疾病，如脂代謝紊亂，動脈粥樣硬化，冠心病等。
文檔編號A61K31/7048GK1569868SQ20041000905
公開日2005年1月26日 申請日期2004年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月29日
發(fā)明者邢東明, 王偉, 王如峰, 趙玉男, 陳蕓蕓, 杜力軍, 丁怡 申請人:清華大學(xué)