專利名稱：龍血竭油劑，含有該油劑的軟膠囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及龍血竭的油劑和軟膠囊，具體的，本發(fā)明涉及龍血竭超細(xì)粉末的油劑和軟膠囊，以及它們的制備方法。本發(fā)明的龍血竭油劑和軟膠囊劑可用作藥品或功能性食品，所述的油劑和軟膠囊對凝血系統(tǒng)具有明顯的雙向調(diào)節(jié)作用，既可活血化瘀又有收斂止血作用，不會引起出血傾向，具有更高的抗血小板活性，因此可用于治療和/或預(yù)防血栓形成，防止血栓的形成和延展，具有明顯的活血化淤、通脈及增加腦血流量作用。
背景技術(shù)：
龍血竭為龍舌蘭科龍血樹屬植物劍葉龍血樹(DracaenaCochinchinensis(Lour.)S.C.Chen)含脂木質(zhì)部經(jīng)提取加工制成的樹脂，已正式列了衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)。為不規(guī)則塊狀，紅棕色至黑棕色，有光澤；在甲醇、乙醇或稀堿溶液中溶解，在水、乙醚和稀酸中不溶。血竭是著名的南藥，在我國的應(yīng)用歷史有1500多年。我國藥學(xué)鼻祖李時(shí)珍在《本草綱目》中推崇它是“活血圣藥”。它具有獨(dú)特的活血、止血雙向調(diào)節(jié)作用，并可以定痛、生肌、增強(qiáng)人體免疫力、保健養(yǎng)顏。龍血竭可單獨(dú)用藥，市場上已有龍血竭含片、龍血竭滴丸，龍血竭硬膠囊等，例如云南西雙版納雨林制藥有限責(zé)任公司將龍血竭單獨(dú)制藥，制成血竭硬膠囊(批號為國藥準(zhǔn)字Z53021514號)，該膠囊的內(nèi)容物是龍血竭粉末，顆粒較粗，嚼之有碳粒感，用于活血化淤，定痛止血、斂瘡生肌。其它制劑也具有類似功能。龍血竭也常常與其它中藥聯(lián)合制劑，也具有類似的活血化淤，通竅止痛等功能。例如云南省個(gè)舊市藥業(yè)有限公司的專利申請03117771.9公開了由龍血竭、三七粉及微量冰片制成的復(fù)合制劑，用于心血淤阻所致胸痹心痛，胸悶刺痛等冠心病、心絞痛等癥候，療效明顯優(yōu)于復(fù)方丹參。但是，不管龍血竭是單獨(dú)用藥還是與其它藥物聯(lián)合用藥，其生物利用度都較低，效果也差。
這是因?yàn)辇堁叩闹饕钚猿煞质屈S酮類化合物，此類成分是親脂性的，故龍血竭難溶于水，口服使用時(shí)生物利用度較低。本發(fā)明人經(jīng)過大量試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)將龍血竭均勻分散于油中制成油劑時(shí)，可大大提高其生物利用度。更進(jìn)一步地，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)將龍血竭以超細(xì)粉末的形式用藥時(shí)，可進(jìn)一步提高其生物利用度，從而可以減少其使用量。為了方便使用，可直接使用油劑，或?qū)⑺龅挠蛣┲瞥绍浤z囊。
本發(fā)明的油劑或軟膠囊對凝血系統(tǒng)具有明顯的雙向調(diào)節(jié)作用，不會引起出血傾向，具有更高的抗血小板活性，可用于治療和/或預(yù)防血栓形成。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種龍血竭油劑和/或軟膠囊制劑，所述制劑使用方便，具有明顯的雙向調(diào)節(jié)作用，用于治療和/或預(yù)防血栓形成，所述油劑和/或軟膠囊含有龍血竭粉末和可食用油。
更具體地，本發(fā)明油劑中所含的龍血竭粉末為超細(xì)粉末，其大小大約在600-2000目，優(yōu)選大約800-1300目，更優(yōu)選在1000目左右，以便于人體吸收。
本發(fā)明油劑中所含的可食用油可以是可食用油或其它對人體無害以及對龍血竭的作用無相反影響的油類，如食用油、礦物油等，優(yōu)選食用油，例如玉米油、花生油、大豆油、葵花籽油、芝麻油、橄欖油等，或者是它們之中任意二種或多種的混合物，優(yōu)選玉米油。
本發(fā)明的油劑中龍血竭粉末必須有合適的稀釋比，油太少時(shí)，龍血竭粉末容易沉淀，影響使用效果；油太多時(shí)會使有效成分的濃度降低。根據(jù)所使用的龍血竭粉末的粒度和/或所用油類，龍血竭粉末和可食用油的比例可以變化。通常，本發(fā)明油劑中龍血竭粉末和可食用油的重量比為1∶2.0-5.0，優(yōu)選1∶2.0-4.0，更優(yōu)選1∶2.2-2.5，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)例中，龍血竭粉末和可食用油的重量比為1∶2.23。
本發(fā)明的另一目的是提供了一種使用方便的，用于治療和/或預(yù)防血栓形成的龍血竭軟膠囊。
本發(fā)明的軟膠囊由內(nèi)容物和膠囊殼兩部分組成。所述的內(nèi)容物為本發(fā)明所述油劑；所述的膠囊殼主要由明膠和甘油組成，并且需要適當(dāng)控制所述明膠和甘油的重量配比。甘油的量太多，囊殼較軟，容易變形；甘油的量太少，囊殼較脆，容易破裂，影響軟膠囊的質(zhì)量穩(wěn)定性。具體的，所述的膠囊殼由明膠10重量份、甘油3-6重量份和適量水組成；優(yōu)選明膠10重量份和甘油4-5份；最優(yōu)選明膠10重量份和甘油4.8份。其中所述的“適量水”通常大約是混合物總體積的16-17％，本專業(yè)普通技術(shù)人員對此混合物中如何調(diào)節(jié)水的用量是清楚的。
根據(jù)本領(lǐng)域的常識，本發(fā)明油劑和軟膠囊中還可以含有具有相同和/或不同藥理效果的、具有類似粉末形式的其它中藥，制成具有特定藥理效果的復(fù)合制劑。這些中藥粉末例如可以是三七粉、靈芝粉、人參粉等。
本發(fā)明的另一目的是提供本發(fā)明龍血竭油劑和軟膠囊的制備方法。
本發(fā)明龍血竭油劑的制備方法是稱取龍血竭超細(xì)粉末微粉，按比例與可食用油混合，攪拌均勻，即可制成本發(fā)明的油劑。
本發(fā)明龍血竭軟膠囊的制備方法包括以下步驟(1)將甘油與適量水混合均勻，按比例溶入大約60-80℃，優(yōu)選大約60-70℃的明膠，攪拌均勻，真空脫氣后，制成膠囊殼的原料，保溫靜置待用；(2)用上述方法制備的龍血竭油劑作為內(nèi)容物，將其倒入藥液漏斗中，以步驟(1)的產(chǎn)品作為膠囊殼原料，用模具壓制出軟膠囊。
制備軟膠囊時(shí)可使用制藥領(lǐng)域中常用于制備軟膠囊的通用設(shè)備，例如溶膠機(jī)組或壓丸機(jī)組系統(tǒng)。
在本發(fā)明制備龍血竭油劑和軟膠囊的方法中，其關(guān)鍵是控制龍血竭油劑中龍血竭粉末和可食用油的比例，以及控制軟膠囊殼制備中明膠與甘油的比例，具體的制備工藝，例如混合、熔化、溶解、攪拌、脫氣等均是制藥領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，在實(shí)際操作過程中本領(lǐng)域普通技術(shù)人員不需要經(jīng)過創(chuàng)造性的勞動(dòng)即可以選擇出最佳工藝條件。
本發(fā)明的龍血竭油劑和軟膠囊可作為藥品或功能性食品。
本發(fā)明的龍血竭軟膠囊每粒膠囊中含龍血竭20-400毫克和上述比例的食用油輔料。優(yōu)選以口服的形式施用，但是也可以根據(jù)需要選擇其它合適的施用方式，例如在用于外傷治療時(shí)，可取內(nèi)容物外敷傷口。根據(jù)施用目的，例如治療、預(yù)防或用作功能食品，以及使用者的身體狀況，疾病的嚴(yán)重程度等確定每日的施用量，每日的施用量可以是6-12粒，分2-4次服用。具體地，以每粒含186mg龍血竭超細(xì)粉末的軟膠囊為例，在用于治療跌打損傷、活血散淤、斂瘡生肌、淤血作痛等病征的治療時(shí)，每天口服三次，每次3-5粒；在用于婦女氣血凝滯、子宮出血的治療時(shí)，每天口服三次，每次3-5粒；在用于外傷出血、膿瘡久不收口的治療時(shí)，可取內(nèi)容物適量外敷傷口(其用量取決于傷口的程度)，一日兩次；同時(shí)每天口服三次，每次2粒。
很顯然，根據(jù)本發(fā)明龍血竭油劑和/或軟膠囊的藥理作用，該油劑和/或軟膠囊具有良好的保健功能，可用于制備功能食品。在用于保健功能時(shí)，其用量可適當(dāng)降低。
為了證明本發(fā)明龍血竭油劑和軟膠囊的藥理作用，本發(fā)明人進(jìn)行了大量的醫(yī)學(xué)研究，例如采用Born方法(Born GVR，Aggregation ofblood platets by adenosine diphosphate and its reversal，Nature，1962，194927-9)測定龍血竭軟膠囊灌胃對家兔血小板聚集功能的影響，運(yùn)用Charlton和Diminno G等的方法(Charlton PA等人，Evaluationof a low molecular weight modulator of human plasminogen activatorinhibitor-1 activity，Thrombosis and Haemostasis，1996，75808-815；Diminno G，等人，Mouse antithrombotic assaya simple method for theevaluation of antithrombotic agents in vivo.，J.Pharmacol.Exp.Ther，，1983，22557)評價(jià)龍血軟膠囊對電刺激大鼠頸動(dòng)脈血栓形成和ADP致小鼠肺血栓突然死亡的保護(hù)作用；同時(shí)測定龍血竭軟膠囊對小鼠尾尖出血時(shí)問、家兔凝血酶原時(shí)間(PT)、白陶土部分凝血活酶時(shí)間(KPTT)和小鼠凝血時(shí)間(毛細(xì)玻璃管法)的影響。結(jié)果表明，龍血竭軟膠囊灌胃明顯抑制ADP和PAF誘導(dǎo)的血小板聚集。與等劑量的血竭硬膠囊相比，龍血竭軟膠囊的抗血小板作用明顯增強(qiáng)；富含不飽和脂肪酸的食用玉米油亦表現(xiàn)出明顯的抗血小板作用。高、中劑量的龍血竭軟膠囊明顯延長大鼠頸動(dòng)脈閉塞時(shí)間，同時(shí)降低ADP引起的小鼠死亡數(shù)，而且與血竭硬膠囊比較，1.95g/kg龍血竭軟膠囊的抗栓作用更強(qiáng)。龍血竭軟膠囊對凝血系統(tǒng)的影響具體表現(xiàn)為明顯縮短KPTT(對PT無影響)、小鼠尾尖出血時(shí)間和凝血時(shí)間(毛細(xì)玻璃管法)，對凝血系統(tǒng)表現(xiàn)出雙向調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果總的提示，與硬膠囊比較，由于龍血竭的超細(xì)粉碎和食用玉米油的助溶作用提高了龍血竭軟膠囊生物利用度，龍血竭軟膠囊具有更高的抗血小板活性和較強(qiáng)的防止血栓形成與延展作用對凝血系統(tǒng)影響的雙向訓(xùn)節(jié)作用表明，龍血竭軟膠囊不會引起明顯的出血傾向。
在本發(fā)明的藥理作用研究中，以西雙版納雨林制藥有限責(zé)任公司提供的龍血竭硬膠囊作為對照。
藥理作用的研究結(jié)果為開發(fā)血竭新劑型-龍血竭油劑和軟膠囊提供了藥效學(xué)試驗(yàn)依據(jù)。
1、實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物健康日本大耳白兔，休重2～2.5kg，雌雄各半；雄性SD大鼠，體重240～280g；ICR小鼠，體重18～22g，雌雄各半。均由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號滇實(shí)動(dòng)證字第2002082號、2001034號、2001035號)。
1.2供試藥品和主要試劑龍血竭油劑，深紅色，為含龍血竭31％的食用玉米油劑，由西雙版納雨林制藥有限責(zé)任公司提供。
龍血竭軟膠囊油劑，其中含有上述油劑，每粒膠囊含龍血竭186mg，由西雙版納雨林制藥有限責(zé)任公司提供，批號YL2003-3-001。
龍血竭硬膠囊，每粒膠囊含龍血竭300mg，西雙版納雨林制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號國藥準(zhǔn)字Z53021514號。
食用玉米油為市售商品(防城港新海油脂工業(yè)有限公司生產(chǎn))。
血小板活化因子(platelet activator factor，PAF)系Sigma公司產(chǎn)品，目錄號P-9525，規(guī)格10mg/5ml，純度約99％，用前溶于含0.25％小牛血清蛋白的Tris-NaCl緩沖液中，pH值7.2。
腺苷二磷酸(adenosine diphosphate，ADP)系Fluka公司產(chǎn)品，規(guī)格500mg/瓶。用前溶于磷酸鹽緩沖液中。
凝血酶原時(shí)間(prothrombin time，PT)及白陶土部分凝血活酶時(shí)間(kaolin partial thromboplastin time，KPTT)測定試劑盒購自上海生物技術(shù)公司，PT試劑國際敏感指數(shù)ISI值為1.22。
其他常規(guī)試劑均為國產(chǎn)分析純。
1.3主要儀器LBY-NJ2型血液凝聚儀，由北京普利生精密儀器研究中心生產(chǎn)；SEN-7203型電刺激儀及DVM-4200型二道血流速度流量儀分別由日本Nihon Kohden和Hayashi Denki公司生產(chǎn)。
2、方法與結(jié)果2.1給藥方法龍血竭軟膠囊的給藥量以油劑中所含血竭粉量計(jì)算。據(jù)龍血竭濃度折算成相應(yīng)體積的軟膠囊油劑灌胃給藥。食用玉米油組所給油量與龍血竭軟膠囊高劑量組所給油劑中含油量體積相等。
2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)方法以Student t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
試驗(yàn)1.龍血竭軟膠囊對血小板聚集功能的影響1、富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)和貧血小板血漿(platelet-poor plasma，PPP)的制備自清醒家兔頸動(dòng)脈取血收集于塑料離心管中，以3.8％枸櫞酸鈉抗凝(血與抗凝劑休積比9∶1)。室溫下1000rpm離心10min，得PRP，吸出PRP于潔凈塑料管中；剩余血液再以3000rpm離心10min得PPP。PPP用于調(diào)零或調(diào)整PRP中的血小板數(shù)目，試驗(yàn)過程中血小板數(shù)控制在5×1011cell/L。
2、抗血小板聚集試驗(yàn)日本大耳白兔隨機(jī)分成6組，每組4只，即等體積生理鹽水組(5ml/kg)、食用玉米油組(2.2ml/kg)、0.5、0.75、1.0g/kg的龍血竭軟膠囊組及1.0g/kg血竭硬膠囊組。家兔禁食不禁飲過夜后，上述各組份均按體重灌胃給藥。給藥前取血一次，給藥后1、2、3和4h分別取血，制需PRP和PPP，按Born方法觀察藥物灌胃后對ADP和PAF誘導(dǎo)血小板聚集功能的影響。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，龍血竭軟膠囊及血竭硬膠囊灌胃后均可明顯抑制ADP和PAF誘導(dǎo)的血小板聚集，在血竭劑量相等情況下，軟膠囊抑制血小板聚集作用顯著優(yōu)于硬膠囊，食用玉米油亦表現(xiàn)出一定的抑制ADP所誘發(fā)的血小板聚集作用，而對PAF引起的血小板聚集無明顯影響。具體表現(xiàn)為對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集，0.5、0.75、1.0g/kg龍血竭軟膠囊及1.0g/kg的血竭硬膠囊均于給藥后1h起效，2h達(dá)最大抑制作用，藥效可持續(xù)爭4h，龍血竭軟膠囊呈現(xiàn)較好的抗血小板量效關(guān)系，且與等劑量的血竭硬膠囊相比，龍血竭軟膠囊的抗血小板作用明顯增強(qiáng)；食用玉米油雖然在灌胃后1-2h亦表現(xiàn)出抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集功能作用，但其抑制率顯著低于含油量相等的龍血竭軟膠囊高劑量組。對PAF誘導(dǎo)的血小板聚集，0.5g/kg的龍血竭軟膠囊于給藥后1-2h具有抗血小板聚集作用，0.75及1.0g/kg的龍血竭軟膠囊于灌胃后1h起效，3h達(dá)最大效應(yīng)，藥效可持續(xù)4h，1.0g/kg的血竭硬膠囊于給藥后1h起效，抑制作用亦持續(xù)至4h；0.75和1.0/kg的龍血竭軟膠囊的抗PAF作用在給藥后2-4h均明顯強(qiáng)于1.0g/kg的血竭硬膠囊。在本實(shí)驗(yàn)中，食用玉米油對PAF引起的血小板聚集無明顯影響(表1)。
表1.龍血竭軟膠囊灌胃對ADP和PAF誘導(dǎo)家兔血小板聚集功能的影響

n＝4，x±s.ap＜0.05，bp＜0.01與同時(shí)間點(diǎn)的生理鹽水組比較；cp＜0.05與血竭硬膠囊組比較；dp＜0.05與食用玉米油組比較試驗(yàn)2.龍血竭軟膠囊對電刺激大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的影響雄性SD大鼠隨機(jī)分成6組，每組8只，即生理鹽水組、食用玉米油組(4.3ml/kg，為軟膠囊高劑量組油劑中所含食用油量)、0.65、1.3、1.95g/kg的龍血竭軟膠囊組和1.95g/kg血竭硬膠囊組。按體重灌胃，1次/d，連續(xù)5d，于末次給藥1h后，應(yīng)用Charlton等的方法并加以改良，即用30mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠，分離左頸總動(dòng)脈，測定正常血流量，然后置兩根銀制電極于血管兩端，間距1cm，電極及血管下襯一絕緣薄膜，通以1.5mA直流電連續(xù)刺激7min.用5MHz點(diǎn)試超聲探頭替換溫度儀，連續(xù)測量刺激部位遠(yuǎn)心端的血流量，排除了室溫對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響從刺激開始至血流量為零的時(shí)間間隔，代表血管栓塞時(shí)間(occlusion time，OT)，此為血栓形成時(shí)間。若60min內(nèi)血管仍開放，則以60min作為記錄終點(diǎn)。
結(jié)果顯示，1.3和1.95g/kg龍血竭軟膠囊灌胃后，呈劑量相關(guān)性明顯延長電刺激大鼠頸動(dòng)脈的血栓形成時(shí)間；1.95g/kg的龍血竭軟膠囊對血管閉塞時(shí)間的延長作用明顯較1.95/kg的血竭硬膠囊組增強(qiáng)；有興趣的是，食用玉米油亦顯著延長頸動(dòng)脈的閉塞時(shí)間。1.95g/kg的龍血竭軟膠囊和血竭硬膠囊的作用均明顯強(qiáng)于食剛玉米油(表2)。
表2.龍血竭軟膠囊灌胃對電刺激大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的影響

n＝8，x±s，bp＜0.01與生理鹽水組比較，cp＜0.05與血竭硬膠囊組比較，dp＜0.05與食用玉米油比較試驗(yàn)3.龍血竭軟膠囊對小鼠肺微循環(huán)血栓形成的影響雄性ICR小鼠，休重20-24g，隨機(jī)分6組，每組10只，即生理鹽水組(0.2ml/10g體重)、食用玉米油組(與龍血竭軟膠囊高劑量組所給油劑中含有的食用玉米油相等，11ml/kg體重)、0.65、1.3、1.95g/kg的龍血竭軟膠囊組和1.95g/kg血竭硬膠囊組。連續(xù)灌胃5d，1次/d，于末次給藥1h后，按Diminno的方法于小鼠尾靜脈注入300mg/kg的ADP(0.1ml/10g體重)注畢，觀察并記錄15min內(nèi)動(dòng)物死亡數(shù)。
結(jié)果表明，中、高劑量的龍血竭軟膠囊均明顯減少ADP致小鼠肺微血管栓塞的死亡數(shù)，該作用呈劑量依賴趨勢，與等劑量(1.95g/kg)的血竭硬膠囊比較，龍血竭軟膠囊的作用明顯增強(qiáng)(表3)。
表3.龍血竭軟膠囊灌胃對ADP致小鼠肺栓塞死亡的保護(hù)作用

ap＜0.05，bp＜0.01與生理鹽水組比較cp＜0.05與血竭膠囊組比較試驗(yàn)4.龍血竭軟膠囊對凝血系統(tǒng)的影響1、對凝血酶原時(shí)間(PT)和白時(shí)間(KPTT)的影響此試驗(yàn)參見下述文獻(xiàn)黃正良和王凱，“紅花黃色素的抗凝血作用”，中草藥，1987，1824-26；和顧月芳，“血余炭粗晶凝血機(jī)理的探討”，中藥藥理與臨床，1987，319-22。
健康家兔，體重2-2.5kg，隨機(jī)分6組，每組4只，雌雄各半。即生理鹽水組(5ml/kg體重)、食用玉米油組(2.2ml/kg體重)、0.5、0.75、1.0g/kg的龍血竭軟膠囊組和1.0g/kg血竭硬膠囊組。給藥前自頸動(dòng)脈取血1次，給藥后1，2，3和4h再分別取血。同血小扳聚集試驗(yàn)制備PPP。按試劑盒說明書，在血液凝聚儀上測定藥物對PT和KPTT的影響。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，龍血竭軟膠囊、血竭硬膠囊和食用玉米油對PT均無明顯影響；對KPTT的影響表現(xiàn)為，0.75g/kg的龍血竭軟膠囊于給藥后1-2h明顯縮短KPTT，1.0g/kg的龍血竭軟膠囊和血竭硬膠囊均于給藥后1h起效，藥效可持續(xù)4h食用玉米油對KPTT僅于給藥后2h有一過性縮短作用(表4)。
表4.龍血竭軟膠囊灌胃對家兔凝血酶原時(shí)間(PT)和白陶土凝血活酶時(shí)間(KPTT)的影響

n＝4，x+s，bp＜0.01與生理鹽水組比較
2、龍竭軟膠囊對小鼠尾尖出血時(shí)間的影響此試驗(yàn)參見下述文獻(xiàn)李儀奎主編，中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1991，496。
雄性ICR小鼠(20～24g)分為6組，每組10只，即0.9％的生理鹽水組、食用玉米油組，0.65、1.3、1.95g/kg的龍血竭軟膠囊組和1.95的血竭硬膠囊組。各組均灌胃給藥，1次/d，連續(xù)4d。于末次給藥后1h，距尾尖0.6cm處橫斷。待血液自行溢出開始計(jì)時(shí)，每30s用濾紙吸去血滴1次，直至出血自然停止(濾紙無血跡)為止，記錄出血時(shí)間。結(jié)果顯示，高、中劑量的龍血竭軟膠囊明顯縮短小鼠尾尖出血時(shí)間，1.95g/kg的龍血竭軟膠囊較等劑量的血竭硬膠囊的縮短出血時(shí)間作用增強(qiáng).食用玉米油對出血時(shí)間無明顯影響(表5)。
表5.龍血竭軟膠囊灌冒對小鼠尾尖出血時(shí)間的影響

n＝10，x±s，ap＜0.05，bp＜0.01與生理鹽水組比較，cp＜0.05與血竭硬膠囊組比較3.龍血竭軟膠囊對小鼠凝血時(shí)間的影響(毛細(xì)玻璃管法)此試驗(yàn)參見下述文獻(xiàn)公開的方法陳奇主編，中藥藥理研究方法學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，1995，484。
選用18-22g ICR小鼠70只，隨機(jī)分成6組，灌胃給藥，1次/d，連續(xù)4d。末次給藥后1h，用長約10cm、內(nèi)徑為1mm玻璃毛細(xì)管由右眼內(nèi)眥插入球后靜脈叢取血，自血液流入管內(nèi)開始計(jì)時(shí)，血液注滿后取出，置水平位，每隔30s斷毛細(xì)管一小段，直至血凝絲出現(xiàn)為止，從毛細(xì)管采血至出現(xiàn)凝血絲的時(shí)間即為凝血時(shí)間。
結(jié)果顯示，1.95g/kg的龍血竭軟膠囊具有較血竭硬膠囊強(qiáng)的縮短小鼠毛細(xì)管法凝血時(shí)間作用，食用玉米油對凝血時(shí)間無明顯影響(表6)。
表6.龍血竭軟膠囊灌胃對小鼠凝血時(shí)間的影響(毛細(xì)玻璃管法)

n＝10，x±s，ap＜0.05，bp＜0.01與生理鹽水組比較，cp＜0.05與血竭硬膠囊組比較。
試驗(yàn)5.龍血竭軟膠囊急性毒性試驗(yàn)此試驗(yàn)參見中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局出版的《中藥新藥研究指南(藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué))》，P203-204。
龍血竭軟膠囊毒性很低，測不出半數(shù)致死量(medium lethaldose，LD50)，故進(jìn)行一次性灌胃的最大耐受量(maximal tolerant dose，MTD)測定，其MTD＞80ml/kg，已達(dá)到臨床推薦劑量0.12ml/kg的667倍以上。
取上述ICR小鼠20只(18～22g，雌雄各半，由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號滇實(shí)動(dòng)證字第2001035號))，禁食不禁水12h后，用提供的血竭軟膠囊油劑(含血竭超細(xì)粉31％的食用玉米油的油劑，批號20021226，由西雙版納雨林制藥有限責(zé)任公司提供。)按0.8ml/只灌胃給藥，一日內(nèi)共2次(總量1.6ml/只，即80ml/kg)。給藥后，觀察動(dòng)物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及嚴(yán)重程度，連續(xù)觀察7天，記錄動(dòng)物中毒和死亡情況。
20只小鼠灌胃給藥后，7天連續(xù)觀察未見動(dòng)物出現(xiàn)明顯中毒反應(yīng)，全部動(dòng)物存活，活動(dòng)自如，進(jìn)食飲水和大小便均正常，體重正常增長，一般情況良好(表1，2)。
表7.龍血竭軟膠囊灌胃小鼠急毒最大耐受量(MTD)的測定

表8.龍血竭軟膠囊灌胃對小鼠體重(g)的影響

x±s，n＝10試驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠灌胃龍血竭軟膠囊油劑的最大耐受量大于80ml/kg，己達(dá)臨床推薦劑量0.12ml/kg的667倍，也未見明顯毒性反應(yīng)。提示本品灌胃的急性毒性很低。
根據(jù)龍血竭軟膠囊臨床推薦用藥量計(jì)算小鼠MTD。
1.龍血竭軟膠囊每粒含0.6ml油劑，臨床推薦用藥量每次4粒，一日三次，每日總量＝7.2ml；2.以成人平均體重60kg計(jì)算，相當(dāng)于每日每公斤體重藥量≈0.12ml·kg-1·d-1。(7.2ml÷60)；所以，本試驗(yàn)中龍血竭軟膠囊的MTD(80ml)為臨床用藥量的667(80÷0.12)倍。
根據(jù)對龍血竭油劑或軟膠囊進(jìn)行的急性毒性試驗(yàn)和相關(guān)藥效學(xué)試驗(yàn)，并與血竭硬膠囊劑型對比，可以總結(jié)出龍血竭油劑和軟膠囊具有如下的藥理作用和主要的臨床應(yīng)用A、龍血竭油劑或軟膠囊具有抗血小板作用和抗栓作用龍血竭油劑或軟膠囊灌胃給藥明顯抑制ADP和PAF誘導(dǎo)的血小板聚集。對ADP，與等劑最的血竭硬膠囊相比，龍血竭油劑或軟膠囊的抗血小板作用明顯增強(qiáng)；對PAF，0.75和1.0g/kg的龍血竭油劑或軟膠囊的抗PAF作用在給藥后2-4h均明顯強(qiáng)于1.0g/kg的血竭硬膠囊；且含有不飽和脂肪酸的食用玉米油亦表現(xiàn)出明顯的抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集作用，提示龍血竭油劑或軟膠囊有比血竭硬膠囊更強(qiáng)的抗血小板作用可能與含有不飽和脂肪酸的食用玉米油作用相關(guān)。
電刺激火鼠頸動(dòng)脈所形的血栓與人體動(dòng)脈血栓相似。采用血流量儀替代點(diǎn)式溫度計(jì)來判斷OT，則排除了室溫的影響，其結(jié)果更精確可靠。龍血竭油劑或軟膠囊高、中劑量組均明顯延長頸動(dòng)脈閉塞時(shí)間，并且有明顯的量效關(guān)系，1.95g/kg的龍血竭油劑或軟膠囊延長血管閉塞時(shí)間較血竭硬膠囊更長，表明龍血竭軟膠囊有較強(qiáng)的防止血栓形成作用。在ADP致小鼠肺血栓模型中，高、中劑量的龍血竭油劑或軟膠囊能顯著降低小鼠因呼吸衰竭而死亡的的數(shù)量，而血竭硬膠囊或食用玉米油降低動(dòng)物死亡數(shù)與對照組比則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。綜合這兩項(xiàng)抗栓實(shí)驗(yàn)，提示與血竭硬膠囊相比，龍血竭軟膠囊的抗血小板和抗血栓作用明顯增強(qiáng)。其原因可能與龍血竭的超微粉碎技術(shù)以及植物油本身具有抑制血小板聚集、降低血粘度和延長凝血時(shí)間等有關(guān)，也可能與油劑或軟膠囊中龍血竭的超微粉碎技術(shù)有利于血竭的吸收從而提高其生物利用度有關(guān)。
該實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示，龍血竭軟膠囊利于防止血栓的形成和延展，具有明顯的活血化淤、通脈及增加腦血流量作用。
B、龍血竭油劑或軟膠囊具有縮短凝血時(shí)間和收斂止血的作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，龍血竭油劑或軟膠囊具有較硬膠囊更顯著的縮短小鼠尾尖出血時(shí)間和縮短凝血時(shí)間作用，表明龍血竭軟膠囊的收斂止血作用也優(yōu)于硬膠囊，該作用與其顯著縮短血漿KPTT有關(guān)。
綜上所述，龍血竭軟油劑和膠囊具有很好的抗血小板活性和較強(qiáng)的抗血栓作用，更有利于防止血栓的形成和延展，具有明顯的活血化淤、通脈作用。同時(shí)，還具有很好的止血、促凝作用。而且龍血竭軟油劑和膠囊的上述作用均明顯地優(yōu)于龍血竭硬膠囊。
更有利的是，由于龍血竭幾乎沒有毒性，因此在使用中可以不考慮毒性問題，本研究結(jié)果為龍血竭油劑和軟膠囊的開發(fā)利用，特別是臨床應(yīng)用提供了藥效學(xué)依據(jù)。
具體實(shí)施例方式
為了進(jìn)一步闡述本技術(shù)所涉產(chǎn)品和方法，給出了下述實(shí)施例。但是，這些實(shí)施例不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1制備如下具有組成的龍血竭油劑和軟膠囊

1、首先稱取龍血竭超細(xì)粉末微粉(1000目)100g，按比例與玉米油400g混合，攪拌均勻后即得到本發(fā)明的油劑。
2、將10g甘油與適量水混合均勻，按比例溶入大約65℃的20g明膠，攪拌均勻，真空脫氣后保溫靜置待用；3、用步驟1得到的龍血竭油劑用作內(nèi)容物，將其倒入藥液漏斗中，以步驟(2)的產(chǎn)品作為膠囊殼，用模具壓制出1000粒軟膠囊，洗滌干燥后得到成品。
由此實(shí)施例制得含龍血竭25％(wt)的油劑，和每粒膠囊含龍血竭100mg的軟膠囊。
實(shí)施例2按照與實(shí)施例1相同的方法，制備具有如下組成的龍血竭油劑和軟膠囊。

由此實(shí)施例制得含龍血竭43％(wt)的油劑，和每粒膠囊含龍血竭180mg的軟膠囊。
實(shí)施例3按照與實(shí)施例1相同的方法，制備具有如下組成的龍血竭油劑和軟膠囊。

由此實(shí)施例制得含龍血竭40％(wt)的油劑，和每粒膠囊含龍血竭200mg的軟膠囊。
以上已詳細(xì)描述了本發(fā)明的實(shí)施方案，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說很顯然可以做很多改進(jìn)和變化而不會背離本發(fā)明的基本精神。所有這些變化和改進(jìn)都在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種龍血竭的油劑，所述油劑含有龍血竭粉末和可食用油。
2.按照權(quán)利要求1的龍血竭油劑，其中所述龍血竭粉末為大約600-2000目的超細(xì)粉末。
3.按照權(quán)利要求2的龍血竭油劑，其中所述龍血竭粉末為大約800-1300目的超細(xì)粉末。
4.按照權(quán)利要求3的龍血竭油劑，其中所述龍血竭粉末為大約1000目的超細(xì)粉末
5.按照權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)的龍血竭油劑，所述油劑中龍血竭粉末和可食用油的重量比為1∶2.0-5.0。
6.按照權(quán)利要求5的龍血竭油劑，所述油劑中龍血竭粉末和可食用油的重量比為1∶2.0-4.0。
7.按照權(quán)利要求6的龍血竭油劑，其中龍血竭粉末和可食用油的重量比為1∶2.2-2.5。
8.按照權(quán)利要求1的龍血竭油劑，其中所述的可食用油選自玉米油、花生油、大豆油、葵花籽油、芝麻油、橄欖油或它們之中任意二種或多種的混合物。
9.一種龍血竭的軟膠囊，該膠囊由內(nèi)容物和膠囊殼兩部分組成，所述的內(nèi)容物為權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)的油劑；所述的膠囊殼由明膠10重量份、甘油3-6重量份和適量水，優(yōu)選由明膠10重量份、甘油4-5份和適量水，更優(yōu)選由明膠10重量份、甘油4.8份和適量水制成。
10.權(quán)利要求9的龍血竭軟膠囊的制備方法，該方法包括以下步驟(1)稱取一定粒度的龍血竭超細(xì)粉末微粉，按比例與可食用油混合，攪拌均勻，得到龍血竭粉末的油劑，室溫放置待用；(2)將甘油與適量水混合均勻，按比例溶入大約60-80℃的明膠，攪拌均勻，真空脫氣后，制成膠囊殼的原料，保溫靜置待用；(3)將步驟(1)配好的內(nèi)容物倒入藥液漏斗中，以步驟(2)的產(chǎn)品作為膠囊殼原料，用模具壓出軟膠囊。
全文摘要
本發(fā)明公開了含有龍血竭的油劑和軟膠囊。所述油劑包括龍血竭超細(xì)粉末和可食用油，其中龍血竭粉末和可食用油的重量比為1∶2.0－5.0，優(yōu)選1∶2.0－4.0，更優(yōu)選1∶2.2－2.5，優(yōu)選實(shí)例為1∶2.23。本發(fā)明的軟膠囊由內(nèi)容物和膠囊殼兩部分組成。所述的內(nèi)容物為本發(fā)明所述的油劑；所述的膠囊殼由明膠、甘油和適量水組成。本發(fā)明還公開了龍血竭油劑和軟膠囊的制備方法。本發(fā)明的龍血竭油劑和軟膠囊可作為藥品或功能性食品，用于治療和/或預(yù)防血栓形成，防止血栓的形成和延展，具有明顯的活血化淤、通脈及增加腦血流量作用。與已知的龍血竭藥品相比，本發(fā)明的龍血竭油劑和軟膠囊提高了龍血竭的生物利用度，減少了藥品的服用量。
文檔編號A61P9/10GK1781531SQ20041000991
公開日2006年6月7日 申請日期2004年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月1日
發(fā)明者楊崇仁, 張穎君, 李海舟 申請人:昆明駿興科技開發(fā)有限公司