專利名稱：用于保持婦女健康的植物雌激素和益生菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的組合物，該組合物可以片劑、膠囊或臨時(shí)配制成混懸液的粉末形式口服給藥，其用于增進(jìn)骨胳的生理機(jī)能以及更年期和絕經(jīng)婦女的健康。
背景技術(shù)：
由于卵巢激素分泌不足而導(dǎo)致的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松是婦女骨質(zhì)流失最常見的原因。這種紊亂通過(guò)施用外源雌激素，即，通過(guò)適當(dāng)?shù)募に靥娲煼?HRT)而得到預(yù)防。用于這種目的的合成雌激素類激素藥效強(qiáng)并且，如果不正確使用的話，可能導(dǎo)致副作用，特別是長(zhǎng)期給藥時(shí)。
亞洲國(guó)家的由骨質(zhì)疏松所致的骨折發(fā)生率要低于西方國(guó)家。這種差異是由于在亞洲國(guó)家大豆食品被廣泛食用[1]以及特別是由于大豆中存在的某些異黃酮的作用。事實(shí)上，大豆異黃酮(SIs)對(duì)絕經(jīng)后婦女的骨胳具有營(yíng)養(yǎng)作用的功效在若干臨床研究中已被證明[2，3，4，5]而且在對(duì)卵巢切除的大鼠的研究中得到證實(shí)[6]。
大豆主要含有兩種異黃酮，即染料木苷和黃豆苷。染料木苷(MW 432.22)是染料木苷原(MW 270.24)的β-葡糖苷。黃豆苷(MW 416.23)是黃豆苷原(daidzin)(MW 254.24)的β-葡糖苷。染料木苷和黃豆苷是相對(duì)較大的分子；它們水溶性好，極性大。這些性質(zhì)妨礙了它們的胃腸道吸收以及雌激素部分的生物利用度。
為了可被吸收和變得可生物利用，SIs必須被水解成糖苷配基，也就是與葡糖苷組分分離[7]。這可通過(guò)特殊酶即糖苷酶的作用完成。然而，人類以及許多哺乳動(dòng)物的胃腸道并不分泌糖苷酶，因此異黃酮并不能被水解進(jìn)而變得生物可利用。相反，腸道菌群的某些微生物，特別是某些乳酸菌，可產(chǎn)生上述水解反應(yīng)所必需的糖苷酶，該糖苷酶對(duì)SIs的吸收是必需的[8，9]。因此胃腸道中產(chǎn)生糖苷酶的細(xì)菌的存在是SIs吸收以及發(fā)揮功效的先決條件。
腸道菌群在個(gè)體之間的變化很大，甚至在相同的受試者體內(nèi)，腸道菌群的功能也隨著食物、氣候、藥物治療、疾病，等等的不同而改變。因而，在很多受試者中，通過(guò)腸道菌群產(chǎn)生的糖苷酶可能很少或者甚至沒(méi)有，從而危及SIs的吸收。
本發(fā)明的目的是提供可口服給藥的，特別是作為食品添加劑的組合物，用于減輕、消除、和/或預(yù)防困擾絕經(jīng)前、絕經(jīng)期以及絕經(jīng)后婦女的更年期以及絕經(jīng)后機(jī)能紊亂，包括骨的新陳代謝紊亂，其可導(dǎo)致增加骨折風(fēng)險(xiǎn)的骨質(zhì)流失以及骨組織改變。
本發(fā)明概述本發(fā)明提供用于緩解和預(yù)防更年期以及絕經(jīng)后機(jī)能紊亂的組合物，其包含有效量的大豆異黃酮和活性乳酸菌，該組合物以適用于口服的劑量形式提供。
本發(fā)明的組合物包括具有雌激素活性的大豆異黃酮和可在腸道內(nèi)產(chǎn)生糖苷酶的乳酸菌，其目的是將攝取的異黃酮葡糖苷裂解成可被吸收的糖苷配基并確保所服用的SIs在所有個(gè)體內(nèi)的生物利用度。
本發(fā)明還提供該組合物用于制備藥物或食品添加劑的用途，通過(guò)在需要的個(gè)體中口服有效量的上述組合物，用于消除和預(yù)防更年期以及絕經(jīng)期機(jī)能紊亂。
原則上，任意類型的乳酸菌都適合于本發(fā)明的組合物。事實(shí)上，乳酸菌是具有諸多益處的益生菌，原因在于●乳酸菌可產(chǎn)生乳酸，其可酸化腸道內(nèi)容物，為諸多致病微生物(大腸桿菌，念珠菌等)的生長(zhǎng)創(chuàng)造了不利的條件，而且，相反地，為鈣、鐵、磷以及其他營(yíng)養(yǎng)素的吸收創(chuàng)造了有利的條件。
●通過(guò)這些機(jī)理，以及通過(guò)由于乳酸的產(chǎn)生而導(dǎo)致的pH降低，乳酸菌改善并均衡了腸道菌群。這是非常有用的，特別是在由于不正確的飲食、藥物(特別是抗生素)、氣候應(yīng)激反應(yīng)、消化紊亂或營(yíng)養(yǎng)缺乏而導(dǎo)致的腸道菌群不足或失衡時(shí)。事實(shí)上，由于腐敗菌群比發(fā)酵菌群占優(yōu)勢(shì)而產(chǎn)生毒素，這些情況可導(dǎo)致腹瀉、便秘、氣脹、消化不良、衰弱及不適。
●乳酸菌產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶，其完成蛋白質(zhì)和脂肪的消化并且還削減腸道菌群微生物的這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，它們會(huì)產(chǎn)生有毒物質(zhì)，例如在厭氧的腐敗過(guò)程所產(chǎn)生的物質(zhì)。
●乳酸菌可產(chǎn)生維生素K，其是血液凝固所必需的因子；而且可產(chǎn)生B族的幾種維生素，其對(duì)維持活躍的新陳代謝是必需的。
●還因?yàn)槿樗峋僧a(chǎn)生特殊的抗菌物質(zhì)細(xì)菌素，其可阻止“有害”菌群的生長(zhǎng)。因此它們可消除腸道的不良微生物作用。
●另外，乳酸菌在腸壁上生長(zhǎng)和繁殖，從而形成抵御致病微生物的一層屏障，這些致病微生物是例如白色念珠菌、沙門氏菌族、埃希氏桿菌族、葡萄球菌、梭狀芽孢桿菌，等等，其可產(chǎn)生毒素而且可致腸道感染。
●最后，乳酸菌可激活胃腸道的免疫防御，其有助于使我們的機(jī)體抵御感染以及毒物過(guò)敏。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，特別優(yōu)選乳酸桿菌孢子(凝固芽孢桿菌)，下文縮寫為L(zhǎng)s，任選地與其他乳酸菌結(jié)合，因?yàn)長(zhǎng)s的孢子在一般環(huán)境條件下是穩(wěn)定的，并不需要在冰箱中保存而且可在能殺滅大部分其他乳酸菌的胃和膽的分泌物中保持活性。
特別要指出的是，Ls通過(guò)同型發(fā)酵反應(yīng)產(chǎn)生L-乳酸。L-乳酸，也就是進(jìn)入我們的代謝途徑中的乳酸的異構(gòu)體，因其不引起全身酸中毒而為世界衛(wèi)生組織所推薦。
為了生產(chǎn)乳酸，Ls利用未消化的糖的碎片，削減腸菌群中有害種類的這些底物，因而抑制了它們的生長(zhǎng)而且還有助于保持身體健康。
因?yàn)樯鲜龅倪@些原因，乳酸菌，特別是Ls，是非常有益的益生素，它們除了可提高SIs的生物利用度之外，還對(duì)保持身體健康提供諸多益處。
骨骼的進(jìn)一步強(qiáng)化可通過(guò)加入其他對(duì)骨骼和關(guān)節(jié)有益的物質(zhì)來(lái)實(shí)現(xiàn)。其中之一就是木賊(問(wèn)荊)，其可提供單硅酸的有機(jī)鹽，其為硅的可溶性本體，在胃腸道容易吸收而且因此易被生物利用。硅，與磷、氟化物、鎂、以及硼一起，與羥基磷灰石晶體在膠原原纖維上的沉積過(guò)程(也就是骨礦物質(zhì)成分累積在器官結(jié)構(gòu)上)有關(guān)系，木賊還含有木賊寧，其為具有溫和的利尿作用的物質(zhì)，可用于調(diào)整水潴留，這種情況在絕經(jīng)期經(jīng)常發(fā)生并導(dǎo)致下肢腫脹以及體重增加。另外還應(yīng)當(dāng)補(bǔ)充鈣(與維生素D一起使用以促進(jìn)鈣的吸收和在骨骼上沉積)，因?yàn)榻^經(jīng)時(shí)對(duì)鈣的需求總是增長(zhǎng)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)部分的目的是調(diào)查不同成份在預(yù)防切除卵巢的大鼠的骨質(zhì)流失中的作用，切除卵巢的大鼠是廣泛應(yīng)用的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型[6]。
簡(jiǎn)要地說(shuō)，就是在以3ml/kg體重的量進(jìn)行equitesin(equitesin是戊巴比妥、乙醇、水合氯醛、丙二醇、硫酸鎂水溶液的混合物)腹膜麻醉的情況下，切除95天齡的Sprague-Dawley大鼠的卵巢。每8只大鼠一組，共分為4組。第5組的8只大鼠進(jìn)行假手術(shù)并且作為未切除卵巢的對(duì)照組。大鼠可自由飲水并且隨意喂食針對(duì)嚙齒類動(dòng)物的添加碳酸鈣(0.1g/kg食物)和維生素D3(1μg/kg食物)的Harlan食品。SIs和Ls混懸于0.5％的羥丙基甲基纖維素水溶液(下文稱為載體)中，然后每天以10ml/kg體重的劑量用胃管給藥。
各組進(jìn)行如下處理。
組1.假手術(shù)，未切除卵巢的對(duì)照組載體組2.切除卵巢的對(duì)照組載體組3.切除卵巢的SIs處理組染料木苷0.5mg/kg體重+黃豆苷0.5mg/kg體重組4.切除卵巢的SIs+Ls處理組染料木苷0.5mg/kg體重+黃豆苷0.5mg/kg體重+8百萬(wàn)/每千克體重的Ls孢子組5.切除卵巢的SIs+Ls+木賊處理組染料木苷0.5mg/kg體重+黃豆苷0.5mg/kg體重+8百萬(wàn)/每千克體重的Ls孢子+1.5mg/kg體重的木賊莖干干燥提取物(以含有7％硅為標(biāo)準(zhǔn))劑量以對(duì)人類使用的通常建議用量為基礎(chǔ)，根據(jù)研究中所用的大鼠體重進(jìn)行調(diào)整。
大豆異黃酮通常的日劑量為20-80mg，優(yōu)選40-60mg。
乳酸桿菌孢子通常的日劑量為0.75億-15億個(gè)孢子，優(yōu)選2.5-10億個(gè)。
木賊通常的日劑量為相當(dāng)于3-10mg二氧化硅。
鈣成年婦女推薦的每日膳食供給量(RDDA)為800mg。對(duì)于本發(fā)明來(lái)說(shuō)，優(yōu)選100mg至300mg的日劑量，將其作為在日常飲食中所包含的鈣的補(bǔ)充。
維生素D3成年婦女的RDDA為5μg。對(duì)于本發(fā)明的組合物來(lái)說(shuō)，優(yōu)選3-5μg的日劑量。
卵巢切除后六周，大鼠乙醚麻醉后用頸脫位法處死。取出子宮迅速稱量，將股骨從軟組織取出，并用卡尺測(cè)量其長(zhǎng)度，應(yīng)用阿基米德原理測(cè)量體積和密度，然后在640℃下灰化24h。每一個(gè)灰分樣品稱重然后溶于6N的HCl中。在最終的溶液中通過(guò)原子吸收光譜法測(cè)量鈣，通過(guò)比色分析測(cè)量磷。
計(jì)算不同結(jié)果的平均和標(biāo)準(zhǔn)誤差，進(jìn)而通過(guò)t-檢驗(yàn)估計(jì)各個(gè)數(shù)值間的顯著性差異。
本研究最后得到的結(jié)果見表1而且可以總結(jié)如下。
1.相對(duì)于假手術(shù)動(dòng)物組(組1)，任何卵巢切除動(dòng)物組在切除卵巢后六周的體重沒(méi)有任何顯著性變化。
2.相反地，在卵巢切除對(duì)照組(組2)，子宮重量有非常顯著的下降而且股骨在長(zhǎng)度、密度、灰分重量、鈣和磷的含量方面下降很明顯，從而顯示雌激素缺乏對(duì)骨的營(yíng)養(yǎng)有負(fù)面影響。
3.給予SIs(組3)對(duì)體重和子宮的影響(相對(duì)于組2)不顯著(對(duì)α雌激素受體無(wú)刺激作用)，但是可顯著增加股骨長(zhǎng)度以及骨骼中的磷，從而顯示對(duì)骨的營(yíng)養(yǎng)有適當(dāng)?shù)姆e極作用。
4.添加Ls至SIs中(組4)顯著地和令人驚訝地改善了骨的營(yíng)養(yǎng)狀況，如通過(guò)所有骨營(yíng)養(yǎng)狀況的標(biāo)志(股骨長(zhǎng)度、密度、灰分重量、鈣和磷的含量)的顯著增加所示，從而支持了SIs-Ls的組合的理論，即通過(guò)SIs-Ls的組合提高了SIs的生物利用度進(jìn)而增進(jìn)SIs對(duì)骨胳的正面作用。
5.額外添加的木賊提取物(組5)使得所有骨營(yíng)養(yǎng)狀況標(biāo)志(股骨長(zhǎng)度、密度、灰分重量、鈣和磷的含量)有了出乎意料的進(jìn)一步提高，從而證實(shí)了這種天然草本植物產(chǎn)品對(duì)骨合成代謝的作用。
總之，由于Ls的益生性能所致的SIs的生物利用度以及腸內(nèi)鈣和磷吸收的提高，Ls顯著強(qiáng)化了SIs對(duì)骨合成代謝的作用。木賊提取物的添加則對(duì)骨合成代謝有進(jìn)一步的促進(jìn)作用。值得注意的是，無(wú)論是SIs還是SIs+Ls均對(duì)子宮的重量沒(méi)有明顯影響，從而表明其對(duì)d雌激素受體沒(méi)有刺激作用。這與雌激素類激素所產(chǎn)生的作用形成了鮮明的對(duì)比，由于雌激素類激素對(duì)d雌激素受體的刺激，因而其在促進(jìn)骨營(yíng)養(yǎng)的同時(shí)可能在一些患者中產(chǎn)生有害作用，特別是長(zhǎng)期使用的情況下更是如此。
因此，本研究支持了這一理論，即SIs+Ls的組合是防止大鼠骨質(zhì)流失的天然的和耐受良好的治療劑，其中大鼠的骨質(zhì)流失是由于卵巢切除所致的雌激素類激素缺乏所引起的，這一情況也存在于絕經(jīng)后的婦女當(dāng)中。添加木賊提取物可增強(qiáng)SIs+Ls組合防止骨質(zhì)流失的作用。
表1.6周治療后不同組的結(jié)果。平均值以及標(biāo)準(zhǔn)誤差體重和子宮數(shù)據(jù)的數(shù)量＝8；股骨數(shù)據(jù)數(shù)量＝16還記錄了相對(duì)于組2的卵巢切除對(duì)照組的變化百分?jǐn)?shù)數(shù)據(jù)。顯著性差異(Pt＜0.05)以斜體表示。

aPtNS vs.組1bPtNS vs.組2cPt＜0.001 vs.組1dPt＜0.05 vs.組1ePt＜0.001 vs.組2fPt＝0.05 vs.組2gPt＜0.05 vs.組2本發(fā)明詳述下列實(shí)施例描述了本發(fā)明可能的實(shí)際應(yīng)用但并未將本發(fā)明的范圍限定于這些實(shí)施例實(shí)施例1用于口服的片劑下列處方考慮了本發(fā)明條件下可用來(lái)配制口服片制的活性成份以及賦形劑(和它們的技術(shù)功能)。
一片中包含一個(gè)日劑量。根據(jù)本領(lǐng)域通常的技術(shù)常識(shí)制備片劑，不需要任何特別或特殊的步驟?？傊铝兄苽洳襟E是必需的●稱出單個(gè)組分；●通過(guò)在合適的干燥粉末混合器中混合處方組份制備壓片混合物；●在合適的自動(dòng)壓片機(jī)中壓制所得的混合物，得到具有所需形狀和大小的片。
所需的組份列于下表。

(*)含有36％m/m鈣(**)還被用作賦形劑

實(shí)施例2用于口服的膠囊下列處方考慮了本發(fā)明條件下可用來(lái)制備口服膠囊的活性成份以及賦形劑(和它們的技術(shù)功能)。
兩只膠囊含有一個(gè)日劑量。根據(jù)本領(lǐng)域通常的技術(shù)常識(shí)制備膠囊，不需要任何特別或特殊的步驟?？傊铝兄苽洳襟E是必需的●稱出單個(gè)組分；●在適合于進(jìn)行干燥混合操作的混合器中制備用于填充膠囊的混合物；●選用合適尺寸和預(yù)期顏色的硬明膠膠囊，在自動(dòng)封囊機(jī)中進(jìn)行膠囊填充。
所需的組份列于下表。

(*)含有36％m/m鈣

實(shí)施例3包含粉末的藥囊(該粉末可臨時(shí)配制成口服混懸液)下列處方考慮了本發(fā)明條件下可用來(lái)配制適合制成口服混懸液的粉末的活性成份以及賦形劑(和它們的技術(shù)功能)。
一份粉末包含一個(gè)日劑量。這份粉末包含在藥囊中，該藥囊是由外部紙層、鋁中間層、以及內(nèi)部聚乙烯層組成。根據(jù)本領(lǐng)域通常的技術(shù)常識(shí)來(lái)制備藥囊，不需要任何特別或特殊的步驟?？傊铝兄苽洳襟E是必需的●稱出單個(gè)組分；●在適合于進(jìn)行干燥混合操作的混合器中勻化混合組份；●在合適的自動(dòng)生產(chǎn)線上熱壓成形制備藥囊，該自動(dòng)生產(chǎn)線其中還包括填充和封閉裝置；●在上述的自動(dòng)生產(chǎn)線上填充并封閉藥囊，得到所期望的大小和形狀的藥囊，該藥囊含有可供臨時(shí)應(yīng)用的單劑量粉末。
所需的組份列于下表。

(*)含有36％m/m鈣

(*)增甜劑以及調(diào)味劑可隨意添加，根據(jù)喜好而變。
參考文獻(xiàn)[1]Ho SC.Body measurements，bone mass and frac tures-does the East differfrom the West？Clin Orthp Rel Res 1996；32375-80[2]Alekel DL，Germain AS，Peterson CT，Hanson K B，Stewart JW，Toda T.Isoflavone-rich soy protein isolate attenuates bone loss in the lumbar spine ofperimenopausal women.Am J Clin Nutr 2000；72844-852[3]Mei J，Yeung SS，Kung AW，High dietary phytoo estrogen intake isassociated with higher bome mineral density in postmenopausal but not pre-menopausal women.J Clin Endocrinol Metab 2001；865217-5221[4]Potter SM，Baum JA，Teng H，Stillman RJ，Shay NF，Erdman JW Jr，Soyprotein and isoflavonestheir effects on blood lipids and bone density inpostmenopausal women.Am J Clin Nutr 1998；68(suppl)1377S-1379S[5]Scheiber MD，Liu JH，Subbiah MT，Rebar RW，Secchell KD.Dietaryinclusion of whole soy foods results in significant reductions in clinical risk ractors forosterporosis and cardiovascilar disease in normal postmenopausal wanen.Menopause2001；8384-392[6]Draper CR，Edel MJ，Dick IM，Randall AG，Mar tin GB，Prince RL.Phytooertogens reduce bone loss and bone resorption in ophorectomised rarts.J Nutr1997；1271795-1799[7]Izumi T，Pistula MK，Osawa S，Obata A，Tobe K，Saito M，Kataoka S，Kubota Y，Kikuchi M.Soy Isoflavones Aglycones are adsorbed faster and in higheramounts than their glucosides in humans.J Nutr 2000；1301695-1699[8]Boriello SP，Setchell KDR，Axelson M，Lawson A M.Production andmetabolism of lignans by the human faecal flora.JAppl Bacteriol 1985；5837-43[9]Setchell KDR，Boriello SP，Hulme P，Kirk DN，Axelson M.Non-steroidalestrogens of dietary originpossible roles in hormone-dependent diseases.Am J ClinNutr 1984；40569-578.
權(quán)利要求
1.用于緩解和/或預(yù)防困擾絕經(jīng)前、絕經(jīng)期以及絕經(jīng)后婦女的更年期以及絕經(jīng)期機(jī)能紊亂的組合物，其特征在于該組合物含有大豆異黃酮和可促進(jìn)大豆異黃酮吸收的活性乳酸菌，該組合物以口服給藥的劑量形式提供。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述的乳酸菌包含乳酸桿菌孢子(凝固芽孢桿菌)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的組合物，其中還含有問(wèn)荊干燥提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一的組合物，其中所說(shuō)的劑量形式適合于大豆異黃酮以20-80mg，優(yōu)選40-60mg的日劑量給藥。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一的組合物，其中所說(shuō)的劑量形式適合于所說(shuō)的乳酸菌以0.75億-15億個(gè)孢子，優(yōu)選2.5-10億個(gè)孢子的日劑量給藥。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的組合物，其中所說(shuō)的劑量形式適合于問(wèn)荊干燥提取物以3.0-10.0mg并且優(yōu)選5-7mg的日劑量給藥，該劑量以所述干燥提取物中含有的二氧化硅來(lái)表達(dá)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一的組合物，其中還包含藥學(xué)上可接受的鈣鹽和/或維生素D3。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一的組合物，其中所述的劑量形式選自片、膠囊或包含可臨時(shí)配制成混懸液的粉末的藥囊。
9.權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)的組合物用于制備藥物或食品添加劑的用途，該藥物或食品添加劑可口服用于治療困擾絕經(jīng)前、絕經(jīng)期以及絕經(jīng)后婦女的更年期以及絕經(jīng)期機(jī)能紊亂。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其用于預(yù)防與絕經(jīng)或其他形式的卵巢機(jī)能不全有關(guān)的骨流失。
全文摘要
用于緩解和/或預(yù)防困擾絕經(jīng)前、絕經(jīng)期以及絕經(jīng)后婦女的更年期以及絕經(jīng)期機(jī)能紊亂的組合物，其含有大豆異黃酮和可促進(jìn)大豆異黃酮吸收的活性乳酸菌并優(yōu)選含有乳酸桿菌孢子。組合物以適合于口服的劑量形式提供。優(yōu)選該組合物還包含問(wèn)荊干燥提取物和藥學(xué)上可接受的鈣鹽和/或維生素D
文檔編號(hào)A61P19/00GK1781497SQ20041001043
公開日2006年6月7日 申請(qǐng)日期2004年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月29日
發(fā)明者P·塞寧, I·塞特尼卡, L·A·羅瓦蒂 申請(qǐng)人:羅塔藥品股份有限公司