專利名稱：丹參總酚酸的提取方法及其在藥學(xué)上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥的提取工藝及其在藥學(xué)上的應(yīng)用，特別是涉及丹參總酚酸類成分的提取純化工藝及其在藥學(xué)上的應(yīng)用，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前，無(wú)論市場(chǎng)上銷售的丹參注射液、復(fù)方丹參注射液還是其它一些有關(guān)丹參類中藥品種，其提取方法多以水提醇沉法(水煎煮二次；煎煮液濃縮至清膏狀，乙醇沉淀，其含醇量達(dá)80％，回收乙醇并濃縮至清膏狀，再次乙醇沉淀，含醇量達(dá)80％，回收乙醇并濃縮至清膏狀，加水溶解，過(guò)濾，即得)。其優(yōu)點(diǎn)為提取工藝簡(jiǎn)便；成本低。
其缺點(diǎn)在于丹參總酚酸為水溶性成分，易溶于水和低濃度乙醇。因此反復(fù)用高濃度乙醇沉淀，丹參總酚酸類成分隨之被沉淀而導(dǎo)致含量及藥效下降，從而使生產(chǎn)質(zhì)量不穩(wěn)定。
本發(fā)明在于提取工藝經(jīng)過(guò)改進(jìn)以后，丹參總酚酸的含量由傳統(tǒng)工藝的大約1.7748mg/g生藥增加到大約7.88mg/g生藥，增加了4.44倍，質(zhì)量穩(wěn)定、可控。一系列藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，改進(jìn)后提取的丹參總酚酸類成分有明顯的藥理作用，為進(jìn)一步開發(fā)新產(chǎn)品提供了更好的理論依據(jù)和提取工藝的生產(chǎn)路線。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提高丹參總酚酸在提取物中的含量，同時(shí)本發(fā)明的另一目的是提供丹參總酚酸在藥學(xué)上的應(yīng)用。
本發(fā)明的丹參總酚酸的提取是采取以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種丹參總酚酸的提取方法，其特征如下(1)煎煮加水煎煮1-4次，每次1-4小時(shí)，每次加水8-14倍量；(2)濃縮合并煎煮液，濃縮至每1ml相當(dāng)于含生藥0.5-3g；(3)堿處理濃縮液加堿調(diào)節(jié)pH至7.0-14.0；(4)醇沉調(diào)整藥液濃度至每1ml相當(dāng)于含生藥0.5-3g，加乙醇沉淀使含醇量達(dá)20-70％，冷藏24-48小時(shí)；(5)回收醇液將醇液過(guò)濾，減壓回收至不含乙醇；(6)酸處理用酸調(diào)節(jié)pH至1.0-5.0；(7)萃取用等量醋酸乙酯萃取3-6次；(8)回收醋酸乙酯合并酯萃取液，減壓回收醋酸乙酯得浸膏；(9)水處理浸膏加水溶解，過(guò)濾，濃縮；(10)干燥將上述濃縮液干燥，得丹參總酚酸本發(fā)明一種丹參總酚酸的提取方法還可以采取以下的技術(shù)方案來(lái)進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)前述的一種丹參總酚酸的提取方法，其特征在于其中步驟(3)所述的堿為氫氧化鈉溶液；酸為鹽酸。
前述的一種丹參總酚酸的提取方法，其特征在于其中步驟(4)所述的醇為乙醇。
前述的一種丹參總酚酸的提取方法，其特征在于其中步驟(8)所述的酯為醋酸乙酯。
前述的一種丹參總酚酸的提取方法，其特征在于還可以采取以下步驟(1)煎煮加水煎煮2-3次，每次2-3小時(shí)，每次加水量10-12倍量；(2)濃縮合并煎煮液，濃縮至每1ml相當(dāng)于含生藥1-2g；(3)堿處理濃縮藥液加NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10-12，(4)醇沉調(diào)整藥液濃度至每1ml相當(dāng)于含生藥1-2g，加乙醇沉淀使含醇量達(dá)40-60％，冷藏24-30小時(shí)；(5)回收醇液將醇沉液過(guò)濾，減壓回收至不含乙醇；(6)酸處理再用HCl調(diào)節(jié)pH至1-4；(7)萃取用等量醋酸乙酯萃取4-5次；(8)回收酯合并醋酸乙酯萃取液，減壓回收醋酸乙酯；(9)水處理浸膏加水溶解，過(guò)濾，濃縮；(10)干燥將上述浸膏減壓干燥或噴霧干燥，得丹參總酚酸。
一種丹參總酚酸，其特征在于丹參總酚酸在制備治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述的一種丹參總酚酸的提取方法及其應(yīng)用其優(yōu)點(diǎn)在于(1)丹參總酚酸成分傳統(tǒng)的提取方法為水提醇沉法取丹參藥材加水煎煮二次；每次1.5小時(shí)，合并煎煮液并濃縮至清膏狀，乙醇沉淀，含醇量達(dá)80％，靜置，上清液回收乙醇并濃縮至清膏狀，再次乙醇沉淀，含醇量達(dá)80％，靜置，上清液回收乙醇并濃縮至清膏狀，加蒸餾水溶解，過(guò)濾即得。
(2)改進(jìn)后丹參總酚酸成分的提取方法為水提乙酸乙酯萃取法丹參加水煎煮，過(guò)濾，合并煎煮液，濃縮，堿處理，乙醇沉淀，過(guò)濾，回收乙醇用酸處理，用醋酸乙酯萃取，回收醋酸乙酯，水處理，過(guò)濾，干燥得丹參總酚酸。
改進(jìn)后的方法與傳統(tǒng)方法相比提取物中丹參素和原兒茶醛的含量分別提高了4.28和6.33倍，有效成分百分含量提高了3.49倍(詳表1)。
表1 萃取法與二次醇沉法丹參總酚酸含量比較提取方法丹參素mg/g 原兒茶醛mg/g 總提物mg/g 有效成分百分比萃取法 7.1287 0.763118.134 43.52二次醇沉法 1.6645 0.120414.31 12.47(3)本提取物與類似藥物在功效上有以下不同點(diǎn)①犬心肌缺血試驗(yàn)研究主要藥效學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)證丹參總酚酸與臨床功能主治有關(guān)的作用，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)(見實(shí)例2表2-1-表2-8)。
②犬心臟血流動(dòng)力試驗(yàn)研究觀察丹參總酚酸靜脈滴注給藥后對(duì)麻醉犬心臟血流動(dòng)力學(xué)的作用(見實(shí)例3表3-1~表3-5)。
③家兔血液流變性試驗(yàn)研究觀察丹參總酚酸對(duì)家兔血瘀模型血液流變性的影響(見實(shí)例4表4-1~表4-2)。


附圖1是本發(fā)明丹參總酚酸的提取方法流程簡(jiǎn)圖。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的提取方法以及從藥效學(xué)試驗(yàn)來(lái)說(shuō)明本發(fā)明藥物的有益效果。
取中藥材加水煎煮3次，合并煎煮液，濃縮，加堿調(diào)節(jié)pH，加乙醇沉淀，靜置過(guò)濾，回收乙醇，用HCl調(diào)節(jié)pH，用等量醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯萃取液，減壓回收醋酸乙酯，浸膏加少量注射用水溶解，過(guò)濾，干燥得丹參總酚酸。取丹參總酚酸，加注射用水溶解配成注射劑、或配制成大輸液、或粉針。本工藝制得的丹參總酚酸中含丹參素和原兒茶醛占36％-40％，而傳統(tǒng)工藝只占11％-13％。數(shù)據(jù)列于表1-1。
表1-1 丹參提取物中有效成分百分比批號(hào) 981231990128990305上海 廣東丹參素含量mg/g6.68867.12777.25523.14831.6545原兒茶醛含量mg/g 0.68390.75310.62870.44120.1203提取物mg/g18.13621.54720.66432.60 14.33有效成分百分比(％)40.65 36.57 38.15 11.01 12.39以下為藥效學(xué)試驗(yàn)[試驗(yàn)例2]犬心肌缺血試驗(yàn)研究報(bào)告實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)主要藥效學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)證丹參總酚酸與臨床功能主治有關(guān)的作用，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1實(shí)驗(yàn)材料1.1藥品與試劑丹參總酚酸為深褐色液體，規(guī)格為250ml/瓶，靜脈滴注，生藥含量為2g/ml，成人日用量為16g/60kg，批號(hào)990112。臨用前用5％的葡萄糖注射液配成所需濃度。葛根素注射液，康恩貝集團(tuán)制藥有限公司制造，批號(hào)981204。
Creatine phosphate kinase(CPK試劑盒)，POINTE BIOTECH(SHANGHAI)CO.LTD.，LOT83101，EXP500。
Lactic dehydrogenase(LDH試劑盒)，POINTE BIOTECH(SHANGHAI)CO.LTD.，LOT83101.EXP500。
Malon-dialdehyde(MDA試劑盒)，南京建成生物工程研究所，批號(hào)990104。
Superoxide dismutase(SOD試劑盒)，南京建成生物工程研究所，批號(hào)980410。
氯化硝基四氮唑蘭(NBT)，中國(guó)上海前進(jìn)試劑廠，批號(hào)971201。
1.2動(dòng)物家犬30只，由南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心收購(gòu)自市郊的雜種家犬，試驗(yàn)前在該動(dòng)物中心飼養(yǎng)，經(jīng)檢疫及驅(qū)蟲，兩周后用于該項(xiàng)試驗(yàn)。體重7.5～10.0kg。雌雄兼用。
1.3儀器RM-6000八道生理記錄儀及其附件，日本NIHON KOHDEN公司DH140人工呼吸器，浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器實(shí)驗(yàn)廠722型分光光度計(jì)，上海分析儀器廠2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果丹參總酚酸對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞的影響[1、2、3]取家犬30只，♀♂不拘，體重7.5～10kg。隨機(jī)均分為六組。(1)偽手術(shù)組生理鹽水10ml/kg；(2)模型組生理鹽水10ml/kg；(3)葛根素組葛根素注射液20mg/kg；(4)丹參總酚酸低劑量組0.8g/kg；(5)丹參總酚酸中劑量組1.6g/kg；(6)丹參總酚酸大劑量組2.4g/kg。由前肢隱小靜脈用3％戊巴比妥鈉1ml/kg麻醉后，固定于手術(shù)臺(tái)上。于左側(cè)第四、五肋間開胸，暴露心臟，并接人工呼吸機(jī)。分離右側(cè)股動(dòng)脈、股靜脈，股動(dòng)脈插管測(cè)量動(dòng)脈壓(BP)和心率(HR)，股靜脈插管以備靜脈滴注藥物。打開心包膜，縫于胸壁，做成荷包搖籃。用0號(hào)絲線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支上中1/3處，偽手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。選擇梗塞區(qū)附近位置10個(gè)標(biāo)測(cè)點(diǎn)縫置心外膜電圖電極，并在遠(yuǎn)離梗塞區(qū)選一對(duì)照點(diǎn)，用八道生理記錄儀胸導(dǎo)聯(lián)標(biāo)測(cè)心外膜電圖(EECG)。結(jié)扎15min后給藥。記錄缺血前、缺血15min和給藥后15、30、60、120、180min的EECG、血壓(SAP、DAP、MAP)、心率(HR)。統(tǒng)計(jì)各標(biāo)測(cè)點(diǎn)EECG的ST段偏移∑-ST，以及ST段抬高≥2mv以上的N-ST。各組給藥180min后，股靜脈取血，測(cè)定血清CPK、LDH、MDA、SOD值。取血后立即取出心臟，用生理鹽水洗去血液后，稱取心室重量，并把心室橫切成5片，置于37℃0.25％NBT溶液中染色15min，剪去各心肌片被染色的非梗塞區(qū)，把未染色的梗塞區(qū)心肌稱重，除以全心重或心室重分別得到梗塞范圍占全心重或占心室重的％。
結(jié)果見表2-1-表2-8。
表2-1 對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞∑-ST的影響(x±S)組別劑量缺血前 缺血 給藥后(min)G/kg15min 1530 60 120 180偽手術(shù)組- 7.0211.18 10.80 12.30 10.34 11.22 11.26±1.33 ±3.2 ±1.79±2.02 ±2.39 ±2.45±0.91模型組 - 7.2032.22## 31.16## 30.14##28.62##26.44## 23.92##±1.10 ±4.24±3.36±4.09 ±4.11 ±4.15±3.12葛根素組0.026.6829.64## 24.76*## 24.72*## 22.64*## 23.02## 19.22*##±1.00 ±1.18±3.10±1.64 ±2.00 ±2.18±2.0丹參總酚酸 0.8 7.4429.40## 26.34*## 27.10##24.38##22.66## 22.3##低劑量組±0.66 ±3.19±1.63±3.13 ±2.59 ±2.97±3.80丹參總酚酸 1.6 7.1427.96## 25.52*## 23.48*## 22.76*## 22.14## 20.84##中劑量組±1.49 ±5.35±1.78±2.47 ±1.79 ±2.24±1.36丹參總酚酸 2.4 6.5829.16## 24.58*## 21.50**## 21.08**## 21.66*## 6.96**##高劑量組±1.45 ±2.39±4.81±4.0 ±1.70 ±1.64±1.57注①n＝5，Student-t檢驗(yàn)，各劑量組與模型組相比*p＜0.05，**p＜0.01；各劑量組與偽手術(shù)組相比#p＜0.05，##p＜0.01。
表2-2 對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞N-ST的影響(x±S)組別劑量缺血 給藥后(min)G/kg15min153060120 180偽手術(shù)組- 2.88 3.92 4.62 3.94 4.18 3.30±2.05 ±1.79±2.42±1.11±1.72±1.33模型組 - 25.96## 26.20## 25.52## 24.10## 21.92## 17.82##±4.26 ±4.23±5.48±5.79±3.80±3.72葛根素組0.0226.18## 17.58*## 18.78*## 17.68*## 16.96## 13.98**##±1.40 ±3.73±2.53±1.80±2.55±2.28丹參總酚酸 0.8 25.42## 20.68*## 22.46## 18.54## 17.08## 15.74##低劑量組±5.16 ±1.61±3.48±3.45±2.49±4.24丹參總酚酸 1.6 22.98## 19.38*## 17.72*## 17.68*## 17.04## 14.70##中劑量組±6.82 ±1.86±2.37±1.95±2.72±2.96丹參總酚酸 2.4 24.98## 17.80*## 17.74*## 15.02*## 15.18*## 14.26*##高劑量組±4.86 ±6.51±4.0±1.98 ±2.25±3.91n＝5，Student-t檢驗(yàn)，各劑量組與模型組相比*p＜0.05，**p＜0.01；各劑量組與偽手術(shù)組相比#p＜0.05，##p＜0.01。
表2-3 對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞CPK、LDH、MDA、SOD的影響(x±S)組別劑量 CPK LDHMDA SOD(G/kg)(U/L) (U/L) (nmol/L)(nU/L)偽手術(shù)組- 1061.8 363.0 1.50163.0±173.7 ±77.0 ±0.51 ±16.5模型組 - 2744.1##764.8##4.44## 131.4#±554.3 ±56.0 ±0.54 ±15.4葛根素組0.02 1722.2*## 540.0*#1.82** 159.4*±202.9 ±142.9±0.30 ±9.0丹參總酚酸 0.8 2042.5*## 628.8*## 1.86** 146.6低劑量組 ±313.3 ±92.8 ±0.30 ±11.5丹參總酚酸 1.6 1852.6*## 617.6*## 1.48** 154.0*中劑量組 ±238.8 ±100.0±0.52 ±12.4丹參總酚酸 2.4 1720.7**## 436.8**1.44** 157.6*高劑量組 ±261.0 ±88.4 ±0.66 ±16.5n＝5，Student-t檢驗(yàn)，各劑量組與模型組相比*p＜0.05，**p＜0.01；各劑量組與偽手術(shù)組相比#p＜0.05，##p＜0.01。
表2-4 丹參總酚酸對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞范圍的影響(x±S)組別 劑量心臟重心室重 梗塞心肌重 梗塞區(qū)/心臟 梗塞區(qū)/心室(G/kg) (g) (g) (g) (％) (％)偽手術(shù)組 - 95.2 59.3 0 00±4.4 ±5.7模型組- 93.6 60.3 8.76## 9.3##14.4##±5.0 ±4.8±2.4 ±2.1±2.9葛根素組 0.0292.3 58.1 5.5*## 5.9* 9.5*##±9.1 ±7.1±0.8 ±0.8±1.4丹參總酚酸0.8 90.9 57.5 6.2## 6.7*## 10.7*##低劑量組 ±5.8 ±4.4±1.5 ±1.1±1.7丹參總酚酸1.6 95.8 61.1 5.2## 5.4**## 8.5**##中劑量組 ±6.4 ±4.9±1.1 ±0.9±1.4丹參總酚酸2.4 97.9 62.2 3.5## 3.6**## 5.7**##高劑量組 ±3.8 ±4.5±1.2 ±1.3±2.2n＝5，Student-t檢驗(yàn)，各劑量組與生理鹽水組相比*p＜0.05，**p＜0.01；各劑量組與偽手術(shù)組相比#p＜0.05，##p＜0.01。
表2-5 對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞收縮壓(SAP)(kpa)的影響(x±S)組別劑量缺血前缺血給藥后(min)G/kg 15min1530 60 120 180偽手術(shù)組- 19.8 19.7 19.5 19.5 19.2 19.0 18.7±4.1 ±3.9±4.0 ±3.9±3.8±3.9±4.0Δ％ -0.4 -1.6 -1.3 -2.7 -3.6 -5.5±1.2±0.8 ±1.5±1.3±2.5±1.5模型組 - 18.7 17.9 17.9 17.4 17.3 17.1 16.6±3.0 ±3.3±2.9 ±2.9±3.6±3.6±3.2Δ％ -4.9## -4.2 -7.2#-7.9 -9.1 -11.8#±2.4±3.0 ±4.2±5.4±7.8±4.1葛根素組0.0221.7 20.7 20.4 20.8 20.5 20.6 19.5±3.0 ±2.9±3.4 ±2.6±3.1±3.0±3.5Δ％ -4.6## -5.9 -3.9 -5.6 -5.2 -10.3±2.5±3.2 ±2.1±3.7±7.4±5.3丹參注射液 0.8 19.2 18.6 19.0 18.6 18.5 18.2 17.5低劑量組±2.8 ±3.0±2.6 ±2.5±2.7±2.7±3.0Δ％ -3.6#-1.4 -3.5 -1.9 -5.6 -9.2±2.3±1.7 ±1.7±6.1±3.8±6.8丹參總酚酸 1.6 19.8 19.4 18.7 18.6 18.5 17.9 17.6中劑量組±3.7 ±3.4±3.4 ±3.4±3.5±3.1±3.1Δ％ -1.6 -5.2# -5.8## -6.3#-8.9#-10.8##±1.8±2.6 ±1.5±2.5±3.3±2.7丹參總酚酸 2.4 20.4 19.9 19.7 19.6 19.6 19.0 18.8高劑量組±2.7 ±2.7±2.8 ±3.0±3.0±2.5±2.8Δ％ -2.7#-3.8# -4.4 -4.0 -6.6 -8.0±1.3±1.7 ±3.3±2.7±1.4±2.2n＝5，Student-t檢驗(yàn)，各劑量組與模型組相比p＞0.05各劑量組與偽手術(shù)組相比#p＜0.05，##p＜0.01。
表2-6 對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞舒張壓(DAP)(kpa)的影響(x±S)組別劑量 缺血前 缺血 給藥后(min)G/kg15min15 30 60 120 180偽手術(shù)組- 13.2 13.2 13.2 13.1 13.0 12.8 12.6±3.9±3.7±3.8±3.9±4.0±3.6±3.5Δ％-0.0 -0.0 -1.4 -2.3 -3.1 -4.6±1.9±1.4±2.3±2.9±1.7±12.7模型組 - 12.3 11.9 11.8 12.1 11.6 11.6 11.0±3.4±3.6±3.4±3.8±3.4±3.3±3.5Δ％-4.2#-4.3 -2.6 -5.8 -6.2 -10.9#±2.6±5.8±7.3±4.8±4.5±4.3葛根素組0.02 14.9 14.2 14.3 13.9 14.9 13.9 13.4±3.0±3.4±3.2±3.5±3.0±3.4±2.9Δ％-5.5#-4.6#-7.2#-5.1 -7.6 -10.1#±3.7±2.9±4.9±2.9±4.4±4.2丹參注射液 0.812.9 12.1 12.3 12.1 12.2 11.8 11.7低劑量組 ±3.0±3.1±2.8±2.8±3.0±2.6±2.8Δ％-6.1 -4.5## -5.7 -5.2 -7.9#-9.3#±2.5±2.1±3.5±2.4±3.3±1.9丹參總酚酸 1.612.7 12.0 11.9 11.7 12.0 11.7 11.6中劑量組 ±3.1±3.2±3.5±2.9±3.6±3.1±2.9Δ％-6.0#-7.0#-8.2## -6.2 -8.7## -9.4##±2.9±5.3±1.0±8.5±2.4±1.6丹參總酚酸 2.413.7 13.0 12.8 12.8 12.7 12.4 12.4高劑量組 ±3.0±2.8±3.1±2.9±2.8±3.0±3.1Δ％-5.2## -6.6## -6.3## -7.0#-9.7## -9.8#±1.4±2.4±1.6±2.9±3.0±4.0n＝5，Student-t檢驗(yàn)，各劑量組與模型組相比p＞0.05各劑量組與偽手術(shù)組相比#p＜0.05，##p＜0.01。
表2-7 丹參總酚酸對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞平均動(dòng)脈壓(MAP)(kpa)的影響(x±S)組別劑量 缺血前缺血 給藥后(min)G/kg 15min15 30 60 120 180偽手術(shù)組- 16.0 15.7 15.8 15.7 15.3 15.2 15.1±3.3 ±3.2±3.4±3.5±3.3±3.1±3.0Δ％ -1.9 -1.4 -2.1 -5.0 -5.1 -5.2±1.1±2.1±2.3±2.6±3.4±3.6模型組 - 14.7 14.1 14.0 14.0 13.7 13.5 13.3±3.0 ±2.9±2.7±2.9±3.0±2.6±2.8Δ％ -4.5 -5.0 -4.9 -7.0 8.5 -9.6±2.3±3.6±1.7±2.2±2.3±2.3葛根素組0.02 17.3 15.2 15.5 15.0 15.3 15.1 14.9±2.8 ±5.2±5.4±5.3±4.9±5.4±5.4Δ％ -13.7-12.0-14.9-13.2-14.8-15.9±17.4 ±18.5 ±17.9 ±15.5 ±18.8 ±18.7丹參注射液 0.815.4 14.5 14.7 14.2 14.1 14.1 13.8低劑量組 ±2.8 ±2.7±3.2±3.1±2.4±3.0±2.9Δ％ -5.9## -4.8 -8.0#7.8 -8.6 -10.3±1.0±4.2±3.4±5.1±4.0±3.7丹參總酚酸 1.615.0 14.1 14.0 14.3 14.1 13.8 13.5中劑量組 ±3.0 ±2.7±3.0±3.0±2.5±2.5±2.6Δ％ -5.8#-6.4## -5.2 -5.7 -7.4 -10.1#±2.5±2.3±2.7±2.9±7.2±2.3丹參總酚酸 2.416.3 15.3 15.5 15.2 15.1 15.2 14.8高劑量組 ±3.0 ±3.0±3.1±3.0±3.3±2.5±3.1Δ％ -6.2## -5.1#-7.0 -7.4 -6.8 -9.4±2.4±2.1±1.2±3.6±2.5±2.4n＝5，Student-t檢驗(yàn)，各劑量組與模型組相比p＞0.05各劑量組與偽手術(shù)組相比#p＜0.05，##p＜0.01。
表2-8 丹參總酚酸對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞心率(HR)(beats/min)的影響(x±S)組別劑量 缺血前缺血 給藥后(min)G/kg 15min 153060120 180偽手術(shù)組- 159.4 161.2 160.0 159.0 158.9 155.4 155.3±30.5±31.5±30.6±30.4±29.3±30.1±28.0Δ％ 1.1 0.4 -0.2 -0.1 -2.5 -2.3±1.1 ±1.2 ±1.0 ±1.5 ±1.0 ±1.5模型組 - 134.8 142.6 141.8 142.4 142.2 139.6 138.2±30.8±35.2±34.2±33.6±33.5±35.8±35.7Δ％ 5.4## 5.0## 5.5## 5.3## 3.0# 1.9±2.5 ±2.5 ±1.5 ±2.6 ±3.0 ±3.8葛根素組0.02151.4155.2 155.4 145.8 143.6 143.6 141.0±33.1 ±35.5±36.9±32.7±38.5±33.0±33.1Δ％ 2.5 2.4 -3.6**-5.7**-5.2* -6.7±6.3 ±4.0 ±4.9 ±16.8±6.0 ±9.6丹參注射液 0.8 145.4150.0 146.2 144.8 143.6 144.0 140.8低劑量組±25.2 ±29.7±29.9±28.2±28.2±26.5±26.1Δ％ 2.9 0.3 -0.7**-1.4* -1.0 -3.3*±3.7 ±6.8 ±3.8 ±4.1 ±4.0 ±1.7丹參總酚酸 1.6 150.2162.8 152.0 152.1 146.6 147.6 142.0中劑量組±25.3 ±30.7±31.0±29.1±29.7±27.2±30.4Δ％ 8.1## 0.8 0.9* -2.8**-1.9 -5.9*±2.8 ±3.5 ±2.8 ±3.5 ±3.1 ±5.0丹參總酚酸 2.4 161.6172.8 165.8 162.2 160.6 160.0 157.8高劑量組±27.2 ±27.3±22.3±28.9±26.0±28.1±28.0Δ％ 7.1## 3.1 0.2** -0.5**-1.1* -8.4**##±1.4 ±4.0 ±2.1 ±1.9 ±1.6 ±3.6n＝5 Student-t檢驗(yàn)，各劑量組與模型組相比*p＜0.05，**p＜0.01。各劑量組與偽手術(shù)組相比#p＜0.05，##p＜0.01。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明丹參總酚酸三個(gè)劑量組及陽(yáng)性對(duì)照藥葛根素組靜脈給藥均明顯減輕心肌缺血程度，∑-ST、N-ST與模型組比較明顯下降(P＜0.05、0.01＝(表2-1、2-2)；能減少血清中CPK、LDH、MDA釋放，增強(qiáng)SOD活性，與模型組比較差異顯著(P＜0.05、0.01＝(表2-3)；并能縮小心肌梗塞范圍(P＜0.05、0.01＝(表2-4)，減慢因缺血而致的心率加快(P＜0.05、0.01＝(表2-8)。提示丹參總酚酸對(duì)冠脈結(jié)扎所致狗心肌缺血有明顯的改善作用。
6.3結(jié)論丹參注射液三個(gè)劑量組能明顯減輕心肌缺血程度，∑-ST、N-ST與模型組比較明顯下降，減少血清中CPK、LDH、MDA釋放，增強(qiáng)SOD活性，縮小心肌梗塞范圍，減慢因缺血而致的心率加快，提示丹參注射液對(duì)冠脈結(jié)扎所致狗心肌缺血有明顯的改善作用。
參考文獻(xiàn)[1]于占久等，關(guān)于心肌梗塞的實(shí)驗(yàn)研究--I.動(dòng)物模型的建立及心外膜電圖標(biāo)測(cè)術(shù)，中華心血管病雜志1980；8(1)65-67。
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犬心臟血流動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察丹參總酚酸靜脈滴注給藥后對(duì)麻醉犬心臟血流動(dòng)力學(xué)的作用。
1實(shí)驗(yàn)材料1.1丹參總酚酸含生藥材5g/ml，批號(hào)990209，pH＝5.55，由江蘇省中醫(yī)藥研究院藥物制劑研究室提供；1.2雜種家犬健康，共25只，♀♂兼有，雌性無(wú)孕，體重6～11kg，由江蘇省中醫(yī)藥研究院藥理研究室提供；本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科提供；1.3 5％葡萄糖注射液250ml/瓶，批號(hào)980416，南京小營(yíng)制藥廠生產(chǎn)；1.4葛根素注射液100mg/2ml/支，批號(hào)981204，浙江康恩貝集團(tuán)制藥有限公司生產(chǎn)；1.5RM-6000型八道生理記錄儀，日本光電公司生產(chǎn)；1.6MFV-3200型電磁血流量計(jì)，日本光電公司生產(chǎn)。
2實(shí)驗(yàn)方法取健康雜種家犬25只，隨機(jī)分為5組，每組5只，♀♂兼有(一般每組♀2只，♂3只)，分別為生理鹽水(NS)對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組及丹參總酚酸大、中、小劑量組。犬稱重后，腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg進(jìn)行麻醉，并仰位固定于犬手術(shù)臺(tái)上。剪去頸、胸部及右后肢內(nèi)側(cè)的毛，并用碘酒和75％酒精消毒剪毛區(qū)。切開頸部皮膚，分離氣管，進(jìn)行氣管插管，并接動(dòng)物人工呼吸機(jī)。分離頸總動(dòng)脈，并插入動(dòng)脈插管，用充滿含肝素鈉25u/ml生理鹽水(NS)的導(dǎo)管液導(dǎo)接通TP-400T型壓力換能器，由AP-641G型血壓放大器記錄血壓(收縮壓SAP、舒張壓DAP、平均動(dòng)脈壓MAP)，定標(biāo)靈敏度為13.33kPa(100mmHg汞柱)/cm。分離右側(cè)股靜脈，以備輸液和給藥。在左側(cè)第四肋間橫向切開皮膚，分離肋間肌。用開胸器撐開胸腔切口，暴露心臟，切開心包膜，做心包搖籃。開動(dòng)人工呼吸機(jī)(20～25次/min)，分離升主動(dòng)脈根部，放置適宜直徑的電磁血流量計(jì)的探頭，由電磁血流量計(jì)記錄心輸出量(CO)。左心室心尖部插入導(dǎo)管至左心室腔內(nèi)測(cè)量心室內(nèi)壓(換能器為TP-400型，放大器為AP-601型)，定標(biāo)靈敏度為13.33kPa/cm。并將信號(hào)輸入AD-601G型放大器放大后記錄左心室舒張末期壓(LVEDP)，輸入ED-601G型微分器記錄左心室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dt max)。于冠脈第一、第二分支間分離冠狀動(dòng)脈，放置適宜探頭測(cè)量冠脈流量(CAF)，并于犬四肢皮下插入針狀電極，記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖，測(cè)量心率(HR)。上述測(cè)量信號(hào)均輸入RM-6000型八道生理記錄儀記錄、描記，同時(shí)將心輸出量、心電、血壓及心室內(nèi)壓的電信號(hào)同步輸入微機(jī)的生物醫(yī)學(xué)生理信號(hào)處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理，并由微機(jī)處理后讀出心室內(nèi)壓峰值(LVSP)、舒張末期壓(LVEDP)、心室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dt max)、及一個(gè)周期心室內(nèi)壓曲線下積分的面積。最后，按文獻(xiàn)[1]的公式和方法計(jì)算心臟指數(shù)(CI)、每搏輸出量(SV)、心搏指數(shù)(SI)、左室作功指數(shù)(LVWI)、血管總外周阻力(TPVR)及反應(yīng)心臟耗氧情況的TTI等參數(shù)。
手術(shù)完成后穩(wěn)定20min左右，待所記錄的各指標(biāo)穩(wěn)定后，記錄上述指標(biāo)作為給藥前的正常值，然后于股靜脈滴注給藥，大劑量組的劑量為3g生藥/Kg，中劑量組為2g生藥/Kg，小劑量組為g生藥/Kg，均將藥物混入100ml的NS輸液中，約在15min內(nèi)滴完?？瞻讓?duì)照組僅滴入100ml的NS輸液；陽(yáng)性藥組給予葛根素注射液50mg/Kg，給藥方法同丹參給藥組。記錄并計(jì)算給藥后5、10、20、30、60、120、180min的上述各血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，結(jié)果進(jìn)行給藥前、后的配對(duì)t-檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果(詳見表3-1～3-5)
表3-1 空白對(duì)照組犬的心臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)變化情況(x±s，n＝5)指標(biāo) 給藥前給藥后(min)5 1020 30 60 120 180SAP(kPa) 14.0±0.8514.45±0.6714.37±0.62 14.69±0.5414.64±0.7214.93±0.7514.40±0.41 13.33±2.02DAP(kPa) 8.67±1.228.61±1.11 8.45±1.349.07±1.29 9.33±1.51 9.33±1.56 8.29±1.28 6.93±1.21MAP(kPa) 10.44±1.00 10.56±0.7410.43±0.98 10.94±0.8811.10±1.1711.20±1.1910.33±0.84 9.07±1.25CO(L/min) 0.89±0.210.88±0.23 0.86±0.180.88±0.24 0.89±0.23 0.85±0.15 0.72±0.06 0.67±0.10HR(beats/min) 181.6±37.2 185.6±25.9194 4±3.43*199.8±33.6**199.0±34.5**207.3±27.3**208.4±34.9***209.8±41.9*LVSP(kPa) 21.65±3.86 22.22±3.4621.79±3.22 21.01±3.5520.94±3.6721.86±4.1420.07±2.7818.98±2.06LVEDP(kPa)0.56±0.380.47±0.37 0.62±0.390.60±0.46 0.81±0.78 0.82±0.68 0.50±0.34 0.41±0.27+dp/dt max(kPa/s) 613.3±195.3 600.4±179.4 584.1±172.0 572.6±214.0 577.7±189.1 596.9±158.1 550.4±160.2 442.5±141.1*CI(L/min/m2) 2.12±0.672.11±0.71 2.06±0.602.11±0.74 2.11±0.73 2.02±0.51 1.69±0.16 1.57±0.20SV(×10-3L/beat) 4.93±0.854.76±0.71 4.47±0.734.41±0.78 4.41±0.73 4.09±0.50 3.54±0.80*3.33±1.04*SI(×10-3L/beat/m2) 11.67±2.26 11.3±2.10 10.60±2.00 10.47±2.3710.49±2.259.70±1.57 8.29±1.56*7.77±2.12*TPVR(kPa·s/L)729.7±140.1 742.3±125.0 744.3±134.3 778.6±169.1 794.2±198.4 813.8±168.9 874.2±126.5 827.0±138.1LVWI(kg·M/min/m2) 0.30±0.120.30±0.13 0.20±0.100.31±0.12 0.32±0.12 0.31±0.09 0.23±0.02 0.19±0.04TTI(kPa·beats) 7.49±1.937.65±1.91 7.86±2.708.07±1.71 8.06±1.68 8.04±1.33 7.20±1.28 7.10±1.96CAF(×10-3L/min) 42.6±8.1 42.4±11.6 41.6±9.8 38.8±11.8 41.2±6.4 38.4±6.9 38.0±3.5 35.0±7.8注與給藥前比較，*P＜0.05。
表3-2 陽(yáng)性藥組犬的心臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)變化情況(x±s，n＝5)指標(biāo) 給藥前 給藥后(min)5 10 203060120 180SAP(kPa) 15.36±1.63 16.18±0.8116.32±0.5716.08±1.31 15.57±0.71 15.95±1.09 16.59±1.68 14.53±2.83DAP(kPa) 9.44±2.329.60±1.88 10.11±1.799.76±2.249.01±1.259.33±2.249.55±2.896.69±3.34MAP(kPa) 11.41±1.93 11.79±1.4812.18±1.3711.87±1.86 11.20±0.94 11.54±1.79 11.89±2.36 9.31±3.02CO(L/min) 0.89±0.211.18±0.40*1.17±0.38*1.08±0.451.02±0.460.88±0.360.77±0.310.73±0.33HR(beats/min) 175.6±14.7 181.2±13.4182.0±19.4181.0±25.7 182.6±28.2 197.2±20.2* 198.8±17.6* 187.2±42.0LVSP(kPa) 23.27±2.06 27.39±3.85* 28.05±4.06* 26.78±2.30* 23.85±3.10 24.60±2.97 24.50±4.69 21.45±6.64LVEDP(kPa) 0.54±0.500.30±0.12 0.32±0.12 0.34±0.140.40±0.180.40±0.190.38±0.140.30±0.17+dp/dt max(kPa/s) 597.7±86.6 720.7±111.4* 733.4±113.0* 700.4±94 3 644.0±91.3 636.1±119.8 640.2±150.5 532.5±196.4CI(L/min/m2) 1.92±0.412.60±0.91 2.56±0.82 2.35±0.972.22±0.991.91±0.791.66±0.681.56±0.74SV(×10-3L/beat) 5.02±1.056.53±2.36 6.51±2.42 6.03±2.755.60±2.654.50±1.913.91±1.594.27±2.74SI(×10-3L/beat/m2) 10.91±1.83 14.46±5.3914.27±5.2213.14±5.84 12.22±5.63 9.68±4.038.36±3.349.13±5.84TPVR(kPa·s/L) 838.6±367.5 670.4±266.5 697.6±294.7 813.3±520.8 800.5±445.6 1005±768.5 1120±692.1 919.8±471.1LVWI(kg·M/min/m2)0.29±0.060.40±0.12*0.41±0.10*0.36±0.110.33±0.140.29±0.130.28±0.150.21±0.14TTI(kPa·beats)5.95±2.928.50±0.79 8.84±0.85 8.52±1.167.84±2.138.16±1.838.05±2.746.59±2.95CAF(×10-3L/min) 28.2±5.4 50.0±8.5* 53.0±9.2*** 50.2±9.6** 43.4±7.6** 40.6±10.1* 32.6±8.5326.4±4.93注與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表3-3 大劑量組犬的臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)變化情況(x±s，n＝5)指標(biāo) 給藥前 給藥后(min)5 10203060120 180SAP(kPa) 15.23±1.33 17.20±1.42 17.07±1.47 16.24±1.29 15.55±1.16 16.00±1.22 16.05±1.24 15.92±1.92DAP(kPa) 10.09±1.15 10.37±1.94 10.40±1.63 9.47±1.659.28±1.5510.03±1.65 10.21±2.22 8.45±3.12MAP(kPa) 11.80±1.18 12 65±1.69 12.62±1.53 11.72±1.49 11.37±1.34 12.02±1.20 12.16±1078 10.96±2.65CO(L/min) 0.69±0.050.78±0.40* 0.76±0.05* 0 72±0.050.68±0.040.66±0.040.63±0.090.61±0.11HR(beats/min) 201.0±35.3 200.6±30.2 204.0±27.4 201.8±31.6 202.8±34.7 209.0±32.3 210.6±31.8 212.7±27.2LVSP(kPa) 25.81±2.06 28 66±6.93* 28.626.28*28.25±7.55 27.48±7.41 27.58±8.25 27.72±11.26 27.49±12.87LVEDP(kPa)0.24±0.180.43±0.400.38±0.410.55±0.420.49±0.340.36±0.280.40±0.170.36±0.09+dp/dt max(kPa/s) 653.3±184.7 780.1±290.7 746.8±282.1 715.7±317.5 676.7±332.5 687.9±245.9 629.7±167.6 556.9±158.3CI(L/min/m2) 1.59±0.231.81±0.28* 1.75±0.28* 1.67±0.241.57±0.181.53±0.211.44±0.271.39±0.32SV(×10-3L/beat) 3.54±0.944.00±0.933.80±0.883.67±0.783.47±0.813 25±0.783.06±0.922.91±0.87SI(×10-3L/beat/m2) 8.27±2.809.35±2.898.87±2.728.56±2.468.07±2.437.59±2.377.14±2.616.79±2.46TPVR(kPa·s/L)1042±165.2 979.5±174.4 1007±156.6 977.8±136.3 977.8±56.3 1093±92.51174±118.7 1105±281.8LVWI(kg·M/min/m2) 0.25±0.010.31±0.22** 0.30±0.03* 0.26±0.030.24±0.040.25±0.040.24±0.070.21±0.09TTI(kPa·beats) 9.56±2.4210.40±1.85 9.99±1.629.67±2.028.61±2.158.59±2.468.54±1.788.98±1.43CAF(×10-3L/min) 31.6±4.2 45.0±6.8*49.4±12.9* 49.2±13.5* 45.4±7.9*43.8±5.3*** 40.0±6.6** 38.2±13.2注與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表3-4 中劑量組犬的心臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)變化情況(x±s，n＝5)指標(biāo) 給藥前 給藥后(min)5 10 20 30 60 120180SAP(kPa) 15.84±1.2517.12±2.2317.36±2.2715.97±1.7616.45±1.5216.16±1.7415.97±2.6415.65±3.17DAP(kPa) 11.15±1.0910.83±1.8311.12±1.7610.11±2.2610.51±1.9910.35±1.1710.05±1.658.67±3.52MAP(kPa) 12.70±1.0512.92±1.8613.20±1.7812.06±2.0412.49±1.7512.28±1.3012.03±1.9311.00±3.14CO(L/min) 0.65±0.06 0.73±0.11*0.74±0.11*0.70±0.07** 0.70±0.04*0.67±0.03 0.67±0.03 0.63±0.03HR(beats/min) 188.2±24.9187.4±29.6190.4±29.1189.4±29.2192.4±27.7196.2±27.5195.6±28.3200.2±21.8LVSP(kPa) 23.53±3.4525.13±6.3025.05±6.5623.51±5.8122.79±5.3022.78±5.1422.96±4.2522.14±5.01LVEDP(kPa) 0.46±0.05 0.45±0.13 0.51±0.08 0.41±0.11 0.47±0.12 0.38±0.16 0.32±0.15 0.44±0.20+dp/dt max(kPa/s) 619.5±187.7 709.5±342.9 749.2±325.2 705.8±317.7 698.4±282.8 661.0±293.8 612.6±177.9 636.5±161.0CI(L/min/m2) 1.56±0.21 1.75±0.19*1.78±0.24*1.70±0.22** 1.69±0.22** 1.63±0.22 1.62±0.25 1.52±0.18SV(×10-3L/beat) 3.48±0.54 3.93±0.50** 3.92±0.56*** 3.77±0.50** 3.67±0.47 3.48±0.48 3.46±0.49 3.15±0.34SI(×10-3L/bcat/m2) 8.51±2.07 9.57±1.92 9.56±2.16 9.22±2.17 8.99±2.15 8.52±2.12 8.46±2.06 7.68±1.52TPVR(kPa·s/L) 1183±99.1 1065±80.3*** 1077±89.7*** 1024±92.2*1073±102.41099±126.21084±173.11055±295.1LVWI(kg·M/min/m2)0.27±0.04 0.31±0.07 0.32±0.07 0.28±0.07 0.29±0.06 0.27±0.03 0.26±0.07*0.22±0.07TTI(kPa·beats)7.61±1.78 8.27±2.94 8.53±2.26 8.11±2.92 7.88±2.01 7.73±1.60 7.03±2.12 6.54±2.50CAF(×10-3L/min) 28.4±7.5 36.0±4.1* 39.0±5.5*** 38.4±6.9*** 36.0±6.6* 32.8±5.1 31.2±6.3 30.2±5.3注與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表3-5 小劑量組犬的心臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)變化情況(x±s，n＝5)
指標(biāo) 給藥前 給藥后(min)5 10 20 30 60 120180SAP(kPa) 15.01±2.4516.51±3.0115.92±3.3415.28±3.0515.73±2.2114.77±1.4613.92±2.1511.49±3.90*DAP(kPa) 9.60±2.81 9.55±3.79 9.49±3.95 9.76±3.39 9.79±3.19 9.12±2.07 6.91±2.53 5.81±3.45MAP(kPa) 11.40±2.6211.87±3.4111.64±3.6411.60±3.1911.77±2.7811.00±1.819.24±2.38 7.71±3.52CO(L/min) 0.65±0.06 0.71±0.15 0.73±0.17 0.73±0.16 0.73±0.15 0.72±0.13 0.70±0.19 0.67±0.21HR(beats/min) 187.0±26.4195.8±32.7209.0±26.5210.5±27.0215.5±30.4215.8±25.7219.5±17.3217.8±13.5LVSP(kPa) 22.15±3.5723.43±4.4323.32±4.5523.65±3.3523.69±2.0421.29±1.9919.45±2.7617.36±4.18LVEDP(kPa)0.28±0.16 0.32±0.21 0.45±0.22 0.50±0.20 0.31±0.18 0.28±0.15 0.25±0.15 0.22±0.12+dp/dtmax(kPa/s) 564.0±148.1 624.5±157.3 692.5±123.5 697.0±101.1 679.9±52.7574.7±75.3513.3±82.3441.3±108.3CI(L/min/m2) 1.55±0.11 1.69±0.22 1.69±0.27 1.69±0.27 1.70±0.27 1.65±0.22 1.62±0.29 1.56±0.31SV(×10-3L/beat) 3.52+0.55 3.72±0.84 3.56±0.69 3.52±0.57 3.48±0.57 3.34±0.37 3.17±0.64 3.09±0.83SI(×10-3L/beat/m2) 8.41±1.28 8.84±1.72 8.50±1.50 8.43±1.35 8.35±1.49 8.00±0.97 7.54±1.16 7.34±1.53TPVR(kPa·s/L)1050±171.4990.1±125.9 956.3±129.9 958.9±93.2988.4±104.5 936.4±111.3 827.0±145.4* 694.2±140.2**LVWI(kg·M/min/m2) 0.24±0.06 0.28±0.12 0.27±0.13 0.27±0.12 0.28±0.11 0.25±0.07 0.21±0.09 0.17+0.12TTI(kPa·beats) 7.46±1.75 7.88±2.26 8.11±1.28 7.71±1.43 7.48±1.50 7.27±1.00 7.21±0.66 6.10±0.85CAF(×10-3L/min) 26.8±6.9 42.6±8.7* 40.8±9.1* 40.8±12.9*35.5±7.3 31.5±4.8 29.7±7.7 25.0±3.7注與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
由表3-1可知，對(duì)照組麻醉犬手術(shù)后10min即引起持續(xù)性心率增加(與滴注NS前比較，P＜0.05～0.001)；心臟每搏輸出量、心搏指數(shù)和心室內(nèi)壓最大上升速率隨時(shí)間呈下降趨勢(shì)，在2～3h時(shí)則有明顯下降(P＜0.05)，其余的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)則無(wú)顯著性改變。
由表3-3～表3-5可知，丹參總酚酸靜脈滴注給藥后，麻醉犬的心率無(wú)顯著性增加(與給藥前比較，P＞0.05)，表明本品可抑制因手術(shù)引起的犬心率增加。給藥后5min，即引起麻醉犬的CAF明顯增加，并呈一定的劑量依賴性，大劑量組在給藥后120min內(nèi)均有明顯增加(P＜0.05～0.001)，3h時(shí)亦有增高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，中劑量組在30min內(nèi)CAF顯著升高(P＜0.05～0.001)，而小劑量組的作用僅維持了約20min。大、中劑量組給藥后有短時(shí)間的心輸出量明顯增加(P＜0.05～0.01)，但作用僅維持了20～30min。另外，大劑量組的LVSP、CI和LVWI在給藥后10min內(nèi)明顯升高(P＜0.05～0.01)；中劑量組的CI、SV在給藥后的20～30min內(nèi)明顯增高，TPVR則有明顯的下降(P＜0.05～0.001)。陽(yáng)性藥葛根素注射液靜脈滴注給藥后，1h內(nèi)麻醉犬的CAF顯著上升(P＜0.05～0.001)，CO、LVSP、±dp/dt max、LVWI在給藥后10～20min內(nèi)也有明顯上升(P＜0.05)，但犬的心率有增加，在給藥后1～2h時(shí)有顯著增加(P＜0.05)。
綜上所述，證明丹參總酚酸給藥后能抑制麻醉犬手術(shù)后心率增快，顯著增加冠脈流量和心輸出量，心臟指數(shù)、每搏心輸出量和左室作功指數(shù)也有明顯增加，而血管外周阻力則明顯下降，表明能擴(kuò)張外周血管，增強(qiáng)心功能。這樣，能調(diào)整缺血心肌的供-需平衡，使心臟血流供應(yīng)得到改善，有利于保護(hù)缺血心肌，減輕心臟缺血癥狀。
參考文獻(xiàn)1陳奇。中藥藥理研究方法學(xué)。北京，人民衛(wèi)生出版社，1994，525～5302徐叔云，卞如濂，陳修。藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)(第2版)。北京，人民衛(wèi)生出版社，1994，854～861[試驗(yàn)例四]家兔血液流變性試驗(yàn)報(bào)告摘要 家兔經(jīng)耳緣靜脈注射高分子右旋糖酐造成血瘀模型。丹參總酚酸的大、小劑量(2g、1g/ml)均能明顯改善血瘀模型家兔的全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、血沉、血沉方程K值、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)等指標(biāo)。小劑量還能明顯改善血瘀模型家兔的全血還原粘度(低切)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 觀察丹參總酚酸對(duì)家兔血瘀模型血液流變性的影響。
1實(shí)驗(yàn)材料1.1家兔新西蘭白兔，♀♂各半，購(gòu)于省農(nóng)科院種畜場(chǎng)，合格證號(hào)蘇動(dòng)(質(zhì))981200。
1.2丹參總酚酸5g/ml，本院藥物室提供，批號(hào)990129，以注射用生理鹽水配成2g/ml及1g/ml，分別用于大小劑量組。
1.3注射用尿激酶10萬(wàn)單位/瓶，南京大學(xué)制藥廠，批號(hào)9803103，以注射用生理鹽水配成400單位/ml用于陽(yáng)性藥組。
1.4高分子右旋糖酐平均分子量236000，上海長(zhǎng)征制藥廠，以注射用生理鹽水加熱配成10％。
1.5血小板聚集儀，MG-190型，上海醫(yī)科大學(xué)產(chǎn)；1.6全自動(dòng)清洗粘度儀，LBY-N6A型，北京普利生公司產(chǎn)。
2實(shí)驗(yàn)方法[1，2]和結(jié)果家兔30只，♀♂各半，隨機(jī)分為5組。給藥途徑為耳緣靜脈注射。大小劑量組給藥1ml/Kg，連續(xù)8天；陽(yáng)性藥組于第7、8天給尿激酶0.5ml/Kg；大小劑量組、陽(yáng)性藥組、模型組均于第7天下午給10％高分子右旋糖酐15ml/Kg，第8天上午給10％高分子右旋糖酐5ml/Kg；空白組給生理鹽水1ml/Kg連續(xù)8天。第8天給藥后1小時(shí)，心臟采血6ml，2ml置枸櫞酸鈉管供測(cè)定血小板聚集率，4ml置肝素管供測(cè)定全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、血沉、纖維蛋白原、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)等其它血液流變指標(biāo)。結(jié)果見表。
結(jié)果表明丹參總酚酸的大、小劑量均能明顯改善血瘀模型家兔的全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、血沉、血沉方程K值、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)等指標(biāo)。而且小劑量能明顯改善血瘀模型家兔的全血還原粘度(低切)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)等其它血液流變指標(biāo)。
表4-1 對(duì)家兔血瘀模型的血液流變影響(x±s，n＝6)組別 全血粘度 血漿粘度 全血還原粘度血小板聚集率低切(10/s) 中切(60/s) 高切(150/s)(120/s) 低切(10/s) 中切(60/s) 高切(150/s)(％)空白組5.90±0.80*** 4.06±0.53** 3.38±0.24*** 1.73±0.32*** 9.83±1.61**4.94±0.87 3.88±0.77 60.83±8.98**模型組9.50±0.95 5.55±0.82 5.03±0.66 2.81±0.23 15.02±1.24 6.16±1.42 5.00±1.01 78.83±7.55陽(yáng)性藥組 6.41±1.22*** 4.11±0.57** 3.61±0.43** 1.71±0.31*** 11.35±1.53** 5.82±0.80 4.61±0.76 70.50±5.32大劑量組 6.80±1.39** 4.13±0.40** 3.57±0.22*** 1.50±0.31*** 13.35±3.76 6.67±1.61 5.24±1.25 72.50±7.18小劑量組 5.49±1.07*** 3.69±0.36*** 3.30±0.24*** 1.57±0.19*** 10.05±1.45*** 5.51±0.47 4.51±0.51 70.17±6.24(續(xù)表)組別 紅細(xì)胞壓積血沉血沉方程 紅細(xì)胞 纖維蛋白原 紅細(xì)胞 紅細(xì)胞紅細(xì)胞(％) (mm/H) K值 聚集指數(shù) (g/L) 電泳指數(shù)剛性指數(shù) 變形指數(shù)空白組42.17±3.82 1.50±0.65*** 6.19±2.90*** 1.74±0.14 3.850.97** 4.15±0.31 2.38±0.910.56±0.13模型組44.50±2.88 46.83±10.93184.13±43.85 1.90±0.15 5.49±0.55 4.27±0.35 1.77±0.270.47±0.05陽(yáng)性藥組 40.83±5.12 8.67±8.94*** 27.22±27.984*** 1.76±0.15 4.35±2.07 4.34±0.29 2.83±0.94* 0.64±0.13*大劑量組 39.50±3.33* 12.67±9.40*** 37.77±26.41*** 1.89±0.28 4.72±1.25 4.80±0.60 3.77±1.67* 0.75±0.19**小劑量組 38.67±4.84* 14.83±15.75** 39.72±42.91*** 1.65±0.23* 4.65±1.66 4.28±0.16 2.94±0.64** 0.68±0.11**注與模型組比較，*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001參考文獻(xiàn)1.陳奇。中藥藥理研究方法學(xué)。北京，人民衛(wèi)生出版社，1994，564～5682.苗明三。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)。中國(guó)中醫(yī)藥出版社，1997，276～277除以上實(shí)施例外，凡采用等同替換或等效變換的形式所獲得的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1一種丹參總酚酸的提取方法，其特征如下(1)煎煮加水煎煮1-4次，每次1-4小時(shí)，每次加水8-14倍量；(2)濃縮合并煎煮藥液，濃縮至每1ml相當(dāng)于含生藥0.5-3g；(3)堿處理將濃縮液加堿調(diào)節(jié)pH至7.0-14.0；(4)醇沉調(diào)整藥液濃度至每1ml相當(dāng)于含生藥0.5-3g，加乙醇沉淀使含醇量達(dá)20-70％，冷藏24-48小時(shí)；(5)回收醇液將醇沉液過(guò)濾，減壓回收至不含乙醇；(6)酸處理用酸調(diào)節(jié)至pH至1.0-5.0；(7)萃取用等量醋酸乙酯萃取3-6次；(8)回收醋酸乙酯合并酯萃取液，減壓回收醋酸乙酯得浸膏；(9)水處理浸膏加水溶解，過(guò)濾，濃縮；(10)干燥將上述濃縮液干燥，得丹參總酚酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參總酚酸的提取方法，其特征在于其中步驟(3)所述的堿為氫氧化鈉溶液；酸為鹽酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參總酚酸的提取方法，其特征在于其中步驟(4)所述的醇為乙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參總酚酸的提取方法，其特征在于其中步驟(8)所述的酯為醋酸乙酯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參總酚酸的提取方法，其特征在于步驟如下(1)煎煮加水煎煮2-3次，每次2-3小時(shí)，每次加水10-12倍量；(2)濃縮合并煎煮液，濃縮至每1ml相當(dāng)于含生藥1-2g；(3)堿處理濃縮液加NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10-12，(4)醇沉調(diào)整藥液濃度至每1ml相當(dāng)于含生藥1-2g，加乙醇沉淀使含醇量達(dá)40-60％，冷藏24-30小時(shí)；(5)回收醇液將醇沉液過(guò)濾，減壓回收至不含乙醇；(6)酸處理再用HCl調(diào)節(jié)pH至1-4；(7)萃取用等量醋酸乙酯萃取4-5次；(8)回收酯合并醋酸乙酯萃取液，減壓回收醋酸乙酯；(9)水處理浸膏加水溶解，過(guò)濾，濃縮；(10)干燥將上述浸膏減壓干燥或噴霧干燥，得丹參總酚酸。
6.一種丹參總酚酸，其特征在于丹參總酚酸在制備治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種丹參總酚酸的提取方法及其在藥學(xué)上的應(yīng)用，其步驟主要有煎煮、濃縮、堿處理、醇沉等。本發(fā)明所述的丹參總酚酸成分的提取方法為水提乙酸乙酯萃取法丹參加水煎煮，過(guò)濾，合并煎煮液，濃縮，堿處理，乙醇沉淀，過(guò)濾，回收乙醇用酸處理，用醋酸乙酯萃取，回收醋酸乙酯，水處理，過(guò)濾，干燥得丹參總酚酸。本發(fā)明提取工藝經(jīng)過(guò)改進(jìn)以后，丹參總酚酸的含量由傳統(tǒng)工藝的1.7748mg/g生藥增加到7.88mg/g生藥，增加了4.44倍，質(zhì)量穩(wěn)定、可控。一系列藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，改進(jìn)后提取的丹參總酚酸類成分有明顯的藥理作用，為進(jìn)一步開發(fā)新產(chǎn)品提供了更好的理論依據(jù)和提取工藝的生產(chǎn)路線。
文檔編號(hào)A61K31/58GK1560000SQ20041001413
公開日2005年1月5日 申請(qǐng)日期2004年2月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月23日
發(fā)明者賈曉斌, 施亞芳, 陳彥 申請(qǐng)人:江蘇省中醫(yī)藥研究院