專利名稱：一種促進(jìn)骨折愈合的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以中草藥為原料制成的藥物，特別是一種促進(jìn)骨折愈合的藥物；本發(fā)明還涉及該藥物的制備方法。
背景技術(shù)：
目前骨折的治療方法主要是外科復(fù)位和固定，但不管外科方法如何先進(jìn)，一般骨折的治愈也需要3個(gè)月或者更長(zhǎng)的時(shí)間，從而使骨折者在很長(zhǎng)的一段時(shí)間喪失勞動(dòng)能力甚至生活自理能力。此外采用堅(jiān)強(qiáng)內(nèi)固定方法的骨折治療由于應(yīng)力遮擋的存在，骨質(zhì)疏松和骨萎縮明顯，取出內(nèi)固定后易發(fā)生再骨折；采用彈性固定方法的骨折治療則由于骨端活動(dòng)難以控制，易致骨折延遲愈合或不愈合。
中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)藥物中在治療骨折方面也有許多應(yīng)用，如續(xù)斷、血竭、紅花等藥物有利于骨折的愈合。近年來(lái)也公開(kāi)了一些促進(jìn)骨折愈合的藥物。如《寧夏醫(yī)學(xué)雜志》1999年第21卷11期中公開(kāi)了一篇《三花接骨散治療128例骨折的臨床分析》。復(fù)方中藥三花接骨散具有消腫、止痛的功效，能夠明顯的促進(jìn)骨折的愈合。三花接骨散由三七、西紅花、血竭等18味中草藥組成，方中主要西紅花為名貴藥材，且該藥為散劑，不利于患者服用。申請(qǐng)?zhí)枮?2109322.9、名稱為“接骨丹”的中國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)了由多種中草藥原料制成的治療骨折愈合的藥物?！敖庸堑ぁ庇僧?dāng)歸、川芎、赤芍等20味中藥組成，處方復(fù)雜。目前還沒(méi)有組方科學(xué)、簡(jiǎn)單，藥理藥效明顯的促進(jìn)骨折愈合的中成藥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種配伍合理、配方簡(jiǎn)單、治療效果好的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物。
本發(fā)明還提供了該種藥物的制備方法。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種促進(jìn)骨折愈合的藥物，其特點(diǎn)是，它是由下述重量百分比的原料制成的藥劑，骨碎補(bǔ) 25-35％ 三七 15-25％ 黃芪 40-60％。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題還可以通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。以上所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物，其特點(diǎn)是，各原料的重量百分比為，骨碎補(bǔ) 28％ 三七 17％ 黃芪 55％。
這是本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題還可以通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明是一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特點(diǎn)是，其步驟如下，(1)取骨碎補(bǔ)飲片、三七粗粉，加40-60％乙醇回流提取2-4次，每次1-3小時(shí)，提取液合并，回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為1-3∶1，冷藏，放置20-48小時(shí)，濾過(guò)，濾液加乙醇至溶液含醇量達(dá)85-95％，靜置20-48小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為2-8∶1，加水飽和正丁醇萃取2-4次，萃取液回收正丁醇，濃縮至稠膏，真空干燥，得骨碎補(bǔ)、三七提取物；(2)取黃芪飲片，加3-6倍量水煎煮1-3次，每次0.5-2小時(shí)，煎煮液合并，濃縮至藥材∶藥液為1-3∶1，加乙醇使溶液含醇量達(dá)70-80％，靜置20-48小時(shí)，濾過(guò)，用35-45％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH為8-11，靜置過(guò)夜，濾過(guò)濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，干燥物加水20-30倍量溶解，靜置，濾過(guò)或離心，濾液加乙醇使溶液含醇量達(dá)70-80％，靜置20-48小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣，用少量乙醇洗滌，殘?jiān)婵崭稍?，得黃芪提取物；(3)取上述骨碎補(bǔ)、三七提取物與黃芪提取物，加入藥學(xué)上可接受的藥用輔料，制成藥劑學(xué)上所述的任何一種劑型。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題還可以通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。以上所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特點(diǎn)是，取骨碎補(bǔ)、三七提取物置配液容器中，加注射用水，加熱煮沸20-40分鐘，冷藏20-48小時(shí)，濾過(guò)，備用；取黃芪提取物置配液容器中，加注射用水溶解，加熱煮沸20-40分鐘，冷藏20-48小時(shí)，濾過(guò)，加活性炭，煮沸20-30分鐘，趁熱濾過(guò)，濾液與骨碎補(bǔ)、三七提取物濾過(guò)液混勻，加熱煮沸20-40分鐘，冷藏20-48小時(shí)，濾過(guò)，加活性碳，加熱煮沸10-20分鐘，濾過(guò)，濾液加Na2SO3溶解或者在生產(chǎn)時(shí)充氮?dú)?，按需要補(bǔ)加注射用水至適量，濾過(guò)，濾液超濾灌封于安瓿中，流通蒸汽滅菌，得注射劑。
以上所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特點(diǎn)是，所制得的注射劑的PH值為6.0-8.0。
以上所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特點(diǎn)是，所制得的注射劑每毫升含總固體量應(yīng)不低于25毫克。
以上所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特點(diǎn)是，所制得的注射劑每毫升含三七以人參皂苷Rb1、Rg1總和計(jì)不低于8毫克。
以上所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特點(diǎn)是，所制得的注射劑每毫升含骨碎補(bǔ)以柚皮苷計(jì)不低于0.5毫克。
用本發(fā)明方法制得的注射劑的鑒別如下(1)取本品20ml，加水飽和的正丁醇萃取2次，每次10ml，合并正丁醇溶液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rb1、Rg1加甲醇制成每1ml各含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以氯仿—甲醇—水(13∶7∶2)10□以下放置的下層液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于105□加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，分別在與金銀花對(duì)照藥材和綠原酸對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(2)取鑒別(1)項(xiàng)下的供試液作為供試品溶液。取柚皮苷作為對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯—乙酸乙酯—甲酸—水(1∶12∶2.5∶3)的上層液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，于紫外光燈365nm下檢識(shí)。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的熒光斑點(diǎn)。
本發(fā)明方法制備的注射劑(以下簡(jiǎn)稱本品)的檢查如下蛋白質(zhì)取本品1ml，加新鮮配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現(xiàn)渾濁。
鞣質(zhì)取本品1ml，加新鮮配制的1％蛋清生理鹽水5ml，搖勻，放置10分鐘，不得有渾濁或沉淀。
重金屬取本品4ml，依法檢查(《中國(guó)藥典》1995年版一部附錄IXE第二法)，應(yīng)低于百萬(wàn)分之十。
砷鹽取本品4ml，依法檢查(《中國(guó)藥典》1995年版一部附錄IXF第二法)，應(yīng)低于百萬(wàn)分之二。
草酸鹽取本品2ml，加3％氯化鈣試液2-3滴，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀。
鉀離子檢查按藥典法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄IXS)檢驗(yàn)。
樹(shù)脂取本品5ml，加濃鹽酸1滴，半小時(shí)后應(yīng)無(wú)樹(shù)脂狀物析出。
熾灼殘?jiān)”酒?ml，水浴蒸干，依法測(cè)定(《中國(guó)藥典》1995年版一部附錄IXJ)，遺留殘?jiān)鼞?yīng)低于1.5％(g/ml)。
異常毒性取本品，加生理鹽水制成每1ml含0.1ml藥液的溶液，依法檢查(《中國(guó)藥典》2000年版二部附錄XIC)。按靜脈注射法給藥，應(yīng)符合規(guī)定。
熱原取本品，依法檢查(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄XIIIA)，劑量按家兔體重每1kg注射5ml，應(yīng)符合規(guī)定。
無(wú)菌取本品2ml，依法檢查(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄XIIIB)，應(yīng)符合規(guī)定。
不溶性微粒取本品按臨床用法配制，顯微計(jì)數(shù)法檢查(《中國(guó)藥典》2000年一部附錄IXR)，每ml含10μm以上微粒不得超過(guò)20粒，25μm以上微粒不得超過(guò)2粒。
總固體量測(cè)定精密量取本品10ml，置已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3小時(shí)，移置干燥器中，放置冷卻30分鐘，稱重，計(jì)算，即得。本品每ml含總固體量應(yīng)不低于25mg。
本發(fā)明方法制備的注射劑的含量測(cè)定(1)三七皂苷含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，水—乙腈(70∶30)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm。柱溫40□。理論塔板數(shù)按Rb1峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取Rb1、Rg1對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制備成每1ml約含0.3mg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的制備精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
測(cè)定法分別精密量取對(duì)照品溶液和供品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算即得。
本品每ml含三七以人參皂苷Rb1、Rg1總和計(jì)，應(yīng)為不低于8mg/ml。
(2)柚皮苷含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，醋酸—水—甲醇(4∶65∶35)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm，理論塔板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取柚皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密量取本品1ml，置5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得。
本品每ml含骨碎補(bǔ)以柚皮苷計(jì)，不低于0.5mg/ml。
在本發(fā)明藥物的原料組成中，骨碎補(bǔ)具有促進(jìn)軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，三七能夠促進(jìn)各種血細(xì)胞的分裂與生長(zhǎng)，黃芪具有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、降低血清脂質(zhì)過(guò)氧化物的含量的作用，該三種原料的有效成份在促進(jìn)骨折愈合的治療過(guò)種中相輔相成。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明藥物是一種組方科學(xué)合理、藥理作用明顯的用于加速骨折后的愈合和增強(qiáng)抗折強(qiáng)度的中成藥。而用本發(fā)明方法制備出的本發(fā)明藥物，其有效成份含量高，可進(jìn)一步的提高本發(fā)明藥物的療效。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1。一種促進(jìn)骨折愈合的藥物，它是由下述重量百分比的原料制成的藥劑，骨碎補(bǔ) 28％ 三七 17％ 黃芪 55％。
實(shí)施例2。一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其步驟如下，(1)取骨碎補(bǔ)飲片500克、三七粗粉300克，加50％乙醇回流提取3次，每次3小時(shí)，提取液合并，回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為2∶1，冷藏，放置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液加乙醇至溶液含醇量達(dá)90％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為5∶1，加水飽和正丁醇萃取3次，萃取液回收正丁醇，濃縮至稠膏，真空干燥，得骨碎補(bǔ)、三七提取物；(2)取黃芪飲片1000克，加5倍量水煎煮3次，每次1小時(shí)，煎煮液合并，濃縮至藥材∶藥液為4∶1，加乙醇使溶液含醇量達(dá)75％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，用40％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH為10，靜置過(guò)夜，濾過(guò)濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，干燥物加水25倍量溶解，靜置，濾過(guò)或離心，濾液加乙醇使溶液含醇量達(dá)75％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣，用少量乙醇洗滌，殘?jiān)婵崭稍?，得黃芪提取物；(3)取骨碎補(bǔ)、三七提取物置配液容器中，加注射用水，加熱煮沸30分鐘，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，備用；取黃芪提取物置配液容器中，加注射用水溶解，加熱煮沸30分鐘，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，加活性炭，煮沸25分鐘，趁熱濾過(guò)，濾液與骨碎補(bǔ)、三七提取物濾過(guò)液混勻，加熱煮沸30分鐘，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，加活性碳，加熱煮沸15分鐘，濾過(guò)，濾液加Na2SO3溶解，按需要補(bǔ)加注射用水至適量，濾過(guò)，濾液超濾灌封于安瓿中，流通蒸汽滅菌，得注射劑1000毫升。
功能主治活血化瘀、補(bǔ)腎壯骨，用于加速骨折后的愈合和增強(qiáng)抗折強(qiáng)度。用法用量靜脈滴注，本品10～20ml注射液，加入0.9％氯化鈉注射液250ml，靜滴，或與其他抗生素合用。每日1次或遵醫(yī)囑，規(guī)格10ml/支。
實(shí)施例3。一種促進(jìn)骨折愈合的藥物，它是由下述重量百分比的原料制成的藥劑，所述藥劑的劑型為片劑，骨碎補(bǔ) 25％ 三七 25％ 黃芪 50％。
其制備方法是(1)按上述比例取骨碎補(bǔ)飲片、三七粗粉，加60％乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，提取液合并，回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為1∶1，冷藏，放置48小時(shí)，濾過(guò)，濾液加乙醇至溶液含醇量達(dá)85％，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為2∶1，加水飽和正丁醇萃取4次，萃取液回收正丁醇，濃縮至稠膏，真空干燥，得骨碎補(bǔ)、三七提取物；(2)取黃芪飲片，加6倍量水煎煮2次，每次2小時(shí)，煎煮液合并，濃縮至藥材∶藥液為1∶1，加乙醇使溶液含醇量達(dá)70％，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，用35％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH為8，靜置過(guò)夜，濾過(guò)濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，干燥物加水20倍量溶解，靜置，濾過(guò)或離心，濾液加乙醇使溶液含醇量達(dá)70％，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣，用少量乙醇洗滌，殘?jiān)婵崭稍?，得黃芪提取物；(3)取上述骨碎補(bǔ)、三七提取物與黃芪提取物，加入藥學(xué)上可接受的藥用輔料，按常規(guī)工藝制成片劑。
實(shí)施例4。一種促進(jìn)骨折愈合的藥物，它是由下述重量百分比的原料制成的藥劑，所述藥劑的劑型為膠囊劑，骨碎補(bǔ) 30％ 三七 15％ 黃芪 55％。
其制備方法是(1)按上述比例取骨碎補(bǔ)飲片、三七粗粉，加40％乙醇回流提取4次，每次1小時(shí)，提取液合并，回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為3∶1，冷藏，放置20小時(shí)，濾過(guò)，濾液加乙醇至溶液含醇量達(dá)85％，靜置20小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為7∶1，加水飽和正丁醇萃取2次，萃取液回收正丁醇，濃縮至稠膏，真空干燥，得骨碎補(bǔ)、三七提取物；(2)取黃芪飲片，加3倍量水煎煮3次，每次1.5小時(shí)，煎煮液合并，濃縮至藥材∶藥液為3∶1，加乙醇使溶液含醇量達(dá)80％，靜置20小時(shí)，濾過(guò)，用45％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH為11，靜置過(guò)夜，濾過(guò)濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，干燥物加水30倍量溶解，靜置，濾過(guò)或離心，濾液加乙醇使溶液含醇量達(dá)80％，靜置20小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣，用少量乙醇洗滌，殘?jiān)婵崭稍?，得黃芪提取物；(3)取上述骨碎補(bǔ)、三七提取物與黃芪提取物，加入藥學(xué)上可接受的藥用輔料，按常規(guī)工藝制成膠囊劑。
實(shí)施例5。一種促進(jìn)骨折愈合的藥物，它是由下述重量百分比的原料制成的藥劑，所述藥劑的劑型為口服液，骨碎補(bǔ) 25％ 三七 15％ 黃芪 60％。
其制備方法是(1)取骨碎補(bǔ)飲片、三七粗粉，加55％乙醇回流提取2次，第一次2小時(shí)，第2次1小時(shí)，提取液合并，回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為2∶1，冷藏，放置36小時(shí)，濾過(guò)，濾液加乙醇至溶液含醇量達(dá)90％，靜置36小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為6∶1，加水飽和正丁醇萃取2次，萃取液回收正丁醇，濃縮至稠膏，真空干燥，得骨碎補(bǔ)、三七提取物；(2)取黃芪飲片，加4倍量水煎煮2次，第1次1小時(shí)，第2次0.5小時(shí)，煎煮液合并，濃縮至藥材∶藥液為2∶1，加乙醇使溶液含醇量達(dá)75％，靜置36小時(shí)，濾過(guò)，用40％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH為9，靜置過(guò)夜，濾過(guò)濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，干燥物加水25倍量溶解，靜置，濾過(guò)或離心，濾液加乙醇使溶液含醇量達(dá)75％，靜置36小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣，用少量乙醇洗滌，殘?jiān)婵崭稍?，得黃芪提取物；(3)取上述骨碎補(bǔ)、三七提取物與黃芪提取物，加入藥學(xué)上可接受的藥用輔料，按常規(guī)工藝制成口服液。
實(shí)施例6。一種促進(jìn)骨折愈合的藥物，它是由下述重量百分比的原料制成的藥劑，所述藥劑的劑型為注射劑，骨碎補(bǔ) 28％ 三七 20％ 黃芪 52％。
其制備方法是(1)按上述取骨碎補(bǔ)飲片、三七粗粉，加50％乙醇回流提取2次，每次1—2小時(shí)，提取液合并，回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為2∶1，冷藏，放置40小時(shí)，濾過(guò)，濾液加乙醇至溶液含醇量達(dá)90％，靜置40小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為5∶1，加水飽和正丁醇萃取3次，萃取液回收正丁醇，濃縮至稠膏，真空干燥，得骨碎補(bǔ)、三七提取物；(2)取黃芪飲片，加5倍量水煎煮2次，每次1小時(shí)，煎煮液合并，濃縮至藥材∶藥液為3∶1，加乙醇使溶液含醇量達(dá)75％，靜置40小時(shí)，濾過(guò)，用40％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH為10，靜置過(guò)夜，濾過(guò)濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，干燥物加水25倍量溶解，靜置，濾過(guò)或離心，濾液加乙醇使溶液含醇量達(dá)75％，靜置40小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣，用少量乙醇洗滌，殘?jiān)婵崭稍?，得黃芪提取物；(3)取骨碎補(bǔ)、三七提取物置配液容器中，加注射用水，加熱煮沸20分鐘，冷藏36小時(shí)，濾過(guò)，備用；取黃芪提取物置配液容器中，加注射用水溶解，加熱煮沸20分鐘，冷藏36小時(shí)，濾過(guò)，加活性炭，煮沸20分鐘，趁熱濾過(guò)，濾液與骨碎補(bǔ)、三七提取物濾過(guò)液混勻，加熱煮沸20分鐘，冷藏36小時(shí)，濾過(guò)，加活性碳，加熱煮沸10分鐘，濾過(guò)，濾液在生產(chǎn)時(shí)充氮?dú)猓葱枰a(bǔ)加注射用水至適量，濾過(guò)，濾液超濾灌封于安瓿中，流通蒸汽滅菌，得注射劑。
本實(shí)施例所制得的注射劑的PH值為7.0；每毫升含總固體量為25毫克；每毫升含三七以人參皂苷Rb1、Rg1總和計(jì)為8毫克；每毫升含骨碎補(bǔ)以柚皮苷計(jì)為0.5毫克。
實(shí)施例7。本發(fā)明藥物(以注射劑為例)的藥效學(xué)試驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)藥物骨肽注射液長(zhǎng)春天誠(chéng)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)031021。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新西蘭家兔，由南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。
實(shí)驗(yàn)條件給藥前后，實(shí)驗(yàn)家兔均雌雄分籠用全價(jià)飼料正常喂養(yǎng)，自由飲水，室溫19--23□，濕度40-65％。
統(tǒng)計(jì)方法采用t檢驗(yàn)法。
一、對(duì)骨折家兔愈合作用的影響。
1、造模方法及分組給藥。
取家兔100只，體重1.5-2.0kg。隨機(jī)分成5組，(1)空白對(duì)照組生理鹽水1ml/kg(2)骨肽注射液組5mg/kg；(3)本發(fā)明低劑量組0.4g/kg(生藥量)；(4)本發(fā)明中劑量組0.8g/kg(生藥量)；本發(fā)明高劑量組1.6g/kg(生藥量)。每組20只，稱重并標(biāo)號(hào)。每只家兔均以20％烏拉坦(3ml/kg)耳緣靜脈注射麻醉。在無(wú)菌條件下，用鋼鋸行左橈骨中段橫斷3mm缺損手術(shù)，術(shù)后給予40萬(wàn)單位，肌肉注射。術(shù)后當(dāng)天便按劑量設(shè)計(jì)分別耳緣靜脈注射生理鹽水或受試藥物，每天一次，連續(xù)4周，仔細(xì)觀察家兔傷口及左前肢活動(dòng)情況
2、觀測(cè)指標(biāo)及方法。
1)對(duì)骨痂出現(xiàn)的時(shí)間、數(shù)量和鈣化情況的影響。
5組動(dòng)物在相同條件下分別于術(shù)后1、2、3、4周在相同條件下拍傷肢X線平片，以觀察骨痂出現(xiàn)的時(shí)間、數(shù)量和鈣化情況。用“-”表示無(wú)骨痂形成；“+”表示骨折邊緣趨向模糊，有少量骨痂出現(xiàn)；“++”表示骨折邊緣明顯模糊，有中等量骨痂出現(xiàn)；“+++”表示骨折邊緣接近消失，有較多的骨痂出現(xiàn)；“++++”表示骨折邊緣基本消失，兩骨折端已完全連接，有大量密度高的骨痂，密度接近正常骨。
2)對(duì)生物力學(xué)的影響。
分別于術(shù)后1、2、3、4周每組隨機(jī)抽樣5只處死取左橈骨全干，用WE-10B型液壓萬(wàn)能試驗(yàn)機(jī)測(cè)試橈骨干抗折強(qiáng)度(以骨缺損為中心，跨距70mm)。
3)組織學(xué)觀察測(cè)定抗折強(qiáng)度后，切取帶骨痂標(biāo)本，10％甲醛固定，送病理檢查。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
1)對(duì)骨痂出現(xiàn)的時(shí)間、數(shù)量和鈣化情況的影響。
從X線片所見(jiàn)骨痂數(shù)量看，本發(fā)明組第2周骨折端有少量連續(xù)性骨痂；第3周骨折端有橋樣骨痂出現(xiàn)，骨折線近模糊；第4周骨折端新生骨痂變堅(jiān)實(shí)，改建塑形，骨折線變模糊。骨性愈合時(shí)間本發(fā)明高、中、低劑量組較空白對(duì)照組提前近2周，在愈合過(guò)程中本發(fā)明優(yōu)于骨肽注射液組，見(jiàn)表1-4表1本發(fā)明給藥1周對(duì)骨痂形成的影響組別骨痂出現(xiàn)量(X線密度陰影)N - + ++ +++ ++++空白對(duì)照組20 17 3 0 0 0骨肽注射液組 20 6 14 0 0 0本發(fā)明低劑量組20 5 15 0 0 0本發(fā)明中劑量組20 4 16 0 0 0本發(fā)明高劑量組20 4 16 0 0 0表2本發(fā)明給藥2周對(duì)骨痂形成的影響組別骨痂出現(xiàn)量(X線密度陰影)N - + ++ +++++++空白對(duì)照組15 5 9 1 0 0骨肽注射液組 15 1 4 10 0 0本發(fā)明低劑量組15 1 3 11 0 0本發(fā)明中劑量組15 0 2 11 2 0本發(fā)明高劑量組15 0 1 10 4 0表3本發(fā)明給藥3周對(duì)骨痂形成的影響組別骨痂出現(xiàn)量(X線密度陰影)N - + ++ +++++++空白對(duì)照組10 0 2 5 3 0骨肽注射液組 10 0 0 3 4 3本發(fā)明低劑量組10 0 0 2 4 4本發(fā)明中劑量組10 0 0 1 5 4
本發(fā)明高劑量組10 0 01 4 5表4本發(fā)明給藥4周對(duì)骨痂形成的影響組別 骨痂出現(xiàn)量(X線密度陰影)N - + +++++ ++++空白對(duì)照組 5 0 0 2 2 1骨肽注射液組5 0 0 0 1 4本發(fā)明低劑量組 5 0 0 0 1 4本發(fā)明中劑量組 5 0 0 0 0 5本發(fā)明高劑量組 5 0 0 0 0 52)對(duì)生物力學(xué)的影響本發(fā)明能顯著增加抗折強(qiáng)度，第3、4周本發(fā)明高、中、低劑量組與空白對(duì)照組比較，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，與骨肽注射液組比較，抗折強(qiáng)度也比該組大，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，見(jiàn)表5。
表5本發(fā)明對(duì)骨痂抗折強(qiáng)度的影響(單位kg)組別1周 2周 3周4周空白對(duì)照組 0.8±0.2 1.4±0.5 3.1±0.5 5.5±0.6骨肽注射液組1.2±0.5 2.6±0.4 10.8±0.7 15.0±0.4本發(fā)明低劑量組 1.3±0.4 2.8±0.4 11.3±0.6 15.6±0.4本發(fā)明中劑量組 1.5±0.3 3.2±0.7 11.4±0.5 15.8±0.7本發(fā)明高劑量組 1.6±0.4 3.4±0.5 11.6±0.6 16.2±0.53)組織學(xué)觀察第1周，本發(fā)明高、中、低劑量組血腫明顯吸收，高劑量組的血腫則完全被吸收(表明具有活血化瘀的作用)，本發(fā)明組均出現(xiàn)明顯的纖維性骨痂。骨折斷端出現(xiàn)少量的新生骨小梁及類骨組織，第2周后骨痂連結(jié)于骨折斷端。成骨細(xì)胞及軟骨化骨增生活躍，3、4周后骨折斷端出現(xiàn)骨性骨痂，骨小梁增粗?？瞻讓?duì)照組血腫則吸收較慢，到第4周尚未完全吸收，結(jié)締組織形成的少，膠原纖維細(xì)且稀疏。成骨細(xì)胞及軟骨組織在前兩周產(chǎn)生的少，第4周的形態(tài)改變相當(dāng)于本發(fā)明組的第2周，比本發(fā)明組慢2周左右。骨肽注射液組比本發(fā)明組骨折愈合過(guò)程慢1周左右，3周后才出現(xiàn)骨樣骨痂連結(jié)于骨折斷端，第4周成骨細(xì)胞及軟骨化骨才出現(xiàn)增生活躍狀態(tài)。
本發(fā)明藥物對(duì)骨折家兔愈合作用的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明0.4、0.8、1.6g/kg三個(gè)劑量能明顯縮短家兔骨折愈合與血腫吸收的時(shí)間，增強(qiáng)抗折強(qiáng)度，本發(fā)明各組劑量加大家兔骨折愈合時(shí)間明顯縮短，血腫吸收加快，抗折強(qiáng)度增加。表明本發(fā)明具有縮短骨折愈合時(shí)間，增強(qiáng)抗折強(qiáng)度和活血化瘀的作用，顯示本發(fā)明有較好地促進(jìn)骨折愈合的作用。
權(quán)利要求
1.一種促進(jìn)骨折愈合的藥物，其特征在于，它是由下述重量百分比的原料制成的藥劑，骨碎補(bǔ) 25-35％ 三七 15-25％ 黃芪40-60％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物，其特征在于，各原料的重量百分比為，骨碎補(bǔ) 28％ 三七 17％ 黃芪 55％。
3.權(quán)利要求1或2所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特征在于，其步驟如下，(1)取骨碎補(bǔ)飲片、三七粗粉，加40-80％乙醇回流提取2-4次，每次1-3小時(shí)，提取液合并，回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為1-3∶1，冷藏，放置20-48小時(shí)，濾過(guò)，濾液加乙醇至溶液含醇量達(dá)75-95％，靜置20-48小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇濃縮至藥材∶藥液為2-8∶1，加水飽和正丁醇萃取2-4次，萃取液回收正丁醇，濃縮至稠膏，真空干燥，得骨碎補(bǔ)、三七提取物；(2)取黃芪飲片，加3-6倍量水煎煮1-3次，每次0.5-2小時(shí)，煎煮液合并，濃縮至藥材∶藥液為1-3∶1，加乙醇使溶液含醇量達(dá)60-90％，靜置20-48小時(shí)，濾過(guò)，用35-45％的無(wú)機(jī)或有機(jī)堿調(diào)節(jié)PH為8-11，靜置過(guò)夜，濾過(guò)濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，干燥物加水10-40倍量溶解，靜置，濾過(guò)或離心，濾液加乙醇使溶液含醇量達(dá)60-80％，靜置20-48小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣，用少量乙醇洗滌，殘?jiān)婵崭稍?，得黃芪提取物；(3)取上述骨碎補(bǔ)、三七提取物與黃芪提取物，加入藥學(xué)上可接受的藥用輔料，制成藥劑學(xué)上所述的任何一種劑型。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特征在于，取骨碎補(bǔ)、三七提取物置配液容器中，加注射用水，加熱煮沸20-40分鐘，冷藏20-48小時(shí)，濾過(guò)，備用；取黃芪提取物置配液容器中，加注射用水溶解，加熱煮沸20-40分鐘，冷藏20-48小時(shí)，濾過(guò)，加活性炭，煮沸20-30分鐘，趁熱濾過(guò)，濾液與骨碎補(bǔ)、三七提取物濾過(guò)液混勻，加熱煮沸20-40分鐘，冷藏20-48小時(shí)，濾過(guò)，加活性碳，加熱煮沸10-20分鐘，濾過(guò)，濾液加Na2SO3溶解或者在生產(chǎn)時(shí)充氮?dú)?，按需要補(bǔ)加注射用水至適量，濾過(guò)，濾液超濾灌封于安瓿中，流通蒸汽滅菌，得注射劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特征在于，所制得的注射劑的PH值為5.0-9.0。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特征在于，所制得的注射劑每毫升含總固體量應(yīng)不低于25毫克。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特征在于，所制得的注射劑每毫升含三七以人參皂苷Rb1、Rg1總和計(jì)不低于8毫克。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法，其特征在于，所制得的注射劑每毫升含骨碎補(bǔ)以柚皮苷計(jì)不低于0.5毫克。
全文摘要
一種促進(jìn)骨折愈合的藥物，其特征在于，它是由下述重量百分比的原料制成的藥劑，骨碎補(bǔ)25－35％、三七15－25％、黃芪40－60％。本發(fā)明還公開(kāi)了一種促進(jìn)骨折愈合的藥物的制備方法。本發(fā)明藥物是一種組方科學(xué)合理、藥理作用明顯的用于加速骨折后的愈合和增強(qiáng)抗折強(qiáng)度的中成藥。而用本發(fā)明方法制備出的本發(fā)明藥物，其有效成分含量高，可進(jìn)一步的提高本發(fā)明藥物的療效。
文檔編號(hào)A61P19/00GK1666764SQ200410014290
公開(kāi)日2005年9月14日 申請(qǐng)日期2004年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月9日
發(fā)明者肖偉, 戴翔翎, 凌婭, 廖正根, 劉濤, 鐘裔榮 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司