專利名稱：納米砒霜磁性脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種作為治療癌癥藥物的納米砒霜磁性脂質(zhì)體的制備方法。
背景技術(shù)：
本發(fā)明所涉及的是新型納米中藥制劑及其制備方法，將納米技術(shù)引入到中藥砒霜(As2O3、三氧化二砷)的制備，通過納米技術(shù)制備納米磁性微球(錳鋅鐵氧體納米粒子)作為載體，將As2O3與其結(jié)合制成納米砒霜磁性脂質(zhì)體，從而使其具有雙重抗腫瘤效能，即砒霜的“毒殺”和磁性載體的磁感應(yīng)升溫“熱殺”腫瘤細胞作用。納米技術(shù)是指0.1-100納米材料尺度上的研究與應(yīng)用，納米藥物是指藥物粒徑在1000納米范圍的藥物，但一般不超過500納米。
中藥砒霜作為抗腫瘤藥物在我國已有百年歷史，尤其近年來，其對腫瘤的治療已成為研究的熱點。近年來，As2O3在治療急性早幼粒細胞白血病上臨床效果顯著，引起人們對它的重新認識。大量研究發(fā)現(xiàn)用As2O3作用于急性早幼粒細胞白血病(acutepromyelocytic leukaemia，APL)細胞株NB4有劑量依賴雙重效應(yīng)，低濃度As2O3(0.1μmol/l～0.5μmol/l)長時間(10d～14d)可誘導(dǎo)其分化，高濃度(0.5μmol/l～2.0μmol/l)As2O3可以誘導(dǎo)凋亡，并且這種凋亡作用是通過維甲酸受體信號通路(即誘導(dǎo)PML/RAR α融合蛋白降解)而實現(xiàn)的。后來，有研究發(fā)現(xiàn)[9]對維甲酸耐藥的PML/RARα融合蛋白缺乏小鼠白血病細胞對As2O3誘導(dǎo)的凋亡也表現(xiàn)出明顯的敏感性，而且另有文獻[10-12]報道，As2O3對細胞凋亡的誘導(dǎo)作用并無APL特異性，它不但可以導(dǎo)致NB4細胞發(fā)生凋亡，也可以誘導(dǎo)急性髓細胞樣白血病(acute myloid leukemia，AML)細胞株HL-60及慢性髓細胞樣白血病(chronic myloid leukemia，CML)細胞株K562等細胞凋亡。所以該藥有可能通過多種途徑或凋亡相關(guān)蛋白[13-15]等誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，是一種潛在的廣譜抗癌藥。鑒于此，一些學(xué)者開始了As2O3用于實體瘤治療方面的研究，結(jié)果表明As2O3可以通過阻滯細胞周期(如G2/M期等)、調(diào)節(jié)線粒體(如改變膜通透性和透膜電位等)及某些凋亡相關(guān)基因或蛋白[20-24](C-myc、Bcl-2/bax及Caspases酶底物PARP等)等途徑來誘導(dǎo)實體瘤細胞的凋亡。在誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細胞凋亡時，可同時發(fā)現(xiàn)As2O3幾乎可以完全抑制HPV18病毒E6或E7基因的表達，而且其他基因無明顯改變。因HPV DNA中E6、E7基因是子宮頸上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化所必需的，所以可認為As2O3抑制病毒致癌基因E6、E7的表達是導(dǎo)致HeLa細胞凋亡的關(guān)鍵[25-26]。目前，As2O3誘導(dǎo)實體癌細胞凋亡已應(yīng)用于臨床[27-29]，治療效果令人鼓舞。另外，As2O3在臨床治療白血病時，不但效果顯著，而且沒有化療藥物引起的骨髓抑制等毒副作用，無全反式維甲酸治療引起的易復(fù)發(fā)、易耐藥等缺點。但是我們同時也要看到，由于全身用藥，血漿砷濃度很快升高并迅速彌散周圍組織，所以仍有少部分病人出現(xiàn)消化道癥狀、末梢神經(jīng)炎、皮膚干燥、色素沉著，甚至出現(xiàn)腎功能損害或胸腹水等副作用；尤其是流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)[32]某些腫瘤的發(fā)生與砷的累積量有關(guān)。所以，我們在看到As2O3的臨床應(yīng)用價值的同時，也還必須認識到為進一步減少藥量，提高療效，積極深入開展對As2O3新劑型、靶向定位等的研究是非常迫切和必要的。
磁性微球載體及納米藥物的研制隨著納米技術(shù)的興起頗受重視。1979年Widder首先研制出載有抗癌藥物的磁性微球，發(fā)現(xiàn)磁載體定位好、無毒。1987年家藤哲朗研制果絲裂霉素磁化微球并用于腎癌、膀胱癌，效果頗佳。國內(nèi)對磁性微載體及所載藥物(西藥、中藥)也進行了多方面研究，由于磁性微載體是一種獨特的靶向藥物運載系統(tǒng)，因此一直是藥物新型制劑最活躍的領(lǐng)域之一。從文獻報道看，目前研制的此類藥物的磁性載體已可達納米水平，但攜載藥物后的磁性藥物微球多屬于微米極水平，這可能與制作工藝有關(guān)。因納米級微球(納米粒)遠遠小于微米級微球，所以更有利于細胞吸收，分布也更均勻，且在物理特性上也有不同。研究表明納米粒對腫瘤細胞具有親合力，易吸附于瘤細胞表面，并具有淋巴系統(tǒng)導(dǎo)向性，其特點是納米粒注入體內(nèi)后，既可被淋巴毛細管吸收并帶至引流區(qū)淋巴結(jié)，也可被巨噬細胞吞噬后帶至淋巴器官和肝、肺、骨髓等處。因此，攜載抗癌藥物的納米藥物是一種極具應(yīng)用前景的既可治療原發(fā)腫瘤又可阻遏淋巴轉(zhuǎn)移的藥物新劑型。
近年來，人們根據(jù)磁性微球不僅可以用作藥物載體，在交變磁場下還可加熱升溫的物理特點，對其在腫瘤熱療方面的潛在價值引起了重視。在臨床上用微波等對腫瘤進行熱療是常采用的手段之一。但由于對腫瘤的升溫?zé)o特異性，不易測溫控溫；加之定位困難、或者是由于體表或治療路徑組織溫度過高等而影響了其應(yīng)用。1997年德國學(xué)者Jordan采用納米技術(shù)和熱療相結(jié)合的新療法—磁流體熱療(magnetic fluid hyperthermia，MFH)治療腫瘤取得了重要進展，Jordan將含磁性微粒的液體(磁流體)導(dǎo)入C3H大鼠乳腺癌移植瘤瘤內(nèi)，經(jīng)交變磁場局部照射，磁微粒吸收能量升溫至47℃，結(jié)果腫瘤得到了有效控制。此方法的優(yōu)點是靶向定位升溫，即無磁微粒組織不受損。日本一研究小組[35-36]將納米磁性微粒用脂質(zhì)膜包裹起來，制成磁性脂質(zhì)體(magnetic liposomes，MLs)，由于脂質(zhì)膜和細胞膜的成份相似，這種磁性脂質(zhì)體通過細胞的融合或吞噬作用就可以更快更多的進入細胞內(nèi)部，從而進一步增強細胞內(nèi)熱療的療效。他們把含有磁性脂質(zhì)體的T-9神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞團或移植瘤模型置于AMF(場強384Oe，頻率118kHz，功率5.0kW)中央照射，磁性粒子產(chǎn)生的熱量可以有效殺滅腫瘤細胞。所以，感應(yīng)熱療的前景是十分廣闊的。但MFH沒有載藥，其作用仍顯單一，有效測溫控溫亦未解決。
在腫瘤熱療中，準(zhǔn)確測定腫瘤溫度及其分布很困難，這對于掌握熱療劑量和治療效果帶來很大影響，因此一直是腫瘤熱療中急須解決的問題。1996年學(xué)者們提出了一種能提高深層部位腫瘤熱療效果的新方法?；驹硎菍⒕哂辛己梦绽走_電磁波能量的磁粉吸收劑注射到血管中，然后在外磁場的引導(dǎo)下，磁性微粉吸收劑定位于腫瘤周圍和腫瘤內(nèi)部的血管中，然后在電磁波的照射下，磁性微粉大量吸收電磁波能量，并將其迅速轉(zhuǎn)換成熱能，使腫瘤升溫，達到腫瘤熱療效應(yīng)。磁性物質(zhì)在射頻電磁場的照射下，因渦流損耗而不斷產(chǎn)熱，可在一定的時間內(nèi)達到殺死腫瘤細胞的溫度，由于鐵磁性物質(zhì)本身具有Tc的特點[41，42]，當(dāng)溫度升至居里點后鐵磁性物質(zhì)即失去磁性而不能吸收電磁波能量，使溫度下降，當(dāng)溫度低于居里點后鐵磁性物質(zhì)又恢復(fù)磁性而升溫，從而達到對腫瘤熱療的自動控溫和恒溫，這對深層部位腫瘤的熱療具有重要的意義。錳鋅鐵氧體(Mn1-xZnxFe2O4)是具有較低居里溫度的軟磁鐵氧體材料，在交變磁場照射下可以強烈吸收電磁波能量而升溫；當(dāng)溫度達到居里溫度時，它轉(zhuǎn)變?yōu)榉谴判晕镔|(zhì)而失去吸收電磁波能量的能力，使溫度下降，當(dāng)溫度低于居里溫度時，又恢復(fù)升溫錳鋅鐵氧體納米微球又恢復(fù)磁性升溫，如此往復(fù)，使溫度始終控制在設(shè)定的居里溫度處，從而實現(xiàn)對腫瘤加熱治療的自動升溫和控溫，提高治療效果的穩(wěn)定性和安全性。Mn1-xZnxFe2O4隨著x的改變，其居里溫度可以在很寬的溫度范圍內(nèi)變化。所以，改變配方就可以制備出一系列適用于腫瘤熱療的低居里溫度的錳鋅鐵氧體材料。從理論上講，如能制備出具有抗癌溫度與居里溫度相一致的錳鋅鐵氧體是最理想的，如居里溫度為43℃-46℃(有效抗癌溫度)的錳鋅鐵氧體。但是，我們在實驗中發(fā)現(xiàn)，在200kHz、輸出加熱電流300A的條件下，居里溫度為92℃的納米錳鋅鐵氧體材料配成液體(磁流體)后升溫僅為39℃，達不到理想的治療溫度，這顯然是散熱超過了升溫的幅度所致，因此居里溫度設(shè)定為抗癌溫度43℃-46℃的錳鋅鐵氧體配成的磁流體在上述條件下是難以達到治療溫度的。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明提供一種納米砒霜磁性脂質(zhì)體的制備方法，利用本發(fā)明可獲得磁響應(yīng)性強，分散性較好，粒徑小的納米砒霜磁性脂質(zhì)體。
本發(fā)明采用如下技術(shù)方案來解決其技術(shù)問題一種作為治療癌癥藥物的納米砒霜磁性脂質(zhì)體的制備方法第一步將MnSO4、ZnSO4、FeSO4按摩爾比x∶(1-x)∶2混合，其中x＝0.4～0.6，用1mol/L的NaOH調(diào)成糊狀，反應(yīng)10～14h，置80℃烤箱中干燥，再置電阻爐內(nèi)400℃焙燒60±20分鐘，冷卻后將材料研細成粉末狀，熱蒸餾水淋洗，靜置自然沉降，過濾除去可溶性硫酸鈉無機鹽，用無水乙醇淋洗過濾后，將其放入60℃～80℃烤箱中干燥后，得錳鋅鐵磁性納米粒子；第二步將卵磷脂、膽固醇按質(zhì)量比為(1.6～1.8)∶1.0置于茄形瓶中，并加入相當(dāng)于卵磷脂和膽固醇8～12倍體積的氯仿和無水乙醚的混合液，氯仿和無水乙醚按體積比為2∶1形成混合液，使卵磷脂和膽固醇溶解，用薄膜旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在40℃±5℃下恒溫真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直到有機溶劑完全揮發(fā)，在茄形瓶內(nèi)壁形成一均勻薄膜；將0.07～0.12倍卵磷脂和膽固醇總質(zhì)量的明膠加入到砒霜NaOH溶液和磷酸鹽緩沖液混合液，其pH為7.2±0.2，砒霜NaOH溶液和磷酸鹽緩沖液混合液中的兩溶液體積比為(0.5～1.0)∶9，60±5℃超聲處理3～5分鐘，然后加入0.35～0.70倍卵磷脂和膽固醇總質(zhì)量的錳鋅鐵氧體磁性納米粒子，18℃～25℃下超聲處理3~5分鐘，形成混懸液，將此混懸液加到上述含薄膜的茄形瓶中，40±5℃恒溫震蕩至薄膜脫落，0℃～4℃下超聲處理3~5分鐘，加上述混懸液1％～2％體積的甘油，混勻，置容器在-20℃～-80℃中冷凍2～6小時，37±0.1℃融化，超聲處理40±10秒后再置于-20℃～-80℃中2～6小時，如此反復(fù)凍融及超聲處理3次即得納米砒霜磁性脂質(zhì)體。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明取得了如下有益效果1.用化學(xué)共沉淀法成功制備出的錳鋅鐵氧體(Mn0.5Zn0.5Fe2O4)納米磁性粒子呈圓形或橢圓形，約40nm(圖1)，磁響應(yīng)性強，分散性較好。Mn0.5Zn0.5Fe2O4為尖晶石結(jié)構(gòu)復(fù)合鐵氧體，在培養(yǎng)液及組織中化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易分解。對培養(yǎng)細胞沒有毒性，并且在較長的時間內(nèi)(磁感應(yīng)加熱)對肝功能和腎功能等器官沒有明顯的毒副作用(見表1、2)，因此可以作為一種磁感應(yīng)加熱納米熱籽來治療腫瘤。
表1錳鋅鐵氧體磁性納米粒子浸漬液的細胞毒性評定(X±S)組別 OD值 生長增殖率毒性分級陰性對照組 0.3171±0.0375 100.00％ 025％浸漬液組 0.3031±0.0365 95.58％050％浸漬液組 0.3004±0.0189 94.73％075％浸漬液組 0.3058±0.0625 96.44％0100％浸漬液組0.3013±0.0516 95.02％0陽性對照組 0.0469±0.0127 14.79％4表2.錳鋅鐵氧體磁性納米粒子AMF照射下對荷瘤裸鼠肝功和腎功的影響(X±S)組別 ALT AST Bun CrPBS對照組 28.33±3.37106.67±13.2 5.92±0.6656.83±3.00錳鋅鐵氧體磁性納米粒子27.50±1.73122.00±18.425.34±0.3851.20±5.93各組裸鼠血清中的ALT、AST、Bun及Cr的平均值比較皆P＞0.05，差異無顯著性。
2.在頻率為200kHz、功率為4kW，輸出加熱電流為150A～300A的交變磁場照射下，居里溫度為110.7℃的Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁流體溫度升高情況與磁流體濃度有關(guān)隨濃度升高(1mg/ml～16mg/ml)，磁流體溫度升高的速度和幅度依次增加，各濃度磁流體的溫度上升到某一定點后即保持恒定(恒溫)，并且最終可達腫瘤治療溫度范圍(42℃～45℃)(見圖2)。
3.在頻率為200kHz、功率為4kW的交變磁場照射下，一定濃度的Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁流體的溫度升高情況與輸出加熱電流(即磁場強度)有關(guān)隨輸出加熱電流依次增高(150A～300A)，濃度為8mg/ml的Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁流體的溫度升高速度和幅度也依次增加，溫度升高到某一定點后也能保持恒定(恒溫)，最終溫度可達42℃～45℃腫瘤治療溫度范圍。(圖3)4.本發(fā)明增加反復(fù)凍融和超聲處理兩道程序，并加明膠增強磁性納米粒子的分散性，制備出納米As2O3磁性脂質(zhì)體，其粒徑為190±80nm，呈球形或卵形，平面圓度為1.10±0.13，其中可見電子密度高的磁性納米粒子核心，外有脂質(zhì)膜包繞，分散性好(圖4)，以上性能和特征均優(yōu)于用現(xiàn)有制備方法制備的磁性脂質(zhì)體。
5.一定量的納米As2O3磁性脂質(zhì)體局部注射到移植瘤內(nèi)，在頻率為200kHz、功率為4kW、輸出加熱電流為300A的交變磁場照射下，可以在15min內(nèi)使腫瘤區(qū)溫度迅速升溫43℃±1℃，并在以后的時間里保持恒溫，而周圍正常組織溫度基本不變，表明該方法具有靶向定位加熱和恒溫的治療作用。
6.一定量的納米As2O3磁性脂質(zhì)體局部注射到移植瘤內(nèi)，不但可以通過磁感應(yīng)靶向加熱、還可以通過釋放As2O3來共同抑制裸鼠人宮頸癌抑制瘤的生長(P＜0.001)，它與單一的納米磁性脂質(zhì)體磁感應(yīng)熱療或單一的納米As2O3脂質(zhì)體治療相比，效果更加顯著(P＜0.05)(表3，圖6、7、8、9、10)。
表3.三種復(fù)合型納米脂質(zhì)體在AMF照射下對裸鼠人宮頸癌移植瘤的質(zhì)量抑制率組別裸鼠只數(shù)平均體重(g，X±S) 腫瘤質(zhì)量 抑瘤率前后前后 (g，X±S)PBS對照組6624.07±1.62 24.43±3.353.28±1.13納米As2O3脂質(zhì)體組 6624.45±0.72 24.4±0.58 1.41±0.65 57.06％1)納米磁性脂質(zhì)體組 5523.98±1.05 24.62±1.311.66±0.80 49.44％1)納米As2O3磁性脂質(zhì)體組 7723.80±0.86 23.83±1.630.63±0.53 80.84％2)其中，與對照組相比，1)代表P＜0.05；2)則代表P＜0.001。
7.治療實驗表明納米As2O3磁性脂質(zhì)體是一種對腫瘤既有“毒殺”又有“熱殺”治療作用的多功能靶向新型中藥制劑。


圖1是錳鋅鐵氧體磁性納米粒子照片。
圖2是體外加熱試驗磁場強度一定時，不同濃度的Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁流體磁感應(yīng)產(chǎn)熱情況曲線圖。
圖3是體外加熱試驗不同輸出加熱電流(磁場強度)下，8mg/ml的Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁流體磁感應(yīng)產(chǎn)熱情況曲線圖。
圖4是納米As2O3磁性脂質(zhì)體的顯微照片。
圖5是實驗結(jié)束時對照組裸鼠移植瘤照片。
圖6是實驗結(jié)束時納米As2O3脂質(zhì)體組裸鼠移植瘤照片。
圖7是實驗結(jié)束時納米磁性脂質(zhì)體感應(yīng)加熱組裸鼠移植瘤照片。
圖8是實驗結(jié)束時納米As2O3磁性脂質(zhì)體感應(yīng)加熱組裸鼠移植瘤照片。
圖9是治療實驗結(jié)束后，對照組(1)、納米As2O3脂質(zhì)體組(2)、納米磁性脂質(zhì)體組(3)及納米As2O3磁性脂質(zhì)體組(4)移植瘤的大體情況照片。
具體實施方案一種作為治療癌癥藥物的納米砒霜磁性脂質(zhì)體的制備方法第一步將MnSO4、ZnSO4、FeSO4按摩爾比x∶(1-x)∶2混合，其中x＝0.4～0.6，用1mol/L的NaOH調(diào)成糊狀，反應(yīng)10～14h，置80℃烤箱中干燥，再置電阻爐內(nèi)400℃焙燒60±20分鐘，冷卻后將材料研細成粉末狀，熱蒸餾水淋洗，靜置自然沉降，過濾除去可溶性硫酸鈉無機鹽，用無水乙醇淋洗過濾后，將其放入60℃～80℃烤箱中干燥后，得錳鋅鐵磁性納米粒子；第二步將卵磷脂、膽固醇按質(zhì)量比為(1.6～1.8)∶1.0置于茄形瓶中，并加入相當(dāng)于卵磷脂和膽固醇8～12倍體積的氯仿和無水乙醚的混合液，氯仿和無水乙醚按體積比為2∶1形成混合液，使卵磷脂和膽固醇溶解，用薄膜旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在40℃±5℃下恒溫真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直到有機溶劑完全揮發(fā)，在茄形瓶內(nèi)壁形成一均勻薄膜；將0.07～0.12倍卵磷脂和膽固醇總質(zhì)量的明膠加入到砒霜NaOH溶液和磷酸鹽緩沖液混合液，其pH為7.2±0.2，砒霜NaOH溶液和磷酸鹽緩沖液混合液中的兩溶液體積比為(0.5～1.0)∶9，60±5℃超聲處理3～5分鐘，然后加入0.35～0.70倍卵磷脂和膽固醇總質(zhì)量的錳鋅鐵氧體磁性納米粒子，18℃～25℃下超聲處理3～5分鐘，形成混懸液，將此混懸液加到上述含薄膜的茄形瓶中，40±5℃恒溫震蕩至薄膜脫落，0℃～4℃下超聲處理3~5分鐘，加上述混懸液1％～2％體積的甘油，混勻，置容器在-20℃～-80℃中冷凍2～6小時，37±0.1℃融化，超聲處理40±10秒后再置于-20℃～-80℃中2～6小時，如此反復(fù)凍融及超聲處理3次即得納米砒霜磁性脂質(zhì)體，在本實施例中，將制得的錳鋅鐵磁性納米粒子置于十二烷基苯磺酸鈉水溶液中懸浮。
權(quán)利要求
1.一種作為治療癌癥藥物的納米砒霜磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于第一步將MnSO4、ZnSO4、FeSO4按摩爾比x∶(1-x)∶2混合，其中x＝0.4～0.6，用1mol/L的NaOH調(diào)成糊狀，反應(yīng)10～14h，置80℃烤箱中干燥，再置電阻爐內(nèi)400℃焙燒60±20分鐘，冷卻后將材料研細成粉末狀，熱蒸餾水淋洗，靜置自然沉降，過濾除去可溶性硫酸鈉無機鹽，用無水乙醇淋洗過濾后，將其放入60℃～80℃烤箱中干燥后，得錳鋅鐵磁性納米粒子；第二步將卵磷脂、膽固醇按質(zhì)量比為(1.6～1.8)∶1.0置于茄形瓶中，并加入相當(dāng)于卵磷脂和膽固醇8～12倍體積的氯仿和無水乙醚的混合液，氯仿和無水乙醚按體積比為2∶1形成混合液，使卵磷脂和膽固醇溶解，用薄膜旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在40℃±5℃下恒溫真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直到有機溶劑完全揮發(fā)，在茄形瓶內(nèi)壁形成一均勻薄膜；將占0.07～0.12倍卵磷脂和膽固醇總質(zhì)量的明膠加入到砒霜NaOH溶液和磷酸鹽緩沖液混合液，其pH為7.2±0.2，砒霜NaOH溶液和磷酸鹽緩沖液混合液中的兩溶液體積比為(0.5～1.0)∶9，60±5℃超聲處理3～5分鐘，然后加入0.35～0.70倍卵磷脂和膽固醇總質(zhì)量的錳鋅鐵氧體磁性納米粒子，18℃～25℃下超聲處理3~5分鐘，形成混懸液，將此混懸液加到上述含薄膜的茄形瓶中，40±5℃恒溫震蕩至薄膜脫落，0℃～4℃下超聲處理3~5分鐘，加上述混懸液1％～2％體積的甘油，混勻，置容器在-20℃～-80℃中冷凍2～6小時，37±0.1℃融化，超聲處理40±10秒后再置于-20℃～-80℃中2～6小時，如此反復(fù)凍融及超聲處理3次即得納米砒霜磁性脂質(zhì)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米砒霜磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于將制得的錳鋅鐵磁性納米粒子置于十二烷基苯磺酸鈉水溶液中懸浮。
全文摘要
本發(fā)明是將MnSO
文檔編號A61K33/36GK1559439SQ20041001429
公開日2005年1月5日 申請日期2004年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月12日
發(fā)明者張東生, 樊祥山, 鄭杰, 賈秀鵬, 顧寧, 丁安偉, 金立強, 萬美鈴, 李群慧 申請人:東南大學(xué)