專利名稱：虎眼萬年青皂甙osw-1類型皂甙的23位雜原子取代的類似物及其合成方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及具有高抗腫瘤和免疫抑制活性的虎眼萬年青皂甙OSW-1類型皂甙的23位雜原子取代的類似物的結構和合成方法及用途。
背景技術：
虎眼萬年青皂甙OSW-1是日本化學家Sashida等從一種原產(chǎn)于南非斯威士蘭(Swaziland)、德蘭士瓦(Transvaal)、納塔爾(Natal)等省的常綠觀賞植物虎眼萬年青(Ornithogalum Saundersiae)的地下球莖中分離提取出的具有膽甾烷骨架的皂甙[Kubo，S.Y.；Terao，M.M.；Sashida，Y.Phytochemistry 1992，31，3969]。生物活性測試顯示OSW-1具有極強的廣譜抗腫瘤活性[Mimaki，Y.；Kuroda，M.；Kameyama，A.；Sashida，Y.Biorg.Med.Chem.Lett.1997，7，633]。其IC50值在0.1-0.7nM之間，比臨床使用的甲胺喋呤(methotreate)、依托泊甙(etoposide)、阿霉素(adriamycin)、順鉑(cisplatin)、喜樹堿(camptothecin)以及紫杉醇(taxol)等強10-100倍。而它對人正常肺細胞毒性與臨床用藥相當(IC50＝1500nM)，而且使用10mg/Kg的量即可延長轉染P388白血病小鼠的壽命達到59％。通常皂甙在很低的濃度下就有顯著的溶血作用(如10μg/mL)，這種溶血作用大大阻礙了皂甙作為藥物的可能性，而OSW-1即使在濃度高達100μg/mL時對人紅細胞仍沒有溶血作用。另外，離體器官實驗表明，大大高于抗腫瘤劑量的OSW-1對內(nèi)皮細胞也幾乎沒有損害作用。Sashida等隨后從Ornithogalum Saundersiae及相關植物中分離出了一系列與OSW-1結構相關的皂甙，一些皂甙顯示了相當?shù)目鼓[瘤活性和免疫抑制活性，并申請了一系列專利。[(a)Sashita，Y.；Oka，K.；Hirano，T.；Mimaki，Y.；Kuroda，A.；Fujii，A.；Myata，Y.(Sashita Y.；Oka K.；Pola Kasei Kogyo Kk，Japan).Jpn.Kokai Tokkyo Koho JP 09048794 A2 18 Feb 1997 Heisei，7 pp.(Japan).(b)Sashita，Y.；Oka，K.；Hirano，T.；Mimaki，Y.；Kuroda，A.；Fujii，A.；Myata，Y.(Sashita Y.；Oka K.；PolaKasei Kogyo Kk，Japan).Jpn.Kokai Tokkyo Koho JP 09048796 A2 18 Feb 1997 Heisei，6 pp.(Japan).(c)Sashita，Y.；Oka，K.；Hirano，T.；Mimaki，Y.；Kuroda，A.；Fujii，A.；Myata，Y.(SashitaY.；Oka K.；Pola Kasei Kogyo Kk，Japan).Jpn.Kokai Tokkyo Koho JP 09048795 A2 18 Feb 1997Heisei，7 pp.(Japan).(d)Sashita，Y.；Oka，K.；Hirano，T.；Mimaki，Y.；Kuroda，A.；Fujii，A.；Myata，Y.(Sashita Y.；Oka K.；Pola Kasei Kogyo Kk，Japan).Jpn.Kokai Tokkyo Koho JP 09040691 A210 Feb 1997 Heisei，7 pp.(Japan).(e)Sashita，Y.；Oka，K.；Hirano，T.；Mimaki，Y.；Kuroda，A.；Fujii，A.；Myata，Y.(Sashita Y.；Oka K.；Pola Kasei Kogyo Kk，Japan).Jpn.Kokai Tokkyo KohoJP 09040690 A2 10 Feb 1997 Heisei，10 pp.(Japan).]。
1998年，鄧紹江、俞飚和惠永正等率先完成了OSW-1的全合成[Deng，S.；Yu，B.；Lou，Y.；Hui，Y.J.Org.Chem.1998，202]。隨后對于其全合成又有多次報道[(a)Morzycki，J.W.；Gryzkiewicz A.Carbohyd.Res.2002，1269-1274.(b)Yu，W.；Jin，Z.J.Am.Chem.Soc.2001，123，3369-3370.(c)Yu，W.；Jin，Z.J.Am.Chem.Soc.2002，124，6576-6583.]。近年來，我們小組通過對OSW-1及其衍生物的化學合成及生理活性的測定，對其構效關系有了進一步的了解[(a)Ma，X.；Yu，B.；Hui，Y.；Xiao，D.；Ding，J.Carbohydrate Research，329(3)，2000，495-505，.(b)Ma，X.；Yu，B.；Hui，Y.；Miao，Z.；Ding，J.Carbohydrate Research，334(2)，2001，159-164.(c)Ma，X.；Yu，B.；Hui，Y.；Miao，Z.；Ding，J.Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，11，2001，2153-2156.]。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供的是23位雜OSW-1類型皂甙的新化合物。
本發(fā)明要解決的問題是提供一種實用的合成23位雜OSW-1類型皂甙的合成方法。
本發(fā)明要解決的問題是提供23位雜OSW-1類型皂甙的用途。
本發(fā)明提供的23位雜OSW-1類型皂甙的新化合物的結構通式如下
其中X＝O，S，N；R1＝H，烷基(所述的烷基推薦為C1-C6的烷基)，?；?所述的酰基推薦為C1-C10的?；?或糖基；R2＝H或者烷基(所述的烷基推薦為C1-C3的烷基)，構型不定；R3＝直鏈或帶支鏈烷基(所述的烷基推薦為C1-C10的烷基)，當X＝N時，允許雙取代；C5-C6為單鍵或者雙鍵連接。R4＝糖基，推薦為帶取代基團的單糖或二糖。
上述R1為糖基時，所述的糖基推薦為葡萄糖基、甘露糖基、半乳糖基、阿拉伯糖基、木糖基等或它們組成的寡糖基；上述R4＝糖基中的糖基為帶取代基團的單糖或二糖，所述的帶取代基團的單糖或二糖上的取代基是C1-C10的?；龅膯翁腔蚨鞘瞧咸烟腔?、甘露糖基、半乳糖基、阿拉伯糖基、木糖基等或它們組成的二糖基。
所述的23位雜OSW-1類型皂甙的新化合物例如 其中的Ac＝乙?；?，MBz＝對甲氧基苯甲?；?br> 本發(fā)明首次提供了一種合成一系列23位雜OSW-1類型皂甙的新的實用的合成方法，該方法包括如下步驟
(1)16α-羥基的引入以乙酰去氫表雄酮或其5，6-雙氫化產(chǎn)物為原料，引入16α羥基；(2)Aldol反應引入 結構所示側鏈，同時構建得到17α-羥基，其中X為O或S，R2、R3如前所述；(3)16位羥基氧化成酮；(4)16位羥基構型的翻轉；(5)16位羥基的糖苷化；(6)脫除保護基得到目標化合物。
所述的16位糖基推薦為所示的D-木糖和L-阿拉伯糖形成的OSW-1二糖2-O-(4-甲氧基苯甲?；?-β-D-木糖吡喃糖基-(1→3)-2-O-乙?；?α-L-阿拉伯吡喃糖基。
具體來說，推薦各步驟如下(1)16α-羥基的引入以乙酰去氫表雄酮或其5，6-雙氫化產(chǎn)物為原料，醇/溴化酮回流下，然后重結晶得到16α-溴代酮，保護基操作保護3位羥基，堿性條件下水解，可以得到16α羥基。所述的醇推薦為甲醇，所述的堿性條件下水解推薦以DMF-H2O-CH2Cl2作溶劑。
(2)Aldol反應(羥醛縮合反應)引入側鏈使用酯或硫酯，在常規(guī)條件下下發(fā)生16-羥基位阻誘導的Aldol反應，在17位引入 結構所示側鏈，同時構建得到17α-羥基，其中X為O或S，R2、R3如前所述。所述的酯或硫酯推薦為 結構所示的酯或硫酯，R2、R3如前所述。
(3)16位羥基氧化成酮Swern氧化或者TPAP/NMO氧化16位羥基為酮。Swem氧化可參見Deng，S.；Yu，B.；Lou，Y.；Hui，Y.J.Org.Chem.1998，202.；TPAP/NMO氧化可參見Paquette，L. A.；Zhao，M.；Wang，H.L.J.Am.Chem.Soc.1998，120，5213。所述的TPAP為Tetrapropylammonium perruthenate，所述的NMO為4-methylmorpholine N-oxide。
(4)16位羥基構型的翻轉NaBH4/CeCl3·7H2O條件下還原翻轉16位羥基。
(5)16位羥基的糖苷化使用1位羥基用三氯乙酰亞胺酯活化的糖基給體，推薦為二糖給體，促進劑使用催化量的路易絲酸或質(zhì)子酸。所述的路易斯酸或質(zhì)子酸推薦為三烷基硅基三氟甲磺酸酯(如TMSOTf，TESOTf，TBSOTf)和三氟甲磺酸等。
(6)脫除保護基得到目標化合物，其結構通式如下 式中R1、R2、R3、R4、X如前所述。
推薦為如下結構通式 其中X＝O，S，N；R1＝H，烷基(C1-C6)，?；?C1-C10)或糖基；R2＝H或者烷基(C1-C3)，構型不定；R3＝直鏈或帶支鏈烷基(C1-C10)，當X＝N時，允許雙取代；C5-C6為單鍵或者雙鍵連接。R4＝C1-C10的酰基。
對于23位雜原子為N時，步驟(4)后用DIBAL-H-RNH2(or RR’NH·HCl)進行胺解，其中的R、R’＝C1-C10的烷基，DIBAL-H為diisobutylaluminiumhydride。后續(xù)步驟不變。
本發(fā)明提供的23位雜OSW-1類型皂甙的新結構化合物在體外活性試驗中顯示很強的對腫瘤細胞的抑制活性，半抑制濃度(IC50)到達1-0.01微克/毫升。如化合物1對胃癌細胞AGS、肝癌細胞7404、乳腺癌細胞MCF-7的半抑制濃度(IC50)分別為2.71、0.027、0.27微克/毫升；優(yōu)于作對照的順鉑(其半抑制濃度分別為7.23、2.51、5.61微克/毫升)。
具體實施例方式
實施例123-氧雜-OSW-1(1)的合成合成路線如下圖所示 試劑和條件(a)3當量CuBr2，CH3OH，回流，99％；(b)TBSCl，imidazole，DMF，室溫，過夜，96％；(c)1.3當量NaOH，DMF-H2O-CH2Cl2(v/v＝3∶1∶2)，室溫，過夜，94.5％；(d)i)iPr2NH，nBuLi，-78℃，15分鐘；ii)HMPA，THF，-78℃，C2H5CO2CH2CH(CH3)2，0.5小時；iii)6，-78 ℃，78％；(e)TPAP，NMO，CH2Cl2，4MS，室溫，過夜，91％ or Swern氧化；(f) NaBH4，CeCl3·7H2O，THF，-10℃，81％；(g)10，0.1當量TMSOTf，4MS，CH2Cl2，-20℃，2小時，49％；(h)Pd(MeCN)2Cl2，丙酮-水(v/v＝20∶1)，室溫，過夜，85.8％.
具體實驗和數(shù)據(jù)(1)16α-Bromo-17-oxo Steroids 4乙酰去氫表雄酮3(16.8克)和溴化銅(34.3克)于400毫升甲醇中回流，8小時后，反應完畢，冷卻，過濾，濃縮去掉部分溶劑，傾入200毫升水中，二氯甲烷萃取，飽和氯化鈉洗滌，無水Na2SO4干燥。過濾，旋干，甲醇重結晶，得白色固體4(16.9克，91％)。[α]24D＝-17.76(c0.8，CHCl3)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.39-5.37(m，1H)，4.56-4.54(m，1H)，3.56-3.53(m，1H)，1.04(s，3H)，0.93(s，3H)。
(2)16-Bromo-3β-O-(tert-butyldimethylsilyl)-17-oxo steroids 5化合物4(3.1克，8.4毫摩爾)，咪唑(1.4克，21毫摩爾)，TBSCl(tert-butyl-dimethylsilyl chloride)(3.8克，12.6毫摩爾)溶于30毫升干燥的DMF中，室溫攪拌過夜，CH2Cl2稀釋，水洗，5％HCl，飽和NaHCO3，飽和NaCl水溶液洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，旋干。快速柱層析(石油醚∶乙酸乙酯∶二氯甲烷＝34∶2∶1)，得到16位異構化的白色固體產(chǎn)物5(3.9克，96％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.34-5.33(m，1H)，4.55-4.53(m，1H)，3.52-3.41(m，1H)，1.02(s，3H)，0.92(s，3H)，0.89(s，6H)，0.06(s，6H)；EIMS m/z(％)425(同位素峰，100)，423(M-57+，94.20)；Anal.Calcd for C25H41BrO2SiC，62.35；H，8.58；FoundC，62.79；H，8.77。
(3)16α-Hydroxy-3β-O-(tert-butyldimethylsilyl)-17-oxo steroids 6化合物5(3.7克，7.68毫摩爾)溶于30毫升CH2Cl2和45毫升DMF的混合溶液中，NaOH(0.4克，10毫摩爾)溶于15毫升水中投入混合物中，室溫攪拌過夜，反應液水洗，飽和NaCl洗，有機相無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干，柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝7∶1)，得到白色固體6(3.0克，95％)。[α]26D＝10.40(c1.0，CHCl3)；1H NMR(300MHz，CDCl3)5.34-5.32(m，1H)，4.40-4.37(m，1H)，3.53-3.43(m，1H)，1.02(s，3H)，0.97(s，3H)，0.88(s，9H)，0.05(s，6H)；ESIMSm/z436(M+H2O+)，459(M+H2O+Na+)；Anal.Calcd for C25H42O3SiC，71.72；H，10.11；FoundC，71.41；H，10.08。
(4)16，17-cis Diol 7
條件A干燥的反應瓶中，氬氣保護下，iPr2NH(2.8毫升)于40毫升THF中，冷至-45℃，逐滴加入nBuLi(12毫升，1.6M)，恒溫10分鐘，冷至-78℃，逐滴加入丙酸異丁酯(3.2毫升)，恒溫1小時。逐滴加入溶于10毫升THF的化合物6(1克)，-78°反應3小時，停止反應，傾入60毫升10％的HCl中，乙酸乙酯萃取，飽和NaCl洗，無水硫酸鈉干燥。過濾，旋干，柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1)得泡沫狀固體7(1.02克，78％)。[α]26D＝-41.34(c1.0，CHCl3)；1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ5.25(m，1H)，4.18-4.16(m，1H)，3.88-3.84(m，1H)，3.54(br，1H)，3.53-3.41(m，1H)，2.75(q，J＝7.1Hz，1H)，1.23(d，J＝7.1Hz，1H)，1.02(s，3H)，0.97(s，3H)，0.93(s，3H)，0.83(s，9H)，0.75(s，3H)，0.05(s，6H)；EIMS m/z(％)548(M+)，491(M+-57)；Anal.Calcd for C30H52O5SiC，69.18；H，10.06；FoundC，69.42；H，10.32。
(5)Ketone 8TPAP(47毫克，0.26當量)和NMO(194毫克)溶于5毫升干燥CH2Cl2中，加入4MS，常溫加入7(348毫克)，4小時后，硅藻土過濾，旋干，柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝60∶1)得白色固體8(315毫克，91％)。[α]26D＝-114.4(c1.0，CHCl3)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.32-5.30(m，1H)，4.04-3.88(m，2H)，3.49(m，1H)，2.58(q，J＝7.2Hz，1H)，1.27(d，J＝7.2Hz，3H)，1.02(s，3H)，0.98(s，3H)，0.96(s，3H)，0.88(s，9H)，0.78(s，3H)，0.05(s，6H)；EIMS m/z(％)546(M+，7.53)，489(M-57+，56.28)；Anal.Calcd for C32H54O5SiC，70.28；H，9.95；FoundC，69.80；H，10.12。
更經(jīng)濟的方法為使用Swern氧化，操作同常規(guī)方法。
(6)16，17-trans Diol 9化合物8(280毫克)溶于12毫升THF中，-10℃下加入CeCl3·7H2O(243毫克)和NaBH4(130毫克)，2小時后，降溫至-78℃，緩慢加入0.5毫升CH3OH淬滅，再加入10毫升5％的鹽酸，CH2Cl2萃取，飽和氯化鈉洗，無水硫酸鈉干燥。過濾，旋干，柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝30∶1)得白色固體9(227毫克，81％)。[α]26D＝-38.0(c0.9，CHCl3)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.26-5.24(m，1H)，3.95-3.81(m，3H)，3.50-3.34(m，1H)，3.34(br，1H)，3.05(q，J＝7.1Hz，1H)，1.21(d，J＝7.1Hz，1H)，0.95(s，3H)，0.90(s，3H)，0.88(s，3H)，0.85(s，3H)，0.83(s，9H)，0.05(s，6H)；EIMS m/z(％)530(M-18+)，473(M-57-18+)；Anal.Calcd for C32H56O5SiC，70.02；H，10.28；FoundC，69.87；H，10.28。
(7)全保護的23-氧雜-OSW-1 119(150毫克，0.27毫摩爾)和10(1.69克，6.4當量)，4MS于30毫升干燥的CH2Cl2中，室溫攪拌15分鐘，冷至-20℃，3毫升TMSOTf(trimethylsilyltrifluoromethane sulfonate)(0.0045M的CH2Cl2液)逐滴加入，3小時后，2.5毫升Et3N淬滅，過濾，旋干，柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝30∶1-25∶1)得11(183毫克，49％)。[α]20D＝-38.3(c1.1，CHCl3)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.06 and 6.89(AB，4H)，5.30(m，1H)，4.98(br，1H)，4.90-4.89(m，1H)，4.81-4.80(1H)，4.39-4.35(1H)，4.30(br，1H)，3.86(s，3H)，2.87(q，J＝7.4Hz，3H)，2.00(s，3H)，1.17(d，J＝7.4Hz，1H)，0.06(s，6H)；13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ179.3，168.9，164.6，163.3，141.5，132.0，122.8，121.1，113.3，100.5，84.872.6，71.3，70.6，69.4，55.4，53.3，49.6，48.3，45.8，42.8，40.9，37.3，36.6，34.9，32.0，29.6，27.5，25.9，20.7，20.5，19.2，18.9，18.7，18.2，14.0，13.0，6.9，6.7，4.8，4.7，-4.6；MALDI-MS m/z1353.7(M+Na+)；HRMS(MALDI)m/z 1353.7702(M+Na+)Calcd for C70H122NaO16Si41353.7724。
(8)23-氧雜-OSW-1 1化合物11(41毫克，0.029毫摩爾)和約3毫克PdCl2(CH3CN)2溶于2毫升丙酮和水(v/v＝20∶1)中，室溫攪拌過夜，旋干，柱層析(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)得白色固體1(23毫克，86％)。[α]20D＝-47.2(c1.2，CHCl3)；1H NMR(300MHz，Py-d5)δ8.40 and 7.14(AB，4H)，5.82-5.75(2H)，5.46(m，1H)，5.30(d，J＝7.0Hz，1H)，4.67(d，J＝6.3Hz，1H)，4.63(s，1H)，4.51-4.25(8H)，3.81(s，3H)，3.27(q，J＝7.5Hz，1H)，2.01(s，3H)，1.55(d，J＝7.5Hz，3H)，1.13(s，3H)，1.02(s，3H)，0.88(d，J＝7.5Hz，6H)；13C NMR(75MHz，Py-d5)δ178.2，169.4，165.3，163.6，141.7，132.2，120.9，113.8，102.5，101.8，88.2，84.8，79.4，76.2，75.4，74.6，71.0，70.4，70.2，67.7，66.3，65.5，55.3，50.0，48.7，46.3，43.3，41.1，37.6，36.6，35.6，32.5，32.4，32.0，31.9，29.8，27.8，20.7，20.6，19.4，19.0，18.9，13.3，13.2；MALDI-MS m/z897.4(M+Na+)；HRMS(MALDI)m/z 897.4243(M+Na+)Calcd for C46H66O16Na897.4279。
實施例223-氮雜-OSW-12的合成合成路線如下圖所示 試劑和條件(a)3當量CuBr2，CH3OH，回流，99％；(b)TBSCl，imidazole，DMF，室溫，過夜，96％；(c)1.3當量NaOH，DMF-H2O-CH2Cl2(v/v＝3∶1∶2)，室溫，過夜，94.5％；(d)i)iPr2NH，nBuLi，-78℃，15分鐘；ii)HMPA，THF，-78℃，C2H5CO2CH2CH(CH3)2，0.5小時；iii)6，-78℃，78％；(e)TPAP，NMO，CH2Cl2，4MS，室溫，過夜，91％；或Swern氧化；(f)i)NaBH4，CeCl3·7H2O，THF，-10℃；ii)CH3OH，室溫，10分鐘，then water，室溫，0.5小時，92％.或條件f’；i)NaBH4，CeCl3·7H2O，THF，-10℃；ii)CH3OH，-78℃，0.5小時，then H2O至室溫(g)i)iBuNH2，THF，DIBAL-H，0℃，2小時；ii)14(or 14’)，THF，室溫，4小時，95％；(h)10，0.1當量TMSOTf，4MS，CH2Cl2，-20℃，2小時，65％；(i)Pd(MeCN)2Cl2，acetone-water(v/v＝20∶1)，室溫，過夜，75％.
具體實驗和數(shù)據(jù)(1)16，17-cis Diol 12反應條件同上述條件A，得白色固體12(1.94克，75％)，21-甲基異構體(0.31克，12％)。[α]26D＝-45.47(c1.0，CHCl3)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.30-5.28(m，1H)，4.19-4.11(m & q，1H+2H)，3.70-3.50(br，1H)，3.53-3.44(m，1H)，2.78(q，J＝7.1Hz，1H)，1.31-1.25(d & t，6H)，0.99(s，3H)，0.88(s，9H)，0.80(s，3H)，0.05(s，6H)；EIMS m/z(％)518(M+，5.36)，561(M-57+，100)；Anal.Calcd forC30H52O5SiC，69.18；H，10.06；FoundC，69.12；H，9.67。
(2)16-Ketone 13TPAP(221毫克，0.2當量)和NMO(1.14克，3當量)溶于30毫升干燥CH2Cl2中，加入4MS，常溫加入12(1.64克)，4小時后，硅藻土過濾，旋干，柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝30∶1)得白色固體13(1.49克，92％)。[α]26D＝-126.8(c1.0，CHCl3)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.32-5.30(m，1H)，4.28-4.20(m，2H)，3.53-3.46(m，1H)，2.56(q，J＝7.1Hz，1H)，1.33(t，J＝7.1Hz，3H)，1.26(d，J＝7.1Hz，3H)，1.02(s，3H)，0.89(s，6H)，0.78(s，3H)，0.06(s，6H)；EIMS m/z(％)520(M+)，463(M-57+，100)；Anal.Calcd for C30H50O5SiC，69.45；H，9.71；FoundC，69.20；H，9.74。
更經(jīng)濟的方法為使用Swern氧化，操作同常規(guī)方法。
(2)Lactone 14
化合物13(318毫克，19毫摩爾)，NaBH4(160毫克，135毫摩爾)和CeCl3·7H2O(320毫克，27毫摩爾)懸浮于15毫升干燥的THF中，0℃下反應1小時，加入1毫升CH3OH，室溫攪拌10分鐘，再加入1毫升水，室溫攪拌半小時，二氯甲烷稀釋，水洗，無水硫酸鈉干燥。過濾，旋干，柱層析(石油醚∶乙酸乙酯∶二氯甲烷＝9∶1∶2)得白色固體14(267毫克，92％)。[α]26D＝-85.23(c0.3，CHCl3)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.27-5.25(m，1H)，4.43(dd，J＝4.7Hz，3.2，1H)，3.46-3.39(m，1H)，2.67(q，J＝7.7Hz，1H)，1.29(d，J＝7.7Hz，3H)，1.03(s，3H)，0.89(s，9H)，0.81(s，3H)，0.06(s，6H)；ESIMS m/z492.4(M+Na+)，971.6(2M+Na+)；Anal.Calcd for C28H46O4SiC，70.84；H，9.77；FoundC，71.03；H，9.78。
(4)Amide 15DIBAL-H-iBuNH2復合物的制備0℃，氬氣保護下，4.9mL DIBAL-H(1Min甲苯)逐滴加入0.5毫升iBuNH2(5毫摩爾)的2毫升THF中，加完后，升至室溫，攪拌2小時，制得濃度約為0.72mol/L的溶液。
30毫克化合物14溶于2毫升無水THF中，氬氣保護室溫下，逐滴加入0.44毫升(0.72mol/L，5當量)的DIBAL-H-iBuNH2復合物，TLC檢測反應完成后，0.1毫升水淬滅，加入5毫升1M KHSO4攪拌，二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗，有機相無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干，快速柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)得白色固體(33毫克，95％)。也可以化合物14’為原料制備，操作相同。[α]20D＝-39.2(c0.5，CHCl3)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.77(br，1H)，5.29-5.28(m，1H)，4.21(s，1H)，3.92(m，1H)，3.50-3.43(m，1H)，3.12-3.00(m，2H)，2.86(q，J＝7.2Hz，1H)，2.66(m，1H)，1.24(d，J＝7.2Hz，3H)，1.13(s，3H)，0.98(s，3H)，0.91(s，3H)，0.88(d，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ178.4，141.5，120.8，85.1，81.8，72.5，49.6，48.4，46.7，46.3，42.7，41.8，37.3，36.5，35.8，32.6，32.0，31.9，31.8，28.5，25.9，20.4，20.1，19.4，18.2，13.4，-4.6；ESI-MS m/z570.4(M+Na+)；HRMS(ESI)m/z570.3963(M+Na)+Calcd for C32H57NO4SiNa+570.3949。
(5)全保護的23-氮雜-OSW-1 1615(33毫克，0.06毫摩爾)和10(70毫克，0.072毫摩爾)，200毫克4MS于3毫升干燥的CH2Cl2中，室溫攪拌15分鐘，冷至-20℃，30微升TMSOTf(0.1M的CH2Cl2液)逐滴加入，2小時后，0.1毫升Et3N淬滅，過濾，旋干，柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝15∶1-10∶1)得16(52毫克，65％)。[α]20D＝-24.3(c1.6，CHCl3)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.03 and 6.93(AB，4H)，7.20(m，1H)，5.62(s，1H)，5.30(m，1H)，4.89(s，1H)，4.82-4.81(m，2H)，4.47-4.42(2H)，3.89(s，3H)，3.50-3.47(m，1H)，3.12(q，J＝7.4Hz，1H)，1.99(s，3H)，1.32(d，J＝7.4Hz，3H)，0.06(s，6H)；δ180.1，169.1，166.7，163.4，141.3，132.0，122.0，121.1，113.6，100.5，98.1，91.2，85.5，76.1，73.9，72.5，71.9，70.6，68.4，65.3，63.2，59.7，55.5，49.6，48.2，46.1，45.7，42.9，40.4，37.2，36.5，35.0，32.3，32.1，31.9，28.2，25.9，20.7，20.6，20.2，20.1，19.2，18.2，14.5，14.4，6.9，6.7，5.1，5.0，4.7，-4.6；MALDI-MS m/z1352.7(M+Na+)；HRMS(MALDI)m/z 1352.7905(M+Na)+Calcd for C70H123NaNO15Si41352.7862。
(6)23-氮雜-OSW-1 2化合物16(40毫克，0.03毫摩爾)和約2毫克PdCl2(CH3CN)2溶于2毫升丙酮和水(v/v＝20∶1)中，室溫攪拌過夜，旋干，柱層析(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)得白色固體2(20毫克，75％)。[α]20D＝-45.3(c0.9，CHCl3)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.07 and 6.99(AB，4H)，5.65-5.62(m，1H)，5.32-5.31(m，1H)，5.27(s，1H)，4.90(br，1H)，4.90-4.87(m，1H)，4.71-4.70(m，1H)，4.39(br，1H)，4.32-4.31(m，1H)，4.28-4.27(m，1H)，3.96(br，1H)，3.88(s，3H)，2.58(q，J＝7.4Hz，1H)，2.02(s，3H)，1.19(d，J＝7.4Hz，3H)，1.00(s，3H)，0.84(s，3H)，0.79(d，J＝6.6Hz，6H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ179.4，169.6，166.0，164.3，140.5，132.2，121.6，121.0，114.2，99.5，99.4，90.4，85.3，76.1，72.6，72.4，71.7，70.3，69.1，63.7，63.0，59.6，55.6，49.5，48.0，46.2，45.7，42.3，40.6，37.1，36.4，34.7，32.2，31.8，31.6，28.2，20.8，20.6，20.0，19.9，19.4，14.5，13.5；MALDI-MS m/z896.5(M+Na+)；HRMS(MALDI)m/z 896.4446(M+Na+)Calcd for C46H67O15NaN896.4403。
權利要求
1. 23位雜虎眼萬年青皂甙類似物，其特征是該結構如下(1)3位為羥基或者羥基被烷基、?；蛱腔〈?；(2)21位為氫或者烷基，構型不定；(3)23位雜原子取代，包括N，S，O；(4)23位雜原子上連接取代基為烷基，當23位雜原子為N時，允許雙烷基取代；(5)16位為β羥基連接的糖基；(6)甾體5位和6位為單鍵或者雙鍵連接。其結構通式如下 其中X＝O，S，N；R1＝H，烷基，?；蛱腔?；R2＝H或者烷基，構型不定；R3＝直鏈或帶支鏈烷基，當X＝N時，允許雙取代；C5-C6為單鍵或者雙鍵連接，R4＝糖基，所述的糖基為帶取代基團的單糖或二糖。
2.如權利要求1所述的23位雜虎眼萬年青皂甙類似物，其特征是所述的R1＝H，C1-C6的烷基，C1-C10的酰基或糖基，所述的糖基為葡萄糖基、甘露糖基、半乳糖基、阿拉伯糖基、木糖基等或它們組成的寡糖基；R2＝H或者C1-C3的烷基，R3＝C1-C10的直鏈或帶支鏈烷基；其中16位β羥基連接的糖基中的糖基為帶取代基團的單糖或二糖，所述的帶取代基團的單糖或二糖上的取代基是C1-C10的酰基，所述的單糖或二糖是葡萄糖基、甘露糖基、半乳糖基、阿拉伯糖基、木糖基等或它們組成的二糖基。
3.如權利要求1所述的23位雜虎眼萬年青皂甙類似物，其特征是所述的16位糖基R4為 結構所示的D-木糖和L-阿拉伯糖形成的二糖2-O-?；?β-D-木糖吡喃糖基-(1→3)-2-O-乙酰基-α-L-阿拉伯吡喃糖基，其中的?；鵕5為C1-C10的酰基，推薦為單取代或者多取代的芳香酯。
4.如權利要求1所述的一種23位雜虎眼萬年青皂甙的實用的合成方法，其特征是該方法包括如下步驟(1)16α-羥基的引入以乙酰去氫表雄酮或其5，6-雙氫化產(chǎn)物為原料，引入16α羥基；(2)Aldol反應引入 結構所示的側鏈，同時構建得到17α-羥基，其中X，為O或S，R2、R3如權利要求1所述；(3)16位羥基氧化成酮；(4)16位羥基構型的翻轉；(5)16位羥基的糖苷化；(6)脫除保護基得到目標化合物。當X＝N時，步驟(4)后加入胺解反應，后續(xù)不變。
5.如權利要求4所述的合成方法，其特征是當所述23位雜虎眼萬年青皂甙結構中X＝O，S時，各步驟如下(1)16α-羥基的引入以乙酰去氫表雄酮或其5，6-雙氫化產(chǎn)物為原料，甲醇/溴化酮回流下，然后重結晶得到16α-溴代酮，保護基操作保護3位羥基，DMF-H2O-CH2Cl2作溶劑堿性條件下水解，可以得到16α羥基。(2)Aldol反應引入側鏈使用酯或硫酯，在常規(guī)條件下下發(fā)生16α-羥基位阻誘導的Aldol反應，在17位引入 結構所示的側鏈，同時構建得到17α-羥基，其中X為O或S，R2、R3如權利要求1所述。(3)16位羥基氧化成酮Swern氧化或者TPAP/NMO氧化16位羥基為酮。。(4)16位羥基構型的翻轉NaBH4/CeCl3·7H2O條件下還原翻轉16位羥基。(5)16位羥基的糖苷化使用1位羥基用三氯乙酰亞胺酯活化的糖基給體，促進劑使用催化量的路易絲酸或質(zhì)子酸。(6)脫除保護基得到目標化合物，其結構通式如權利要求1所述。
6.如權利要求4所述的的合成方法，其特征是所述的3位為羥基，16位糖基R4為 結構所示的D-木糖和L-阿拉伯糖形成的二糖2-O-?；鵕5-β-D-木糖吡喃糖基-(1→3)-2-O-乙?；?α-L-阿拉伯吡喃糖基，其中的?；鵕5為C1-C10的?；?。
7.如權利要求4所述的的合成方法，其特征是17位側鏈的引入采用16位羥基誘導的Aldol反應。
8.如權利要求4所述的合成方法，其特征是當所述23位雜虎眼萬年青皂甙結構中X為N時，各步驟如下步驟(1)，(2)，(3)，(4)同權利要求4所述之步驟(1)，(2)，(3)，(4)，對得到的23-氧雜的化合物用DIBAL-H-RNH2或者RR’NH·HCl進行胺解，其中R、R’為C1-C10的烷基。后續(xù)操作同權利要求4所述之步驟(5)，(6)。
9.如權利要求8所述的合成方法，其特征是對23-氧雜化合物或其內(nèi)酯化產(chǎn)物采用胺解合成23-氮雜-OSW-1。
10.如權利要求1所述的23位雜虎眼萬年青皂甙類似物的用途，其特征是用于制備抑制腫瘤的藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種23位雜虎眼萬年青OSW－1類型皂甙的新化合物及其合成方法和用途。本發(fā)明提供的實用的合成23位雜OSW－1類型皂甙新結構的合成方法包括如下步驟(1)16α－羥基的引入以乙酰去氫表雄酮或其5，6－雙氫化產(chǎn)物為原料，引入16α羥基；(2)Aldol反應引入側鏈，同時構建得到17α－羥基；(3)16位羥基氧化成酮；(4)16位羥基構型的翻轉；(5)16位羥基的糖苷化；(6)脫除保護基得到目標化合物。此類化合物顯示了很強的抗腫瘤活性。此前尚無對此類化合物結構和合成的報道。
文檔編號A61K31/704GK1556111SQ20041001574
公開日2004年12月22日 申請日期2004年1月9日 優(yōu)先權日2004年1月9日
發(fā)明者飚 俞, 俞飚, 史炳鋒 申請人:中國科學院上海有機化學研究所