專利名稱：天然降壓生物活性成分制備及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含天然降壓生物活性成份制劑的制備及應(yīng)用。尤其涉及一種從免疫乳牛分泌的牛奶中制備含天然降壓生物活性成份制劑的方法及應(yīng)用。
發(fā)明技術(shù)背景醫(yī)學(xué)界把高血壓分為原發(fā)性高血壓(即高血壓病)和繼發(fā)性高血壓(即癥狀性高血壓)兩大類。繼發(fā)性高血壓是指由于某些疾病引起的高血壓，高血壓僅僅是這種疾病的癥狀之一。原發(fā)性高血壓是常見病、多發(fā)病，其發(fā)病機(jī)理至今為止尚未完全探明，可能與壓力、肥胖、吸煙、高血脂、運(yùn)動(dòng)減少、高脂肪飲食、遺傳等有關(guān)。臨床上以動(dòng)脈血壓升高為主要特征，隨著病情加重，常常使心、腦、腎等臟器受累，發(fā)生功能性或器質(zhì)性改變，如高血壓性心臟病、心力衰竭、腦血管意外，腎功能衰竭等，是影響人類健康的最大元兇之一。
目前有多種降低血壓的藥物用于控制和降低血壓，包括利尿劑、β-受體阻滯劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和血管緊張素II拮抗劑等五大類，這些藥物雖能有效降低血壓，但是，長(zhǎng)期服用都有各種副作用，其中某些副作用還很嚴(yán)重，而且有些藥物價(jià)格昂貴，很多病人不能長(zhǎng)期堅(jiān)持服用，據(jù)統(tǒng)計(jì)，很大一部份病人，約40％的高血壓病人其血壓未能得到良好控制。高血壓病人盼望著用既能有效降低血壓，又不引發(fā)任何毒付作用的天然藥物來控制血壓。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，在高敏感免疫狀態(tài)的乳牛分泌的牛奶中，存在著一種能有效降低血壓又不引發(fā)任何毒付作用的天然生物活性成份。
從免疫接種的牛奶中制備某些生物活性物質(zhì)已經(jīng)有很多報(bào)導(dǎo)，美國專利(4324782)報(bào)導(dǎo)了治療齲齒的方法，美國專利(4636384)報(bào)導(dǎo)了從高敏感免疫狀態(tài)乳牛牛奶中制備改善心血管和肺功能的生物活性物質(zhì)的方法。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，制備有效降低血壓的天然生物活性成份制劑，應(yīng)用于原發(fā)性高血壓的治療。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是，選擇合適的抗原，制備多價(jià)抗原復(fù)合疫苗，免疫接種健康乳牛，并激發(fā)其進(jìn)入高敏感免疫狀態(tài)，通過血清學(xué)檢測(cè)確認(rèn)接種乳牛的高敏感免疫狀態(tài)后，收集其分泌的牛奶，采用超濾設(shè)備分離過濾，制備降壓活性成份，并應(yīng)用于高血壓的治療。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，只有在乳牛處于高敏感免疫狀態(tài)時(shí)乳牛分泌的牛奶中才含有較高濃度的降壓生物活性成份，普通乳牛分泌的牛奶中雖然也含有這一成份，但含量較低，因此，為了獲得較高濃度的降壓活性成份，乳牛必須被進(jìn)行足夠劑量疫苗免疫接種，并通過重復(fù)的追加接種，以維持乳牛的高敏感免疫狀態(tài)。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，用于乳牛免疫接種的抗原，可以是任何類型的抗原，只要這些抗原能引起乳牛免疫系統(tǒng)的應(yīng)答，這些抗原包括但不限于細(xì)菌、病毒、螺旋體、衣原體、寄生蟲、孢子體、真菌等，最好的抗原組合是細(xì)菌多價(jià)抗原，復(fù)合疫苗最好由多種滅活細(xì)菌制備，不僅可以激發(fā)乳牛體內(nèi)高敏感免疫狀態(tài)，還能在牛奶中產(chǎn)生高含量降壓生物活性成份，接種疫苗按照已知的方式制備。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，免疫接種乳牛的方法，可以采用任何能夠激發(fā)乳牛體內(nèi)免疫系統(tǒng)應(yīng)答的方法，包括，肌肉注射、靜脈注射、乳房?jī)?nèi)注射、腹膜內(nèi)注射、肛門給藥、口服等多種形式，最好的接種方式是肌肉內(nèi)注射，疫苗濃度為1.time.10.sup.8 cell/ml，接種劑量每次5ml，每?jī)芍苤貜?fù)追加接種一次，每次注射方式和劑量相同，共接種五次左右，以保持接種乳牛高敏感免疫狀態(tài)。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，檢測(cè)接種乳牛是否處于高敏感免疫狀態(tài)是必需的，有很多已知的免疫學(xué)方法可以用于此測(cè)試，最好的方法是在接種前后收集血清，用接種的多價(jià)滅活細(xì)菌抗原來檢測(cè)血清中是否存在與抗原發(fā)生粘集反應(yīng)的抗體，以及抗體的滴度，只有已產(chǎn)生高敏感免疫狀態(tài)的乳牛的牛奶才能作為原材料，來制備天然降壓生物活性成份。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，為了保持接種乳牛的高敏感免疫狀態(tài)，定期重復(fù)追加接種是必需的，追加接種疫苗的劑量、濃度與初次接種相同，重復(fù)追加接種的周期為每?jī)芍茏芳右淮危谧芳咏臃N期間，仍應(yīng)定期檢測(cè)接種乳牛血清中抗體滴度，以判斷其免疫狀態(tài)，一旦免疫接種乳牛出現(xiàn)免疫耐受現(xiàn)象，即應(yīng)仃用該乳牛的牛奶作為原材料，為了提高接種效果，可以聯(lián)合應(yīng)用多種接種方式，如在肌肉注射的同時(shí)聯(lián)合靜脈注射、乳房?jī)?nèi)注射或口服。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，測(cè)試牛奶中天然降壓生物活性成份是必需的，測(cè)試方法是采用層析柱分離其純凈物后進(jìn)行儀器分析和測(cè)試，或通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)直接測(cè)試其降血壓效果。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，分離和純化降壓生物活性成份的方法及步驟是，收集牛奶并脫脂，凝固并去除酪旦白，用分子量為10,000的超微濾膜分離過濾并去除分子量大于10,000的旦白質(zhì)，用離子交換柱捕獲分子量＜10,000帶負(fù)電荷的分子，最終用分子篩凈化分離，調(diào)PH至10.5，收集沉淀物，用冷凍干燥裝置制備干粉，其中富含天然降壓生物活性成份。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明方法制備的天然降壓生物活性物質(zhì)可以幫助高血壓患者降低血壓，既適用于原發(fā)性高血壓患者，也適合繼發(fā)性高血壓患者，還適合于伴有其他疾病的高血壓患者，既可以用來治療高血壓，也可以用于預(yù)防發(fā)生高血壓，既可以單獨(dú)應(yīng)用，也可以與其他具有降壓作用的成份聯(lián)合應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明制備的天然降壓生物活性成分可以用多種方式、劑型給患者施用，可以直接以牛奶或奶粉形式施用，也可以與各種醫(yī)藥等級(jí)的輔料混合制備各種片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、油劑、沖劑等劑型服用，還可以作為食品添加到各種食品中去，成為治療高血壓的功能性食品，但在加工過程中溫度不能超過140°F，否則會(huì)破壞其生物活性。
本發(fā)明的有益效果是，本發(fā)明方法制備的天然降壓生物活性成份，在降壓同時(shí)無任何毒付作用，適合患者長(zhǎng)期服用。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明實(shí)例1制備復(fù)合細(xì)菌疫苗從美國菌種培養(yǎng)中心(American Type Culture Collection)獲得下列菌種金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus，ATCC#.11631)、表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis.155)、釀膿葡萄球菌1型(streptococcus pyogenes.Typel.8671)、3型(Type3.10389)、5型(type5.12347)、8型(Type8.12349)、12型(type12.11434)、14型(type14.12972)、18型(type18.12357)、22型(type22.10403)、產(chǎn)氣桿菌(Aerobacteraerogenes.884)、大腸桿菌(Escherichia Coli.11126)、腸炎(沙門)桿菌(Salmonellaenteritidis 13076)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa 7700)、肺炎桿菌(KlebsiellaPneumoniae.9590)、鼠傷寒(沙門)桿菌(Salmonella typhimurium.13311)、出血桿菌(Haemophilus typhimurium.9333)、普通變形桿菌(Proteus vulgaris 13315)、志賀痢疾桿菌(Shigella dysenteriae.13313)、肺炎雙球菌(Diplococcus pneumoniae.6303)、變異鏈球菌(Strep.sanguinis 10556)、小鏈球菌(Strep.Mitis.6249)、出血鏈球菌(Strep.Sanguinis.10556)、唾液鏈球菌(Strep.Salivarius.13419)、缺乳鏈球菌(Strep.Agalactiae.13813)。每種細(xì)菌接種按照規(guī)定，采用合適的培養(yǎng)液，在37℃恒溫下培養(yǎng)48小時(shí)，觀察培養(yǎng)是否正常，如果細(xì)菌在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，用離心機(jī)分離培養(yǎng)液，細(xì)菌用無菌生理鹽水沖洗五次，用60℃溫度滅活2小時(shí)，殺死所有細(xì)菌，從已滅活的細(xì)菌中采集樣本繼續(xù)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)(37℃下培養(yǎng)2小時(shí))，確認(rèn)無細(xì)菌存活，收集的細(xì)菌冷凍干燥成為細(xì)菌粉，上述每種粉稱取1g，用500ml生理鹽水混懸，并反復(fù)稀釋，直至配制成濃度為2.times.10.sup.8bacterial cells/ml的溶液，(在660nm上顯示1.0光密度單位)。
實(shí)施例2用復(fù)合疫苗免疫接種乳牛選擇健康乳牛，用實(shí)施例1配制的復(fù)合細(xì)菌疫苗免疫接種乳牛，采用肌肉注射方式，在臀部肌肉注射5ml疫苗，每隔二周用相同劑量追加注射一次，共重復(fù)追加五次，在第一次注射后5天，采集接種乳牛的牛奶，采用放射免疫法測(cè)定復(fù)合抗原的抗體滴度，并與未免疫接種前采集的牛奶進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)免疫接種后復(fù)合抗原的抗體滴度增加百倍，證明接種乳牛處于高敏感免疫狀態(tài)。
實(shí)施例3制備降壓生物活性成份收集20公升免疫接種乳牛的牛奶，用脂肪分離機(jī)去脂，脫脂奶用中空纖維分離器(分子量為10,000)分離過濾牛奶，流速在自動(dòng)計(jì)量器上的讀數(shù)為80，入口壓力為30psi，出口壓力為25psi，收集分離過濾液，直接送入冷凍干燥裝置，制備為干粉。
實(shí)施例4驗(yàn)證降壓活性成份的降壓作用取實(shí)施例3制備的降壓生物活性成份20mg，放在自愿者的舌尖上，分別測(cè)量前后血壓值，在放置降壓成份后30分鐘左右，受試者的血壓(收縮壓)下降30％，重復(fù)試驗(yàn)數(shù)次，效果相似。
實(shí)施例5驗(yàn)證降壓生物活性成份臨床療效隨機(jī)選取高血壓患者10人，每天服用實(shí)施例3制備的降壓生物活性成份10g(用水沖服)連續(xù)服用12周，結(jié)果顯示，90％的病人血壓下降效果明顯，平均降壓效果達(dá)到8％～10％，無任何付作用發(fā)生。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及一種含天然降壓生物活性成份制劑的制備及應(yīng)用。尤其涉及一種從免疫乳牛分泌的牛奶中制備含天然降壓生物活性成份制劑的方法及應(yīng)用，其特征是，選擇合適的抗原，制備多價(jià)抗原復(fù)合疫苗，免疫接種健康乳牛，并激發(fā)其進(jìn)入高敏感免疫狀態(tài)，通過血清學(xué)檢測(cè)確認(rèn)接種乳牛的高敏感免疫狀態(tài)后，收集其分泌的牛奶，采用超濾設(shè)備分離過濾，制備降壓活性成份，并應(yīng)用于高血壓的治療。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，只有在乳牛處于高敏感免疫狀態(tài)時(shí)乳牛分泌的牛奶中才含有較高濃度的降壓生物活性成份，普通乳牛分泌的牛奶中雖然也含有這一成份，但含量較低，因此，為了獲得較高濃度的降壓活性成份，乳牛必須被進(jìn)行足夠劑量疫苗免疫接種，并通過重復(fù)的追加接種，以維持乳牛的高敏感免疫狀態(tài)。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，用于乳牛免疫接種的抗原，可以是任何類型的抗原，只要這些抗原能引起乳牛免疫系統(tǒng)的應(yīng)答，這些抗原包括但不限于細(xì)菌、病毒、螺旋體、衣原體、寄生蟲、孢子體、真菌等，最好的抗原組合是細(xì)菌多價(jià)抗原，復(fù)合疫苗最好由多種滅活細(xì)菌制備，不僅可以激發(fā)乳牛體內(nèi)高敏感免疫狀態(tài)，還能在牛奶中產(chǎn)生高含量降壓生物活性成份，接種疫苗按照已知的方式制備。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，免疫接種乳牛的方法，可以采用任何能夠激發(fā)乳牛體內(nèi)免疫系統(tǒng)應(yīng)答的方法，包括，肌肉注射、靜脈注射、乳房?jī)?nèi)注射、腹膜內(nèi)注射、肛門給藥、口服等多種形式，最好的接種方式是肌肉內(nèi)注射，疫苗濃度為1.time.10.sup.8 cell/ml，接種劑量每次5ml，每?jī)芍苤貜?fù)追加接種一次，每次注射方式和劑量相同，共接種五次左右，以保持接種乳牛高敏感免疫狀態(tài)。
5.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，檢測(cè)接種乳牛是否處于高敏感免疫狀態(tài)是必需的，有很多已知的免疫學(xué)方法可以用于此測(cè)試，最好的方法是在接種前后收集血清，用接種的多價(jià)滅活細(xì)菌抗原來檢測(cè)血清中是否存在與抗原發(fā)生粘集反應(yīng)的抗體，以及抗體的滴度，只有已產(chǎn)生高敏感免疫狀態(tài)的乳牛的牛奶才能作為原材料，來制備天然降壓生物活性成份。
6.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，測(cè)試牛奶中天然降壓生物活性成份是必需的，測(cè)試方法是采用層析柱分離其純凈物后進(jìn)行儀器分析和測(cè)試，或通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)直接測(cè)試其降血壓效果。
7.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，分離和純化降壓生物活性成份的方法及步驟是，收集牛奶并脫脂，凝固并去除酪旦白，用分子量為10,000的超微濾膜分離過濾并去除分子量大于10,000的旦白質(zhì)，用離子交換柱捕獲分子量＜10,000帶負(fù)電荷的分子，最終用分子篩凈化分離，調(diào)PH至10.5，收集沉淀物，用冷凍干燥裝置制備干粉，其中富含天然降壓生物活性成份。
8.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，為了保持接種乳牛的高敏感免疫狀態(tài)，定期重復(fù)追加接種是必需的，追加接種疫苗的劑量、濃度與初次接種相同，重復(fù)追加接種的周期為每?jī)芍茏芳右淮危谧芳咏臃N期間，仍應(yīng)定期檢測(cè)接種乳牛血清中抗體滴度，以判斷其免疫狀態(tài)，一旦免疫接種乳牛出現(xiàn)免疫耐受現(xiàn)象，即應(yīng)仃用該乳牛的牛奶作為原材料，為了提高接種效果，可以聯(lián)合應(yīng)用多種接種方式，如在肌肉注射的同時(shí)聯(lián)合靜脈注射、乳房?jī)?nèi)注射或口服。
9.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明制備的天然降壓生物活性成分可以用多種方式、劑型給患者施用，可以直接以牛奶或奶粉形式施用，也可以與各種醫(yī)藥等級(jí)的輔料混合制備各種片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、油劑、沖劑等劑型服用，還可以作為食品添加到各種食品中去，成為治療高血壓的功能性食品，但在加工過程中溫度不能超過140°F，否則會(huì)破壞其生物活性。
10.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明方法制備的天然降壓生物活性物質(zhì)可以幫助高血壓患者降低血壓，既適用于原發(fā)性高血壓患者，也適合繼發(fā)性高血壓患者，還適合于伴有其他疾病的高血壓患者，既可以用來治療高血壓，也可以用于預(yù)防發(fā)生高血壓，既可以單獨(dú)應(yīng)用，也可以與其他具有降壓作用的成份聯(lián)合應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含天然降壓生物活性成分制劑的制備及應(yīng)用，尤其涉及一種從免疫乳牛分泌的牛奶中制備含天然降壓生物活性成分制劑的方法及應(yīng)用，其特征是，選擇合適的抗原，制備多價(jià)抗原復(fù)合疫苗，免疫接種健康乳牛，并激發(fā)其進(jìn)入高敏感免疫狀態(tài)，通過血清學(xué)檢測(cè)確認(rèn)接種乳牛的高敏感免疫狀態(tài)后，收集其分泌的牛奶，采用超濾設(shè)備分離過濾，制備降壓活性成分，并應(yīng)用于高血壓的治療。
文檔編號(hào)A61K35/20GK1557337SQ200410015848
公開日2004年12月29日 申請(qǐng)日期2004年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月15日
發(fā)明者高春平 申請(qǐng)人:高春平