專利名稱：改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法。尤其是5-氟尿嘧啶、阿霉素、胰島素、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、人絨毛膜促性腺激素、破傷風(fēng)桿菌疫苗等藥物微球的制備方法。
背景技術(shù)：
近年來，藥物控釋微球在醫(yī)藥領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用。第一，作為各種藥物的控釋及多途徑給藥制劑，如可用作注射、口服、鼻腔吸入、眼部給藥等多途徑給藥；第二，作為化學(xué)栓塞制劑發(fā)揮栓塞及控釋雙重功能；第三，作為激素、疫苗等生理活性物質(zhì)的載體實(shí)現(xiàn)一次給藥達(dá)到長時間發(fā)揮療效、刺激機(jī)體免疫響應(yīng)的作用。
目前用于制備控釋微球的載體材料有多種，按來源可分為(1)天然高分子材料，如纖維素及其衍生物、殼聚糖及其衍生物、蛋白質(zhì)，海藻酸鈉，這類材料大多可降解且具有良好的生物相容性；(2)合成高分子材料，按生物降解特性又可分為非生物降解型高分子材料，如聚丙烯酸酯及其衍生物，聚醋酸乙烯酯，聚氨酯；生物降解型高分子材料，主要有聚酯、聚酸酐、聚原酸酯、聚碳酸酯以及聚膦腈等，其中聚乳酸，聚(丙交酯-共-乙交酯)，由于其良好的生物相容性及生物降解性已被美國FDA批準(zhǔn)作為醫(yī)用材料臨床使用。
控釋微球制劑中的生理活性物質(zhì)可以是脂溶性的，也可以是水溶性的。其中載有抗癌藥物、多肽蛋白類藥物以及疫苗的可降解性微球作為一類新型藥物劑型隨生物技術(shù)和基因工程的快速發(fā)展引起人們的高度重視。這種新型的緩釋劑型中，有的已經(jīng)作為上市產(chǎn)品，如醋酸亮丙瑞林、曲譜瑞林緩釋微球劑型已用于臨床治療前列腺癌、子宮內(nèi)膜異位癥及子宮平滑肌瘤等疾??；有的微球制劑正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，如抗神經(jīng)膠質(zhì)瘤的5-氟尿嘧啶/聚(丙交酯-共-乙交酯)微球已在法國一個研究小組進(jìn)行臨床試驗(yàn)，用于治療激素依賴型侏儒癥和兒童期發(fā)育不全的重組人生長激素緩釋微球制劑正在美國進(jìn)行臨床試驗(yàn)；有的雖然只是初步的基礎(chǔ)研究，但已顯示出廣泛的應(yīng)用前景，如口服胰島素制劑、載有亞單位疫苗或病毒疫苗的緩釋制劑。通過制成緩釋微球劑型，既可以避免生物活性物質(zhì)受體內(nèi)酶的降解和其它物質(zhì)的破壞失活，又可顯著延長藥物在體內(nèi)的釋放時間，達(dá)到一次給藥長期有效的目的。
相分離法或凝聚法是藥物微球化的最為常用的方法之一。在該法制備微球過程中，硅油是最為常用的高分子類凝聚劑或非溶劑，尤其是二甲基硅油。使用該類凝聚劑的缺點(diǎn)是第一，使用該類凝聚劑時，必須很好的控制水油相體積比、聚合物濃度、凝聚劑的體積及其滴加速度以使體系處于‘穩(wěn)定窗’內(nèi)，否則在制備過程中微球很容易聚集，且較難得到高包埋率的載藥微球。第二，許多研究表明，在微球制備過程中硅油等凝聚劑會被包埋于微球中，在之后的洗滌過程也很難徹底去除。而硅油具有一定的毒性，其在體內(nèi)不可降解也難以通過代謝排出體外，因而影響最終產(chǎn)品的應(yīng)用；同時該類物質(zhì)的存在又會影響微球的理化性能，進(jìn)而影響藥物的釋放行為，使得影響微球中藥物釋放的因素更加復(fù)雜化，這對于微球制劑的合理設(shè)計(jì)增加了困難。第三，該類凝聚劑的使用，導(dǎo)致制備中懸浮液體系的粘度增加很多，這種情況下很難得到小粒徑微球，而對于某些給藥途徑或一些生物活性物質(zhì)的控釋又要求微球具有很小的粒徑。這使得傳統(tǒng)相分離法的應(yīng)用受到了一定的限制。第四，使用該類乳化劑時，由于體系較大的粘度使得有機(jī)溶劑提取不徹底。而這些有機(jī)溶劑往往具有較強(qiáng)的毒性，比如二氯甲烷、氯仿等常用的鹵代烴具有致癌性、制畸性、突變性和一定的神經(jīng)毒性，美國藥典和歐洲藥典均規(guī)定這兩種溶劑在微球內(nèi)的殘余量分別要小于500ppm和50ppm。
鑒于以上原因，很多研究小組對傳統(tǒng)的相分離法做了改進(jìn)。Leelarasamee等人使用礦物油代替硅油作為凝聚劑，并使用不同大小口徑的注射裝置制備不同粒徑的微球。該法的局限性是要求有特殊的裝置，同時礦物油在微球中也有一定的殘留量。McGee等人將卵白蛋白和聚合物形成的乳液加入到含有一定乳化劑的硅油溶液中，得到了粒徑很小的微球。但該法的缺點(diǎn)是由于使用了大量體積的硅油，因而蛋白的損失量大，這對于價格昂貴的多肽、蛋白類藥物或疫苗的包埋是不適用的。為了減少最后微球中溶劑殘留量，Lewis等人采用較小的溶劑/凝聚劑比來制備載有組氨瑞林的PLGA微球，他們也建議使用芝麻油作為新的凝聚劑。Lawter等人以易于揮發(fā)的六二甲基硅烷為凝聚劑來制備曲譜瑞林微球。
盡管現(xiàn)有的研究對傳統(tǒng)的相分離法做了不小的改進(jìn)，但仍然存在不少問題，比如難揮發(fā)性凝聚劑的使用、粒徑的控制及有機(jī)溶劑的殘留。具有不同沸程的石油醚是一類易于揮發(fā)的有機(jī)溶劑，同時該類溶劑也被國際協(xié)調(diào)委員會(ICH)劃分為三級溶劑，即被允許在藥劑工業(yè)中使用的低毒性溶劑。司班類或磷脂類油溶性乳化劑是經(jīng)常用于制劑中的物質(zhì)，其體內(nèi)使用的安全性早已被證明。我們使用含有一定量司班類或磷脂類油溶性乳化劑的石油醚或正己烷、正庚烷溶液代替常用的硅油作為凝聚劑來制備水溶性小分子藥物、多肽蛋白類藥物和疫苗的高分子微球。該法既可以得到高包埋率的小粒徑微球，甚至納米球，又可減少微球中有機(jī)溶劑的殘留量。而這方面的工作至今也未見于文獻(xiàn)報道中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法。
首先將水溶性藥物和疫苗溶解在水溶液或緩沖鹽溶液中得到水相，可降解性載體材料即高分子聚合物溶解在二氯甲烷或氯仿中得到油相，司班類或磷脂類乳化劑與石油醚或正己烷、正庚烷組成的溶液作為凝聚劑或非溶劑，然后在冰浴中和以每分鐘500-40000轉(zhuǎn)高速攪拌下或超聲波作用下將水相乳化于油相中形成油包水乳液，在500-40000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘聦⒛蹌┗蚍侨軇┑渭佑谠撊橐褐械玫胶邪牍袒⑶虻亩嘞鄳腋∫后w系，再將該懸浮液加入到石油醚中以提取去除油相的有機(jī)溶劑，并在室溫下磁力攪拌30-60分鐘，待微球硬化后，離心分離，石油醚或正庚烷洗滌，冷凍干燥。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1)使用含有一定量司班類或磷脂類油溶性乳化劑的石油醚或正己烷、正庚烷溶液代替常用的硅油作為凝聚劑，可以避免所得微球中含有硅油類毒性物質(zhì)。
2)使用含有一定量司班類或磷脂類油溶性乳化劑的石油醚或正己烷、正庚烷溶液作為凝聚劑，既可以避免制備過程中微球的團(tuán)聚或聚集，又可得到很小粒徑的微球；采用適當(dāng)?shù)闹苽涔に?，可以得到納米球。
3)使用含有一定量司班類或磷脂類油溶性乳化劑的石油醚或正己烷、正庚烷溶液作為凝聚劑，可以有效的降低(減低5-100倍)微球中毒性有機(jī)溶劑的殘留量。
4)使用含有一定量司班類或磷脂類油溶性乳化劑的石油醚或正己烷、正庚烷溶液作為凝聚劑，可以得到高藥物包埋率(75-100％)的微球，且微球收率較高(75-100％)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明使用含有一定量司班類或磷脂類油溶性乳化劑的石油醚或正己烷、正庚烷溶液代替常用的硅油作為凝聚劑，采用相分離法來制備水溶性藥物和疫苗的高分子微球。為了防止微球的聚集，減小微球粒徑并降低微球中有機(jī)溶劑的殘留量，本發(fā)明采取如下措施。該法水相為溶解有藥物的水溶液或緩沖鹽溶液，其中藥物濃度為0.01-100mg/ml。油相為溶解有聚乳酸、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚(丙交酯-共-三亞甲基碳酸酯)的二氯甲烷或氯仿溶液，其中聚合物濃度為1-200mg/ml。司班類或磷脂類乳化劑與石油醚或正己烷、正庚烷組成的溶液作為凝聚劑，其中司班類或磷脂類乳化劑的濃度為0.05-20％(g/ml)，凝聚劑的體積為油相體積的0.5-5倍，其滴加速度為每分鐘0.5-20毫升。固化步驟中使用的石油醚或正己烷、正庚烷的體積為油相體積的1-50倍。在冰浴中和以每分鐘500-40000轉(zhuǎn)高速攪拌下或超聲波作用下將水相乳化于油相中形成油包水乳液，在500-40000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘聦⒛蹌?或非溶劑)滴加于該乳液中得到含有半固化微球的多相懸浮液體系，再將該懸浮液加入到一定量的石油醚中，并在室溫下磁力攪拌30-60分鐘以提取去除油相的有機(jī)溶劑，待微球硬化后，離心分離，石油醚或正庚烷洗滌，冷凍干燥即可。
下面結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
實(shí)施例1水相采用0.5ml濃度為50mg/ml的牛血清白蛋白(BSA，分子量為67000)的水溶液，油相為4.0ml濃度為50mg/ml的聚(丙交酯-共-乙交酯)(摩爾比為75∶25，重均分子量為45000)的二氯甲烷溶液，凝聚劑為粘度為1000cs的二甲基硅油，制備時將水相在2800轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘氯榛谟拖嘀?，形成的油包水初乳，在相同的攪拌速度下?.0ml凝聚劑加入到該初乳中，其滴加速度為4.0ml/min，得到含有半固化微球的多相懸浮液體系，再將該懸浮液在機(jī)械攪拌下加入50ml石油醚(沸程60-90℃)中以提取去除油相溶劑，室溫下磁力攪拌30分鐘，待微球硬化后，離心分離，石油醚洗滌，冷凍干燥即可。所得微球5-氟尿嘧啶的包埋率為88.7％，微球收率為85％，微球數(shù)均粒徑為46.0μm。溶劑殘留量為4.4μl/mg。
實(shí)施例2水相采用0.5ml濃度為50mg/ml的5-氟尿嘧啶的鹽酸溶液(0.1N)，油相為5.0ml濃度為50mg/ml的聚(丙交酯-共-乙交酯)(摩爾比為60∶40，重均分子量為35000)的二氯甲烷溶液，凝聚劑為含有2.5％(重量/體積)司班20的石油醚(沸程60-90℃)溶液，制備時將水相在超聲波作用(200w，10s)下乳化于油相中，形成的油包水初乳，然后2800轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘聦?0ml凝聚劑加入到該初乳中，其滴加速度為5.0ml/min，得到含有半固化微球的多相懸浮液體系，再將該懸浮液在機(jī)械攪拌下加入50ml石油醚(沸程60-90℃)中以提取去除油相溶劑，室溫下磁力攪拌30分鐘，待微球硬化后，離心分離，石油醚洗滌，冷凍干燥即可。所得微球5-氟尿嘧啶包埋率為80.7％，微球收率為90％，微球數(shù)均粒徑為6.0μm。溶劑殘留量為0.4μl/mg。
實(shí)施例3水相采用0.5ml濃度為10mg/ml的牛胰島素(分子量為5800)的水溶液，油相為4.0ml濃度為50mg/ml的聚(丙交酯-共-乙交酯)(摩爾比為50∶50，重均分子量為40000)的二氯甲烷溶液，凝聚劑為含有5.0％(重量/體積)司班20的石油醚(沸程60-90℃)溶液，制備時將水相在4000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘氯榛谟拖嘀?，形成的油包水初乳，在相同的攪拌速度下?0ml凝聚劑加入到該初乳中，其滴加速度為10.0ml/min，得到含有半固化微球的多相懸浮液體系，再將該懸浮液在機(jī)械攪拌下加入50ml的石油醚(沸程60-90℃)中以提取去除油相溶劑，室溫下磁力攪拌45分鐘，待微球硬化后，離心分離，正庚烷洗滌，冷凍干燥即可。所得微球牛胰島素包埋率為90.5％，微球收率為85％，微球數(shù)均粒徑為4.0μm。溶劑殘留量為0.15μl/mg。
實(shí)施例4水相采用0.5ml濃度為5.0mg/ml的人絨毛膜促性腺激素(HCG，免疫活性為14000IU/mg)的磷酸緩沖鹽溶液(0.1M，pH7.4)，油相為4.0ml濃度為50mg/ml的聚(丙交酯-共-乙交酯)(摩爾比為50∶50，重均分子量為30000)的二氯甲烷溶液，凝聚劑為含有10.0％(重量/體積)司班80的石油醚(沸程30-60℃)溶液，制備時將水相在3000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘氯榛谟拖嘀?，形成的油包水初乳，在相同的攪拌速度下?0ml凝聚劑加入到該初乳中，其滴加速度為2.0ml/min，得到含有半固化微球的多相懸浮液體系，再將該懸浮液在機(jī)械攪拌下加入50ml的石油醚(沸程30-60℃)中以提取去除油相溶劑，室溫下磁力攪拌60分鐘，待微球硬化后，離心分離，正己烷洗滌，冷凍干燥即可。所得微球HCG包埋率為90.3％，微球收率為95％，微球數(shù)均粒徑為2.5μm。溶劑殘留量為0.06μl/mg。
實(shí)施例5水相采用0.5ml濃度為50mg/ml的牛血清白蛋白(BSA，Mw＝67000)的水溶液，油相為5.0ml濃度為的40mg/ml的聚(丙交酯-共-三亞甲基碳酸酯)(摩爾比為80∶20，重均分子量為28000)的二氯甲烷溶液，凝聚劑為含有5.0％(重量/體積)司班80的石油醚(沸程30-60℃)溶液，制備時將水相在2800轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘氯榛谟拖嘀?，形成的油包水初乳，在相同的攪拌速度下?2.5ml凝聚劑加入到該初乳中，其滴加速度為2.5ml/min，得到含有半固化微球的多相懸浮液體系，再將該懸浮液在機(jī)械攪拌下加入100ml的石油醚(沸程30-60℃)中以提取去除油相溶劑，室溫下磁力攪拌60分鐘，待微球硬化后，離心分離，石油醚(沸程30-60℃)洗滌，冷凍干燥即可。所得微球BSA包埋率為99.0％，微球收率為90％，微球數(shù)均粒徑為8.5μm。溶劑殘留量為0.1μl/mg。
實(shí)施例6水相采用0.5ml濃度為50mg/ml的人血清白蛋白(HSA)的水溶液，油相為4.0ml濃度為的50mg/ml的聚(丙交酯-共-乙交酯)(摩爾比為75∶25，重均分子量為38000)的二氯甲烷溶液，凝聚劑為含有10.0％(重量/體積)司班80的石油醚(沸程30-60℃)溶液，制備時將水相在2800轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘氯榛谟拖嘀校纬傻挠桶跞椋谙嗤臄嚢杷俣认聦?.5ml凝聚劑加入到該初乳中，其滴加速度為7.5ml/min，得到含有半固化微球的多相懸浮液體系，再將該懸浮液在機(jī)械攪拌下加入50ml的石油醚(沸程30-60℃)中以提取去除油相溶劑，室溫下磁力攪拌60分鐘，待微球硬化后，離心分離，石油醚(沸程30-60℃)洗滌，冷凍干燥即可。所得微球HSA包埋率為90.5％，微球收率為85％，微球數(shù)均粒徑為4.5μm。溶劑殘留量為0.12μl/mg。
實(shí)施例7水相采用0.5ml濃度為50mg/ml的人血清白蛋白(HSA)的水溶液，油相為5.0ml濃度為的40mg/ml的聚(丙交酯-共-乙交酯)(摩爾比為50∶50，重均分子量為58000)的二氯甲烷溶液，凝聚劑為含有10.0％(重量/體積)司班80的正庚烷溶液，制備時將水相在10000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘氯榛谟拖嘀?，形成的油包水初乳，在相同的攪拌速度下?0ml凝聚劑加入到該初乳中，其滴加速度為10.0ml/min，得到含有半固化微球的多相懸浮液體系，再將該懸浮液在機(jī)械攪拌下加入75ml的石油醚(沸程30-60℃)中以提取去除油相溶劑，室溫下磁力攪拌60分鐘，待微球硬化后，離心分離，正己烷洗滌，冷凍干燥即可。所得微球HSA包埋率為77.6％，微球收率為75％，微球數(shù)均粒徑為500nm。溶劑殘留量為0.17μl/mg。
實(shí)施例8水相采用0.5ml破傷風(fēng)桿菌疫苗的水溶液(15000IU/ml)，油相為5.0ml濃度為的50mg/ml的聚乳酸(重均分子量為36000)的二氯甲烷溶液，凝聚劑為含有0.1％(重量/體積)卵磷脂的正己烷溶液，制備時將水相在5600轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘氯榛谟拖嘀?，形成的油包水初乳，在相同的攪拌速度下?.5ml凝聚劑加入到該初乳中，其滴加速度為4.0ml/min，得到含有半固化微球的多相懸浮液體系，再將該懸浮液在機(jī)械攪拌下加入200ml的石油醚中(沸程30-60℃)以提取去除油相溶劑，室溫下磁力攪拌60分鐘，待微球硬化后，離心分離，石油醚洗滌，冷凍干燥即可。破傷風(fēng)桿菌疫苗的包埋率為85.7％，微球收率為80％，微球數(shù)均粒徑為3.5μm。溶劑殘留量為0.12μl/mg。
實(shí)施例9水相采用0.5ml阿霉素的水溶液(10mg/ml)，油相為4.0ml濃度為的50mg/ml的聚乳酸(重均分子量為36000)的二氯甲烷溶液，凝聚劑為含有5.0％(重量/體積)司班80的石油醚(沸程60-90℃)溶液，制備時將水相在超聲波作用(150w，15s)下乳化于油相中，形成的油包水初乳，然后2800轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘聦?0ml凝聚劑加入到該初乳中，其滴加速度為5.0ml/min，得到含有半固化微球的多相懸浮液體系，再將該懸浮液在機(jī)械攪拌下加入100ml的石油醚中(沸程60-90℃)以提取去除油相溶劑，室溫下磁力攪拌30分鐘，待微球硬化后，離心分離，石油醚洗滌，冷凍干燥即可。所得微球中阿霉素的包埋率為86.7％，微球收率為90％，微球數(shù)均粒徑為9.5μm。溶劑殘留量為0.23μl/mg。
權(quán)利要求
1.一種改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法，其特征在于首先將水溶性藥物和疫苗溶解在水溶液或緩沖鹽溶液中得到水相，可降解性載體材料即高分子聚合物溶解在二氯甲烷或氯仿中得到油相，司班類或磷脂類乳化劑與石油醚或正己烷、正庚烷組成的溶液作為凝聚劑或非溶劑，然后在冰浴中和以每分鐘500-40000轉(zhuǎn)高速攪拌下或超聲波作用下將水相乳化于油相中形成油包水乳液，在500-40000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柘聦⒛蹌┗蚍侨軇┑渭佑谠撊橐褐械玫胶邪牍袒⑶虻亩嘞鄳腋∫后w系，再將該懸浮液加入到石油醚中以提取去除油相的有機(jī)溶劑，并在室溫下磁力攪拌30-60分鐘，待微球硬化后，離心分離，石油醚或正庚烷洗滌，冷凍干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法，其特征在于所說的凝聚劑或非溶劑為司班類或磷脂類乳化劑與石油醚或正己烷、正庚烷組成的溶液，司班類或磷脂類乳化劑的濃度按重量體積比表示為0.05-20％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法，其特征在于所說的石油醚的沸程為30-60℃、60-90℃、90-120℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法，其特征在于所說的凝聚劑或非溶劑的體積為油相體積的0.5-5倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法，其特征在于所說的凝聚劑或非溶劑的滴加速度為每分鐘0.5-20毫升。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法，其特征在于所說的固化步驟中使用的石油醚的體積為油相體積的1-50倍。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法，其特征在于所說的水溶性藥物和疫苗為5-氟尿嘧啶、阿霉素、胰島素、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、人絨毛膜促性腺激素、破傷風(fēng)桿菌疫苗。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法，其特征在于所說的可降解性載體材料為聚乳酸、聚(丙交酯—共—乙交酯)、聚(丙交酯—共—三亞甲基碳酸酯)生物降解高分子材料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種改進(jìn)的包埋水溶性藥物和疫苗的高分子微球的制備方法。該體系的初始乳液由水相和油相組成，其水相為藥物的水溶液或緩沖鹽溶液，油相為聚合物溶液，凝聚劑或非溶劑為含有一定量的油溶性乳化劑的石油醚或正己烷、正庚烷溶液。制備時將一定量的水相乳化于油相中得到油包水乳液，在攪拌下將一定量的凝聚劑加入到該乳液中得到含有半固化微球的多相懸浮液體系，再將該懸浮液加入到一定量的石油醚中，并在室溫下磁力攪拌一定時間。待微球完全固化后，離心分離并用石油醚洗滌微球。本發(fā)明以含有油溶性乳化劑的石油醚或正己烷、正庚烷溶液為凝聚劑，以相分離法成功制備了載有水溶性藥物和疫苗的高分子微球。
文檔編號A61K47/34GK1557282SQ20041001600
公開日2004年12月29日 申請日期2004年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月17日
發(fā)明者朱康杰, 張建祥 申請人:浙江大學(xué)