專利名稱：香加皮強心作用有效提取物、制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療急、慢性充血性心力衰竭的中藥有效提取物、有效提取物的制備方法以及在制備治療急、慢性充血性心力衰竭藥物中的用途。
背景技術(shù)：
香加皮是蘿藦科植物杠柳的干燥根皮，中醫(yī)認(rèn)為其具有祛風(fēng)濕、強筋骨的功效，主要用于風(fēng)寒濕痹、腰膝酸軟、心悸氣短、下肢浮腫等。因香加皮兼有強心及利尿的功效，近年來香加皮常和益氣、溫陽、化瘀、利水的其它中藥組成復(fù)方，應(yīng)用于CHF的臨床治療，如復(fù)方生脈飲，強心飲、芪加沖劑、北五加皮合劑、心衰靈等。從其制備工藝來看，均為全成分入藥的復(fù)方。香加皮中強心苷成分杠柳毒苷未得到富集；杠柳毒苷的含量也不能得到有效的控制。
日本學(xué)者Seiichi Sakama(Seiichi Sakama，et al.Constituents of Chinese Crude Drug“Wujiapi”I.Studies on the Aglycones of Steroidal Glycosides of Pei-Wujiapi(1).Chem.Pharm.Bull，1968，16(2)326)公開的技術(shù)中，香加皮的提取是以95％乙醇為溶劑，對杠柳毒苷的提取效率較低。其后無關(guān)于香加皮提取工藝的報道，也無關(guān)于香加皮強心作用的有效提取物制備的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種香加皮強心作用有效提取物。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種香加皮強心作用有效提取物的制備方法。
本發(fā)明的第三個目的是提供一種香加皮強心作用有效提取物在制備治療急、慢性充血性心力衰竭藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下香加皮強心作用有效提取物，是用下述方法制備而成(1)香加皮藥材的提取以體積百分比濃度為40％～80％的乙醇或40％～100％甲醇為提取溶劑，對香加皮進(jìn)行提取，提取后蒸去溶劑，加水稀釋后過濾或離心，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離香加皮水溶液經(jīng)大孔樹脂吸附，用2～10倍樹脂床體積的乙醇洗脫，所述乙醇的體積百分比濃度為50％～95％，收集洗脫液，濃縮，干燥后，即得香加皮強心作用有效提取物。
一種香加皮強心作用有效提取物的制備方法，包括如下步驟(1)香加皮藥材的提取以體積百分比濃度為40％～80％的乙醇或40％～100％甲醇為提取溶劑，對香加皮進(jìn)行提取，提取后蒸去溶劑，加水稀釋后過濾或離心，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離香加皮水溶液經(jīng)大孔樹脂吸附，用2～10倍樹脂床體積的乙醇洗脫，所述乙醇的體積百分比濃度為50％～95％，收集洗脫液，濃縮，干燥后，即得香加皮強心作用有效提取物。
在香加皮藥材的提取過程中，提取溶劑乙醇的體積百分比濃度以50％～70％為宜，最好是60％。
在大孔樹脂吸附分離過程中，洗脫溶劑乙醇的體積百分比濃度以60％～70％為宜。
所述大孔樹脂為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。
所述非極性大孔樹脂是以苯乙烯或乙基苯乙烯或α-甲基苯乙烯為骨架的大孔樹脂。
所述弱極性大孔樹脂是以苯乙烯為骨架的大孔樹脂。
所述步驟(2)中香加皮水溶液經(jīng)大孔樹脂吸附后，最好先用1～4倍樹脂床體積的體積百分比濃度為10％～30％的乙醇預(yù)洗，再用60％～70％乙醇洗脫。
一種香加皮強心作用有效提取物在制備治療急、慢性充血性心力衰竭藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的一種香加皮強心作用有效提取物可以組合物的形式通過口服給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、顆粒劑或膠囊劑等。
本發(fā)明的各種劑型可以按藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如使一種香加皮強心作用有效提取物與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。
離體心臟灌流實驗證明恒壓、恒流灌注條件下，香加皮有效提取物能顯著升高大鼠離體心臟的左心室收縮壓，增加室內(nèi)壓最大上升速率，降低左心室舒張末期壓力從而改善心功能，具有強心作用；而預(yù)洗部位無此作用。
應(yīng)用本發(fā)明的方法制備的一種香加皮強心作用有效提取物，去除了原藥材香加皮的與強心作用無關(guān)的糖類、氨基酸、多肽、無機鹽及其他雜質(zhì)，富集了強心成分杠柳毒苷，尤其經(jīng)10％～30％乙醇預(yù)洗后，富集效果更好；而且大大降低了出膏率。本發(fā)明對于減少藥物的劑量，改進(jìn)劑型，提高療效，便于質(zhì)量控制具有重要意義。本發(fā)明用40％～80％乙醇提取，對杠柳毒苷提取完全；用大孔樹脂可一次完成除雜和有效成分的富集。本方法成本低，操作簡單，有實用價值。


圖1為香加皮有效提取物的色譜圖；圖2為大孔樹脂預(yù)洗部位的色譜圖；圖3為香加皮有效提取物對大鼠離體心臟左心室收縮壓影響；圖4為香加皮有效提取物對大鼠離體心臟左心室舒張壓影響；圖5為香加皮有效提取物對大鼠離體心臟室內(nèi)最大上升速率影響；圖6為香加皮有效提取物對大鼠離體心臟室內(nèi)最大下降速率影響。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明
實施例1(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加3000mL體積百分比濃度為80％乙醇溶液，回流提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至約400mL，加600mL水稀釋后過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的800mL D101大孔樹脂(天津農(nóng)藥廠生產(chǎn))吸附后，先用800mL水洗，后用800mL 30％的乙醇預(yù)洗，再用1600mL 95％乙醇洗脫，將洗脫液減壓蒸干，真空干燥，得香加皮強心作用有效提取物17.5克，出膏率為3.5％，其杠柳毒苷所占質(zhì)量百分比為3.18％。(如果提取的香加皮水溶液未經(jīng)大孔樹脂處理，其出膏率為21.3％，杠柳毒苷所占質(zhì)量百分比為0.52％)。
香加皮有效提取物的色譜圖見圖1，圖中1為杠柳毒苷峰；預(yù)洗部位的色譜圖見圖2，圖中無杠柳毒苷峰。
實施例2香加皮有效提取物對離體心臟心功能的影響選取健康大鼠24只，隨機分為3組分別為空白對照組、香加皮有效提取物A組、香加皮預(yù)洗部位B組，每組8只，大鼠斷頭處死，迅速取出心臟，置于4℃K-H液中，輕輕排出殘留血液，將心臟連接到Langendorff系統(tǒng)灌流裝置并用絲線固定，開始灌流，灌流液維持37℃，并通入95％的氧氣。接好心電電極，待心電平穩(wěn)后，將灌注壓調(diào)節(jié)在46±3mmHg左右，灌流量調(diào)節(jié)在6.00±0.06ml/min進(jìn)行恒壓恒流灌注，穩(wěn)定后記錄給藥前左心室收縮壓(LVSP)、左心室舒張末期壓力(LVEDP)、室內(nèi)壓最大上升速率(±dp/dtmax)、心率(HR)，經(jīng)給藥孔緩慢注入用Krebs-Henseleit液溶解的藥液，A、B組分別按40mg生藥/心臟一次性給藥；空白組給同體積的Krebs-Henseleit液/心臟，記錄給藥之前以及給藥后10分鐘內(nèi)上述各項指標(biāo)。
Krebs-Henseleit液，其組成為(mmol/L)NaCl 118，，KCl 4.7，MgSO4·7H2O 1.2，，CaCl22.0，，NaHCO320，KH2PO41.2，，葡萄糖11.1，PH值7.2-7.4。
結(jié)果數(shù)據(jù)見表1和表2，附圖3、附圖4、附圖5和附圖6。
結(jié)果表明在恒壓、恒流灌注條件下，香加皮有效提取物A能顯著升高大鼠離體心臟的LVSP，增加±dp/dtmax，降低LVEDP從而改善心功能，具有強心作用；香加皮預(yù)洗部位B無此作用；A、B對大鼠心率均無顯著影響。
實施例3(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加4000mL體積百分比濃度為40％乙醇溶液，進(jìn)行滲漉提取，將提取液減壓濃縮至約500mL，加500mL水稀釋后過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的800mL AB-8大孔樹脂(南開大學(xué)化工廠生產(chǎn))吸附，用8000mL 50％乙醇洗脫，將洗脫液減壓蒸干溶劑，得香加皮強心作用的有效提取物31.0克，出膏率6.2％，其杠柳毒苷所占質(zhì)量百分比為1.65％。
實施例4(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加4000mL體積百分比濃度為70％乙醇溶液，回流提取2.5小時，提取2次，合并提取液，減壓濃縮至約300mL，加700mL水稀釋后過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的800mL D301大孔樹脂(天津農(nóng)藥廠生產(chǎn))吸附，用3200mL 70％乙醇洗脫，減壓蒸干溶劑，得香加皮強心作用的有效提取物33.6克，出膏率為6.7％，其杠柳毒苷所占質(zhì)量百分比為1.57％。
實施例5(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加4000mL體積百分比濃度為50％乙醇溶液冷浸，將提取液減壓濃縮至約300mL，加700mL水稀釋后過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的HPD100大孔樹脂(滄州寶恩化工有限公司生產(chǎn))吸附，用3200mL 70％乙醇洗脫，減壓蒸干溶劑，得香加皮強心作用的有效提取物31.6克，出膏率為6.3％，其杠柳毒苷所占質(zhì)量百分比為1.73％。
實施例6(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加8000mL體積百分比濃度為40％甲醇溶液進(jìn)行滲漉提取，將提取液減壓濃縮至約400mL，加700mL水稀釋后過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的上試102(上海試劑廠生產(chǎn))吸附后，先用800mL水洗，后用3200mL 10％的乙醇預(yù)洗，再用8000mL 50％乙醇洗脫，將洗脫液減壓蒸干，真空干燥，得香加皮強心作用有效提取物17.4克，出膏率為3.5％，其杠柳毒苷所占質(zhì)量百分比為3.72％。
實施例7(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加3000mL甲醇溶液，回流提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至干，加800mL水稀釋后過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的D201大孔樹脂(天津農(nóng)藥廠生產(chǎn))吸附后，先用1600mL水洗，后用1600mL 30％的乙醇預(yù)洗，再用8000mL 60％乙醇洗脫，將洗脫液減壓蒸干，真空干燥，得香加皮強心作用有效提取物15.8克。出膏率為3.2％，其杠柳毒苷所占質(zhì)量百分比為3.87％。
在實際操作時，還可以選用的非極性大孔樹脂型號為D101(天津農(nóng)藥廠)；HPD 100，或HPD 300(滄州寶恩化工有限公司)；GDX-104(天津試劑二廠生產(chǎn))；SIP-1100，或SIP-1200，或SIP-1300，或SIP-1400(上海醫(yī)藥工業(yè)研究院)；上試101，或上試102，或上試401，或上試402(上海試劑廠)；南大3520，或D1，或D，或Dm2，Dm5(南開大學(xué)化工廠)等等?？梢赃x的弱極性大孔樹脂的型號為D201或D101(天津農(nóng)藥廠)；AB-8(南開大學(xué)化工廠)；HPD 500，HPD 400(滄州寶恩化工有限公司)；D201，D301(天津農(nóng)藥廠)等等。另外，還可以選用國外Diaion(HP10，HP20，HP21)，Amberlite(XAD-1，XAD-2)。
實施例8制成片劑(1000片配方)香加皮強心作用有效提取物125g
乳糖250g微晶纖維素105g羥甲基淀粉鈉15g5％PVPK30溶液100ml阿斯巴甜5g硬脂酸鎂2g制備方法除PVPK30溶液外，以上原輔料均過100目篩備用。將香加皮強心作用有效提取物、乳糖、微晶纖維素、羥甲基淀粉鈉及阿斯巴甜混合均勻。用PVPK30溶液制軟材，16目篩制粒，60℃干燥并整粒。整粒后的顆粒加入硬脂酸鎂，混合均勻，壓片。每片片重約0.5克。香加片強心作用有效提取物含量為0.125g/片。
用法及用量口服，一日兩次，一次一片。
實施例9制成膠囊劑(1000粒配方)香加皮強心作用有效提取物64g乳糖170g微晶纖維素100g羥甲基淀粉鈉8g5％PVPK30溶液80ml阿斯巴甜5g硬脂酸鎂1g微粉硅膠2g制備方法除PVPK30溶液外，以上原輔料均過100目篩備用。將香加皮強心作用有效提取物、乳糖、微晶纖維素、羥甲基淀粉鈉及阿斯巴甜混合均勻。用PVPK30溶液制軟材，20目篩制粒，60℃干燥并整粒。整粒后的顆粒加入硬脂酸鎂及微粉硅膠，混合均勻，裝入1號膠囊。每粒膠囊重約0.35克。香加片強心作用有效提取物含量為0.064g/粒。
用法及用量口服，一日兩次，一次兩粒。
表1 香加皮有效提取物對大鼠離體心臟LVSP(mmHg)、LVEDP(mmHg)、+dp/dtmax(mmHg·s-1)、-dp/dtmax(mmHg·s-1)的影響(x±s)給藥后組別 給藥前1min 2min 3min 4min 5min 10min空白組 LVSP 73.88±8.93 75.10±9.5674.67±7.7874.21±7.52 74.98±7.1274.18±7.38 75.07±12.29n＝8 -(101.61±2.76) (101.37±5.08) (100.83±6.05) (102.02±7.45) (100.89±7.30) (101.45±9.13)LVEDP 0.84±4.65 1.62±4.90 1.13±5.09 1.65±5.52 2.10±6.00 2.47±6.38 1.38±6.14+dp/dtmax1018.40±195.94 1040.69±187.321032.66±168.11101 4.76±161.99 1020.49±145.891009.99±149.99 1032.44±221.01-(102.36±4.09) (101.95±6.92) (100.33±8.88) (101.30±10.22)(100.23±11.01) (101.06±9.02)-dp/dtmax-608.55±134.19 -628.86±134.93-626.94±150.02-619.66±146.60 -626.87±144.70-623.57±147.37 -636.32±183.83-(103.50±4.01) (102.92±8.98) (101l 81±9.55) (103.32±10.86)(102.65±11.26) (103.16±14.91)A組LVSP 72.30±11.78 88.24±16.89*87.03±22.78 81.10±13.60 78.05±9.1178.76±12.27 78.51±12.20n＝8 -(121.66±8.50)***(119.18±13.68)**(112.37±6.91)**(108.85±8.34) (109.92±13.44) (110.14±17.58)1.36mg藥/心LVEDP 2.54±4.91 1.74±9.67 1.27±9.39 2.67±9.51 3.34±8.88 4.22±8.25 4.27±8.79+dp/dtmax967.86±195.29 1167.00±253.791145.44±249.721063.92±151.76 1019.40±122.251004.82±129.79 1075.95±304.15-(120.59±8.66)***(118.79±13.22)**(112.02±15.37)*(107.92±17.13)(106.72±19.79) (118.48±58.90)-dp/dtmax-569.98±140.74 -692.21±201.75-692.08±208.24-636.95±124.37 -605.00±82.17 -583.12±71.20 -665.52±193.19-(121.41±12.99)***(121.37±16.76)**(113.81±14.02)*(109.51±17.79)(106.74±23.18) (124.23±54.89)B組LVSP 71.32±8.58 74.18±10.00#73.81±10.62 72.94±10.76 72.77±10.83 73.81±12.72 75.03±12.92n＝8 -(104.03±7.24)###(103.37±7.26)##(102.04±6.14)##(101.75±5.24) (102.95±6.58) (104.93±11.41)0.78mg藥/心LVEDP 2.72±2.74 2.08±2.51 2.11±2.57 2.45±3.10 2.89±3.56 3.42±4.59 3.34±3.94+dp/dtmax977.66±124.72 1026.45±130.981022.88±136.031011.04±141.58 1002.37±137.691012.24±155.79 1017.73±138.23-(105.19±7.55)###(104.74±7.32)##(103.39±6.59) (102.50±5.90) (103.30±5.86) (104.33±10.23)+dp/dtmax-619.32±95.84 -646.07±105.29-649.83±94.98 -643.53±98.29 -643.10±95.63 -647.70±101.28 -656.69±77.10-(104.48±8.41)###(105.26±7.65)#(104.13±7.26) (104.06±6.44) (104.72±6.93) (107.06±12.90)F值LVSP 0.1440.137 3.113 1.8971.294 0.6720.498-(21.689) (8.598)(7.911) (2.543)(1.938) (0.878)LVEDP 0.4850.011 0.056 0.0530.074 0.1420.400+dp/dtmax0.1871.231 1.020 0.3020.045 0.0050.137-(15.497) (7.079)(2.462) (0.690)(0.462) (0.600)-dp/dtmax0.3440.368 0.350 0.0780.238 0.6900.070-(9.518)(5.765)(2.852) (0.576)(0.141) (0.886)注1.與空白組比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與A組比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.0012.括號內(nèi)數(shù)值為各時間數(shù)值/給藥前數(shù)值*100得到的各數(shù)值升高相對值。
表2 香加皮提取物對大鼠離體心臟心率(HR/times·min-1)的影響(n＝8)(x±s)給藥后組別 給藥前1min 2min 3min 4min 5min 10min空白組165.18±50.83155.71±48.30155.52±44.06154.56±40.60 150.89±41.29 159.29±44.26 156.44±36.76A組 175.07±26.01169.14±18.10158.42±20.85161.％±16.23 167.86±14.16 165.28±17.79 165.39±17.06B組 174.71±44.47164.25±40.90170.94±40.84167.62±35.15 155.03±43.16 153.80±43.58 158.90±44.11F值 0.1440.2560.399 0.3270.498 0.190 0.14權(quán)利要求
1.一種香加皮強心作用有效提取物，其特征是用下述方法制備而成(1)香加皮藥材的提取以體積百分比濃度為40％～80％的乙醇或40％～100％甲醇為提取溶劑，對香加皮進(jìn)行提取，提取后蒸去溶劑，加水稀釋后過濾或離心，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離香加皮水溶液經(jīng)大孔樹脂吸附，用2～10倍樹脂床體積的乙醇洗脫，所述乙醇的體積百分比濃度為50％～95％，收集洗脫液，濃縮，干燥后，即得香加皮強心作用有效提取物。
2.一種香加皮強心作用有效提取物的制備方法，其特征是包括如下步驟(1)香加皮藥材的提取以體積百分比濃度為40％～80％的乙醇或40％～100％甲醇為提取溶劑，對香加皮進(jìn)行提取，提取后蒸去溶劑，加水稀釋后過濾或離心，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離香加皮水溶液經(jīng)大孔樹脂吸附，用2～10倍樹脂床體積的乙醇洗脫，所述乙醇的體積百分比濃度為50％～95％，收集洗脫液，濃縮，干燥后，即得香加皮強心作用有效提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種香加皮強心作用有效提取物的制備方法，其特征是所述提取溶劑乙醇的濃度為50％～70％。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種香加皮強心作用有效提取物的制備方法，其特征是所述洗脫溶劑乙醇的濃度為60％～70％。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種香加皮強心作用有效提取物的制備方法，其特征是所述大孔樹脂為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種香加皮強心作用有效提取物的制備方法，其特征是所述非極性大孔樹脂是以苯乙烯或乙基苯乙烯或α-甲基苯乙烯為骨架的大孔樹脂。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種香加皮強心作用有效提取物的制備方法，其特征是所述弱極性大孔樹脂是以苯乙烯為骨架的大孔樹脂。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種香加皮強心作用有效提取物的制備方法，其特征是所述步驟(2)中香加皮水溶液經(jīng)大孔樹脂吸附后，用1～4倍樹脂床體積的乙醇預(yù)洗，所述乙醇的體積百分比濃度為10％～30％。
9.權(quán)利要求1的香加皮強心作用有效提取物在制備治療急、慢性充血性心力衰竭藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種香加皮強心作用有效提取物、制備方法及用途，制備方法是(1)香加皮藥材的提取，以40％～80％的乙醇或40％～100％甲醇為提取溶劑，對香加皮進(jìn)行提取，提取后蒸去溶劑，加水稀釋后過濾或離心，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離，香加皮水溶液經(jīng)大孔樹脂吸附，用2～10倍樹脂床體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥后，即得香加皮強心作用有效提取物，經(jīng)離體心臟灌流實驗證明恒壓、恒流灌注條件下，香加皮有效提取物能顯著升高大鼠離體心臟的左心室收縮壓，增加室內(nèi)壓最大上升速率，降低左心室舒張末期壓力從而改善心功能，具有強心作用，能在制備治療急、慢性充血性心力衰竭藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P9/04GK1593503SQ20041001997
公開日2005年3月16日 申請日期2004年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月13日
發(fā)明者張伯禮, 劉虹, 高秀梅, 潘桂湘, 郭俊華, 朱曉薇 申請人:天津中醫(yī)學(xué)院