專利名稱：熊去氧膽酸的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及熊去氧膽酸的新用途，特別是在制備治療痔瘡藥物中的用途。
背景技術(shù)：
痔是肛墊病理性肥大，移位及肛周皮下血管叢血流淤滯形成的團塊，以齒線為界分內(nèi)、外痔。痔瘡的臨床主要表現(xiàn)為出血、疼痛、水腫、糜爛、瘙癢等，是臨床常見病。常規(guī)痔瘡的治療分手術(shù)治療和非手術(shù)治療。手術(shù)治已經(jīng)被證實導(dǎo)致肛漏等難以避免的并發(fā)癥，并且往往伴有出血、疼痛、斑痕等，一般患者不易接受。而一般的藥物治療只能解決局部炎癥感染問題，被醫(yī)生廣泛使用的粘膜保護劑，同樣增加創(chuàng)面感染的機會，并且延長了患者康復(fù)所需時間。因此，尋找有效的治療痔瘡藥物仍然是制藥行業(yè)當(dāng)前的主要目標(biāo)之一。
熊去氧膽酸(ursodeoxycholi cacid)最早從熊的膽汁中分離出來，其化學(xué)名為3α，7β-二羥基膽烷酸，是鵝去氧膽酸(chenodeoxycholic acid)的7β-羥基差向異構(gòu)體。20世紀(jì)80年代，發(fā)現(xiàn)本品除了能有效溶解膽固醇性結(jié)石外，還有利膽、保護肝細(xì)胞等重要作用。但是，到目前為止，還未見應(yīng)用熊去氧膽酸治療痔瘡的任何報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的就是提供一種熊去氧膽酸在制備治療痔瘡藥物中的應(yīng)用。
熊去氧膽酸在制備治療痔瘡藥物中的應(yīng)用中，可以是以單獨的熊去氧膽酸為原料制成適合的劑型，也可以將熊去氧膽酸與其他藥物配合制成復(fù)方制劑。
這里的熊去氧膽酸可以是人工合成的，也可以是叢熊膽中提出的。
用熊去氧膽酸制備治療痔瘡的栓劑，其原料是由熊去氧膽酸、混合脂肪酸甘油酯、沒食子酸丙酯、膠性二氧化硅所組成，具體制備方法是配方熊去氧膽酸 100mg混合脂肪酸甘油酯1100g沒食子酸丙酯0.1g膠性二氧化硅50g取熊去氧膽酸加純化水50ml使溶解，再加入沒食子酸丙酯混勻，備用。取混合脂肪酸甘油酯，加熱熔融，加入膠性二氧化硅，混勻，再加入上述熊去氧膽酸溶液，保溫攪拌均勻，澆模，冷卻，即得。
熊去氧膽酸在制備治療痔瘡藥物中的用途，其藥理作用主要體現(xiàn)在
1、本發(fā)明的化合物被發(fā)現(xiàn)可以誘導(dǎo)創(chuàng)面組織細(xì)胞去分化為干細(xì)胞，并啟動再生性修復(fù)。
2、同時改善創(chuàng)面修復(fù)環(huán)境清除創(chuàng)面異物，清除創(chuàng)面病原微生物，改善微循環(huán)，解除盆底肌群痙攣，控制炎癥反應(yīng)，由此加速肛墊創(chuàng)面的修復(fù)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點1、熊去氧膽酸在制備痔瘡藥物中的應(yīng)用是本申請人首先發(fā)現(xiàn)，早期熊去氧膽酸主要用于治療肝膽疾病，本發(fā)明進而發(fā)現(xiàn)了熊去氧膽酸在痔瘡方面的用途，進一步擴大了熊去氧膽酸的應(yīng)用范圍。
2、熊去氧膽酸可以通過人工合成，該技術(shù)目前已經(jīng)很成熟，因此，本發(fā)明藥源豐富。
3、熊去氧膽酸在治療痔瘡療效確切，安全低毒。
下面通過動物實驗或臨床實驗進一步來證實熊去氧膽酸的新用途。
具體實施例方式共14只大鼠，被擊頭致昏，迅速取出胸主動脈，制備成保存內(nèi)皮細(xì)胞的血管條標(biāo)本，置于標(biāo)本槽內(nèi)，與張力換能器相連。標(biāo)本槽容量1ml。灌流液從槽底部流入，頂部流出，流速2ml/min，液溫控制于37℃左右，不斷向灌流液中充入純氧。
所有標(biāo)本首先用Tyrode液灌流1小時左右，張力穩(wěn)定后，被隨機分為2組，分別以NE-Tyrode液或高K-Tyrode液灌流，引發(fā)平滑肌收縮，待穩(wěn)定后，每隔20min左右，以遞增濃度的3α，7β-二羥基-5β-膽烷酸-Tyrode液灌注，熊去氧膽酸的濃度分別為0.125、0.25、0.5、1、2、4mg/ml，同時記錄張力變化，所得數(shù)據(jù)進行t檢驗。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.25mg/ml的熊去氧膽酸就可以完全的對抗，不管是NE還是高K導(dǎo)致的血管收縮。
這證實熊去氧膽酸對受體依賴性鈣通道和電壓依賴性鈣通道均有拮抗作用。
熊去氧膽酸在角叉菜膠致大鼠肩胛區(qū)炎癥為模型的研究中，被發(fā)現(xiàn)降低了PGE2的濃度，從而減輕了炎癥反應(yīng)。
共28只大鼠被分為4組，在乙醚麻醉下，將浸潤10mg/ml角叉菜膠的滅菌乙烯海綿植入大鼠背部肩胛區(qū)皮下，12小時后分別給予局部皮下注射3α，7β-二羥基-5β-膽烷酸0.25、0.5、1mg/ml或生理鹽水各1ml。24小時后，處死大鼠，取出海綿，收集滲出液，稀釋離心取上清液。經(jīng)無水乙醇與甲醇處理后，用紫外分光光度計在278nm處，測光密度，求PGE2含量。
結(jié)果，發(fā)現(xiàn)用熊去氧膽酸處理，可以顯著地降低滲出液中的PGE2含量，并且與熊去氧膽酸的濃度呈正相關(guān)。這證實，熊去氧膽酸可以通過抑制PGE2的作用控制炎癥反應(yīng)。
我們用相似的方法，以角叉菜膠致大鼠右后足腫脹為模型的研究發(fā)現(xiàn)熊去氧膽酸可以顯著抑制角叉菜膠所致大鼠右后足腫脹。
熊去氧膽酸在體外藥敏試驗中被發(fā)現(xiàn)對所有試驗菌株有殺菌作用。
熊去氧膽酸在以大鼠口腔黏膜化學(xué)性潰瘍?yōu)槟Ｐ偷难芯恐斜挥^察到創(chuàng)面愈合速度與安慰劑組有顯著性差異。
共40只大鼠，被隨機分為4組，乙醚麻醉下，用石炭酸棉片燒灼口腔黏膜30秒，致相同面積，相似深度的口腔黏膜潰瘍，分別每日2次用3α，7β-二羥基-5β-膽烷酸0.25、0.5、1mg/ml或生理鹽水各1ml涂于創(chuàng)面，觀察創(chuàng)面面積變化等指標(biāo)，結(jié)果用卡方檢驗分析。
結(jié)果，發(fā)現(xiàn)用熊去氧膽酸處理與安慰劑組相比，可以顯著或非常顯著地加速潰瘍修復(fù)的進程，中、高劑量組與低劑量組間有顯著差異，而中劑量與高劑量組間沒有顯著性差異。
3α，7β-二羥基-5β-膽烷酸在以大鼠肛門物理性擦傷為模型的研究中被觀察到創(chuàng)面愈合速度與安慰劑組在12小時就有非常顯著的差異。而50mg及以上的各劑量組愈合速度沒有顯著的差別。
共40只大鼠，被隨機分為4組，乙醚麻醉下，用纏紗布的小棍往復(fù)轉(zhuǎn)動6次，致相似面積，相似深度的肛門黏膜損傷，分別每日2次用熊去氧膽酸25、50、100mg與混合脂肪酸甘油脂制成的小栓劑，和用混合脂肪酸甘油脂制成的盲品的治療。觀察出血，分泌物，刺激肛門反應(yīng)，一般情況等指標(biāo)，結(jié)果用卡方檢驗分析。
結(jié)果，發(fā)現(xiàn)用熊去氧膽酸處理與安慰劑組相比，可以顯著或非常顯著地加速大鼠康復(fù)的進程，中、高劑量組與低劑量組間有顯著差異，而中劑量與高劑量組間沒有顯著性差異。
3α，7β-二羥基-5β-膽烷酸在以大鼠肛門物理性檫傷為模型的研究中同時觀察到在12小時的大鼠肛門創(chuàng)瘍病理切片出現(xiàn)去分化特征的細(xì)胞----干細(xì)胞特征的細(xì)胞。
共14只大鼠被乙醚麻醉下，用纏紗布的小棍往復(fù)轉(zhuǎn)動6次，致相似面積，相似深度的肛門黏膜損傷，分別每日2次用熊去氧膽酸50mg與混合脂肪酸甘油脂制成的小栓劑治療，每12小時處死一只大鼠，解剖肛門，觀察創(chuàng)面面積，并制作兩組創(chuàng)面病理切片，分別G或Rhodamine 123染色后油鏡觀察。
結(jié)果提示創(chuàng)面面積與大鼠反應(yīng)有相關(guān)性。
令人意外的是在12小時與24小時的大鼠肛門創(chuàng)瘍病理切片發(fā)現(xiàn)去分化特征的細(xì)胞，與干細(xì)胞特征的細(xì)胞。這提示，本發(fā)明涉及的化合物熊去氧膽酸可能通過原位干細(xì)胞化的作用，誘導(dǎo)再生性修復(fù)的啟動。
熊去氧膽酸在初步的臨床試驗中被發(fā)現(xiàn)與動物研究相似的結(jié)果[試驗例8][關(guān)鍵詞]熊去氧膽酸；痔病新近，被廣泛接受的肛墊下移學(xué)說認(rèn)為痔病癥狀是損傷導(dǎo)致的，痔病脫出癥狀是反復(fù)損傷，Treitz韌帶不能再生性修復(fù)導(dǎo)致的。熊去氧膽酸是膽烷酸類物質(zhì)，最早從熊膽中提取，現(xiàn)在已經(jīng)能夠人工合成，此前被主要用于口服治療肝膽疾病。我們的研究發(fā)現(xiàn)熊去氧膽酸可能通過啟動再生性修復(fù)，以及維持創(chuàng)面修復(fù)的良好環(huán)境，促進組織修復(fù)?？赡艹蔀橹委熤滩〉挠行幬?。本研究觀察熊去氧膽酸治療一、二期痔病的療效與安全性。
資料與方法[病例入組、排除標(biāo)準(zhǔn)]1、入選標(biāo)準(zhǔn)(1)、年齡在18-65歲之間(2)、確診為痔病，一、二期；(3)、伴有損傷癥狀；(4)、本研究前10天內(nèi)，未接受其他相關(guān)治療；(5)、獲得知情同意；痔病診斷標(biāo)準(zhǔn)(1)、主要癥狀A(yù)、便時肛門部出血，滴血或射血；B、便時或勞累后，痔脫出肛門外，能自行復(fù)位或需手法復(fù)位；C、便時肛門部不適，伴墜痛；(2)、視診增加腹壓時痔核變大，部分患者內(nèi)痔脫出肛外；(3)、肛鏡檢查直腸下段齒線上區(qū)有隆起的半球形粘膜，充血、滲血或伴糜爛。(4)、以上三條凡符合第一條兩點和2、3條中的一條即可診斷。痔病分期標(biāo)準(zhǔn)(按《痔診治暫行標(biāo)準(zhǔn)》，中華醫(yī)學(xué)會外科學(xué)分會肛腸外科學(xué)組2002.9修訂)I期便時帶血、滴血或噴射狀出血，便后出血可自行停止。無痔脫出II期常有便血；排便時有痔脫出，便后可自行還納；III期偶有便血；排便或久站、咳嗽、勞累、負(fù)重時痔脫出，需用手還納；IV期偶有便血；痔脫出不能還納。
2、排除標(biāo)準(zhǔn)(1)、妊娠及哺乳期婦女，(2)、既往對本品有過敏史者，(3)、其他肛門疾病患者(如肛瘺、肛周膿腫、肛裂、肛門惡性腫瘤等)，(4)、腸道感染性疾病。
3、剔除標(biāo)準(zhǔn)(1)、違反試驗方案者，(2)、需加用其他藥物，影響療效評價者，(3)、撤銷知情同意，(4)、因故未能完成試驗，不能進行療效和安全性評價者。
本研究采用隨機雙盲平行對照方法，共入選90位志愿者，隨機分為2組熊去氧膽酸栓組45例，安慰劑組45例，分別接受熊去氧膽酸栓或安慰劑的治療，每日肛門用藥2次，連續(xù)治療192小時或直到癥狀完全緩解(兩種試劑均由成都大西南制藥股份有限公司制造提供熊去氧膽酸含量是100mg)。治療前、后，接受三大常規(guī)以及血生化全套檢查，每日記錄出血、疼痛、瘙癢、墜脹、分泌物、大便改變、難以表達的痛苦、其他不適感受的程度(4分法0分完全沒有這種癥狀；1分有這種癥狀，但很輕微，經(jīng)表格提示才注意到；2分癥狀明顯，但不改善這種癥狀，也無所謂3分癥狀嚴(yán)重，希望盡快改善這種癥狀。)。
療效判定標(biāo)準(zhǔn)1、完全緩解所有損傷癥狀均完全緩解；2、部分緩解僅有部分損傷癥狀緩解，但不影響工作、學(xué)習(xí)與生活；3、未緩解多數(shù)癥狀未緩解，而且給工作、學(xué)習(xí)與生活帶來不便。
治療中注意觀察病人有無任何不適，對出現(xiàn)的不適主訴或檢驗異常應(yīng)詳細(xì)記錄，必要時對癥處理，并進行隨訪，設(shè)法分清不良反應(yīng)與栓藥的關(guān)系(5分法評定1、有關(guān)；2、可能有關(guān)；3、可能無關(guān)；4、無關(guān)；5、無法評定)，1、2項統(tǒng)計為不良反應(yīng)。
計量資料統(tǒng)計方法選T檢驗，計數(shù)資料統(tǒng)計方法選卡方檢驗。
結(jié)果[兩組療效比較]由于7位志愿者在試驗期間暫停了治療，或接受了其他藥物治療，因此只有83位志愿者有評價的意義。如說明書附圖中

圖1，83位患者中，44位接受了試藥的治療，39位接受了安慰劑的治療。顯著性的差異在36小時已經(jīng)出現(xiàn)，81.8％的治療組患者在72小時痔病癥狀已經(jīng)完全緩解，120小時后所有44位治療組患者癥狀完全緩解。對照組在192小時仍有17.9％的志愿者癥狀沒有完全緩解。
表1 治療36小時完全緩解率的比較

X2＝5.216，P＝0.022＜0.05如表1所示，在治療36小時，兩組間顯著性差異已經(jīng)出現(xiàn)。
表2 治療72小時完全緩解率的比較

X2＝28.740，P＝0.000＜0.01如表2所示，在治療72小時，兩組間有極顯著性的差異。
兩組志愿者均沒有與試藥相關(guān)或可能相關(guān)的不適主訴，以及惡化中的實驗室指標(biāo)異常。
討論研究提示熊去氧膽酸不僅可以全面改善痔病損傷癥狀，而且可以縮短患者康復(fù)需要的時間，并且可能降低痔病進展的危險。這與基礎(chǔ)研究是吻合的，即熊去氧膽酸通過啟動再生性修復(fù)的作用，以及維持創(chuàng)面修復(fù)的良好環(huán)境，顯著加快了組織修復(fù)的進程，從而全面地緩解痔病的損傷癥狀，并加速了痔病康復(fù)的進程，并防止了病情進展，降低需要手術(shù)的危險。在不良反應(yīng)方面，沒有與試藥相關(guān)或可能相關(guān)的不適主訴，以及惡化中的實驗室指標(biāo)異常。這些都強烈提示熊去氧膽酸治療痔病作用全面、起效迅速、降低痔病進展風(fēng)險、并且安全，有可能成為痔病患者新的有益的選擇。
權(quán)利要求
1.熊去氧膽酸在制備治療痔瘡藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了熊去氧膽酸的新用途，用熊去氧膽酸可以制備成治療痔瘡的藥物，具有藥源豐富、療效確切，安全低毒的優(yōu)點。
文檔編號A61K31/575GK1704063SQ20041002262
公開日2005年12月7日 申請日期2004年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月28日
發(fā)明者高江河, 達曉玲 申請人:成都康弘科技實業(yè)(集團)有限公司