專利名稱：酶促天然牛黃制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是根據(jù)牛黃成因，培養(yǎng)大腸桿菌，制備β-GA酶(大腸桿菌β-葡萄糖醛酸酶)，將酶加入牛膽汁中，在最適條件下，酶即催化牛膽汁中牛黃的有效成分俱沉，產(chǎn)生酶促天然牛黃。
背景技術(shù)：
牛黃為名貴中藥，療效奇特但很稀缺。“黃金易得牛黃難求”。據(jù)資料介紹，我國醫(yī)藥業(yè)年消耗天然牛黃5000公斤，用于生產(chǎn)高檔品牌中成藥，而其潛在市場需求量大約200噸左右。據(jù)估算，我國天然牛每年產(chǎn)量400-700公斤，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足需求。所以，這些年來，90％靠進(jìn)口天然牛黃。最近幾年，因防止瘋牛病，國家限制進(jìn)口天然牛黃，使天然牛黃奇缺。為此，研究人員研究牛黃的代用品，取得了一些成效，但不理想。如(1)人工牛黃，根據(jù)天然牛黃的成分配制而成，但失缺有效成分，療效不佳。(2)在牛膽囊內(nèi)接種牛黃失敗。(3)體外培育牛黃，療效好，國家藥監(jiān)局宣布，可替代天然牛黃。但仍然靠配方生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明開發(fā)一種用牛、豬、禽動(dòng)物膽汁通過酶促反應(yīng)生產(chǎn)天然牛黃的方法，以盡快改變我國牛黃稀缺的現(xiàn)狀。發(fā)明人經(jīng)過二十多年的反復(fù)研究，以大腸桿菌β-GA酶酶促反應(yīng)制備，解決了提高牛黃產(chǎn)量的關(guān)鍵問題，使牛黃產(chǎn)量大增。10公斤牛膽汁可生產(chǎn)牛黃20-30g。使酶法生產(chǎn)牛黃工廠化完全變成了現(xiàn)實(shí)。成本以1公斤(1000ml)牛膽汁計(jì)算。1公斤牛膽汁花去6元，培養(yǎng)大腸桿菌約用8元，試劑、水電約6元，總計(jì)成本20元。產(chǎn)值1公斤牛膽汁產(chǎn)牛黃2、3g。天然牛黃1g價(jià)值800元。
本方法主要工藝是培養(yǎng)大腸桿菌，再制備β-GA酶，在收集到的牛(禽)膽汁中加入β-GA酶，通過酶催化反應(yīng)、沉淀，產(chǎn)出天然牛黃。
本方法變廢為空，為國家節(jié)省大量外匯，經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益巨大。


圖1酶促天然牛黃制備方法流程1中1培養(yǎng)大腸桿菌，2制備β-GA酶，3牛(禽)膽汁，4酶促反應(yīng)，5沉淀，6形成酶促天然牛黃。
(五)發(fā)明最佳實(shí)施方式(1)培養(yǎng)大腸桿菌，以大腸埃希氏菌(衛(wèi)生部生物制品檢定所其菌號(hào)是44348)，培養(yǎng)于1000毫升肉湯培養(yǎng)基(3.8％蛋白胨溶液)中恒溫37℃10小時(shí)后，以5000r/min離心沉淀10分鐘，棄上清液，沉淀物以Tris HCl緩沖液洗滌一次，離心，沉淀物即為大腸桿菌。
(2)制備β-GA酶。取上述沉淀物3-6g，加Tris-HCl緩沖液100毫升，混勻后置超聲波槽中振蕩20分鐘，離心沉淀4000r/min20分鐘，取上清液即為β-GA酶粗制品。
(3)牛膽汁，必須保持新鮮，使牛膽汁中牛黃有效成分不被破壞。
(4)酶促反應(yīng)，取一定體積的牛膽汁(如1000毫升)，加一定體積酶粗制品(10毫升)，攪拌混合20分鐘，置37℃振蕩水浴8-12小時(shí)，β-GA酶即催化牛膽汁中牛黃有效成分反應(yīng)，主要是水解水溶性結(jié)合膽紅素的糖苷鍵，生成游離膽紅素和葡萄糖醛酸。游離膽紅素脂溶性，其丙酸基與Ca++結(jié)合，形成膽紅素鈣鹽。
(5)沉淀，膽紅素鈣鹽不溶于水，而形成沉淀。此外，β-GA酶還催化膽酸、?；撬岬扰cCa++結(jié)合，形成鈣鹽而沉淀。
(6)牛黃的主要成份是膽紅素鈣鹽，呈棕黃(紅)色沉淀物。將沉淀物加工為牛黃狀的球形或橢球形狀，即為酶促天然牛黃。
酶法生產(chǎn)中的牛黃按最低價(jià)算200-300元，按最低價(jià)計(jì)算，它比生產(chǎn)黃金還可觀。一天用10公斤牛膽汁生產(chǎn)牛黃，可產(chǎn)20-30g，純利潤是3800元。利用新鮮牛、豬、禽類膽汁，變廢為寶，逐步擴(kuò)大生產(chǎn)，年產(chǎn)牛黃幾十、幾百甚至上千公斤，可創(chuàng)產(chǎn)值數(shù)千萬元，累計(jì)甚至上億元。牛黃產(chǎn)量大增，投入社會(huì)以求盡快改變牛黃奇缺的現(xiàn)狀，以滿足人民群眾健康的需求。減輕人民群眾的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，造福廣大人民群眾。
權(quán)利要求
1.一種酶促天然牛黃制備方法，其特征在于通過在牛、豬、禽動(dòng)物膽汁中加入β-GA酶，充分?jǐn)嚢?0分鐘，置37℃恒溫振蕩水浴8-12小時(shí)，形成膽紅素鈣鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶促天然牛黃制備方法，其特征在于牛、豬、禽動(dòng)物膽汁中加入的β-GA酶是由大腸埃希氏菌培養(yǎng)而成，在3.8％蛋白胨的1000毫升溶液，置恒溫水浴37℃10小時(shí)后，5000r/min離心沉淀10分鐘，棄上清液，沉淀物Tris-HCl緩沖液洗滌，沉淀物為大腸桿菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的一種酶促天然牛黃制備方法，其特征在于取大腸桿菌3-6克，加Tris-HCl緩沖液100毫升，混勻后置超聲波槽中振蕩20分鐘，經(jīng)4000r/min20分鐘離心沉淀，取上清液即為β-GA酶粗制品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶促天然牛黃制備方法，其特征在于牛、豬、禽動(dòng)物膽汁與β-GA酶的重量比為100∶1-3。
全文摘要
根據(jù)牛黃(牛膽結(jié)石)成因，培養(yǎng)大腸桿菌，制備β－GA酶(大腸桿菌β—葡萄糖醛酸酯)。于牛膽汁中加入β－GA酶溶液，常溫保溫?cái)?shù)小時(shí)，β－GA酶催化牛膽中牛黃的有效成分膽紅素、膽酸、牛磺液、膽固醇、無機(jī)鹽等反應(yīng)，產(chǎn)生棕黃(紅)色，膽、紅素鈣鹽等沉淀，將沉淀物干燥后，壓制成牛黃形狀的球形或橢球形狀，即為“酶促天然牛黃”。除牛膽汁外，豬及禽動(dòng)物的膽汁皆可做制備牛黃的原料，極為豐富，但必須新鮮。用酶學(xué)方法制備牛黃，是根據(jù)生物學(xué)的基本原理，采用仿生學(xué)的技術(shù)完成的。所產(chǎn)牛黃經(jīng)鑒定，其成分與性質(zhì)與天然牛黃完全相同，它可替代天然牛黃。工業(yè)化生產(chǎn)牛黃后，可盡快改變我國牛黃稀缺的現(xiàn)狀，產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，給人民群眾的健康帶來福音，產(chǎn)生深遠(yuǎn)的社會(huì)影響。
文檔編號(hào)A61K35/413GK1563393SQ200410023790
公開日2005年1月12日 申請(qǐng)日期2004年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月6日
發(fā)明者周廣禮 申請(qǐng)人:周廣禮