專利名稱：一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子前體脂質(zhì)體及其制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物劑型的制備方法，是關(guān)于一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)脂質(zhì)體制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
20世紀(jì)下半葉以來(lái)，癌癥的發(fā)病率和死亡率均呈逐年上升的趨勢(shì)，尤其是20世紀(jì)70年代以后，癌癥的發(fā)病人數(shù)以每年3％-5％的速度遞增。目前我國(guó)每年有腫瘤患者212.7萬(wàn)，即腫瘤的全國(guó)發(fā)病率約在1.65‰左右。癌癥(腫瘤)成為繼心腦血管疾病后的我國(guó)第二大疾病。
我國(guó)抗腫瘤藥物產(chǎn)品已發(fā)展到7大類160多個(gè)品種，這些抗腫瘤藥物在臨床中使用，在治療腫瘤的同時(shí)，絕大多數(shù)引起的骨髓移植和白細(xì)胞數(shù)目的下降。
重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)是目前升高白細(xì)胞效果最為確切的藥物，并可用于外周血干細(xì)胞移植、骨髓移植等，其普通的注射劑已在臨床上廣泛應(yīng)用。
rhG-CSF在臨床使用中存在的主要問題是半衰期短，靜脈注射后快速?gòu)捏w循環(huán)中消失，平均保留時(shí)間為1.34小時(shí)，其消除半衰期為1.3-4.2小時(shí)。國(guó)內(nèi)外目前解決該問題的方法是將rhG-CSF皮下注射，使吸收相延長(zhǎng)，以延長(zhǎng)其在注射部位的滯留時(shí)間，但仍無(wú)法解決其消除半衰期過(guò)短的問題。
將rhG-CSF制成脂質(zhì)體，將藥物包裹在脂質(zhì)雙分子層中，藥物受到脂質(zhì)體雙分子層的保護(hù)，可避免體內(nèi)各種酶的破壞，提高了藥物穩(wěn)定性。rhG-CSF脂質(zhì)體皮下注射后，能與細(xì)胞和組織結(jié)合，甚至被細(xì)胞內(nèi)吞后，藥物從脂質(zhì)體中緩慢釋放出來(lái)，在血液循環(huán)中的保留時(shí)間比游離藥物長(zhǎng)得多，提高了治療指數(shù)，并具有長(zhǎng)效的作用。
目前國(guó)內(nèi)外在脂質(zhì)體研制方面存在的主要問題是(1)脂質(zhì)體制備工藝復(fù)雜，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)；(2)用常規(guī)方法制得的脂質(zhì)體易于聚集和融合，有效期短；(3)包封率低。
目前文獻(xiàn)報(bào)道制備脂質(zhì)體的方法有多種，F(xiàn)rench加壓擠出法、膜擠壓法、乙醇(乙醚)注入法等方法，雖然有很多人作了積極的探索，但僅能在小試水平操作，其生產(chǎn)率水平和設(shè)備水平限制了工業(yè)化生產(chǎn)。近年報(bào)道較多的是采用超聲波法和逆相蒸發(fā)法，這些工藝方法包封率低，對(duì)設(shè)備要求高，如超聲波法，探頭型超聲波儀在使用的過(guò)程中，其探頭磨損的金屬屑會(huì)污染制劑，或?qū)е骂愔到?；而水浴型的超聲波儀功率小、耗時(shí)長(zhǎng)。逆向蒸發(fā)法的包封率只有50％左右，通常也需超聲波處理，而且工藝中引入大量有機(jī)溶媒，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明采用的制備工藝簡(jiǎn)單，不需要特殊的儀器設(shè)備，易于進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)；制得的脂質(zhì)體包封率穩(wěn)定保持在80％以上，達(dá)到《中國(guó)藥典》2000年版的有關(guān)規(guī)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種穩(wěn)定性好，并具有長(zhǎng)效作用的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)的注射制劑。
本發(fā)明的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)前體脂質(zhì)體，由以下處方組成重組人粒細(xì)胞集落刺激因子0.001-0.1％，卵磷脂0.5-5.0％，膽固醇0.1-1.0％，水溶性載體1.0-90.0％。
本發(fā)明中的水溶性載體可以是氯化鈉、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、乳糖或它們的混合物。
本發(fā)明優(yōu)選的處方組成重組人粒細(xì)胞集落刺激因子0.005-0.045％，卵磷脂1.0-2.0％，膽固醇0.1-0.5％，水溶性載體5-20％。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子前體脂質(zhì)體的制備方法。
本發(fā)明的制備方法包括以下步驟(1)按以下配比稱量原輔料重組人粒細(xì)胞集落刺激因子 1-1000mg卵磷脂 5-50g膽固醇 1-10g水溶性載體 10-900g制成1000ml(2)將卵磷脂、膽固醇按處方比例溶解于有機(jī)溶劑中，形成澄明溶液；(3)在該溶液中加入水溶性載體粉末，該載體不溶于有機(jī)相，在有機(jī)溶液中呈極細(xì)的顆粒；(4)真空干燥，使有機(jī)溶液揮發(fā)完全，脂質(zhì)均勻吸附于載體顆粒上；(5)將重組人粒細(xì)胞集落刺激因子溶于水中，加入到脂質(zhì)—載體系統(tǒng)中，形成大小均一的脂質(zhì)體混懸液。
本發(fā)明中的水溶性載體可以是氯化鈉、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、乳糖或它們的混合物；所說(shuō)的有機(jī)溶劑為氯仿、乙醇、乙醚或它們的混合物。
所制得的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子前體脂質(zhì)體為微黃色混懸溶液。
在本發(fā)明中，重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)的規(guī)格劑量較低，在rhG-CSF前體脂質(zhì)體混懸液中rhG-CSF的總含量(包括被脂質(zhì)體包合部分和游離部分)約在1ug-1000ug/ml，游離rhG-CSF的含量非常低，需要靈敏度較高的方法測(cè)定其含量。本發(fā)明采用雙抗體夾心ABC-ELISA法的定量EIA試劑盒，用酶標(biāo)儀在492nm處測(cè)定OD值，計(jì)算rhG-CSF的含量。本方法靈敏度高，重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)在1000-2000pg/ml的范圍內(nèi)濃度與吸收度線性關(guān)系好，回收率高，精密度符合規(guī)定。以該種檢測(cè)方法測(cè)定三批重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)前體脂質(zhì)體的含量，見表1。
表1重組人粒細(xì)胞集落刺激因子前體脂質(zhì)體的含量測(cè)定結(jié)果

在含量測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠的基礎(chǔ)上，測(cè)定脂質(zhì)體的包封率。
本發(fā)明制成的脂質(zhì)體直徑較小，故采用凝聚法測(cè)定，即在rhG-CSF前體脂質(zhì)體混懸液中加入適量魚精蛋白，使rhG-CSF前體脂質(zhì)體聚集成團(tuán)，離心，可獲得上清液，測(cè)定游離rhG-CSF的濃度，計(jì)算脂質(zhì)體的包封率。經(jīng)測(cè)定，三批rhG-CSF前體脂質(zhì)體的包封率，平均為81.2％，見表2。
表2三批重組人粒細(xì)胞集落刺激因子前體脂質(zhì)體包封率的測(cè)定

為考察本發(fā)明所制備脂質(zhì)體的質(zhì)量，對(duì)制得的脂質(zhì)體進(jìn)行了穩(wěn)定性研究。
取批號(hào)為030605樣品，置光照(3000LX)、高溫(40℃)、高濕(RH92.5％)的條件下放置10天，于5天、10天取樣，測(cè)定各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)，測(cè)定結(jié)果見表3。
表3rhG-CSF前體脂質(zhì)體(030605批)影響因素試驗(yàn)結(jié)果

從表3可以看出，樣品在光照(3000LX)、高溫(40℃)、高濕(RH92.5％)條件下放置10天，產(chǎn)品的外觀性狀除在高溫(40℃)10天有脂質(zhì)析出外，其他條件下均無(wú)明顯變化；但在各種條件下含量均有所下降，原因可能是重組人粒細(xì)胞集落刺激因子的貯存條件為2～8℃避光保存，在常溫下不穩(wěn)定；在各種條件下，包封率均有所下降，在高溫(40℃)的條件下下降較明顯，而在光照和高濕條件下有較小的下降幅度。
為此，又進(jìn)行了2-8℃的條件下的穩(wěn)定性研究。
取三批樣品(批號(hào)為030603、030604、030605)，置2-8℃的條件下放置，于1、2、3、6、9、12個(gè)月取樣，測(cè)定各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)，測(cè)定結(jié)果見表4。
表4rhG-CSF前體脂質(zhì)體2-8℃的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明本品在2-8℃的條件下放置9個(gè)月，各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)與0月比較均無(wú)明顯變化，說(shuō)明本發(fā)明所制備的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子前體脂質(zhì)體在一定的貯存條件下質(zhì)量穩(wěn)定。
具體實(shí)施例方式下面再以實(shí)施例方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，給出本發(fā)明的實(shí)施細(xì)節(jié)，但是并不是旨在限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
重組人粒細(xì)胞集落刺激因子 150mg卵磷脂15g膽固醇5g山梨醇90g制成1000ml先將卵磷脂、膽固醇按處方比例溶解于氯仿中，形成澄明溶液；在該溶液中加入山梨醇粉末，山梨醇不溶于氯仿，在氯仿溶液中呈極細(xì)的顆粒；真空干燥，使氯仿?lián)]發(fā)完全，脂質(zhì)均勻吸附于載體顆粒上；將重組人粒細(xì)胞集落刺激因子溶于水中，加入到脂質(zhì)—載體系統(tǒng)中，形成大小均一的脂質(zhì)體混懸液。
經(jīng)測(cè)定，包封率為82.2％。
下面再用幾個(gè)實(shí)例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，下述實(shí)例是以生產(chǎn)1000毫升重組人粒細(xì)胞集落刺激因子前體脂質(zhì)體的配方例。
實(shí)施例12 3組分重組人粒細(xì)胞集落刺激因子 50mg 150mg 450mg卵磷脂10g 20g 50g膽固醇1g 6g10g山梨醇200g甘露醇 900g氯化鈉 50g性能含量(標(biāo)示量％)102.1％ 99.8％98.7％包封率(％)82.5％ 81.0％81.6％
權(quán)利要求
1.一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)前體脂質(zhì)體，其特征在于所說(shuō)的脂質(zhì)體混懸液的組成含量，以重量體積百分?jǐn)?shù)計(jì)為重組人粒細(xì)胞集落刺激因子0.001-0.1％，卵磷脂0.5-5.0％，膽固醇0.1-1.0％，水溶性載體1.0-90.0％。
2.依照權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其特征在于其水溶性載體可以是氯化鈉、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、乳糖或它們的混合物。
3.依照權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其特征在于包括以下主要配制步驟(1)將卵磷脂、膽固醇按處方比例溶解于有機(jī)溶劑中，形成澄明溶液；(2)在該溶液中加入水溶性載體粉末，該載體不溶于有機(jī)相，在有機(jī)溶液中呈極細(xì)的顆粒；(3)真空干燥，使有機(jī)溶液揮發(fā)完全，脂質(zhì)均勻吸附于載體顆粒上；(4)將重組人粒細(xì)胞集落刺激因子溶于水中，加入到脂質(zhì)-載體系統(tǒng)中，形成大小均一的脂質(zhì)體混懸液。
4.依照權(quán)利要求1所述的前體脂質(zhì)體，其特征在于所說(shuō)的有機(jī)溶劑為氯仿、乙醇、乙醚或它們的混合物。
全文摘要
一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG－CSF)前體脂質(zhì)體，是將脂質(zhì)均勻吸附于極細(xì)的水溶性載體上，以增加脂質(zhì)分散的表面積。當(dāng)這種前體脂質(zhì)體與水溶液接觸時(shí)，脂質(zhì)溶脹而載體迅速溶解，在水中形成大小均一的脂質(zhì)體。前體脂質(zhì)體在水化前便于貯存，重新混懸時(shí)易于分散，包封率高，該工藝過(guò)程不需要特殊設(shè)備，可規(guī)模化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K9/127GK1683005SQ20041002401
公開日2005年10月19日 申請(qǐng)日期2004年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月13日
發(fā)明者馬晶 申請(qǐng)人:馬晶