專利名稱：中藥成分鹽酸巴馬汀在治療Ⅱ型糖尿病疾病中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種來自中藥原料藥的成分，尤其涉及來自黃連和黃柏原料藥提取物中鹽酸巴馬汀成分。本發(fā)明還涉及鹽酸巴馬汀在治療II型糖尿病疾病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病(diabetes mellitus，DM)是由于遺傳和環(huán)境因素相互作用而引起的臨床綜合癥，是最普通的內(nèi)分泌疾病之一。因胰島素分泌絕對(duì)或相對(duì)不足以及靶組織對(duì)胰島素敏感性降低，引起糖、蛋白、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂。臨床上出現(xiàn)三多(多食、多飲、多尿)、一少(體重下降)、高血糖癥狀。根據(jù)病因的不同，糖尿病可分為胰島素依賴型糖尿病(IDDM，1型)和非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM，2型)。
目前全世界有糖尿病病人3億，中國有6000萬。在這些患者中86％-89％為2型糖尿病，表現(xiàn)為葡糖的過度產(chǎn)生和低利用效率，從而導(dǎo)致迅速的高血糖癥狀。糖尿病在城市的發(fā)病率高于農(nóng)村，老年、肥胖、生活水平由差變好容易發(fā)病。在糖尿病人群中發(fā)生冠心病、缺血性或出血性腦血管病、失明、肢端壞疽等嚴(yán)重并發(fā)癥均明顯高于非糖尿病人群。因此，糖尿病已成為世界上繼腫瘤、心腦血管病之后第三位嚴(yán)重危害人類身體健康的慢性非傳染性疾病。正出于上述情況，人們對(duì)糖尿病的研究可以說歷史悠久，至今方興未艾。
糖尿病的治療主要有精神療法、飲食療法、運(yùn)動(dòng)療法、胰島素療法以及藥物治療(口服降糖藥)。一般來說，如果口服降糖藥不能很好的控制血糖，那么就要用胰島素予以治療。胰島素是治療1型糖尿病唯一有效的治療方法。目前市場(chǎng)上已投放的治療2型糖尿病的藥物有(1)胰島素促分泌藥物，如磺酰脲類藥物優(yōu)降糖(glyburide，格列本脲)、美吡達(dá)(glipizide，格列吡嗪)、達(dá)美康(gliclazide，格列齊特)、糖適平(gliquidone，格列喹酮)，還有更新的鈣通道抑制劑納格列奈(nateglinide)、瑞格列奈(repaglinide)；(2)雙胍類，如二甲雙胍(metformin hydrochloride)；(3)α-糖甘酶抑制劑，如阿卡波糖(拜糖平)；(4)格列酮類(glitazones)，如吡格列酮(pioglitazone)、羅格列酮(rosiglitazone)。
磺酰脲類藥物是最常用的治療糖尿病的藥物之一。此類藥物有多種，其共同的結(jié)構(gòu)為Ri-SO4N-HCONH-R2?；腔碗艴；鶅烧呓Y(jié)合決定其降糖作用，輔基的改變決定不同磺酰脲類降糖藥作用的強(qiáng)度和時(shí)間。
此類藥物通過作用于胰島β細(xì)胞表面的受體促進(jìn)胰島素釋放，其降血糖作用有賴于尚存在相當(dāng)數(shù)量(30％以上)有功能的胰島β細(xì)胞組織。此外，磺酰脲類藥物治療NIDDM病人可改善胰島素受體和受體后缺陷，增強(qiáng)靶組織對(duì)胰島素的敏感性，故認(rèn)為可能有胰外降血糖作用。但是，隨著胰島素分泌功能的下降以及其他一些因素，磺酰脲類降糖藥的作用也會(huì)下降，這時(shí)或加用其他類降糖藥，或加用胰島素。
磺酰脲類藥物主要的適應(yīng)癥是NIDDM病人用飲食治療和體育鍛煉無效而胰島功能尚存的輕、中度糖尿病人。本類藥物不適用于IDDM病人，NIDDM合并嚴(yán)重感染，酮癥酸中毒，高滲性昏迷，進(jìn)行大手術(shù)，伴有肝腎功能不全，以及合并妊娠的病人。
磺酰脲類藥物一個(gè)明顯的副作用是用量過大時(shí)可出現(xiàn)低血糖。因此，用藥時(shí)應(yīng)該注意合理用藥的問題，宜在飲前服用黃連(Rhizoma Coptidis)本品為毛莨科植物黃連Coptis chinensis Franch.、三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptis teeta Wall.的干燥根莖。以上三種分別習(xí)稱“味連”、“雅連”、“云連”。秋季采挖，除去須根及泥沙，干燥，撞去殘留須根。據(jù)《中國藥典》2000年版中記載黃連性寒，味苦。歸心、脾、胃、肝、膽、大腸經(jīng)。具有清熱燥濕，瀉火解毒。用于濕熱痞滿，嘔吐，瀉痢，黃疸，高熱神昏，心火亢盛，心煩不寐，血熱吐衄，目赤吞酸，牙痛，消渴，癰腫疔瘡；外治濕疹，濕瘡，耳道流膿。酒黃連善清上焦火熱。用于目赤，口瘡。姜黃連清胃和胃止嘔。用于寒熱互結(jié)，濕熱中阻，痞滿嘔吐。萸黃連舒肝和胃止嘔。用于肝胃不和，嘔吐吞酸等病癥。
黃連中主含生物堿，“味連”、“雅連”、“云連”三種黃連中均含有小檗堿(berberine)、巴馬汀(掌葉防己堿，palmatine)、黃連堿(Coptisine)等生物堿。另外還含有Cu、Mn、Zn、Fe、Co、Se、Sr、Ti、Al、Mg、K、Ca等無機(jī)元素黃柏(Cortex Phellodendri)本品為蕓香科植物黃皮樹Phellodendron chinense Schneid.的干燥樹皮。習(xí)稱“川黃柏”。據(jù)《中國藥典》2000年版中記載黃柏性寒，味苦，歸腎、膀胱經(jīng)。具有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡。用于濕熱瀉痢，黃疸，帶下，熱淋，腳氣，痿，骨蒸勞熱，盜汗，遺精，瘡瘍腫毒，濕疹瘙癢。鹽炙黃柏滋陰降火，用于陰虛火旺，盜汗骨蒸等病癥。
黃柏中主含生物堿，含量約1％～3％。其主要組成有小檗堿(berberine)、巴馬汀(掌葉防己堿，palmatine)、藥根堿(jatrorrhizine)、木蘭花堿(magnoflorine)等，另含黃柏堿(phelldendrine)、蝙蝠葛堿(meruspermine)、白栝樓堿(N-甲基大麥芽堿、candicine)、胍(guanidine)等；苦味質(zhì)成分主要有黃柏內(nèi)酯(obakulactone)、黃柏酮(obakunone)、檸檬苦素(limonin)；甾體成分有β-谷甾醇(β-sitosterol)、γ-谷甾醇(γ-sitosterol)、菜油甾醇(campesterol)、7-去氫豆甾醇(7-dehydrostigmasterol)。白鮮交酯(dictamnolide)、黃柏酮酸(obacunonic acid)、青熒光酸(lumicaeruleic acid)、24-亞甲基環(huán)木菠蘿烯醇(24-methyleneoycloartenol)、γ-羥基丁烯內(nèi)酯衍生物I、II，牛奶樹醇(hispiol)、小檗紅堿(berberrubine)。此外尚含氯原酸類化合物、木脂素單葡萄糖甙、對(duì)羥苯乙醇芹酰葡萄糖甙及一種具3個(gè)酚羥基的N-甲基四氧苯甲酰異喹啉的單葡萄糖甙。小檗堿在黃柏中一般含1.6％~4.0％，樹皮中小檗堿含量越接近樹基部越高，而越接近樹梢部皮中木蘭花堿和巴馬汀等含量越高。全株除葉外，果實(shí)及木質(zhì)部也均含小檗堿。產(chǎn)地不同，小檗堿含量有差異。根皮也含小檗堿、藥根堿、黃柏堿、N-甲基大麥芽堿。木部含小檗堿。
黃皮樹含小檗堿、木蘭花堿、黃柏堿、巴馬汀及內(nèi)酯、甾醇、粘液質(zhì)等。
禿葉黃皮樹含四氫小檗堿(tetrahydroberberine)、四氫巴馬汀(tetrapalmatine)、四氫藥根堿(tetrahydrojatrorrhizine)、黃柏堿、木蘭花堿及β-谷甾醇。
臺(tái)灣產(chǎn)黃柏(P.wilsonii Hay-et kane)含小檗堿、非洲防己堿(columbamine)、藥根堿、木蘭花堿、巴馬汀、黃柏堿、白蓬芬定(thalifendine)、白蓬草寧(thaloiphenine)。
申請(qǐng)人在對(duì)黃連和黃柏中的鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀成分進(jìn)行研究中，意外地發(fā)現(xiàn)對(duì)糖尿病疾病的治療中有效果，因而完成了本發(fā)明的內(nèi)容。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種來自中藥原料藥的鹽酸巴馬汀成分，該成分可用于II型糖尿病疾病的治療。
本發(fā)明尤其提供了來自中藥黃連和黃柏的鹽酸巴馬汀的成分，進(jìn)而提出了黃連和黃柏中有效成分的新的醫(yī)藥用途。
本發(fā)明的成分可以來自任何含有鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的原料藥，優(yōu)選來自黃連和黃柏原料藥中生物堿有效成分。通過任何可行的方法即可得到。
通過藥效學(xué)研究，證明本發(fā)明的鹽酸巴馬汀可用于II型糖尿病疾病的治療。
為驗(yàn)證本發(fā)明鹽酸巴馬汀成分的藥用效果，除了成分檢測(cè)外，本發(fā)明人還對(duì)該成分進(jìn)行了進(jìn)一步的細(xì)胞膜色譜分析(Cell MembraneChromatography，CMC)。細(xì)胞膜色譜是一種仿生學(xué)的生物親合色譜方法，可以測(cè)定藥物和化合物分子與細(xì)胞膜及膜受體間的特異性相互作用。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)中用胰島細(xì)胞膜色譜模型，以格列本脲為對(duì)照，對(duì)黃連和黃柏原料藥總有效部位中的有效成分進(jìn)行了篩選。
試驗(yàn)結(jié)果顯示，在CMC篩選條件下，本發(fā)明的黃連和黃柏總有效部位中含有與格列本脲作用相似的有效成分及鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀，其中鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀與胰島細(xì)胞膜及膜受體的作用強(qiáng)度大于陽性對(duì)照藥。
總之，本發(fā)明人在對(duì)黃連和黃柏的藥用研究中意外地發(fā)現(xiàn)，上述成分對(duì)II型糖尿病疾病的治療有效，并測(cè)定出其中含有與格列本脲類似作用的活性成分。進(jìn)一步藥效試驗(yàn)證實(shí)，黃連和黃柏中有效成分對(duì)正常血糖沒有影響。對(duì)四氧嘧啶所致高血糖有降低作用。
具體實(shí)施例方式
以下是發(fā)明人給出的關(guān)于本發(fā)明的具體實(shí)施和治療效果，并結(jié)合優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行的進(jìn)一步詳細(xì)闡述。
1.黃連和黃柏有效部位的提取黃連或黃柏藥材用8倍量85％乙醇加熱回流2次，每次2h。合并提取液，回收乙醇，濃縮水液使成粘稠狀。加入1/2藥材量的水，攪拌，多層紗布過濾，濾液加入適量的Ca(OH)2，攪拌，靜置24h，過濾。濾液濃縮，放冷，用鹽酸調(diào)節(jié)pH1～pH2，靜置，有沉淀析出，過濾，干燥沉淀即得黃柏或黃連提取物。
2.黃連或黃柏提取物的薄層色譜法定性分析取本品粉末10.0mg，加鹽酸-甲醇(1∶100)溶液10mL，超聲振蕩20min，濾過，濾液補(bǔ)充甲醇至10mL，作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃色熒光斑點(diǎn)。
結(jié)果顯示，本提取物中含有鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀。
3.色譜篩選條件以兔胰島細(xì)胞膜固定相裝柱(50mm×2mm，I.D.)；流動(dòng)相25mmol/L硫酸銨緩沖液(pH7.4)；流速0.5ml/min；檢測(cè)波長270nm；柱溫37℃。
分別取上述黃連和黃柏總有效部位提取物、格列苯脲、鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀適量，加吡啶100μl使溶解，離心5min(6000r/min)，吸取上清液5μl進(jìn)樣測(cè)定，格列苯脲為陽性對(duì)照藥，記錄CMC篩選色譜圖。在CMC篩選條件下，該黃連和黃柏總有效部位中含有與格列苯脲作用相似的有效成分和鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀，其中鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀與胰島細(xì)胞膜及膜受體的作用強(qiáng)度大于陽性對(duì)照藥。
4.鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿對(duì)正常小鼠血糖和刺激胰島素分泌的藥理抗糖尿病藥物中有些可通過刺激胰島β細(xì)胞，促進(jìn)胰島素的分泌；有些可抑制糖異生，促進(jìn)外周組織中的葡萄糖利用或抑制葡萄糖在小腸的攝取，有些能提高外周組織對(duì)胰島素的敏感性達(dá)到降血糖的目的。故某些降血糖藥物不僅可使高血糖動(dòng)物的血糖水平降低，還可使正常的血糖水平降低。磺酰脲類藥物如格列本脲、格列吡嗪、格列喹酮和格列齊特，雙胍類的二甲雙胍，以及黃連素是常用的降血糖藥物。本實(shí)驗(yàn)以健康小鼠作實(shí)驗(yàn)對(duì)象，比較了降低正常血糖和刺激胰島素分泌的藥理作用強(qiáng)度。
5.實(shí)驗(yàn)材料藥品與試劑格列本脲(天津力生制藥股份有限公司，批號(hào)0301003)，二甲雙胍(深圳市中聯(lián)制藥有限公司，批號(hào)0203068)，鹽酸小檗堿，鹽酸巴馬汀(自制)，葡萄糖氧化酶試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司)，I125-胰島素試劑盒。
動(dòng)物昆明種雄性小白鼠，體重18g～22g，由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
6.方法與結(jié)果小鼠84只，按體重分層分為5組，每組12只，依次是陰性對(duì)照組、格列本脲、二甲雙胍、鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀。在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下飼養(yǎng)3天，眼眶取血，離心，取血清10μL，葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖，記為藥前血糖值。ig給予對(duì)應(yīng)藥物，每日一次，連續(xù)7天，末次給藥2小時(shí)后，眼眶取血，再次測(cè)定血糖，記為藥后血糖值，血糖測(cè)定前均需禁食(不禁水)10小時(shí)。另外，取血清100μL用作血清胰島素水平的測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。
表1 鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀對(duì)小鼠正常血糖和胰島素水平的影響

與空白組比*P＜0.05，**P＜0.01
從表中數(shù)據(jù)可以得出，格列本脲對(duì)小鼠正常血糖有降低作用，二甲雙胍在降低正常血糖的同時(shí)，降低血清胰島素水平。鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿二者影響均無顯著性意義。
7.鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿對(duì)四氧嘧啶高血糖小鼠的影響昆明種小白鼠80只，雌雄各半，在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下飼養(yǎng)至體重為22~26g后，禁食(不禁水)24小時(shí)，尾靜脈iv四氧嘧啶48g·kg-1。4天后，觀察到各組動(dòng)物出現(xiàn)明顯的多飲、多食癥狀。眼眶取血，取血前，動(dòng)物禁食(不禁水)6小時(shí)，葡萄糖氧化酶測(cè)定血糖，記作藥前血糖值。并根據(jù)血糖值平均分成6組，每天給藥1次，連續(xù)一周。末次給藥前禁食4小時(shí)后給藥，給藥后2小時(shí)，眼眶取血測(cè)定其血糖值，與對(duì)照組比較，統(tǒng)計(jì)分析給藥后給藥組對(duì)四氧嘧啶引起血糖升高的程度，同時(shí)觀察各組小鼠每12小時(shí)的飲水變化。
表2 鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀對(duì)四氧嘧啶高血糖小鼠的影響

“**”表示P＜0.01，“*”表示P＜0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果(見表3-1)表明，鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿降低四氧嘧啶高血糖小鼠血糖具有顯著性意義(P＜0.05)，提示該兩個(gè)藥物具有一定的降血糖作用。
權(quán)利要求
1.中藥成分鹽酸巴馬汀用于治療II型糖尿病的藥物用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種來自中藥原料藥的鹽酸巴馬汀成分，并涉及這類成分在治療II型糖尿病疾病中的應(yīng)用。該鹽酸巴馬汀來自黃連或黃柏原料藥中的生物堿類提取物。提取方法簡(jiǎn)單實(shí)用，提純效果良好，成分物療效確切，通過藥效學(xué)研究，證明本發(fā)明的鹽酸巴馬汀可用于治療II型糖尿病的藥物用途。
文檔編號(hào)A61P3/10GK1582930SQ20041002622
公開日2005年2月23日 申請(qǐng)日期2004年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月10日
發(fā)明者楊廣德, 賀浪沖, 李西玲, 趙良 申請(qǐng)人:西安交通大學(xué)