專利名稱：連翹苷在制備治療肥胖病口服藥物和保健食品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及連翹苷在機(jī)體中減肥的新用途。
背景技術(shù)：
肥胖病，是人體體重超常的疾病，是當(dāng)今社會(huì)的常見(jiàn)和多發(fā)性疾病，也是世界衛(wèi)生組織確定的疑難性疾病之一。肥胖癥已成為世界范圍內(nèi)的流行病，在我國(guó)城市有10％～15％左右的發(fā)病率，在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國(guó)家發(fā)病率高達(dá)20％～30％，而且有逐年增高和年輕化傾向。肥胖病作為一種全身內(nèi)分泌代謝疾病，不但影響體態(tài)和活動(dòng)，而且與高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、糖尿病、痛風(fēng)、脂肪肝、內(nèi)分泌失調(diào)、肺泡低換氣綜合征、膽囊炎等密切相關(guān)，有損健康和有礙延壽，全世界每年因肥胖死亡的人數(shù)約28萬(wàn)，僅次于吸煙。因此，科學(xué)的防治肥胖是保健、延壽的措施之一。
藥物是防治肥胖病的有效手段之一。近年來(lái)，隨著對(duì)肥胖病的深入研究，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)治療肥胖病藥物的藥理作用進(jìn)行了大量研究，在藥物治療領(lǐng)域出現(xiàn)了不少新理論、新概念及新藥物，也有許多種類的治療肥胖病藥物上市。目前市場(chǎng)上銷售治療肥胖病的西藥主要有食欲抑制類、抑制腸道消化吸收類、增加能量消耗類，治療肥胖病西藥的主要缺點(diǎn)是副作用大，缺乏長(zhǎng)期療效，停藥后體重有反彈現(xiàn)象，如芬氟拉明，在臨床應(yīng)用20多年，多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期服用芬氟拉明可導(dǎo)致心臟瓣膜損害、肺動(dòng)脈高壓和手指壞死。苯丙胺類減肥藥可導(dǎo)致失眠、不安、神經(jīng)過(guò)敏、頭暈、震顫、血壓升高等。目前市場(chǎng)上銷售治療肥胖病的中成藥種類很多，但起效速度不及西藥迅速，而且產(chǎn)品質(zhì)量也難以保證，在相當(dāng)多中成藥減肥藥物中往往加入了一些西藥減肥藥物。另外，治療肥胖病的西藥和中成藥，價(jià)格都比較昂貴。目前開(kāi)發(fā)一種副作用小、起效速度快、價(jià)格便宜的治療肥胖病的藥物是當(dāng)前需要迫切解決的技術(shù)問(wèn)題。
連翹是我國(guó)的一種常用中藥，連翹苷是從連翹果實(shí)或者連翹葉中分離出來(lái)的一種化學(xué)成分，連翹苷的制備方法、化學(xué)性質(zhì)等方面的研究已有大量報(bào)道，但連翹苷藥理活性的研究報(bào)道較少，目前還未報(bào)道過(guò)連翹苷在治療肥胖病藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于克服上述治療肥胖病藥物的缺點(diǎn)，為用有效成分連翹苷制備的藥物和食品提供一種新用途。
解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是有效成分連翹苷在制備治療肥胖病口服藥物和保健食品中的應(yīng)用。
連翹苷是從我國(guó)常用中藥連翹果實(shí)或連翹葉中提取分離得到的一種化合物，它的分子式是C27H34O11，分子量為534.56，分子結(jié)構(gòu)式見(jiàn)下圖 連翹苷的制備方法已在《中藥化學(xué)》第188頁(yè)(上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1987)公開(kāi)。
連翹苷在抗氧化降血脂口服藥物中的應(yīng)用已在專利號(hào)為03108073.1、發(fā)明名稱為《一種抗氧化降血脂的口服藥物》的發(fā)明專利中公開(kāi)。
有效成分用連翹苷制備治療肥胖病的口服藥物以常規(guī)藥用制劑的形式來(lái)使用；所述的常規(guī)藥用制劑含作為活性成分在制劑中與藥學(xué)上可接受的載體如適宜于胃腸內(nèi)的有機(jī)或無(wú)機(jī)的固體或液體賦形劑混合，該藥用制劑可以是固體形式如片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑，也可以是液體形式如乳劑、糖漿劑等。
上述制劑中可含有輔助物質(zhì)、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑和其它常用的添加劑，如乳糖、檸酸、酒石酸、硬脂酸、硬脂酸鎂、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、花生油、橄欖油、可可脂、乙二醇、抗壞血酸等。
上述的藥用制劑可按照各種制劑常規(guī)的制備工藝制成。
有效成分連翹苷也可以加入乳制品、飲料、茶葉、面包等食品中，制成減肥保健食品。
有效成分連翹苷作為治療肥胖病的口服藥物和保健食品中的應(yīng)用，所制備成各種劑型的口服藥物和保健食品，成人口服，藥物和保健食品中連翹苷的含量應(yīng)為每天63～90mg，20天為一個(gè)療程，用藥3～5個(gè)療程，兒童酌情減量，保健食品可長(zhǎng)期使用。
上述藥品和保健食品中的有效成分連翹苷經(jīng)急性毒性試驗(yàn)和藥效試驗(yàn)。急性毒性試驗(yàn)表明，連翹苷對(duì)小鼠的LD50為8.30g/kg，說(shuō)明其毒副作用較小，使用比較安全。藥效試驗(yàn)表明，連翹苷可以減低營(yíng)養(yǎng)型肥胖小鼠的體重增長(zhǎng)率、脂肪系數(shù)、lee’s指數(shù)，降低血清總膽固醇和甘油三酯含量，使脂肪細(xì)胞變小，說(shuō)明連翹苷對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠具有較好的減肥作用。
具體實(shí)施例方式
下面發(fā)明人給出了用連翹苷制備治療肥胖病藥物的藥用制劑和保健食品的實(shí)施例。
實(shí)施例1藥用制劑制備成片劑，以生產(chǎn)片劑1000片為例所用原料和輔料及其重量配比如下連翹苷 30g淀 粉150g乳 糖120g其制備工藝按制劑學(xué)片劑的常規(guī)工藝進(jìn)行，每片重0.3g，每片含連翹苷30mg。
用法用量口服，每次一片，一日三次，小兒酌減。20天為一個(gè)療程。
實(shí)施例2藥用制劑制備成膠囊劑，以生產(chǎn)膠囊劑1000粒為例所用原料和輔料及其重量配比如下連 翹 苷 30g玉米淀粉 35g硬脂酸鎂5g其制備工藝按制劑學(xué)膠囊劑的常規(guī)工藝進(jìn)行，每粒重0.07g，每粒含連翹苷30mg。
用法用量口服，每次一粒，一日三次，小兒酌減。20天為一個(gè)療程。
實(shí)施例3藥用制劑制備成顆粒劑，以生產(chǎn)顆粒劑1000g為例所用原料和輔料及其重量配比如下連翹苷 10g蔗糖粉 650g糊 精 340g制備工藝按制劑學(xué)顆粒劑的常規(guī)工藝進(jìn)行，每袋3g，1g含連翹苷10mg。
用法用量口服，每次1袋，一日三次，小兒酌減。20天為一個(gè)療程。
實(shí)施例4藥用制劑制備成糖漿劑，以生產(chǎn)糖漿劑1000mL為例所用原料和輔料及其重量配比如下連翹苷3g蔗 糖 600g苯甲酸1g蒸餾水加至1000mL其制備工藝按制劑學(xué)糖漿劑的常規(guī)工藝進(jìn)行，1mL含連翹苷3mg。
用法用量口服，每次10mL，一日三次，小兒酌減。20天為一個(gè)療程。
實(shí)施例5取連翹苷7g，用10倍量的乙醇溶解，均勻噴灑到1Kg茶葉上，使每克茶葉中連翹苷的含量為7mg，烘干，分裝成每袋3g的袋泡茶，每天飲用1～3袋，可長(zhǎng)期飲用。
實(shí)施例6取連翹苷70mg，用30mL的0.3％食品用羧甲基纖維素鈉懸浮，加入1L牛奶中制成具有減肥保健乳制品，每100mL含連翹苷7mg，滅菌后包裝，每袋230mL，每人每天飲用不超過(guò)1000mL，可長(zhǎng)期飲用。
實(shí)施例7
取連翹苷280mg，加入1000g標(biāo)準(zhǔn)粉，植物油50g，20g活性酵母，按照常規(guī)面包制作工藝進(jìn)行。每人每天食用250g，含連翹苷70mg。
在其他食品中，如餅干、蛋糕等食品中，也可以加入連翹苷，按每人每天連翹苷食用量70mg為宜。
為了驗(yàn)證有效成分連翹苷治療肥胖病的有益效果，申請(qǐng)人將已制備的連翹苷進(jìn)行了毒性和藥效試驗(yàn)，各種試驗(yàn)情況如下一、連翹苷的急性毒性試驗(yàn)1、受試藥物連翹苷(純度大于97.22％)，自制。用0.5％羧甲基纖維素鈉配制成相應(yīng)濃度的懸浮液。
2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠由陜西省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重20～22g，鼠齡6～7周，動(dòng)物合格證為醫(yī)動(dòng)字08-24號(hào)。
3、實(shí)驗(yàn)方法取健康ICR小鼠60只，體重20～22g，雌雄各半，隨機(jī)分為四組，每組15只，喂養(yǎng)一周，待動(dòng)物熟悉飼養(yǎng)環(huán)境后，禁食12小時(shí)，灌胃給予不同濃度的連翹苷藥液，在12小時(shí)內(nèi)給藥兩次，間隔6小時(shí)，給藥體積為0.2mL/10g(根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，一次給藥最大濃度和最大體積動(dòng)物死亡數(shù)僅20％左右，給藥兩次)，給藥后觀察一周，記錄各組動(dòng)物死亡數(shù)。
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 連翹苷對(duì)小鼠的LD50測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果表組別 鼠數(shù)(n) 劑量(d)(g/kg)logd 死亡數(shù) 死亡率(p)p21 15 12.01.0792 13 0.866 0.7552 15 8.40.9243 8 0.533 0.2843 15 5.90.7684 2 0.133 0.01815 4.10.6149 0 0 0
用改進(jìn)寇氏法計(jì)算LB50及95％可信限，經(jīng)計(jì)算，LD50＝8.30g/kg，LD50的95％可信限為7.29～9.45g/kg。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論連翹苷對(duì)小鼠的LD50為8.30g/kg，按照世界衛(wèi)生組織規(guī)定的化學(xué)物質(zhì)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，屬于實(shí)際無(wú)毒物質(zhì)。
二、連翹苷對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠的減肥作用試驗(yàn)1、受試藥物連翹苷(純度大于97.22％)，用0.5％羧甲基纖維素鈉配制成相應(yīng)濃度的懸浮液；陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸芬氟拉明(上?，F(xiàn)代浦東藥廠有限公司生產(chǎn))，用0.5％羧甲基纖維素鈉配制成相應(yīng)濃度。
2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠由陜西省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重20～22g，鼠齡6～7周，動(dòng)物合格證為醫(yī)動(dòng)字08-24號(hào)。
3、實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常對(duì)照組和高脂飼料組，正常對(duì)照組動(dòng)物從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始至結(jié)束均用普通飼料喂養(yǎng)，其余動(dòng)物均給予高脂飼料(高脂飼料重量配比膽固醇1％、蛋黃粉10％、豬油10％、普通飼料79％)，3周后測(cè)體重與正常對(duì)照組比較，數(shù)據(jù)差異具有顯著意義，確定已形成營(yíng)養(yǎng)性肥胖動(dòng)物模型。將高脂飼料組動(dòng)物隨機(jī)分為5組高脂血癥對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組、連翹苷45mg/kg大劑量組、連翹苷15mg/kg中劑量組、連翹苷5mg/kg小劑量組，每天繼續(xù)給予高脂飼料，高脂血癥對(duì)照組按照0.2mL/10g給予0.5％羧甲基纖維素鈉，連翹苷大、中、小三個(gè)劑量組，每天分別以劑量為45mg/kg、15mg/kg、5mg/kg的連翹苷懸浮液(連翹苷用0.5％羧甲基纖維素鈉配制成濃度為2.25mg/mL、0.75mg/mL、0.25mg/mL)灌胃給藥，陽(yáng)性藥對(duì)照組每天灌胃給藥4mg/kg的芬氟拉明；正常對(duì)照組給以等體積的0.5％羧甲基纖維素鈉溶液。17天后，各組小鼠稱重，眼眶取血，分離血清備用；動(dòng)物引頸脫臼處死，分離生殖器旁脂肪備用。
4、指標(biāo)測(cè)定血清總膽固醇測(cè)定用酶法試劑盒由山東濰坊開(kāi)發(fā)區(qū)三濰(3V)生物工程有限公司生產(chǎn)，批號(hào)200402166，按照試劑盒使用說(shuō)明進(jìn)行測(cè)定操作。
血清甘油三酯的測(cè)定用酶法試劑盒由山東濰坊開(kāi)發(fā)區(qū)三濰(3V)生物工程有限公司生產(chǎn)，批號(hào)200402166，按照試劑盒使用說(shuō)明進(jìn)行測(cè)定操作。
體重增長(zhǎng)率及l(fā)ee’s指數(shù)計(jì)算記錄給藥前體重(始重)，解剖前體重(終重)，計(jì)算體重增長(zhǎng)率。測(cè)小鼠鼻尖到肛門(mén)的長(zhǎng)度，計(jì)算lee’s指數(shù)。
脂肪濕重和脂肪系數(shù)計(jì)算分離小鼠生殖器旁邊脂肪，稱量脂肪濕重，用脂肪濕重除以小鼠體重記作脂肪系數(shù)。
脂肪細(xì)胞大小測(cè)定取生殖器旁同一位置處脂肪一小塊，用2.5％甲醛乙醇液固定，石蠟切片，HE染色，在400倍鏡下計(jì)數(shù)全視野中脂肪細(xì)胞數(shù)目，并用經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)物鏡測(cè)微尺糾正的目鏡測(cè)微器測(cè)量視野最大細(xì)胞最大徑。
5、數(shù)據(jù)處理計(jì)量資料均以x±s表示.兩樣本比較采用t檢驗(yàn)。
6、試驗(yàn)結(jié)果(1)連翹苷對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠血清總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)的影響試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
表2連翹苷對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠血清總膽固醇和甘油三酯的影響(x±s，n＝12)組別 鼠數(shù) TG(mmol/l) TC(mmol/L)正常對(duì)照組120.48±0.19** 1.68±0.02**模型對(duì)照組121.34±0.17 3.49±0.30連翹苷大劑量組120.81±0.38** 2.91±0.05**連翹苷中劑量組121.08±0.30*2.90±0.13**連翹苷小劑量組121.03±0.34*3.29±0.06*陽(yáng)性藥對(duì)照組 120.92±0.46*3.09±0.09**注與模型對(duì)照組相比，經(jīng)t檢驗(yàn)*P＜0.05，**P＜0.01連翹苷各劑量組均可以降低肥胖小鼠的血清總膽固醇和甘油三酯水平，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)差別有顯著意義。
(2)連翹苷對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠體重增長(zhǎng)率和lee’s指數(shù)的影響試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。
表3連翹苷對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠體重和lee’s指數(shù)的影響(x+s，n＝12)組 別 鼠數(shù) 始重(灌藥前) 終重 Lee’s指數(shù)體重增長(zhǎng)率(％)正常對(duì)照組 12 22.93±2.4824.41±2.87 344.5±14.7*6.06模型對(duì)照組 12 26.79±1.0330.92±2.39 362.5±16.213.35大劑量組12 26.52±1.9826.90±2.51 332.8±15.0*1.41中劑量組12 26.60±2.5227.16±3.14 345.3±13.6*1.91小劑量組12 26.47±2.3126.87±2.88 355.7±23.2 1.71陽(yáng)性藥對(duì)照組12 26.95±2.3427.61±3.06 339.7±15.8*2.39注與模型對(duì)照組相比，經(jīng)t檢驗(yàn)*P＜0.05，連翹苷各劑量組均可以降低肥胖小鼠的體重增長(zhǎng)率及l(fā)ee’s指數(shù)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理，除連翹苷小劑量組外，陽(yáng)性藥組、連翹苷大劑量和中劑量組lee’s指數(shù)的數(shù)據(jù)差別有顯著意義。
(3)連翹苷對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠脂肪濕重、脂肪系數(shù)、全視野細(xì)胞數(shù)及脂肪細(xì)胞大小的影響試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。
表4連翹苷對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠脂肪細(xì)胞及肝系數(shù)的影響(x±s，n＝12)組別 脂肪濕重(g) 脂肪系數(shù)(％) 全視野細(xì)胞數(shù)(個(gè)) 脂肪細(xì)胞最大徑(um)正常對(duì)照組 0.307±0.060**1.20±0.29** 118.7±6.1** 74.6±4.84**模型對(duì)照組 0.770±0.057 2.91±0.2071.9±7.0**97.3±5.84大劑量組0.571±0.056**1.88±0.21** 115±5.9** 71.7±4.54**中劑量組0.575±0.070**2.11±0.28** 102.9±10.3** 81.2±5.83**小劑量組0.526±0.061**1.91±0.44** 110.1±5.6** 84.4±2.67**陽(yáng)性藥對(duì)照組0.630±0.092**2.01±0.63** 109±5.3** 80.9±5.89**
注與模型對(duì)照組相比，經(jīng)t檢驗(yàn)**P＜0.01。
連翹苷各劑量組的小鼠脂肪濕重、脂肪系數(shù)、均小于模型對(duì)照組，連翹苷各劑量組的全視野脂肪細(xì)胞數(shù)目也高于模型對(duì)照組，模型對(duì)照組的脂肪細(xì)胞最大徑高于給藥組及正常對(duì)照組、陽(yáng)性藥組，經(jīng)t檢驗(yàn)，各組別的上述指標(biāo)與模型對(duì)照組比較，數(shù)據(jù)差異均有顯著性意義。
試驗(yàn)結(jié)論連翹苷可以減低營(yíng)養(yǎng)型肥胖小鼠的體重增長(zhǎng)率、脂肪系數(shù)、lee’s指數(shù)，降低血清總膽固醇和甘油三酯含量，使脂肪細(xì)胞變小，說(shuō)明連翹苷對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠具有較好的減肥作用。
權(quán)利要求
1.有效成分連翹苷在制備治療肥胖病口服藥物和保健食品中的應(yīng)用。
全文摘要
有效成分連翹苷在制備治療肥胖病口服藥物和保健食品中的應(yīng)用。連翹苷是從中藥連翹果實(shí)或連翹葉中提取分離得到的一種有效成分，有效成分連翹苷與有機(jī)或無(wú)機(jī)的固體或液體賦形劑混合，制備成固體口服制劑如片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑，也可以制備成液體口服制劑如乳劑、糖漿劑，有效成分連翹苷還可加入到食品中制成保健食品。連翹苷經(jīng)毒性和藥效試驗(yàn)，毒性試驗(yàn)表明，連翹苷對(duì)小鼠的LD
文檔編號(hào)A61P3/04GK1602855SQ20041002638
公開(kāi)日2005年4月6日 申請(qǐng)日期2004年8月5日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月5日
發(fā)明者李發(fā)榮, 王喆之, 封衛(wèi)毅, 楊建雄 申請(qǐng)人:陜西師范大學(xué)