專利名稱：含有α-硫辛酸、氨溴索和/或血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑的藥物制劑及其治療神經(jīng)變 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有α-硫辛酸、氨溴索和/或ACE抑制劑(血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑)的藥物制劑。此外，本發(fā)明涉及一種藥物制劑用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的衰退疾病，這些疾病例如，缺血或出血性中風(fēng)，局灶或全局性缺血，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，阿爾茨海默氏病，帕金森氏病，亨廷頓舞蹈癥，(腦脊髓)多發(fā)性硬化，由老年性或與年老相關(guān)的癡呆的神經(jīng)衰退、外傷和常染色體顯性神經(jīng)垂體尿崩癥(ADNDI)導(dǎo)致的神經(jīng)變性。本發(fā)明還包括一種根據(jù)本發(fā)明的制劑的用途，用于預(yù)防和治療由心臟和心血管損傷導(dǎo)致的大腦缺血。上述各種疾病的臨床適應(yīng)癥都會(huì)導(dǎo)致CNS特定區(qū)域的功能喪失，并且對(duì)大部分病例來(lái)說(shuō)，還會(huì)導(dǎo)致不可逆的精神和肉體上的殘疾。對(duì)神經(jīng)變性疾病中細(xì)胞巰基態(tài)進(jìn)行調(diào)節(jié)性干涉的目的，一方面在于將損傷的發(fā)生降到最低，另一方面在于防止半影區(qū)內(nèi)在細(xì)胞損傷不很嚴(yán)重的情況下出現(xiàn)的損傷。
背景技術(shù)：
細(xì)胞的巰基/二硫化物態(tài)是進(jìn)行生物代謝最為重要的基本前提條件之一。特別是對(duì)于蛋白質(zhì)的功能，它在很大程度上受到巰基/二硫化物基團(tuán)的氧化和還原的影響。
受幾種不同的酶控制的二硫化物基團(tuán)的斷裂以及巰基的生成這種代謝過(guò)程的維持和正常功能，從細(xì)胞的多重生物功能來(lái)說(shuō)，是細(xì)胞變異性的必要條件，尤其是對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化過(guò)程十分必要，這其中包括細(xì)胞程序性死亡及細(xì)胞保護(hù)和細(xì)胞去污的機(jī)制。這種代謝系統(tǒng)的紊亂以及巰基濃度的變化都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞功能的嚴(yán)重紊亂，這種紊亂僅能夠在個(gè)別病人中受到局部限制；通常，這種紊亂會(huì)對(duì)大部分相關(guān)組織產(chǎn)生不利影響，甚至?xí)暗洁徑M織或整個(gè)機(jī)體。
在神經(jīng)變性疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，至今仍沒(méi)有對(duì)細(xì)胞中被擾亂的巰基/二硫化物態(tài)所產(chǎn)生的作用進(jìn)行充分的探究。因此，急需闡明巰基態(tài)和神經(jīng)變性疾病病理生理學(xué)之間的關(guān)系，尤其是旨在尋找到能夠治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和損傷的強(qiáng)力有效藥物，對(duì)于這一點(diǎn)但至今還沒(méi)有等效的藥物介入治療。
在局部缺血后產(chǎn)生神經(jīng)變性的過(guò)程中，除了內(nèi)皮損傷以外(血腦屏障的屏蔽功能發(fā)生變化)，內(nèi)皮保護(hù)機(jī)制中的抑制作用發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，因?yàn)樵诰植咳毖l(fā)生后，多種酶和再生系統(tǒng)就受到了抑制[1，2]。這一作用尤其在多次灌注期間有所體現(xiàn)。
不論對(duì)于患者患有中風(fēng)這種情況，還對(duì)于出現(xiàn)其他神經(jīng)變性疾病的情況來(lái)說(shuō)，例如具有急性或慢性過(guò)程的疾病，比如帕金森氏病、阿爾茨海默氏病[3]、衰老過(guò)程、出血性中風(fēng)[6]、興奮毒性[7]、ALS以及外傷[8]，討論了由于缺乏保護(hù)或再生系統(tǒng)或再生系統(tǒng)受到抑制而產(chǎn)生的神經(jīng)性損傷。但現(xiàn)在還不能闡明其中產(chǎn)生真正影響的是什么。然而，如果組成這些內(nèi)源性保護(hù)系統(tǒng)中的部分成分有缺陷，或是僅在較小的范圍內(nèi)出現(xiàn)(如錐體細(xì)胞所示的實(shí)例)，那么都將產(chǎn)生嚴(yán)重的后果。
缺乏細(xì)胞保護(hù)機(jī)制尤其會(huì)致使脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化，其結(jié)果是細(xì)胞膜的完整性喪失。細(xì)胞膜包覆的蛋白質(zhì)也會(huì)受到這種機(jī)制的影響。例如在局部缺血的情況下，谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能將會(huì)受到影響[8]，其功能是將已經(jīng)被釋放的谷氨酸運(yùn)回到細(xì)胞中，以此來(lái)防止這種神經(jīng)遞質(zhì)分子在細(xì)胞外達(dá)到毒性濃度。
直到現(xiàn)在a-硫辛酸用作治療外周糖尿病性多神經(jīng)病中感覺(jué)錯(cuò)亂的輔藥，僅取得了一般的成果(糖尿病學(xué)1995；381425-1433；糖尿病研究臨床實(shí)踐.1995；2919-26；糖尿病護(hù)理1999；221296-1301；藥物代謝評(píng)論1997；291025-1054；DE 43 43 592 C2)。此外，在德國(guó)專利DE 44 47 599 C2和歐洲專利EP 0 530446 B1中已經(jīng)對(duì)a-硫辛酸在治療其它神經(jīng)紊亂例如耳鳴和突然性耳聾中的用途給予了保護(hù)。
在出現(xiàn)糖尿病癥狀的期間，細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制不僅基于影響蛋白的糖依賴性修飾(蛋白質(zhì)糖基化)，以及減少毒性酮體的生成，而且還基于α-硫辛酸的功能及其作為抗氧化劑的代謝產(chǎn)物[9]。
在歐洲專利EP0812590 A2和EP0427247 B1中揭示了α-硫辛酸作為外周細(xì)胞保護(hù)劑、鎮(zhèn)痛劑以及抗炎藥物的用途。
氨溴索(反-4-(2-氨基-3，5-二溴芐氨基)環(huán)己烷鹽酸鹽)可用于幾種不同的給藥形式中，作為治療肺和支氣管疾病中溶解粘液的藥物(WO96/33704；GB 2,239,242；WO 01/05378)。此外，從德國(guó)專利DE3530761中可以了解到氨溴索用作抗尿酸過(guò)多的用途。氨溴索作為溶解粘液藥劑的效果是基于它對(duì)支氣管細(xì)胞表面活性劑產(chǎn)物的刺激作用，特別也基于它的自由基清除作用[10]。上述物質(zhì)的抗氧化活性主要從肺部的細(xì)胞[11]以及感染肌體的結(jié)構(gòu)[12]中檢出。此外我們知道，谷胱甘肽代謝的調(diào)節(jié)酶直接受到加入的大劑量氨溴索的影響[13]。
血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑用于治療廣譜心血管疾病是非常成功的。這類物質(zhì)分別通過(guò)抑制血管緊張素I轉(zhuǎn)化為血管緊張素II，和通過(guò)對(duì)激肽代謝的影響，來(lái)發(fā)揮降低血壓的作用。對(duì)于影響細(xì)胞間氧化還原過(guò)程，必須區(qū)分出含有巰基的ACE抑制劑例如卡托普利(1-[(2S)-3-巰基-2-甲基-丙?；?]L-脯氨酸)的作用，以及不含有巰基的ACE抑制劑例如依納普利(1-{N-[(S)1-乙氧羰基-3-苯丙基-]L-丙氨?；?}L-脯氨酸)的作用。前者作為自由基清除劑直接參與反應(yīng)，因此具有抗氧化的作用，后者是不含有SH基團(tuán)的抑制劑，也就基本上不能發(fā)揮此作用。然而，這兩組物質(zhì)的共同特性是他們通過(guò)對(duì)谷胱甘肽還原酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶以及超氧化物岐化酶的調(diào)節(jié)，來(lái)影響谷胱甘肽氧化還原循環(huán)(《美國(guó)生理學(xué)和調(diào)節(jié)完整比較生理學(xué)雜志》，2000；278572-577)。
在德國(guó)專利DE4420102A1中，α-硫辛酸與不同的藥物組合，用于提高現(xiàn)有藥物對(duì)心血管疾病和由糖尿病引起的疾病的治療作用這一用途已經(jīng)受到保護(hù)。除了α-硫辛酸與鈣離子拮抗劑的組合以外(這種組合不屬于目前描述的新型物質(zhì)組合)，這篇專利的權(quán)利要求限制在這些用途范圍內(nèi)。在德國(guó)專利DE4420102 A1中，已對(duì)α-硫辛酸和鈣離子拮抗劑的組合物專門用于治療神經(jīng)退化性疾病的方案提出保護(hù)。德國(guó)專利DE 4420102 A1主權(quán)利要求的主題是，不同的α-硫辛酸立體異構(gòu)體區(qū)分為作為特定的有效制劑以及特定的藥物配方。

發(fā)明內(nèi)容
與其相反，本發(fā)明要求保護(hù)的全新物質(zhì)組合和藥物，以它們?yōu)榛A(chǔ)減緩神經(jīng)損傷的進(jìn)程，這種損傷是導(dǎo)致神經(jīng)變性疾病的病因以及這種疾病產(chǎn)生的后果。新型神經(jīng)保護(hù)藥物的制造是以能夠?qū)χ袠猩窠?jīng)系統(tǒng)(CNS)細(xì)胞的巰基/二硫化物態(tài)產(chǎn)生正面影響的物質(zhì)為基礎(chǔ)的。由于目前還沒(méi)有預(yù)防和治療神經(jīng)變性疾病的有效藥物(不論是治療還是緩解癥狀)，因此當(dāng)前記敘的發(fā)明潛在的發(fā)掘了藥物的巨大潛力。
毫無(wú)疑問(wèn)，本發(fā)明基于的是下述新發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元具有較低含量的游離(還原)巰基基團(tuán)，這個(gè)事實(shí)由于某種原因不利地影響了他們對(duì)于神經(jīng)變性損傷的易損性。令人驚奇的是，有一種組合物能夠顯著的降低變性病變/損傷后的腦損傷，該組合物是兩種或兩種以上下述物質(zhì)的組合α-硫辛酸及其鹽和異構(gòu)體、氨溴索及其鹽和前藥、以及至少一種ACE抑制劑。潛在的，發(fā)現(xiàn)了一種有發(fā)展前景的建議，用于預(yù)防和治療神經(jīng)變性疾病，該疾病到目前還不能被處理，或者只能進(jìn)行不充分的治療。
在形成本發(fā)明的研究框架下，我們能夠發(fā)現(xiàn)令人驚奇的事實(shí)，那就是細(xì)胞間巰基/二硫化物的代謝在神經(jīng)變性疾病的發(fā)病機(jī)理中扮演了十分重要的角色。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)可以說(shuō)明，極易損的CNS神經(jīng)細(xì)胞(神經(jīng)元)得到了較少量的游離巰基，因此與其它非神經(jīng)細(xì)胞(例如星形細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞)相比，其受到的損傷要小。這一點(diǎn)可從圖1a、b所示的組織化學(xué)熒光照片，或從圖2a、b所示的神經(jīng)水平圖中清楚地看到。此外，基于上述發(fā)現(xiàn)，巰基反應(yīng)化合物作為神經(jīng)變性過(guò)程中的保護(hù)機(jī)制的重要角色可以通過(guò)兩種或多種下列物質(zhì)對(duì)細(xì)胞巰基/二硫化物態(tài)的受控的影響進(jìn)行說(shuō)明，這些物質(zhì)包括α-硫辛酸、其鹽和異構(gòu)體、以及谷胱甘肽代謝調(diào)諧劑(氨溴索及其鹽和前藥以及一種ACE抑制劑)。
令人驚奇的是，通過(guò)組合兩種或兩種以上下述物質(zhì)α-硫辛酸及其鹽和異構(gòu)體、溴氨索及其鹽和前藥、以及至少一種ACE抑制劑，就能夠在所述的試驗(yàn)中成功并顯著的提高神經(jīng)變性損傷后神經(jīng)元的存活力。與這些結(jié)果相反的是，單獨(dú)應(yīng)用上述任何一種物質(zhì)都沒(méi)有效果。在目前的實(shí)驗(yàn)中，我們測(cè)定了變性神經(jīng)元的比率，這是一種臨床相關(guān)性極好的參數(shù)。
因此，本發(fā)明是關(guān)于含有兩種或兩種以上下述物質(zhì)的藥物制劑α-硫辛酸及其鹽和異構(gòu)體，溴氨索及其鹽和前藥，以及至少一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑，可選擇與藥學(xué)上可接受的常用載體、添加劑和輔料合用。
本發(fā)明還涉及這種藥物制劑在預(yù)防和治療神經(jīng)變性疾病中的用途，所述藥物制劑中含有兩種或兩種以上的下述物質(zhì)α-硫辛酸及其鹽和異構(gòu)體，溴氨索及其鹽和前藥，以及至少一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑，可選擇與藥學(xué)上可接受的常用載體、添加劑和輔料合用。
因此，α-硫辛酸、氨溴索和/或ACE抑制劑對(duì)紊亂的巰基代謝的糾正獲得了對(duì)于預(yù)防和治療多種疾病的根本上的重要性，這些疾病有不同的起因，然而，特別是對(duì)于神經(jīng)變性疾病的預(yù)防和治療方法。在不囿于某種理論的前提下，可認(rèn)為此處描述的化合物所發(fā)揮的作用來(lái)源于它們的巰基穩(wěn)定功效，通過(guò)這種功效，利用本發(fā)明中的藥劑新組合和目標(biāo)組合，令人驚訝地引入神經(jīng)協(xié)同作用。與之相反，單獨(dú)應(yīng)用一種物質(zhì)則基本上沒(méi)有效果。
選擇的實(shí)驗(yàn)條件基本上滿足臨床情況[14，15]。所有被測(cè)化合物都是臨床上已經(jīng)認(rèn)可的藥物。因而，單一物質(zhì)已經(jīng)成功的通過(guò)了安全清除測(cè)試。所有的單一物質(zhì)以及它們的組合物都是沒(méi)有神經(jīng)毒性的。
根據(jù)本發(fā)明，對(duì)具有如權(quán)利要求1所述特征的藥物組合物提出保護(hù)。換言之本發(fā)明包括了兩種或兩種以上的上述有效藥物的組合，同時(shí)也包括全部三種有效藥物的組合。從屬權(quán)利要求2到9是優(yōu)選的實(shí)施方案。權(quán)利要求10請(qǐng)求保護(hù)本發(fā)明制劑在一個(gè)指征中的應(yīng)用。從屬權(quán)利要求11和12是這些應(yīng)用的優(yōu)選實(shí)施方案。
根據(jù)本發(fā)明所述的藥物組合物的成分之一可以是α-硫辛酸。本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)“α-硫辛酸”可以理解為包括純?chǔ)?硫辛酸物質(zhì)(該物質(zhì)的化學(xué)名根據(jù)命名法應(yīng)為(R)-5-(1，2-二硫戊環(huán)-3-基)戊酸)及其鹽；然而，就目前的情形來(lái)看，只有藥學(xué)上可接受的鹽是適用的。術(shù)語(yǔ)“α-硫辛酸”也同樣可以理解為包含其立體異構(gòu)體、兩種異構(gòu)體的混合物以及外消旋混合物。也可以認(rèn)為術(shù)語(yǔ)“α-硫辛酸”是包含任何一種α-硫辛酸的代謝物，其中包括所述酸的氧化和還原形式。同時(shí)也可以將上述α-硫辛酸物質(zhì)組合使用。
谷胱甘肽代謝的效應(yīng)物之一和可用于本發(fā)明的藥品組合物的成分是具有通式I的氨溴索。

可直接使用上述結(jié)構(gòu)的氨溴索，或優(yōu)選使用其鹽和/或其前藥形式的物質(zhì)。只能使用藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，術(shù)語(yǔ)“氨溴索的前藥”可以認(rèn)為是包含所有能夠使用和/或給予的作為所述化合物前體的物質(zhì)，以及在體內(nèi)能夠轉(zhuǎn)化(“激活”)為活性藥物的物質(zhì)，例如當(dāng)受到某種酶的作用時(shí)。
作為谷胱甘肽代謝中的第二個(gè)效應(yīng)物和本發(fā)明藥物組合物中的另一個(gè)可以想到的組分，使用了一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑(或可以用幾種抑制劑)。所有本身已知的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑均可以使用。例如依那普利、卡托普利、賴索普利(lisopril)、雷米普利和螺普利，但本發(fā)明并不僅限于這些物質(zhì)。與此同時(shí)，可以使用多個(gè)分子變體，這些變體可主要以其藥物代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行區(qū)分，同時(shí)具有相似的藥物作用動(dòng)力學(xué)全貌。
從得到的結(jié)果來(lái)看，分子中的游離巰基基團(tuán)不是產(chǎn)生治療效果的前提條件，因?yàn)楫?dāng)使用不含巰基基團(tuán)的ACE抑制劑時(shí)，也能夠得到相似的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選使用下述化合物A)1-[(2S)-3-巰基-2-甲基丙?；?]L-脯氨酸(卡托普利)，具有通式II所示的結(jié)構(gòu) B)1-{N2-[(S)-1-羧基-3-苯丙基]L-賴氨酰-}L-脯氨酸(賴諾普利)具有通式III所示的結(jié)構(gòu)
C)1-{N-[(S)-1-乙氧羰基-3-苯丙基-]L-丙氨酰-}L-脯氨酸(依那普利)，具有通式IV所示的結(jié)構(gòu) D)(2S，3aS，6aS)-1-{(S)-N-[(S)-1-乙氧羰基-3-苯丙基-]丙氨酰-}-八氫環(huán)戊基[b]-吡咯-2-羧酸(雷米普利)，具有通式V所示的結(jié)構(gòu) 還包括例如被取代、修飾或置換的脯氨酸化合物E) 螺普利(8S)-7-{(S)-N-[(S)-1-乙氧羰基-3-苯丙基-]丙氨酰-}-1，4-二硫雜-7-氮雜螺[4，4]壬烷-8-羧酸；
咪達(dá)普利(4S)-3-{N-[(S)-1-乙氧羰基-3-苯丙基-]L-丙氨酰-}1-甲基-2-氧代-4-咪唑烷羧酸； 莫昔普利(3S)-2-{N-[(S)-1-乙氧羰基-3-苯丙基-]L-丙氨酰-}1，2，3，4-四氫-6，7-二甲氧基-3-異喹啉羧酸。
就上述化合物的給藥來(lái)講，用于某人的優(yōu)選藥用劑量取決于所使用的化合物。
在本發(fā)明所述的藥物組合物中，上述各組物質(zhì)可以包含在每一個(gè)期望的組合物中。本發(fā)明的優(yōu)選例子是含有下述物質(zhì)的組合藥物制劑α-硫辛酸、其鹽、立體異構(gòu)體或代謝產(chǎn)物，以及氨溴索、其鹽或其前藥的組合；或是包含α-硫辛酸、其鹽、立體異構(gòu)體或代謝產(chǎn)物，以及一個(gè)或幾個(gè)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的組合；再或是含有一個(gè)或幾個(gè)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，以及氨溴索、其鹽或其前藥的組合；或是含有α-硫辛酸、其鹽、立體異構(gòu)體或代謝產(chǎn)物，以及氨溴索、其鹽或其前藥，與一個(gè)或幾個(gè)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的組合。
本發(fā)明組合物中上述組分的含量可以在一個(gè)比較寬泛的范圍內(nèi)變化，這主要由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)被給予組合物的病人情況來(lái)確定。疾病類型及其嚴(yán)重程度、病人的狀態(tài)、體重以及患者的代謝參數(shù)、給藥途徑的選擇，這些都是給藥劑量的重要參考變量。α-硫辛酸、其鹽或異構(gòu)體的治療有效量—與本發(fā)明藥物組合物中含有的其它成分的有效劑量一樣—是由患者的狀況決定，并且決定性地取決于本領(lǐng)域用藥的常用劑量，以及患者的相關(guān)參數(shù)，例如上述參數(shù)。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，用于患者的人類用藥的藥物組合物中含有的α-硫辛酸的量為30到1200mg/天，優(yōu)選200到600mg/天。上述劑量是每天給藥的量，可以每日單劑量或多劑量的方式給予患者，最優(yōu)選每日至多三劑量。用于患者的人類用藥的藥物組合物中，氨溴索的劑量?jī)?yōu)選為7.5到90mg/天，尤其優(yōu)選60到75mg/天，所述劑量也是每日所用的劑量，其可分別以每日單劑量或多劑量的方式給予患者，最優(yōu)選每日至多三劑量。用于人類用藥的ACE抑制劑的劑量為1到50mg/天，尤其優(yōu)選5到20mg/天，所述劑量也是每日所用的劑量，其可分別以每日單劑量或多劑量的方式給予患者，最優(yōu)選每日至多三劑量。
此外，藥物組合物中還可含有常用的載體、添加劑和/或輔料，這取決于用藥部位、給藥形式或其它要求。這些物質(zhì)可以包含例如水性溶劑、穩(wěn)定劑、懸浮劑、分散劑、潤(rùn)濕劑、分解質(zhì)(此處指用于口服給藥組合物的片劑形式中)、及食品添加劑。
本發(fā)明藥物組合物可以由本領(lǐng)域已知的方法制成任意劑型。例如，優(yōu)選劑型包括有含有有機(jī)和/或無(wú)機(jī)溶劑的溶液劑、顆粒劑、氣霧劑、粉劑、懸浮劑、乳劑、片劑(也可選用為咀嚼的片劑)和/或包衣片劑，能夠延緩或延遲有效藥物釋放的片劑、膠囊劑以及透過(guò)皮膚給藥的系統(tǒng)。在這些劑型中，本發(fā)明藥物組合物的組份可以存在于單一的制劑形式中，也可以存在于各自獨(dú)立的制劑形式中。
本發(fā)明使用的組合制劑可以常規(guī)的藥理給藥形式給予患者，作預(yù)防或治療用?？赡艿慕o藥形式有片劑(耐胃液片、包衣片)、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、溶液劑、乳液、懸浮劑、氣霧劑、透皮給藥系統(tǒng)、能夠使一種或全部有效藥物延緩或延遲釋放的給藥形式，或是能夠不延遲藥物釋放的給藥形式。各組分可分別以獨(dú)立的制劑形式給藥。此外，也可以將這些各自獨(dú)立的制劑以單一的劑型施用，其中符合特定病患的單一成分的濃度用量分可以下述形式給予片劑(耐胃液片、包衣片)、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、溶液劑、乳劑、懸浮劑、氣霧劑、透皮給藥系統(tǒng)、對(duì)一種或所有有效藥劑具有延緩或延遲釋放效果的給藥形式或是能夠不延遲藥物釋放的給藥形式。
本發(fā)明藥物組合物可以各種任意的給藥途徑給予患者。并不限于下述實(shí)例口服、口腔內(nèi)、肺、鼻、經(jīng)皮、靜脈、皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、直腸、陰道或鞘內(nèi)給藥，任選的加入本領(lǐng)域已知的載體、輔料和添加劑，也可與食品添加劑組合。各組分可分別以獨(dú)立的制劑形式給藥。此外，也可以將這些各自獨(dú)立的制劑以單一的劑型給藥，其中根據(jù)特定的病例其濃縮的單獨(dú)組分可以下述系統(tǒng)的方式給予例如口服、口腔內(nèi)、肺、鼻、經(jīng)皮、靜脈、皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、直腸、陰道或鞘內(nèi)給藥，可任選加入本領(lǐng)域已知的載體、輔料和添加劑，也可與食品添加劑組合。各成分可以單一制劑的形式使用。此外，那些單一的制劑可以一種模式給藥，其中符合特定病患的獨(dú)立成分的濃度量以系統(tǒng)的給藥方式使用，例如口服、口腔內(nèi)、肺、鼻、經(jīng)皮、靜脈、皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、直腸、陰道或鞘內(nèi)給藥，可任選加入本領(lǐng)域已知的載體、輔料和添加劑，也可與食品添加劑組合。
本發(fā)明的藥用組合物，其中包含兩種或兩種以上的前面詳述的組分，在本發(fā)明的含義中，特別適合用于預(yù)防和治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)變性疾病。對(duì)這樣的病例可用各自獨(dú)立的制劑同時(shí)進(jìn)行治療、也可按獨(dú)立的時(shí)間段實(shí)施間歇治療。有利的是，本發(fā)明藥物組合物可以用于預(yù)防和治療下述疾病局部缺血和出血性中風(fēng)、肌萎縮性側(cè)索硬化、阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷頓舞蹈癥，(腦脊髓)多發(fā)性硬化、老年人、癡呆、顱腦外傷和常染色體顯性神經(jīng)垂體尿崩癥(ADNDI)中出現(xiàn)的神經(jīng)變性。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明藥物組合物也可以用于預(yù)防和治療由心臟和心血管損傷導(dǎo)致的腦局部缺血。
本發(fā)明的實(shí)施例和附圖進(jìn)一步描述了本發(fā)明藥物組合物及其在預(yù)防和治療CNS變性疾病中的用途，其中藥物組合物包含兩種或兩種以上下述物質(zhì)的組合α-硫辛酸、氨溴索以及血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑。所提供的實(shí)施例僅作為對(duì)本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的說(shuō)明，并不對(duì)本發(fā)明形成任何限制。


圖1a和1b顯示的是器官特異(organotypical)海馬切片組織的化學(xué)熒光照片，其中b圖為CMTMR熒光(紅色)和NT熒光(綠色)兩種信號(hào)疊加的效果。
圖2a和2b顯示的是神經(jīng)水平圖，其中b圖為CMTMR熒光(紅色)和NT熒光(綠色)兩種信號(hào)疊加的效果。
圖3顯示了α-硫辛酸(10μg/ml)、氨溴索(10μM)和依那普利(20μg/ml)組合物(以下稱為“雞尾酒”)對(duì)OGD后神經(jīng)細(xì)胞生存的作用。
在圖4a到c顯示的是將雞尾酒產(chǎn)生的神經(jīng)保護(hù)作用與OGD后的標(biāo)準(zhǔn)損傷以及應(yīng)用單一物質(zhì)產(chǎn)生的作用進(jìn)行比較。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1實(shí)施例1闡述了一個(gè)全新且令人驚嘆的發(fā)現(xiàn)，根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)，在正常的生理?xiàng)l件下，神經(jīng)細(xì)胞比非神經(jīng)細(xì)胞具有更少的游離巰基基團(tuán)。5-[和6]-(((氯甲基-)苯甲?；?)氨基-)四甲基若丹明(CMTMR)熒光染色用來(lái)標(biāo)記游離的巰基基團(tuán)。CMTMR中的活性的氯甲基基團(tuán)與蛋白質(zhì)的游離巰基基團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)，而與細(xì)胞類型無(wú)關(guān)，所以在UV區(qū)域進(jìn)行特定的激發(fā)后，就可使其可見(jiàn)。
圖1顯示的是器官特異(organotypical)海馬組織切片的圖像。令人驚訝的是，正是那些海馬結(jié)構(gòu)中明顯易損的神經(jīng)元(錐體細(xì)胞)，顯示出含量較低的游離巰基基團(tuán)，因此幾乎檢測(cè)不到。
圖1b和2b清楚明白的說(shuō)明了這一點(diǎn)。這些圖中顯示了雙標(biāo)記結(jié)果。除了對(duì)游離巰基基團(tuán)進(jìn)行特定標(biāo)記外(CMTMR)，也將神經(jīng)追蹤(NT)作為對(duì)神經(jīng)的標(biāo)記。圖2a顯示了CMTMR熒光(紅色)和NT熒光(綠色)。這兩種熒光信號(hào)不共同出現(xiàn)在局部細(xì)胞中，這就說(shuō)明了NT和CMTMR可大量定位在各種不同類型的細(xì)胞中，例如分別出現(xiàn)在神經(jīng)細(xì)胞或非神經(jīng)細(xì)胞中。圖1b和2b顯示了兩種信號(hào)的疊加圖像。
實(shí)施例2物質(zhì)組合對(duì)神經(jīng)變性后神經(jīng)細(xì)胞生存的影響為了檢測(cè)可與巰基反應(yīng)的物質(zhì)的神經(jīng)保護(hù)作用，我們對(duì)器官特異(organotypical)海馬組織切片實(shí)施短暫性缺血的處理過(guò)程[14-16]，這一過(guò)程按照我實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。通過(guò)這樣的步驟獲得了三維培養(yǎng)外植體，其對(duì)后續(xù)的臨床試驗(yàn)具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值。在那些含有神經(jīng)細(xì)胞和非神經(jīng)細(xì)胞的組織培養(yǎng)物中，仍然保留著大量極復(fù)雜的胞間連接。這對(duì)整個(gè)CNS的功能是非常重要的。腦組織培養(yǎng)物出現(xiàn)了導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變性情況，作為實(shí)際的臨床情形的模擬。
組織切片(375μm)由鼠海馬組織制備(P7)。那些切片培養(yǎng)物的培養(yǎng)是在孔徑為0.02μm的膜嵌入物上進(jìn)行的。培養(yǎng)10到12天后(于孵化器中，37℃；3.3％CO2；相對(duì)空氣濕度98％)，組織培養(yǎng)物的重建過(guò)程完成，然后通過(guò)對(duì)組織切片實(shí)施短暫的氧/葡糖糖缺失來(lái)模擬與臨床相關(guān)的神經(jīng)變性狀況。各物質(zhì)的作用以標(biāo)準(zhǔn)損傷變化的形式來(lái)衡量(載體應(yīng)用)。
圖3顯示了α-硫辛酸(10μg/ml)、氨溴索(10μM)和依那普利(20μg/ml)組合物(以下稱為“雞尾酒”)對(duì)OGD后神經(jīng)細(xì)胞生存的作用。分別定量度量當(dāng)應(yīng)用雞尾酒和不應(yīng)用雞尾酒時(shí)標(biāo)準(zhǔn)OGD后的神經(jīng)損傷，同時(shí)度量應(yīng)用雞尾酒自身后的損傷(任意的物質(zhì)毒性)。表1概括了相應(yīng)的隨機(jī)試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)參數(shù)。用受損的表面面積百分比來(lái)表示損傷程度。我們將每一個(gè)組織切片的受損表面積與總表面積相比就可以得到上述百分比數(shù)據(jù)。
表1特異度數(shù)量 平均值 中值 SEMOGD對(duì)照712.45 12.8 1.59OGD對(duì)照+雞尾酒 76.697.73 2.1雞尾酒無(wú)OGD50.420.08 0.23令人驚嘆的是，通過(guò)使用本發(fā)明組合物可以明顯和顯著的降低神經(jīng)損傷(其中組合物是在權(quán)利要求中請(qǐng)求保護(hù)的)，其包含前面詳述的具體組分。定量的神經(jīng)保護(hù)作用值達(dá)到了約40到45％。該試驗(yàn)同時(shí)還表明了，在沒(méi)有變性狀況出現(xiàn)的情況下，實(shí)驗(yàn)用組合物確實(shí)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞沒(méi)有損傷。這對(duì)于該物質(zhì)或組合物臨床應(yīng)用于治療和預(yù)防神經(jīng)變性疾病是一個(gè)基本的前提條件。
實(shí)施例3本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的組合物的聯(lián)合效果和單一組份作用的比較在這些實(shí)驗(yàn)過(guò)程中我們檢測(cè)到，應(yīng)用單一物質(zhì)不能產(chǎn)生明顯的神經(jīng)保護(hù)作用。這些實(shí)驗(yàn)是基于實(shí)施例2中描述的方案。在圖4a到c顯示的上述實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，將雞尾酒產(chǎn)生的神經(jīng)保護(hù)作用與OGD后的標(biāo)準(zhǔn)損傷以及應(yīng)用單一物質(zhì)產(chǎn)生的作用進(jìn)行比較。從所有的實(shí)驗(yàn)中我們都可以清楚的得知，沒(méi)有任何一種被單獨(dú)測(cè)試的物質(zhì)能夠降低神經(jīng)變性后出現(xiàn)的損傷，而雞尾酒卻可以提供顯著的保護(hù)作用。表2a到c顯示了相關(guān)的統(tǒng)計(jì)參數(shù)。
表2a)特異度數(shù)量平均值 中值 SEMOGD對(duì)照9 11.70 10.8 1.71OGD對(duì)照+雞尾酒 9 7.86 5.53 2.18OGD對(duì)照+α-硫辛酸 9 14.82 13.543.40表2b)特異度數(shù)量平均值 中值 SEMOGD對(duì)照9 13 .37 11.991.22OGD對(duì)照+雞尾酒 9 9.91 8.65 1.57OGD對(duì)照+氨溴素 9 10.79 8.32 1.88表2c)特異度數(shù)量平均值 中值 SEMOGD對(duì)照11 13.98 12.271.63OGD對(duì)照+雞尾酒 11 9.62 7.57 1.95OGD對(duì)照+依那普利 10 11.23 8.70 1.76與雞尾酒(包含α-硫辛酸、氨溴索和ACE抑制劑的組合物)形成對(duì)比的是，不論是α-硫辛酸、氨溴索還是ACE抑制劑，如果單獨(dú)使用，都不能在短暫OGD后顯著降低神經(jīng)損傷。
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權(quán)利要求
1.藥物組合物，其中含有兩種或兩種以上的下述物質(zhì)α-硫辛酸及其鹽和異構(gòu)體，氨溴索及其鹽和前藥，以及血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑，可選擇與常用的藥學(xué)上可接受的載體、添加劑和輔料混合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中包含α-硫辛酸或其鹽或其異構(gòu)體，和氨溴索或其鹽或其前藥的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中包含α-硫辛酸或其鹽或其異構(gòu)體，和至少一個(gè)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中包含氨溴索或其鹽或其前藥，和至少一個(gè)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1到4任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中包含α-硫辛酸或其鹽或其異構(gòu)體，和氨溴索或其鹽或其前藥，以及至少一個(gè)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1到5任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中還包含一種或幾種已知的載體、輔料和/或添加劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1到6任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中含有α-硫辛酸或其鹽或其異構(gòu)體，其含量范圍是30到1200mg/天，優(yōu)選范圍是200到600mg/天；和/或氨溴索或其鹽或其前藥，其含量范圍是7.5到90mg/天，優(yōu)選范圍是60到75mg/天；和/或至少一個(gè)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，其含量范圍是1到50mg/天，優(yōu)選范圍是5到20mg/天。
8.根據(jù)權(quán)利要求1到7任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中組合物用于口服、口腔內(nèi)、肺、鼻、經(jīng)皮、靜脈、皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、直腸、陰道和鞘內(nèi)給藥。
9.根據(jù)權(quán)利要求1到7任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中組合物的形式為片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、溶液劑、乳劑、懸浮劑、氣霧劑、經(jīng)皮給藥系統(tǒng)、栓劑，以及能夠延緩單一藥物或所有有效藥物釋放的給藥形式。
10.根據(jù)權(quán)利要求1到9的一種或幾種藥物組合物用于預(yù)防和治療神經(jīng)變性疾病的用途。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中用于預(yù)防和治療下述疾病缺血或出血性中風(fēng)，肌萎縮性側(cè)索硬化，阿爾茨海默氏病，帕金森氏病，亨廷頓舞蹈癥，(腦脊髓)多發(fā)性硬化，老年人、癡呆、顱腦外傷和常染色體顯性神經(jīng)垂體尿崩癥中出現(xiàn)的神經(jīng)變性。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中用于預(yù)防和治療由心臟和心血管損傷導(dǎo)致的腦缺血。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥物組合物在預(yù)防和治療神經(jīng)變性疾病中的用途(例如缺血或出血性中風(fēng)，局灶或全局性缺血，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，阿爾茨海默氏病，帕金森氏病，亨廷頓舞蹈癥，多發(fā)性硬化)。有效藥劑的組合物包括至少兩種下述物質(zhì)α－硫辛酸；氨溴索以及一個(gè)或幾個(gè)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑。在本發(fā)明所基于的實(shí)驗(yàn)中我們驚奇的發(fā)現(xiàn)，對(duì)變性損傷特別敏感的神經(jīng)細(xì)胞比其它中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)細(xì)胞具有更少的固有游離巰基基團(tuán)。這就說(shuō)明了游離巰基基團(tuán)含量的降低與發(fā)生變性后的那些細(xì)胞損傷具有某種不確定的聯(lián)系。通過(guò)應(yīng)用α－硫辛酸、氨溴索和/或ACE抑制劑的組合物，可使神經(jīng)變性損傷后的受損率降低40到45％。
文檔編號(hào)A61P25/28GK1530102SQ20041003974
公開(kāi)日2004年9月22日 申請(qǐng)日期2004年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月28日
發(fā)明者P·勒納特, S·安佐格, F·施特里格, M·塔格爾, K·雷曼, U·施羅德, P 勒納特, 乩鋦, 穸 , 舾, 薜 申請(qǐng)人:主要神經(jīng)技術(shù)公司, 馬格德堡醫(yī)學(xué)技術(shù)研究有限公司