專利名稱：艾滋病防治藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥制品領(lǐng)域，尤其是涉及一種艾滋病防治藥物。
背景技術(shù)：
艾滋病(AIDS)的迅速蔓延，不僅對人民的生命和健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅，而且嚴(yán)重阻礙經(jīng)濟及社會發(fā)展。美籍華人科學(xué)家何大一教授發(fā)明的聯(lián)合藥物療法“雞尾酒療法”曾轟動一時，雖然對AIDS病人有確切的療效，但因毒副作用較大、實用范圍小、對HIV病毒(人類免疫缺陷病毒)攜帶者和早期AIDS患者不宜使用，更重要的是，這種治療每年要花天文數(shù)字般的費用。目前AIDS藥物主要針對HIV復(fù)制過程的關(guān)鍵酶-HIV逆轉(zhuǎn)錄酶(HIVRT)這一類的藥物有六個品種，即齊多夫定、去肌苷、扎西他濱、司他夫定、拉米夫定及阿巴卡韋，其中齊多夫定是第一個上市的抗AIDS藥物，也是治療AIDS的首選藥。另外美國默克公司的佳息患、施多寧，三共和華納·蘭伯特公司的R-escriptor，最早用于治療艾滋病的AZT，美國食品及藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)的雙脫氧肌苷，與AZT合用的雙脫氧胞苷，雙脫氧雙去氫胸苷等。這些藥物一般用于艾滋病晚期，雖有一定療效，但問題在于不能治愈AIDS患者，價格昂貴，有較大毒副作用和出現(xiàn)耐藥變異病毒，且多數(shù)僅為短期有效，不能滿足長期及終生用藥的要求。應(yīng)用天然藥物治療AIDS，具有療效確切、副作用小、不容易產(chǎn)生耐藥性、價格低廉、適合長期服用及至終生服用等方面的優(yōu)勢，是一個很有前途和價值的研究領(lǐng)域，為世界各國所矚目。目前，復(fù)方小柴胡湯、理中湯、公明抗HIV、復(fù)方SH、乾坤寧、908口服掖、新血片等用于AIDS患者臨床研究，實踐證明，這些復(fù)方能激發(fā)人體T細(xì)胞、NK細(xì)胞、增強人體免疫功能，有的還能抑制HIV病毒。HIV病毒由三部分構(gòu)成，酶、蛋白和基因。目前抗ADIS藥物主要針對HIV復(fù)制過程的關(guān)鍵酶-HIV逆轉(zhuǎn)錄酶(HIVRT)及HIV蛋白酶(HIVPR)，前者又分為核苷類HIVRT抑制藥(NRTI)及非核苷類HIVRT抑制藥(NNRTI)。比如施多寧，其著力點為酶，而佳息患著力點為蛋白。在第十三屆非洲艾滋病與性病國際會議中，中國科學(xué)家指出，面對艾滋病的蔓延，有著悠久歷史的中醫(yī)藥可以充分發(fā)展標(biāo)本兼治的特點。再者，中文醫(yī)網(wǎng)報告，穿心蓮、黃蓮、淫羊藿、螃蜞菊、金銀花、夏枯草、紫花地丁、貫眾和苦參均有抑制艾滋病病毒的作用。但這些研究都不夠成熟，有些仍需與西藥合制，或只是直接從中藥化合物中尋求療效，中醫(yī)方解滲透不夠

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高效、安全、價廉的艾滋病防治藥物。
本發(fā)明的目的是通過下述方案來實現(xiàn)的本發(fā)明的艾滋病防治藥物是將下述重量份配比的原料混合，采用常規(guī)工藝制成膠囊、丸劑、片劑、口服液甘草提取物甘草甜素140份，黃芩提取物黃芩甙150份～190份，貫葉連翹提取物金絲桃素120份～160份。
上述甘草甜素提取物原料較好是采自中國北方，經(jīng)過粉碎、乙醇浸提、萃取、濃縮和噴霧干燥等工藝加工而成，甘草甜素提取物的主要活性成分為甘草甜素，顏色呈白色，含量在95％以上，其余指標(biāo)應(yīng)符合《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》。
上述黃芩提取物原料較好是采自中國西部地區(qū)，經(jīng)過粉碎、乙醇浸提、濃縮和噴霧干燥等工藝加工而成，提取物的顏色呈淡黃色，其活性成分黃芩甙含量在95％以上，其余指標(biāo)應(yīng)符合《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》。
貫葉連翹提取物原料較好是采自中國西北地區(qū)，經(jīng)過粉碎、乙醇浸提、萃取、濃縮、柱過濾和噴霧等工藝加工而成，貫葉連翹提取物又稱金絲桃素提取物的顏色呈黑色，其活性成分金絲桃素的含量較好在0.3～1.2％之間，其余指標(biāo)應(yīng)符合《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》。
本發(fā)明是發(fā)明人通過多年反復(fù)實踐總結(jié)出來的科學(xué)實用的技術(shù)方案，本發(fā)明的優(yōu)點在于其一，產(chǎn)品的有效成分明確且顯效快，有利于控制生產(chǎn)、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定；其二，產(chǎn)品合理的配方、精確的劑量和中藥現(xiàn)代化的生產(chǎn)工藝；其三，產(chǎn)品具有明顯的高效、無毒、價廉的優(yōu)勢。
本發(fā)明的技術(shù)方案中，甘草甜素提取物的主要活性成分甘草甜素(包括甘草酸單鉀鹽、銨鹽、鈉鹽等)可抑制HIV感染細(xì)胞中的病毒抗原的表面及HIV復(fù)制，可抑制HIV斑的形成和感染細(xì)胞的變性，從而有效地抑制HIV的繁殖，抑制率達(dá)98％。通過觀察感染艾滋病的細(xì)胞中艾滋病毒的增殖情況，發(fā)現(xiàn)0.5mg/ml甘草甜素溶液可使98％以上的病毒增殖受到抑制；用0.125mg/ml的甘草甜素溶液，可使50％的病毒增殖受到抑制。甘草甜素對HIV具有非常明顯的解毒增效作用。
甘草甜素的分子式結(jié)構(gòu)如右圖 黃芩甙有較好的抑制逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)作用，靜滴黃芩甙可使P24r抗原降低，CD4細(xì)胞上升。黃芩甙具有廣譜抗菌、消炎作用。
黃芩甙的分子式結(jié)構(gòu)如右圖 金絲桃素在0.5g即可抑制EIAV的復(fù)制99.9％，而在遺傳學(xué)上EIAV與HIV相似，實驗證明，對HIV逆轉(zhuǎn)錄酶病毒有以下作用干擾病毒的浸染和(或)傳播，通過阻斷HIV病毒的脫殼，出芽和裝配而干擾逆轉(zhuǎn)錄酶病毒的復(fù)制；可有效地抑制病毒釋放RT，但對RT無直接作用；而且，它可通過血腦屏障與西藥協(xié)同合作。
金絲桃素的分子式結(jié)構(gòu)如右圖 經(jīng)中國中醫(yī)藥研究院對HIV-1作用的實驗研究顯示本發(fā)明的艾滋病防治藥物在31.25ug/ml～500ug/ml劑量范圍內(nèi)，對HIV-1感染細(xì)胞有一定的保護作用，表明其在此劑量范圍內(nèi)，對HIV-1的復(fù)制有抑制作用，抑制率為50.22％～77.61％，其50％有效濃度為28.98ug/ml，由于本發(fā)明的艾滋病防治藥物對細(xì)胞的毒性很低，從而治療指數(shù)很高，達(dá)到了66，說明本發(fā)明的艾滋病防治藥物具有較強的抗HIV-1作用。通過初步驗證，本發(fā)明的艾滋病防治藥物對AIDS患者及HIV病毒攜帶者有理想治療效果，產(chǎn)品通過干擾病毒的浸染和(或)傳播，通過阻斷HIV病毒的脫殼，出芽和裝配而干擾逆轉(zhuǎn)錄酶病毒的復(fù)制；可有效地抑制病毒釋放RT，能明顯抑制HIV復(fù)制、抑制巨嗜細(xì)胞的形成、阻滯HIV的釋放，并通過吞噬HIV的自然殺傷細(xì)胞(NK)的增加，從而達(dá)到提高人體免疫力、持續(xù)增加T4細(xì)胞量的作用。本發(fā)明的艾滋病防治藥物不僅發(fā)力于酶、蛋白，而且著力于HIV病毒內(nèi)部，從而破壞HIV病毒的基因組成和排列。這是本發(fā)明的艾滋病防治藥物的技術(shù)關(guān)鍵，從而使其更具先進性。
與國外技術(shù)相比，本發(fā)明的艾滋病防治藥物的技術(shù)源自中國有著數(shù)千年悠久歷史的醫(yī)術(shù)。艾滋病是發(fā)現(xiàn)才幾十年的一種病毒性傳染病，雖然中醫(yī)歷代文獻(xiàn)中尚無其名，但根據(jù)其傳播方式、流行情況、發(fā)病特點和臨床表現(xiàn)等來看，與中醫(yī)的某些病癥病名，如瘟疫、虛癆等有類似之處，這種相關(guān)性為中醫(yī)治療艾滋病提供了理論依據(jù)和診治經(jīng)驗。中醫(yī)強調(diào)的是機體對致病因子的反應(yīng)性和適應(yīng)性，以提高機體免疫功能、阻斷病情發(fā)展、延緩發(fā)病或減輕癥狀，從而提高患者生存質(zhì)量、延長患者壽命。此外，辨證施治、因人而異是中醫(yī)學(xué)的精髓，這對艾滋病患者也具有重要意義。本發(fā)明的艾滋病防治藥物正是掌握了艾滋病病理、醫(yī)理、藥理的統(tǒng)一性研制出來的，為臨床提供了一種高效、安全、價廉的抗艾(HIV)治療藥物，以其療效獨特，毒副作用低，價格適中的特點將在中醫(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)占有一席地位，為眾多的艾滋病患者所接受；不僅為我國艾滋病患者解除疾苦，而且該膠囊技術(shù)含量高、有效成分確切、質(zhì)量可控制，為走向國際市場提供了有利保證，市場空間不可估量，產(chǎn)業(yè)化前景亦十分巨大。
具體實施例方式下面是本發(fā)明的實施例。
實施例一采用常規(guī)工藝將甘草甜素提取物140千克、黃芩甙提取物150千克、金絲桃素提取物160千克與乙醇混合，噴霧干燥，粉碎制粒，按每粒膠囊凈重450毫克計裝膠囊。
實施例二采用常規(guī)工藝將甘草甜素提取物140千克、黃芩甙提取物190千克、金絲桃素提取物120千克與乙醇混合，噴霧干燥，粉碎制粒，按每粒膠囊凈重450毫克計裝膠囊。
實施例三采用常規(guī)工藝將甘草甜素提取物140千克、黃芩甙提取物170千克、金絲桃素提取物145千克與乙醇混合，噴霧干燥，粉碎制粒，按每粒膠囊凈重450毫克計裝膠囊。
實施例四將甘草甜素提取物140千克、黃芩甙提取物175千克、金絲桃素提取物150千克提取物與乙醇混合，噴霧干燥，粉碎制粒，按每粒膠囊凈重450毫克計，采用常規(guī)工藝裝膠囊。
實施例五將甘草甜素提取物140千克、黃芩甙提取物180千克、金絲桃素提取物160千克混合，采用常規(guī)工藝制成片劑。
實施例六將甘草甜素提取物140千克、黃芩甙提取物170千克、金絲桃素提取物155千克混合，采用常規(guī)工藝制成口服液、丸劑或壓片。
下面為本發(fā)明的療效情況簡介一、材料和方法細(xì)胞MT-4細(xì)胞，由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所提供。
病毒人類免疫缺陷病毒I型(HIV-1)，感染滴度為2×104CCID50，由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所提供。
藥物按實施例一～六制備。
試劑所有的噻唑蘭即MTT(3-(4，5-dimethylthylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide)，為美國進口試劑，以pH7.2PBS配制成0.7mg/ml溶液置4℃冰箱保存?zhèn)溆?。其他如RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板等，均為美國進口試劑和材料。
儀器測定光密度所用酶標(biāo)儀為法國生產(chǎn)的LP 400全自動酶標(biāo)儀。
二、步驟1.藥物對實驗所用MT-4細(xì)胞的毒性作用1)向全板各孔加入100ul含10％胎牛血清的1640細(xì)胞培養(yǎng)液；向第1列4孔加入藥樣100ul，用多頭加樣器吹打混勻，吸取100ul下移第2列，混勻，以此類推直至最后1列，棄去100ul，使各列呈2倍梯度稀釋。留1列不加藥作正常細(xì)胞對照。
2)將生長旺盛的MT-4細(xì)胞懸液100ul加入板中各孔，使每孔中含有104個細(xì)胞。
3)置細(xì)胞板于37℃5％CO2孵箱中，培養(yǎng)5天。
4)MTT染色試驗(方法同下所述)。
5)計算藥物對MT-4細(xì)胞的50％毒性濃度CC50(方法見后)。
2.藥物對HIV-1的作用1)藥樣2倍稀釋方法同上，設(shè)細(xì)胞對照和病毒對照。
2)將生長旺盛的MT-4細(xì)胞懸液50ul加入板中各孔，使每孔中104含有個細(xì)胞。
3)將40TCID50的HIV-1病毒液50ul，加入除正常細(xì)胞對照外的各孔中，置試驗細(xì)胞板于37℃ 5％ CO2孵箱中，培養(yǎng)5天后，進行MTT染色。
3.MTT染色試驗MTT試驗的原理是，黃色的MTT被代謝旺盛的活細(xì)胞線粒體脫氫酶還原成蘭色formazan的結(jié)晶，溶解后可用分光光度計測量光密度(OD)值，其蘭色越深，OD值就越高，反映出活細(xì)胞的量就越多，因而可求出藥物對病毒感染細(xì)胞的保護率。
1)用多頭加樣器向細(xì)胞板各孔加入30ulMTT溶液，加蓋置于避光的37℃ 5％CO2孵箱中培養(yǎng)3小時。
2)從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞板用8道加樣器從每孔中移去170ul混合液，注意吸取時不得帶出下部含有formazan結(jié)晶的MT-4細(xì)胞部分。
3)用多道加樣器向各孔中加入100ul二甲基亞砜(DMSO)，以溶解formazan結(jié)晶，輕搖10分鐘，使結(jié)晶完全溶解。
4)用酶標(biāo)儀以550nm和625nm雙波長讀取吸收值(OD)，打印出結(jié)果。
5)結(jié)果計算首先分別計算出各稀釋度OD均值和標(biāo)準(zhǔn)差，再以下式計算各稀釋度藥物對HIV感染細(xì)胞的保護率 達(dá)到50％保護的劑量，為50％有效劑量(ED50)，或50％有效濃度(EC50)。關(guān)于ED50或EC50的計算，可根據(jù)各稀釋度的保護率，利用正規(guī)機率單位法(Bliss法)計算ED50或EC50的統(tǒng)計程序求出。對病毒感染細(xì)胞避免發(fā)生細(xì)胞病變(CPE)的保護率，就是對病毒感染細(xì)胞發(fā)生CPE的抑制率，即抑制率＝保護率。藥物對細(xì)胞毒性CC50的計算同EC50，只是上述保護率公式中的HIV感染對照OD值應(yīng)代入0。
三、實驗結(jié)果1.藥物對細(xì)胞的毒性作用按上述方法，將藥物用1640液稀釋若干濃度，測定其對實驗所用MT-4細(xì)胞的50％毒性濃度，結(jié)果如表1。
表1藥物對MT-4細(xì)胞的50％毒性濃度測定。

以Bless法求得藥物對MT-4細(xì)胞的50％毒性濃度CC50＝1976.ug/ml。
2.藥物對HIV-1感染細(xì)胞的保護作用將藥物用1640液配制成亞毒性濃度以下的若干個濃度，進行抗HIV-1實驗。方法如上述，結(jié)果見表2。
表2藥物對HIV-1感染細(xì)胞的保護作用

表中可見，藥物的抑制率為50.22％～77.61％；以Biss法求得其抑制HIV-1的半數(shù)有效濃度EC50＝28.98ug/ml，其治療指數(shù)TI＝CC50/EC50＝1916.6/28.98＝66。
四、結(jié)論以上實驗結(jié)果顯示，藥物在31.25ug～500ug/ml劑量范圍內(nèi)，對HIV-1感染細(xì)胞有一定的保護作用，表明其在此劑量范圍內(nèi)，對HIV-1復(fù)制有抑制作用，抑制率為50.22％～77.61％，其50％有效濃度為28.98ug/ml，由于藥物對細(xì)胞的毒性很低，從而治療指數(shù)很高，達(dá)到了66，說明該藥物具有較強的抗HIV-1作用。
權(quán)利要求
1.一種艾滋病防治藥物，其特征在于是將下述重量份配比的原料混合，采用常規(guī)工藝制成膠囊、丸劑、片劑、口服液甘草提取物甘草甜素140份，黃芩提取物黃芩甙150份～190份，貫葉連翹提取物金絲桃素120份～160份。
全文摘要
本發(fā)明是一種艾滋病防治藥物，是將下述重量份配比的原料混合，采用常規(guī)工藝制成膠囊、丸劑、片劑、口服液甘草提取物甘草甜素140份，黃芩提取物黃芩甙150份～190份，貫葉連翹提取物金絲桃素120份～160份。本方面的優(yōu)點在于產(chǎn)品的有效成分明確且顯效快，有利于控制生產(chǎn)、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定；產(chǎn)品合理的配方、精確的劑量和中藥現(xiàn)代化的生產(chǎn)工藝；產(chǎn)品具有明顯的高效、無毒、價廉的優(yōu)勢。
文檔編號A61K36/484GK1732965SQ200410040410
公開日2006年2月15日 申請日期2004年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月10日
發(fā)明者何利均 申請人:何利均