專利名稱：阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體注射劑及其制備工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及阿霉素或鹽酸阿霉素的制劑，具體說是涉及一種阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體注射劑，本發(fā)明還涉及該藥物的制備工藝。
背景技術：
鹽酸阿霉素(DOX-HCL)為蒽環(huán)類廣譜抗腫瘤抗生素阿霉素的鹽酸鹽，其作用機制主要是阿霉素分子進入細胞核與DNA結合，從而抑制核酸的合成和有絲分裂。鹽酸阿霉素具有廣譜的抗實驗性腫瘤的作用，對拓撲異構酶也有抑制作用，可適用于急性白血病，惡性淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤，肺癌，乳腺癌，膀膠癌，睪丸癌，甲狀腺癌，軟組織腫瘤，骨肉瘤，神經母細胞癌等，也可用于胃癌，結腸直腸癌，肝癌，食管癌，卵巢癌，官頸癌等。雖然鹽酸阿霉素抗瘤譜廣，療效好，但是由靜脈注射后毒副作用較大，主要包括惡心，嘔吐，骨髓抑制，嚴重脫發(fā)等，臨床上出現(xiàn)的毒副作用還有厭食、胃炎甚至潰瘍、口腔粘膜炎癥等。而且，當累積劑量大時會導致嚴重的確心臟損害，表現(xiàn)為心動過速、心律失常及充血性心力衰竭等。上述毒副作用嚴重限制了鹽酸阿霉素的臨床應用。
脂質體(Liposome)最初是由英國學者Bangham和Standish將磷脂分散在水中進行電鏡觀察時發(fā)現(xiàn)的。磷脂分散在水中自然形成多層囊泡，每層均為脂質的雙分子層；囊泡中央和各層之間被水相隔開，雙分子層厚度約為4納米。后來，將這種具有類似生物膜結構的雙分子層小囊稱為脂質體。脂質體可分為多室脂質體和單室脂質體。單室脂質體又分為小單室脂質體和大單室脂質體。Bangham和Standish最初發(fā)現(xiàn)的就是多室脂質體，它們較易制備，尺寸一般為佳0.5-5微米。小單室脂質體為球形，尺寸一般為佳20-50納米；大單室脂質體的尺寸為微米數(shù)量級。1971年英國萊門等人開始將脂質體用于藥物載體，主要作用機理是將藥物粉末或溶液包裹在脂質體雙層脂質膜所封閉的水相中或嵌入脂質體雙層脂質膜中，這種微粒具有類細胞結構，進入人體內主要被網狀內皮系統(tǒng)吞噬而激活機體的自身免疫功能，并改變被包封藥物的體內分布，使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中積蓄，從而提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性。目前用作藥物載體的脂質體多為大單室脂質體，粒徑一般位于100-1000納米之間。70年代中后期，人們開始研究將脂質體用作蒽環(huán)類抗癌藥物(包括鹽酸阿霉素)的有效載體，80年代末已有臨床實驗開始進行，到90年代中期歐美已有脂質體藥物上市。當鹽酸阿霉素被包裹在特定的脂質體再通過靜脈注射進入人體后，臨床實驗結果表明其毒副作用明顯減少，藥物半衰期顯著延長，但其藥效卻并不減弱反而得到加強。
目前國際上有三種脂質體鹽酸阿霉素產品在市場上銷售，分別為美國AlzaPharmaceuticals醫(yī)藥公司研制的Doxil和Caelyx，美國伊蘭醫(yī)藥公司(ElanPharmaceuticals，Inc.)的MyocetTM。其中Doxil和Caelyx是運用“隱形”(stealth)技術將鹽酸阿霉素包裹在脂質體微粒中，同時在每個脂質體微粒表面再包裹上聚乙二醇(PEG)以進一步延長其在體內循環(huán)半衰期，它們的半衰期可達55小時。我國目前尚無自行研制和生產的脂質體鹽酸阿霉素產品在市場上銷售，患者只能使用進口產品。但進口脂質體鹽酸阿霉素價格昂貴，如一支Doxil注射劑約合人民幣8000元，這大大限制了我國癌癥患者對這種新穎而且高效的抗癌藥物的使用。
國內外已有的研究結果表明，有三個因素提高鹽酸阿霉素脂質體藥效和降低毒副作用有重要的影響。一是脂質體的粒徑和均勻度；二是形成脂質體的脂質和脂質體內所包裹藥物的化學降解程度；三是脂質體藥物中非包裹藥物的存在量，也即藥物在脂質體中包裹率的控制和非包裹藥物的去除技術。到目前為止，解決上述三個因素的工藝條件均不理想。本發(fā)明提供的阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體注射劑的新配方和制備工藝很好地解決了這三個制備脂質體藥物的關鍵因素。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定性好、包裹率高、成本低、毒副作用少的阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體注射劑。
本發(fā)明另一個目的是提供該注射劑的制備工藝。
本發(fā)明的技術方案是根據(jù)脂質體的特性，選用特殊比例的磷脂混合物制備包裹阿霉素或鹽酸阿霉素的空白脂質體，配方中還加入膽固醇和自由基捕捉劑維生素E來增加脂質體鹽酸阿霉素的穩(wěn)定性，采用pH梯度法促進藥物包裹，藥物包裹率高達100％，并通過特殊的加工工藝來控制該制劑注射入人體后阿霉素從脂質體中釋放到人體內的速度，降低了鹽酸阿霉素的毒副作用而使其藥效增加。
脂質體主要由天然和/或合成磷脂組成，這些磷脂可分為兩大類，即中性磷脂和帶負電磷脂。目前脂質體制備主要選用中性的卵磷脂，但由于含有卵磷脂的脂質體的粒徑在貯存期間會發(fā)生改變而影響其藥效，本發(fā)明在配方中加入帶負電荷的磷脂可使脂質體粒經在貯存期間的變化減小到最小低程度。帶負電荷磷脂和中性磷脂的比例為0.05∶5-2∶5。另外，配方中還加入膽固醇，它使脂質體雙分子層膜固化，從而減少自由基的生成，降低了氧化水平，使脂質體穩(wěn)定性顯著增強。膽固醇和中性磷脂的比例為0.1∶1-1∶1。同時為了進一步降低形成脂質體的磷脂和脂質體所包裹藥物的化學降解，配方中還加入了維生素E。維生素E是一種有效的抗氧化劑，被認為是通過與磷脂過氧化自由基反應并猝滅單一態(tài)的氧分子和對磷脂的雙分子層進行排序(如限制類脂層分子的流動性)等分子機制而發(fā)揮其抗氧化作用。維生素E和磷脂的摩爾比例為0.1∶5-1∶5。已有的研究結果表明，卵磷脂、飽和大豆磷脂和磷脂酰甘油酯等的水解都受pH值的影響，而且水解產物可以使脂質體混懸液的pH值下降，加速脂質體的進一步水解。這些磷脂成分均在pH6.5時最穩(wěn)定，水解速度常數(shù)最小。因此，本發(fā)明在把阿霉素或鹽酸阿霉素有效地包裹在空白脂質體中后，又將阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體置于加入緩沖劑的脂質體分散液中，進一步增強了阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體的穩(wěn)定性。
阿霉素或鹽酸阿霉素可采用“離子梯度法”來包裹到空白脂質體中，它通過脂質體雙分子脂質層內外離子濃度的差異來使藥物更容易被包裹到脂質體中，這些離子包括Na+，K+，Li，NH4+，H+等，使用H+時的方法被稱作“pH梯度法”。本發(fā)明將采用“離子梯度法”中效果較好的“pH梯度法”來包裹阿霉素或鹽酸阿霉素。該方法通過調節(jié)脂質體內外環(huán)境的pH差異來使脂質體外的阿霉素或鹽酸阿霉素較易進入脂質體內，而脂質體內的阿霉素或鹽酸阿霉素不易釋放到脂質體外，從而使藥物包裹率很高，一般可達100％。具體措施通過將阿霉素或鹽酸阿霉素在被包裹到空白脂質體時用堿粉沫或堿水溶液來調節(jié)空白脂質體脂質雙層膜外液相環(huán)境中的pH值來增加藥物包裹率，藥物處于脂質體雙層脂質膜所包裹的酸性水溶液中，酸性水溶液由0.01M-0.5M的有機酸制備。脂質體的粒度及均勻度可通過高壓均粒機制備，也可通過擠壓設備把空白脂質體懸浮液在壓力下擠過相應孔徑的微孔膜來達到。在包裹藥物后通過滲析過濾法然后將阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體置于與人體生理環(huán)境類似的脂質體分散液中。
空白脂質體的制備可采用薄膜分散法(TFV)，也可用逆相蒸發(fā)法(REV)、乙醇注入法來制備。制備過程中確切溫度隨脂質體組份不同而不同。成品鹽酸阿霉素脂質體的分散液中為增加其在儲存期間的穩(wěn)定性加入了緩沖劑。
本發(fā)明的目的可以通過以下措施來為實現(xiàn)一種阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，每1000ml制劑的原料配方為
阿霉素或鹽酸阿霉素500mg～5000mg中性磷脂 240mg～30000mg負電荷磷脂2mg～20000mg膽固醇10mg～15000mg抗氧化劑 0.25mg～480mg有機酸25mg～25000mg堿20mg～35000mg糖28g～200g緩沖劑1g～100g注射用水 定容至1000ml同時滿足阿霉素或鹽酸阿霉素和磷脂的重量比例為0.1∶1-2∶1，帶負電荷磷脂和中性磷脂的摩爾比例為0.05∶5-2∶5，膽固醇和中性磷脂的摩爾比例為0.1∶1-1∶1。
所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其中中性磷脂可以是蛋黃卵磷脂(EPC)、氫化蛋黃卵磷脂(HEPC)、雙硬脂酸卵磷脂(DSPC)、大豆卵磷脂(soy PC)、氫化大豆卵磷脂(HSPC)、雙軟脂酸卵磷脂(DPPC)或雙肉豆寇酸卵磷脂(DMPC)。
所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其中帶負電荷磷脂可以是雙肉豆寇酸磷脂酰甘油(DMPG)、雙月桂酸磷脂酰甘油(DLPG)、雙軟脂酸磷脂酰甘油(DPPG)、雙硬脂酸磷脂酰甘油(DSPG)、雙肉豆寇酸磷脂酸(DMPA)、雙硬脂酸磷脂酸(DSPA)、雙月桂酸磷脂酸(DLPA)、雙軟脂酸磷脂酸(DPPA)、雙油酸磷脂酰絲氨酸(DOPS)或雙亞油酸磷脂酰肌醇(DLPI)。
所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其中抗氧化劑可以是維生素E，維生素E和磷脂的摩爾比例為0.1∶5-1∶5。
所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其中有機酸可以是檸檬酸、琥珀酸、乙酸、草酸、葡萄酸、乳糖酸、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸。
所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其中堿可以是碳酸鈣、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸鉀或氫氧化鈉。
所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其中糖為乳糖、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖或棉白糖。
所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其中緩沖劑可以是左氨酸、組氨酸或緩血酸胺。
所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其劑型可以是注射液、凍干粉。
所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑的制備方法，包含下列步驟1)制備空白脂質體根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿或氯仿-甲醇混合溶劑中混合均勻；用旋轉蒸發(fā)儀將溶液中溶劑減壓除去，形成脂質薄膜；配制0.01-0.5 M的有機酸溶液，用酸溶液來水化脂質薄膜，水化溫度一般在40℃-70℃之間，得空白脂質體懸浮液；2)均化脂質體水化完全后用高壓均粒機制備脂質體至所需粒徑和均勻度，也可通過擠壓設備把空白脂質體懸浮液在壓力下擠過相應孔徑的微孔膜來達到，脂質體的粒徑控制在50-300nm，脂質體粒徑和均勻度可用多角度納米粒子分析器來檢測；3)制備含阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體配制0.1M-2.0M的堿水溶液或準備堿粉末；將鹽酸阿霉素或阿霉素溶于無菌水或濃度為3％-20％的糖水溶液，加熱到40℃-70℃；用堿水溶液或堿粉末調節(jié)空白脂質體懸浮液至堿性；將阿霉素或鹽酸阿霉素溶液和堿性空白脂質體懸浮液混合均勻并在40℃-70℃下保溫一段時間；4)制備阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體混懸液按重量百分比配制濃度為3％-20％的糖水溶液并加入緩沖劑調節(jié)至pH5-pH7，得脂質體分散液，緩沖劑的含量為0.2％-10％；然后采用脂質體分散液洗滌含阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體，利用滲析過濾法使阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體外溶液置換為pH5-pH7的脂質體分散液，使阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體分散在與人體生理環(huán)境類似的糖水溶液中，得阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體混懸液；5)定容、除菌、分裝、保存用注射用水定容；將阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體懸浮液用微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明的脂質體的粒徑位于50nm-300nm之間，藥物包裹率可達100％。同時，配方加入膽固醇和抗氧化劑維生素E，使得阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體的穩(wěn)定性大大提高。另外，由于阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體的生產過程中關鍵的均粒步驟可由高效的高壓均粒機來完成，而且該制劑也可通過凍干制成凍干劑型來保存，這不僅使阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體的穩(wěn)定性進一步提高，并且使該制劑的工業(yè)化生產成為可能。本發(fā)明凍干粉在2℃-8℃下的兩年穩(wěn)定性實驗結果表明其平均粒徑變化率小于6％，藥物包裹率的變化率小于5％，顯示了本發(fā)明阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體制劑優(yōu)異的穩(wěn)定性。
本發(fā)明的阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體制劑的制備采用了國產原料，大大降低了其生產成本，使我國癌癥患者最終能使用這種藥效高且毒副作用低的抗癌新藥。
本發(fā)明的藥效學實驗結果1)急性毒性實驗脂質體鹽酸阿霉素(L-DOX)制劑按實例3制備，濃度為2.0mg/ml的，傳統(tǒng)鹽酸阿霉素(F-DOX)制劑由鹽酸阿霉素溶于無菌生理鹽水配制，濃度為2.0mg/ml。L-DOX和F-DOX分別由小鼠尾靜脈注射入小鼠體內，實驗期為7天。傳統(tǒng)鹽酸阿霉素(F-DOX)在95％置信限時的LD50為17.21mg/Kg±1.19mg/Kg，脂質體鹽酸阿霉素(L-DOX)在95％置信限時的LD50為38.36mg/Kg±1.57mg/Kg。
實驗結果表明脂質體鹽酸阿霉素的LD50比傳統(tǒng)鹽酸阿霉素提高了1.26倍。
2)慢性毒性實驗脂質體鹽酸阿霉素(L-DOX)制劑按實例3制備，濃度為2.0mg/ml的，傳統(tǒng)鹽酸阿霉素(F-DOX)制劑由鹽酸阿霉素溶于無菌生理鹽水配制，濃度為2.0mg/ml。四種不同劑量的L-DOX和F-DOX分別由小鼠尾靜脈注射入小鼠體內10mg/Kg，15mg/Kg，20mg/Kg和25mg/Kg，實驗期為90天。
在注射L-DOX的小鼠中，10mg/Kg和15mg/Kg劑量組的小鼠死亡率為零，20mg/Kg劑量組的小鼠死亡率為20％，25mg/Kg劑量組的小鼠死亡率為40％。
在注射F-DOX的小鼠中，10mg/Kg劑量組的小鼠死亡率為20％，15mg/Kg劑量組的小鼠死亡率為50％，20mg/Kg和25mg/Kg劑量組的小鼠死亡率為100％。
實驗結果表明本發(fā)明脂質體鹽酸阿霉素制劑的慢毒性明顯低于傳統(tǒng)的鹽酸阿霉素。
3)脂質體鹽酸阿霉素對人類A121卵巢腫瘤的藥效實驗人類A121卵巢腫瘤通過套管針灌輸以0.2ml/20g小鼠體重移植到小鼠體中。在腫瘤移植后的第5天和第12天共兩次由小鼠尾靜脈注射按實例3制備的濃度為2.0mg/ml的脂質體鹽酸阿霉素(L-DOX)。對照組的小鼠在同樣條件下注射溶于無菌生理鹽水的濃度為2.0mg/ml的傳統(tǒng)鹽酸阿霉素(F-DOX)。
在10mg/Kg的劑量下(每次注射6mg/Kg，共兩次)，注射L-DOX的小鼠的腫瘤體積在第5天第一次注射前為平均46.8mm3，在平均第11天腫瘤幾乎全部消失，一直到第90天腫瘤體積也沒有明顯的增長，而且死亡率為零。注射F-DOX的小鼠的腫瘤體積由第5天第一次注射前的平均44.6mm3緩慢減小，在第25天腫瘤才降為平均6.4mm3，而后10天腫瘤體積沒有明顯的增長。但在平均第35天后腫瘤體積急劇增加，在第50天腫瘤體積已達平均614.5mm3，而且還有增加的趨勢，90天后死亡率為本60％。
在20mg/Kg的劑量下(每次注射12mg/Kg，共兩次)，注射L-DOX的小鼠的腫瘤體積由第5天第一次注射前的平均98.2mm3降到第二次注射前的48.5mm3，在平均第19天腫瘤幾乎全部消失，一直到第90天腫瘤體積也沒有明顯的增長，死亡率為30％。注射F-DOX的小鼠的腫瘤體積由第5天第一次注射前的平均87.9mm3降到第二次注射前的平均68.9mm3，在平均第19天腫瘤幾乎全部消失，而后腫瘤體積也一直沒有明顯的增長，但在平均第68天后小鼠就不再能存活下去，即90天時小鼠死亡率為100％。
在30mg/Kg的劑量下(每次注射18mg/Kg，共兩次)，注射L-DOX的小鼠的腫瘤體積由第5天第一次注射前的平均142.3mm3降到第二次注射前的平均47.7mm3，在平均第25天腫瘤幾乎全部消失，一直到第90天腫瘤體積也沒有明顯的增長，死亡率為60％。注射F-DOX的小鼠的腫瘤體積在第5天第一次注射前為平均138.4mm3，在平均第11天腫瘤幾乎全部消失，而后腫瘤體積也一直沒有明顯的增長，但在平均第49天后小鼠就不再能存活下去，即90天時小鼠死亡率為100％。
上述藥效實驗結果表明脂質體鹽酸阿霉素對人類A121卵巢腫瘤不僅有明顯的治療效果，而且療效大大優(yōu)于傳統(tǒng)鹽酸阿霉素。而且本發(fā)明的脂質體鹽酸阿霉素制劑可明顯增加藥物在病體的攝入量并增強其抗腫瘤的治療功能。
具體實施例方式
以下通過實施例對本發(fā)明作進一步闡明。
實施例1制劑處方(25ml容量)鹽酸阿霉素 50mg雙硬脂酸卵磷脂(DSPC) 320mg雙硬脂酸磷脂酰甘油(DSPG) 68mg膽固醇 95mg維生素E 1.2mg檸檬酸 560mg無水碳酸鈉 800mg蔗糖 約2250mg
甘氨酸 約125mg注射用水 定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質薄膜；配制0.3M的檸檬酸溶液，用檸檬酸溶液來水化脂質薄膜，水化溫度一般在55℃-65℃之間，得空白脂質體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機制備脂質體至平均粒徑為120±10nm，脂質體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來檢測；將鹽酸阿霉素溶于9％的蔗糖水溶液，加熱到55℃-65℃；用0.5M的無水碳酸鈉水溶液調節(jié)空白脂質體懸浮液pH為7.5±0.3；將鹽酸阿霉素溶液和堿性空白脂質體懸浮液在60℃-65℃混合均勻并保溫10-30分鐘；配制9％的蔗糖水溶液并加入1.0％的甘氨酸，得脂質體分散液；采用脂質體分散液洗滌含鹽酸阿霉素的脂質體，利用滲析過濾法使阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體外溶液置換為pH為6.0-7.0的脂質體分散液，用注射用水定容并調節(jié)至鹽酸阿霉素的濃度為2.0mg/ml溶液，將鹽酸阿霉素脂質體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實施例2制劑處方(25ml容量)鹽酸阿霉素 50mg氫化大豆卵磷脂(HSPC) 380mg雙肉豆寇酸磷脂酰甘油(DMPG) 50mg膽固醇 110mg維生素E1.0mg琥珀酸 300mg氫氧化鈉 170mg乳糖 約1125mg甘氨酸 約95mg注射用水 定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于2∶1氯仿-甲醇中混合均勻；用旋轉蒸發(fā)儀將溶液中氯仿和甲醇減壓除去，形成脂質薄膜；配制0.25M的琥珀酸溶液，用琥珀酸溶液來水化脂質薄膜，水化溫度一般在65℃±3℃之間，得空白脂質體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機制備脂質體至平均粒徑為180±10nm，脂質體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來檢測，將鹽酸阿霉素溶于4.5％的乳糖水溶液，加熱到65℃±5℃；用0.5M的氫氧化鈉水溶液調節(jié)空白脂質體懸浮液pH為7.3±0.3；將鹽酸阿霉素溶液和堿性空白脂質體懸浮液在65℃±5℃混合均勻并保溫10-30分鐘；配制4.5％的乳糖水溶液并加入1.0％的甘氨酸，得脂質體分散液；采用脂質體分散液洗滌含鹽酸阿霉素的脂質體，利用滲析過濾法使阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體外溶液置換為pH為6.0-7.0的脂質體分散液，用注射用水定容并調節(jié)至鹽酸阿霉素的濃度為2.0mg/ml溶液，將鹽酸阿霉素脂質體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實施例3制劑處方(25ml容量)鹽酸阿霉素50mg氫化大豆卵磷脂(HSPC) 360mg雙硬脂酸磷脂酰甘油(DSPG) 80mg膽固醇110mg維生素E 0.8mg檸檬酸620mg氫氧化鈉 520mg蔗糖 約2250mg甘氨酸約125mg注射用水 定容至所需容量制劑工藝如下根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質薄膜；配制0.3M的檸檬酸溶液，用檸檬酸溶液來水化脂質薄膜，水化溫度一般在55℃-65℃之間，得空白脂質體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機制備脂質體至平均粒徑為120±10nm，脂質體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來檢測；將鹽酸阿霉素溶于9％的蔗糖水溶液，加熱到60℃-65℃；用1.0M的氫氧化鈉水溶液調節(jié)空白脂質體懸浮液pH為7.5±0.3；將鹽酸阿霉素溶液和堿性空白脂質體懸浮液在55℃-65℃混合均勻并保溫10-30分鐘；配制9％的蔗糖水溶液并加入1.0％的甘氨酸，得脂質體分散液；采用脂質體分散液洗滌含鹽酸阿霉素的脂質體，利用滲析過濾法使阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體外溶液置換為pH為6.0-7.0的脂質體分散液，用注射用水定容并調節(jié)至鹽酸阿霉素的濃度為2.0mg/ml溶液，將鹽酸阿霉素脂質體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
實施例4制劑處方(25ml容量)鹽酸阿霉素 50mg雙軟脂酸卵磷脂(DPPC) 460mg蛋黃磷脂酰甘油(EPG)120mg膽固醇 130mg維生素E1.5mg檸檬酸 620mg無水碳酸鈉 750mg乳糖 約2250mg甘氨酸 約125mg注射用水 定容至所需容量制備工藝根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿中混合均勻；用旋轉蒸發(fā)儀將溶液中氯仿減壓除去，形成脂質薄膜；配制0.3M的檸檬酸溶液，用檸檬酸溶液來水化脂質薄膜，水化溫度一般在40℃-50℃之間，得空白脂質體懸浮液；水化完全后用高壓均粒機制備脂質體至平均粒徑為120±10nm，脂質體粒徑和均勻度用多角度納米粒子分析器來檢測；將鹽酸阿霉素溶于9％的乳糖水溶液，加熱到40℃-50℃；加入配方量的無水碳酸鈉粉末調節(jié)空白脂質體懸浮液pH為7.5±0.3；將鹽酸阿霉素溶液和堿性空白脂質體懸浮液在60℃-65℃混合均勻并保溫10-30分鐘；配制9％的乳糖水溶液并加入1.0％的甘氨酸，得脂質體分散液；采用脂質體分散液洗滌含鹽酸阿霉素的脂質體，利用滲析過濾法使阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體外溶液置換為pH為6.0-7.0的脂質體分散液，用注射用水定容并調節(jié)至鹽酸阿霉素的濃度為2.0mg/ml溶液，將鹽酸阿霉素脂質體懸浮液用0.22微米孔徑的微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
權利要求
1.一種阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其特征在于每1000ml制劑的原料配方為阿霉素或鹽酸阿霉素 500mg～5000mg中性磷脂240mg～30000mg負電荷磷脂 2mg～20000mg膽固醇 10mg～15000mg抗氧化劑0.25mg～480mg有機酸 25mg～25000mg堿 20mg～35000mg糖 28g～200g緩沖劑 1g～100g注射用水定容至1000ml同時滿足阿霉素或鹽酸阿霉素和磷脂的重量比例為0.1∶1-2∶1，帶負電荷磷脂和中性磷脂的摩爾比例為0.05∶5-2∶5，膽固醇和中性磷脂的摩爾比例為0.1∶1-1∶1。
2.權利要求1中脂質體中包含中性磷脂，中性磷脂選自蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、雙硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、雙軟脂酸卵磷脂或雙肉豆寇酸卵磷脂。
3.權利要求1中脂質體包含帶負電荷磷脂，帶負電荷磷脂選自雙肉豆寇酸磷脂酰甘油、雙月桂酸磷脂酰甘油、雙軟脂酸磷脂酰甘油、雙硬脂酸磷脂酰甘油、雙肉豆寇酸磷脂酸、雙硬脂酸磷脂酸、雙月桂酸磷脂酸、雙軟脂酸磷脂酸、雙油酸磷脂酰絲氨酸或雙亞油酸磷脂酰肌醇。
4.根據(jù)權利要求1所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其特征在于抗氧化劑可以是維生素E，維生素E和磷脂的摩爾比例為0.1∶5-1∶5。
5.根據(jù)權利要求1所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其特征在于有機酸包括檸檬酸、琥珀酸、乙酸、草酸、葡萄酸、乳糖酸、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸。
6.根據(jù)權利要求1所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其特征在于堿包括碳酸鈣、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸鉀或氫氧化鈉。
7.根據(jù)權利要求1所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其特征在于糖為乳糖、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖或棉白糖。
8.根據(jù)權利要求1所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其特征在于緩沖劑可以是左氨酸、組氨酸或緩血酸胺。
9.根據(jù)權利要求1所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑，其特征在于其劑型可以是注射液、凍干粉。
10.權利要求1所述的阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體注射劑的制備方法，其特征在于包含下列步驟1)制備空白脂質體根據(jù)配方選用磷脂、膽固醇和維生素E溶于氯仿或氯仿-甲醇混合溶劑中混合均勻；用旋轉蒸發(fā)儀將溶液中溶劑減壓除去，形成脂質薄膜；配制0.01M-0.5M的有機酸溶液，用酸溶液來水化脂質薄膜，水化溫度一般在40℃-70℃之間，得空白脂質體懸浮液；2)均化脂質體水化完全后用高壓均粒機制備脂質體至所需粒徑和均勻度，也可通過擠壓設備把空白脂質體懸浮液在壓力下擠過相應孔徑的微孔膜來達到，脂質體的粒徑控制在50-300nm，脂質體粒徑和均勻度可用多角度納米粒子分析器來檢測；3)制備含阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體配制0.1M-2.0M的堿水溶液或準備堿粉末；將鹽酸阿霉素或阿霉素溶于無菌水或濃度為3％-20％的糖水溶液，加熱到40℃-70℃；用堿水溶液或堿粉末調節(jié)空白脂質體懸浮液至堿性；將阿霉素或鹽酸阿霉素溶液和堿性空白脂質體懸浮液混合均勻并在40℃-70℃下保溫一段時間；4)制備阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體混懸液按重量百分比配制濃度為3％-20％的糖水溶液并加入緩沖劑調節(jié)至pH5-pH7，得脂質體分散液，緩沖劑的含量為0.2％-10％；然后采用脂質體分散液洗滌含阿霉素或鹽酸阿霉素的脂質體，利用滲析過濾法使阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體外溶液置換為pH5-pH7的脂質體分散液，使阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體分散在與人體生理環(huán)境類似的糖水溶液中，得阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體混懸液；5)定容、除菌、分裝、保存用注射用水定容；將阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體懸浮液用微孔膜過濾除菌，分裝即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或凍干保存至使用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體注射劑及其制備工藝。該注射劑由阿霉素或鹽酸阿霉素、中性磷脂、負電荷磷脂、膽固醇、抗氧化劑、有機酸、堿、糖、緩沖劑、注射用水組成，該制備工藝包括制備空白脂質體、均化脂質體、制備阿霉素或鹽酸阿霉素脂質體及其混懸液、定容、除菌、分裝、保存等步驟。該注射劑穩(wěn)定性好、包裹率高、成本低、毒副作用少，該制備工藝簡單易行。
文檔編號A61K31/7028GK1593437SQ20041004110
公開日2005年3月16日 申請日期2004年6月29日 優(yōu)先權日2004年6月29日
發(fā)明者賀明, 賀欣 申請人:常州太平洋藥物研究所有限公司