專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以中草藥為原料的藥物的制備方法，特別是一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中，由本申請(qǐng)人申請(qǐng)的申請(qǐng)?zhí)枮?1815449.2、名稱(chēng)為“一種中草藥藥物組合物及其制備方法”的專(zhuān)利公開(kāi)了一種用于治療婦科血瘀癥疾病的藥物組合物，其是由桂枝、白芍、茯苓、桃仁和牡丹皮按所需重量比經(jīng)水蒸汽蒸餾、乙醇提取、濃縮、制粒、干燥等步驟制成膠囊。該藥物組合物具有療效確切、無(wú)毒副作用、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可控、易于吸收的特點(diǎn)。其缺陷在于及該方法制備的藥物的有效成份含量相對(duì)較低，服用量較大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供另一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，通過(guò)該方法制備的藥物有效成份含量高，服用量少，屬精制藥物。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，它以中草藥桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁為原料，其特點(diǎn)是，其步驟如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超臨界流體萃取揮發(fā)油，得肉桂油備用；藥渣合并桃仁用10～12倍量水提取2次，桃仁沸下，每次1.5～2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1.5～2g藥材，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為70％～80％，醇沉12～48小時(shí)，濾過(guò)，取上清液回收乙醇，濃縮，70℃～80℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分別加入7～9倍、5～7倍量的70％～80％乙醇回流提取2次，每次1.5～2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮，70℃～80℃真空干燥，得浸膏II；茯苓藥渣，加入7～9倍、5～7倍量的水提取2次，每次1.5～2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于0.8～1.2g藥材，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為75％～85％，醇沉12～48小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣70℃～80℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸餾得丹皮酚備用；藥渣合并白芍分別加入7～9倍、5～7倍量的70％～80％乙醇回流提取2次，每次1.5～2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于0.8～1.2g藥材離心，取上清液上D-101大孔吸附樹(shù)脂柱，以4～6倍柱體積水洗脫，棄去水洗液，再以18～22倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，60℃～70℃減壓干燥，得干浸膏IV；
(4)取肉桂油，加入8～12倍量的β-環(huán)糊精的65～75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合1.5～2小時(shí)，冷藏24～48小時(shí)，抽濾，40～50℃干燥，得肉桂油β-環(huán)糊精包合物；(5)取丹皮酚結(jié)晶，加入5～7倍量乙醇使溶解，然后加入8～12倍量的β-環(huán)糊精的65～75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合1.5～2小時(shí)，冷藏24～48小時(shí)，抽濾，40～50℃干燥，得丹皮酚β-環(huán)糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-環(huán)糊精包合物和丹皮酚β-環(huán)糊精包合物，加入常規(guī)藥用輔料，制成藥劑學(xué)上所述的任何一種劑型的藥物。
以下是本發(fā)明的優(yōu)選的技術(shù)方案一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，其特點(diǎn)是，其步驟如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超臨界流體萃取揮發(fā)油，得肉桂沒(méi)備用；藥渣合并桃仁用12倍量水提取兩次，桃仁沸下，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于2g藥材(在45～50℃時(shí)測(cè)得其比重為1.04～1.08)，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為70％，醇沉24小時(shí)，濾過(guò)，取上清液回收乙醇，濃縮，80℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分別加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取兩次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮，75℃真空干燥，得浸膏II；茯苓藥渣，加入8倍、6倍量的水提取兩次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1g藥材(在45～50℃時(shí)測(cè)得其比重為1.00～1.05)，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為80％，醇沉24小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣75℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸餾得丹皮酚備用；藥渣合并白芍分別加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取兩次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1g藥材(在45～50℃時(shí)測(cè)得其比重為1.02～1.06)，離心，取上清液上D-101大孔吸附樹(shù)脂柱，以5倍柱體積水洗脫，棄去水洗液，再以20倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，70℃減壓干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入10倍量的β-環(huán)糊精的75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合2小時(shí)，冷藏24小時(shí)，抽濾，50℃干燥，得肉桂油β-環(huán)糊精包合物；(5)取丹皮酚結(jié)晶，加入6倍量乙醇使溶解，然后加入10倍量的β-環(huán)糊精的75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合1.5小時(shí)，冷藏24小時(shí)，抽濾，50℃干燥，得丹皮酚β-環(huán)糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-環(huán)糊精包合物和丹皮酚β-環(huán)糊精包合物，加入適量糊精或淀粉，用95％乙醇制粒，50℃烘干，整粒，裝膠囊，壓鋁塑板，包裝，得成品桂枝茯苓膠囊劑；或者整粒后壓片得片劑；或者直接制成顆粒劑。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題還可以通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。以上所述的一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，其特點(diǎn)是，其中，中草藥原料的重量配比為，桂枝 700-750茯苓 700-750牡丹皮 700-750白芍 700-750桃仁 700-750。
其中，優(yōu)選的中草藥原料的重量配比為，桂枝 720茯苓 720牡丹皮 720白芍 720桃仁 720。
本發(fā)明方法制備的藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下鑒別(1)取成品內(nèi)容物1g，研細(xì)，乙醇10ml超聲(20℃，250w，40kHz)30分鐘，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取桂皮醛對(duì)照品適量，加乙醇10ml配成濃度為1mg/ml的對(duì)照品溶液。照色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60℃-90℃)∶醋酸乙酯(17∶3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。噴以二硝基苯肼乙醇顯色劑。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的桔紅色斑點(diǎn)。
(2)取成品內(nèi)容物10g，研細(xì)，加乙醚50ml，加熱回流1h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)迎h(huán)己烷1ml使溶解，作為供試品液。另取茯苓對(duì)照藥材8g，加乙醚40ml，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30-60℃)∶丙酮∶醋酸乙酯(84∶15∶1)為展開(kāi)劑，飽和15min，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
其他應(yīng)符合膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄IL)。
含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VID)測(cè)定。
白芍、牡丹皮色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑；以乙腈-水-磷酸-三乙胺(14∶86∶0.08∶0.08)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約0.1g，精密稱(chēng)定，置50ml容量瓶中，精密加入50％乙醇40ml，超聲處理(250w，40kHz)30分鐘，取出，放冷，用50％乙醇補(bǔ)足至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
成品膠囊劑每粒含白芍、牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計(jì)，不得少于10.0mg。
桃仁色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑；以流動(dòng)相甲醇-水溶液(20∶80)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為218nm。理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備取苦杏仁苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50％甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量，研細(xì)。取0.2g的成品粉末，精密加入25毫升乙醇，稱(chēng)重，回流1.5小時(shí)，取出，放冷，稱(chēng)重，加入乙醇補(bǔ)足重量，精密取續(xù)濾液2ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻作供試溶液，測(cè)定苦杏仁苷的含量。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
成品膠囊劑每粒含桃仁以苦杏仁苷(C20H27NO11)計(jì)，不得少于4.5mg。
牡丹皮色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)安捷倫GC6890，用hp-5涂布毛細(xì)管柱；進(jìn)樣口溫度；200℃，柱溫150℃，檢測(cè)器溫度；240℃，理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算，應(yīng)不低于30000。
對(duì)照品溶液的制備取丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加入正十五烷內(nèi)標(biāo)，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.2mg的丹皮酚，0.1mg的正十五烷溶液，即得。
供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量，研細(xì)。取約0.2g的成品粉末，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加入乙醇20ml，超聲處理(250w，40kHz)30分鐘，取出，放冷，用乙醇補(bǔ)足至刻度，濾過(guò)，精密取9ml的續(xù)濾液，加入1ml的c＝1mg/ml的正十五烷內(nèi)標(biāo)液，配成10ml的溶液，作供試品，測(cè)定丹皮酚的含量.
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液2μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。
成品膠囊劑每粒含牡丹皮以丹皮酚計(jì)，不得少于6.0mg。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，用本發(fā)明方法制備的藥物除具有原桂枝茯苓膠囊的作用外，還大大地提高了其治療效果，且藥物中的有效成份含量高，藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可控；藥物的日服用量大大減少，是現(xiàn)有技術(shù)的三分之一。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1。一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，分別稱(chēng)取桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁各720克，其制備步驟如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超臨界流體萃取揮發(fā)油，得肉桂沒(méi)備用；藥渣合并桃仁用12倍量水提取兩次，桃仁沸下，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于2g藥材(在45℃時(shí)測(cè)得其比重為1.06)，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為70％，醇沉24小時(shí)，濾過(guò)，取上清液回收乙醇，濃縮，80℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分別加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取兩次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮，75℃真空干燥，得浸膏II；茯苓藥渣，加入8倍、6倍量的水提取兩次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1g藥材(在45℃時(shí)測(cè)得其比重為1.02)，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為80％，醇沉24小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣75℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸餾得丹皮酚備用；藥渣合并白芍分別加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取兩次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1g藥材(在45℃時(shí)測(cè)得其比重為1.04)，離心，取上清液上D-101大孔吸附樹(shù)脂柱，以5倍柱體積水洗脫，棄去水洗液，再以20倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，70℃減壓干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入10倍量的β-環(huán)糊精的75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合2小時(shí)，冷藏24小時(shí)，抽濾，50℃干燥，得肉桂油β-環(huán)糊精包合物；(5)取丹皮酚結(jié)晶，加入6倍量乙醇使溶解，然后加入10倍量的β-環(huán)糊精的75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合1.5小時(shí)，冷藏24小時(shí)，抽濾，50℃干燥，得丹皮酚β-環(huán)糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-環(huán)糊精包合物和丹皮酚β-環(huán)糊精包合物，加入適量糊精，用95％乙醇制粒，50℃烘干，整粒，裝膠囊，壓鋁塑板，包裝，得成品精制桂枝茯苓膠囊1000粒，每粒0.30克。用于治療婦科血瘀癥疾病，一天3次，每次1粒。
實(shí)施例2。一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，稱(chēng)取中草藥桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁各750克，其制備步驟如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超臨界流體萃取揮發(fā)油，得肉桂油備用；藥渣合并桃仁用11倍量水提取2次，桃仁沸下，每次1.5小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1.5g藥材(在45℃時(shí)測(cè)得其比重為1.04)，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為70％，醇沉12小時(shí)，濾過(guò)，取上清液回收乙醇，濃縮，70℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分別加入7倍、5倍量的70％乙醇回流提取2次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮，70℃真空干燥，得浸膏II；茯苓藥渣，加入9倍、7倍量的水提取2次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于0.8g藥材(在50℃時(shí)測(cè)得其比重為1.00)，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為75％％，醇沉12小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣70℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸餾得丹皮酚備用；藥渣合并白芍分別加入7倍、5倍量的70％乙醇回流提取2次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于0.8g藥材(在50℃時(shí)測(cè)得其比重為1.02)，離心，取上清液上D-101大孔吸附樹(shù)脂柱，以4倍柱體積水洗脫，棄去水洗液，再以18倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，70℃減壓干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入8倍量的β-環(huán)糊精的65℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合1.5小時(shí)，冷藏24小時(shí)，抽濾，40℃干燥，得肉桂油β-環(huán)糊精包合物；(5)取丹皮酚結(jié)晶，加入7倍量乙醇使溶解，然后加入8倍量的β-環(huán)糊精的65℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合1.5小時(shí)，冷藏24小時(shí)，抽濾，40℃干燥，得丹皮酚β-環(huán)糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-環(huán)糊精包合物和丹皮酚β-環(huán)糊精包合物，加入適量淀粉，用95％乙醇制粒，50℃烘干，整粒，壓片，得成品精制桂枝茯苓片1000片，每片0.30克。用于治療婦科血瘀癥疾病，一天3次，每次1片。
實(shí)施例3。一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，稱(chēng)取中草藥桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁各700克，其制備步驟如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超臨界流體萃取揮發(fā)油，得肉桂油備用；藥渣合并桃仁用10倍量水提取2次，桃仁沸下，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1.8g藥材(在50℃時(shí)測(cè)得其比重為1.08)，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為75％，醇沉48小時(shí)，濾過(guò)，取上清液回收乙醇，濃縮，65℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分別加入9倍、7倍量的75％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮，75℃真空干燥，得浸膏II；茯苓藥渣，加入9倍、7倍量的水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1.0g藥材(在50℃時(shí)測(cè)得其比重為1.05)，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為85％，醇沉48小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣75℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸餾得丹皮酚備用；藥渣合并白芍分別加入9倍、7倍量的75％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1.2g藥材(在50℃時(shí)測(cè)得其比重為1.06)，離心，取上清液上D-101大孔吸附樹(shù)脂柱，以6倍柱體積水洗脫，棄去水洗液，再以22倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，70℃減壓干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入10倍量的β-環(huán)糊精的75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合2小時(shí)，冷藏48小時(shí)，抽濾，50℃干燥，得肉桂油β-環(huán)糊精包合物；(5)取丹皮酚結(jié)晶，加入5倍量乙醇使溶解，然后加入10倍量的β-環(huán)糊精的75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合2小時(shí)，冷藏48小時(shí)，抽濾，50℃干燥，得丹皮酚β-環(huán)糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-環(huán)糊精包合物和丹皮酚β-環(huán)糊精包合物，制成顆粒劑。
實(shí)施例4。實(shí)施例1所制備的精制桂枝茯苓膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別方法如下，(1)取成品內(nèi)容物1g，研細(xì)，乙醇10ml超聲30分鐘，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取桂皮醛對(duì)照品適量，加乙醇10ml配成濃度為1mg/ml的對(duì)照品溶液；照色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚∶醋酸乙酯17∶3為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干；噴以二硝基苯肼乙醇顯色劑；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的桔紅色斑點(diǎn)；(2)取成品內(nèi)容物10g，研細(xì)，加乙醚50ml，加熱回流1h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)迎h(huán)己烷1ml使溶解，作為供試品液；另取茯苓對(duì)照藥材8g，加乙醚40ml，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚∶丙酮∶醋酸乙酯為84∶15∶1為展開(kāi)劑，飽和15分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。實(shí)施例5。實(shí)施例1所制備的精制桂枝茯苓膠囊的成份含量測(cè)定方法如下，(1)白芍、牡丹皮色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑；以乙腈-水-磷酸-三乙胺14∶86∶0.08∶0.08為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000；對(duì)照品溶液的制備取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約0.1g，精密稱(chēng)定，置50ml容量瓶中，精密加入50％乙醇40ml，超聲處理30分鐘，取出，放冷，用50％乙醇補(bǔ)足至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；(2)桃仁色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑；以流動(dòng)相甲醇-水溶液20∶80為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為218nm；理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000；對(duì)照品溶液的制備取苦杏仁苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50％甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量，研細(xì)；取0.2g的成品粉末，精密加入25毫升乙醇，稱(chēng)重，回流1.5小時(shí)，取出，放冷，稱(chēng)重，加入乙醇補(bǔ)足重量，精密取續(xù)濾液2ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻作供試溶液，測(cè)定苦杏仁苷的含量；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；(3)牡丹皮色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)安捷倫GC6890，用hp-5涂布毛細(xì)管柱，進(jìn)樣口溫度，200℃，柱溫150℃，檢測(cè)器溫度，240℃，理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算，應(yīng)不低于30000；對(duì)照品溶液的制備取丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加入正十五烷內(nèi)標(biāo)，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.2mg的丹皮酚，0.1mg的正十五烷溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量，研細(xì)；取約0.2g的成品粉末，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加入乙醇20ml，超聲處理30分鐘，取出，放冷，用乙醇補(bǔ)足至刻度，濾過(guò)，精密取9ml的續(xù)濾液，加入1ml的c＝1mg/ml的正十五烷內(nèi)標(biāo)液，配成10ml的溶液，作供試品，測(cè)定丹皮酚的含量；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液2μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。
按本實(shí)施例方法測(cè)得所制備的成品膠囊劑每粒含白芍、牡丹皮以芍藥苷C23H28O11計(jì)為10.0mg；每粒含桃仁以苦杏仁苷C20H27NO11計(jì)為4.5mg，每粒含牡丹皮以丹皮酚計(jì)為6.0mg。
實(shí)施例6。下面是發(fā)明人用實(shí)施例1所制備的精制桂枝茯苓膠囊所作的藥理實(shí)驗(yàn)。
用體外注射雌二醇和黃體酮造成大鼠子宮肌瘤的模型，在給予精制桂枝茯苓膠囊后實(shí)驗(yàn)表明，精制桂枝茯苓膠囊對(duì)大鼠子宮肌瘤具有明顯的治療作用，能明顯降低子宮系數(shù)，降低宮體和宮頸直徑，與原桂枝茯苓膠囊比較有顯著性差異，有降低雌二醇和黃體酮含量的趨勢(shì)。病理組織學(xué)觀察結(jié)果表明，模型組表現(xiàn)為子宮壁肌層增厚，平滑肌細(xì)胞呈環(huán)行或局灶性，排列紊亂，并向系膜區(qū)延伸，增生的平滑肌細(xì)胞體積變大，胞核大，核仁大而明顯。此外宮內(nèi)膜上皮也較正常上皮增生，呈高柱狀，并出現(xiàn)鱗狀細(xì)胞化生，宮內(nèi)膜腺體數(shù)目減少，有部分子宮肌瘤病變嚴(yán)重，宮壁組織壞死，局部有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)(化膿性改變)，精制桂枝茯苓膠囊有減小子宮平滑肌增生程度，大劑量組未見(jiàn)化膿性改變，提示大劑量組除對(duì)子宮肌瘤有治療作用外，還有一定程度的抗炎作用。應(yīng)用激光多普勒血流計(jì)實(shí)驗(yàn)表明，精制桂枝茯苓膠囊對(duì)正常子宮內(nèi)膜血流量有明顯影響，大、中劑量組能明顯增加子宮內(nèi)膜血流量，小劑量組也有較好的效果。精制桂枝茯苓膠囊對(duì)正常子宮張力無(wú)明顯影響，對(duì)正常子宮幅度有很好的降低作用，對(duì)正常子宮頻率也無(wú)明顯的影響；精制桂枝茯苓膠囊對(duì)催產(chǎn)素作用下的子宮張力有明顯的松弛作用，對(duì)催產(chǎn)素作用下的子宮幅度及頻率有明顯的降低作用。精制桂枝茯苓膠囊能明顯改善小鼠耳廓微循環(huán)，對(duì)小鼠耳廓微動(dòng)脈及微靜脈具有顯著擴(kuò)張作用，對(duì)血液流速無(wú)明顯影響。精制桂枝茯苓膠囊對(duì)全血粘度有很好的降低作用，對(duì)血漿粘度、血沉、壓積的影響不大。精制桂枝茯苓膠囊對(duì)大鼠棉球肉芽腫有抑制作用，能降低肉芽腫的重量。與模型組相比，大劑量組和中劑量組差異具有顯著性。三個(gè)劑量組與二甲苯所致模型組相比可以抑制耳廓腫脹的程度但無(wú)顯著差異。與巴豆油所致模型組相比可以抑制耳廓腫脹的程度，有顯著差異。對(duì)化學(xué)性疼痛模型具有一定的鎮(zhèn)痛作用，能減少冰醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)，較原劑型組相比，具有顯著性差異。精制桂枝茯苓膠囊有明顯的鎮(zhèn)痛作用，能提高痛閾值，其作用效果隨劑量的增加而增加，與模型組相比，大劑量組和中劑量組差異具有顯著性。綜合以上結(jié)果，抗炎鎮(zhèn)痛、改善血液流變學(xué)、減低子宮張力，舒張子宮平滑肌，增加子宮內(nèi)膜血流量，改善微循環(huán)是桂枝茯苓膠囊治療子宮肌瘤的藥理學(xué)基礎(chǔ)。
急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示精制桂枝茯苓膠囊一次性灌服最大體積(0.4ml/10g)、最大濃度(6g生藥/ml)，小鼠未見(jiàn)死亡，無(wú)法測(cè)出LD50。24小時(shí)內(nèi)以最大體積(0.3ml/10g)、最大濃度(6g生藥/ml)灌服給藥兩次，結(jié)果小鼠未見(jiàn)死亡，則小鼠一日內(nèi)對(duì)精制桂枝茯苓膠囊的最大給藥量為360g生藥/kg，相當(dāng)于臨床劑量的2337倍。
藥物長(zhǎng)期毒性是評(píng)價(jià)藥物的一項(xiàng)重要指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)主要觀察大鼠連續(xù)重復(fù)給予精制桂枝茯苓膠囊后所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)、首先出現(xiàn)的癥狀及嚴(yán)重程度，并觀察精制桂枝茯苓膠囊毒副反應(yīng)的靶器官和其恢復(fù)及發(fā)展情況，確定無(wú)毒反應(yīng)劑量，為擬定人用安全劑量提供參考。
本實(shí)驗(yàn)設(shè)對(duì)照組、精制桂枝茯苓膠囊低、中、高劑量組，劑量分別為1.54g/kg、6.17g/kg、10.80g/kg(生藥量表示)，其中高、中、低劑量組分別為臨床用藥劑量的70、40及10倍，對(duì)照組給予等容量的蒸餾水，試驗(yàn)周期為六個(gè)月，給藥途徑為灌胃。結(jié)果在給藥三個(gè)月、六個(gè)月及停藥兩周后，各組大鼠行為活動(dòng)、毛發(fā)均正常，各組大鼠體重也均穩(wěn)定增長(zhǎng)，進(jìn)食量也無(wú)明顯差異。血液學(xué)指標(biāo)給藥三個(gè)月后，僅見(jiàn)小劑量組WBC、LY升高，高、中劑量未見(jiàn)指標(biāo)明顯變化；給藥六個(gè)月及恢復(fù)期均未見(jiàn)血液學(xué)指標(biāo)有明顯變化。血液生化指標(biāo)給藥三個(gè)月后，高劑量組ALP\TG降低、BUN\ALB\TBIL升高，中劑量組AST升高，低劑量ALP降低、TBIL升高；給藥六個(gè)月高劑量組ALP\TG降低，TBIL升高；恢復(fù)期各給藥組變化指標(biāo)均恢復(fù)正常。各期給藥組臟器指數(shù)與對(duì)照組比較均無(wú)明顯差異。病理學(xué)檢查了心，肝，肺，脾，腎，腎上腺，甲狀腺，胸腺，腦，胃，十二指腸，睪丸，附睪，前列腺，子宮，卵巢，膀胱等主要臟器及腺體，結(jié)果未顯示精制桂枝茯苓膠囊所致的各種實(shí)質(zhì)細(xì)胞變性壞死，間質(zhì)血管擴(kuò)張、充血，炎細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化。
權(quán)利要求
1.一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，它以中草藥桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁為原料，其特征在于，其步驟如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超臨界流體萃取揮發(fā)油，得肉桂油備用；藥渣合并桃仁用10～12倍量水提取2次，桃仁沸下，每次1.5～2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1.5～2g藥材，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為70％～80％，醇沉12～48小時(shí)，濾過(guò)，取上清液回收乙醇，濃縮，70℃～80℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分別加入7～9倍、5～7倍量的70％～80％乙醇回流提取2次，每次1.5～2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮，70℃～80℃真空干燥，得浸膏II；茯苓藥渣，加入7～9倍、5～7倍量的水提取2次，每次1.5～2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于0.8～1.2g藥材，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為75％～85％，醇沉12～48小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣70℃～80℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸餾得丹皮酚備用；藥渣合并白芍分別加入7～9倍、5～7倍量的70％～80％乙醇回流提取2次，每次1.5～2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于0.8～1.2g藥材，離心，取上清液上D-101大孔吸附樹(shù)脂柱，以4～6倍柱體積水洗脫，棄去水洗液，再以18～22倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，60℃～70℃減壓干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入8～12倍量的β-環(huán)糊精的65～75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合1.5～2小時(shí)，冷藏24～48小時(shí)，抽濾，40～50℃干燥，得肉桂油β-環(huán)糊精包合物；(5)取丹皮酚結(jié)晶，加入5～7倍量乙醇使溶解，然后加入8～12倍量的β-環(huán)糊精的65～75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合1.5～2小時(shí)，冷藏24～48小時(shí)，抽濾，40～50℃干燥，得丹皮酚β-環(huán)糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-環(huán)糊精包合物和丹皮酚β-環(huán)糊精包合物，加入常規(guī)藥用輔料，制成藥劑學(xué)上所述的任何一種劑型的藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，其特征在于，其步驟如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超臨界流體萃取揮發(fā)油，得肉桂沒(méi)備用；藥渣合并桃仁用12倍量水提取兩次，桃仁沸下，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于2g藥材，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為70％，醇沉24小時(shí)，濾過(guò)，取上清液回收乙醇，濃縮，80℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分別加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取兩次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮，75℃真空干燥，得浸膏II；茯苓藥渣，加入8倍、6倍量的水提取兩次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1g藥材，冷卻至室溫后加入95％乙醇使乙醇濃度為80％，醇沉24小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣75℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸餾得丹皮酚備用；藥渣合并白芍分別加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取兩次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于1g藥材，離心，取上清液上D-101大孔吸附樹(shù)脂柱，以5倍柱體積水洗脫，棄去水洗液，再以20倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，70℃減壓干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入10倍量的β-環(huán)糊精的75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合2小時(shí)，冷藏24小時(shí)，抽濾，50℃干燥，得肉桂油β-環(huán)糊精包合物；(5)取丹皮酚結(jié)晶，加入6倍量乙醇使溶解，然后加入10倍量的β-環(huán)糊精的75℃飽和水溶液中，固定轉(zhuǎn)速為900r/min，包合1.5小時(shí)，冷藏24小時(shí)，抽濾，50℃干燥，得丹皮酚β-環(huán)糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-環(huán)糊精包合物和丹皮酚β-環(huán)糊精包合物，加入適量糊精或淀粉，用95％乙醇制粒，50℃烘干，整粒，裝膠囊，壓鋁塑板，包裝，得成品桂枝茯苓膠囊劑；或者整粒后壓片得片劑；或者直接制成顆粒劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，其特征在于，所制備的成品膠囊劑每粒含白芍、牡丹皮以芍藥苷C23H28O11計(jì)，不少于10.0mg；每粒含桃仁以苦杏仁苷C20H27NO11計(jì)，不少于4.5mg，每粒含牡丹皮以丹皮酚計(jì)，不少于6.0mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，其特征在于，其中，中草藥原料的重量配比為，桂枝 700-750茯苓 700-750牡丹皮 700-750白芍 700-750桃仁 700-750。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，其特征在于，其中，中草藥原料的重量配比為，桂枝 720茯苓 720牡丹皮 720白芍 720桃仁 720。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，其特征在于，所制備的成品鑒別方法如下，(1)取成品內(nèi)容物1g，研細(xì)，乙醇10ml超聲30分鐘，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取桂皮醛對(duì)照品適量，加乙醇10ml配成濃度為1mg/ml的對(duì)照品溶液；照色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚∶醋酸乙酯17∶3為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干；噴以二硝基苯肼乙醇顯色劑；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的桔紅色斑點(diǎn)；(2)取成品內(nèi)容物10g，研細(xì)，加乙醚50ml，加熱回流1h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)迎h(huán)己烷1ml使溶解，作為供試品液；另取茯苓對(duì)照藥材8g，加乙醚40ml，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚∶丙酮∶醋酸乙酯為84∶15∶1為展開(kāi)劑，飽和15分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，其特征在于，所制備的成品中成份含量測(cè)定方法如下，(1)白芍、牡丹皮色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑；以乙腈-水-磷酸-三乙胺14∶86∶0.08∶0.08為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000；對(duì)照品溶液的制備取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約0.1g，精密稱(chēng)定，置50ml容量瓶中，精密加入50％乙醇40ml，超聲處理30分鐘，取出，放冷，用50％乙醇補(bǔ)足至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；(2)桃仁色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑；以流動(dòng)相甲醇-水溶液20∶80為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為218nm；理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000；對(duì)照品溶液的制備取苦杏仁苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50％甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量，研細(xì)；取0.2g的成品粉末，精密加入25毫升乙醇，稱(chēng)重，回流1.5小時(shí)，取出，放冷，稱(chēng)重，加入乙醇補(bǔ)足重量，精密取續(xù)濾液2ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻作供試溶液，測(cè)定苦杏仁苷的含量；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；(3)牡丹皮色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)安捷倫GC6890，用hp-5涂布毛細(xì)管柱，進(jìn)樣口溫度，200℃，柱溫150℃，檢測(cè)器溫度，240℃，理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算，應(yīng)不低于30000；對(duì)照品溶液的制備取丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加入正十五烷內(nèi)標(biāo)，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.2mg的丹皮酚，0.1mg的正十五烷溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量，研細(xì)；取約0.2g的成品粉末，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加入乙醇20ml，超聲處理30分鐘，取出，放冷，用乙醇補(bǔ)足至刻度，濾過(guò)，精密取9ml的續(xù)濾液，加入1ml的c＝1mg/ml的正十五烷內(nèi)標(biāo)液，配成10ml的溶液，作供試品，測(cè)定丹皮酚的含量；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液2μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。
全文摘要
一種治療婦科血瘀癥疾病的藥物的制備方法，它以中草藥桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁為原料，其特征在于，其步驟是分別制取桂枝桃仁浸膏、茯苓浸膏、牡丹皮白芍浸膏、肉桂油β－環(huán)糊精包合物、丹皮酚β－環(huán)糊精包合物，加入常規(guī)藥用輔料制成。用本發(fā)明方法制備的藥物除具有原桂枝茯苓膠囊的作用外，還大大地提高了其治療效果，且藥物中的有效成分含量高，藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可控；藥物的日服用量大大減少，是現(xiàn)有技術(shù)的三分之一。
文檔編號(hào)A61K9/16GK1583102SQ20041004121
公開(kāi)日2005年2月23日 申請(qǐng)日期2004年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月6日
發(fā)明者肖偉, 戴翔翎, 廖正根, 鄒紅, 仲艷, 柳于介, 張孝法 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司