專利名稱：一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及組合植物藥的提取方法。特別是治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法。
背景技術(shù)：
黃褐斑是一種常見的慢性皮膚色素代謝障礙性疾患，多發(fā)于面部，呈蝶形分布，故又名“蝴蝶斑”，發(fā)病率高，幾乎是所有種族共患疾病。臨床多發(fā)于中青年女性，尤其多見于生育后的女性，并隨著年齡的增長增多，少數(shù)男性也患此病。其發(fā)病率有逐年增加的趨勢?，F(xiàn)代醫(yī)學認為，此病與內(nèi)分泌、日光照射、自由基、局部微生態(tài)失衡、微量元素含量異常、血液流變學及遺傳、精神因素和某些慢性病等因素有關(guān)。治療的目的是阻止黑色素細胞的增生，抑制黑色素小體的形成和促使其分解。中醫(yī)理論認為黃褐斑雖發(fā)生于面部，但與臟腑功能失調(diào)、經(jīng)絡(luò)阻滯、氣血失和相關(guān)，分為肝瘀氣滯、氣滯血瘀、痰濕阻滯、肝腎陰虛、氣血兩虛、陰虛內(nèi)熱6型。本病多因暴怒傷肝、思慮傷脾、驚恐傷腎致使氣機紊亂，氣滯血瘀，不能上榮，面部經(jīng)絡(luò)受阻，郁結(jié)不散而生黃褐斑；或腎精受損，久傷陰精，疲勞過度，水虧不能制火，血虛不榮，釀成褐斑，屬祖國醫(yī)學的面塵、肝斑、黧黑斑范疇。從中醫(yī)的角度來看，血行不暢，瘀阻膚絡(luò)是其主要病理特點，正如《難經(jīng)》所言“脈不通則血不流，血不流則色澤去，所以面色黑如漆，此血先死。”究其“瘀”之根本常因肝郁氣滯、肝腎陰虛、脾胃虛弱、腎精不足等所致。凡七情內(nèi)傷、肝郁氣滯、飲食勞倦、婦人經(jīng)血不調(diào)等，均可致此病。故以滋陰、補腎、疏肝、調(diào)和氣血、活血化瘀為治療原則，常用六味地黃丸、逍遙丸、桃紅四物湯、祛斑逍遙散等治療，收到一定療效。
現(xiàn)有技術(shù)中，西醫(yī)治療重標，多采用外治法。雖然有一定治療效果，但有一定的毒副作用。如產(chǎn)生外源性褐黃病，皮膚萎縮，永久性脫色造成的“點斑樣”，有些還可致腎毒性及神經(jīng)、精神癥狀。中醫(yī)治療主要采用活血化瘀、疏肝理氣、滋陰補腎等方劑內(nèi)服，充分體現(xiàn)了中醫(yī)治療的整體觀念及辨證求因、辨證施治的原則。與西醫(yī)治療相比，中醫(yī)治療效果較佳，且毒副作用小，特別是對婦女黃褐斑療效更令人滿意。中醫(yī)認為黃褐斑的形成是機體機能失調(diào)的外在表現(xiàn)，在治療方面主張治病求本，調(diào)整機體失調(diào)的狀態(tài)，消除內(nèi)邪的治病因素。通過調(diào)整肝脾腎，活血化瘀、理氣消斑，達到局部經(jīng)氣，調(diào)整激素水平的目的?，F(xiàn)有的中藥臨床經(jīng)驗方是湯劑，存在的問題是用藥時需按規(guī)定火候長時間煎熬，十分不便，由于現(xiàn)代社會生活節(jié)奏加快，大多數(shù)患者尤其是青、中年女性，常因工作緊張、家務(wù)繁忙而難以接受湯劑。目前缺乏更理想的治療方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提出了一種用現(xiàn)代化分析和提取手段，提取具有補腎疏肝、化瘀消斑、清熱化痰功效的經(jīng)驗處方中的有效成份的方法，也即一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法。
本發(fā)明的目的是由以下技術(shù)方案來達到的，本發(fā)明是一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特點是組合植物藥提取物原料的重量配方為地 黃 341～512 菟絲子 341～512柴 胡 227～342白 芍 227～342 當 歸 227～342甘 草 136～205(a)取當歸加5～8倍量水浸泡20～90分鐘，水蒸汽蒸餾，提取揮發(fā)油2～4小時，所得當歸揮發(fā)油另器存放；(b)當歸蒸餾后的藥渣與地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加6～14倍量水浸泡0.5～2小時，煎煮0.5～2.0小時，濾過，藥渣再加4～12倍量水，煎煮0.5～2.0小時，濾過，合并兩次濾液與當歸提油后的殘液，濃縮至50℃下相對密度為1.05～1.32，濃縮液于50～70℃下加原藥材投料量0.6～0.8％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌15～25分鐘，低溫靜置20～72小時，離心，棄去沉淀，得藥材提取物。
本發(fā)明的目的由以下技術(shù)方案來進一步達到，根據(jù)前述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特點是取上述藥材提取物，減壓濃縮至50℃度下相對密度為1.05～1.4，干燥，粉碎加入當歸揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物，混勻，制粒，制成藥劑學所述的顆粒劑、膠囊劑和片劑。
本發(fā)明的目的由以下技術(shù)方案來進一步達到，根據(jù)前述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特點是取上述藥材提取物，加分散劑，加入當歸揮發(fā)油，混勻，制成軟膠囊。
本發(fā)明的目的由以下技術(shù)方案來進一步達到，根據(jù)前述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特點是取上述藥材提取物，加入當歸揮發(fā)油，按藥劑學方法制成口服液。
本發(fā)明的目的由以下技術(shù)方案來進一步達到，根據(jù)前述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特點是取上述藥材提取物，超濾后，加入當歸揮發(fā)油，按藥劑學方法制成注射液。
本發(fā)明的目的由以下技術(shù)方案也可達到，所述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特點是組合植物藥提取物原料的重量配方為地 黃 341～512 菟絲子 341～512柴 胡 227～342白 芍 227～342 當 歸 227～342甘 草 136～205取當歸、地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加6～14倍量水浸泡0.5～2小時，煎煮0.5～2.0小時，濾過，藥渣再加4～12倍量水，煎煮0.5～2.0小時，濾過，合并兩次濾液，濃縮至50℃下相對密度為1.05～1.10，濃縮液于50～70℃下加原藥材投料量0.5～1.5％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌15～25分鐘，低溫靜置20～72小時，離心，棄去沉淀，上清液超濾，加入支架劑，溶解，過濾。經(jīng)冷凍干燥，制成凍干粉針劑。
本發(fā)明的目的由以下技術(shù)方案來進一步達到，根據(jù)前述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特點是所述的殼聚糖溶液是殼聚糖與濃度為0.5～1.5％醋酸溶液制成的濃度為0.5～1.5％的溶液。
本發(fā)明的目的由以下技術(shù)方案來進一步達到，根據(jù)前述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特點是所述的當歸揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物，是按當歸揮發(fā)油β-環(huán)糊精以1∶7～9的重量比，25～35℃的包合溫度，2.5～3.5小時的包合時間下制成的。
本發(fā)明的目的由以下技術(shù)方案來進一步達到，根據(jù)前述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特點是所述的減壓濃縮是在為0.06～0.09兆帕負壓和60～80℃的溫度下進行的。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，將具有補腎疏肝、化瘀消斑、清熱化痰功效，臨床上用于治療腎虛肝郁證的黃褐斑療效顯著的經(jīng)驗方中的藥材經(jīng)提取揮發(fā)油、水煎煮、純化和低溫干燥等方法精制成干浸膏，干法制粒制成新劑型，并根據(jù)其組成藥物在處方中的地位及其所含活性成分的理化特性，制訂了較為客觀的質(zhì)量標準。對于發(fā)揚中醫(yī)藥特色，挖掘古方、經(jīng)驗方，進行中醫(yī)藥治療黃褐斑的療效研究，有著積極的意義。選用本發(fā)明的劑型。它不僅保持了湯劑的特色，而且可以提高療效、減少用藥體積、便于患者服用；尚克服了湯劑服前臨時煎煮、容易變質(zhì)霉敗的缺點，有利于大批量生產(chǎn)和貯運。實驗也證明，本發(fā)明的組合植物藥的提取方法制得的制劑，在治療黃褐斑方面有確切的療效。


圖1為本發(fā)明的提取物膠囊對小鼠耳廓微循環(huán)血流速度的影響圖。
圖2為本發(fā)明的提取物膠囊對小鼠耳廓微靜脈管徑的影響圖。
圖3為本發(fā)明的提取物膠囊對小鼠微動脈管徑的影響圖。
具體實施例方式
下面為本發(fā)明的實施例，進一步描述本發(fā)明的發(fā)明內(nèi)容。
實施例一、本實施例是一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，組合植物藥提取物原料的重量(克)配方為地 黃 426.5 菟絲子 426.5柴 胡 284.5白 芍 284.5 當 歸 284.5甘 草 170.5(a)取當歸加6倍量水浸泡30分鐘，水蒸汽蒸餾，提取揮發(fā)油3小時，所得當歸揮發(fā)油另器存放；(b)當歸蒸餾后的藥渣與地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加10倍量水浸泡1小時，煎煮1.2小時，濾過，藥渣再加7倍量水，煎煮1.5小時，濾過，合并兩次濾液與當歸提油后的殘液，減壓濃縮至50℃下相對密度為1.1，濃縮液于60℃下加原藥材投料量0.7％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌20分鐘，低溫靜置24小時，離心，棄去沉淀，得藥材提取物。
取上述藥材提取物，減壓濃縮至50℃下相對密度為1.2，干燥，粉碎加入當歸揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物，混勻，制粒，制成藥劑學所述的顆粒劑、膠囊劑和片劑。其中，制成膠囊1000粒，每粒含生藥量1.87克。
所述的殼聚糖溶液是殼聚糖與濃度為1％醋酸溶液制成的濃度為1％的溶液。所述的當歸揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物，是按當歸揮發(fā)油β-環(huán)糊精以1∶8的重量比，30℃的包合溫度，3小時的包合時間下制成的。減壓濃縮是在為0.07兆帕負壓和65℃的溫度下進行的。
實施例二、本實施例是一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，組合植物藥提取物原料的重量(克)配方為地 黃 341 菟絲子 512 柴 胡 342
白 芍 227 當 歸 227 甘 草 136(a)取當歸加5倍量水浸泡90分鐘，水蒸汽蒸餾，提取揮發(fā)油2小時，所得當歸揮發(fā)油另器存放；(b)當歸蒸餾后的藥渣與地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加6倍量水浸泡2小時，煎煮0.5小時，濾過，藥渣再加12倍量水，煎煮2小時，濾過，合并兩次濾液與當歸提油后的殘液，減壓濃縮至50℃下相對密度為1.05，濃縮液于50℃下加原藥材投料量0.8％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌15分鐘，低溫靜置20小時，離心，棄去沉淀，得藥材提取物。
取上述藥材提取物，減壓濃縮至50℃下相對密度為1.05，干燥，粉碎加入當歸揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物，混勻，制粒，制成藥劑學所述的顆粒劑、膠囊劑和片劑。
所述的殼聚糖溶液是殼聚糖與濃度為0.5％醋酸溶液制成的濃度為0.5％的溶液。所述的當歸揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物，是按當歸揮發(fā)油β-環(huán)糊精以1∶7的重量比，25℃的包合溫度，2.5小時的包合時間下制成的。減壓濃縮是在為0.06兆帕負壓和60℃的溫度下進行的。
實施例三、本實施例是一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，組合植物藥提取物原料的重量(克)配方為地 黃 512 菟絲子 341柴 胡 227白 芍 342 當 歸 342甘 草 205(a)取當歸加8倍量水浸泡20分鐘，水蒸汽蒸餾，提取揮發(fā)油4小時，所得當歸揮發(fā)油另器存放；(b)當歸蒸餾后的藥渣與地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加14倍量水浸泡0.5小時，煎煮2小時，濾過，藥渣再加4倍量水，煎煮0.5小時，濾過，合并兩次濾液與當歸提油后的殘液，減壓濃縮至50℃下相對密度為1.32，濃縮液于70℃下加原藥材投料量0.6％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌25分鐘，低溫靜置72小時，離心，棄去沉淀，得藥材提取物。
取上述藥材提取物，減壓濃縮至50℃下相對密度為1.4，干燥，粉碎加入當歸揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物，混勻，制粒，制成藥劑學所述的顆粒劑、膠囊劑和片劑。
所述的殼聚糖溶液是殼聚糖與重量濃度為1.5％醋酸溶液制成的濃度為1.5％的溶液。所述的當歸揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物，是按當歸揮發(fā)油β-環(huán)糊精以1∶9的重量比，35℃的包合溫度，3.5小時的包合時間下制成的。減壓濃縮是在為0.09兆帕負壓和80℃的溫度下進行的實施例四、本實施例是一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，組合植物藥提取物原料的重量(克)配方為地 黃 426.5 菟絲子 426.5柴 胡 284.5白 芍 284.5 當 歸 284.5甘 草 170.5(a)取當歸加6倍量水浸泡30分鐘，水蒸汽蒸餾，提取揮發(fā)油3小時，所得當歸揮發(fā)油另器存放；(b)當歸蒸餾后的藥渣與地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加10倍量水浸泡1.5小時，煎煮1.2小時，濾過，藥渣再加7倍量水，煎煮1.3小時，濾過，合并兩次濾液與當歸提油后的殘液，減壓濃縮至50℃下相對密度為1.1，濃縮液于60℃下加原藥材投料量0.7％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌20分鐘，低溫靜置30小時，離心，棄去沉淀，得藥材提取物。取上述藥材提取物，加分散劑，加入當歸揮發(fā)油，混勻，制成軟膠囊。所述的殼聚糖溶液是殼聚糖與濃度為1％冰醋酸溶液制成的濃度為1％的溶液。
實施例五、本實施例是一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，組合植物藥提取物原料的重量(克)配方為地 黃 341 菟絲子 512柴 胡 342白 芍 227 當 歸 227甘 草 136
(a)取當歸加5倍量水浸泡40分鐘，水蒸汽蒸餾，提取揮發(fā)油2小時，所得當歸揮發(fā)油另器存放；(b)當歸蒸餾后的藥渣與地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加6倍量水浸泡1小時，煎煮0.75小時，濾過，藥渣再加8倍量水，煎煮1.5小時，濾過，合并兩次濾液與當歸提油后的殘液，減壓濃縮至50℃下相對密度為1.05，濃縮液于50℃下加原藥材投料量0.8％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌15分鐘，低溫靜置20小時，離心，棄去沉淀，得藥材提取物。
取上述藥材提取物，加入當歸揮發(fā)油，按藥劑學方法制成口服液。所述的殼聚糖溶液是殼聚糖與濃度為1％醋酸溶液制成的濃度為1％的溶液。
實施例六、取實施例五的藥材提取物，超濾后，加入當歸揮發(fā)油，按藥劑學方法制成注射液。
實施例七、本實施例是一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，組合植物藥提取物原料的重量(克)配方為地 黃 426.5 菟絲子 426.5柴 胡 284.5白 芍 284.5 當 歸 284.5甘 草 170.5取當歸、地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加10倍量水浸泡1小時，煎煮1.5小時，濾過，藥渣再加7倍量水，煎煮1.5小時，濾過，合并兩次濾液，濃縮至50℃下相對密度為1.10，濃縮液于60℃下加原藥材投料量0.7％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌20分鐘，低溫靜置30小時，離心，棄去沉淀，上清液超濾，加入支架劑，溶解，過濾。經(jīng)冷凍干燥，制成凍干粉針劑。
實施例八、本實施例是一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，組合植物藥提取物原料的重量(克)配方為地 黃 341菟絲子 512 柴 胡 342白 芍 227當 歸 227 甘 草 136取當歸、地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加6倍量水浸泡2小時，煎煮0.5小時，濾過，藥渣再加12倍量水，煎煮2.0小時，濾過，合并兩次濾液，濃縮至50℃下相對密度為1.05，濃縮液于50℃下加原藥材投料量1.5％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌25分鐘，低溫靜置72小時，離心，棄去沉淀，上清液超濾，加入支架劑，溶解，過濾。經(jīng)冷凍干燥，制成凍干粉針劑。
實施例九、本實施例是一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，組合植物藥提取物原料的重量(克)配方為地 黃 512菟絲子 341 柴 胡 227白 芍 342當 歸 342 甘 草 205取當歸、地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加14倍量水浸泡0.5小時，煎煮2.0小時，濾過，藥渣再加4倍量水，煎煮0.5小時，濾過，合并兩次濾液，濃縮至50℃下相對密度為1.10，濃縮液于70℃下加原藥材投料量0.5％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌15分鐘，低溫靜置20小時，離心，棄去沉淀，上清液超濾，加入支架劑，溶解，過濾。經(jīng)冷凍干燥，制成凍干粉針劑。
藥效實驗在下述藥效實驗中定義本發(fā)明的藥劑名稱為褐斑凈一、概述經(jīng)主要藥效學研究，褐斑凈膠囊具有的藥理作用如下1.褐斑凈膠囊具有減輕黃體酮攻擊小鼠的黃褐斑模型皮膚黑色素沉積的作用；可抑制小鼠黃褐斑模型的氧化反應(yīng)，調(diào)節(jié)氧化與抗氧化之間平衡紊亂，具有降低皮膚、肝臟酪氨酸含量與MDA水平，升高SOD水平的作用。
2.褐斑凈膠囊具有減少紫外線攻擊豚鼠的黃褐斑模型表皮黑色素沉著面積、減輕黑色素沉著程度的作用；具有降低模型豚鼠皮膚與肝臟的酪氨酸、MDA水平，升高SOD水平的作用；褐斑凈膠囊對模型豚鼠雌二醇(E2)水平的升高有一定的抑制作用。
3.褐斑凈膠囊能對抗腎上腺素引起的微血管收縮，擴張小鼠微血管細靜脈和細動脈，且呈劑量依賴性。提示褐斑凈具有改善微循環(huán)的作用。
4.褐斑凈膠囊各給藥組能明顯降低“血瘀”模型大鼠不同切變率下的全血粘度、血漿粘度及血沉的作用。
二、實驗?zāi)康耐ㄟ^藥效學試驗驗證褐斑凈膠囊與臨床功能主治有關(guān)的作用。
三、實驗結(jié)果1.褐斑凈對黃體酮攻擊小鼠的黃褐斑實驗動物模型的影響(1)對造模小鼠一般情況的影響開始觀察小鼠每日一般情況，小鼠行為活動、精神狀況、排泄物等無明顯異常。注射黃體酮注射液20日后用10％Na2S溶液給小鼠脫毛(背部右下側(cè))并每日觀察脫毛部位皮膚變化情況發(fā)現(xiàn)模型組及各給藥組脫毛部位皮膚色澤暗于正常組，以模型組最為嚴重，各給藥組情況略好于模型組。
(2)對造模小鼠表皮黑色素沉積的影響正常組表皮結(jié)構(gòu)正常。由2～6層角質(zhì)形成細胞組成，其中基底層細胞排列較緊密，中間層細胞胞體較大，角化層細胞很薄?；讓蛹毎g偶見黑色素顆粒陽性反應(yīng)的黑色素細胞，中間層的角質(zhì)形成細胞內(nèi)有時可見被吞噬的少量、淡染的黑色素顆粒存在。
模型組表皮角質(zhì)形成細胞的基底層細胞間，常見有數(shù)個黑色素細胞夾雜其間，中間層的角質(zhì)形成細胞內(nèi)有被吞噬的大量、濃染的黑色素顆粒存在，其他未見異常。
褐斑凈小劑量組表皮角質(zhì)形成細胞的基底層細胞間的黑色素細胞仍常見，中間層的角質(zhì)形成細胞內(nèi)有被吞噬的大量、濃染的黑色素顆粒存在，其他未見異常。
褐斑凈中劑量組夾雜在表皮角質(zhì)形成細胞基底層間的黑色素細胞較少見，被吞噬的黑色素顆粒在角質(zhì)形成細胞內(nèi)分布少，且淡染。
褐斑凈大劑量組表皮結(jié)構(gòu)正常?；讓蛹毎g偶見黑色素顆粒陽性反應(yīng)的黑色素細胞，中間層的角質(zhì)形成細胞內(nèi)有時可見被吞噬的少量、淡染的黑色素顆粒存在。
化瘀祛斑膠囊組表皮結(jié)構(gòu)正常?；讓蛹毎g偶見黑色素顆粒陽性反應(yīng)的黑色素細胞，中間層的角質(zhì)形成細胞內(nèi)有時可見被吞噬的少量、淡染的黑色素顆粒存在。
(3)對造模小鼠皮膚酪氨酸(Tyr)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的影響結(jié)果顯示，造模后小鼠皮膚酪氨酸、MDA水平升高，SOD水平降低，與正常組比較有顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)；各給藥組較模型組酪氨酸、MDA降低，SOD水平升高，其中褐斑凈小、中、大劑量組酪氨酸水平顯著降低，褐斑凈大劑量組MDA水平顯著降低，化瘀祛斑膠囊組、褐斑凈小、中、大劑量組SOD水平明顯升高，與模型組比較有顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)。提示褐斑凈膠囊對模型小鼠皮膚酪氨酸、MDA水平升高，SOD水平降低有一定的抑制作用。
表1褐斑凈膠囊對小鼠皮膚酪氨酸、MDA、SOD活性的影響(X±S)

注與正常組比較，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
(4)對造模小鼠肝臟酪氨酸(Tyr)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的影響結(jié)果顯示，造模后小鼠肝臟酪氨酸、MDA水平顯著升高，SOD水平顯著降低，與正常組比較有顯著性差異(p＜0.05)；各給藥組較模型組酪氨酸、MDA水平降低，SOD水平升高，其中化瘀祛斑膠囊組、褐斑凈小、中、大劑量組酪氨酸水平顯著降低，褐斑凈中、大劑量組MDA水平顯著降低，化瘀祛斑膠囊組、褐斑凈大劑量組SOD水平明顯升高，與模型組比較有顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)。提示褐斑凈膠囊對模型小鼠肝臟酪氨酸、MDA水平升高，SOD水平降低有一定的抑制作用。
表2褐斑凈膠囊對小鼠肝臟酪氨酸、MDA、SOD活性的影響(X±S)

注與正常組比較，ΔΔp＜0.01；與模型組比較，**p＜0.01。
2.褐斑凈對紫外線照射豚鼠的黃褐斑模型的影響
(1)對造模豚鼠一般情況的影響紫外線照射17日后造模豚鼠活動減少，陸續(xù)出現(xiàn)部分動物抓撓后足；觀察脫毛部位皮膚變化情況發(fā)現(xiàn)模型組及各給藥組脫毛部位皮膚色澤暗于正常組，部分動物皮膚逐日出現(xiàn)黑色斑塊，部分動物后足發(fā)黑，以模型組最為嚴重，各給藥組情況略好于模型組。
(2)對造模豚鼠表皮黑色素沉積的影響(皮膚表皮免疫組化檢查結(jié)果)正常組基底層細胞間可見黑色素顆粒陽性反應(yīng)的黑色素細胞，分布密度約為每7～16個細胞可見到一個細胞，中間層的角質(zhì)形成細胞內(nèi)有時可見被吞噬的少量、淡染的黑色素顆粒存在。
模型組表皮角質(zhì)形成細胞的基底層細胞間，夾有數(shù)量較多的黑色素顆粒染色陽性的黑色素細胞，分布密度約為每3～7個細胞可見到一個。中間層的角質(zhì)形成細胞內(nèi)有被吞噬的大量黑色素顆粒存在，黑色素顆粒量多密集，所以著色很深，許多細胞呈黑色。
褐斑凈小劑量組表皮角質(zhì)形成細胞的基底層細胞間的黑色素細胞分布仍較密集，染色較深，中間層的角質(zhì)形成細胞內(nèi)有被吞噬的大量、濃染的黑色素顆粒存在，其他未見異常。
褐斑凈中劑量組夾雜在表皮角質(zhì)形成細胞基底層間的黑色素細胞分布較稀疏，約為每4～15個細胞可見到一個，染色也較淡。被吞噬的黑色素顆粒在角質(zhì)形成細胞內(nèi)分布少，且淡染。其他未見異常。
褐斑凈大劑量組表皮結(jié)構(gòu)正常。基底層細胞間黑色素顆粒陽性反應(yīng)的黑色素細胞分布密度大為降低，約為每10～20個細胞可見到一個，著色也很淡，一般為褐色，中間層的角質(zhì)形成細胞內(nèi)極少見到被吞噬的黑色素顆粒存在。
化瘀祛斑膠囊組基底層細胞間可見黑色素顆粒陽性反應(yīng)的黑色素細胞分布較稀疏，約為每4～12個細胞可見到一個，著色多為深褐色，中間層的角質(zhì)形成細胞內(nèi)有時可見被吞噬的少量的黑色素顆粒存在。
(3)對造模豚鼠黑色素細胞面積、數(shù)量的影響造模后模型組黑色素面密度、目標個數(shù)、數(shù)密度、周密度明顯高于正常組(p＜0.01)；化瘀祛斑膠囊組面密度、周密度，褐斑凈中劑量組面密度、周密度，褐斑凈大劑量組目標面積、面密度、目標個數(shù)、數(shù)密度、周密度均顯著低于模型組(p＜0.05，0.01)。
表3褐斑凈對造模豚鼠黑色素細胞面積、數(shù)量的影響(X±S)

注與正常組比較，ΔΔp＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。樣本缺失，原因部分樣本染色標記不成功。
(4)對造模豚鼠黑色素細胞染色深淺度的影響豚鼠黑色素細胞染色深淺度用灰度值和光密度值表示，顏色越深，灰度值越小，光密度越大。積分光密度是平均光密度與面積的乘積，顏色越深，面積越大，積分光密度越高[3]。造模后豚鼠黑色素細胞平均光密度、積分光密度明顯高于正常組，平均灰度明顯低于正常組(p＜0.05，0.01)；用藥后各給藥組平均灰度有一定的降低，平均光密度、積分光密度有一定的升高，化瘀祛斑膠囊組、褐斑凈大劑量組積分光密度顯著低于模型組(p＜0.05，0.01)。
表4褐斑凈對造模豚鼠黑色素細胞染色深淺度的影響(X±S)

注與正常組比較，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。樣本缺失，原因部分樣本染色標記不成功。
(5)對造模豚鼠皮膚酪氨酸(Tyr)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的影響結(jié)果顯示，造模后豚鼠皮膚酪氨酸、MDA水平升高，SOD水平降低，其中皮膚酪氨酸、SOD水平與正常組比較有顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)；各給藥組較模型組酪氨酸、MDA水平降低，SOD水平升高，其中褐斑凈中、大劑量組酪氨酸水平顯著降低，化瘀祛斑膠囊組、褐斑凈小、中、大劑量組MDA水平顯著降低，化瘀祛斑膠囊組、褐斑凈大劑量組SOD水平明顯升高，與模型組比較有顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)。提示褐斑凈膠囊對模型豚鼠皮膚酪氨酸、MDA水平升高，SOD水平降低有一定的抑制作用。
表5褐斑凈膠囊對豚鼠皮膚酪氨酸、MDA、SOD活性的影響(X±S)

注與正常組比較，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
(6)對造模豚鼠肝臟酪氨酸(Tyr)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的影響結(jié)果顯示，造模后豚鼠肝臟酪氨酸、MDA水平明顯升高，SOD水平明顯降低，與正常組比較有顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)；各給藥組較模型組酪氨酸、MDA水平降低，SOD水平升高，其中化瘀祛斑膠囊組、褐斑凈小、中、大劑量組酪氨酸及MDA水平顯著降低，化瘀祛斑膠囊組、褐斑凈大劑量組SOD水平明顯升高，與模型組比較有顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)。提示褐斑凈膠囊對模型豚鼠肝臟酪氨酸、MDA水平升高，SOD水平降低有一定的抑制作用。
表6褐斑凈膠囊對豚鼠肝臟酪氨酸、MDA、SOD活性的影響(X±S)

注與正常組比較，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
(7)對造模豚鼠血清性激素水平的影響結(jié)果顯示，造模后豚鼠E2、FSH水平明顯升高，與正常組比較有顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)；各給藥組較模型組E2水平降低，其中褐斑凈大劑量組E2水平顯著降低，與模型組比較有顯著性差異(p＜0.05)。提示褐斑凈膠囊對模型豚鼠雌二醇(E2)水平的升高有一定的抑制作用。
表7褐斑凈膠囊對豚鼠對血清激素水平的影響(X±S)

注與正常組比較，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05。
3.褐斑凈膠囊對小鼠耳廓微循環(huán)的影響實驗結(jié)果顯示褐斑凈膠囊小、中、大三個劑量組對血流速度無明顯影響，但均能對抗腎上腺素引起的微血管收縮，擴張小鼠微血管細靜脈和細動脈，與空白對照組比較差異顯著(p＜0.05或p＜0.01)，且呈劑量依賴性。表明褐斑凈具有改善微循環(huán)的作用。
表8褐斑凈膠囊對小鼠耳廓微循環(huán)血流速度的影響(X±S)(n＝10)

表9褐斑凈膠囊對小鼠耳廓微靜脈管徑的影響(X±S)(n＝10)

注與空白對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
表10褐斑凈膠囊對小鼠耳廓微動脈管徑的影響(X±S)(n＝10)

注與空白對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
4.褐斑凈膠囊對“血瘀證”模型大鼠血液流變性的影響(1)造模后大鼠不同切變率下的全血粘度和血漿粘度均明顯升高，與空白對照組比較有非常顯著性差異(p＜0.01)。褐斑凈膠囊各給藥組能明顯降低“血瘀”模型大鼠不同切變率下的全血粘度及血漿粘度，與模型組比較差異均有顯著性(p＜0.01，p＜0.05)，結(jié)果見表11。
表11褐斑凈膠囊對“血瘀證”大鼠全血和血漿粘度的影響(X±S)

注化瘀祛斑膠囊組與褐斑凈小劑量組各有1管凝血，無法檢測出數(shù)據(jù)。與空白對照組比較，ΔΔp＜0.01；與模型組比較，**p＜0.01，*p＜0.05。
(2)對“血瘀證”模型大鼠紅細胞壓積、血沉的影響造模后大鼠紅細胞壓積未見明顯改變。模型大鼠血沉增加，與空白對照組比較有顯著性差異(p＜0.01)。褐斑凈膠囊各給藥組血沉有一定的下降，模型組比較有顯著性差異(p＜0.05)，結(jié)果見表12。
表12褐斑凈膠囊對“血瘀證”模型大鼠紅細胞壓積、血沉的影響(X±S)

注與空白對照組比較，ΔΔp＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05。
權(quán)利要求
1.一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特征在于組合植物藥提取物原料的重量配方為地 黃341～512 菟絲子341～512 柴 胡227～342白 芍227～342 當 歸227～342 甘 草136～205(a)取當歸加5～8倍量水浸泡20～90分鐘，水蒸汽蒸餾，提取揮發(fā)油2～4小時，所得當歸揮發(fā)油另器存放；(b)當歸蒸餾后的藥渣與地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加6～14倍量水浸泡0.5～2小時，煎煮0.5～2.0小時，濾過，藥渣再加4～12倍量水，煎煮0.5～2.0小時，濾過，合并兩次濾液與當歸提油后的殘液，濃縮至50℃下相對密度為1.05～1.32，濃縮液于50～70℃下加原藥材投料量0.6～0.8％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌15～25分鐘，低溫靜置20～72小時，離心，棄去沉淀，得藥材提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特征在于取上述藥材提取物，濃縮至50℃下相對密度為1.05～1.4干燥，粉碎加入當歸揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物，混勻，制粒，制成藥劑學所述的顆粒劑、膠囊劑和片劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特征在于取上述藥材提取物，加分散劑，加入當歸揮發(fā)油，混勻，制成軟膠囊。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特征在于取上述藥材提取物，加入當歸揮發(fā)油，按藥劑學方法制成口服液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特征在于取上述藥材提取物，超濾后，加入當歸揮發(fā)油，按藥劑學方法制成注射液。
6.一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特征在于組合植物藥提取物原料的重量配方為地 黃341～512 菟絲子341～512 柴 胡227～342白 芍227～342 當 歸227～342 甘 草136～205取當歸、地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加6～14倍量水浸泡0.5～2小時，煎煮0.5～2.0小時，濾過，藥渣再加4～12倍量水，煎煮0.5～2.0小時，濾過，合并兩次濾液，濃縮至50℃下相對密度為1.05～1.10，濃縮液于50～70℃下加原藥材投料量0.5～1.5％的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌15～25分鐘，低溫靜置20～72小時，離心，棄去沉淀，上清液超濾，加入支架劑，溶解，過濾。經(jīng)冷凍干燥，制成凍干粉針劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特征在于所述的殼聚糖溶液是殼聚糖與濃度為0.5～1.5％醋酸溶液制成的濃度為0.5～1.5％的溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特征在于所述的當歸揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物，是按當歸揮發(fā)油∶β-環(huán)糊精以1∶7～9的重量比，25～35℃的包合溫度，2.5～3.5小時的包合時間下制成的。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，其特征在于濃縮采用減壓濃縮，在0.06～0.09兆帕負壓下和60～80℃的溫度下進行。
全文摘要
一種治療黃褐斑的組合植物藥的提取方法，當歸加水浸泡，水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油；當歸蒸餾后的藥渣與地黃、菟絲子、柴胡、白芍、甘草藥材加水浸泡煎煮濾，濾過與當歸提油后的殘液減壓濃縮，濃縮液加殼聚糖溶液，靜置、離心、棄去沉淀，得藥材提取物。藥材提取物減壓濃縮、干燥、粉碎加入當歸揮發(fā)油的β－環(huán)糊精包合物，混勻、制粒，制成藥劑學所述的顆粒劑、膠囊劑和片劑。本發(fā)明它不僅保持了湯劑的特色，而且可以提高療效、減少用藥體積、便于患者服用；尚克服了湯劑服前臨時煎煮、容易變質(zhì)霉敗的缺點，有利于大批量生產(chǎn)和貯運。
文檔編號A61P17/00GK1736428SQ20041004175
公開日2006年2月22日 申請日期2004年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月17日
發(fā)明者蔡寶昌, 潘揚, 陸潔, 章晨峰, 曹亮 申請人:江蘇中康藥物科技有限公司