專利名稱：齊墩果酸丁二酸單酯的合成及其治療急慢性肝炎藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本技術(shù)領(lǐng)域?qū)儆谥兴幀F(xiàn)代化研究及有機(jī)合成技術(shù)范疇。
背景技術(shù)：
齊墩果酸是廣泛存在于植物和中草藥中的一種五環(huán)三萜類化合物，是植物中很廣泛的次生物質(zhì)。許多植物如青葉膽、女貞子、雪膽、楤木、人參、夏枯草、連翹、山楂、木通、懷牛膝等均可從中分離得到齊墩果酸。齊墩果酸具有抗菌消炎、護(hù)肝降酶、強(qiáng)心利尿、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、升白細(xì)胞、降血脂、降血糖及抗癌等方面的生理活性，在臨床上已用于傳染性急性黃疸型肝炎以及慢性遷延性肝炎，能有效地改善臨床癥狀和體征，成為較常用的護(hù)肝藥物，但是由于齊墩果酸極難溶于水的特性，影響了其在胃腸道的溶出和吸收，因而口服吸收不理想，為了增大其水溶性，增進(jìn)吸收，提高生物利用度，我們對(duì)齊墩果酸進(jìn)行了化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾，以吡啶為催化劑，使齊墩果酸3位的羥基與丁二酸酐反應(yīng)結(jié)合成酯，即齊墩果酸丁二酸單酯(簡(jiǎn)稱齊丁酯)發(fā)明內(nèi)容通過有機(jī)半合成方式對(duì)齊墩果酸進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，生成了新的復(fù)合化合物。其化學(xué)結(jié)構(gòu)為新的化合物，其合成工藝為新的工藝技術(shù)，故申請(qǐng)專利予以保護(hù)。


附圖為齊丁酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖，即在3β位置將丁二酸酐與齊墩果酸羥基形成單酯化合物，其分子式C34H52O6，分子量為556.77?！褒R丁酯”純品，為白色針狀結(jié)晶，無(wú)臭；熔點(diǎn)為256～258℃；比旋度為+83.0°～+84.0°(氯仿，C＝1％)。易溶于氯仿，略溶于甲醇、乙醇、丙酮，極微溶于水。合成的“齊丁酯”一方面在水溶性上有所提高，分散性較齊墩果酸好；另一方面，還保留有一定的脂溶性，因而在胃腸道的吸收增加，藥效增強(qiáng)，提高了生物利用度。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)也表明，“齊丁酯”的保肝降酶作用優(yōu)于其母體藥物齊墩果酸。
具體實(shí)施例方式
1.“齊丁酯”的合成工藝優(yōu)化是采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行四因素三水平正交試驗(yàn)，從而優(yōu)選出了最佳合成條件丁二酯酐的用量為齊墩果酸的7倍(摩爾比)，吡啶的用量為齊墩果酸的4倍(ml∶g)；反應(yīng)溫度為100℃；反應(yīng)時(shí)間為8小時(shí)。待反應(yīng)完畢(齊墩果酸完全反應(yīng)成為“齊丁酯”)，將反應(yīng)液冷卻后緩緩傾入大體積冷水中，同時(shí)不斷攪拌，使絮狀沉淀逐漸析出，放置過濾，反復(fù)洗滌沉淀物后將其置80℃干燥，即可得到類白色粉末，即為“齊丁酯”的粗品，將“齊丁酯”粗品以無(wú)水乙醇重結(jié)晶，即可得到“齊丁酯”純品，合成產(chǎn)物純度可達(dá)98％以上。粗品收率可達(dá)95％。

2.“齊丁酯”的合成工藝優(yōu)化2.1工藝設(shè)計(jì)根據(jù)“齊丁酯”的合成反應(yīng)原理，可知影響“齊丁酯”生成的條件主要有反應(yīng)物齊墩果酸與琥珀酸酐的用量比(A)；溶劑兼催化劑吡啶與齊墩果酸的用量比(B)；反應(yīng)溫度(C)；反應(yīng)時(shí)間(D)。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)分別選取了以上四個(gè)因素的三個(gè)水平進(jìn)行四因素三水平正交試驗(yàn)，選擇條件見表1。
表1.正交試驗(yàn)的因素水平表

2.2考核指標(biāo)考核產(chǎn)物“齊丁酯”的收得率，以收得率最高者為最佳。按因素水平數(shù)選用L9(34)正交表(表6)設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
表2.正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)數(shù)據(jù)及結(jié)果計(jì)算表

2.3實(shí)驗(yàn)操作通法稱取齊墩果酸4.56g(0.01mol)，置于帶有冷凝管的干燥三頸瓶中，按表1要求加入規(guī)定量的琥珀酸酐、吡啶，并在規(guī)定溫度水浴加熱反應(yīng)所需時(shí)間。反應(yīng)結(jié)束后，所得各批反應(yīng)液均在相同條件下按合成反應(yīng)的操作步驟洗滌、干燥，待干燥至恒重后，稱量各批樣品重量，并分別取樣進(jìn)行含量測(cè)定。
2.4“齊丁酯”的含量測(cè)定經(jīng)查閱文獻(xiàn)，參考齊墩果酸的含量測(cè)定方法，采用薄層比色法進(jìn)行“齊丁酯”的含量測(cè)定。
2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密稱取齊丁酯對(duì)照品加氯仿制成1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密吸取此標(biāo)準(zhǔn)溶液10μl、20μl、30μl、40μl、50μl分別點(diǎn)于硅膠GF254薄層板上，以CHCl3∶Me2CO∶HOAc(10∶1∶0.1)為展開劑進(jìn)行展開，于λ254nm紫外燈下將斑點(diǎn)定位，刮取齊丁酯位置硅膠，加入5％香草醛、冰醋酸溶液0.3ml、高氯酸0.6ml，于70℃水浴加熱15min，冷卻，加冰醋酸5ml，同時(shí)取與標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)大小相同平行位置的空白硅膠同樣操作，作為空白對(duì)照。將上述待測(cè)液離心，取上清液于570nm波長(zhǎng)處測(cè)吸收度，由吸收度和相應(yīng)濃度求算回歸方程，結(jié)果表明，齊丁酯點(diǎn)樣量在10～50μg之間時(shí)，線性關(guān)系良好，其回歸方程為Y＝11.40×10-3X-0.0034(r＝0.9995)2.4.2樣品含量測(cè)定精密稱各批試驗(yàn)號(hào)樣品，分別配制成1mg/ml的氯仿溶液，吸取30μl點(diǎn)于硅膠GF254薄層板上，余同標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下操作，測(cè)定A值并計(jì)算含量，結(jié)果見表2中試驗(yàn)結(jié)果的產(chǎn)物純度項(xiàng)。
根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果直觀分析表(表2)上極差R的大小可知，影響齊丁酯合成反應(yīng)收得率的主要因素為A(琥珀酸酐的用量)，C(反應(yīng)溫度)次之，D(反應(yīng)時(shí)間)及B(溶劑兼催化劑吡啶用量)對(duì)收得率的影響較小。由表2得出較好的試驗(yàn)方案為A3B1C3D2，最優(yōu)水平組合為A3B1C3D3。由以上的分析可知齊丁酯合成的最佳條件為琥珀酸酐用量為齊墩果酸的7倍(摩爾比)；吡啶的用量為齊墩果酸的4倍；反應(yīng)溫度為100℃；反應(yīng)時(shí)間為8小時(shí)。
實(shí)施例1稱取齊墩果酸45.6g(0.1mol)，置于帶有冷凝管的干燥三頸瓶中，加入琥珀酸酐70g(0.7mol)，再加入吡啶180ml，100℃水浴反應(yīng)8小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，待反應(yīng)液冷卻，將反應(yīng)液緩緩傾入大體積冷水中，同時(shí)不斷攪拌，使絮狀沉淀逐漸析出，濾取沉淀物，用蒸餾水反復(fù)洗滌至無(wú)吡啶味后，將沉淀物置80℃干燥，得到類白色粉末53.5g，即為齊丁酯粗品，用乙醇重結(jié)晶即可得到齊墩果酸丁二酸單酯純品。
3.本發(fā)明的藥物制品是作為口服應(yīng)用的，其劑型可以是膠囊劑或片劑等，相對(duì)比較而言，膠囊劑的制備在工藝上更為簡(jiǎn)便一些。
以下是制劑的組成及制法實(shí)施例實(shí)施例2膠囊劑(龍牙肝泰膠囊)處方齊丁酯50g 淀粉22g 制成1000粒制備方法將處方量的齊丁酯和淀粉混勻，過5號(hào)篩，裝膠囊，即得。
4.齊丁酯具有保肝降酶的藥理作用，其實(shí)驗(yàn)及結(jié)果如下4.1齊丁酯對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的影響取健康昆明種小白鼠70只，體重20±2g，雌雄各半。按體重隨機(jī)分七組，每組10只，雌雄各半。在實(shí)驗(yàn)室溫度26±2℃，夜間16±2℃，濕度75％，陽(yáng)光充足，通風(fēng)良好的條件下實(shí)驗(yàn)。
正常對(duì)照組急性實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)分三次以等體積生理鹽水0.2ml灌胃(30ml/kg)，于次日24小時(shí)腹腔注射橄欖油一次，劑量為10ml/kg。模型損傷對(duì)照組急性實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)分三次以等體積生理鹽水灌胃(30ml/kg)，于次日24小時(shí)改用0.1％橄欖油溶液10ml/kg腹腔注射一次；聯(lián)苯雙酯陽(yáng)性藥物組(9.75mg/kg)、齊墩果酸陽(yáng)性藥物組(11.7mg/kg)、齊丁酯低劑量組(1.404g/kg)、中劑量組(2.808g/kg)、高劑量組(4.68g/kg)，分三次以等體積0.2ml灌胃，并于次日24小時(shí)腹腔注射0.1％氯化碳橄欖油溶液10ml/kg一次。
于腹腔注射四氯化碳肝臟毒物24小時(shí)后，斷頭處死小鼠，收集血液分離血清，用722型光柵分光光度計(jì)在520nm處測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)值，各實(shí)驗(yàn)組均與模型對(duì)照組比較，用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并做肝臟組織學(xué)鏡檢，即每只動(dòng)物取同一葉肝臟并且部位大致相同的一塊肝組織，固定于10％福爾馬林溶液中，脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，鏡檢。肝臟病變情況組織學(xué)改變按5級(jí)分類。各劑量組肝臟病變組織學(xué)鏡檢結(jié)果均與模型損傷組組織學(xué)鏡檢結(jié)果比較，用Ridit檢驗(yàn)進(jìn)行處理，其結(jié)果見表3。
表3.齊丁酯對(duì)CCL4致小鼠急性肝損傷ALT、AST及肝組織學(xué)的影響(X±SD)

注ΔΔΔP＜0.001，ΔΔ示P＜0.01為損傷組與對(duì)照比較。
***示P＜0.001，**示P＜0.01，*示P＜0.05為各給藥組與損傷組比較注示(0)正常；(1)肝細(xì)胞變性(主要是濁腫)，范圍不超過肝小葉半徑1/2；(2)肝細(xì)胞變性范圍超過肝小葉半徑的1/2；(3)肝細(xì)胞變性，有少數(shù)散在肝小葉中央壞死；(4)肝細(xì)胞呈大片嚴(yán)重變性、壞死從表3的結(jié)果看出，齊丁酯的三個(gè)劑量組均能明顯抑制CCL4致急性肝損傷時(shí)ALT、AST升高，使轉(zhuǎn)氨酶值顯著降低。組間比較，齊丁酯中、低劑量組使轉(zhuǎn)氨酶降低值經(jīng)t檢驗(yàn)均顯著優(yōu)于聯(lián)苯雙酯及齊墩果酸陽(yáng)性藥物組。
四氯化碳對(duì)肝組織的損傷程度，按五個(gè)等級(jí)分類用Ridit檢驗(yàn)處理，結(jié)果是齊丁酯低、中、高三個(gè)劑量均能使肝臟病理?yè)p傷程度顯著減輕，并且有優(yōu)于聯(lián)苯雙酯及齊墩果酸組的趨勢(shì)。
4.2齊丁酯對(duì)D-氨基半乳糖致小鼠急性肝損傷的影響選取昆明種小白鼠70只，體重20±2g，雌雄各半。按體重隨機(jī)分七組。正常對(duì)照組(30ml/kg生理鹽水)、模型損傷對(duì)照組；陽(yáng)性藥物聯(lián)苯雙酯組(9.75mg/kg)和齊墩果酸組(11.7mg/kg)；實(shí)驗(yàn)藥物齊丁酯分低(1.404g/kg)、中(2.808g/kg)、高(4.68g/kg)三個(gè)劑量組。
生理鹽水對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)分三次以等體積0.2ml生理鹽水灌胃(30ml/kg)，于次日24小時(shí)用生理鹽水10ml/kg腹腔注射一次。
模型損傷組實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)以等體積生理鹽水0.2ml灌胃三次，于次日24小時(shí)腹腔注射D-氨其半乳糖800mg/kg一次。
聯(lián)苯雙酯、齊墩果酸組、齊丁酯低劑量組、中劑量組、高劑量組均于實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)，分別按各組劑量以等體積0.2ml灌胃給藥三次，于次日24小時(shí)腹腔注射D-氨基半乳糖800mg/kg一次。
各組均于腹腔注射D-氨基半乳糖24小時(shí)后，將小鼠用斷頭法處死，收集血液，分離血清，同前法測(cè)定ALT、AST值，各實(shí)驗(yàn)組與模型損傷組比較，用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)。并做肝組織學(xué)鏡檢(肝臟取材及病理切片同上法)，而各劑量組肝臟組織鏡檢結(jié)果均與模型損傷組鏡檢結(jié)果相比較，用Ridit檢驗(yàn)處理。其結(jié)果見表4。
表4.齊丁酯對(duì)D-GaLN致小鼠急性肝損傷ALT、AST及肝組織學(xué)的影響(X±SD)

注ΔΔΔ示P＜0.001，ΔΔ示P＜0.01為損傷組與對(duì)照組比較***示P＜0.001，**示P＜0.01，*示P＜0.05為各給藥組與損傷組比較從表4結(jié)果指出，齊丁酯低、中兩個(gè)劑量組能非常顯著對(duì)抗D-GalN致小鼠急性肝損傷ALT、AST的升高，使轉(zhuǎn)氨酶顯著降低。組間t檢驗(yàn)證明，齊丁酯低、中兩個(gè)劑量組對(duì)ALT及AST值降低水平極顯著優(yōu)于聯(lián)苯雙酯組及齊墩果酸組。而齊丁酯的高劑量組能抑制急性肝損傷ALT、AST的升高，使轉(zhuǎn)氨酶的降低并不明顯。
D-GalN對(duì)肝臟組織的損傷程度，同樣按五個(gè)等級(jí)分組為Ridit處理，結(jié)果同樣是齊丁酯低、中二個(gè)劑量組能使肝臟病理?yè)p傷非常顯著減輕，具明顯優(yōu)于對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯及齊墩果酸。而齊丁酯高劑量組只能使肝臟損傷減輕，但并不明顯。
4.3齊丁酯對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性慢性肝損傷的影響4.3.1橄欖油正常對(duì)照組和四氯化碳肝慢性損傷模型的建立選取大鼠120只，體重120-150g，雄雌各半。按體重隨機(jī)分為橄欖油對(duì)照組(20只，雄雌各半)和四氯化碳模型組(100只，雄雌各半)。
橄欖油對(duì)照組用橄欖油給大鼠皮下注射5ml/kg，每周兩次，連續(xù)二個(gè)月。
肝損傷模型組用10％四氯化碳/橄欖油溶液5ml/kg皮下注射，與對(duì)照組同一時(shí)間，每周兩次，連續(xù)二個(gè)月。
4.3.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及藥物治療將皮下注射橄欖油兩個(gè)月的大鼠仍作為正常對(duì)照組；注射四氯化碳兩個(gè)月剩下的80只大鼠按體重隨機(jī)分為六組損傷對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯組(13.5mg/kg.d-1)和齊墩果酸組(40.5mg/kg.d-1)、齊丁酯低劑量組(8.1mg/kg.d-1)和中劑量組(40.5mg/kg.d-1)、高劑量組(81mg/kg.d-1)三個(gè)劑量組。除繼續(xù)四氯化碳中毒外，按各組確定的藥物劑量于中毒后兩個(gè)月開始給藥治療，每天po給藥一次，連續(xù)給藥治療一個(gè)半月。正常對(duì)照組用橄欖油5ml/kg皮下注射，每周兩次，連續(xù)一個(gè)半月，其它各組繼續(xù)用10％CCL4的橄欖油溶液5ml/kg皮下注射，每周兩次，連續(xù)一個(gè)半月。
4.3.3測(cè)定結(jié)果(1)齊丁酯對(duì)CCL4致大鼠慢性肝損傷ALT、AST、TP、ALB、A/G的影響。治療一個(gè)半月后24小時(shí)即于末次給藥24小時(shí)后，斷頭處死大鼠，收集血液，分離血清，用日立7020全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定ATL、AST、TB(總蛋白)、ALB(白蛋白)、A/G(白蛋白/球蛋白)比例，各給藥組與損傷對(duì)照組間各項(xiàng)測(cè)定指標(biāo)的比較t檢驗(yàn)處理結(jié)果見表5。
1.齊丁酯對(duì)CCl4致大鼠慢性肝損傷ALT、AST、TP、ALB、A/G的影響(表5)表5.齊丁酯對(duì)CCl4致大鼠慢性肝損傷ALT、AST、TP、ALB、A/G的影響(X±SD)

注ΔΔΔ示P＜0.001，ΔΔ示P＜0.01，ΔP＜0.05為損傷組與對(duì)照組比較***示P＜0.001，**示P＜0.01，*示P＜0.05 ，為各給藥組與損傷組比較從表中各項(xiàng)指標(biāo)看出，齊丁酯能使轉(zhuǎn)氨酶活性明顯下降，尤其高劑量組能使轉(zhuǎn)氨酶非常顯著下降，其作用與聯(lián)苯雙酯相近；齊丁酯低劑量組對(duì)轉(zhuǎn)氨酶的抑制作用與齊墩果酸相近。而齊丁酯高劑量組對(duì)轉(zhuǎn)氨酶的抑制作用經(jīng)t檢驗(yàn)顯著優(yōu)于齊墩果酸組。另一方面對(duì)蛋白的影響看，雖然對(duì)TP、ALB無(wú)明顯影響，而齊丁酯各劑量組均能明顯對(duì)抗CCL4對(duì)白蛋白的損傷破壞作用，因?yàn)锳/G值同損傷組比較明顯升高，與聯(lián)苯雙酯的作用相近，而齊墩果酸組的A/G值雖然升高，而與損傷組比較卻不明顯，因此，齊丁酯對(duì)肝臟合成白蛋白有一定的保護(hù)作用，明顯抑制CCL4對(duì)肝臟合成白蛋白的影響。
(2)齊丁酯對(duì)CCL4致大鼠慢性肝損傷肝纖維化的保護(hù)作用將上述取過血的大鼠摘取肝臟的同一部位按前述方法用福爾馬林液固定，切片染色，鏡檢，其結(jié)果與模型損傷組對(duì)照比較。用Ridit檢驗(yàn)處理，檢驗(yàn)肝纖維化程度。
同時(shí)摘取肝臟另一相同部分，放入95%酒精中去水半日，取出后去掉酒精，放入丙酮中浸泡脫脂兩天，取出后于110℃烘干，研成粉末。準(zhǔn)確稱取40mg肝粉放在磨口試管中，加入3ml6mol/L鹽酸，加蓋，于125℃水解2小時(shí)，冷卻后將水解液移入50ml容量瓶中，用6mol/L氫氧化鈉調(diào)PH值至6，然后稀釋至刻度，濾過。吸取2ml放入試管中，加入1ml氯氨T溶液混勻，室溫放置20分鐘，加入1ml過氯酸溶液，5分鐘后加入1ml10％對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液，在60℃水溶中保溫20分鐘上，顯色，冷卻后在550nm處比色，隨行試劑做空白對(duì)照。與此同時(shí)，取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)羥脯氨酸(2，5，8，10，16，20μg)按上述方法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線。羥脯氨酸的含量按下式計(jì)算按光密度查標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的羥脯氨酸的μg數(shù)×25×25＝1g肝粉中所含的羥脯氨酸的μg數(shù)。各給藥組與損傷組的測(cè)定指標(biāo)用t檢驗(yàn)檢查。結(jié)果見表6。
表6、齊丁酯對(duì)四氯化碳所致大鼠慢性肝損傷肝纖維化的保護(hù)作用

注ΔΔΔ示P＜0.001，ΔΔ示P＜0.01為損傷組與對(duì)照組比較。
***示P＜0.001，**示P＜0.01，*示P＜0.05為各給藥組與損傷組比較(0)為正常細(xì)胞；(1)僅匯管區(qū)有少量纖維，向肝小葉內(nèi)呈放射狀；(2)增生的纖維分割小葉，但未形成嫩小葉；(3)假小葉形成從表6可以看出，齊丁酯三個(gè)劑量組均能明顯降低實(shí)驗(yàn)性肝損傷中羥脯氨酸的含量，進(jìn)而減少膠原蛋白的合成。病理切片檢查表明齊丁酯高、中兩個(gè)劑量組均能明顯減輕四氯化碳所致的肝纖維化病理表改變。
4.4齊丁酯對(duì)BCG加LPS引起的小鼠免疫性肝損傷的作用將70只小鼠隨機(jī)分為7組空白對(duì)照組，肝損傷模型組(給予等體積蒸餾水)，陽(yáng)性藥聯(lián)苯雙酯組及齊墩果酸組，齊丁酯低、中、高三個(gè)劑量組，其給藥量同急性試驗(yàn)中的劑量。
以上各組除空白對(duì)照組iv0.2ml生理鹽水外，其它各組均ivBGC7.95×106個(gè)活菌/鼠后，次日，陽(yáng)性藥物聯(lián)苯雙酯(9.75mg/kg.d-1)組、齊墩果酸(11.7mg/1kg.d-1)組以及齊丁酯低劑量組(1.404g/kg.d-1)組、中劑量組(2.808g/kg.d-1)高劑量組(4.68g/kg.d-1)po試驗(yàn)劑量的藥物，空白對(duì)照組及肝損傷模型組給po0.2ml/鼠d-1生理鹽水。于感染BCG后10日，未次給藥2小時(shí)后，肝損傷模型組及各給藥組ivLPS10μg/鼠，空白對(duì)照組iv0.2ml/鼠的生理鹽水后10小時(shí)，斷頭處死小鼠，留血液，分離血清，測(cè)ALT、AST值，各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果均與模型損傷組比較，用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。并做肝組織鏡檢，方法同急性肝損傷實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7。
從表7可以看出，齊丁酯三個(gè)劑量組均能顯著抑制BCG加LPS所致小鼠實(shí)驗(yàn)性免疫肝損傷所致的ALT及AST的升高。病理切片檢查表明，齊丁酯的中、低劑量組可明顯抑制肝組織的免疫性病變。
表7.齊丁酯對(duì)BCG加LPS引起的小鼠免疫性肝損傷的作用(X±SD)

注ΔΔΔ示P＜0.001，ΔΔ示P＜0.01為損傷組與對(duì)照組比較。
***示P＜0 001，**示P＜0.01，*示P＜0.05為各給藥組與損傷組比較注示(0)沒有損傷正常細(xì)胞；(1)輕度損傷小葉炎癥細(xì)胞呈圍管性浸潤(rùn)；(2)中度損傷，肝小葉內(nèi)呈現(xiàn)數(shù)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)灶；(3)嚴(yán)重?fù)p傷，肝細(xì)胞呈現(xiàn)多數(shù)壞死。
5.本發(fā)明的藥物制品的臨床應(yīng)用及結(jié)果急慢性肝炎是嚴(yán)重威脅人類健康的多發(fā)病之一，且治療棘手，為了開發(fā)良好的治療急慢性肝炎的藥物，我們對(duì)龍牙肝泰膠囊進(jìn)行了123例急慢性肝炎的臨床研究，取得了較為滿意的療效，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下5.1臨床資料5.1.1一般情況全部病例180例隨機(jī)分為兩組，龍牙肝泰膠囊治療組133例，其中急性肝炎55例，男32例，女23例，年齡21～47歲，平均年齡31歲；慢性肝炎78例，男47例，女31例，年齡23～61歲，平均年齡48歲。齊墩果酸對(duì)照組47例，其中急性肝炎20例，男11例，女9例，年齡19～45歲，平均年齡30歲；慢性肝炎27歲，男17例，女10例，年齡34～57歲，平均年齡47歲。兩組患者的一般慢況具有可比性。
5.1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1984年南寧第三次肝炎會(huì)議修訂的《病毒性肝炎防治方案》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。
5.2治療方法與結(jié)果5.2.1治療方法治療組龍牙肝泰膠囊由黑龍江久久藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，每粒膠囊含齊丁酯50mg。用法急性肝炎，每次一粒，每日兩次，療程一個(gè)月；慢性肝炎，每次二粒，每日兩次，療程三個(gè)月。
對(duì)照組聯(lián)苯雙酯片由浙江仙居制藥廠提供。用法急性肝炎，每次50mg，每日三次，療程一個(gè)月；慢性肝炎，每次100mg，每日三次，療程三個(gè)月。
1、療效標(biāo)準(zhǔn)急性肝炎(1)無(wú)效主要癥狀無(wú)改善，肝區(qū)仍有壓痛和叩痛，肝功能檢查異常。
(2)臨床治愈主要癥候群消失，肝區(qū)無(wú)明顯壓痛和叩痛，肝功能檢查正常。
(3)基本治愈臨床治愈各項(xiàng)指標(biāo)隨訪半年無(wú)異常改變者。
(4)治愈臨床治愈各項(xiàng)指標(biāo)隨訪一年無(wú)異常改變者。
慢性肝炎(1)基本治愈自覺癥狀消失；肝脾腫大穩(wěn)定不變或縮小，且無(wú)明顯壓痛和叩痛；肝功能檢查正常；以上各項(xiàng)指標(biāo)穩(wěn)定一年以上者。
(2)有效主要癥狀消失或基本消失；肝脾腫大穩(wěn)定不變，且無(wú)明顯壓痛及叩痛；肝功能檢查正?；蛟迪陆抵?0％以上，并持續(xù)3個(gè)月者。
(3)無(wú)效療程結(jié)束后，SGPT不下降者。
5.2.3治療結(jié)果表8急性肝炎治療結(jié)果

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，兩組總有效率和治愈率無(wú)顯著差異(P＞0.05)，但龍牙肝泰膠囊中提取物的劑量?jī)H為聯(lián)苯雙酯的2/3，表明該藥的藥效確于聯(lián)苯雙酯。
表9慢性肝炎治療結(jié)果

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，龍牙肝泰治療組有效率(88.46％)明顯高于對(duì)照組(81.48％)5.3結(jié)論5.3.1龍牙肝泰膠囊在治療急慢性肝炎方面確有較好療效，與聯(lián)苯雙酯對(duì)照組比，急性肝炎二者總有效率差異不顯著(P＞0.05)，從數(shù)據(jù)上看，治療組(81.82％)有高于對(duì)照組(80.00％)的趨勢(shì)；慢性肝炎龍牙肝泰膠囊治療明顯優(yōu)于對(duì)照組(P＞0.05)。
5.3.2在服藥期間，心、腎功能正常，未發(fā)生毒性反應(yīng)，亦未見其它副作用。
5.3.3該藥服用次數(shù)少、方便、實(shí)用。
權(quán)利要求
本品請(qǐng)求專利保護(hù)的范圍為“齊丁酯”的化學(xué)結(jié)構(gòu)及合成技術(shù)以及合成工藝。1、齊丁酯化學(xué)結(jié)構(gòu)為 齊丁酯分子式C34H52O6齊丁酯分子量556.77
2.合成技術(shù)將齊墩果酸與丁二酸酐反應(yīng)，以無(wú)水吡啶為催化劑兼溶劑，加熱反應(yīng)，從而合成了齊墩果酸丁二酯單酯，即“齊丁酯”。
3.合成工藝將一定量的齊墩果酸加入7倍量(摩爾比)的丁二酸酐，再加入4倍量(ml/g)的吡啶，在100℃加熱反應(yīng)8小時(shí)，反應(yīng)完畢，經(jīng)水洗去剩余的丁二酸酐以及催化劑吡啶，即可得到最終合成產(chǎn)物“齊丁酯”。
4.按權(quán)利要求3所述的合成工藝合成齊丁酯，其特征在于該制品有保肝降酶作用。
5.按權(quán)利要求3所述的藥物制品，其特征在于該制品為口服制劑。
6.按權(quán)利要求5所述的藥物制品，其特征在于該制品為膠囊劑。
7.按權(quán)利要求6所述的藥物制品，其特征在于該制品含齊丁酯50mg。
8.按權(quán)利要求4所述的藥物制品，其特征在于該制品經(jīng)口服在有效量下可降低轉(zhuǎn)氨酶，保護(hù)肝臟，減輕肝損傷。
全文摘要
本技術(shù)屬于中藥現(xiàn)代化研究及有機(jī)合成技術(shù)范疇。利用中藥中的天然成分齊墩果酸，與丁二酸酐在無(wú)水吡啶做催化劑條件下進(jìn)行酯化合成，生成齊墩果酸丁二酸單酯(簡(jiǎn)稱齊丁酯)，獲得新化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物。技術(shù)方案要點(diǎn)是在合成反應(yīng)中，將齊墩果酸加7倍量的丁二酸酐，再加4倍量吡啶，100℃加熱反應(yīng)8小時(shí)，反應(yīng)完畢，經(jīng)水洗去剩余丁二酸酐及吡啶，得齊丁酯。進(jìn)一步純化用無(wú)水乙醇重結(jié)晶。發(fā)明所獲新的化合物齊丁酯結(jié)構(gòu)見附圖。分子式C
文檔編號(hào)A61P1/16GK1715291SQ20041004365
公開日2006年1月4日 申請(qǐng)日期2004年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月28日
發(fā)明者田振坤 申請(qǐng)人:田振坤, 王建明, 匡海學(xué)