專利名稱：注射用脈絡(luò)寧粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療周圍血管病和腦血管病等疾病的傳統(tǒng)中藥復(fù)方制劑以及該制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
脈絡(luò)寧以著名醫(yī)方“四妙勇安湯”為基礎(chǔ)研發(fā)而成。四妙勇安湯是我國(guó)多年來沿用的傳統(tǒng)治療方劑，收載于清代《驗(yàn)方新編》一書，由金銀花、玄參、當(dāng)歸、甘草四味藥組成，具有清熱解毒、活血止痛之功效。
脈絡(luò)寧是中藥復(fù)方制劑，具有清熱養(yǎng)陰、活血化瘀的作用，臨床用于血管閉塞性脈管炎、靜脈血栓形成、動(dòng)脈硬化性閉塞癥、腦血栓形成及后遺癥等病。
中國(guó)專利申請(qǐng)CN048148A(申請(qǐng)?zhí)?2107848.X)公開了一種“脈絡(luò)寧靜脈注射液的工藝方法”，此方法是將金銀花、牛膝、玄參、石斛四味藥按比例配伍后，加水浸煮，將煎液濃縮成半固體狀，以乙醇淀析，醇液回收乙醇后用醋酸乙酯抽提，提取液用蒸餾水轉(zhuǎn)溶，濾取水溶液加適量吐溫-80及20％NaOH溶液調(diào)節(jié)其PH值，得到此發(fā)明所說的成品。
中國(guó)專利申請(qǐng)CN 1345250A(申請(qǐng)?zhí)?3119593.8)公開了一種“注射用脈絡(luò)寧口服固體制劑的制備方法”，此方法是以傳統(tǒng)中藥忍冬金銀花、黃草石斛、浙玄參和懷牛膝為原料，粉碎后加入甲醇、氯仿，運(yùn)用現(xiàn)代超聲技術(shù)提取有效成分，減壓回收有機(jī)溶劑，除盡溶劑，再進(jìn)行相應(yīng)的后處理，即可得到此發(fā)明所說的制成品。
中藥材的品種繁多，質(zhì)量不一。在本發(fā)明涉及的藥材中，中國(guó)藥典2000版收載金銀花4種；石斛的品種更多，其中中國(guó)藥典2000版收載6種、江蘇省藥品檢驗(yàn)所2003年頒布的石斛標(biāo)準(zhǔn)中收載4種。不同品種藥材的活性成分不同且含量不同，有不同的藥理毒理作用。因此將原材料具體化即選擇合適的原材料具體品種，對(duì)于提高方劑的藥理藥效作用和產(chǎn)品質(zhì)量的可控性十分關(guān)鍵。
此外，現(xiàn)有的脈絡(luò)寧為水針劑型或水溶液等，水針在長(zhǎng)期儲(chǔ)存和運(yùn)輸方面存在局限性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是克服現(xiàn)有水劑型注射用脈絡(luò)寧制劑在長(zhǎng)期儲(chǔ)存和運(yùn)輸方面、藥理藥效作用和產(chǎn)品質(zhì)量可控性方面的局限性，提供一種注射用脈絡(luò)寧粉針劑。
本發(fā)明的目的之二是提供一種上述注射用脈絡(luò)寧粉針劑的制備方法。
本發(fā)明之一的注射用脈絡(luò)寧粉針劑是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的注射用脈絡(luò)寧粉針劑，包括重量配比均為25％的原藥材忍冬、玄參、牛膝、石斛的有效提取物。
本發(fā)明的優(yōu)選原藥材組分為球花石斛(或鐵皮石斛)、玄參、牛膝、忍冬，每個(gè)組分的含量均為25％(重量份)。
由上述原藥材組分得到注射用脈絡(luò)寧粉針劑可以通過如下的方法制備將四種原藥材等量混勻，用常規(guī)方法水煎、提取、濃縮、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水轉(zhuǎn)溶、濃縮后加骨架劑、加入活性炭吸附除熱原(即除去分子量為5000～20000左右的蛋白或內(nèi)毒素)、濾過除炭、除菌，得到半成品溶液，再通過凍干半成品溶液得到成品即注射用脈絡(luò)寧粉針劑。
上述的骨架劑可以為甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、環(huán)糊精、山梨醇、氯化鈉、右旋糖酐的一種或幾種的組合。
具體的制備方法可以按照下述的步驟進(jìn)行一、取得原藥材提取物將四種原藥材等量混勻，水煎兩次，每次1.5小時(shí)，取合并濾液濃縮至浸膏狀，二次醇沉，使最終含醇量達(dá)75.0％～85.0％，上清液通過回收乙醇至無醇味后得到回收液；二、取得浸膏狀原藥材提取物上述回收液用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至3.0后，用等量乙酸乙酯連續(xù)萃取四次，合并萃取液，對(duì)合并后的萃取液進(jìn)行減壓回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴濃縮成浸膏狀；三、取得預(yù)凍半成品對(duì)上述浸膏狀回收液進(jìn)行減壓烘干，水轉(zhuǎn)溶后，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0，使用沸水浴進(jìn)行濃縮后，加入骨架劑甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，濾過除炭，補(bǔ)足水量，濾過除菌，得到半成品；四、冷凍將半成品放入凍干箱，調(diào)節(jié)凍干箱溫度至-35℃以下，使半成品凍實(shí)，凝結(jié)器預(yù)先降溫至-50℃以下后，與凍干箱接通；五、干燥對(duì)凝結(jié)器和凍干箱進(jìn)行真空處理，使其真空度達(dá)到10-1～10-4mmHg后，逐步升溫20～50小時(shí)使凝結(jié)器和凍干箱達(dá)到-20℃～0℃后，升溫速度加快，升溫5～15小時(shí)使凝結(jié)器和凍干箱達(dá)到30℃～35℃，保溫2～6小時(shí)，通入無菌的空氣，得到成品即注射用脈絡(luò)寧粉針劑。
本發(fā)明之二的注射用脈絡(luò)寧粉針劑的制備方法是這樣實(shí)現(xiàn)的將四種原藥材等量混勻，用常規(guī)方法水煎、提取、濃縮、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水轉(zhuǎn)溶、濃縮后加骨架劑、加入活性炭吸附除熱原、濾過除炭、除菌，得到半成品溶液，再通過凍干半成品溶液得到成品即注射用脈絡(luò)寧粉針劑。
上述的骨架劑可以為甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、環(huán)糊精、山梨醇、氯化鈉、右旋糖酐的一種或幾種的組合。
上述方法的具體步驟可以是一、取得原藥材提取物將四種原藥材等量混勻，水煎兩次，每次1.5小時(shí)，取合并濾液濃縮至浸膏狀，二次醇沉，使最終含醇量達(dá)75.0％～85.0％，上清液通過回收乙醇至無醇味后得到回收液；二、取得浸膏狀原藥材提取物上述回收液用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至3.0后，用等量乙酸乙酯連續(xù)萃取四次，合并萃取液，對(duì)合并后的萃取液進(jìn)行減壓回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴濃縮成浸膏狀；三、取得預(yù)凍半成品對(duì)上述浸膏狀回收液進(jìn)行減壓烘干，水轉(zhuǎn)溶后，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0，使用沸水浴進(jìn)行濃縮后，加入骨架劑甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，濾過除炭，補(bǔ)足水量，濾過除菌，得到半成品；四、冷凍將半成品放入凍干箱，調(diào)節(jié)凍干箱溫度至-35℃以下，使半成品凍實(shí)，凝結(jié)器預(yù)先降溫至-50℃以下后，與凍干箱接通；五、干燥對(duì)凝結(jié)器和凍干箱進(jìn)行真空處理，使其真空度達(dá)到10-1～10-4mmHg后，逐步升溫20～50小時(shí)使凝結(jié)器和凍干箱達(dá)到-20℃～0℃后，升溫速度加快，升溫5～15小時(shí)使凝結(jié)器和凍干箱達(dá)到30℃～35℃，保溫2～6小時(shí)，通入無菌的空氣，得到成品即注射用脈絡(luò)寧粉針劑。
上述的活性炭添加量為1.0‰；真空條件為10-3mmHg；逐步升溫25小時(shí)使凍干箱達(dá)到0℃后，升溫速度加快，升溫5小時(shí)使凍干箱達(dá)到30℃；保溫5小時(shí)。
由于本發(fā)明的注射用脈絡(luò)寧粉針劑為經(jīng)過冷凍干燥的固體粉針劑，含水量低，可以長(zhǎng)期貯存并保持穩(wěn)定的質(zhì)量，而且方便運(yùn)輸，實(shí)用性好。本發(fā)明的注射用脈絡(luò)寧粉針劑還具有劑量準(zhǔn)確，外觀優(yōu)良，質(zhì)地疏松，加水迅速溶解恢復(fù)藥液原有特性的特點(diǎn)。
本發(fā)明的注射用脈絡(luò)寧粉針劑制備方法由于避免了接觸污染的機(jī)會(huì)較，因此其中的微粒物質(zhì)含量較少。
本發(fā)明的注射用脈絡(luò)寧粉針劑是脈絡(luò)寧注射液的新劑型。脈絡(luò)寧注射液是由石斛、玄參、牛膝、金銀花等四味藥材制成，其中有法定標(biāo)準(zhǔn)得石斛藥材有9種，包括環(huán)草石斛、馬鞭石斛、黃草石斛、鐵皮石斛、金釵石斛、短棒石斛、疊鞘石斛、球花石斛、鼓槌石斛；有法定標(biāo)準(zhǔn)的金銀花藥材有四種，包括忍冬、紅腺忍冬、山銀花、毛花柱忍冬。
本發(fā)明特別優(yōu)選了金銀花、石斛原藥材的優(yōu)選品種忍冬和球花石斛(或鐵皮石斛)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，濱蒿內(nèi)酯是石斛藥材的主要有效成分，石斛藥材的各品種中以球花石斛和鐵皮石斛中濱蒿內(nèi)酯的含量較高；綠原酸為金銀花中的有效成分，并且是衡量其藥材質(zhì)量的法定定量指標(biāo)，而異綠原酸與綠原酸相比藥理作用要小毒性要大，在金銀花的各品種中，以忍冬中的異綠原酸含量較低且綠原酸含量較高。因此，本發(fā)明具有更高的藥理藥效作用，提高了產(chǎn)品質(zhì)量的可控性。
本發(fā)明的注射用脈絡(luò)寧(MLN)經(jīng)過了動(dòng)物試驗(yàn)，包括藥效學(xué)試驗(yàn)、一般藥理學(xué)試驗(yàn)、小鼠急性毒性試驗(yàn)、大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)、溶血、局部刺激、過敏試驗(yàn)等。
試驗(yàn)按照下列的表1對(duì)石斛和金銀花藥材的具體品種通過制劑的動(dòng)物試驗(yàn)(藥理、藥效、毒理試驗(yàn))進(jìn)行篩選。
表1石斛和金銀花藥材的篩選試驗(yàn)編號(hào)表

動(dòng)物試驗(yàn)的藥物使用劑量MLN擬臨床靜脈注射的人日用量為成年人每日一次靜脈滴注0.65g或1.3g(相當(dāng)于100克或200克藥材)，按60kg人計(jì)算，人日用劑量約為0.0108g/kg或0.0217g/kg。經(jīng)折算大鼠的等效劑量為0.0697g/kg、0.139g/kg，本試驗(yàn)中設(shè)定MLN大鼠的低、中、高劑量分別為0.0697g/kg、0.139g/kg、0.279g/kg；兔的等效劑量約為0.036g/kg、0.073g/kg，本試驗(yàn)中設(shè)定MLN家兔低、中、高劑量組分別為0.036g/kg、0.073g/kg、0.145g/kg；小鼠的等效劑量約為0.098g/kg～0.196g/kg，本試驗(yàn)中設(shè)定MLN小鼠的低、中、高劑量分別為0.098g/kg、0.196g/kg、0.393g/kg；犬的等效劑量約為0.021g/kg～0.042g/kg，本試驗(yàn)中設(shè)定MLN犬的低、中、高劑量分別為0.021g/kg、0.042g/kg、0.084g/kg。
1、藥效學(xué)試驗(yàn)大鼠全血粘度MLN 0.139g/kg、0.279g/kg ip(單次腹腔注射)10d對(duì)200/s、30/s、3/s切變率下大鼠全血粘度(P＜0.05)和紅細(xì)胞比容的影響所有處方的制成品均能顯著降低大鼠全血粘度(P＜0.05)和紅細(xì)胞比容。
大鼠最大血小板聚集率MLN 0.279g/kg ip 10d對(duì)ADP誘導(dǎo)的大鼠最大血小板聚集率的影響均顯著降低(P＜0.01)，抑制率為35.1％～43.4％，其中處方A1B4和A1B8的抑制率為42.9％。
大鼠下腔靜脈血栓形成MLN 0.070g/kg、0.139g/kg、0.279g/kg ip 10d對(duì)大鼠下腔靜脈血栓形成的作用均顯著抑制(P＜0.01)，MLN 0.070g/kg、處方A1B4和A1B8的抑制率為28.6％，顯著高于其他處方組成。
大鼠結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈造成的急性不完全性腦缺血MLN 0.139g/kg、0.279g/kg對(duì)大鼠結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈造成的急性不完全性腦缺血的作用均有顯著的保護(hù)作用，并使腦梗塞面積、腦指數(shù)、腦水分均較鹽水組顯著降低(P＜0.05)。
家兔頸總動(dòng)脈血栓濕重、血栓重量/長(zhǎng)度指數(shù)、重量/重量指數(shù) MLN0.073g/kg、0.145g/kg iv(靜脈注射)10d對(duì)家兔頸總動(dòng)脈血栓濕重、血栓重量/長(zhǎng)度指數(shù)、重量/重量指數(shù)的作用其中處方A1B4和A1B8的抑制率分別為20.9％及38.2％、21.2％和37.9％、28.6％和37.7％，顯著高于其他處方組成。
靜脈注射花生四烯酸致小鼠死亡率MLN 0.196g/kg、0.393g/kg iv10d對(duì)靜脈注射花生四烯酸致小鼠死亡率的影響均能降低死亡率，其中處方A1B4和A1B8的死亡率由鹽水組的90.0％降低至66.7％和56.7％，顯著高于其他處方組成(P＜0.05)。
離體血管平滑肌試驗(yàn)MLN 3.3mg/ml～7.2mg/ml濃度依賴性地抑制去甲腎上腺素(10-7～10-5mol/L)和KCl(20～80mmol/L)對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)的作用均能顯著收縮胸主動(dòng)脈血管環(huán)(P＜0.01)，處方A1B4和A1B8的IC50值分別為2.96mg/ml(95％可信區(qū)間為2.37mg/ml～3.70mg/ml)和5.23mg/ml(95％可信區(qū)間為4.78mg/ml～5.70mg/ml)，顯著高于其他處方組成。
2、一般藥理學(xué)試驗(yàn)小鼠試驗(yàn)MLN 0.098g/kg、0.196g/kg、0.393g/kg iv 10d對(duì)小鼠體重一般精神狀態(tài)、自主活動(dòng)次數(shù)、懸尾停動(dòng)時(shí)間、平衡桿跌落次數(shù)及傾斜板滑下角度和滑下時(shí)間、小鼠胃腸推進(jìn)率均無顯著影響。
麻醉犬試驗(yàn) MLN 0.021g/kg、0.042g/kg、0.084g/kg iv劑量依賴性地降低麻醉犬血壓(收縮壓、舒張壓和平均動(dòng)脈壓)，用藥后均在20min～30min時(shí)血壓降低最顯著，藥后60min開始逐漸恢復(fù)。處方A1B4和A1B8分別使平均血壓降到藥前的55％、45％、37％，120min時(shí)分別恢復(fù)至藥前的92％、71％、53％，血壓下降幅度及有效時(shí)間均顯著高于其他組。
所有組成的MLN對(duì)麻醉犬臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)均有一定的抑制作用，表現(xiàn)為L(zhǎng)VSP、LVEDP、+dP/dt、-dP/dt等指標(biāo)于藥后20min～30min顯著降低，藥后60min漸恢復(fù)。處方A1B4和A1B8的LVSP、+dp/dtmax，-dp/dtmax分別降至藥前的30％～50％，用藥后120min時(shí)可恢復(fù)至用藥前62％～78％，作用強(qiáng)度及有效時(shí)間均顯著高于其他組。
所有組成的MLN藥后20min～30min麻醉犬心率顯著減慢，中、高劑量組藥后90min～120min麻醉犬心率加快。MLN對(duì)麻醉犬心電圖PR間期、QRS波寬和QT間期等指標(biāo)無顯著影響。
MLN藥后麻醉犬腦血流量立即增加，處方A1B4和A1B8藥后10min達(dá)高峰，20min開始下降，30min時(shí)降到藥前水平以下，持續(xù)時(shí)間20min并顯著高于其他組。
3、小鼠急性毒性試驗(yàn)小鼠單次腹腔注射(ip)或靜脈注射(iv)最大可給藥量(4.06g/kg)均未引起受試鼠出現(xiàn)任何異常反應(yīng)。
一日內(nèi)多次ip或iv給藥，日用藥量3×4.06g/kg，藥后14日受試鼠均未出現(xiàn)任何異常反應(yīng)，試驗(yàn)觀察期間受試鼠無一死亡，試驗(yàn)結(jié)束動(dòng)物尸檢未發(fā)現(xiàn)受試鼠各臟器出現(xiàn)任何異常表現(xiàn)。急性毒性試驗(yàn)結(jié)論為，MLN毒性小，單次或一日內(nèi)多次ip或iv給藥均不能引起受試鼠出現(xiàn)死亡。各組成的單次ip或iv的最大耐受量及多次用藥的日用藥最大耐受量沒有顯著差異，處方A1B4和A1B8單次ip或iv的最大耐受量為4.06g/kg，約相當(dāng)于擬臨床人日用量的370倍；多次用藥的日用藥最大耐受量為12.18g/kg，約相當(dāng)于擬臨床人日用量的1110倍。
4、大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)MLN 0.072g/kg、0.22g/kg、0.65g/kg，每日1次，連續(xù)ip給藥90天，僅0.22g/kg、0.65g/kg組在連續(xù)用藥90天時(shí)，處方A1B4和A1B8的大鼠血液凝固時(shí)間分別由鹽水組的3.3±0.5min延長(zhǎng)至4.3±0.9min和5.3±1.0min(P＜0.01)，各組成的延長(zhǎng)時(shí)間沒有顯著性差異。停藥15天大鼠血液凝固時(shí)間均基本恢復(fù)正常；其他指標(biāo)包括一般狀態(tài)、血液學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)和組織形態(tài)學(xué)等均未見任何異常。
5、溶血、局部刺激、過敏試驗(yàn)體外溶血試驗(yàn)6.5mg/ml濃度以下均未見溶血和紅細(xì)胞凝集反應(yīng)。
血管刺激試驗(yàn)0.036g/kg和0.073g/kg，隔日1次兔耳靜脈滴注，連續(xù)5次。
結(jié)果均未見滴注局部血管及周圍組織有紅腫、充血、硬結(jié)或潰爛等。組織學(xué)檢查顯示，血管內(nèi)無淤血、無血栓形成，血管內(nèi)皮細(xì)胞無增生，血管壁無增生、變性，無出血、水腫和炎性滲出，血管壁及周圍組織無鈣化或其他異常物質(zhì)沉著。給藥側(cè)和對(duì)照側(cè)相比無明顯差別，表明MLN靜脈滴注對(duì)兔耳緣靜脈無局部刺激反應(yīng)。
過敏試驗(yàn)制成6.5％生理鹽水溶液，豚鼠隔日連續(xù)3次腹腔注射，每次0.5ml/只致敏。于第1次用藥的第14天、第21天、第28天，分別靜脈注射6.5％MLN生理鹽水溶液1ml/只進(jìn)行激發(fā)。結(jié)果表明動(dòng)物未出現(xiàn)任何過敏反應(yīng)表現(xiàn)。
6、統(tǒng)計(jì)方法試驗(yàn)結(jié)果以x±s表示，用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各組結(jié)果進(jìn)行方差分析比較；以分組t檢驗(yàn)比較各組間差異顯著性，以配對(duì)t檢驗(yàn)比較給藥前后差異顯著性。
本發(fā)明的注射用脈絡(luò)寧粉針劑通過以下方法進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果表明注射用脈絡(luò)寧粉針劑完全符合規(guī)定。
性狀成品性狀為黃棕色至紅棕色的松散塊狀物。
鑒別(1)取成品1瓶，加水10ml，搖勻，量取1ml，加水4ml，輕搖，逐滴加入碘化鉍鉀試液5滴，即生成橙紅色沉淀。
(2)取成品1瓶，加水10ml，搖勻，量取2ml，加水4ml，滴加醋酐10滴，沿壁加硫酸1ml，兩界面處呈紅棕色環(huán)。
(3)取成品1瓶，加水10ml，搖勻，作為供試品溶液，另取綠原酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯-甲酸-水(14∶5∶5)的上清液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(4)取成品1瓶，加水10ml，搖勻，至分液漏斗中，用氯仿提取4次，每次10ml，合并提取液，置水浴中濃縮至干，殘?jiān)勇确?ml使溶解，作為供試品溶液。另取濱蒿內(nèi)酯對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含0.3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液1μl，供試品溶液10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸丁酯(2∶3∶3)為展開劑，展開，取出，吹干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
pH值取成品1瓶，加水20ml溶解，依中國(guó)藥典2000版一部附錄VIIG所述方法測(cè)定，結(jié)果為7.2。
蛋白質(zhì)取成品1瓶，加水10ml，量取5ml，加30％磺基水楊酸溶液5ml，混勻，放置5分鐘，沒有發(fā)生渾濁。
溶血試驗(yàn)取成品1瓶，加水10ml，精密量取0.3ml，精密加生理鹽水0.2ml和2％兔血紅細(xì)胞生理鹽水混懸液2.5ml，搖勻，置36.5±0.5℃恒溫水浴中，觀察2小時(shí)，沒有溶血和粘集現(xiàn)象。
熱原取成品1瓶，加水10ml，劑量按家兔體重每1kg注射2ml，依中國(guó)藥典2000版一部附錄XIIIA所述方法檢測(cè)，應(yīng)符合規(guī)定。
重金屬取成品1g，依中國(guó)藥典2000版一部附錄IXE第二法檢查，含重金屬低于10ppm。
肉桂酸含量按照中國(guó)藥典2000版一部附錄VID所述測(cè)定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.1％磷酸溶液(60∶40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm。理論塔板數(shù)按肉桂酸峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。取肉桂酸對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每1ml中含2μg的溶液作為對(duì)照溶液；取成品裝量差異下內(nèi)容物，研勻，精密稱取適量，加水溶解，制得0.04g藥材/ml的溶液，即得供試品溶液。分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，按照峰面積以外標(biāo)法計(jì)算，得肉桂酸含量2.9mg/瓶。
本發(fā)明通過藥理和生化等方面實(shí)驗(yàn)研究證明脈絡(luò)寧有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、增加血流量及抗凝血、溶血栓等作用。臨床上可用于治療周圍血管、腦血管閉塞性疾病。另外，在中藥注射劑的研制生產(chǎn)中，要求較好的控制藥材質(zhì)量，而篩選出良好藥效、較明顯藥理作用、較低毒性的金銀花和石斛藥材的具體品種，這樣才有利于提高制劑質(zhì)量的可控性。為此，本發(fā)明通過藥效、藥理、毒性等動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)金銀花和石斛藥材進(jìn)行了篩選。
試驗(yàn)結(jié)果表明所有處方的制成品均有良好的藥效、較明顯的藥理作用、較低的毒性，其中處方A1B4(鐵皮石斛、忍冬)和A1B8(球花石斛、忍冬)的藥效及藥理作用顯著高于其他組成，毒性與其他組成沒有顯著差異，因此選用A1B4和A1B8作為石斛及金銀花藥材的具體品種用于本發(fā)明的原藥材組分。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的注射用脈絡(luò)寧粉針劑及其制備方法可以這樣實(shí)現(xiàn)一、取得藥材提取物將四種原藥材等量混勻，水煎兩次，每次1.5小時(shí)，取合并濾液濃縮至浸膏狀，二次醇沉，使最終含醇量達(dá)75.0％～85.0％，上清液通過回收乙醇至無醇味后得到回收液；二、取得浸膏狀原藥材提取物上述回收液用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至3.0后，用等量乙酸乙酯連續(xù)萃取四次，合并萃取液，對(duì)合并后的萃取液進(jìn)行減壓回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴濃縮成浸膏狀；三、取得預(yù)凍半成品對(duì)上述浸膏狀回收液進(jìn)行減壓烘干，水轉(zhuǎn)溶后，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0，使用沸水浴進(jìn)行濃縮后，加入骨架劑甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，濾過除炭，補(bǔ)足水量，濾過除菌，得到半成品；四、冷凍將半成品放入凍干箱，調(diào)節(jié)凍干箱溫度至-35℃以下，使半成品凍實(shí)，凝結(jié)器預(yù)先降溫至-50℃以下后，與凍干箱接通；五、干燥對(duì)凍干箱和凝結(jié)器進(jìn)行真空處理，使其真空度達(dá)到10-3mmHg后，逐步升溫25小時(shí)使凍干箱和凝結(jié)器達(dá)到0℃后，升溫速度加快，升溫5小時(shí)使凍干箱和凝結(jié)器達(dá)到30℃，保溫5小時(shí)，通入無菌的空氣，得到成品即注射用脈絡(luò)寧粉針劑。
權(quán)利要求
1.一種注射用脈絡(luò)寧粉針劑，其特征在于該制劑包括重量配比均為25％的原藥材忍冬、玄參、牛膝、石斛的有效提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用脈絡(luò)寧粉針劑，其特征在于上述的石斛為球花石斛或鐵皮石斛。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的注射用脈絡(luò)寧粉針劑，其特征在于該制劑通過下列方法得到將四種原藥材等量混勻，用常規(guī)方法水煎、提取、濃縮、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水轉(zhuǎn)溶、濃縮后加骨架劑、加入活性炭吸附除熱原、濾過除炭、除菌，得到半成品溶液，再通過凍干半成品溶液得到成品即注射用脈絡(luò)寧粉針劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的注射用脈絡(luò)寧粉針劑，其特征在于所述的骨架劑為甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、環(huán)糊精、山梨醇、氯化鈉、右旋糖酐的一種或幾種的組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的注射用脈絡(luò)寧粉針劑，其特征在于該制劑的制備方法由下列步驟構(gòu)成一、取得原藥材提取物將四種原藥材等量混勻，水煎兩次，每次1.5小時(shí)，取合并濾液濃縮至浸膏狀，二次醇沉，使最終含醇量達(dá)75.0％～85.0％，上清液通過回收乙醇至無醇味后得到回收液；二、取得浸膏狀原藥材提取物上述回收液用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至3.0后，用等量乙酸乙酯連續(xù)萃取四次，合并萃取液，對(duì)合并后的萃取液進(jìn)行減壓回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴濃縮成浸膏狀；三、取得預(yù)凍半成品對(duì)上述浸膏狀回收液進(jìn)行減壓烘干，水轉(zhuǎn)溶后，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0，使用沸水浴進(jìn)行濃縮后，加入骨架劑甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，濾過除炭，補(bǔ)足水量，濾過除菌，得到半成品；四、冷凍將半成品放入凍干箱，調(diào)節(jié)凍干箱溫度至-35℃以下，使半成品凍實(shí)，凝結(jié)器預(yù)先降溫至-50℃以下后，與凍干箱接通；五、干燥對(duì)凝結(jié)器和凍干箱進(jìn)行真空處理，使其真空度達(dá)到10-1～10-4mmHg后，逐步升溫20～50小時(shí)使凝結(jié)器和凍干箱達(dá)到-20℃～0℃后，升溫速度加快，升溫5～15小時(shí)使凝結(jié)器和凍干箱達(dá)到30℃～35℃，保溫2～6小時(shí)，通入無菌的空氣，得到成品即注射用脈絡(luò)寧粉針劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的注射用脈絡(luò)寧粉針劑，其特征在于所述的活性炭添加量為1.0‰；真空條件為10-3mmHg；逐步升溫25小時(shí)使凍干箱達(dá)到0℃后，升溫速度加快，升溫5小時(shí)使凍干箱達(dá)到30℃；保溫5小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6之一所述的注射用脈絡(luò)寧粉針劑的制備方法，其特征在于該制劑的制備方法為將四種原藥材等量混勻，用常規(guī)方法水煎、提取、濃縮、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水轉(zhuǎn)溶、濃縮后加骨架劑、加入活性炭吸附除熱原、濾過除炭、除菌，得到半成品溶液，再通過凍干半成品溶液得到成品即注射用脈絡(luò)寧粉針劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的注射用脈絡(luò)寧粉針劑的制備方法，其特征在于所述的骨架劑為甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、環(huán)糊精、山梨醇、氯化鈉、右旋糖酐的一種或幾種的組合。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的注射用脈絡(luò)寧粉針劑的制備方法，其特征在于該制劑的制備方法為一、取得原藥材提取物將四種原藥材等量混勻，水煎兩次，每次1.5小時(shí)，取合并濾液濃縮至浸膏狀，二次醇沉，使最終含醇量達(dá)75.0％～85.0％，上清液通過回收乙醇至無醇味后得到回收液；二、取得浸膏狀原藥材提取物上述回收液用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至3.0后，用等量乙酸乙酯連續(xù)萃取四次，合并萃取液，對(duì)合并后的萃取液進(jìn)行減壓回收乙酸乙酯，得到的回收液用沸水浴濃縮成浸膏狀；三、取得預(yù)凍半成品對(duì)上述浸膏狀回收液進(jìn)行減壓烘干，水轉(zhuǎn)溶后，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0，使用沸水浴進(jìn)行濃縮后，加入骨架劑甘露醇和0.5‰～2.0‰活性炭，濾過除炭，補(bǔ)足水量，濾過除菌，得到半成品；四、冷凍將半成品放入凍干箱，調(diào)節(jié)凍干箱溫度至-35℃以下，使半成品凍實(shí)，凝結(jié)器預(yù)先降溫至-50℃以下后，與凍干箱接通；五、干燥對(duì)凝結(jié)器和凍干箱進(jìn)行真空處理，使其真空度達(dá)到10-1～10-4mmHg后，逐步升溫20～50小時(shí)使凝結(jié)器和凍干箱達(dá)到-20℃～0℃后，升溫速度加快，升溫5～15小時(shí)使凝結(jié)器和凍干箱達(dá)到30℃～35℃，保溫2～6小時(shí)，通入無菌的空氣，得到成品即注射用脈絡(luò)寧粉針劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的注射用脈絡(luò)寧粉針劑的制備方法，其特征在于所述的活性炭添加量為1.0‰；真空條件為10-3mmHg；逐步升溫25小時(shí)使凍干箱達(dá)到0℃后，升溫速度加快，升溫5小時(shí)使凍干箱達(dá)到30℃；保溫5小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明為注射用脈絡(luò)寧粉針劑及其制備方法。本發(fā)明將石斛、玄參、牛膝、忍冬(其中優(yōu)選球花石斛或鐵皮石斛)上述四種原藥材等量混勻，用常規(guī)方法水煎提取濃縮、乙醇醇沉、乙酸乙酯萃取、水轉(zhuǎn)溶、濃縮后加骨架劑、活性炭吸附除熱原、濾過除炭除菌后，得到半成品溶液。然后調(diào)節(jié)凍干箱的真空度和溫度對(duì)半成品溶液進(jìn)行冷凍處理，得到成品即注射用脈絡(luò)寧粉針劑。本發(fā)明的注射用脈絡(luò)寧粉針劑含水量低，可以長(zhǎng)期貯存并保持穩(wěn)定的質(zhì)量，而且方便運(yùn)輸，實(shí)用性好。另外，還具有劑量準(zhǔn)確，外觀優(yōu)良，質(zhì)地疏松，加水迅速溶解恢復(fù)藥液原有特性的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1714849SQ20041006223
公開日2006年1月4日 申請(qǐng)日期2004年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月1日
發(fā)明者石秀坤 申請(qǐng)人:石秀坤