專利名稱：黃連、吳茱萸總生物堿的提取方法及其制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中國藥典收載的一種中藥復(fù)方黃連、吳茱萸的有效成份提取方法及其提取物的應(yīng)用，特別是從中藥復(fù)方中提取總生物堿的方法。
背景技術(shù)：
黃連、吳茱萸總生物堿對于急慢性胃炎、腸炎、胃潰瘍等疾病有較好的療效。但黃連、吳茱萸藥物的生產(chǎn)過程中，對于原料藥的提取是采用水煎提取法(或直接粉碎制成成品藥)，該方法得到的提取物是浸膏，這種提取物純度低，吸濕性強(qiáng)，制劑制備困難，制劑質(zhì)量較差，服用量大。已有在公開號為CN 1431014A的發(fā)明專申請中，公開了一種黃連、吳茱萸總生物堿的提取方法，該方法為將黃連、吳茱萸固定配方粉料加入5～10倍0.5～5％的鹽酸甲醇作為提取溶劑，回流提取，藥渣用水提取，合并以上兩提取液，回收甲醇后提取物過中性氧化鋁柱，濃縮后提取物再用乙醇提取，得黃連、吳茱萸總生物堿。但這一方法的運(yùn)用，總生物堿提取得率和脂溶性生物堿轉(zhuǎn)移率都較低。同時，在這項技術(shù)中，只用酸沉淀，而沒有用脂溶性溶媒進(jìn)行較多量的脂溶性生物堿的提取，脂溶性有效成份不能充分獲得。不僅如此，已有方法是先用溶媒為鹽酸甲醇，后用中性氧化鋁分離，可能存在有溶媒的毒副作用，以及有機(jī)物的殘留。而且本工藝繁瑣，成本較高，工業(yè)化大生產(chǎn)操作難度大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為避免上述現(xiàn)有技術(shù)所存在的不足之處，提供一種所得提取物中總生物堿含量可高達(dá)60％、總生物堿中鹽酸小檗胡含量達(dá)60％，從而提高制劑水平的黃連、吳茱萸總生物堿的提取方法及其制劑。
本發(fā)明黃連、吳茱萸總生物堿的提取方法的特點是按以下步驟進(jìn)行，所述份數(shù)均為重量份；a、取黃連6份、吳茱萸1份，分別粉碎成粗粉，混合得粉料；b、向粉料中加入5～10倍量70～95％乙醇回流提取1～3次，每次0.5～3小時，過濾，合并濾液，得乙醇提取液；藥渣再用4～10倍量水煎煮1～3次，每次0.5～3小時，過濾，合并煎煮液，濃縮至相對密度1.0～1.2，得濃縮液；c、對步驟b乙醇提取液回收乙醇得稠膏，用1～6倍生藥量乙酸乙酯萃取1～4次，回收乙酸乙酯后分別得提取物A和水溶液；水溶液和步驟b的濃縮液合并，靜置，濾過，濾液用鹽酸調(diào)pH為1.0～5.0，加入NaCl使含量為5～10％(重量/體積)，攪拌使其溶解，靜置后濾過，沉淀后用水洗滌至pH為3.0～7.0，得提取物B；
d、合并提取物A和提取物B，50～70℃下減壓干燥，粉碎，得提取物黃連、吳茱萸總生物堿。
本發(fā)明中以上述方法提取的黃連、吳茱萸總生物堿的制劑特點是將所提取的黃連、吳茱萸總生物堿按常規(guī)制劑工藝制成用于治療急慢性胃炎、胃潰瘍的各種劑型。
與已有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在1、本發(fā)明方法使總生物堿提取得率有效提高。
2、本發(fā)明方法通過使用乙酸乙酯將脂溶性生物堿進(jìn)行萃取，避免了有效成份的損失，脂溶性生物堿轉(zhuǎn)移率有效提高。
3、本發(fā)明方法以常規(guī)的乙醇作為溶媒，不過柱，溶媒?jīng)]有毒副作用，不會留下有機(jī)殘留物。
4、本發(fā)明方法所得提取物的總生物堿含量大于60％，總生物堿中鹽酸小檗堿含量為60％，其它生物堿占40％，含量得到國家對申報新藥的要求，以其制成制劑，可以大大提高制劑水平，而且藥理作用效果明顯。
5、本發(fā)明工藝流程簡單，不再需要已有技術(shù)中比較繁瑣的過中性氧化鋁柱步驟，工業(yè)化大生產(chǎn)操作難度小，成本大大降低。
具體實施例方式提取方法按以下步驟進(jìn)行，所述份數(shù)均為重量份；a、取黃連6份、吳茱萸1份，分別粉碎成粗粉，混合得粉料；b、向粉料中加入5～10倍量70～95％乙醇回流提取1～3次，每次0.5～3小時，過濾，合并濾液，得乙醇提取液；藥渣再用4～10倍量水煎煮1～3次，每次0.5～3小時，過濾，合并煎煮液，濃縮至相對密度1.0～1.2，得濃縮液。
c、對步驟b乙醇提取液回收乙醇得稠膏，用1～6倍生藥量乙酸乙酯萃取1～4次，回收乙酸乙酯后分別得提取物A和水溶液；水溶液和步驟b的濃縮液合并，靜置，濾過，濾液用鹽酸調(diào)pH為1.0～5.0，加入NaCl使含量為5～10％(重量/體積)，攪拌使其溶解，靜置后濾過，沉淀后用水洗滌至pH為3.0～7.0，得提取物B；d、合并提取物A和提取物B，50～70℃下減壓干燥，粉碎，得提取物黃連、吳茱萸總生物堿。
具體實施中，有益效果更顯突的方案包括在步驟b中，向粉料中加入6～9倍量80～95％乙醇回流提取1～3次，每次0.5～2小時。
在步驟b中，藥渣再用6～9倍量水煎煮1～3次，每次0.5～2小時。
在步驟c中，稠膏用1～3倍生藥量乙酸乙酯萃取1～2次。
在步驟c中，濾液用鹽酸調(diào)pH為1.0～3.0。
在步驟c中，沉淀后用水洗滌至pH為4.0～6.0。
將所提取的黃連、吳茱萸總生物堿按常規(guī)制劑工藝制成用于治療急慢性胃炎、胃潰瘍的各種劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑。
實施例1按以下步驟操作a、備料取黃連21kg，吳茱萸3.5kg作為原料，將黃連、吳茱萸分別粉碎成粗粉后混合，得粉料；b、提取向粉料中加入90％的乙醇196kg，回流提取2次，每次1小時，過濾，合并濾液，得乙醇提取液；藥渣再用196kg水煎煮2次，每次1小時，過濾，合并煎煮液，濃縮至相對密度1.0～1.2，得濃縮液；c、對步驟b乙醇提取液回收乙醇得稠膏，用24500ml乙酸乙酯萃取2次，回收乙酸乙酯后分別得提取物A和水溶液；水溶液和步驟b的濃縮液合并，靜置，濾過，濾液用鹽酸調(diào)pH為2.0，加入NaCl使含量為6％(重量/體積)，攪拌使其溶解，靜置后濾過，沉淀后用水洗滌至pH為5.0，得提取物B；d、合并提取物A和提取物B，60℃下減壓干燥，粉碎，得提取物黃連、吳茱萸總生物堿。
按常規(guī)膠囊劑制備工藝，取黃連、吳茱萸總生物堿共4.4kg(以鹽酸小檗堿計2.20kg)，加輔料適量，混合均勻，填充于空心膠囊殼中，得膠囊10000粒，每粒含總生物堿(以鹽酸小檗堿計)110mg?？诜咳諆纱?，每次兩粒。
實施例2按以下步驟操作a、備料取黃連21kg，吳茱萸3.5kg作為原料，將黃連、吳茱萸分別粉碎成粗粉后混合，得粉料；b、提取向粉料中加入70％的乙醇147kg，回流提取2次，每次1小時，過濾，合并濾液，得乙醇提取液；藥渣再用147kg水煎煮2次，每次1小時，過濾，合并煎煮液，濃縮至相對密度1.0～1.2，得濃縮液；c、對步驟b乙醇提取液回收乙醇得稠膏，用49000ml乙酸乙酯萃取2次，回收乙酸乙酯后分別得提取物A和水溶液；水溶液和步驟b的濃縮液合并，靜置，濾過，濾液用鹽酸調(diào)pH為1.0，加入NaCl使含量為5％(重量/體積)，攪拌使其溶解，靜置后濾過，沉淀后用水洗滌至pH為3.0，得提取物B；d、合并提取物A和提取物B，60℃下減壓干燥，粉碎，得提取物黃連、吳茱萸總生物堿。
按常規(guī)片劑制備工藝，取黃連、吳茱萸總生物堿共4.00kg(以鹽酸小檗堿計2.00kg)，加輔料適量，混合均勻制粒后壓片，得片劑10000片，每片含總生物堿(以鹽酸小檗堿計)100mg?？诜咳諆纱?，每次兩片，溫開水送服。
實施例3按以下步驟操作。
a、備料取黃連21kg，吳茱萸3.5kg作為原料，將黃連、吳茱萸分別粉碎成粗粉后混合，得粉料；b、提取向粉料中加入95％的乙醇245kg，回流提取2次，每次1小時，過濾，合并濾液，得乙醇提取液；藥渣再用245kg水煎煮2次，每次1小時，過濾，合并煎煮液，濃縮至相對密度1.0～1.2，得濃縮液；c、對步驟b乙醇提取液回收乙醇得稠膏，用98000ml乙酸乙酯萃取2次，回收乙酸乙酯后分別得提取物A和水溶液；水溶液和步驟b的濃縮液合并，靜置，濾過，濾液用鹽酸調(diào)pH為4.0，加入NaCl使含量為10％(重量/體積)，攪拌使其溶解，靜置后濾過，沉淀后用水洗滌至pH為7.0，得提取物B；d、合并提取物A和提取物B，60℃下減壓干燥，粉碎，得提取物黃連、吳茱萸總生物堿。
按常規(guī)顆粒劑制備工藝，取黃連、吳茱萸總生物堿共4.20kg(以鹽酸小檗堿計2.10kg)，加輔料適量，混合均勻，制粒后，得顆粒劑25000g，每袋重5g，每袋含總生物堿(以鹽酸小檗堿計)105mg?？诜?，每日兩次，每次一袋，開水沖服。
本發(fā)明提取所得黃連、吳茱萸總生物堿的含量測定方法及藥理作用如下黃連、吳茱萸總生物堿的含量測定1、取本品粉末0.2，精密稱定，置50ml量瓶中，用鹽酸-甲醇(1∶100)溶解并稀釋至刻度，搖勻。照柱色譜法(中國藥典2000年版I部附錄VIC)試驗，精密量取5ml，置氧化鋁柱(內(nèi)經(jīng)約0.9cm，中性氧化鋁5g，濕法裝柱，用乙醇約30ml預(yù)洗)上，用乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取2ml，置50ml量瓶中，用0.05mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻。照分光光度法(中國藥典2000年版I部附錄附錄V A)，在345nm的波長處測定吸收度，按鹽酸小檗堿(C20H17NO4·HCl)的吸收系數(shù)為728計算，即得。
本品每1g含總生物堿以鹽酸小檗堿(C20H17NO4·HCl)計，不得低于0.5g。
2、照高效液相色譜法(中國藥典2000年版I部附錄附錄VI D)測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水-四氫呋喃-醋酸(51∶48∶1∶0.1)為流動相；檢測波長為225nm。理論塔板數(shù)按吳茱萸堿峰計算應(yīng)不低于7000對照品溶液的制備精密稱取吳茱萸堿、吳茱萸次堿對照品適量，加甲醇分別制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品粉末約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取上述兩種對照品溶液與供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定即得。本品每g含吳茱萸堿(C19H17N30)和吳茱萸次堿(C18H13N30)的總量不得少于0.3mg。
3、照高效液相色譜法(附錄VI D)測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相乙腈-水(3∶7)，內(nèi)含0.025mol·L-1磷酸二氫鉀，0.025mg·L-1十二烷基磺酸鈉，磷酸調(diào)PH5。檢測波長為345nm。理論塔板數(shù)按吳茱萸堿峰計算應(yīng)不低于7000對照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬亭、硫酸黃連堿和鹽酸藥根堿對照品適量，加甲醇-鹽酸(100∶1)定量稀釋制成每1ml中含小檗堿0.2g，含巴馬亭、黃連堿和藥根堿均為0.02mg的混合對照品溶液。
供試品溶液的制備取本品粉末0.1g，精密稱定，置50ml量瓶中，用鹽酸-甲醇(1∶100)溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密移取1ml至10ml量瓶中，用鹽酸-甲醇(1∶100)稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定即得。
本品每1g含小檗堿不得低于0.3g；含巴馬亭不得低于0.08g；黃連堿不得低于0.07g；藥根堿不得低于0.05g。
黃連、吳茱萸總生物堿的藥理作用一、黃連、吳茱萸總生物堿對鹽酸-乙醇所致大鼠急性胃粘膜損傷模型的影響大鼠給予鹽酸-乙醇后，可以造成胃粘膜損傷模型，給予陽性對照藥及總生物堿后，對胃粘膜潰瘍的形成有比較明顯的保護(hù)作用，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，分別給予總生物堿0.05、0.10、0.20g/kg(分別相當(dāng)于臨床用量的2.5、5、10倍)后，與陰性對照組相比有非常顯著意義，分別為P＜0.01、P＜0.001和P＜0.001，與黃連、吳茱萸總生物堿及氫氧化鋁有相同的藥理作用。提示總生物堿具有一定的抗胃炎及胃潰瘍形成作用。
二、黃連、吳茱萸總生物堿對因水浸應(yīng)激造成的胃粘膜損傷模型的影響由試驗可知，大鼠給予水浸應(yīng)激后，可以造成胃粘膜損傷模型，給予陽性對照藥及總生物堿后，對胃粘膜潰瘍的形成有比較明顯的保護(hù)作用，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，分別給予總生物堿0.05、0.10、0.20g/kg(分別相當(dāng)于臨床用量的2.5、5、10倍)后，與陰性對照組相比有非常顯著意義，分別為P＜0.05、P＜0.001和P＜0.001，與黃連、吳茱萸及氫氧化鋁有相同的藥理作用。提示總生物堿具有一定的抗胃炎及胃潰瘍形成作用。
三、黃連、吳茱萸總生物堿對小鼠因熱板所致痛閾值的影響由試驗可知，黃連、吳茱萸總生物堿小、中、大劑量(0.10、0.20、0.40g/kg，分別相當(dāng)于臨床用量的5、10、20倍)灌胃給予小鼠7天后，可明顯提高因熱板所致小鼠的痛閾值，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，在給藥后30分鐘和60分鐘時與生理鹽水組相比較具有顯著意義(分別為P＜0.05～P＜0.001)。與黃連、吳茱萸原劑型相比具有同等的藥理作用。
四、黃連、吳茱萸總生物堿對因0.6％醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響試驗表明，黃連、吳茱萸總生物堿三劑量及黃連、吳茱萸原劑型均可明顯抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增加，與生理鹽酸水組相比較，有非常顯著意義，其中黃連、吳茱萸總生物堿中、大劑量組經(jīng)統(tǒng)計分析分別為P＜0.05和P＜0.05(其中有2只動物尾靜脈注射時失敗，3只動物解剖時出血嚴(yán)重影響檢測)。提示黃連、吳茱萸總生物堿具有一定的抗炎作用。
關(guān)于對鹽酸-乙醇所致大鼠急性胃粘膜損傷的影響試驗?zāi)康挠^察黃連、吳茱萸總生物堿對鹽酸-乙醇所致大鼠急性胃粘膜損傷的影響。
受試藥物1、藥物名稱黃連、吳茱萸總生物堿2、提供單位安徽省藥物研究所提供。
3、批號040418。
4、含量每g總生物堿內(nèi)含生藥10.5g。
5、配制方法用蒸餾水配制。
6、對照藥品黃連、吳茱萸，湖北施恩堂制藥有限公司生產(chǎn)，批號030503；氫氧化鋁，山西臨汾民康制藥廠生產(chǎn)，批號040202；動物1、來源，種屬，品系，合格證安徽醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，Wister大鼠，遠(yuǎn)交封閉系，皖醫(yī)動準(zhǔn)第03號。
2、體重200-250g3、性別♂。
4、動物數(shù)60只，每組10只。
5、實驗環(huán)境實驗室溫度為18-28℃，相對濕度為50-70％。
6、顆粒飼料由阜陽穎泉康樂實驗動物飼料有限公司提供。
試劑及儀器
1、鹽酸，2、乙醇，3、阿拉伯膠。
試驗方法參照文獻(xiàn)方法，取大鼠60只，雄性，隨機(jī)均分為5組，分別為阿拉伯膠對照組、黃連、吳茱萸組、氫氧化鋁組及總生物堿小、中、大劑量組。對照組給予等體積的阿拉伯膠液(5％，1ml/100g)；黃連、吳茱萸組給予1.00g/kg的黃連、吳茱萸；氫氧化鋁組給予0.45g/kg的氫氧化鋁；總生物堿組分別給予0.05、0.10、0.20g/kg的總生物堿提取物(分別相當(dāng)于臨床用量的2.5、5、10倍)；禁食48小時(不禁水)后，按上分組給藥1ml/100g或?qū)φ找海?小時后每只大鼠灌胃鹽酸-乙醇混合液1.5ml/只，再過1小時后用過量乙醚麻醉大鼠致死，開腹取胃，用夾子夾緊賁門，由幽門注入1％甲醛溶液5ml，夾緊幽門，將全胃置于1％甲醛溶液中固定10min。沿胃大彎剪開，將胃外翻，用清水輕輕洗去胃內(nèi)容物。將胃平鋪于玻璃板上，用尺子測量胃粘膜損傷長度，以損傷長度(損傷長度大于1mm者加倍計算)總和作為胃粘膜損傷指數(shù)，并計算與給藥前的差值，與生理鹽水組相比較，并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)果見表1。
表1 對鹽酸-乙醇所致大鼠急性胃粘膜損傷的影響(X±SD)

注與生理鹽水組相比較**P＜0.01，***P＜0.001，試驗結(jié)果由試驗可知，大鼠給予鹽酸-乙醇后，可以造成胃粘膜損傷模型，給予陽性對照藥及總生物堿后，對胃粘膜潰瘍的形成有比較明顯的保護(hù)作用，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，分別給予總生物堿0.05、0.10、0.20g/kg(分別相當(dāng)于臨床用量的2.5、5、10倍)后，與陰性對照組相比有非常顯著意義，分別為P＜0.01、P＜0.001和P＜0.001，與黃連、吳茱萸及氫氧化鋁有相同的藥理作用。提示總生物堿具有一定的抗胃炎及胃潰瘍形成作用。
關(guān)于對大鼠急性應(yīng)激性胃粘膜損傷模型的影響試驗?zāi)康挠^察黃連、吳茱萸總生物堿對對大鼠急性應(yīng)激性胃粘膜損傷模型的影響。
受試藥物1、藥物名稱黃連、吳茱萸總生物堿2、提供單位安徽省藥物研究所提供。
3、批號040418。
4、含量每g總生物堿內(nèi)含生藥10.5g。
5、配制方法用蒸餾水配制。
6、對照藥品黃連、吳茱萸，湖北施恩堂制藥有限公司生產(chǎn)，批號030503；氫氧化鋁，山西臨汾民康制藥廠生產(chǎn)，批號040202；動物1、來源，種屬，品系，合格證安徽醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，Wister大鼠，遠(yuǎn)交封閉系，皖醫(yī)動準(zhǔn)第03號。
2、體重150-200g3、性別♂。
4、動物數(shù)60只，每組10只。
5、實驗環(huán)境實驗室溫度為18-28℃，相對濕度為50-70％。
6、顆粒飼料由阜陽穎泉康樂實驗動物飼料有限公司提供。
試劑及儀器1、乙醚，甲醛溶液。
2、恒溫水浴鍋，自制大鼠固定器。
試驗方法參照文獻(xiàn)方法，取大鼠60只，雄性，隨機(jī)均分為5組，分別為阿拉伯膠對照組、黃連、吳茱萸組、氫氧化鋁組及總生物堿小、中、大劑量組。對照組給予等體積的阿拉伯膠液(5％，1ml/100g)；黃連、吳茱萸組給予1.00g/kg的黃連、吳茱萸；氫氧化鋁組給予0.45g/kg的氫氧化鋁；總生物堿組分別給予0.05、0.10、0.20g/kg的總生物堿提取物(分別相當(dāng)于臨床用量的2.5、5、10倍)；禁食24小時(不禁水)后，按上分組給藥1ml/100g或?qū)φ找?。先用乙醚輕度麻醉，四肢各系上一條絲繩后，在把大鼠仰臥位放在特制固定鋼板上，頭部用特制的固定器固定，然后給藥，于給藥后20min將固定好的大鼠直立浸于23℃的恒溫水槽內(nèi)，水面以齊劍突為宜，水浸20h后，放血，處死。結(jié)扎幽門和賁門后取胃，每胃由腺胃部注入6ml生理鹽水，并將其放入1％甲醛溶液中固定10min，沿胃大彎剪開，將胃外翻，用清水輕輕洗去胃內(nèi)容物。將胃平鋪于玻璃板上，用尺子測量胃粘膜損傷長度，以損傷長度(損傷長度大于1mm者加倍計算)總和作為胃粘膜損傷指數(shù)，并計算與給藥前的差值，與生理鹽水組相比較，并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)果見表2。
表2 對大鼠急性應(yīng)激性胃粘膜損傷模型的影響(X±SD)

注與生理鹽水組相比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，試驗結(jié)果由試驗可知，大鼠給予水浸應(yīng)激后，可以造成胃粘膜損傷模型，給予陽性對照藥及總生物堿后，對胃粘膜潰瘍的形成有比較明顯的保護(hù)作用，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，分別給予總生物堿0.05、0.10、0.20g/kg(分別相當(dāng)于臨床用量的2.5、5、10倍)后，與陰性對照組相比有非常顯著意義，分別為P＜0.05、P＜0.001和P＜0.001，與黃連、吳茱萸及氫氧化鋁有相同的藥理作用。提示總生物堿具有一定的抗胃炎及胃潰瘍形成作用。
關(guān)于對小鼠熱板所致痛閾值的影響試驗?zāi)康挠^察黃連、吳茱萸總生物堿對小鼠因熱板所致痛閾值的影響。
受試藥物1、藥物名稱黃連、吳茱萸總生物堿2、提供單位安徽省藥物研究所提供。
3、批號040418。
4、含量每g總生物堿內(nèi)含生藥10.5g。
5、配制方法用蒸餾水配制。
6、對照藥品黃連、吳茱萸，湖北施恩堂制藥有限公司生產(chǎn)，批號030503。
試驗動物1、來源，種屬，品系，合格證安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所實驗動物中心提供，昆明種小鼠，遠(yuǎn)交封閉系，皖醫(yī)動準(zhǔn)第01號。
2、體重18～22g3、性別♀。
4、動物數(shù)50只，每組10只。
5、實驗環(huán)境實驗室溫度為18-28℃，相對濕度為50-70％。
6、顆粒飼料由阜陽穎泉康樂實驗動物飼料有限公司提供。
試劑及儀器熱板儀安徽省藥物研究所自制；電熱恒溫水浴鍋，上海醫(yī)療器械廠產(chǎn)品。
試驗方法參照文獻(xiàn)方法，取♀性昆明種小鼠50只，隨機(jī)分成5組，分別為對照組、黃連、吳茱萸組及總生物堿小、中、大劑量組。對照組給予等體積的生理鹽水；黃連、吳茱萸組給予2.00g/kg的黃連、吳茱萸；總生物堿組分別給予0.10、0.20、0.40g/kg的總生物堿提取物(分別相當(dāng)于臨床用量的5、10、20倍)；分別灌胃給予0.2ml/10g相應(yīng)供試液，連續(xù)7天，第7天給完藥后0.5h時做試驗。末次給藥后0.5h、1.0h將小鼠放入熱板上(將恒溫水浴調(diào)節(jié)至55±0.5℃，上放入2000ml的鐵皮燒懷，底部接觸水面)，用秒表記錄小鼠自投入熱板至出現(xiàn)舔后足的時間(S)作為該鼠的痛閾值，并作t檢驗，比較組間差異顯著性。
試驗結(jié)果由試驗可知，黃連、吳茱萸總生物堿小、中、大劑量(0.10、0.20、0.40g/kg，分別相當(dāng)于臨床用量的5、10、20倍)灌胃給予小鼠7天后，可明顯提高因熱板所致小鼠的痛閾值，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，在給藥后30分鐘和60分鐘時與生理鹽水組相比較具有顯著意義(分別為P＜0.05～P＜0.001)。與黃連、吳茱萸原劑型相比具有同等的藥理作用。結(jié)果見表3表3 黃連、吳茱萸總生物堿對小鼠因熱板所致痛閾值的影響(X±SD)

注與生理鹽水組相比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001
關(guān)于對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響試驗?zāi)康挠^察黃連、吳茱萸總生物堿對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響。
受試藥物1、藥物名稱黃連、吳茱萸總生物堿2、提供單位安徽省藥物研究所提供。
3、批號040418。
4、含量每g總生物堿內(nèi)含生藥10.5g。
5、配制方法用蒸餾水配制。
6、對照藥品黃連、吳茱萸，湖北施恩堂制藥有限公司生產(chǎn)，批號030503。
動物1、來源、種屬、品名、合格證安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所實驗動物中心提供，昆明種小鼠，遠(yuǎn)交封閉系，皖醫(yī)動準(zhǔn)第01號。
2、體重18-22g3、性別♂♀各半。
4、動物數(shù)60只，每組12只。
5、實驗環(huán)境實驗室溫度為18-28℃，相對濕度為50-70％。
6、顆粒飼料由阜陽穎泉康樂實驗動物飼料有限公司提供。
試劑及儀器1、依文思藍(lán)，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站行知校辦廠分裝，批號881102。
2、醋酸天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠出品，批號020215。
3、721型分光光度計，上海第三分析儀器廠出品。
4、80-2沉淀離心機(jī)，上海手術(shù)器械廠產(chǎn)品。
5、TG 328B型電光分析天平，上海天平儀器廠產(chǎn)品。
試驗方法參照文獻(xiàn)方法，取小鼠60只，隨機(jī)分成5組，分別為對照組、黃連、吳茱萸組及總生物堿小、中、大劑量組。對照組給予等體積的生理鹽水；黃連、吳茱萸組給予2.00g/kg的黃連、吳茱萸；總生物堿組分別給予0.10、0.20、0.40g/kg的總生物堿提取物(分別相當(dāng)于臨床用量的5、10、20倍)；分別灌胃給予0.2ml/10g相應(yīng)供試液，連續(xù)5天，末次給完藥后0.5h時做試驗。于末次藥后30min尾靜脈注射依文思蘭生理鹽水溶液0.1ml/10g，然后立即腹腔注射0.6％醋酸0.1ml/10g，20min后處死動物，用生理鹽水每次約2-3ml清洗腹腔3次，合并腹腔洗液，加生理鹽水至10ml，混勻后，3000r/min離心15min，取上清液加入0.1N的NaOH 0.1ml，于590min在721分光光度計上比色，測定光密度，結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析(t檢驗)。
試驗結(jié)果試驗表明，黃連、吳茱萸總生物堿三劑量及黃連、吳茱萸原劑型均可明顯抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增加，與生理鹽酸水組相比較，有非常顯著意義，其中黃連、吳茱萸總生物堿中、大劑量組經(jīng)統(tǒng)計分析分別為P＜0.05和P＜0.05(其中有2只動物尾靜脈注射時失敗，3只動物解剖時出血嚴(yán)重影響檢測)。提示黃連、吳茱萸總生物堿具有一定的抗炎作用。見表4表4 黃連、吳茱萸總生物堿對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響(X±SD)

注與生理鹽水組相比較*P＜0.0權(quán)利要求
1.黃連、吳茱萸總生物堿的提取方法，其特征是按以下步驟進(jìn)行，所述份數(shù)均為重量份；a、取黃連6份、吳茱萸1份，分別粉碎成粗粉，混合得粉料；b、向粉料中加入5～10倍量70～95％乙醇回流提取1～3次，每次0.5～3小時，過濾，合并濾液，得乙醇提取液；藥渣再用4～10倍量水煎煮1～3次，每次0.5～3小時，過濾，合并煎煮液，濃縮至相對密度1.0～1.2，得濃縮液；c、對步驟b乙醇提取液回收乙醇得稠膏，用1～6倍生藥量乙酸乙酯萃取1～4次，回收乙酸乙酯后分別得提取物A和水溶液；水溶液和步驟b的濃縮液合并，靜置，濾過，濾液用鹽酸調(diào)pH為1.0～5.0，加入NaCl使含量為5～10％(重量/體積)，攪拌使其溶解，靜置后濾過，沉淀后用水洗滌至pH為3.0～7.0，得提取物B；d、合并提取物A和提取物B，50～70℃下減壓干燥，粉碎，得提取物黃連、吳茱萸總生物堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是在所述步驟b中，向所述粉料中加入的是6～9倍量80～95％的乙醇回流提取1～3次，每次為0.5～2小時。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是在所述步驟b中，所述藥渣是用6～9倍量的水煎煮1～3次，每次0.5～2小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征是在所述步驟c中，對所述步驟b乙醇提取液回收乙醇得稠膏后，用1～3倍生藥量乙酸乙酯萃取1～2次。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征是在所述步驟c中，所述濾液用鹽酸調(diào)pH為1.0～3.0。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征是在所述步驟c中，沉淀后用水洗滌至pH為4.0～6.0，得提取物B。
7.一種權(quán)利要1所述方法提取的黃連、吳茱萸總生物堿制劑，其特征在是將所提取的黃連、吳茱萸總生物堿按常規(guī)制劑工藝制成用于治療急慢性胃炎、胃潰瘍的各種劑型。
全文摘要
黃連、吳茱萸總生物堿的提取方法及其制劑，提取方法特點是取黃連6份、吳茱萸1份，分別粉碎成粗粉后混合，經(jīng)乙醇回流提取，回收乙醇，稠膏用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得提取物；乙醇回流后的藥渣加水煎煮過濾，濃縮得濃縮液；萃取后的水溶液和濃縮液過濾，濾液用鹽酸調(diào)pH為1.0～4.0，溶液中加NaCl使含量為5～10％，攪拌使其溶解，靜置濾過，沉淀用水洗滌至pH為4.0～7.0得提取物，與上述提取物合并，減壓干燥、粉碎即得提取物黃連、吳茱萸總生物堿。按該方法提取的黃連、吳茱萸總生物堿具有抗胃炎、胃潰瘍及鎮(zhèn)痛等藥理作用，其總生物堿含量大于60％，總生物堿中鹽酸小檗堿含量為60％，其它生物堿占40％。本發(fā)明易于實施、成本低、易制成各種制劑。
文檔編號A61P1/04GK1660210SQ20041006589
公開日2005年8月31日 申請日期2004年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月23日
發(fā)明者楊士友, 黃世福, 賀飛, 張毅, 呂凌 申請人:安徽省藥物研究所, 楊士友