專利名稱：一種防治血栓性疾病的制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是防治血栓性疾病的制劑，特別是關(guān)于一種用蛇床子提取物制備的防治血栓性疾病的制劑。
背景技術(shù)：
血栓性疾病尤其是心腦血管血栓栓塞性疾病在臨床上較為常見(jiàn)，是致死致殘的重要原因之一。心腦血管疾病是導(dǎo)致人類死亡的第一病種，血栓的產(chǎn)生與發(fā)展既是心腦血管疾病發(fā)生的重要環(huán)節(jié)，又是造成中風(fēng)、心肌梗塞的直接原因。隨著生活水平的提高以及人口的老齡化，心腦血管疾病藥物的研究成為藥物開(kāi)發(fā)中的熱點(diǎn)。而適時(shí)運(yùn)用抗血栓藥物是防治這類疾病的核心措施<1>。中醫(yī)藥在上述疾病的預(yù)防和治療中將會(huì)發(fā)揮重要作用。
目前臨床抗血栓治療主要用藥如下①阿斯匹林(Aspirin)阿斯匹林的抗血小板活性作用是通過(guò)乙酰化滅活環(huán)氧化酶，從而阻止花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素G2(血栓素A2途徑的必須步驟)。因?yàn)檠“鍩o(wú)核，不能生成更多的環(huán)氧化酶，故這種抑制是不可逆的。實(shí)驗(yàn)證明，阿斯匹林能有效地減少血小板聚集。②噻氯匹定(Ticlopidine)和它的衍生物氯吡格雷(Clopidogrel)需在肝臟代謝后激活，是二磷酸腺苷(ADP)受體拮抗劑，抑制血小板聚集，是一種作用更強(qiáng)的抗血小板聚集藥物。③血小板膜糖蛋白受體(GP)IIb/IIIa拮抗劑，其受體的生物學(xué)十分復(fù)雜是血小板的最終共同途徑。④肝素(Heparin)是依賴抗凝血酶III(AT-III)的凝血酶抑制劑，在體內(nèi)外均有抗凝作用。肝素是血栓性疾病治療中最常用的抗凝藥。⑤低分子量肝素(LMWH)由于普通肝素易伴發(fā)出血和血小板減少，，近年來(lái)已開(kāi)發(fā)了具有高抗栓活性和低出血副作用的LMWH。⑥水蛭素(Hirudin)對(duì)凝血酶有直接抑制作用，具有較強(qiáng)的抗凝和抗血栓作用。⑦維生素K拮抗劑-華法林(Warfarin)主要抑制肝臟微粒體內(nèi)維生素K依賴性凝血因子II、VII、IX、X和抗凝血蛋白C、S的合成，從而起到抗凝作用。⑧溶栓劑是在纖維蛋白支架上通過(guò)蛋白水解作用溶解已形成的血栓，用于治療血栓栓塞性疾病，如急性心肌梗塞、深靜脈血栓、腦血栓形成、閉塞性脈管炎等。至今為至，有許多抗血栓藥物尚在研制和開(kāi)發(fā)中，有關(guān)一種香豆素類化合物歐芹素乙(Imperatorin，IMP)用于制備防治腦缺血性腦卒中藥物的新用途已申報(bào)專利(02111526.5)。華發(fā)林等雙香豆素類維生素K拮抗劑報(bào)道外，而未見(jiàn)到其它香豆素類藥物用于防治血栓性疾病的相關(guān)報(bào)道。
蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)用于防治骨質(zhì)疏松癥已有相關(guān)報(bào)道，但將其用于防治血栓性疾病未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是將蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)作為制備防治血栓性疾病制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是將蛇床子素(歐芹酚甲醚，Oshol)用于涉及治療血栓性疾病的藥物制劑及其制備方法。這種制劑能有效抑制ADP，凝血酶誘導(dǎo)得血小板聚集。本制劑具有不良反應(yīng)少、治療劑量易于控制、符合國(guó)際藥用制劑的標(biāo)準(zhǔn)要求，也符合中藥現(xiàn)代化要求。
本發(fā)明的技術(shù)方案是設(shè)計(jì)一種防治血栓性疾病的制劑，其特征是所述制劑是含有蛇床子素Osthol的制劑，它作為制備防治血栓性疾病藥的應(yīng)用。
制劑是蛇床子素Osthol，它的純度≥90％以上。
所述的制劑由10％-90％蛇床子素Osthol和90％-10％阿司匹林(Aspinrin)組成。
所述的制劑包含有蛇床子素Osthol重量比選擇在10％-90％，和噻氯匹定(Ticlopidine)重量比選擇在90％-10％。
所述的制劑包含有蛇床子素Osthol重量比選擇在10％-90％，和氯吡格雷(Clopidorel)重量比選擇在90％-10％。
所述的制劑包含有蛇床子素Osthol重量比選擇在10％-90％，和丹參提取物重量比選擇在90％-10％。
所述的制劑包含有蛇床子素Osthol重量比選擇在10％-90％，和歐芹素乙(Imperatorin)其重量比選擇在90％-10％。
所述的制劑包含有蛇床子素Osthol重量比選擇在10％-90％，和活血化瘀中藥提取物，其重量比選擇在90％-10％。
所述的活血化瘀中藥提取物，是當(dāng)歸、黨參或黃芪的單一成分提取物或混合物提取物，其重量比選擇在90％-10％。
本發(fā)明的特點(diǎn)是本發(fā)明將蛇床子提取物中的蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)用于制備防治血栓性疾病制劑中的應(yīng)用。蛇床子素的異名是歐芹酚甲醚；甲氧基歐芹酚。英文名Osthol；Osthole；Osthola.化學(xué)名是7-甲氧基-8-異戊烯基香豆素(2H-1-Benzopyran-2-one，7-methoxy-8-(3-methyl-2-butenyl)-)；分子式C15O16H3，分子量224.28其結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1，核磁共振圖譜見(jiàn)圖2和圖3。使用這種蛇床子素進(jìn)行的小鼠急性毒性試驗(yàn)，結(jié)果表明該蛇床子素的急性毒性低，毒副作用小見(jiàn)小鼠灌服蛇床子素急性毒性試驗(yàn)報(bào)告一、摘要小鼠灌服蛇床子素的LD50為6.241g/kg，95％可信限為5.373g/kg～7.249g/kg。給藥后小鼠活動(dòng)減少，趴臥，個(gè)別小鼠有流涎，給藥后4小時(shí)小鼠開(kāi)始死亡，死亡前小鼠呈持續(xù)性小驚厥和抽搐，最后由于呼吸困難而死亡。存活小鼠中，較高劑量組小鼠體重下降，攝食量減少，而小劑量組小鼠體重略有增加。解剖中毒死亡小鼠肉眼觀察可見(jiàn)肺臟有不同程度的水腫，脾、腎等臟器有輕微充血，腸脹氣。尸解處死存活小鼠，除高劑量組小鼠腸脹氣外，未發(fā)現(xiàn)其它主要臟器有肉眼可見(jiàn)的病理性改變。
二、試驗(yàn)?zāi)康挠^察小鼠灌服蛇床子素后所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)和死亡情況。
三、受試藥物1名稱蛇床子素2提供單位西安綠泉生物技術(shù)有限公司提供3制劑、批號(hào)蛇床子素，為乳白色粉末，純度為95.00％，批號(hào)030516，臨用時(shí)用0.5％羥甲基纖維素鈉和0.1％吐溫-80配制成25.00％、21.25％、18.06％、15.35％和13.05％濃度的混懸液，供實(shí)驗(yàn)用。
四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄各半，體重20.5±1.6g，蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心供應(yīng)，清潔級(jí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)XCYK(蘇)2002-0008，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(蘇)2002-0037。實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)室溫度18±2℃。
五、實(shí)驗(yàn)方法通過(guò)預(yù)試，初步估計(jì)蛇床子素急性毒性的劑量范圍為5.0～10.0g/kg，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行正式試驗(yàn)。取昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，實(shí)驗(yàn)前禁食10小時(shí)后，每組動(dòng)物分別按10.000、8.500、7.224、6.140和5.220g/kg灌服蛇床子素，給藥體積為0.4ml/10g體重，劑量比值r＝0.85。
六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠灌服蛇床子素后，活動(dòng)減少，趴臥，個(gè)別小鼠有流涎，給藥后4小時(shí)小鼠開(kāi)始死亡，死亡中的大部分小鼠于給藥后24小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生死亡(見(jiàn)表1)。死亡小鼠在死亡前呈持續(xù)性小驚厥和抽搐，最后由于呼吸困難而死亡。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的存活小鼠中，較高劑量組小鼠體重下降，攝食量減少，而小劑量組小鼠體重略有增加(見(jiàn)表2)。解剖中毒死亡小鼠肉眼觀察可見(jiàn)肺臟有不同程度的水腫，脾、腎等臟器有輕微充血，腸脹氣。尸解處死存活小鼠除高劑量組小鼠腸脹氣外，未發(fā)現(xiàn)其它主要臟器有肉眼可見(jiàn)的病理性改變。小鼠灌服蛇床子素的LD50測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。
表1 小鼠灌服蛇床子素急性毒性試驗(yàn)期間小鼠死亡情況


表2 小鼠灌服蛇床子素急性毒性試驗(yàn)期間小鼠體重(g)變化

注括號(hào)內(nèi)為存活動(dòng)物數(shù)。
表3 小鼠灌服蛇床子素急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，按Bliss法計(jì)算小鼠灌服蛇床子素的LD50為6.241g/kg，95％可信限為5.373g/kg～7.249g/kg。
七、結(jié)論小鼠灌服蛇床子素的LD50為6.241g/kg，95％可信限為5.373g/kg～7.249g/kg；將這種蛇床子素應(yīng)用于血栓癥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型進(jìn)行了試驗(yàn)，數(shù)據(jù)表明蛇床子素對(duì)動(dòng)-靜脈旁路血栓形成有明顯的抑制作用見(jiàn)蛇床子素對(duì)動(dòng)-靜脈旁路血栓形成的影響Wistar大鼠，雄性，體重271±45g，隨機(jī)分成五組(1)陽(yáng)性藥物對(duì)照組復(fù)方丹參滴丸(compound DanShen dripping pills，DS-DP)62.5mg/kg灌胃給藥；(2)，(3)，(4)為蛇床子素小、中、大劑量組，分別以10，20，40mg/kg灌胃給藥；(5)正常對(duì)照組，以等體積生理鹽水灌胃。每組大鼠8只，連續(xù)給藥10天，在末次給藥后1小時(shí)，參照文獻(xiàn)方法制成動(dòng)-靜脈旁路血栓形成模型。即水合氯醛生理鹽水溶液(400mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈和左側(cè)頸外靜脈，然后取由三段聚乙烯管組成的套管，其中在中間套管內(nèi)放一預(yù)先稱重的6cm長(zhǎng)絲線，并在管內(nèi)注入50u/ml肝素生理鹽水溶液。管的一端插入左頸外靜脈，另一端插入右側(cè)頸總動(dòng)脈。開(kāi)放血流15分鐘后，中斷血流，迅速取出絲線并稱重。血栓濕重為總重量減去絲線干重，然后將其放入烤箱70℃，12小時(shí)后取出稱重，按總重量減去絲線干重計(jì)算血栓干重，并分別按下式公式計(jì)算血栓形成抑制率。

結(jié)果大鼠連續(xù)10天用不同劑量的蛇床子素灌胃后，其動(dòng)-靜脈旁路形成的血栓重量明顯低于正常對(duì)照組，各用藥組與正常對(duì)照組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01。血栓濕重形成抑制率為33.10％～37.47％，血栓干重形成抑制率為6.42％～54.04％，復(fù)方丹參滴丸組對(duì)血栓濕重和干重形成抑制率分別為20.77％和49.90％。
蛇床子素對(duì)大鼠動(dòng)-靜脈旁路血栓形成的影響(x±S，n＝8.)

注與正常對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論大鼠連續(xù)10天灌服蛇床子素10～40mg/kg后，對(duì)動(dòng)-靜脈旁路血栓形成有明顯的抑制作用。對(duì)膠原-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)血栓形成所致的動(dòng)物死亡和偏癱均具有明顯的保護(hù)作用見(jiàn)蛇床子素對(duì)膠原-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)血栓形成的影響實(shí)驗(yàn)昆明種小鼠，雌雄各半，體重20±2.0g，隨機(jī)分成五組(1)陽(yáng)性藥物對(duì)照組阿司匹林20mg/kg灌胃給藥。(2)，(3)，(4)為蛇床子素小、中、大劑量組，分別以10，20，40mg/kg灌胃給藥；(5)正常對(duì)照組，以等體積生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥一周，在末次給藥后1小時(shí)，尾靜脈注射膠原-腎上腺素混合溶液，觀察5分鐘內(nèi)小鼠的死亡數(shù)和15分鐘內(nèi)偏癱的恢復(fù)數(shù)，計(jì)算小鼠的死亡率和藥物對(duì)小鼠血栓形成的保護(hù)率。
結(jié)果小鼠連續(xù)一周灌服不同劑量的蛇床子素后，經(jīng)混合誘導(dǎo)劑(膠原-腎上腺素)處理后，15分鐘內(nèi)偏癱小鼠的恢復(fù)率分別為53.85％，77.78％和83.88％。正常對(duì)照組恢復(fù)率為0％，陽(yáng)性藥物對(duì)照阿司匹林組的恢復(fù)率為66.67％。
蛇床子素對(duì)膠原-腎上腺素誘導(dǎo)血栓形成所致小鼠死亡和偏癱的影響


結(jié)論小鼠連續(xù)一周灌服蛇床子素10-40mg/kg后，對(duì)膠原-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)血栓形成所致的動(dòng)物死亡和偏癱均具有明顯的保護(hù)作用。蛇床子素抑制人血小板聚集作用的研究結(jié)果表明，對(duì)ADP、凝血酶和花生四烯酸誘導(dǎo)的人血小板聚集有明顯的抑制作用見(jiàn)蛇床子素抑制人血小板聚集作用的研究實(shí)驗(yàn)方法取健康自愿者新鮮血液制備富血小板血漿(PRP)或血小板懸液，用Born’s比濁法測(cè)定血小板聚集性。在200μl PRP或血小板懸液中加入藥液，陽(yáng)性藥為丹參注射液。37℃溫育5分鐘后，分別加入濃度為112.5μmol/L的ADP5μl、5U/ml的凝血酶20μl、32mmol/L的花生四烯酸5μl后描記5min血小板聚集曲線。聚集抑制率按下式計(jì)算，以抑制百分率為縱坐標(biāo)，不同的藥物濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行直線回歸，按直線回歸方程計(jì)算抑制50％血小板聚集的相應(yīng)藥物濃度(IC50)，并以此比較藥物對(duì)不同誘導(dǎo)劑產(chǎn)生血小板聚集作用的大小。

結(jié)果蛇床子素可使ADP、凝血酶和花生四烯酸誘導(dǎo)的人血小板聚集率明顯降低，且隨著劑量的增加，作用逐漸增強(qiáng)。從IC50看，蛇床子素對(duì)凝血酶誘導(dǎo)血小板聚集的抑制作用最強(qiáng)，其IC50最小，對(duì)ADP和花生四烯酸誘導(dǎo)血小板聚集的抑制作用基本相同。詳見(jiàn)表1、表2和表3。
表1 蛇床子素對(duì)ADP誘導(dǎo)的人血小板聚集的影響(x±s，n＝6)

與溶媒對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，下同。
表2 蛇床子素對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的人血小板聚集的影響(x±s，n＝6)


表3 蛇床子素對(duì)花生四烯酸誘導(dǎo)的人血小板聚集的影響(x±s，n＝6)

結(jié)論蛇床子素能明顯抑制ADP、凝血酶和花生四烯酸誘導(dǎo)的人血小板聚集，且隨著劑量的增加，抑制血小板聚集作用逐漸增強(qiáng)。
可以通過(guò)多種途徑阻斷血小板的凝集，與傳統(tǒng)的抗血栓治療藥物作用機(jī)理有明顯的區(qū)別。使用藥劑量易于控制，從而使該類制劑符合中藥現(xiàn)代化的要求，也能達(dá)到國(guó)際藥用制劑的標(biāo)準(zhǔn)要求。
本發(fā)明與已知技術(shù)對(duì)比如下1、阿斯匹林主要副作用有腸胃反應(yīng)、過(guò)敏反應(yīng)、出血、血小板減少癥等。由于蛇床子素是一種傳統(tǒng)的中藥材，本身來(lái)源于天然綠色植物，經(jīng)多年臨床使用未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用，使用蛇床子素治療血栓性疾病毒副作用小，具有較高的安全性。另外，目前現(xiàn)有的抗血小板藥不能干擾血小板激活的全部代謝過(guò)程，所以不能完全阻斷血栓形成。一般老年人常規(guī)抗凝治療具有較大出血危險(xiǎn)性。兩種藥物聯(lián)合使用可以在多個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮作用，提高了藥效，降低每種藥物的使用劑量，從而達(dá)到減小藥物的毒副作用的目的。
2、阿斯匹林的抗血小板活性作用機(jī)理是通過(guò)乙酰化滅活環(huán)氧化酶，從而阻止花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素G2(血栓素A2途徑的必須步驟)。因?yàn)檠“鍩o(wú)核，不能生成更多的環(huán)氧化酶，故這種抑制是不可逆的。實(shí)驗(yàn)證明，阿斯匹林能有效地減少血小板聚集。蛇床子素抗血小板活性作用機(jī)理是通過(guò)有效抑制ADP、凝血酶和花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集等途徑發(fā)揮作用與阿斯匹林的作用機(jī)理形成互補(bǔ)，所以通過(guò)兩種藥物聯(lián)合作用可以提高血栓性疾病的治療效果。
3、噻氯匹定(Ticlopidine)和它的衍生物氯吡格雷(Clopidogrel)的抗血小板活性作用機(jī)理是在肝臟代謝后激活，成為二磷酸腺苷(ADP)受體拮抗劑，從而抑制血小板聚集，蛇床子素抗血小板活性作用機(jī)理是通過(guò)有效抑制ADP、凝血酶和花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集，與噻氯匹定(Ticlopidine)和它的衍生物氯吡格雷(Clopidogrel)作用機(jī)理形成互補(bǔ)，所以通過(guò)兩種藥物聯(lián)合作用可以提高血栓性疾病的治療效果，有效的阻斷血栓形成。降低每種藥物的使用劑量，從而達(dá)到減小藥物的毒副作用的目的。


圖1是蛇床子素分子結(jié)構(gòu)示意圖。
圖2是蛇床子素核磁共振圖譜-1。
圖3是蛇床子素核磁共振圖譜-2。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1，取蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)，按25mg-200mg為一個(gè)劑量單位，經(jīng)過(guò)粉碎，制成防治血栓性疾病的制劑。這種制劑可以是普通片劑、膠囊劑、沖劑、滴劑、顆粒劑、針劑。
實(shí)施例2，取蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)提取物(含量≥5％)，經(jīng)過(guò)粉碎，混合制成防治血栓性疾病的制劑。這種制劑可以是普通片劑、膠囊劑、沖劑、滴劑、顆粒劑。
實(shí)施例3，取蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)，按重量計(jì)80％，再添加20％的阿司匹林(Aspinrin)，經(jīng)過(guò)粉碎，混合，制成防治血栓性疾病的制劑。這種制劑可以是普通片劑、膠囊劑、沖劑、滴劑、顆粒劑、針劑。
實(shí)施例4，取蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)，按重量計(jì)60％再添加40％的噻氯匹定(Ticlopidine)，經(jīng)過(guò)粉碎，混合，制成防治血栓性疾病的制劑。這種制劑可以是普通片劑、膠囊劑、沖劑、滴劑、顆粒劑、針劑。
實(shí)施例5，取蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)，按重量計(jì)50％再添加35％的丹參提取物(丹參酮)和15％的阿司匹林(Aspinrin)，經(jīng)過(guò)粉碎，混合，制成防治血栓性疾病的制劑。這種制劑可以是普通片劑、膠囊劑、沖劑、滴劑、顆粒劑、針劑。
實(shí)施例6，取蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)，按重量計(jì)40％、阿司匹林(Aspinrin)25％，噻氯匹定(Ticlopidine)20％、氯吡格雷(Clopidorel)15％，經(jīng)過(guò)粉碎、混合，制成防治血栓性疾病的制劑。
實(shí)施例7，取蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)，按重量計(jì)60％、活血化瘀中藥40％提取物，活血化瘀中藥可以是當(dāng)歸、黨參或黃芪的單一成分提取物，也可以是當(dāng)歸10％、黨參10％及黃芪20％混合物的提取物，其重量比選擇在90％-10％。
實(shí)施例8，取蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)，按重量計(jì)80％和歐芹素乙(Imperatorin)其重量比選擇在20％。經(jīng)過(guò)粉碎、混合，制成防治血栓性疾病的制劑。
以上實(shí)施例的制作方法和工藝過(guò)程均按中國(guó)藥典2000版實(shí)施。
本發(fā)明與其他抗血栓藥品聯(lián)合作用效果實(shí)驗(yàn)如下蛇床子素復(fù)方丹參聯(lián)合用藥對(duì)動(dòng)-靜脈旁路血栓形成的影響Wistar大鼠，雄性，體重271±45g，隨機(jī)分成五組(1)陽(yáng)性藥物對(duì)照組復(fù)方丹參滴丸(compound DanShen dripping pills，DS-DP)62.5mg/kg灌胃給藥；(2)，(3)，(4)為蛇床子素小、中、大劑量組，分別以10，20，40mg/kg灌胃給藥；(5)蛇床子素、復(fù)方丹參聯(lián)合用藥組為蛇床子素10mg/kg復(fù)方丹參滴丸30mg/kg混合灌胃給藥；(6)正常對(duì)照組，以等體積生理鹽水灌胃。每組大鼠8只，連續(xù)給藥10天，在末次給藥后1小時(shí)，參照文獻(xiàn)方法制成動(dòng)-靜脈旁路血栓形成模型。即水合氯醛生理鹽水溶液(400mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈和左側(cè)頸外靜脈，然后取由三段聚乙烯管組成的套管，其中在中間套管內(nèi)放一預(yù)先稱重的6cm長(zhǎng)絲線，并在管內(nèi)注入50u/ml肝素生理鹽水溶液。管的一端插入左頸外靜脈，另一端插入右側(cè)頸總動(dòng)脈。開(kāi)放血流15分鐘后，中斷血流，迅速取出絲線并稱重。血栓濕重為總重量減去絲線干重，然后將其放入烤箱70℃，12小時(shí)后取出稱重，按總重量減去絲線干重計(jì)算血栓干重，并分別按下式公式計(jì)算血栓形成抑制率。
結(jié)果大鼠連續(xù)10天用不同劑量的蛇床子素灌胃后，其動(dòng)-靜脈旁路形成的血栓重量明顯低于正常對(duì)照組，各用藥組與正常對(duì)照組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01。血栓濕重形成抑制率為33.10％～37.47％，血栓干重形成抑制率為6.42％～54.04％，復(fù)方丹參滴丸組對(duì)血栓濕重和干重形成抑制率分別為20.77％和49.90％，蛇床子素、復(fù)方丹參聯(lián)合用藥組對(duì)血栓濕重和干重形成抑制率分別為37.32％和48.41％。
蛇床子素對(duì)大鼠動(dòng)-靜脈旁路血栓形成的影響(x±S，n＝8.)

注與正常對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論大鼠連續(xù)10天灌服蛇床子素10mg/kg、復(fù)方丹參滴丸30mg/kg后，對(duì)動(dòng)-靜脈旁路血栓形成有明顯的抑制作用。見(jiàn)實(shí)驗(yàn)蛇床子素和阿司匹林聯(lián)合給藥對(duì)膠原-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)血栓形成的影響昆明種小鼠，雌雄各半，體重20±2.0g，隨機(jī)分成五組(1)陽(yáng)性藥物對(duì)照組阿司匹林20mg/kg灌胃給藥。(2)，(3)，(4)為蛇床子素小、中、大劑量組，分別以10，20，40mg/kg灌胃給藥；(5)蛇床子素、阿司匹林聯(lián)合給藥組分別以蛇床子素10mg/kg阿司匹林10mg/kg劑量灌胃給藥(6)正常對(duì)照組，以等體積生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥一周，在末次給藥后1小時(shí)，尾靜脈注射膠原-腎上腺素混合溶液，觀察5分鐘內(nèi)小鼠的死亡數(shù)和15分鐘內(nèi)偏癱的恢復(fù)數(shù)，計(jì)算小鼠的死亡率和藥物對(duì)小鼠血栓形成的保護(hù)率。
結(jié)果小鼠連續(xù)一周分別灌服不同劑量的蛇床子素及蛇床子素阿司匹林混合給藥后，經(jīng)混合誘導(dǎo)劑(膠原-腎上腺素)處理后，15分鐘內(nèi)偏癱小鼠的恢復(fù)率分別為53.85％，77.78％83.88％和81.82％。正常對(duì)照組恢復(fù)率為0％，陽(yáng)性藥物對(duì)照阿司匹林組的恢復(fù)率為66.67％。
蛇床子素對(duì)膠原-腎上腺素誘導(dǎo)血栓形成所致小鼠死亡和偏癱的影響

結(jié)論小鼠連續(xù)一周灌服蛇床子素、阿司匹林聯(lián)合給藥后，對(duì)膠原腎上腺素誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)血栓形成所致的動(dòng)物死亡和偏癱均具有明顯的保護(hù)作用。
參考文獻(xiàn)1.杜偉等，血栓性疾病抗血栓治療的現(xiàn)狀海南醫(yī)學(xué)2003.14(7)832.一種防治骨質(zhì)疏松的制劑(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00310105958.9)
權(quán)利要求
1.一種防治血栓性疾病的制劑，其特征是所述制劑是含有蛇床子素Osthol的制劑，它作為制備防治血栓性疾病藥的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治血栓性疾病的制劑，其特征是制劑是蛇床子素Osthol，它的純度≥90％以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治血栓性疾病的制劑，其特征是所述的制劑由10％-90％蛇床子素Osthol和90％-10％阿司匹林(Aspinrin)組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治血栓性疾病的制劑，其特征是所述的制劑包含有蛇床子素Osthol重量比選擇在10％-90％，和噻氯匹定(Ticlopidine)重量比選擇在90％-10％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治血栓性疾病的制劑，其特征是所述的制劑包含有蛇床子素Osthol重量比選擇在10％-90％，和氯吡格雷(Clopidorel)重量比選擇在90％-10％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治血栓性疾病的制劑，其特征是所述的制劑包含有蛇床子素Osthol重量比選擇在10％-90％，和丹參提取物重量比選擇在90％-10％。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治血栓性疾病的制劑，其特征是所述的制劑包含有蛇床子素Osthol重量比選擇在10％-90％，和歐芹素乙(Imperatorin)其重量比選擇在90-10％。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治血栓性疾病的制劑，其特征是所述的制劑包含有蛇床子素Osthol重量比選擇在10％-90％，和活血化瘀中藥提取物，其重量比選擇在90％-10％。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治血栓性疾病的制劑，其特征是所述的活血化瘀中藥提取物，是當(dāng)歸、黨參或黃芪的單一成分提取物或混合物提取物，其重量比選擇在90％-10％。
全文摘要
本發(fā)明是防治血栓性疾病的制劑，特別是關(guān)于一種用蛇床子提取物制備的防治血栓性疾病的制劑，其特征是所述制劑是含有蛇床子素Osthol的制劑，它作為制備防治血栓性疾病藥的應(yīng)用。制劑是蛇床子素Osthol，它的純度≥90％以上。本發(fā)明是將蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)作為制備防治血栓性疾病制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是將蛇床子素(歐芹酚甲醚，Osthol)用于涉及治療血栓性疾病的藥物制劑及其制備方法。這種制劑能有效抑制ADP，凝血酶誘導(dǎo)得血小板聚集。本制劑具有不良反應(yīng)少、治療劑量易于控制、符合國(guó)際藥用制劑的標(biāo)準(zhǔn)要求，也符合中藥現(xiàn)代化要求。
文檔編號(hào)A61K31/4365GK1663564SQ20041007308
公開(kāi)日2005年9月7日 申請(qǐng)日期2004年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月15日
發(fā)明者謝梅林, 陳蓉, 周佳 申請(qǐng)人:華強(qiáng), 周佳